PL93587B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wydziela¬ nia albuminy z krwi, produktów krwi, innych cie¬ czy ustrojowych albo ekstraktów tkankowych, po- prtzez oddzielenie plazmy od stalych skladników krwi, komórek krwi i plytek krwi, jak równiez, W razie potrzeby, odzyskanie rozpuszczonych sklad¬ ników nie-albuminowo-plazmowych z plazmy, wy¬ tracenie i oddzielenie globulin, wzbogacenie albu¬ miny, korzystnie przez wytracenie i oddzielenie.Krew jest ciecza, która sklada sie ze skladników stalych i cieklych. Do skladników stalych naleza czerwone i biale cialka krwi, jak równiez plytki krwi. Plazma albo ciekla czesc krwi zawiera okolo 90% wody i 10% substancji stalych. Do substan¬ cji, rozpuszczonych w plazmie, nalezy miedzy in¬ nymi albumina, która jako jedyny skladnik bial¬ kowy plazmy jest odporna na ogrzewanie w tem¬ peraturze powyzej 60°C. Znane jest oddzielanie plazmy krwi od czerwonych i bialych cialek krwi, jak równiez od plytek krwi. Znane jest równiez usuwanie z plazmy gamma-globulin, jak równiez substancji sprzyjajacych krzepnieciu, jak np. fi- brynogen. Dla celów terapeutycznych albo diagno¬ stycznych pozadane jest otrzymanie mozliwie czys¬ tego roztworu albuminy albo pasty albuminowej, która mozliwie nie powinna juz zawierac dalszych skladników bialkowych plazmy krwi.Do wydzielania albuminy z krwi stosuje sie w szczególnosci sposób, znany pod nazwa „metody COHN" (J. Am. Chem. SoiC. 68(1046); sto:. 459), który przy wydajnosci okolo 70% umozliwia uzy¬ skanie stopnia czystosci produktu koncowego tyl¬ ko 95—98%. W sposobie tym stosuje sie jako pro¬ dukt wyjsciowy mieszana plazme próbek krwi i stanowi on w zasadzie frakcjonowane stracanie w róznych warunkach. W pierwszym stopniu od¬ dziela sie najpierw w temperaturze minus 3°C i przy wartosci pH = 7,2 przy dodaniu 8% alko¬ holu pierwszy osad, przede wszystkim fibrynogen.Powstajaca ciecz w trzech dalszych stopniach, .kaz¬ dorazowo w temperaturze ponizej 0°C i przy wzra¬ stajacej zawartosci alkoholu w cieczy, uwalnia sie stale od gamma-globulin, jak równiez alfa- i be- tagdobulin. Nastepnie otrzymuje sie tak zwana su¬ rowa paste albuminowa, która albo przeprowadza sie w 5%-wy roztwór albuminy albo poddaje sie dalszemu oczyszczaniu, otrzymujac 20%-wy roz¬ twór albuminy.Calkowite frakcjonowane oddzielenie wedlug znanej metody COHN wymaga okolo 6—8 dni przy normalnych 8-godzinnych dniach roboczych.Ponadto w metodzie tej wade stanowi to, ze trzeba przeprowadzic liczne cykle robocze przy dokladnie ustalonych temperaturach ponizej 0°C. Wymaga to albo utrzymywania calego laboratorium w tej temperaturze, alb chlodzenia z duzym nakladem naczyn reakcyjnych. Obydwa rozwiazania stano¬ wia wade i sa w szczególnosci bardzo uciazliwe dla obslugi laboratorium.Zadaniem wynalazku jest zatem ulepszenie w 9358793587 3 sposób decydujacy znanej metody, w szczególnosci celem skrócenia czasu pracy, ograniczenia cykli roboczych, zmniejszenia obciazenia obslugi i zwiek¬ szenia stopnia czystosci bez zmniejszenia wydaj¬ nosci, a ponadto równiez celem znacznego zmniej¬ szenia nakladu technicznego. Jako produkty wyjs¬ ciowe dla procesu wedlug wynalazku stasuje sie krew, produkty krwi, inne ciecze ustrojowe albo ekstrakty tkankowe. Przez okreslenie „produkty krwi" nalezy rozumiec np. produkty posrednie, otrzymane metoda COHN. Przez okreslenie „eks¬ trakty tkankowe" rozumie sie np. ekstrakty z lo¬ zyska.Sposób wedlug wynalazku polega na oddziele¬ niu plazmy od .stalych skladników krwi, komórek krwi i plytek krwi, jak równiez, w razie potrze¬ by, odzyskaniu skladników nie-albuminowych z plazmy, wytraceniu globulin przez ogrzewanie od¬ dzielonej cieczy w temperaturze 60—75°C w obec¬ nosci alkoholi o skladzie CH8-(CH2)n-OH, n=0,l lub 2 i substancji stabilizujacych albuminy, od¬ dzieleniu cieczy od wytraconych globulin oraz na wzbogaceniu albuminy, znajdujacej sie w cieczy.Istote sposobu stanowi ogrzewanie cieczy, za¬ wierajacej albuminy, w obecnosci alkoholu. Al¬ bumine chroni sie przy tym przed wytraceniem, w przeciwienstwie do wszystkich innych bialek plazmowych, przez dodanie substancji stabilizuja¬ cych. Specjalista przez substancje stabilizujace bialko lub albuminy rozumie przy tym takie, któ¬ re nawet przy ogrzewaniu czystych roztworów al¬ buminy do temperatury powyzej 60°C nie pozwa¬ laja na wystapienie widocznej zmiany albuminy.Prace Ballau et. al. (J. GWindical Inyest. 23(1944), str. 454—457 J. Diol. Chem. 153<1944), str. 589— —605) wskazuja na to, ze takie zwiazki sodu jak propionian, maslan, walerianian, kapronian, feny- looctan, fenylomaslan, tryptofan itd. maja pozadane wlasciwosci stabilizujace.Dzieki temu, ze globuliny zostaja calkowicie wy¬ tracone w temperaturze okolo 68°C, podczas gdy albuminy w obecnosci alkoholu i substancji sta¬ bilizujacych nieuszkodzone przetrzymuja ogrzewa¬ nie, mozliwe jest nieoczekiwanie zrezygnowanie z oziebiania przy oddzielaniu. Ponadto oszczedza sie jeszcze liczne cykle robocze, poniewaz odpada frakcjonowane wytracanie. Raczej wszystkie glo¬ buliny moga byc usuniete w jednym cyklu robo¬ czym.Optymalna temperatura do wytracania globulin w obecnosci kaprylanu sodu i alkoholu etylowego wynosi 68°C ±3°C. Nalezy zwrócic uwaige na to, ze skladniki nie-albuminowoplazmowe, których nie odzyskano w trakcie pierwszego etapu procesu, moga pozostawac w cieczy, zawierajacej albuminy, nie przeszkadzajac w przebiegu stracania albu¬ miny.Do wzbogacania albuminy z cieczy, zawierajacej albumine, nadaja sie jako srodowiska stracajace w szczególnosci kwas maleinowy i poliglikol etyle¬ nowy. Mozliwe jest jiednatoze równiez stosowanie innych polimeryzowanych, alifatycznych alkoholi wielowodorotlenowyich, kwasów organicznych, Okreslonych soli, monomeryciznych alkoholi lub 4 innych sposobów, nadajacych sie do wzbogacania bialka.W celu przeprowadzenia straconej pasty albumi¬ nowej w roztwór o zadanym stezeniu rozpuszcza sie ja w kcmzystinie buforowanej cieczy. Roztwór albuminy mozna wtenczas korzystnie i bez dodat¬ ku stabilizatora sterylizowac w podwyzszonej tem¬ peraturze.Warianty przebiegu procesu jak równiez dalsze wlasciwosci i zalety nowego sposobu wyjasniono za pomoca rysunku.Fig. 1 a pirzedstawia proces stracania wedlug tak zwanej metody COHN. Fig. Ib przedstawia schematycznie sposób wedlug wynalazku. Fig. 2 a— 2h przedstawiaja diagramy immuno-elektroforezy (LEP) róznych preparatów albuminy, wytworzo¬ nych znanymi lub nowym sposobem.Na fig. la przedstawiony jest schematycznie sposób wedlug tak zwanej metody COHN. Jako substancje wyjsciowa stosuje sie m/ieszana plaz¬ me, która zadaje sie 8% etanolem i wytraca przy wartosci pH = 7,2 w temperaturze minut 3°C. Wy¬ dziela sie przy tym frakcja I. Znajdujaca sie nad nia ciecz zadaje sie nastepnie w temperaturze mi¬ nus 5~C i przy wartosci pH = 5,8 19% etanolem.Wydziela sie przy tym frakcja II—III, która skla¬ da sie glównie z gamma-globulin. Ponownie ciecz, znajdujaca sie nad nia, poddaje sie obróbce przy wyzszej zawartosci alkoholu, przy wartosci pH = = 5,8 i w temperaturze minus 7°C. Uzyskuje sie przy tym frakcje IV, glównie skladaj&jca sie z al¬ fa- i beta-globulin. Znajdujaca sie nad nia ciecz poddaje sie ponownie obróbce przy wartosci pH = = 4,8 a w temperaturze minus 7°C, przy zawartosci etanolu 40*/o. Wydziela sie przy tym jako osad tak zwana surowa albumina. Znajdujaca sie pod nia ciecz odrzuca sie.Surowa albumine mozna po wysuszeniu z za¬ mrazaniem pobrac lub przeprowadzic w 5% roz¬ twór w celu usuniecia alkoholu. Mozliwe jest jed¬ nak równiez ponowne pobranie pasty surowej al¬ buminy i przeprowadzenie iw oczyszczona paste al¬ buminowa w warunkach, podanych na wykresie.Ogólem do wytworzenia oczyszczonej pasty po¬ trzeba 6—8 dni, jesli pracuje sie w ciagu 8-godzin- nych dni. Oprócz tego trzeba bardzo starannie chlodzic, co wymaga odpowiednio duzego nakla¬ du aparatury technicznej.Natomiast sposób wedlug wynalazku mozna 50 przeprowadzic znacznie prosciej Gpatrz fig. 1 b).Takze tutaj jako substancje wyjsciowa stosuje sie mieszana plazme alibo inne ciecze, które zawie¬ raja zarówno albuminy, jak tez globuliny. Ciecz calkowicie w przeciwienstwie do znanych sposo- 195 bów, poddaje sie obróbce cieplnej w temperaturze 68°C w obecnosci alifatycznych, nizszoczasiteczgo- wych alkoholi i substancji stabilizujacych. Jako substancje stabilizujace nadaja sie, jak wspom¬ niano, okreslone alifatyczne kwasy karboksylowe 60 lub ich sole, jak np. kapryian sodu i dalsze zwiaz¬ ki, które sa wymienione w tatailicy III przez Ballou (J. Biol. Chem. 153 (1944) str. 589—605 i tablicy I (J. Clin Invest. 23 (1944) str. 455).W pierwszym etapie procesu, który przeprowa- 65 dza sie przy wartosci pH = 6,5 i zawartosci eta-93587 6 nolu 9'/f, wszystkie globuliny ulegaja denaturacji i wytraceniu. Znajdujaca sie nad nimi ciecz po oziebieniu zakwasza sie do pH = 4,8 i zadaje sie rodkiem stracajacym, jak np. 20—30%, korzyst¬ nie 22f/o, poliglilkolem etylenowym (PEG) albo 15— 5 %, korzystnie 18% kwasem maleinowym. Wy¬ dziela sie bardzo czysta pasta albuminowa, która pobiera sie do 5-^20%-go roztworu.Jak to juz wynika z dokladnych opisów, dla przeprowadzenia sposobu wedlug wynalazku po- io trzebny jest znacznie krótszy czas i znacznie mniejszy naklad techniczny w przeflfcrowadzeniu procesu. Poza tytm uzyskana albumina jest jesz¬ cze znacznie tJardziej czysta niz ta, która otrzy¬ muje, sde znanymi metodami. Fig. 2 a—2h przed- 15 stawiaja diagramy irnmuno-elekrt^ofbrezy (IEP), z których wynikaja nastepujace wnioski: Fig. 2 a i 2c (przedstawiaja diagramy IEP na¬ turalnej plazmy, na których po lewej stronie lwo- rizy sde sierp albuminy; dolaczajace sie po prawej 20 stronie ciensze sierpy pochodza od globulin i in¬ nych skladników plazmy, które przy „czystymi" roztworze albuminy musza byc traktowane jako zanieczyszczenia. Roztwory albuminy, wytworzone znanym sposobem, przedstawiaja fig. 2g i 2h. 25 Mozna wyraznie rozpoznac, ze czesc zanieczyszczen jest usunieta; jednakze nie sa usuniete wszystkie niepozadane skladniki bialkowe.Fig. 2b i 2d przedstawdaja roztwory albuminy, otrzymane sposobem wedlug wynalazku. Tultaj 30 mozna osiagnac prawie 100%-wa czystosc. Fig. 2f przedstawia ciecz, znajdujaca sie na górze, otrzy¬ mana po ostatnim etapie procesu, to znaczy wy¬ tracaniu albuminy. Widac przy tym, ze ciecz ta praktycznie nie zawiera juz albuminy. Z tego wy- 35 mika, ze joiz przy pierwszym kroku procesu, to znaczy -przy ogrzewaniu w temperaturze 68°C w obecnosci alkoholu i kaprylanu sodu, praktycznie zostalo osiagniete calkowite oddzielenie albumin i innych substancji bialkowychplazmy. 40 Poszczególne etapy procesu wyjasnia przyklad I.Przyklad I. Oddzielanie plazmy. Do oddzie¬ lania plazmy stosuje sde plazme, z której osiagnie¬ to czynniki koagulujace. Czyntndk koagulujacy VIII ^ (stezony czynnik koagulujacy, opisany np. w Brit.J. Haemiat. 21, 1-^20, 1971) i fibrynogen wydzielono przez frakcjonowanie i stracanie, i usunieto me¬ toda sedymentacji ferio-etanoiowej. Kompleks pro- trombiny usuwa sie przez adsorpcje DEAEncelu- M lozowa. Plazma pierwotna jest HBAg-mjemna, ma normalne wartosci transamiiny i nie zawiera wi_ docznej hemoglobiny. Do plazmy pierwotnej do¬ daje sie kaprylan sodu, az do uzyskania stezenia 0,004 mola. Mieszanine, która zawiera okolo 9% 53 etanolu, ogrzewa sie przy wartosci pH = 6,5.Wartosc pH uzyskuje siie za pomoca 0,5 n HC1.Temperature doprowadza sie w ciagu okolo 3 go¬ dzin, przy równoczesnym doprowadzaniu cieptla, do 68°C. Nastepnie ciecz oziebia sie. Wartosc pH 60 obniza sie do 4,4 za pomoca HC1. Zakwaszona plazme pozostawia sie przez noc w temperaturze okolo 10°C.Oddzielanie frakcji. Frakcjonowana j«uz w pod¬ wyzszonej temperaturze plazme wpompowuje sde M do wirówek ciaglym strumieniem przez weie sili¬ konowe. Oddzielone substancje bialkowe zbieraja sie w wirnikach. Aibumdna pozostaje w cieczy. Od¬ dzielone w wirnikach substancje bialkowe zawie¬ raja jeszcze albumine, która mozna uzyskac dodat-^ kowo przez ponowne przeprowadzenie w zawiesi* ne i ponowne odwirowanie.Zatezasiie alfeutmfoy przy równoczesnym zredu- ikowandu zawartosci sold (stracanie albuminy).Znajdujaca sie nad osadem ciecz saczy sie przez tak zwane filtry SSK, aby usunac pozostale lipi¬ dy i zmienione proteiny. Nastepnie dodaje sie jako rodek stracajacy kwas *maleinowy o stezeniu 18*/* w temperaturze pokojowej. W ciagu ki&u sekund wytraca sie albumina. Zawiesine albuminy odwi¬ rowuje sie ponownie. Kwas maleinowy i $oip: po¬ zostaja przy tym w cieczy, wolnej od prafcew^. Al¬ bumina zbiera sie w wirnikach w postaci pasty.Pobiera sie ja w pojemniku w wodzie destylowa¬ nej i przeprowadza w olcolo Wlnwy roztwór. Po klarownym przesaczeniu mozna przeprowadzic al¬ bumine bezposrednio w 4—5%-wy roztwór uiyttko- wy, przy czym wspólczynnik osmotyczny nastawia sie za pomoca giikozy albo innych odpowiednich substancji. Nastepnie produkt saczy sie jalowo, na¬ pelnia do butelek i pasteryzuje co najmniej w ciagu 10 godzin w temperaturze 60°C.Przyklad II. Wytwarzania 20%^go roztworu albuminy.Etapy „oddzielanie plazmy" i „oddzielanie frak¬ cji" sa takie same, jak w przykladzie I. Nastep¬ nie straca sie albumine i sporzadza 20%-wy roz¬ twór albuminy.Znajdujaca sie nad osadem ciecz saczy sie przez filtr SSK, aby usunac pozostale lipidy i zmienio¬ ne proteiny. Nastepnie jako srodek stracajacy do¬ daje sie poliglikol etylenowy o ciezarze czasteczr kowyrni okolo 4000—6000 w stezeniu B2% w tem¬ peraturze pokojowej. W ciagu 30 minut straca sie albumina. Zawiesine albuminy odwirowuje sie po¬ nownie. Poliglikol. etylenowy i sole pozestaia przy tym w cieczy, wolnej od protein. Albumina zbie¬ ra sie w wirnikach w postaci pasty. Pobiera sie ja w pojemniku w wodzie destylowanej i przeprowa¬ dza w okolo 8%-wy roztwór. 8%-wa albumine po klarownym saczeniu suszy sie przez liofilizacje.Wysuszony proszek pobiera sie w wodzie |Jesitylo- wanej, przy czym wspólczynnik osmotyczny moz¬ na ewentualnie dostosowac w sposób, wyjasniony juz w przykladzie I.Przyklad III. Uwaga wstepna: Wiadomo, ze dwie frakcje, kitóre powstaja przy zastosowaniu metody COHN i zostaja odrzucone, zawieraja al¬ bumine w takiej ilosci, której odzyskanie jest oplacalne. Konieczne jest przy tym oczywiscie po¬ danie prostej metody otrzymywania. Sa to frak¬ cje IV—I i frakcja IV. Jako frakcje IV—I okresla sie te frakcje, która otrzymuje sie ze znajdujacych sie nad osadem cieczy II i III przez dodanie 19% alkoholu w temperaturze minus 7°C i przy war¬ tosci pH = 5,2.Uzysk wynosi okolo 20—25 gramów wilgotniej pasty, w odniesieniu do litra plazmy pierwotnej, który zawiera okolo 30% proteiny. Jako frakcje IV7 93587 8 rozumie sie frakcje, otrzymana z powstalej cieczy Ij—III w dwóch etapach. Te dwa etapy stanowia przede wszystkim uzyskiwanie frakcja IV—I, jak poprzednio. Nastepnie dodaje sie alkohol az do ilosci 40%, utrzymujac temperature minus 6°C zawartosc pH = 6,5. Straca sie przy tym frakcja IV—IV. Osady odbiera sie przez odwirowanie jako frakcje IV. W wyniku otrzymuje sie okolo 30—35 gramów pasty na litr plazmy. Pasta sklada sie w % z proteiny.Proponuje sie nastepujacy sposób otrzymywania: 1,0: kg. frakcji IV—I (pasta) przeprowadza sie w zawiesine w 2,0 litrach wody, która zawiera 0,004 mola kaprylanu sodu jako substancje stabilizuja¬ ca. Za pomoca wodorotlenku sodu doprowadza sie wartosc pH do 7—7,5. Zawiesine miesza sie slabo w temperaturze pokojowej. Wartosc pH Okresowo sprawdza sie i nastawia. Wieksza czesc pasty roz¬ puszcza sie w ciagu godziny. Otrzymany surowy • roztwór zawiera okolo 10% proteiny i 4—5% al¬ koholu. Roztwór nastawia sie na 9% alkoholu.Nasitapnie ogrzewa sie do temperatury 68°C.Osad. odwirowuje sie i przemywa, aby usunac po¬ zostala jeszcze albumine. Powstajaca ciecz saczy sie .klarownie i w opisany sposób, wedlug przy¬ kladów I i II wytraca za pomoca poliglikolu ety¬ lenowego albo kwasu maleinowego* lub innych srodków stracajacych.Przyklad IV. W podobny sposób, jak w przykladzie III, mozna przeprowadzic w zawiesine 1,0 kg frakcji IV (pasta) w 3,0 litrach wody, która zawiera 0,004 mola kaprylanu sodu jako substan¬ cje stabilizujaca. Roztwór zawiera okolo 7,5% pro¬ teiny i okolo 7% alkoholu.Otrzymanie albuminy z roztworu przeprowadza sie w sposób, opisany w przykladzie III. W celu otrzymania albuminy z roztworu powinien on byc nastawiony na 9% alkoholu.Doswiadczalnie ustalono, ze okolo 20% proteiny we frakcji IV—I stanowi albumina. Mozna uzy¬ skac dodatkowo 1—2 gramów dodatkowej albumi¬ ny na litr plazmy wyjsciowej. Tego samego rzedu wielkosci jest dodatkowe uzyskanie albuminy przy frakcji IV.Zamiast wymienionego w przykladach wzboga¬ cania albuminy przez stracanie PEG i/albo susze¬ nie przez liofilizacje mozna równiez przeprowadzic ultrasaczenie albo ostrozne odparowanie wody z roztworu przez odparowanie rotacyjne.Jesli zatezanie cieczy, pozostalej po oddzielaniu globuliny, przeprowadza sie za pomoca innych me¬ tod niz przez stracanie albuminy, np. przez ultrasa- czenie, odparowanie rotacyjne, to trzeba nastawic zadany wspólczynnik osmotyczny, sklad soli i ste¬ zenie jonów wodorowych przez dialize wobec od¬ powiedniej cieczy.Oprócz plazmy krwi lub surowicy krwi mozna w ten sposób frakcjonowac wszystkie produkty, zawierajace albuminy, niezaleznie od tego, jakim procesom zostaly te frakcje poddane poprzednio.Mozliwe jest równiez poddanie temu procesowi in¬ nych cieczy ustrojowych, ekstraktów z narzadów i tkanek (lozysk). Mozna np. poddac równiez no¬ wemu procesowi jedna z frakcji posrednich w me¬ todzie COHN.Wydajnosc wynosi wedlug wyników doswiad¬ czalnych wiecej niz 90% obecnej pierwotnie albu¬ miny, podczas gdy przy znanych sposobach pomi¬ mo mniejszych stopni czystosci mozna osiagnac najwyzej wydajnosc 60—70%. PL

Claims (6)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wydzielania albuminy z krwi, produk¬ tów z krwi, innych cieczy ustrojowych i ekstrak¬ tów tkankowych poprzez oddzielenie plazmy od stalych skladników krwi, komórek krwi i plytek krwi, ewentualne odzyskanie rozpuszczonych skladników nie-albuminowo-plazmowych z plazmy, wytracanie i oddzielenie globulin, wzbogacenie al¬ buminy, korzysitnie przez wytracenie i oddzielenie, znamienny tym, ze wytracenie globulin prowadzi sie przez ogrzewanie oddzielonej cieczy w tempe¬ raturze 60—75°C w obecnosci alkoholi o wzorze CH8^(CH2)n-OH, w którym n=0,l lub 2 i sub¬ stancji stabilizujacych albuminy, po czym wyltra- cone globuliny oddziela sie.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wytracanie globulin prowadzi sie w obecnosci al¬ koholu etylowego.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1 lufo 2, znamienny tym, ze wytracanie globulin prowadzi sie w tempera¬ turze 60—75°C w obecnosci kaprylanu sodu i al¬ koholu etylowego.
4. 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wzbogacanie albuminy prowadzi sie przez wytra¬ canie za pomoca srodowiska, wytracajacego bialko.
5. 5. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze do roztworu, zawierajacego albuminy, dodaje sie 20—30% poliglikolu etylenowego. 6. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze do .roztworu, zawierajacego albuminy, dodaje sie 15—20% kwasu maleinowego. 7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wzbogacanie albuminy przeprowadza sie przez su¬ szenie z zamrazaniem. 8. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wzbogacanie albuminy przeprowadza sie przez ul- trasaczenie. 10 15 20 25 30 35 40 45 5093587 POLACZONA PLAZMA FRAKCJA I (FIBRYNOGENj OS'AD FRAKCJA U-JII (CAMMAGLOBULINA) FRAKCJA IV CALFA i BETAGLOBULINA) POLACZONA PLAZMA PH
6. 6.5 Et-OH 9% OSAD Y ^»"" CIECZ ODRZUCONY (DENATUROWANA GLOBULINA) T+)5do+20°C pH4.6 PEC 22% OSAD CIECZ ODRZUCONA ROZPUSZCZANIE SUSZENIE Z ZAMRAZANIEM DLA 5%-GO ROZTWORU DLA 20%-CO ROZTWORU Fig. Ib Fia 1a suszenie z zamrazaniem 3* DLA 5%-GO ROZTWORU y osad ODRZUCONY (POZOSTALA GLOBULINA) | OCZYSZCZONA| PASTA ALBUMINY CIECZ ODRZUCONA ZAWIERA ALBUMINE (Z RECULY) ODRZUCONO SUSZENIE Z ZAMRAZANIEM DLA 20y»-GO ROZTWORU fjs»** „mmitmmmmm. -^mmm^0^ ^^^^^^»^^^^^^^^^ f g ¦.tamT PL