PT100443A - Derivados de piridil-tiazolidina, -dioxolano e -pirrolidina e seus sais,seu uso e composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

fe 73 776 4969.PG.01 -2-

MEMÓRIA DESCRITIVA

Campo técnico

Este invento refere-se a compostos tendo actividade farmacológica, a composições contendo estes compostos, e a um processo médico de tratamento, empregando os compostos e composições. Mais particularmente, este invento refere-se a certos compostos de piridiltiazolidina, peridildioxalano e peridilpirrolidina e aos seus sais, que têm actividade antagonista de factor de activação de plaquetas (PAF)', ' ã" composições farmacêuticas contendo estes compostos, e a um processo de tratamento de desordens mediadas por PAF.

Antecedentes do invento 0 factor de activação de plaquetas (PAF) é um fosfolípido libertado a partir das células humanas e de outros animais e é um acetilglicerilo éter da fosforilcolina, como representado pela seguinte fórmula: CH2°íCH2)nCH3 CH3COO-CH 0 CH20—P —0(CH2)2-N+(CH3)3 0' onde n é 15 ou 17. 0 PAF é fisiologicamente activo e causa a contracção do músculo liso das vias respiratórias, o aumento da permeabilidade vascular, a agregação de plaquetas, hipotensão e reacções similares. Foi reconhecido agora como um mediador poderoso da inflamação e pode desempenhar um papel fisiológico ou patobiológico numa diversidade de condições clínicas, tais como a asma e a disfunção pulmonar, inflamação aguda, rejeição de

73 776 4969.PG.01 órgão transplantado, choque induzido por endotoxina e IgG, trombose, anafixia cardíaca, ulceração gastrintestinal, doenças alérgicas da pele, doenças da retina e córnea, cirrose de fígado induzida quimicamente, implantação do ovo na gravidez.

Foram descritos diversos antagonistas do PAF (por exemplo, na patente US 4,948,795, no pedido de patente europeu EP 279681, e em US 4,786,645), mas nenhuma teve grande aceitação. Consequentemente, existe uma necessidade contínua do desenvolvimento de antagonistas do PAF potentes e oralmente activos.

Sumário do invento O presente invento proporciona, no seu aspecto principal, compostos tendo actividade antagonista do PAF de fórmula:

I em que R1 é hidrogénio ou alquilo de um a seis átomos de carbono. R2 é um ou mais grupos seleccionados de entre hidrogénio, halogéneo, ou alquilo de um a seis átomos de carbono. R3 é um ou mais grupos seleccionados de entre hidrogénio, halogéneo, ou alcoxi de um a seis átomos de carbono. A está ausente ou é -N(R4)C(0)- onde R4 é hidrogénio ou alquilo de um a seis átomos de carbono. X é enxofre ou >NR5 onde R5 é hidrogénio, alquilo de um a seis átomos de carbono, alcoílo de um a seis átomos de carbono, 73 776 4969.PG.01 -4-

Ca -C(0)NR®R^ onde R® e R^ sáo seleccionados independentemente de hidrogénio e alquilo de um a seis átomos de carbono, ou -C(0)0R8 onde R8 é um radical alquilo de um a seis átomos de carbono. O grupo Y é enxofre ou metileno.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis, e os estereoisómeros individuais dos compostos de fórmula estrutural I anterior, bem como as suas misturas, são também contemplados como fazendo parte do âmbito do presente invento.

Num outro aspecto, o presente invento proporciona composições farmacêuticas úteis para o tratamento das desordens mediadas por PAF, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I anterior em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.

Ainda num outro aspecto, o presente invento proporciona um processo de inibição da actividade de PAF pela administração a um mamífero hospedeiro com necessidade de tal tratamento de ima quantidade eficaz para inibição de PAF de um composto da estrutura I anterior.

Descrição pormenorizada e concretizações preferidas

Numa concretização do presente invento, os compostos do presente invento são representados pela fórmula IX: R3

R2 e R3 são definidos como atrás. 73 776 4969.PG.01 onde X, R1,

Os compostos preferidos de fórmula II são aqueles em que R1 e R2 são hidrogénio ou alquilo de um a seis átomos de carbono e R3 é hidrogénio ou alcoxi de um a seis átomos de carbono. Os compostos particularmente preferidos de fórmula II são aqueles em que R-*- é hidrogénio ou metilo R2 é hidrogénio e R3 é hidrogénio, 3,4-dimetoxi, 3,5-dimetoxi, ou 3,4,5-trimetoxi.

Numa outra concretização, os compostos do presente invento são representados pela fórmula III: R3

onde X, R1, R2, R3, R4 e R5 são definidos como atrás.

Os compostos preferidos da fórmula III são aqueles em que R1 e R4 são hidrogénio ou alquilo de um a seis átomos de carbono, R2 é hidrogénio, R3 é hidrogénio ou alcoxi de um a seis átomos de carbono, R5 é como atrás definido. Os compostos particularmente preferidos de fórmula III são aqueles em que R1 e R4 são hidrogénio ou metilo, R2 é hidrogénio, R3 é 3,4,5-trimetoxi, e R5 é hidrogénio.

Os exemplos dos compostos contemplados como caindo dentro do âmbito do presente invento incluem, mas não estão necessariamente limitados a: i-JT. < te 73 776 4969.PG.01

-6- N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina; N-(4-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina; N-(3-benzoilfenil)-N-metil-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilme-tilamina; N-(3-benzoilfenil)[2-(3-piridinil)-3-metiltiazolid-4-il]me-tilamina; N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarbonil-tiazolid-4-ilmetilamina; N-[3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil]-2-(3-piridinil)tiazo-lid-4-ilmetilamina; N-[3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil]-[2-(3-piridinil)-3-terc--butoxicarboniltiazolid-4-il]metilamina; N-(4-fenoxifenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina; N—[3-(3, 4,5-trimetoxibenzoil)fenil]-2-(3-piridinil) ditio-lan-4-ilmetilamina; N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)ditiolan-4-ilmetilamina; N-[3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil][2-(3-piridil)-pirroli-din-5-il]metilamina; N-[2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetil]-N/-[3-(3,4/5-trime-toxibenzoil)fenil]ureia; N-[2-(3-piridinil)ditiolan-4-ilmetil]-N'-(3-benzoilfenil)-ureia. - - -

Quando usados através desta descrição e das reivindicações anexas, os termos seguintes têm os significados atribuídos aos mesmos. 0 termo "alcoxi" quando usado aqui refere-se a um grupo alquilo inferior, como definido aqui, que está ligado à porção molecular progenitora através de um átomo de oxigénio. OS exemplos representativos dos grupos alcoxi incluem o metoxi, etoxi, t-butoxi e similares. 0 termo '^Ισοίΐο'' como usado aqui refere-se a formilo e radicais com a estrutura -C(0)-alquilo, em que a porção alquilo é um grupo alquilo linear ou ramificado de um a seis átomos de carbono. Exemplos representativos dos grupos alcoílo incluem formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, pivaloílo e

-7- $ 73 776 4969.PG.01 Ικ similares. O termo "alquilo” como usado aqui refere-se a radicais de cadeia linear ou ramificada derivados de hidrocarbonetos saturados pela remoção de um átomo de hidrogénio. Exemplos representativos dos grupos alquilo incluem metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, iso-butilo, terc-butilo e similares. 0 termo "carbamoílo" é usado aqui significando -C0NR6R7 em que R6 e R7 são independentemente hidrogénio ou um radical alquilo inferior. Exemplos representativos dos grupos carbamoílo incluem carbamoílo, dimetilcarbamoílo, terc-butilcarbamoílo, metiletilcarbamoílo e similares. 0 termo "carboalcoxi" é usado aqui significando -c(0)0R8 em que R8 é um radical alquilo. Exemplos representativos dos grupos carboalcoxi incluem carbometoxi, carboetoxi, carbo-isopropoxi, carbobutoxi, carbosec-butoxi, carbo-isobutoxi, carboterc-butoxi e similares.

As expressões "desordens relacionadas com o PAF" e "desordens mediadas pelo PAF" incluem a asma, choque, síndromes de dificuldade respiratória, ulceração gástrica, rejeição de órgão transplantado, inflamações agudas, psoríase, doenças alérgicas da pele, isquemia e lesões por reperfusão. A expressão "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se aos sais de adição não tóxicos dos ácidos orgânicos e inorgânicos dos compostos, do presente invento. Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e a purificação finais dos compostos ou fazendo reagir separadamente o composto purificado na sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e isolando o sal assim formado. Os sais representativos incluem os sais de hidrobrometo, hidrocloreto, sulfato, bissulfato, fosfato, nitrato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato,

73 776 4969.PG.01 -8- fumarato, succinato, tartarato, naftilato, mesilato, gluco-heptonato, lactiobionato, laurilsulfonato e similares. (Ver, por exemplo, S. M. Berge, et al "Pharmaceutical Salts", Pham. Sei.. 66: 1-19 (1977) que é aqui incorporado por referência). 0 presente invento proporciona também composições farmacêuticas, que compreendem um ou mais compostos da fórmula I anterior, formuladas conjuntamente com um ou mais portadores não tóxicos, aceitáveis farmaceuticamente. As composições farmacêuticas podem ser formuladas especialmente para administração oral na forma líquida ou sólida, para injUcçãõ parentérica ou administração rectal.

As composições farmacêuticas deste invento podem ser administradas a seres humanos ou outros animais oralmente, rectalmente, parentericamente, intracisternamente, intravaginalmente, intraperitonialmente, topicamente (por exemplo, por pós, unguentos e rebuçados), bucalmente, ou como uma pulverização oral ou nasal. 0 termo administração "parentérica’", como usado aqui, refere-se a modos de administração que incluem injecção e infusão intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, subcutânea e intra-articular.

As composições farmacêuticas deste invento para injecção parentérica compreendem soluções, dispersões, suspensões ou emulsões aquosas ou não aquosas estéreis farmaceuticamente aceitáveis, bem como pós estéreis para reconstituição em soluções ou dispersões injectáveis estéreis, imediatamente antes do uso. Os exemplos de portadores, diluentes, solventes ou veículos aquosos ou não aquosos adequados, incluem água, etanol, polióis (tal como o glicerol, propileno-glicol, polietileno--glicol e similares) e suas misturas adequadas, óleos vegetais, (tal como azeite), e ésteres orgânicos injectáveis tais como oleato de etilo. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pela utilização de materiais de revestimento tais como a lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso das dispersões, e pela utilização de surfactantes. 73 776 4969.PG.01 -9-

’S3Sgz!Sè

Estas composições podem também conter adjuvantes tais como conservantes, agentes molhantes, agentes emulsionantes e agentes dispersantes. A prevenção da acção dos microrganismos pode ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenolsórbico e similares. Pode também ser desejável incluir agentes isotónicos tais como açúcares, cloreto de sódio, e similares. A absorção prolongada da forma farmacêutica injectável pode ser conseguida pela inclusão de agentes que retardem a absorção, tais como o monoestearato de alumínio e a gelatina.

Em alguns casos, para prolongar o efeito da droga, é desejável tornar lenta a absorção da droga administrada por injecção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser conseguido pela utilização de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com fraca solubilidade na água. A velocidade de absorção da droga depende da sua velocidade de dissolução que, por sua vez, pode depender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativamente, a absorção retardada de uma forma de droga administrada parentericamente é conseguida dissolvendo ou suspendendo a droga num veículo oleoso.

As formas de depósito injectáveis são feitas pela formação de matrizes microcapsuladas da droga em polímeros biodegradáveis, tais como polilactido-poliglicólido. Dependendo da relação entre a droga e o polímero e da natureza do polímero particular utilizado, a velocidade de libertação da droga pode ser controlada. Os exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações injectáveis de depósito são também preparadas encerrando a droga em liposomas ou microemulsões que sejam compatíveis com os tecidos do corpo.

As formulações injectáveis ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção bacteriana, ou incorporando agentes de esterilização com a forma de composições sólidas estéreis, que podem ser dissolvidas ou dispersadas em água estéril ou noutro meio injectável estéril, imediatamente

-10- 73 776 4969.PG.01 antes do uso.

As formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, e grânulos. Em tais formas de dosagem sólidas, o composto activo é misturado com, pelo menos, um excipiente ou portador inerte, farmaceuticamente aceitável, tal como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio e/ou a) materiais de enchimento ou inertes tais como amidos, lactose, sacarose, glucose, manitol e ácido silícico, b) ligantes tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose, e goma arábica, c) humectantes tais como o glicerol, d) agentes de desintegração tais como o ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos e carbonato de sódio, e) agentes retardadores de solução tais como a parafina, f) aceleradores de absorção tais como compostos de amónio quaternário, g) agentes molhantes tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol, h) absorventes tais como o caulino e a argila de bentonite, ei) lubrificantes tal como o talco, o estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno-glicóis sólidos, sulfato de laurilo e sódio e suas misturas. No caso das cápsulas, dos comprimidos e das pílulas, a forma de dosagem pode compreender também agentes tampão.

As composições sólidas de um tipo similar podem também ser empregues como materiais de enchimento em cápsulas de gelatina mole ou dura utilizando excipientes tais como a lactose ou açúcar lácteo, bem como polietileno-glicóis de elevado peso molecular e similares.

As formas de dosagem sólida dos comprimidos, drageias, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e invólucros, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na arte da formulação farmacêutica. Podem, opcionalmente, conter agentes opacificantes e podem também ter uma composição tal que libertem o(s) ingrediente(s) activo(s) apenas ou, de preferência, numa certa parte do tracto intestinal, opcionalmente de uma maneira 73 776 4969.PG.01 -11-

retardada. Os exemplos das composições de encerramento que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras.

Os compostos activos podem também estar na forma micro--capsulada, se apropriado, com um ou mais dos excipientes atrás mencionados.

As formas de dosagem líquida para administração oral incluem emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Adicionalmente aos compostos activos, as formas de dosagem líquida podem conter diluéntes inertes, utilizados habitualmente na arte, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsionantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzilico, benzoato de benzilo, propileno-glicol, 1,3-butilenoglicol, dimetil--formamida, óleos (em particular, óleo de sementes de algodão, amemdoim, milho, gérmen, azeite, óleo de rícino e óleo de sésamo), glicerol, álcool tetra-hidrofurfurilico, polietileno--glicóis e ésteres de ácidos gordos do sorbitano, e suas misturas.

Além dos diluentes inertes, as composições orais podem também incluir adjuvantes tais como agentes molhantes, agentes emulsionantes e de suspensão, agentes adoçantes, saborizantes e perfumantes.

As suspensões, adicionalmente aos compostos activos, podem conter agentes de suspensão como, por exemplo, alcoóis isostearilícos etoxilados, ésteres de polioxietileno-sorbitol e de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonite, ágar-ágar e tragacanta e suas misturas.

As composições para administração rectal ou vaginal são, de preferência, supositórios, que podem ser preparados misturando os compostos deste invento com excipientes ou portadores não irritantes adequados, tais como manteiga de cacau, polietileno--glicol ou uma cera para supositórios, que sejam sólidos à 73 776 4969.PG.01 -12-

temperatura ambiente mas líquidos à temperatura do corpo e, consequentemente, fundam na cavidade rectal ou vaginal e libertam o composto activo.

Os compostos do presente invento podem também ser administrados na forma de lipossomas. Como é conhecido na arte/ os lipossomas são em geral derivados de fosfolipidos ou de outras substâncias lipídicas. Os lipossomas são formados por cristais líquidos hidratados mono- ou multilamelares, que são dispersos num meio aquoso. Pode ser utilizado qualquer lípido não tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável, capaz‘dè formar lipossomas. As presentes composições na forma de lipossoma podem conter, adicionalmente a um composto do presente invento, estabilizadores, conservantes, excipientes e similares. Os lípidos preferidos são os fosfolipidos e as fosfatidilcolinas (lecitinas), quer naturais quer sintéticas. São conhecidos na arte os processos para formar lipossomas. Ver, por exemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Bioloay. volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), página 33 e seguintes.

As formas de dosagem para a administração tópica de um composto deste invento incluem pós, pulverizações, unguentos e inalantes. 0 composto activo é misturado em condições estéreis com um portador farmaceuticamente aceitável e com quaisquer conservantes, tampões, ou propulsores, que possam ser necessários. As formulações oftálmicas, os unguentos para os olhos, os pós e as soluções são também contempladas pelo âmbito do invento.

Os níveis de dosagem reais, dos ingredientes activos nas composições farmacêuticas deste invento, podem ser variadas, para se obter uma quantidade de composto(s) activo(s) que seja eficaz para se conseguir a resposta terapêutica desejada, para um paciente, composições e modo de administração particulares. 0 nível de dosagem seleccionado dependerá da actividade do composto particular, da via de administração, da gravidade das 73 776 4969.PG.01

-13- condições a serem tratadas e do estado e historial médico anterior do paciente a ser tratado. No entanto, está dentro da técnica começar com doses do composto com níveis mais baixos do que o requerido, para conseguir o efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosagem até o efeito desejado ser conseguido.

Geralmente níveis de dosagem de cerca de 0,001 a cerca de 100, mais preferivelmente, de cerca de 0,01 a cerca de 20, e com maior preferência de cerca de 0,1 a cerca de 10 mg do composto activo por quilograma de peso corporal e por diafsão administrados oralmente a um paciente mamífero. Se desejado, a dose diária eficaz pode ser repartida em doses múltiplas para fins de administração, por exemplo, duas a quatro doses separadas por dia.

Em geral, os compostos deste invento são sintetizados pelos esquemas de reacção I a V como representado abaixo. Dever-se-á compreender que X, Y, A, e R2 como usados aqui correspondem aos grupos identificados na fórmula I.

Os compostos de fórmula (I-III) podem ser preparados utilizando as reacções e técnicas descritas nesta secção. As reacções são executadas num solvente apropriado aos reagentes e materiais empregues e adequados para a transformação a ser efectuada. Deve ser entendido pelos peritos da arte da síntese orgânica, que a funcionalidade presente no heterociclo e noutras porções da molécula deve ser consistente com a transformação proposta. Isto necessitará frequentemente de um juízo em relação ao ordenamento dos passos de síntese, grupos protectores requeridos e condições de desprotecção. (segue Esquema I) 73 776 4969.PG.01

Esquema I o=i

OH

CHO

N

OHq=L

OH (t-BuC0)20 0=4 ΓΛ H2N sh

"r~\ HN. .S

N

VyV1 o

N CH2N2

och3 ΓΛ O^N, .S

(í-Bu)2A1H

oui-BuCOCl/ VV^V ch3oh I o i V

H+

Escruema I

De acordo com o Esquema reaccional I anterior, a L-cisteína (1) é condensada com 3-piridinaaldeído para produzir ácido 2-(3-piridinil)-4-tiazolidinacarboxílico (2). O azoto da tiazolidina pode ser protegido com um grupo apropriado, de preferência, carbo-terc-butoxi (BOC) com dicarbonato de di-terc-butilo para obter 3. 0 ácido protegido é esterifiçado para 4. O éster é ,// 73 776 4969.PG.01 // -15- //-u tá & reduzido com um agente de redução apropriado, tal como hidreto de diisobutilalumínio, para produzir o aldeído 5. 0 aldeído sofre uma aminação redutora com uma amina e um agente de redução, tal como cianoboro-hidreto de sódio para produzir 6. 0 / grupo protegido é removido sob condições apropriadas, como na utilização de HCl para remover o BOC, e é obtida a amina 7,

Esquema II

1. NaSH

2. HCl CH3OH

OCHo 9 HS SH

LiOH 10

HNJ HN(CH3)OCH3 Ji-Bu)2A]H NaBH3CN <,

' S BOPQ "" SVS VS r'NH2 (3) VS

(C2H,)3N

12 Π “ 14 I

Esauema II

De acordo com o Esquema reaccional II anterior, o ácido 2.3- dibromopropiónico (8) é tratado com bissulfeto de sódio (NaSH) seguido pela esterificação com HCl em metanol para dar 2.3— dimercaptopropionato de metilo (9). Este ditiol (9) é condensado com 3-piridinacarboxialdeído na presença de um catalisador ácido, de preferência ácido p-toluenossulfónico, para se obter 2-(3-piridinil)-4-ditiolanocarboxilato de metilo (10). 0 éster ditiolano é hidrolizado para o ácido 73 776 4969.PG.01 -16-

correspondente (11) por tratamento com base aquosa, de preferência hidróxido de litio. 0 ácido 2-(3-piridinil)-4-ditiolanocarboxílico (11) é então convertido em N-metoxi-N-metil -2-(3-piridinil)-4-ditiolanocarboxamida (12) com N-metoxi-N-metilamina na presença de um agente de acoplamento tal como B0PC1(cloreto de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico). A amida é reduzida com um agente de redução apropriado, tal como o hidreto de diisobutilalumínio, para dar o aldeído (13) que sofre uma aminação redutora com uma amina e um agente de redução tal como o cianoboro-hidreto de sódio para 14.

Esquema III

Esauema III

De acordo com o Esquema reaccional III anterior, a amina 6 é primeiro tratada com uma base forte, tal como hexametildisilazida de litio, seguida pela reacção com um haleto de alquilo para produzir 15, que é depois desprotegido sob condições ácidas para 16. (segue Esquema IV) 73 776 4969.PG.01

-17- Esguema IV

17

CHO

NH,

II 21 N (t-BuCO)20 0 IJjc

HN O

22

29

73 776 4969.Ρ6.01 -18-

Esauema IV

De acordo com o Esquema reaccional IV anterior o reagente de Grignard 4-bromomagnésio-l-buteno (17) é feito reagir com um aldeído (18), de preferência piridina-3-carboxaldeído, para produzir o álcool 19. O álcool é sulfonado com um alcanossulfonato, de preferência cloreto de metanossulfónilo, para produzir o metanossulfonato 20. 0 metanossulfonato é feito reagir com azida de sódio seguida por 1,3-propanotiol e trietilamina para dar aminopenteno 21. A amina é protegida com di-terc-butoxicarbonilo para dar 22, que é hidroxilado^para o diol 23. O diol é feito reagir com terc-butilclorodifenilsilano, seguido pela reacção com cloreto de metanossulfonilo para produzir 25. A siloxipirrolidina 26 é formada a partir de 25 na presença de uma base forte, tal como terc-butóxido de potássio. O grupo siloxi é removido com fluoreto de tetra-n-butilamónio para dar o álcool 27 que é convertido no mesilato 28. O composto de mesilo é deslocado com uma amina para dar 29. Os grupos BOC são removidos por tratamento da amina bis-protegida com um ácido, de preferência ácido clorídrico, em dioxano, para dar a amina 30.

Esquema V OH k N, ΓΛ

CHqSO^Cl t Q-SO2CH3 4 I \

JJ hn^hnr ira

ΓΛ HN^ .S

36VN >f T 1 0 35 ΓΛ

NaNi I \

73 776 4969.PG.01 -19-

Esquema V

De acordo com o Esquema reaccional V anterior, o 2-(3-piri-dinil)-3-terc-butoxi-carboniltiazolid-4-ilmetanol (31) é convertido no metanossulfonato 32 que é feito reagir com a azida de sódio em dimetilformamida para dar a metilazida 33. A azida é reduzida na presença de 1,3-propanodiol à amina 34. A amina é feita reagir com um isocianato para dar a ureia 35. o grupo protector BOC é removido da ureia protegida com ácido, de preferência ácido clorídrico em dioxano, para produzir a ureia 36. .......--

Actividade Inibidora de PAF dos Compostos do Presente Invento A capacidade dos compostos representativos do presente invento inibirem a actividade de PAF foi determinada num teste in vitro utilizando o seguinte método.

Foi obtido de Pel-Freez (Rogers, AR) sangue completo, citrado, de coelho. Foram preparadas plaquetas de coelho por centrifugação e lavagem. As plaquetas foram lisadas por congelação-descongelação e sonicação; as membranas das plaquetas foram preparadas por centrifugação e lavagem. As preparações finais de membrana foram armazenadas congeladas em Tris/ 10 mM/ MgCl2 5 mM/EDTA 2 mM (tampão TME, pH 7,0) com sacarose 0,25 M, adicionada para a estabilização da membrana.

0 ensaio de ligação do receptor de PAF, normalizado, continha 10 μg de proteína da membrana da plaqueta, [3H]C2g-PAF 0,6 nM (de Amersham ou New England Nuclear; actividade específica 120-180 Ci/mmol), com ou sem composto de teste, em "tampão de ligação" consistindo em TME com 0,25% de albumina de soro de bovino adicionada (Sigma, grau RIA), o volume final do ensaio foi 100 μΐ. 0 ensaio foi conduzido em placas de filtração Millititre-GV™ (Millipore Corp.); o tempo de incubação foi de 60 minutos à temperatura ambiente (22-23°C). A "ligação específica" foi definida operacionalmente como a diferença aritmética entre a "ligação total" do [3H]C18-PAF 0,6nM (na ausência do PAF 73 776 4969.PG.01 -20-

adicionado) e "ligação não específica" (na presença de PAF 1 μΜ). Após a incubação prescrita, as membranas das plaquetas foram filtradas sob vácuo, e lavadas com 1 mililitro de "tampão de ligação". Os filtros foram secos e removidos. A radioactividade ligada foi quantificada com um analisador de Berthold TLC-Linear, modelo LB2842.

As curvas de dose-resposta da inibição da ligação especifica de [3H]C18-PAF pelos compostos de teste foram conduzidas em triplicado, com pelo menos quatro doses cobrindo a gama activa. As experiências foram repetidas, pelo meiSos‘uma vez. Os valores IC50 (concentração produzindo 50% de inibição) foram determinados por avaliação ponto-a-ponto. Os valores das constantes de ligação inibidoras foram calculados de acordo com o método de Cheng e Prusoff [Biochem. Pharmacol. 22 (1973) 3099-3108] pelo qual IC50

Ki = - l+([[3H]PAF]/Kd[3H]PAF) IC50 l+(0,6nM/0,6nM) IC50 2

Os valores de para os compostos representativos do presente invento apresentam-se na Tabela I. (segue Tabela I)

73 776 4969.PG.01 -21-

Tabela I

Actividade de Ligação do Receptor de PAF

Exemplo K-^nM) Exemplo Ki (nM) la 6 770 9 1 400 lb 13 000 10 900 2 10 11 160 3 8 700 12 3 400 4 23 13 (cis) 2 3*00 5 38 13 (trans) 8 700 6 430 14 110 7 1 200 15 150 8 190 16 750 O que se expôs pode ser melhor compreendido a partir dos exemplos que se seguem, os quais são apresentados com a finalidade de ilustrar e que não se destinam a limitar o âmbito do conceito inventivo.

Exemplo 1

Preparação de N-Γ3-(3.4.5-trimetoxibenzoilVfenil1-Γ2-(3--piridinil)-3-terc-butoxicarboniltiazolid-4-il1metilamina Passo 1. Preparação do ácido 2-(3-PÍridinil)-4-tiazolidinacarbo-xílico A cisteína (24,2 g, 0,2 mole) e 3-piridina carboxaldeído (21,4 g, 0,2 mmole) foram suspensos em etanol aquoso a 60% (400 mL) e a mistura foi aquecida a 100°C durante 5 horas. A mistura reaccional foi então arrefecida e a maioria do solvente foi removida in vacuo. A lama resultante foi filtrada e lavada com etanol. Este material foi seco durante a noite in vacuo a 50°C para se obter ácido de tiazolidina (34 g, 81%).

73 776 4969.PG.01 -22-

Passo 2. Preparação do ácido 2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicar-bonil-4-tiazolidinacarboxílico A uma lama do ácido 2-(3-piridinil)-4-tiazolidinacarboxí-lico (7,0 g, 33,3 nmol) preparado como no Passo 1, em dioxano (40 mL) a 0eC foi adicionado NaOH aquoso (60 mL, 1 M), seguido por uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (1,5 eq; 10,9 g) e dioxano (20 mL) numa só porção. A solução amarelada resultante foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 19 horas. A solução resultante foi concentrada num evaporador rotativo e o resíduo resultante foi submetido a partição entre acetato de etilo (100 mL) e água (100 mL). A fase aquosa foi lavada com acetato de etilo e depois acidificada até um pH de 4 com ácido clorídrico aquoso a 0°C. Esta solução foi então extractada com acetato de etilo e seca sobre sulfato de magnésio para produzir ácido 2-(3-piridinil)-3-terc--butoxicarbonil-4-tiazolidinacarboxílico (8,27 g, rendimento de 80%) como um sólido branco.

Passo 3. Preparação do 2-(3-piridinil)-3-(terc-butoxicar-bonil)-4-tiazolidinacarboxilato de metilo A uma solução de ácido 2-(3-piridinil)-3-(terc-butoxicarbo-nil)-4-tiazolidinacarboxílico preparado como no Passo 2 (10 g) em tetra-hidrofurano seco (THF, 160 mL; 0,2 M) sob atmosfera de azoto, a 0°C, com agitação, foi adicionado N-metilmorfolina (3,9 mL, 1,1 eq) seguida por cloroformato de iso-butilo (4,2 mL, 1,0 eq). A mistura avermelhada resultante foi agitada durante 15 minutos, seguida pela adição de metanol (10 mL). A mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e deixada a agitar durante 16 horas. A mistura resultante foi concentrada e submetida a partição entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de magnésio. A filtração e a remoção do solvente deram o composto de título como um óleo cor-de-laranja. 0 óleo foi purificado adicionalmente por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexanos/acetato de etilo 1:1).

73 776 4969.PG.01 -23-

Passo 4. Preparação do 2-(3-piridinil^-3-(terc-butoxicarbonil)--4-tiazolidinacarboxaldeído 0 2 - (3-piridinil)-3-(terc-butoxicarbonil)-4-tiazo-lidinacarboxilato de metilo (43 mmol, preparado como descrito no Passo 3 atrás) em cloreto de metileno sob atmosfera de azoto a -70 °C com agitação, foi misturado com uma solução de hidreto de di-isobutilalumínio (Dibal, 120 mL de 1M, 3 eq.) em cloreto de metileno e agitado durante 2 horas a -70°C. Após este período de tempo, foi adicionado cloreto de sódio saturado e a mistura foi aquecida até à temperatura ambiente com agitação durãhfê~3O minutos. Foi então adicionado hidróxido de sódio aquoso, a mistura foi agitada e as camadas separadas. A fase aquosa foi extractada com cloreto de metileno e as camadas orgânicas lavadas com hidróxido de sódio aquoso e salmoura. A filtração, seguida por concentração, deu um óleo cor-de-laranja que foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel (hexanos:acetato de etilo 45:55) para produzir 2-(3-piridinil)--3-(terc-butoxicarbonil)-4-tiazolidinacarboxaldeído (9,18 g, 72%) como um óleo amarelo.

Passo 5. Preparação da N-terc-butilcarbonil-3-iodoanilina A 3-iodoanilina (25 g, 114,13 mmol) e dicarbonato de di-terc-butilo (24,89 g) foram misturados em cloreto de metileno à temperatura ambiente com agitação. Foi então adicionada dimetilaminopiridina (50 mg) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi deitada em HC1 0,1 N e a fase orgânica foi separada, seca sobre sulfato de sódio e o solvente evaporado. 0 material foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexano:acetato de etilo 6:1) e o resíduo resultante foi recristalizado em acetato de etilo/hexano para produzir 26,11 g (75%) de N-terc--butilcarbonil-3-iodoanilina como um sólido branco. 73 776 4969.PG.01 24

Passo 6. Preparação da N-terc-butilcarbonil-3-tributilestanho-anilina A N-terc-butilcarbonil-3-iodoanilina (28,2 g 92,5 mmol), preparada como descrito acima, hexabutildi-estanho (46,7 ml, 92,5 mmol) e o tetraquis(trifenilfosfina)paládio (2,13 g) em tolueno foram misturados a 80°C durante um período de 48 horas. A mistura foi agitada com uma mistura de acetato de etilo e água, a camada orgânica foi separada e o solvente evaporado. Foi adicionado hexano ao resíduo e a mistura foi filtrada através de Celite. O filtrado foi evaporado para 40 mL e o resídUô^foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexano:acetato de etilo 19:1) para produzir N-terc-butilcarbonil-3-tributilestanho-anilina (22,6 g 51%).

Passo 7. Preparação da N-terc-butilcarbonil-3-(3.4,5-trimetoxi-benzoil)anilina A N-terc-butilcarbonil-3-tributilestanho-anilina (18,6 g, 38,58 mmol) e cloreto de 3,4,5-trimetoxibenzoilo (8,81 g, 38,19 mmol) foram adicionados a cloreto de benzilo-tetraquis(trifenilfos-fina)paládio (155 mg) em tetra-hidrofurano com agitação e foram aquecidos a 65°C durante 16 horas. Foi adicionado acetato de etilo (250 mL) e a camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de sódio. 0 material foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel para produzir 7,12 g (49,68%) de N-terc-butilcarbonil-3-(3,4,5-trimetoxi-benzoil)anilina.

Passo 8. Preparação da 3-f3.4.5-trimetoxibenzoil)anilina A H-terc-butilcarbonil-3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)anilina (7,10 g, 18,92 mmol), preparada como descrito acima, foi dissolvida em ácido acético (125 mL, 1,4 N) à temperatura ambiente. Foi adicionada uma solução de ácido clorídrico/ácido acético (20 mL) e a mistura foi deixada a agitar durante 45 minutos. Foi adicionado éter dietílico (800 mL) e o precipitado 73 776 4969.PG.01 25

resultante foi filtrado e seco para produzir hidrocloreto de 3-(3,4,5-trime-toxibenzoil)anilina (5,24 g, 85,7%) como um sólido castanho amarelado.

Passo 9. Preparação de Ν-Γ3-(3,4.5-trimetoxibenzoil)fenil')-2-f 3--piridinil)-3-terc-butoxicarboniltiazolid-4-ilmetilamina A uma solução de 2-(3-piridinil)-3-(terc-butoxicarbonil)-4--tiazolidinacarboxaldeído (183 mg, 0,62 mmol, preparado como no Passo 4, atrás) foi adicionado hidrocloreto de 3-03~,"4τ5-trimetoxibenzoil)anilina (241 mg, 1,2 eq., preparado como no Passo 8, atrás) seguido por cianoboro-hidreto de sódio (98 mg, 2,5 eq.). A mistura reaccional resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi então concentrada e submetida a partição entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado. As camadas orgânicas foram lavadas com bicarbonato de sódio saturado e secas sobre sulfato de magnésio. A filtração, seguida por concentração e purificação por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexanos:acetato de etilo 1:1) deu 214 mg do composto do título como um óleo amarelo.

Exemplo 2

Preparação de tri-hidrocloreto de N-(3-(3.4.5-trimetoxiben-zoiDfenill -2-( 3-niridiniHtiazolid-4-ilmetilamina A uma solução de N-[3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil]-2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarboniltiazolid-4-ilmetilamina (214 mg, preparada como se descreveu no Exemplo 1) numa quantidade mínima de dioxano foi adicionado ácido clorídrico em dioxano (8 mL de 4 M) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução resultante foi então concentrada e submetida a partição entre água e acetato de etilo. O pH da fase aquosa foi ajustado a pH 8 com bicarbonato de sódio, seguido por extracção com cloreto de metileno. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até se obter 73 776 4969.PG.01 -26- m %

um óleo amarelo. O material foi purificado adicionalmente por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexanos:acetato de etilo 1:9) para produzir 94 mg de um óleo amarelo. O produto foi dissolvido numa quantidade mínima de dioxano, arrefecido a 0’C e foi adicionada uma solução de ácido clorídrico em dioxano (4M). Esta solução foi deixada a agitar durante 15 minutos e foi depois concentrada para dar o sal hidrocloreto como um sólido branco. RMN (CDC13/ 300 MHz); S 2,90 (t, 1H, J=10,0), 2,96 (dd,lH, J=6,0, 10,0), 3,29-3,42 (c, 2H) , 3,58-3,79 (C, 2H), 3,88 (s, 6H), 3,93 (s,3H), 4,24-4,38 (c, 1H), 5,61 (s largo, 1H), 6,87 (m, 1H), 7,08 (m, 2H) , 7,23-7*; 3'4~fC7 3H), 7,82 (tt,1H, J=1,0, 9,0), 8,56 (m, 1H), 8,74 (d, 1H, J=2,0). IV (CDC13): 1725, 1600, 1580, 1330 1125. Espectro de massa (DCI/NH3) 466 (M+H)+.

Exemplo 3

Preparação de N-(3-benzoilfenil^^-(S-piridinil^-S-terc-butoxi-carboniltiazolidM-ilmetilamina A N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarbonil-tiazolid-4-ilmetilamina foi preparada utilizando o processo do Exemplo 1, com a excepção de ter sido utilizado hidrocloreto de 3-benzoilanilina em vez de 3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)anilina. RMN (CDCI3, 300 MHz); S 1,28 (s largo, 9H), 2,98 (dd, 1H, J=1,0, 12,0), 3,36 (dd, 1H, J=7,0, 12,0), 3,50 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 6,01 (s largo, 1H), 6,92 (m, 1H), 7,08 (m,2H), 7,20-7,36 (c, 4H), 7,43-7,49 (c, 2H), 7,56 (m, 1H), 7,81 (m, 2H), 8,52 (dd, 1H, J=6,0). Espectro de massa (DCI/NH3): 476 (M+H)+.

Exemplo 4

Preparação de N-f3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilme-tilamina A N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina foi preparada utilizando o processo do Exemplo 2, com a excepção 73 776 4969.PG.01 -27-

de ter sido utilizada 3-benzoilanilina em vez de 3-(3,4,5-trimetoxiben- zoil)anilina. RMN (CDC13, 300 MHz); S 2,84-2,96

Exemplo 5

Preparação de tri-hidrocloreto de N-f3-benzoilfenill-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina 0 tri-hidrocloreto de N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)-tiazolid-4-ilmetilamina foi preparado utilizando o processo do Exemplo 2. 0 produto foi retomado numa quantidade mínima de dioxano, arrefecido a 0°C e foi adicionada uma solução de ácido clorídrico em dioxano (4M) e esta solução foi agitada durante 15 minutos e depois concentrada para se obter um sólido branco. Espectro de massa (DCI/NH3): 376 (M+H)+.

Exemplo 6

Preparação de N-f2-benzoilfenil^-2-(3-PÍridinil^tiazolid-4-ilme-tilamina A N-(2-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina foi preparada utilizando o processo do Exemplo 2, com a excepção de ter sido utilizada 2-benzoilanilina em vez de 3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)anilina. Espectro de massa (DCI/NH3): 376 (M+H)+.

Exemplo 7

Preparação de N-(4-benzoilfenil^-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilme-tilamina A N-(4-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina

73 776 4969.PG.01 -28- foi preparada utilizando o processo do Exemplo 2, com a excepção de ter sido utilizada 4-benzoilanilina em vez de 3-(3,4,5--trimetoxibenzoil)anilina. Espectro de massa (DCI/NH3): 376 (M+H)+, 228, 166.

Exemplo 8

Preparação de N-(4-fenoxifenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilme-tilamina A N-(4-fenoxifenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilámina foi preparada utilizando o processo do Exemplo 2, com a excepção de ter sido utilizada 4-fenoxilanilina em vez de 3-(3,4,5-trimetoxiben- zoil)anilina. RMN (CDCI3, 300 MHz); δ 2,92 (m, 1H), 3,15-3,39 (c, 2H), 3,51-3,69 (c, 1H), 3,95 (m, 1H), 5,62 (d, 1H, J=9,0), 6,65 (t, 2H, J=8,5), 6,84-7,05 (c, 4H), 7,21-7,36 (C, 4H), 7,82 (t, 1H, J=8,0), 8,56 (t, 1H, J=6,5), 8,75 (s, 1H). Espectro de massa (DCI/NH3): 364 (M+H)+.

Exemplo 9

Preparação de di-hidrocloreto de N-(3-benzoilfenilH2-(3-piridinil )-3-metiltiazolid-4-illmetilamina

Passo 1. Preparação de 2-(3-piridil)-3-metil-4-tiazolidina-carboxilato de etilo

Dissolveram-se 2-(3-piridil)-4-tiazolidinacarboxilato de etilo (2,0 g, 1,0 eq.) e formaldeído aquoso em acetonitrilo e agitaram-se durante 30 minutos. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,79 g, 1,5 eq.) e a reacção foi levada a pH 3 com ácido acético glacial. Após mais 30 minutos, foi adicionado mais ácido acético. A reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e interrompida com água e deitada em bicarbonato de sódio saturado. A fase aquosa foi extractada com acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas para se obter um óleo amarelo. 0 óleo foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel (eluído com

./vS ./vS c.

73 776 4969.PG.01 -29- acetato de etiloíhexanos 3:1) para dar 1,0 g do composto do titulo (rendimento 48%).

Passo 2. Preparação de N-f3-benzoilfenil)2-(3-piridinil)-3-terc--butoxicarboniltiazolid-4-ilmetilamina A N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarbonil-tiazolid-4-ilmetilamina foi preparada como descrito no Exemplo 1, com a excepção de ter sido utilizado 2-(3-piridil)--3-metil-4-tiazolidinacarboxilato de etilo em vez de 2-(3-piridinil )-3-( terc-butoxicarbonil) -4-tiazolidinacarboxi1‘atO"“de metilo.

Exemplo 10

Preparação de di-hidrocloreto de Ν-Γ3-Γ3.4.5-trimetoxibenzoil)- fenil1-2-f 3-piridinil)ditiolano-4-ilmetilamina

Passo 1. Preparação de 2.3-dimercaptopropionato de metilo

Adicionaram-se, a um balão de três tubuladuras, de 1 litro, seco à chama, 30 g (1,25 mol, 5,8 eq.) de esferas de sódio (enxaguadas com hexanos). O balão foi equipado com um funil de carga e um condensador de refluxo. Foi adicionado metanol anidro (400 mL) ao sódio metálico através do funil de carga, gota-a--gota, a uma taxa tal que se mantivesse um refluxo suave durante a adição. Após aproximadamente 45 minutos, a reacção foi arrefecida a 0°C e saturada com H2S durante 1 h. Durante o curso da adição, o excesso de H2S foi neutralizado fazendo borbulhar a linha de drenagem numa ratoeira contendo uma solução a 10% de hidróxido de sódio aquoso. Foi adicionada uma solução de 50,0 g (0,22 mol, 1 eq.) de ácido 2,3-dibromopropiónico dissolvido em 100 ml de metanol à mistura reaccional através do funil de carga, a uma taxa de gotejamento rápida. A solução foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada mais 18 horas. A reacção foi então acidificada para pH 2 por adição inicial, gota-a-gota, de 100 mL de HC1 metanólico saturado

73 776 4969.PG.01 -30-(observou-se libertação de H2S) seguida pelo borbulhar de HC1 gasoso na mistura reaccional até ser obtido o pH desejado. Neste ponto, estava presente um precipitado branco e espesso. A solução foi deixada a agitar durante mais 4 horas e depois foi concentrada num evaporador rotativo para remover o metanol. O resíduo pastoso resultante foi submetido a partição entre 300 mL de água e 300 mL de éter etílico. A fase aquosa foi extractada com éter etílico (2x) e os extractos orgânicos combinados foram lavados uma vez com salmoura e secos sobre sulfato de magnésio. O agente de secagem foi retirado por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo. ProduçãõT '2'875* gf 86,5% de um óleo amarelo claro.

Passo 2. Preparação de 2-f3-piridinil)-4-ditiolanocarboxilato de metilo

Foram adicionados a um balão de fundo redondo com três tubuladuras, equipado com uma ratoeira de Dean Stark e um funil de carga- com uma taxa constante, 7,5 g (65,7 mmol, 1,0 eq.) de 3-piridina-aldeído e 15,0 g (78,9 mmol, 1,2 eq.) de ácido toluenossulfónico em 350 mL de tolueno e 40 mL de 1-butanol. A solução foi aquecida ao refluxo, após o que foram adicionados gota-a-gota 10,0 g (65,7 mmol, 1 eq.) do material preparado no Passo 1, atrás, em 30 mL de tolueno, durante noventa minutos à mistura reaccional refluxante através do funil de carga. A reacção foi deixada em refluxo durante a noite e no dia seguinte foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi submetido a partição entre bicarbonato de sódio aquoso saturado e acetato de etilo (requer agitação durante >30 minutos). A fase aquosa foi extractada mais uma vez com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados sucessivamente com bissulfeto de sódio aquoso saturado (2x), hidróxido de sódio aquoso 1M (2x), e salmoura aquosa saturada (lx), secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados in vacuo para se obter 18,57 g (rendimento bruto de 117%) de um óleo castanho, o TLC mostrou material predominantemente desejado, conjuntamente com algum nicotinaldeído e uma impureza polar muito inferior. 0 óleo foi purificado por cromatografia "flash"

73 776 4969.PG.01 -31- (Sio2f acetato de etilo:hexanos 80:20). O ditiolano desejado foi isolado nas fracções 85-195 na quantidade de 8,03 g (rendimento 50,6%) de um óleo cor-de-laranja. RMN S (CDC13) 3,45(dd, 0,5H), 3,6 (dd, 0,5H), 3,65 (dd, 0,5H), 3,7 (dd, 0,5H), 3,8 (s, 1,5H), 3,82 (s, 1,5H), 4,5 (t, 0,5H), 4,65 (t, 0,5H), 5,65 (s, 0,5H), 5,75 (S, 0,5H), 7,3 (dd, 1H), 7,95 (ddt, 1H), 8,5 (td, 1H), 8,7 (dd, 1H).

Passo 3. Preparação do ácido 2-(3-piridiniH-4-ditiolanocarboxí-lico O éster ditiolano (2 g, 8,3 mmol, 1 eg.) preparado como no Passo 2 atrás, foi dissolvido numa solução de tetra-hidrofurano e água 3:1 (v/v) e adicionaram-se numa só porção 432 mg de hidrato de hidróxido de lítio (10 mmol, 1,2 eq.). A reacção assumiu imediatamente uma cor-de-laranja. A reacção foi concentrada in vacuo para se remover o tetra-hidrofurano e a solução aquosa resultante foi extractada com éter para remover quaisquer impurezas. A fase aquosa foi acidificada até pH = 4 com ácido clorídrico aquoso IN e concentrada in vacuo. O resíduo oleoso resultante foi então suspenso em tetra-hidrofurano e etanol e filtrado. 0 filtrado foi concentrado in vacuo e captado duas vezes com tolueno para se obter 1,6 g (rendimento de 85%) de um sólido amarelo.

Passo 4. Preparação de N-metoxi-N-metil 2-(3-piridinil)-4-ditio-lanocarboxamida A uma solução de ácido 2-(3-piridinil)-4-ditiolanocarboxí-lico (781 mg, 3,4 mmol, 1 eq.), preparado como descrito no Passo 3, atrás, em 30 mL de diclorometano foi adicionado hidrocloreto de N-metoxi-N-metilamina (363 mg, 3,7 mmol, 1,1 eq.) seguido por cloreto bis(2-oxo-3-oxazolidinil)-fosfínico (961 mg, 3,7 mmol, 1,1 eq.) e trietilamina (1,7 mL, 12,2 mmol, 3,5 eq.). A reacção foi deixada a agitar à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto, durante a noite. No dia seguinte a reacção foi diluída com diclorometano e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (lx), NaCl aquoso saturado (lx), seco sobre sulfato de

73 776 4969.PG.01 ~32 sódio, filtrado e concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexanos:acetato de etilo 35:65) para se obter 426 mg (rendimento de 44%) do produto como um óleo amarelo.

Passo 5. Preparação de 2-f3-piridiniH-3-(terc-butoxicarbonil^--4-ditiolanocarboxaldeído

Uma solução de N-metoxi-N-metil-2-(3-piridinil)-4-ditiola-nocarboxamida (302 mg, 1,1 mmol, preparado como descrito atrás) foi arrefecida a -78eC e foi adicionado gota-a-gota hidretcrde diisobutilalumínio (DIBAL, 3,0 eq.) e a mistura reaccional foi agitada durante 2 horas. A reacção foi parada por meio de adição de cloreto de sódio e a mistura resultante foi submetida a partição entre hidróxido de sódio e acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio, filtrada, e o solvente removido in vacuo para produzir 209 mg (rendimento de 90%) do composto do título.

Passo 6. Preparação do di-hidrocloreto de N-f3-f3,4,5.trimetoxi-benzoil^ fenil1-2-f 3-oiridinil)ditiolan-4-ilmetilamina 0 aldeído (109 mg, 0,5 mmol, preparado como atrás no Passo 5) foi dissolvido em metanol e reagiu com 3-(3,4,5-tri-metoxibenzoil)anilina (81 mg, 1,3 mmol, preparada como descrito no Exemplo 1, Passo 8) na presença de cianoboro-hidreto de sódio (81 mg, 2,5 eq., 1,3 mmol). O pH da solução foi ajustado a pH 3 com ácido acético e a mistura reaccional foi agitada durante a noite sob azoto. Os conteúdos da reacção foram concentrados in vacuo e o resíduo foi submetido a partição entre bicarbonato de sódio e acetato de etilo. As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura e secas sobre sulfato de sódio, e filtradas para produzir 390 mg de um sólido oleoso amarelo. 0 material foi purificado adicionalmente por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexanos:acetato de etilo 60:40). A amina foi convertida para o sal de di-hidrocloreto por agitação em ácido clorídrico 4M e dioxano durante 2 horas. A reacção foi concentrada in vacuo e captada com cloreto de metileno para 73 776 4969.PG.01

-33- c.

produzir o composto do título. RMN (CDCI3, 300 MHz); δ 3,3-3,6

IV (CDCI3): 3300(larga), 1660, 1600, 1590, 1280. Espectro de massa (DCI/NH3): 393 (M+l)+, 215, 182.

Exemplo 11

Preparação de N-f3-benzoilfenil)-2-f3-piridinil)ditiolan-4-ilme-tilamina A N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)ditiolan-4-ilmetilamina foi preparada utilizando o procedimento do Exemplo 10, com a excepção de ter sido utilizada 3-benzoilanilina em vez de 3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)anilina. RMN (CDC13, 300 MHz); í 3,35 (dd, 0,5H, J=5, 12 Hz), 3,45 (dd, 0,5H, J=2, 5 Hz), 3,55 (dd, 0,5H, J=5, 12 Hz), 3,8 (m, 0,5H), 3,87 (s, 6H), 3,95,(3, 3H) , 4,1-4,2 (c, 2H) , 4,27-4,35 (c, 2H), 5,65 (s, 0,5H), 5,67 (s, 0,5H), 6,85 (m, 0,5H), 6,9 (m, 0,5H), 7,1 (s, 2H), 7,1 (m, 0,5H), 7,25 (S, 2H), 7,27 (m, 0,5H), 7,89 (ddd, 0,5H, J=3, 3,8 Hz), 7,95 (ddd, 0,5H, J=3, 3,9 Hz), 8,53 (m, 1H), 8,68 (d largo, 0,5H, J=3 Hz) 8,72 (d largo, 0,5H, J=3 Hz). IV (CDC13): 2900 (largo), 1650 (fraco), 1580, 1460, 1420, 1340, 1130. Espectro de massa (FAB):483 (M+l)+.

Exemplo.12

Preparação do tri-hidrocloreto de N-f3-benzoilfenil)-N-metil--2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina

Passo 1. Preparação de N-f3-benzoilfenil)-2-f3-piridinil)-3--terc-butoxicarboniltiazolid-4-ilmetilamina A uma solução de N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)-3-terc-'-butoxicarboniltiazolid-4-ilmetilamina (201 mg, 0,42 mmol, preparada como descrito no Exemplo 5) e tetra-hidrofurano seco a 0eC com agitação sob azoto foi adicionada bis(trimetilsi-lil)amida de lítio seguida pela adição de iodeto de metilo (32 Λ 73 776 4969.PG.01 34

μΙ>, 1,3 eq.). A mistura resultante foi agitada durante 3 horas a 0eC. A solução foi submetida a partição entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada para dar 259 mg do composto do título como um óleo cor-de-laranja. O composto foi adicionalmente purificado por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com hexanos:acetato de etilo 1:3).

Passo 2. Preparação do tri-hidrocloreto de N-(3-benzoilfenil)-N--metil-2-f 3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina A uma solução de N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)-3-terc--butoxicarboniltiazolid-4-ilmetilamina (57 mg, preparada como no Passo 1) em dioxano à temperatura ambiente com agitação foi adicionado ácido clorídrico em dioxano (5 mL, 4M) e a solução resultante foi agitada durante 18 horas. A mistura reaccional foi concentrada, submetida a partição entre cloreto de metileno e carbonato de sódio aquoso saturado. A fase aquosa foi extractada com cloreto de metileno e as camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e secas. O óleo vermelho resultante foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com acetato de etilo. Este material foi convertido no di-hidrocloreto utilizando ácido clorídrico 4M e dioxano para produzir 15 mg do composto do título como um sólido cor-de-laranj a. RMN (CDC13, 300 MHz); 5 2,91 (m, 1H), 3,08 (s, 1,5H), 3,09 (S, 1,5H), 3,20 (dd, 1H, J=6,0, 10,0), 3,54-3,60 (C, 2,5H), 3,91 (m, 0,5H), 5,58 (s, 0,5H), 5,70 (s, 0,5H), 6,69-7,09 (c,1H), 7,19-7,36 (c, 5H), 7,48 (m, 2H), 7,56 (m,lH), 7,81 (m,2H), 8,52 (dd, 0,5H, J=1,0, 6,0), 8,57 (dd, 0,5H, J=1,0, 6,0), 8,71 (d, 0,5H, J=1,0), 8,73 (d, 0,5 H, J=1,0). Espectro de massa (DCI/NH3) 390 (M+H)+, 107.

Exemplo 13

Preparação de N-Γ3-/3.4.5-trimetoxibenzoil)fenillΓ2-f3-piri-dil)-pirrolidin-5-ilImetilamina

Passo 1. Preparação de l-(3-piridill-pen-4-en-l-ol O reagente de Grignard brometo de 4-but-l-eno magnésio foi

73 776 4969.PG.01 -35-preparado de modo convencional a partir de 4-bromo-l-buteno (50 g, 0,3703 mol. Aldrich) e reagiu com piridina-3-carboxaldeído (38,54 g, 0,359 mol.) por meio da adição gota-a-gota. da solução de Grignard. A mistura resultante foi deixada aguecer lentamente até à temperatura ambiente e foi agitada durante a noite. A reacção foi parada pela adição de cloreto de amónio aquoso saturado e as camadas foram separadas. As camadas orgânicas foram combinadas e secas sobre sulfato de magnésio, filtradas, e o filtrado concentrado por meio de evaporação rotativa para se obter um óleo cor-de-laranja. Este material foi purificado por cromatografia em sílica gel (eluindo com acetato ‘de etilo:hexanos 3:7) para produzir 25,97 g (43%) de l-(3-piridil)--pen-4-en-l-ol.

Passo 2. Preparação do metanossulfonato de l-(3-piridil)-oen--4-en-l-ilo l-(3-piridil)-pen-4-en-l-ol (24,96 g, 0,1529 mol, preparado como no Passo 1 atrás) em cloreto de metileno foi agitado sob azoto e foi adicionada trietilamina (0,1827 mol) por meio de uma seringa. Cloreto de metanossulfonilo (19,27 g, 0,168 mol) em cloreto de metileno foi adicionado, gota-a-gota, à mistura durante um período de l hora. A reacção foi parada 30 minutos após a adição completa do cloreto de metanossulfonilo, com cloreto de amónio aquoso saturado. As camadas resultantes foram separadas e as camadas orgânicas lavadas com bicarbonato de sódio e salmoura. O extracto orgânico foi concentrado para se obter um óleo amarelo (36,4 g, rendimento de 99%).

Passo 3. Preparação de l-(3-PÍridil)-l-aminopent-4-eno 0 metanossulfonato de l-(3-piridil)-pen-4-en-l-ilo ( 36,4 g, 0,1508 mol.) em etanol foi feito reagir com uma solução de azida de sódio (0,1597 mol) em etanol. A mistura reaccional foi agitada durante duas horas à temperatura ambiente, seguida pela rápida adição de 1,3-propanoditiol (0,2778 mol.) e trietilamina (45 mL, 0,3194 mol) por meio de uma seringa. A suspensão resultante foi agitada durante a noite, seguida por filtração 73 776 4969.PG.01 -36-

para se recolher um sólido branco que foi lavado com etanol. o filtrado e lavagem combinados foram concentrados deixando um resíduo semi-sólido amarelo. 0 resíduo foi suspenso em éter dietílico e filtrado para dar um sólido branco sujo que foi recolhido e lavado com éter dietílico e cloreto de metileno. O filtrado e as lavagens combinados foram concentrados para darem o composto do título como um óleo amarelo (40,97 g).

Passo 4. Preparação do N-terc-butoxicarbonil-l-f3-pjridil^-l--aminopent-4-eno 0 l-(3-piridil)-l-aminopent-4-eno (24,46 g) foi dissolvido em dioxano (625 mL) e adicionou-se hidróxido de sódio (IN, 500 mL). A suspensão resultante foi arrefecida num banho de gelo e foi adicionado rapidamente carbonato de di-terc-butilo (102,7 g, 0,661 mol.) em dioxano e a mistura reaccional foi deixada aquecer à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi evaporada e o resíduo resultante foi retomado em água e cloreto de metileno. A camada orgânica foi separada e posta de lado e a camada aquosa foi lavada duas vezes com cloreto de metileno. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura saturada. 0 extracto orgânico lavado foi seco sobre sulfato de magnésio, o filtrado foi seco e concentrado, e o resíduo foi purificado pòr cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com acetato de etilo:hexanos 4:6). As fracções foram combinadas para produzir o composto do título (rendimento de 64%, 25,79 g).

Passo 5. Preparação do N-terc-butoxicarbonil-l-(3-PÍridil)-l--amino-4.5-di-hidroxipentano 0 N-terc-butoxicarbonil-l-(3-piridil)-l-aminopent-4-eno (5,0 g, 0,0191 mol, preparado como descrito no Passo 4) foi adicionado a uma mistura de tetróxido de ósmio (5, 0 g, 0,01917 mol.) em piridina. A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas e depois interrompida com bissulfito de sódio. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos e depois filtrada através de "Celite". 0 bolo de filtração foi lavado com água e o filtrado e as lavagens combinados foram deixados em repouso durante a noite à temperatura ambiente. A solução castanha resultante foi concentrada e purificada por cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com acetona para produzir 2,64 g do composto do título (rendimento de 47%).

Passo 6. Preparação do N-terc-butoxicarbonil-1-(3-piridil)--l-amino-4-di-hidroxi-5-difenil-terc-butilsiloxipentano 0 N-terc-butoxicarbonil-1-(3-piridil)-l-amino-4,5-di-hi-droxi-pentano (1,0 g, 0,00337 mol, preparado como descrito no Passo 5) foi suspenso em cloreto de metileno (8 mL) e foi adicionada trietilamina. Foi adicionado dimetilaminopiridina (16 mg) em cloreto de metileno e a suspensão foi arrefecida a -78eC e foi adicionado terc-butilclorodifenilsilano (1,02 g, 0,004 mol) em cloreto de metileno, gota-a-gota. A mistura resultante foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura reaccional foi diluída com cloreto de metileno e lavada com ácido cítrico e salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o filtrado foi concentrado para produzir o composto do título (1,7 g, rendimento de 92%).

Passo 7. Preparação do metanossulfonato de 4-ΓN-terc-butoxicarbonil-1- (3-piridil)-l-amino-5-difenil-terc-butilsiloxipentanilol 0 N-terc-butoxicarbonil-1-(3-piridil)-l-amino-4-di-hidroxi--5-difenil-terc-butilsiloxipentano (274 g, 0,0005 mol, preparado como descrito no Passo 6) foi dissolvido em 2,5 mL de cloreto de metileno e 154 μΐ de trietilamina e arrefecido a -78°c. Foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (0,001 mol), gota-a-gota e a reacção foi agitada durante 45 minutos e diluída com cloreto de metileno e lavada com cloreto de amónio e salmoura saturada. A camada orgânica lavada foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o filtrado foi concentrado sob alto vácuo para produzir o composto do título (293 mg, rendimento de 94%).

73 776 4969.PG.01 -38-

Passo 8. Preparação do l-terc-butoxicarbonil-2--(3-piridil)-5-difenil-terc-butilsiloxipirrolidina O metanossulfonato de 4-[N-terc-butoxicarbonil-l-(3--piridil)-l-amino-5-difenil-terc-butilsiloxipentanilo] (1,043 g, 0,00167 mol, preparado como descrito acima) foi misturado com tetra-hidrofurano (10 mL) e terc-butóxido de potássio (288 mg, 0,00257) a -78eC. Foram adicionados após cerca de 30 minutos cloreto de amónio saturado e cloreto de metileno. Após a extracção, a camada orgânica foi separada e lavada com salmoura saturada e seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o filtrado foi concentrado para produzir o composto do título (747 mg, rendimento de 87%).

Passo 9. Preparação de fl-terc-butoxicarbonil-2--(3-piridil)-pirrolidin-5-illmetanol A l-terc-butoxicarbonil-2-(3-piridil)-5-difenil-terc-butil-siloxipirrolidina (165 mg, 0,000319 mol, preparado como descrito atrás) foi adicionada a tetra-hidrofurano (2 mL) e agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto. Adicionou-se fluoreto de tetra-n-butilamónio em tetra-hidrofurano (0,000479 mol) por meio de uma seringa e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A solução foi concentrada e o resíduo foi retomado em cloreto de metileno. A solução resultante foi lavada com cloreto de amónio e a camada aquosa foi lavada com cloreto de metileno. As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e o filtrado foi concentrado numa goma amarela. A goma foi purificada adicionalmente por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com acetato de etilorhexanos 3:1) para produzir o composto do título na forma dos isómeros cis e trans. Estes isómeros foram transportados separadamente para os Passos 10-12.

Passo 10. Preparação do metanossulfonato de n-terc-butoxicar-bonil-2-f 3-piridil)-pjrrolidin-5-il1metanol 0 [l-terc-butoxicarbonil-2-(3-piridil)-pirrolidin-5- 73 776 4969.PG.01

-39-

-il]metanol (50 mg, 0,00018 mol, preparado como no Passo 9, atrás), foi adicionado a cloreto de metileno e agitado sob atmosfera de azoto e arrefecido a -78°C. Foi adicionada, por meio de uma seringa, trietilamina (56 μΐ) seguida pela adição gota-a-gota de cloreto de metanossulfonilo (28 ML). A mistura foi agitada durante 45 minutos e diluída com cloreto de metileno e lavada com cloreto de amónio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e o filtrado foi concentrado para produzir 69 mg do composto do título como uma goma amarela.

Passo 11. Preparação Ν-Γ3-Γ3.4.5-trimetoxibenzoil)fértil·)-N- -- (terc-butoxicarbonil)-(!-(terc-butoxicarbonil-2- (3-piridil λ -pir-rolidin-5-illmetilamina A uma solução de terc-butóxido de potássio (33,9 mg, 0,00030 mol), em 1 mL de tetra-hidrofurano arrefecida a -78"C, foi adicionada uma solução de 127,8 mg (0,00033 mol) de N-terc-butoxicarbonil- (3,4,5-trimetoxibenzoil) anilina (preparada como descrito no Exemplo 1, Passo 7) em 1 mL de tetra-hidrofurano. A solução amarela resultante foi adicionada a uma solução de metanossulfato de [l-(terc-butoxicarbonil-2--(3-piridil)-pirrolidin-5-il]metanol (43,1 mg, 0,00012 mol) em 1 mL. A solução foi agitada a 60 °C durante a noite, seguida de arrefecimento. A solução foi lavada com cloreto de amónio e salmoura. O extracto orgânico foi seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e o filtrado foi concentrado para se obter um sólido branco. O sólido foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel, eluindo com acetato de etiloíhexanos 3:7 para produzir 34,5 mg (44%) do composto do título.

Passo 12. Preparação Ν-Γ3-(3.4.5-trimetoxibenzoil)feni!1(2-(3--niridil)-pirrolidin-5-ilImetilamina N- [ 3- (3,4,5-trimetoxibenzoil) fenil]-N-( terc-butoxicarbonil) -- [ 1- (terc-butoxicarbonil )-2-( 3-piridil) -pirrol idin-5-il ] metilami-na (70,0 mg, 0,000108 mol preparada como descrito atrás), foi agitada com 540 μΐ de acido clorídrico 4M e dioxano sob atmosfera de azoto à temperatura ambiente. Após cerca de 45 minutos a 73 776 c,

4969.PG.01 -40

mistura foi concentrada e o resíduo foi azeotropado três vezes com tolueno. O resíduo sólido amarelo resultante foi triturado com éter etílico e o sólido seco durante a noite sob. alto vácuo para produzir 53,8 mg (89%) do composto do título nas formas cis e trans.

Isómero cis RMN (CDC13/ 300 MHz); δ 1,97-2,09 (c, 1H), 2,55 (s largo 1H), 3,60-3,70 (C, 1H), 3,74-3,84 (C, 1H), 3,85-3,95 (c, 2H), 3,89 (s, 6H), 3,92 (s, 3H), 4,40 (s largo, 1H), 5,13 (s largo, 1H), 7,07 (s, 2H), 7,12 (d, 2H, J=7,5 Hz), 7,23 (s, 1H), 7,32 (t, 1H, J=9 Hz), 8,07 (s largo, 1H), 8,85 (s largo, 1 H), 9,09 (d, 1H, J=9 Hz), 9,41 (s largo, 1H), 10,72 (s largoy^lHjT Espectro de massa (DCI/NH3): 448 (M+H) +

Isómero trans RMN (CDC13, 300 MHz); δ 2,1-2,23 (c, 1H), 2,60 (s largo, 3H), 3,55-3,67 (c, 1H), 3,80-3,95 (c, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,91 (s, 3H), 4,20 (s largo, 1H), 4,41 (s largo, 1H), 5,25 (s largo, 1H), 7,10 (s, 2H) 7,16 (s largo, 1H), 7,23-7,32 (c, 2H), 7,40 (s largo, 1H), 7,95 (s largo, 1 H), 8,89 (s largo, 2H), 9,50 (s largo, 1H), 10,57 (s largo, 1H). Espectro de massa (FAB): 448 (M+H)+

Exemplo 14

Preparação de Ν-Γ2-Γ3-piridinil)tiazolid-4-ilmetil1-Ν'~Γ3--(3,4.5-trimetoxibenzoilyfenillureia

Passo l. Preparação do 2-f3-piridinil)-3-terc-butoxicarboniltia-zolid-4-ilmetanol A uma solução de ácido 2-(3-piridinil)-3-(terc-butoxicarbo-nil)-4-tiazolidinacarboxílico (4,0 g, preparado como descrito no Exemplo 1, Passo 2) em tetra-hidrofurano seco sob azoto a 0°C com agitação foi adicionado complexo de dimetilsulfureto de borano (32 μΐ de 1M, 2,5 eq.) e a solução resultante foi agitada a 0°C durante 2 horas, seguida por agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Foi adicionado metanol (25 mL) e os solventes foram removidos por evaporação rotativa e o resíduo foi submetido a partição entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio. A fase aquosa foi extractada com acetato de etilo e as camadas orgânicas lavadas com bicarbonato de sódio aquoso 73 776 4969.PG.01 -41-

saturado, e secas sobre sulfato de magnésio. Após filtração, o resíduo foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com hexano:acetato de etilo 1:3, para produzir 1.591 g do composto do título. RMN (CDC13, 300 MHZ); δ 1,26 (s largo, 9H), 2,97 (dd, 1H, J= 1,5, 12,0), 3,37 (dd, 1H, J= 7,0, 12,0), 3,50 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,88 (S, 6H), 3,92 (s, 3H), 4,81 (m, 1H), 6,01 (S largo, 1H), 6,92 (d largo, 1H, J= 7,5), 7,06 (s, 1H), 7,18-7,32 (c, 4H), 7,66 (d largo, 1H, J=7,5), 8,50 (dd, 1H, J=2,0, 5,5), 8,60 (s largo, 1H). IV (CDC13): 1685, 1580, 1325. Espectro de massa (DCI/NH3) ·’ 566 (M+H)+ · " “ “ ' ~ “

Passo 2. Preparação do metanossulfonato 2-f3-piridinilϊ-3-terc--butoxicarboniltiazolid-4-ilmetilo 0 2-(3-piridinil)-3-terc-4-butoxicarboniltiazolid-4-ilme-tanol (6,7 g, preparado como descrito no Passo 1, acima e trietilamina (4,6 g, 46 mmol) em cloreto de metileno foi feito reagir com cloreto de metanos sulfunilo (3,4 g) com agitação durante 1 hora a 0°C. A mistura reaccional foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura, seco. sobre sulfato de magnésio, filtrado e concentrado para se obter o composto do título (7,9 g).

Passo 3. Preparação de 2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarboniltia-zolid-4-ilmetilazida 0 metanossulfonato de 2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarbo-nil-tiazolid-4-ilmetilo (7,6 g, 1,0 eq. preparado como descrito no Passo 2) e azida de sódio (2,6 g, 40 mmol) foram dissolvidos em dimetilformarnida e aquecidos a 105eC e agitados durante a noite à mesma temperatura. A mistura foi então arrefecida à temperatura ambiente e lavada com salmoura. A fase aquosa foi extractada duas vezes com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas para se obterem 6,5 g do composto do título como um óleo amarelo. Este material foi purificado por cromatografia "flash" em sílica gel (eluindo com 73 776

4969.PG.01 -42 c

hexano:acetato de etilo 1:3), para dar 2,0g.

Passo 4. Preparação de 2-(3-piridinil^-3-terc-butoxicarbonil-tiazolid-4-ilmetilamina A uma solução de 2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarboniltia-zolid-4-ilmetilazida (2,0 g, 1,0 eq. preparada como descrito atrás) em metanol foi adicionado 1,3-propanoditiol (1,3 g, 2,0 eq.), seguido pela adição de trietilamina (1,2 g, 12,4 mmol). A reacção foi agitada durante 4 dias à temperatura ambiente e depois filtrada através de "Celite" e concentrada. O resíduo-foi submetido a partição entre éter dietílico e ácido clorídrico aquoso 10%. A fase aquosa foi extractada com éter dietílico e os extractos de éter rejeitados. A fase aquosa foi neutralizada com bicarbonato de sódio sólido e extractada três vezes com clorofórmio. As camadas orgânicas combinadas foram extractadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, e concentradas para se obter 1,5 g do composto do título como um óleo amarelo claro

Passo 5. Preparação de 3-(3.4.5-trimetoxibenzoil^fenilisocianato 0 hidrocloreto de 3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)anilina (6,48 g, 1,0 eq., preparado como descrito no Exemplo 1, Passo 8) foi suspenso em tolueno e aquecido ao refluxo. Foi feito borbulhar gás fosgénio na mistura reaccional até ter sido obtida uma solução límpida. A mistura reaccional foi arrefecida à temperatura ambiente e o tolueno foi removido para dar um líquido com cor âmbar que solidificou em repouso para se obter 0,50 g do composto do título.

Passo 6. Preparação de N-f2-(3-PÍridinil)-3-terc-butoxicarbonil-tiazolid-4-ilmetin-N/-f 3-f 3.4.5-trimetoxibenzoil)fenil1ureia A uma solução de 2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarboniltia-zolid-4-ilmetilamina (1,5 mmol, 1,0 eq. preparada como descrito no Passo 4, atrás) dissolvida em 5 mL de tetra-hidrofurano foi adicionada 3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil-isocianato (1,5 mmol,

73 776 4969.PG.01 -43-1,0 eg., preparado como descrito no Passo 5, atrás), e a reacção foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi vertida em cloreto de amónio aquoso e foi extractada duas vezes com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas para produzir uma espuma amarela que foi purificada por cromatografia "flash" em sílica gel, eluindo com acetato de etilo, para dar 0,48 g do composto do título como uma espuma branca.

Passo 7, Preparação de N-[2-( 3-piridinil)tiazolid-4-ilmetlI")-N'-— Γ3—f3.4.5-trimetoxibenzoil)fenil1ureia A N- [ 2- (3-piridinil) -3-terc-butoxicarboniltiazolid-4-ilme-til]-Ν'-[3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil]ureia (0,48 g, preparada como descrito atrás) foi misturada com uma solução de ácido clorídrico 4M e dioxano e foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente, o dioxano foi removida e o resíduo foi submetido a partição entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase aquosa foi extractada com acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas. A espuma resultante foi purificada por cromatografia "flash" em sílica gel eluindo com 5% metanol/clorofórmio para produzir 0,28 g do composto do título. RMN (CDC13, 300 MHz): í 2,85 (m, 1H), 3,24 (m, 1H) 3,46 - 3,82 (c, 2H), 3,86 (S, 6H), 3,94 (s, 3H), 5,51 (m, 1H), 5,57 (d, 1H, J= 16 Hz), 7,07 (s, 2H), 7,25 (m, 1H), 7,38 (m, 2H), 7,57 (m, 2H), 7,81 (m, 1H), 8,52 (td, 1H, J=6, 1,5 Hz), 8,72 (S largo, 1H). Espectro de massa (DCI/NH3): 509 (M+H)+.

Exemplo 15

Preparação de di-hidrocloreto de N-(2-(3-piridinil)tiazolid--4-ilmetil 1 -NW 3-benzoilfenil) ureia 0 di-hidrocloreto de N-[2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetil]--N#-(3-benzoilfenil)ureia foi preparado utilizando o processo do

V 73 776 4969.PG.01 -44-

'

Exemplo 14, com a excepção de ter sido utilizado 3- -benzoilfe-nilisocianato em vez de 3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)-fenilisocianato. EMN (CDCI3, 300 MHz): 5 2,81 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,23-3,80 (c, 3H), 5,55 (d, 1H, J=21 Hz), 5,82 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,44 (t, 2H, J=7,5 Hz), 7,51-7,86 (c, 7H), 8,49 (m, 1H), 8,72 (s, 1H). Espectro de massa (DCI/NH3): 419 (M+H)+.

Exemplo 16

Preparação de N- Γ 2-(3-piridinil )ditiolan-4-ilmetil ]N/-<r 3--benzoilfenilΪureia A N-[2-(3-piridinil)ditiolan-4-ilmetil]-N'-(3-benzoilfe-nil)ureia foi preparada utilizando o processo do Exemplo 14, com a excepção de ter sido utilizado 2-3(piridinil)-4--ditiolanocarboxilato de metilo em vez de 2-3(piridinil)-3--(terc-butoxicarbonil)-4-tiazolidinacarboxilato de metilo e 3-benzoilfenil-isocianato em vez de 3-(3,4,5-trime-toxibenzoil)fenilisocianato.

Claims (11)

1. w v 73 776 4969.PG.01

   REIVINDICAÇÕES 1 - Composto caracterizado por ter a fórmula estrutural: R'

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na qual R1 é hidrogénio ou alquilo de um a seis átomos de carbono; R1 é um ou mais grupos seleccionados a partir de -hidrogénio, halogéneo, e alquilo de um a seis átomos de carbono; R2 é um ou mais grupos seleccionados a partir de hidrogénio, halogéneo, e alcoxi de um a seis átomos de carbono; A está ausente ou é -N(R^)C(0)- onde R^ é hidrogénio ou alquilo de um a seis átomos de carbono; X é seleccionado do grupo consistindo em enxofre ou >NR5 onde R5 é hidrogénio, alquilo de um a seis átomos de carbono, alcoilo de um a seis átomos de carbono, -C(o)NR6R7 onde R® e R7 são independentemente hidrogénio ou alquilo de um a seis átomos de carbono, e -C(0)0R8 onde R8 é um radical alquilo de um a seis átomos de carbono; e Y é enxofre ou metileno. 1 - Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado 2 por ter a estrutura 73 776 // /*Λ // rfff / 4969.PG.01 ' c;: ^ ·— -46- ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na qual X, R-L, -R2 e R3 são definidos como anteriormente. por
2. 3 - Composto de acordo com a reivindicação ter a estrutura R3 1» caracterizado

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na qual X, R1, R2, R3 e R4 são definidos como anteriormente.
3. 4 - Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por R1 e R2 serem seleccionados independentemente de hidrogénio e alquilo de um a seis átomos de carboiio e R3 ser hidrogénio ou alcoxi de um a seis átomos de carbono, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. 5 - Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por R1 ser hidrogénio ou metilo e R2 ser hidrogénio e R3 ser seleccionado de entre o grupo consistindo em hidrogénio, 3,4--dimetoxi, 3,5-dimetoxi, e 3,4,5-trimetoxi.

   « 73 776 4969.PG.01

   C?- ' i -47- .....„4Τ ^
5. 6 - Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R1 e R4 serem independentemente seleccionados de hidrogénio e alquilo de um a seis átomos de carbono; R2 ser hidrogénio; R3 ser hidrogénio ou alcoxi de um a seis átomos de carbono; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
6. 7 - Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por R1 e R4 serem independentemente seleccionados de hidrogénio e metilo; R2 ser hidrogénio; R3 ser 3,4,5-trimetoxi e R5 ser hidrogénio.
7. 8 - Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser seleccionado do grupo consistindo em N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina; N-(4-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetilamina; N-(3-benzoilfenil)-N-metil-2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilme-tilamina; N—(3-benzoilfenil)-[2-(3-piridinil)-3-metiltiazolid-4-il]-metilamina; N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)-3-terc-butoxicarbonil-tiazolid-4-ilmetilamina; N-[3-(3,4/5-trimetoxibenzoilfenil]-2-(3-piridinil)tiazolid--4-ilmetilamina; N-[3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil]-[2-(3-piridinil)-3--terc-butoxicarboniltiazolid-4-il]metilamina; N-(4-fenoxifenil )-2-( 3-piridinil )tiazolid-.4-ilmetilamina; N-[3-(3,4,5-trimetoxibenzoilfenil]-2-(3-piridinil)ditiolan--4-ilmetilamina; N-(3-benzoilfenil)-2-(3-piridinil)ditiolan-4-ilmetilamina; N- [3-(3,4,5-trimetoxibenzoil)fenil]-[2-(3-piridinil)-pirro-lidin-5-il]metilamina; N-[2-(3-piridinil)tiazolid-4-ilmetil]-N/-[3-(3,4,5--trimetoxibenzoil)fenil]-ureia; N-[2-(3-piridinil)ditiolan-4-ilmetil]-Ν'-(3-benzoil-fenil)ureia. ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
8. 9 - Composição farmacêutica eficaz para inibir o factor de -48- -48- 4·Α·' 73 776 4969.PG.01 activação de plaquetas (PAF) caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1 em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.
9. 10 - Composto de acordo com a reivindicação 1 para uso como medicamento.
10. 11 - Composto de acordo com a reivindicação 1 para uso para curar estados doentios mediados pelo factor de activação de plaquetas (PAF). " -----------
11. 12 - Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1 para a preparação de um medicamento para o tratamento de estados doentios mediados pelo factor de activação de plaquetas (PAF). Lisboa, 30. M 1992 Por ABBOTT LABORATORIES =0 AGENTE 0FICIAL=