PL202471B1 - Mieszaniny siarczanowanych polisacharydów, sposób ich wytwarzania oraz kompozycja farmaceutyczna - Google Patents
Mieszaniny siarczanowanych polisacharydów, sposób ich wytwarzania oraz kompozycja farmaceutycznaInfo
- Publication number
- PL202471B1 PL202471B1 PL365561A PL36556101A PL202471B1 PL 202471 B1 PL202471 B1 PL 202471B1 PL 365561 A PL365561 A PL 365561A PL 36556101 A PL36556101 A PL 36556101A PL 202471 B1 PL202471 B1 PL 202471B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- heparin
- activity
- benzyl ester
- mixtures
- salt
- Prior art date
Links
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims abstract description 75
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title claims abstract description 46
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 16
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 16
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 16
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- -1 alkaline earth metal salt Chemical class 0.000 claims description 58
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 55
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 45
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 39
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 claims description 28
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 21
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 21
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 21
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 21
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 claims description 18
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 17
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 16
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 16
- 229960003872 benzethonium Drugs 0.000 claims description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N dimethyl-(phenylmethyl)-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]ammonium Chemical group C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- GKTNLYAAZKKMTQ-UHFFFAOYSA-N n-[bis(dimethylamino)phosphinimyl]-n-methylmethanamine Chemical compound CN(C)P(=N)(N(C)C)N(C)C GKTNLYAAZKKMTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims description 5
- ITAWMPSVROAMOE-UHFFFAOYSA-N sodium;imidazol-3-ide Chemical compound [Na+].C1=C[N-]C=N1 ITAWMPSVROAMOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- FVKFHMNJTHKMRX-UHFFFAOYSA-N 3,4,6,7,8,9-hexahydro-2H-pyrimido[1,2-a]pyrimidine Chemical group C1CCN2CCCNC2=N1 FVKFHMNJTHKMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 4
- NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N cetylpyridinium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960004830 cetylpyridinium Drugs 0.000 claims description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N cetyltrimethylammonium ion Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical class [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical class OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical class [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011575 calcium Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 156
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 35
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 32
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 description 27
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 26
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 26
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 24
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 13
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 13
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 6
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 4
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 4
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 3
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N Heparinsodiumsalt Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NS(O)(=O)=O)[C@@H](O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C(O)=O)O1 OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UURSXESKOOOTOV-UHFFFAOYSA-N dec-5-ene Chemical compound CCCCC=CCCCC UURSXESKOOOTOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- IIPYXGDZVMZOAP-UHFFFAOYSA-N lithium nitrate Chemical compound [Li+].[O-][N+]([O-])=O IIPYXGDZVMZOAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- FPJHWYCPAOPVIV-VOZMEZHOSA-N (2R,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5R,6R)-5-acetamido-2-(hydroxymethyl)-6-methoxy-3-sulfooxyoxan-4-yl]oxy-4,5-dihydroxy-3-methoxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H]([C@@H](OC)[C@H](O)[C@H]2O)C(O)=O)[C@H]1NC(C)=O FPJHWYCPAOPVIV-VOZMEZHOSA-N 0.000 description 1
- VSCBATMPTLKTOV-UHFFFAOYSA-N 2-tert-butylimino-n,n-diethyl-1,3-dimethyl-1,3,2$l^{5}-diazaphosphinan-2-amine Chemical compound CCN(CC)P1(=NC(C)(C)C)N(C)CCCN1C VSCBATMPTLKTOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLAOYYSXQGSGBA-UHFFFAOYSA-M 4-hexadecyl-1,2,3-trimethylpyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCC1=CC=[N+](C)C(C)=C1C NLAOYYSXQGSGBA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 238000001159 Fisher's combined probability test Methods 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 102100021194 Glypican-6 Human genes 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012691 depolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 229960000610 enoxaparin Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229940045627 porcine heparin Drugs 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical group S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
- C08B37/0078—Degradation products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/727—Heparin; Heparan
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Wynalazek dotyczy mieszaniny siarczanowanych polisacharydów posiadaj acych ogóln a struktu- r e polisacharydów tworz acych heparyn e i wykazuj acych nast epuj ace w la sciwo sci: - maj a one sredni ci ezar cz asteczkowy 1500-3000, aktywno sc anty-Xa wynosz ac a 100-150 IU/mg, aktywnosc anty-IIa wynosz ac a 0-10 IU/mg i stosunek aktywno sc anty-Xa/aktywno sc anty-IIa wi ekszy od 10, - polisacharydy tworz ace mieszanin e zawieraj a 2-26 jednostek sacharydowych i maj a na jed- nym ze swych ko nców ugrupowanie 2-O-siarczan 4,5-nienasyconego kwasu glukuronowego, w po- staci soli metalu alkalicznego lub ziem alkalicznych. Wynalazek dotyczy równie z sposobu wytwarzania takich mieszanin, zawieraj acych je kompozy- cji farmaceutycznych oraz mieszanin do zastosowania jako leki, zw laszcza leki przeciwzakrzepowe. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy mieszanin siarczanowanych polisacharydów posiadających ogólną strukturę polisacharydów tworzących heparynę, sposobu ich wytwarzania oraz zawierających je kompozycji farmaceutycznych.
Heparyna stanowi mieszaninę siarczanowanych mukopolisacharydów zawierających grupy kwasu siarkowego, pochodzenia zwierzęcego, stosowaną zwłaszcza ze względu na swe właściwości antykoagulacyjne i przeciwzakrzepowe.
Heparyna wykazuje jednak niedogodności, które ograniczają warunki jej stosowania. W szczególności jej wysoka aktywność antykoagulacyjna (aktywność anty-IIa) może powodować krwotoki.
Proponowano heparyny o niskim ciężarze cząsteczkowym, otrzymane przez depolimeryzację zasadową estrów heparyny (EP40144); jednakże te produkty mają jeszcze dużą aktywność anty-IIa.
Przedmiotem wynalazku są mieszaniny siarczanowanych polisacharydów posiadających ogólną strukturę polisacharydów tworzących heparynę i wykazujących następujące właściwości:
- mają one średni ciężar cząsteczkowy 1500-3000, aktywność anty-Xa wynoszącą 100-150 IU/mg, aktywność anty-IIa wynoszącą 0-10 IU/mg i stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa większy od 10,
- polisacharydy tworz ą ce mieszaninę zawierają 2-26 jednostek sacharydowych i mają na jednym ze swych końców ugrupowanie 2-O-siarczan 4,5-nienasyconego kwasu glukuronowego, w postaci soli metalu alkalicznego lub ziem alkalicznych.
Korzystnie mieszaniny wykazują aktywność anty-Xa wynoszącą 125-150 IU/mg.
Korzystnie mieszaniny wykazują aktywność anty-Xa wynoszącą 140-150 IU/mg i mają średni ciężar cząsteczkowy 2000-3000.
Korzystnie mieszaniny mają postać soli sodowej, potasowej, wapniowej lub magnezowej.
Korzystnie mieszaniny wykazują aktywność anty-IIa wynoszącą 0-5 IU/mg.
Korzystnie mieszaniny wykazują stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa większy od 25.
Przedmiot wynalazku stanowi także sposób wytwarzania mieszanin jak określono powyżej polegający na tym, że depolimeryzuje się czwartorzędową sól amonową estru benzylowego heparyny w środowisku organicznym, przy użyciu mocnej zasady organicznej wybranej z rodziny zasad guanidynowych i fosfazenowych lub imidazolanu sodu, przekształca się zdepolimeryzowaną czwartorzędową sól amoniową estru benzylowego heparyny w sól sodową, zmydla się ester i ewentualnie oczyszcza produkt.
Korzystnie czwartorzędowa sól amonowa estru benzylowego heparyny jest solą benzetonium, cetylopirydyniową lub cetylotrimetyloamonową.
Korzystnie zasadą z rodziny guanidyny jest 1,5,7-triazabicyklo[4.4.0]dec-5-en.
Korzystnie zasada z rodziny fosfazenów wybrana jest spośród 2-tert-butyloimino-2-dietyloamino-1,3-dimetyloperhydro-1,3,2-diazafosforyny i 2-tert-butyloimino-tris(dimetyloamino)-fosforanu.
Korzystnie zasady z rodziny guanidyny mają wzór:
w którym R1 oznacza atom wodoru lub alkil, każdy z R2, R3, R4 i R5, jednakowy lub różny, oznacza grupę alkilową zawierającą 1-6 atomów węgla o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym.
Korzystniej R1 oznacza atom wodoru, a R2, R3, R4 i R5 oznaczają grupę metylową.
Korzystnie zasady z rodziny fosfazenów mają wzór:
R3
R2—/ /R4
R1—Ν—P—N—R5
N—R6 /
R7
PL 202 471 B1 w którym grupy R1-R7 są jednakowe lub róż ne i oznaczają grupy alkilowe, zawierają ce 1-6 atomów węgla o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym.
Korzystnie stosunek molowy mocna zasada organiczna/czwartorzędowa sól amonowa estru benzylowego heparyny wynosi 0,2 - 5.
Korzystnie czwartorzędowa sól amonowa estru benzylowego heparyny ma stopień estryfikacji 50 - 100%.
Korzystnie przekształcenie depolimeryzowanej czwartorzędowej soli amonowej estru benzylowego heparyny w sól sodową prowadzi się przez traktowanie środowiska reakcyjnego alkoholowym roztworem octanu sodu.
Korzystnie zmydlanie prowadzi się przy użyciu wodorotlenku metalu alkalicznego.
Korzystnie oczyszczanie prowadzi się przy użyciu nadtlenku wodoru.
Przedmiot wynalazku stanowią również mieszaniny jak określono powyżej do zastosowania jako leki, korzystnie do zastosowania jako leki przeciwzakrzepowe.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, charakteryzująca się tym, ż e jako substancję czynną zawiera mieszaninę jak określono powyżej.
Średni ciężar cząsteczkowy oznacza się za pomocą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej, stosując dwie kolumny ustawione szeregowo np. sprzedawane pod nazwą TSK G3000 XL i TSK G2000 XL. Detekcję wykonuje się przy użyciu refraktometrii. Stosowanym eluentem jest azotan litu i przepł yw wynosi 0,6 ml/minutę . Ukł ad kalibruje się za pomocą wzorców wytwarzanych przez frakcjonowanie enoksaparyny (Aventis) na drodze chromatografii na żelu agaroza-poliakrylamid (IBF). To wytwarzanie prowadzi się według metody opisanej przez Barrowcliffe'a i in., Thromb.Res., 12, 27-36 (1977-78) lub D.A.Lane'a i in., Thromb.Res.,12, 257-271 (1977-78). Wyniki obliczono za pomocą programu GPC6 (Perkin Elmer).
Aktywność anty-Xa zmierzono metodą amidolityczną na substracie chromogenowym opisaną przez Teiena i in., Thromb.Res., 10, 399-410 (1977), stosując jako wzorzec pierwszy wzorzec międzynarodowy heparyn o niskim ciężarze cząsteczkowym.
Aktywność anty-IIa zmierzono metodą opisaną przez L.O.Andersona i in., Thromb.Res., 15, 531-541 (1979), stosując jako wzorzec pierwszy wzorzec międzynarodowy heparyn o niskim ciężarze cząsteczkowym.
Korzystnie mieszaniny, takie jak opisane wyżej, wykazują aktywność anty-Xa, wynoszącą 125150 Ul/mg.
Mieszaniny, takie jak opisane wyżej, wykazują zwłaszcza aktywność anty-Xa, wynoszącą 140150 Ul/mg i mają średni ciężar cząsteczkowy 2000-3000 daltonów.
Korzystnie mieszaniny według wynalazku wykazują aktywność anty-IIa 0-5 Ul/mg.
Jeszcze korzystniej mieszaniny wykazują stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa wyższy od 25.
Mieszaniny oligosacharydów według wynalazku można wytworzyć przez depolimeryzację czwartorzędowej soli amoniowej estru benzylowego heparyny w środowisku organicznym, przy użyciu mocnej zasady organicznej o pKa wyższym od 20 lub imidazolanu sodu, przekształcenie zdepolimeryzowanej czwartorzędowej soli amoniowej estru benzylowego heparyny w sól sodową, zmydlenie estru i ewentualnie oczyszczenie.
Czwartorzędowa sól amoniowa estru benzylowego heparyny jest korzystnie solą benzetonium, cetylopirydyniową lub cetylotrimetyloamoniową.
Depolimeryzację prowadzi się generalnie w obojętnym rozpuszczalniku organicznym, takim jak rozpuszczalnik chlorowany (np. dichlorometan), tetrahydrofuran, anizol, w temperaturze od -20 do 40°C.
Jako mocną zasadę organiczną o pKa wyższym od 20 można stosować 1,5,7-triazabicyklo[4.4.0]dec-5-en, 2-tert-butyloimino-2-dietyloamino-1,3-dimetyloperhydro-1,3,2-diazafosforynę, zasady z rodziny guanidyny i fosfazeny.
Zasadami z rodziny guanidyn są korzystnie zasady o wzorze:
PL 202 471 B1 w którym R1 oznacza atom wodoru lub alkil, każdy z R2, R3, R4 i R5, jednakowy lub różny, oznacza grupę alkilową.
Korzystniej R1 oznacza atom wodoru i R2, R3, R4 i R5 oznaczają grupę metylową.
Mocne zasady obecne w rodzinie fosfazenów są określone np. według R.Schwesingera i in., Angew.Chem.Int. Ed.Engl. 26,1167-1169(1987), R.Schwesingera i in., Angew. Chem.105,1420 (1993).
Wśród zasad z rodziny fosfazenów korzystnie stosuje się zasady o wzorze:
R3
R2—/ /R4
R1—Ν—P—N—R5
N—R6 /
R7 w którym grupy R1-R7 są jednakowe lub różne i oznaczają grupy alkilowe.
W poprzednich wzorach grupy alkilowe zawierają 1-6 atomów wę gla o ł a ń cuchu prostym lub rozgałęzionym.
Korzystnie stosunek molowy mocna zasada organiczna o pKa wyższym od 20 lub imidazolan sodu/czwartorzędowa sól amoniowa estru benzylowego heparyny wynosi 0,2-5 i korzystnie 1-4.
Stopień estryfikacji czwartorzędowej soli amoniowej estru benzylowego heparyny wynosi zwłaszcza 50-100%, korzystnie 70-90%. Ten stopień estryfikacji odpowiada molowemu procentowi estryfikacji kwasów uronowych w heparynie.
Przekształcenie zdepolimeryzowanej czwartorzędowej soli amoniowej estru benzylowego heparyny w sól sodową prowadzi się generalnie przez traktowanie środowiska reakcyjnego alkoholowym roztworem octanu sodu, korzystnie 10% roztworem octanu sodu w metanolu (ciężar/objętość), w temperaturze 15-25°C. Równoważnik wagowy dodanego octanu jest korzystnie 3 razy wyższy od masy czwartorzędowej soli amoniowej estru benzylowego heparyny, poddanej reakcji depolimeryzacji.
Zmydlenie prowadzi się generalnie za pomocą wodorotlenku metalu alkalicznego, jak wodorotlenek sodu, wodorotlenek potasu, wodorotlenek litu, w środowisku wodnym w temperaturze 0-20°C, a korzystnie 0-10°C. Na ogół stosuje się 1-5 równoważ ników molowych wodorotlenku metalu alkalicznego. Zmydlenie wykonuje się korzystnie w obecności 2-3 równoważników molowych wodorotlenku metalu alkalicznego.
Końcowy produkt można ewentualnie oczyścić każdą znaną metodą oczyszczania zdepolimeryzowanych heparyn, a zwłaszcza według metody opisanej w opisie patentowym nr EP 0037319. Korzystnie oczyszcza się przy użyciu nadtlenku wodoru, w środowisku wodnym w temperaturze 10-50°C. Korzystnie tę operację wykonuje się w temperaturze 20-40°C.
Czwartorzędową sól amoniową estru benzylowego heparyny można wytworzyć według następującego schematu reakcyjnego:
a) Przekształcenie heparyny w postaci soli sodowej przy użyciu chlorku benzetonium dla otrzymania heparynianu benzetonium,
b) Estryfikacja otrzymanej poprzednio soli benzetonium za pomocą chlorku benzylu i traktowanie alkoholowym roztworem octanu sodu w celu otrzymania soli sodowej estru benzylowego heparyny,
c) Przekształcenie soli sodowej estru benzylowego heparyny w czwartorzędową sól amoniową, korzystnie w sól benzetonium, cetylopirydyniową lub cetylotrimetylopirydyniową.
Reakcję z etapu a) prowadzi się w środowisku wodnym przez działanie nadmiaru chlorku benzetonium na heparynę w postaci soli sodowej, w temperaturze około 15-25°C. Korzystnie stosunek molowy chlorek benzetonium/heparyna w postaci soli sodowej wynosi 2-3 i korzystniej 2,5.
Stosowaną wyjściową heparyną w postaci soli sodowej jest korzystnie heparyna świńska. Może ona być uprzednio oczyszczona dla zmniejszenia wskaźnika siarczanu dermatanu zgodnie ze sposobem opisanym w opisie patentowym nr FR 2 663 639.
Estryfikację z etapu b) korzystnie prowadzi się w chlorowanym rozpuszczalniku organicznym (np. chloroform, chlorek metylenu), w temperaturze 25-45°C, korzystnie 30-45°C. Następnie otrzymuje się ester w postaci soli sodowej przez wytrącenie 10% (ciężar/objętość) roztworem octanu sodu w alkoholu, takim jak metanol. Generalnie stosuje się 1-1,2 objętości alkoholu na objętość środowiska
PL 202 471 B1 reakcyjnego. Ilość chlorku benzylu i czas reakcji dostosowuje się w celu uzyskania stopnia estryfikacji 50-100%, korzystnie 70-90%. Korzystniej stosuje się 0,5-1,5 części wagowej chlorku benzylu na 1 część wagową soli benzetonium heparyny. Również korzystniej czas reakcji wynosi 10-35 godzin.
Przekształcenie soli z etapu c) prowadzi się za pomocą czwartorzędowego chlorku amoniowego, korzystnie za pomocą chlorku benzetonium, chlorku cetylopirydyniowego lub chlorku cetylotrimetylopirydyniowego, w wodnym środowisku w temperaturze 10-25°C. Korzystnie stosunek molowy czwartorzędowy chlorek amoniowy/sól sodowa estru benzylowego heparyny wynosi 2-3.
Mieszaniny według wynalazku w postaci soli sodowej można przekształcać w inną sól metalu alkalicznego lub ziem alkalicznych. Przechodzi się ewentualnie z jednej soli w inną, stosując metodę opisaną w opisie patentowym nr US 4 168 377.
Mieszaniny według wynalazku nie są toksyczne i można je stosować jako leki.
Mieszaniny według niniejszego wynalazku można stosować jako środki przeciwzakrzepowe. W szczególności są przydatne do zapobiegania zakrzepicy żylnej, przypadkach zakrzepicy tętnic, zwłaszcza w wypadku zawału mięśnia sercowego. Są też przydatne w zapobieganiu i leczeniu rozrostu komórek mięśni gładkich, rozwoju naczyń i jako środek neurochronny w miażdżycy i sklerozie tętnic.
Zgodnie z wynalazkiem kompozycje farmaceutyczne zawierają jako substancję czynną mieszaninę polisacharydów według wynalazku, ewentualnie w połączeniu z jedną lub kilkoma obojętnymi zaróbkami.
Kompozycje farmaceutyczne są np. roztworami do wstrzyknięć drogą podskórną lub dożylną. Są też użyteczne na drodze płucnej (inhalacji).
Dawkowanie może się zmieniać w zależności od wieku, masy i stanu zdrowia pacjenta. Dla dorosłych wynosi zwykle 20-100 mg na dzień drogą domięśniową lub podskórną.
Następujące przykłady ilustrują wynalazek.
P r z y k ł a d A. Wytwarzanie soli benzetonium estru benzylowego heparyny
Heparynian benzetonium
Do roztworu 10 g heparyny w postaci soli sodowej w 100 ml wody w temperaturze około 20°C dodano roztwór 25 g chlorku benzetonium w 125 ml wody. Produkt odsączono, przemyto wodą i wysuszono.
Ester benzylowy heparyny (sól sodowa)
Do roztworu 20 g heparynianu benzetonium w 80 ml chlorku metylenu dodano 16 ml chlorku benzylu. Roztwór ogrzewano w temperaturze 30°C w ciągu 12 godzin. Dodano wtedy 108 ml roztworu 10% octanu sodu w metanolu, odsączono, przemyto metanolem i wysuszono. Otrzymano w ten sposób 7,6 g estru benzylowego heparyny w postaci soli sodowej, w której stopień estryfikacji wynosił 77%.
Ester benzylowy heparyny (sól benzetonium)
Do kolby Erlenmeyera A o pojemności 2 litrów, wprowadzono 36 g (0,0549 mola) estru benzylowego heparyny (sól sodowa) i 540 ml wody destylowanej. Po homogenizacji w temperaturze około 20°C otrzymano jasnożółty roztwór. Mieszając mieszadłem magnetycznym, sporządzono w kolbie Erlenmeyera B o pojemności 1 litra, roztwór 64,45 g (0,1438 mola) chlorku benzetonium i 450 ml wody. Roztwór z kolby Erlenmeyera B wlano w ciągu około 35 minut, mieszając, do roztworu w kolbie Erlenmeyera A. Zauważono tworzenie obfitego białego osadu. Kolbę Erlenmeyera B przemyto 200 ml wody destylowanej i wodę z przemycia wprowadzono do kolby Erlenmeyera A. Mieszanie wtedy przerwano i pozostawiono zawiesinę do osadzenia na 12 godzin. Część przezroczystą supernatantu pobrano i usunięto. Do osadzonego produktu (o wyglądzie zawiesiny), dodano 560 ml wody i mieszano w cią gu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na okoł o 30 minut. Supernatant odebrano i usunięto (560 ml). W osadzonym produkcie powtórzono dwukrotnie operację przemywania z około 560 ml wody destylowanej. W ostatniej operacji przemywania pozostawiono zawieszony osad i odsą czono przez są czek ze spiekanego szkła 3. Placek filtracyjny nastę pnie przemyto 4 razy 200 ml wody destylowanej. Odciśnięto wilgotne białe ciało stałe, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 87,5 g soli benzetonium estru benzylowego heparyny. Uzyskano wydajność 94,9%.
P r z y k ł a d 1
Depolimeryzacja i przekształcenie w sól sodową:
Do kolby Erlenmeyera A o pojemności 50 ml, wprowadzono 28 ml dichlorometanu. Przy mieszaniu załadowano wolno 4 g (0,00238 mola) estru benzylowego heparyny (stopień estryfikacji: 77%,
PL 202 471 B1 sól benzetonium) otrzymanego, jak opisano w przykładzie A. Po całkowitym rozpuszczeniu dodano 1,32 g (0,00948 mola) 1,5,7-triazabicyklo[4.4.0]dec-5-enu. Mieszano w temperaturze około 20°C przez 3 godziny i 30 minut. W ciągu tego czasu sporządzono w temperaturze 4°C w kolbie Erlenmeyera B roztwór 12 g octanu sodowego w 120 ml metanolu. Mieszając mieszadłem magnetycznym, mieszaninę reakcyjną z kolby Erlenmeyera A wlano do metanolowego roztworu octanu sodu. Pojawił się żółty galaretowaty półprzezroczysty osad. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do dekantacji na okres jednej godziny. Przejrzystą część supernatantu pobrano i usunięto (62 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtej zawiesiny) dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do ponownej sedymentacji na około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (49 ml). Do osadzonego osadu dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Zawieszony osad następnie odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 4. Otrzymaną złotożółtą masę przemyto potem 2 razy 25 ml metanolu. Odciś nię to wilgotne ciał o stał e, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciś nieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 1,21 g zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego). Uzyskano wydajność 77,2%.
Zmydlanie:
Do kolby Erlenmeyera o pojemności 25 ml wprowadzono 1,21 g (0,0018 mola) zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego) otrzymanej poprzednio i 11 ml wody. Mieszając mieszadłem magnetycznym, wprowadzono 0,18 ml (0,0018 mola) 30% roztworu wodorotlenku sodowego. Po dodaniu mieszaninę ochłodzono do temperatury 4°C i mieszano w ciągu 2 godzin. Dodano 1,43 g NaCl i zobojętniono roztwór, dodając roztwór HCl 1 mol/litr (14 ml). Mieszaninę przelano do kolby Erlenmeyera o pojemności 100 ml i dodano 52 ml metanolu. Zaobserwowano tworzenie żółtego osadu. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do osadzenia w ciągu 12 godzin w temperaturze około 20°C. Następnie supernatant pobrano, po czym usunięto (44 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtej zawiesiny) dodano 25 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (21 ml). Do osadzonego produktu dodano 25 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Zawieszony osad następnie odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 3. Potem otrzymany jasnożółty placek filtracyjny przemyto 2 razy 10 ml metanolu. Wilgotne ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 0,66 g surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa). Uzyskano wydajność 60%.
Oczyszczanie:
Do kolby Erlenmeyera o pojemności 10 ml wprowadzono 0,66 g surowej zdepolimeryzowanej heparyny otrzymanej poprzednio i 5,9 ml wody destylowanej. Mieszaninę ogrzano w temperaturze 40°C, mieszając mieszadłem magnetycznym. Dodając roztwór 0,1 mola/litr wodorotlenku sodu, doprowadzono pH do 9-10 i dodano 33 mikrolitry 30% wodnego roztworu nadtlenku wodoru. Po około 2 godzinach mieszania dodano 0,65 g chlorku sodu. Nastę pnie mieszaninę zoboję tniono, dodają c roztwór HCl 0,1 mola/litr. Roztwór potem przesączono i przelano do kolby Erlenmeyera o pojemności 25 ml. Wlano 23,3 ml metanolu. Zaobserwowano tworzenie białego osadu. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do osadzenia na okres 12 godzin w temperaturze około 20°C. Następnie supernatant pobrano, po czym usunięto (5 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie zawiesiny) dodano 5 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (5 ml). Do osadzonego produktu dodano 5 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Następnie zawieszony osad odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 3. Otrzymany biały placek filtracyjny przemyto potem 2 razy po 5 ml metanolu. Wilgotne ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 0,51 g oczyszczonej mieszaniny polisacharydów (sól sodowa). Uzyskano wydajność 77,2%.
Właściwości tej mieszaniny były następujące:
Średni ciężar cząsteczkowy: 1600
Aktywność anty-Xa: 94 Ul/mg
Aktywność anty-IIa: < 0,1 Ul/mg
Stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa: > 100
P r z y k ł a d 2
Depolimeryzacja i przekształcenie w sól sodową:
Do kolby Erlenmeyera A o pojemności 100 ml wprowadzono 70 ml dichlorometanu. Przy mieszaniu, załadowano wolno 10 g (0,00595 mola) estru benzylowego heparyny (stopień estryfikacji:
PL 202 471 B1
77%, sól benzetonium) otrzymanego, jak opisano w przykładzie A. Po całkowitym rozpuszczeniu dodano 1,7 ml (0,00587 mola) 2-tert-butyloimino-2--dietyloamino-1,3-dimetyloperhydro-1,3,2-diazafosforyny. W temperaturze około 20°C pozostawiono reakcję do kontynuowania na okres około 3 godzin i 30 minut. W tym czasie sporządzono w temperaturze 4°C w kolbie Erlenmeyera B roztwór 30 g octanu sodowego w 300 ml metanolu. Mieszając mieszadłem magnetycznym, mieszaninę reakcyjną z kolby Erlenmeyera A wlano do roztworu metanolowego octanu sodu. Pojawił się galaretowaty półprzezroczysty żółty osad. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do zdekantowania na okres jednej godziny. Przejrzystą część supernatantu pobrano i usunięto (204 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtej zawiesiny) dodano 125 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji przez około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (162 ml). Do osadzonego produktu dodano 125 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Zawieszony galaretowaty osad następnie odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 3. Otrzymany żółty galaretowaty placek filtracyjny przemyto potem 2 porcjami po 63 ml metanolu. Galaretowate ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 3,34 g. Uzyskano wydajność 85,3%.
Zmydlanie:
Zmydlono 1,67 g zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego) poprzednio otrzymanej według sposobu zmydlania opisanego w przykładzie 1. Otrzymano 0,94 g jasnożółtego proszku. Wydajność surowej zdepolimeryzowanej heparyny (soli sodowej) wyniosła 61%.
Oczyszczanie:
Oczyszczono 0, 94 g surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) poprzednio otrzymanej według sposobu oczyszczania opisanego w przykładzie 1. Otrzymano 0,71 g białego proszku. Wydajność wyniosła 75,5%.
Otrzymana oczyszczona mieszanina polisacharydów (sól sodowa) wykazywała następujące właściwości:
Średni ciężar cząsteczkowy: 2500
Aktywność anty-Xa: 146,6 Ul/mg
Aktywność anty-IIa: 2,15 Ul/mg
Stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa: 68
P r z y k ł a d 3
Depolimeryzacja i przekształcenie w sól sodową:
Do kolby Erlenmeyera A o pojemności 50 ml wprowadzono 28 ml dichlorometanu. Przy mieszaniu załadowano wolno 4 g (0,00238 mola) estru benzylowego heparyny (stopień estryfikacji: 77%, sól benzetonium) otrzymanego według przykładu A. Po całkowitym rozpuszczeniu i ochłodzeniu do temperatury 2°C dodano 0,333 g (0,00239 mola) 1,5,7-triazabicyklo[4.4.0]dec-5-enu. W temperaturze około 20°C pozostawiono reakcję do kontynuacji na okres około 3 godzin i 30 minut. W tym czasie sporządzono w temperaturze 4°C w kolbie Erlenmeyera B roztwór 12 g octanu sodowego w 120 ml metanolu. Mieszając mieszadłem magnetycznym, mieszaninę reakcyjną z kolby Erlenmeyera A wlano do metanolowego roztworu octanu sodowego. Pojawił się żółty osad. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do zdekantowania na okres jednej godziny. Przejrzystą część supernatantu pobrano i usunięto (90 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtej zawiesiny) dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (61 ml). Do osadzonego produktu dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Następnie zawieszony osad odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 4. Otrzymany placek filtracyjny przemyto potem 2 razy 25 ml metanolu. Wilgotne ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 1,19 g zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego). Ciało stałe miało intensywną żółtą barwę. Uzyskano wydajność 75,9%.
Zmydlanie:
Zmydlono 1,19 g heparyny zdepolimeryzowanej (sól sodowa estru benzylowego) poprzednio otrzymanej według sposobu zmydlania opisanego w przykładzie 1. Otrzymano 0,78 g jasnożółtego proszku. Wydajność surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) wyniosła 71,5%.
Oczyszczanie:
Oczyszczono 0,78 g poprzednio otrzymanej surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) według metody oczyszczania opisanej w przykładzie 1. Otrzymano 0,58 g białego proszku.
Wydajność wyniosła 72,5%.
PL 202 471 B1
Otrzymana oczyszczona mieszanina polisacharydów (sól sodowa) wykazywała następujące właściwości:
Średni ciężar cząsteczkowy: 2700
Aktywność anty-Xa: 100,1 Ul/mg
Aktywność anty-IIa: 3,3 Ul/mg
Stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa: 27,3
P r z y k ł a d 4
Depolimeryzacja i przekształcenie w sól sodową:
Do kolby Erlenmeyera A o pojemności 50 ml, wprowadzono 28 ml dichlorometanu. Przy mieszaniu, załadowano wolno 4 g (0,00238 mola) estru benzylowego heparyny (stopień estryfikacji: 77%, sól benzetonium) otrzymanego, jak opisano w przykładzie A. Po całkowitym rozpuszczeniu w temperaturze 2°C dodano 0,6 ml (0,00222 mola) 2-tert-butyloimino-tris(dimetyloamino)fosforanu. W temperaturze około 0°C pozostawiono reakcję do kontynuacji podczas około 3 godzin i 30 minut. W tym czasie sporządzono w temperaturze 4°C w kolbie Erlenmeyera B roztwór 12 g octanu sodowego w 120 ml metanolu. Mieszają c mieszadł em magnetycznym, mieszaninę reakcyjną z kolby Erlenmeyera A wlano do metanolowego roztworu octanu sodowego. Pojawił się galaretowaty półprzezroczysty żółty osad. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do zdekantowania na okres jednej godziny. Przejrzystą część supernatantu pobrano i usunięto (108 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtawej zawiesiny) dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (60 ml). Do osadzonego produktu dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Następnie zawieszony białożółtawy osad odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 4. Otrzymany placek filtracyjny przemyto potem 2 razy 25 ml metanolu. Odciśnięto ciało stałe, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 1,22 g zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego). Uzyskano wydajność 77,8%.
Zmydlanie:
Zmydlono 1,22 g poprzednio otrzymanej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego) według protokołu zmydlania opisanego w przykładzie 1. Otrzymano 0,69 g bardzo jasnożółtego proszku. Wydajność surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) wyniosła 61,6%.
Oczyszczanie:
Oczyszczono 0,69 g poprzednio otrzymanej surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) według protokołu oczyszczania opisanego w przykładzie 1. Otrzymano 0,67 g białego proszku. Wydajność wyniosła 97,1%.
Otrzymana oczyszczona mieszanina polisacharydów (sól sodowa) wykazywała następujące właściwości:
Średni ciężar cząsteczkowy: 2900
Aktywność anty-Xa: 145,2 Ul/mg
Aktywność anty-IIa: 4,5 Ul/mg
Stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa: 32,6
P r z y k ł a d 5
Depolimeryzacja i przekształcenie w sól sodową:
Do kolby A o pojemności 50 ml wprowadzono 28 ml dichlorometanu. Przy mieszaniu, załadowano wolno 4 g (0,00238 mola) heparynianu benzylowego (stopień estryfikacji: 77%, sól benzetonium). Po całkowitym rozpuszczeniu w temperaturze 40°C dodano 0,95 g (0,00949 mola) imidazolanu sodowego. W temperaturze wrzenia wobec powrotu skroplin dichlorometanu pozostawiono reakcję do kontynuacji przez około 4 godziny. W tym czasie sporządzono w temperaturze 4°C w kolbie Erlenmeyera B roztwór 12 g octanu sodowego w 120 ml metanolu. Mieszając mieszadłem magnetycznym, mieszaninę reakcyjną z kolby Erlenmeyera A wlano do metanolowego roztworu octanu sodowego. Pojawił się galaretowaty półprzezroczysty żółty osad. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do zdekantowania na okres jednej godziny. Przejrzystą część supernatantu barwy pomarańczowej pobrano i usunięto (88 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie zawiesiny barwy pomarańczowej) dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (51 ml). Do osadzonego produktu dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Zawieszony osad barwy pomarańczowej następnie odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 4. Otrzymany placek filtracyjny przemyto potem 2 razy 25 ml metanolu. Cia ł o stał e odciś nię to, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciś nieniem
PL 202 471 B1 (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 1,34 g zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego). Uzyskano wydajność 76,6%.
Zmydlanie:
Zmydlono 1,2 g poprzednio otrzymanej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego) według protokołu zmydlania opisanego w przykładzie 1. Otrzymano 0,63 g beżowego proszku. Wydajność surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) wyniosła 52,5%.
Oczyszczanie:
Oczyszczono 0,63 g poprzednio otrzymanej surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) według metody oczyszczania opisanej w przykładzie 1. Otrzymano 0,42 g biało-beżowego proszku. Wydajność wyniosła 66,7%.
Otrzymana oczyszczona mieszanina polisacharydów (sól sodowa) wykazywała następujące właściwości:
Średni ciężar cząsteczkowy: 2250
Aktywność anty-Xa: 134,5 Ul/mg
Aktywność anty-IIa: 1,5 Ul/mg
Stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa: 90,5
P r z y k ł a d 6
Depolimeryzacja i przekształcenie w sól sodową:
Do kolby Erlenmeyera A o pojemności 50 ml wprowadzono 28 ml dichlorometanu. Przy mieszaniu, załadowano wolno 4 g (0,00238 mola) estru benzylowego heparyny (stopień estryfikacji: 77%, sól benzetonium) otrzymanego, jak opisano w przykładzie A. Po całkowitym rozpuszczeniu dodano 1,33 g (0,00956 mola) 1,5,7-triazabicyklo[4.4.0]dec-5-enu. Mieszano w temperaturze około 20°C przez 3 godziny i 30 minut. W tym czasie sporządzono w temperaturze 4°C w kolbie Erlenmeyera B roztwór 12 g octanu sodowego w 120 ml metanolu. Mieszając mieszadłem magnetycznym, mieszaninę reakcyjną z kolby Erlenmeyera A wlano do metanolowego roztworu octanu sodowego. Pojawił się galaretowaty półprzezroczysty żółty osad. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do zdekantowania na okres jednej godziny. Przejrzystą część supernatantu pobrano i usunięto (56 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtej zawiesiny) dodano 60 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 30 minut. Supernatant pobrano i usunięto (70 ml). Do osadzonego produktu dodano 50 ml metanolu i mieszano w ciągu 15 minut. Następnie zawieszony osad odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 4. Otrzymany złotożółty placek filtracyjny przemyto potem 2 razy 50 ml metanolu. Wilgotne ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 0,92 g zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego). Uzyskano wydajność 64%.
Zmydlanie:
Do kolby Erlenmeyera 25 ml wprowadzono 0,92 g (0,0014 mola) otrzymanej poprzednio zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego) i 17,5 ml wody. Mieszając mieszadłem magnetycznym, wprowadzono 0,38 ml (0,00379 mola) 30% roztworu wodorotlenku sodu. Po dodaniu utrzymywano mieszaninę w temperaturze około 20°C i mieszano w ciągu 5 godzin. Dodano 1,8 g NaCl i zoboję tniono roztwór, dodając stężony HCl (końcowa objętość roztworu około 18 ml). Mieszaninę przelano do kolby Erlenmeyera o pojemności 100 ml i dodano 46 ml metanolu. Zaobserwowano tworzenie żółtego osadu. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do osadzenia w ciągu 12 godzin w temperaturze około 20°C. Następnie supernatant pobrano, po czym usunięto (52 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtej zawiesiny) dodano 25 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 1 godzinę. Supernatant pobrano i usunięto (27 ml). Do osadzonego produktu dodano 25 ml metanolu i mieszano w ciągu około 1 godziny. Następnie zawieszony osad odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 4. Otrzymany placek filtracyjny przemyto potem 2 razy 10 ml metanolu. Wilgotne ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 3 godzinach suszenia otrzymano 0,42 g surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa). Uzyskano wydajność 45,6%.
Oczyszczanie:
Do kolby Erlenmeyera o pojemności 10 ml wprowadzono 0,42 g surowej zdepolimeryzowanej heparyny otrzymanej poprzednio i 3,8 ml wody destylowanej. Mieszaninę ogrzano do temperatury
38°C, mieszając mieszadłem magnetycznym. Przez dodanie roztworu 0,1 mola/litr wodorotlenku sodu, doprowadzono pH do 9-10 i dodano 25 mikrolitrów 30% wodnego roztworu nadtlenku wodoru.
Po około 2 godzinach i 30 minutach mieszania dodano 0,5 g chlorku sodu. Następnie mieszaninę
PL 202 471 B1 zobojętniono, dodając roztwór HCl 0,1 mola/litr. Roztwór potem przesączono i przelano do kolby Erlenmeyera o pojemności 25 ml. Wlano 11,3 ml metanolu. 25 Zaobserwowano tworzenie białego osadu. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do osadzenia w ciągu 12 godzin w temperaturze około 20°C. Następnie supernatant pobrano, po czym usunięto (9,8 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie zawiesiny) dodano 5 ml metanolu i mieszano w ciągu 15 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na około 3 godziny. Supernatant pobrano i usunięto (6,2 ml). Do osadzonego produktu dodano 5 ml metanolu i mieszano w ciągu 20 minut. Następnie zawieszony osad odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 3. Otrzymany biały placek filtracyjny przemyto potem 2 razy 5 ml metanolu. Wilgotne ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po około 2 godzinach i 20 minutach suszenia otrzymano 0,39 g czystej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa). Uzyskano wydajność 92,8%.
Właściwości zdepolimeryzowanej heparyny otrzymanej w ten sposób były następujące:
Średni ciężar cząsteczkowy: 1950
Aktywność anty-Xa: 115,6 Ul/mg
Aktywność anty-IIa: < 2 Ul/mg
Stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa: > 57
P r z y k ł a d 7
Depolimeryzacja i przekształcenie w sól sodową:
Do reaktora A o pojemności 400 ml wprowadzono 140 ml dichlorometanu. Przy mieszaniu, załadowano wolno 20 g (0,0119 mola) estru benzylowego heparyny (stopień estryfikacji: 77%, sól benzetonium) otrzymanego, jak opisano w przykładzie A. Po całkowitym rozpuszczeniu zmierzono zawartość wody w środowisku reakcyjnym metodą Karla Fishera. Otrzymana wartość wyniosła 0,1% wody. Dodano wtedy 3,5 ml (0,0121 mola) 2-tert-butyloimino-2-dietylamino-1,3-dimetyloperhydro-1,3,2-diazafosforyny. W temperaturze około 25°C pozostawiono reakcję do kontynuacji na okres około 24 godzin. W tym czasie sporządzono w temperaturze 4°C w kolbie Erlenmeyera B roztwór 30 g octanu sodowego w 300 ml metanolu. Mieszając mieszadłem magnetycznym, połowę mieszaniny reakcyjnej z reaktora A wlano do metanolowego roztworu octanu sodu. Pojawił się galaretowaty pół przezroczysty żółty osad. Mieszanie utrzymywano w ciągu jednej godziny i pozostawiono zawiesinę do zdekantowania przez około 12 godzin w temperaturze 4°C. Przejrzystą część supernatantu pobrano i usunięto (220 ml). Do osadzonego produktu (o wyglądzie żółtej zawiesiny) dodano 220 ml metanolu i mieszano w cią gu 50 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji na okoł o 40 minut. Supernatant pobrano i usunięto (204 ml). Do osadzonego produktu dodano 204 ml metanolu i mieszano w ciągu 40 minut. Zawieszony galaretowaty osad następnie odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 3. Otrzymany żółty galaretowaty placek filtracyjny przemyto potem 2 porcjami 100 ml metanolu. Galaretowate ciało stałe odciśnięto, po czym wysuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze oko ł o 60°C. Po okoł o 12 godzinach suszenia otrzymano 2,6 g zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego). Uzyskano wydajność 70,6% (obliczoną na podstawie połowy traktowanego środowiska reakcyjnego).
Zmydlanie:
Zmydlono 2,6 g poprzednio otrzymanej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa estru benzylowego) według sposobu zmydlania opisanego w przykładzie 1. Otrzymano 1,48 g jasnożółtego proszku. Wydajność surowej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa) wyniosła 62,9%.
Oczyszczanie:
Do kolby Erlenmeyera o pojemności 50 ml wprowadzono 1,48 g surowej zdepolimeryzowanej heparyny otrzymanej poprzednio i 15 ml wody destylowanej. Mieszaninę ogrzano do temperatury
40°C, mieszając mieszadłem magnetycznym. Dodając roztwór 1 mol/litr wodorotlenku sodu, doprowadzono pH do 9-10. Roztwór odsączono przez membranę sączącą o porowatości 1 μm. Dodano następnie 76 mikrolitrów 30% wodnego roztworu nadtlenku wodoru. Po około 2 godzinach mieszania dodano 1,5 g chlorku sodu. Następnie mieszaninę zobojętniono, dodając roztwór HCl 1 mol/litr. Roztwór odsączono przez membranę sączącą o porowatości 1 μm. Wlano 38 ml metanolu. Zaobserwowano tworzenie białego osadu. Przerwano wtedy mieszanie i pozostawiono zawiesinę do osadzenia w ciągu 1 godziny w temperaturze około 20°C. Następnie supernatant pobrano, po czym usunięto (37 ml). Do osadu dodano 37 ml metanolu i mieszano w ciągu 45 minut. Pozostawiono osad do powtórnej sedymentacji przez około 45 minut. Supernatant pobrano i usunięto (34 ml). Do osadzonego produktu dodano 34 ml metanolu i mieszano w ciągu 15 minut. Następnie zawieszony osad odsączono przez sączek ze spiekanego szkła 3. Otrzymany biały placek filtracyjny przemyto potem 2 razy 25 ml
PL 202 471 B1 metanolu. Wilgotne ciało stałe odciśnięto, po czym suszono pod zmniejszonym ciśnieniem (2,7 kPa) w temperaturze około 60°C. Po 12 godzinach suszenia otrzymano 1,29 g czystej zdepolimeryzowanej heparyny (sól sodowa). Uzyskano wydajność 87,2%.
Otrzymana oczyszczona zdepolimeryzowana heparyna (sól sodowa) wykazywała następujące właściwości:
Średni ciężar cząsteczkowy: 2250
Aktywność anty-Xa: 149,6 Ul/mg
Aktywność anty-IIa: 0,85 Ul/mg
Stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa: 176.
Claims (21)
- Zastrzeżenia patentowe1. Mieszaniny siarczanowanych polisacharydów posiadających ogólną strukturę polisacharydów tworzących heparynę i wykazujących następujące właściwości:- mają one średni ciężar cząsteczkowy 1500-3000, aktywność anty-Xa wynoszącą 100-150 IU/mg, aktywność anty-IIa wynoszącą 0-10 IU/mg i stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa większy od 10,- polisacharydy tworz ą ce mieszaninę zawierają 2-26 jednostek sacharydowych i mają na jednym ze swych końców ugrupowanie 2-O-siarczan 4,5-nienasyconego kwasu glukuronowego, w postaci soli metalu alkalicznego lub ziem alkalicznych.
- 2. Mieszaniny według zastrz. 1, znamienne tym, że wykazują aktywność anty-Xa wynoszą c ą 125-150 IU/mg.
- 3. Mieszaniny według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, ż e wykazują aktywność anty-Xa wynoszącą 140-150 IU/mg i mają średni ciężar cząsteczkowy 2000-3000.
- 4. Mieszaniny według któregokolwiek z zastrz. 1-3, znamienne tym, ż e mają postać soli sodowej, potasowej, wapniowej lub magnezowej.
- 5. Mieszaniny według któregokolwiek z zastrz. 1-4, znamienne tym, że wykazują aktywność anty-IIa wynoszącą 0-5 IU/mg.
- 6. Mieszaniny według któregokolwiek z zastrz. 1-5, znamienne tym, że wykazują stosunek aktywność anty-Xa/aktywność anty-IIa większy od 25.
- 7. Sposób wytwarzania mieszanin jak określono w zastrz. 1, znamienny tym, że depolimeryzuje się czwartorzędową sól amonową estru benzylowego heparyny w środowisku organicznym, przy użyciu mocnej zasady organicznej wybranej z rodziny zasad guanidynowych i fosfazenowych lub imidazolanu sodu, przekształca się zdepolimeryzowaną czwartorzędową sól amoniową estru benzylowego heparyny w sól sodową, zmydla się ester i ewentualnie oczyszcza produkt.
- 8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że czwartorzędowa sól amonowa estru benzylowego heparyny jest solą benzetonium, cetylopirydyniową lub cetylotrimetyloamonową.
- 9. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, ż e zasadą z rodziny guanidyny jest 1,5,7-triazabicyklo[4.4.0]dec-5-en.
- 10. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że zasada z rodziny fosfazenów wybrana jest spośród 2-tert-butyloimino-2-dietyloamino-1,3-dimetyloperhydro-1,3,2-diazafosforyny i 2-tert-butyloimino-tris(dimetyloamino)-fosforanu.
- 11. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że zasady z rodziny guanidyny mają wzór:w którym R1 oznacza atom wodoru lub alkil, ka żdy z R2, R3, R4 i R5, jednakowy lub ró ż ny, oznacza grupę alkilową zawierającą 1-6 atomów węgla o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym.PL 202 471 B1
- 12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że R1 oznacza atom wodoru, a R2, R3, R4 i R5 oznaczają grupę metylową.
- 13. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że zasady z rodziny fosfazenów mają wzór:R3R2—/ /R4R1—N—P—N—R5N—R6 /R7 w którym grupy R1-R7 są jednakowe lub róż ne i oznaczają grupy alkilowe, zawierają ce 1-6 atomów węgla o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym.
- 14. Sposób według jednego z zastrz. 7-13, znamienny tym, że stosunek molowy mocna zasada organiczna/czwartorzędowa sól amonowa estru benzylowego heparyny wynosi 0,2 - 5.
- 15. Sposób według jednego z zastrz. 7-14, znamienny tym, że czwartorzędowa sól amonowa estru benzylowego heparyny ma stopień estryfikacji 50 - 100%.
- 16. Sposób według jednego z zastrz. 7-15, znamienny tym, że przekształcenie zdepolimeryzowanej czwartorzędowej soli amonowej estru benzylowego heparyny w sól sodową prowadzi się przez traktowanie środowiska reakcyjnego alkoholowym roztworem octanu sodu.
- 17. Sposób według jednego z zastrz. 7-15, znamienny tym, że zmydlanie prowadzi się przy użyciu wodorotlenku metalu alkalicznego.
- 18. Sposób według jednego z zastrz. 7-16, znamienny tym, że oczyszczanie prowadzi się przy użyciu nadtlenku wodoru.
- 19. Mieszaniny jak określono w zastrz. 1-6, do zastosowania jako leki.
- 20. Mieszaniny według zastrz. 19, do zastosowania jako leki przeciwzakrzepowe.
- 21. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, że jako substancję czynną zawiera mieszaninę jak określono w zastrz. 1-6.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0009572A FR2811992B1 (fr) | 2000-07-21 | 2000-07-21 | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| PCT/FR2001/002332 WO2002008295A1 (fr) | 2000-07-21 | 2001-07-18 | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL365561A1 PL365561A1 (pl) | 2005-01-10 |
| PL202471B1 true PL202471B1 (pl) | 2009-06-30 |
Family
ID=8852768
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL365561A PL202471B1 (pl) | 2000-07-21 | 2001-07-18 | Mieszaniny siarczanowanych polisacharydów, sposób ich wytwarzania oraz kompozycja farmaceutyczna |
Country Status (36)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1307491B2 (pl) |
| JP (1) | JP5279160B2 (pl) |
| KR (1) | KR100853585B1 (pl) |
| CN (1) | CN1230449C (pl) |
| AP (1) | AP1703A (pl) |
| AR (1) | AR029865A1 (pl) |
| AT (1) | ATE470679T1 (pl) |
| AU (2) | AU2001277602B2 (pl) |
| BR (1) | BR0112612B1 (pl) |
| CA (1) | CA2416673C (pl) |
| CL (1) | CL2004001154A1 (pl) |
| CY (1) | CY1110774T1 (pl) |
| DE (1) | DE60142340D1 (pl) |
| DK (1) | DK1307491T3 (pl) |
| DZ (1) | DZ3411A1 (pl) |
| EA (1) | EA005995B1 (pl) |
| EC (1) | ECSP034442A (pl) |
| ES (1) | ES2347134T5 (pl) |
| FR (1) | FR2811992B1 (pl) |
| HK (1) | HK1059273A1 (pl) |
| HR (1) | HRP20030019A2 (pl) |
| HU (1) | HUP0300755A3 (pl) |
| IL (2) | IL153922A0 (pl) |
| MA (1) | MA26928A1 (pl) |
| MX (1) | MXPA03000579A (pl) |
| NO (1) | NO20030296L (pl) |
| NZ (1) | NZ524028A (pl) |
| OA (1) | OA12340A (pl) |
| PL (1) | PL202471B1 (pl) |
| PT (1) | PT1307491E (pl) |
| SI (1) | SI1307491T1 (pl) |
| TW (1) | TWI307278B (pl) |
| UA (1) | UA74836C2 (pl) |
| WO (1) | WO2002008295A1 (pl) |
| YU (1) | YU2903A (pl) |
| ZA (1) | ZA200300898B (pl) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6969705B2 (en) | 2000-07-21 | 2005-11-29 | Aventis Pharma S.A. | Compositions of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| DE60218642T2 (de) * | 2002-06-20 | 2007-11-29 | Chemi S.P.A., Cinisello Balsamo | Verfahren zur Herstellung von Heparinestern |
| FR2845686B1 (fr) * | 2002-10-10 | 2013-08-30 | Aventis Pharma Sa | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| AR041555A1 (es) | 2002-10-10 | 2005-05-18 | Aventis Pharma Sa | Mezclas de polisacaridos derivados de heparina, su preparacion y las composiciones farmaceuticas que las contienen |
| US20040171819A1 (en) | 2002-10-10 | 2004-09-02 | Aventis Pharma S.A. | Mixtures of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2857971B1 (fr) * | 2003-07-24 | 2005-08-26 | Aventis Pharma Sa | Melanges d'oligosaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| US7956046B2 (en) * | 2003-07-24 | 2011-06-07 | Aventis Pharma S.A. | Oligosaccharide mixtures derived from heparin, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them |
| DE102004059134B4 (de) | 2004-12-08 | 2011-12-15 | Siemens Ag | Expansionsvorrichtung für ein Röntgengerät und Röntgenstrahler |
| CA2652205A1 (en) * | 2006-05-25 | 2007-12-06 | Mallik Sundaram | Low molecular weight heparin composition and uses thereof |
| CN101824099B (zh) * | 2010-02-12 | 2011-11-30 | 淮安麦德森化学有限公司 | 一种粗品肝素钠的纯化方法 |
| CN101824446B (zh) * | 2010-02-24 | 2012-12-12 | 淮安麦德森化学有限公司 | 反向沉淀生产硫酸软骨素的方法 |
| EP2399592A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for use as an antithrombotic treatment in hip replacement surgery with improved safety in terms of clinically relevant bleedings and major bleedings |
| EP2399590A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for the prevention of a mortality and/or morbidity event in a patient undergoing major orthopaedic surgery |
| EP2399591A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for the extended prevention of a mortality and/or morbidity event in a patient having undergone hip fracture surgery |
| EP2399593A1 (en) | 2010-06-28 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for use as an antithrombotic treatment in orthopaedic surgery with improved benefit-risk profile |
| CN102399379B (zh) * | 2010-09-09 | 2016-08-31 | 上海喜恩医药科技发展有限公司 | 一种肝素衍生的多糖混合物及其制备方法和药物组合物 |
| CN103209997B (zh) * | 2010-09-14 | 2016-03-16 | 国立大学法人宫崎大学 | 高纯度肝素及其制备方法 |
| WO2012055843A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-03 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for the prevention of major venous thromboembolism in a patient undergoing major abdominal surgery |
| EP2446891A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-02 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for use as an antithrombotic treatment in major abdominal surgery with improved safety in terms of clinically relevant bleedings and major bleedings |
| EP2548561A1 (en) | 2011-07-22 | 2013-01-23 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for improving the survival of patients with locally advanced cancer |
| ES2445494B1 (es) * | 2012-08-02 | 2015-03-06 | Rovi Lab Farmaceut Sa | Procedimiento de obtención de heparinas de bajo y muy bajo peso molecular |
| CN103175925B (zh) * | 2013-03-20 | 2014-12-03 | 山东辰中生物制药有限公司 | 依诺肝素钠生产过程中肝素苄基酯的酯化率的检测方法 |
| FR3016632A1 (fr) * | 2014-01-21 | 2015-07-24 | IFP Energies Nouvelles | Procede de transformation de polysaccharides en molecules oxygenees en presence de superbases organiques neutres |
| CZ306662B6 (cs) * | 2015-06-26 | 2017-04-26 | Contipro A.S. | Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2478646A2 (fr) * | 1980-03-20 | 1981-09-25 | Choay Sa | Composition mucopolysaccharidique ayant une activite regulatrice de la coagulation, medicament la contenant et procede pour l'obtenir |
| IL61201A (en) * | 1979-10-05 | 1984-09-30 | Choay Sa | Oligosaccharides having no more than 8 saccharide moieties,their obtention from heparin and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2482611B1 (fr) * | 1980-05-14 | 1986-03-07 | Pharmindustrie | Nouveaux polysaccharides sulfates, procedes pour leur preparation et leur utilisation comme medicaments |
| US4916219A (en) * | 1985-03-28 | 1990-04-10 | University Of Iowa Research Foundation | Oligosaccharide heparin fragments as inhibitors of complement cascade |
| EP0337327A1 (en) * | 1988-04-09 | 1989-10-18 | Bioiberica, S.A. | Process for the preparation of new oligosaccharide fractions by controlled chemical depolimerization of heparin |
| ES2077533B1 (es) * | 1994-02-28 | 1996-07-01 | Bioiberica | Procedimiento de obtencion de fracciones de oligosacaridos por despolimerizacion quimica de heparina. |
| JP4897991B2 (ja) * | 1999-07-23 | 2012-03-14 | ラボラトリオス ファルマセウティコス ロビ ソシエダッド アノニマ | 超低分子量ヘパリン組成物 |
| ES2161615B1 (es) * | 1999-07-23 | 2003-03-16 | Rovi Lab Farmaceut Sa | Composiciones de heparinas de muy bajo peso molecular. |
-
2000
- 2000-07-21 FR FR0009572A patent/FR2811992B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-07-18 WO PCT/FR2001/002332 patent/WO2002008295A1/fr active IP Right Grant
- 2001-07-18 EP EP01955436.9A patent/EP1307491B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-18 ES ES01955436.9T patent/ES2347134T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-18 HU HU0300755A patent/HUP0300755A3/hu unknown
- 2001-07-18 JP JP2002514199A patent/JP5279160B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-18 MX MXPA03000579A patent/MXPA03000579A/es active IP Right Grant
- 2001-07-18 AT AT01955436T patent/ATE470679T1/de active
- 2001-07-18 YU YU2903A patent/YU2903A/sh unknown
- 2001-07-18 SI SI200130977T patent/SI1307491T1/sl unknown
- 2001-07-18 OA OA1200300012A patent/OA12340A/fr unknown
- 2001-07-18 AP APAP/P/2003/002744A patent/AP1703A/en active
- 2001-07-18 CA CA2416673A patent/CA2416673C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-18 DE DE60142340T patent/DE60142340D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-18 AU AU2001277602A patent/AU2001277602B2/en not_active Ceased
- 2001-07-18 IL IL15392201A patent/IL153922A0/xx unknown
- 2001-07-18 KR KR1020037000689A patent/KR100853585B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 UA UA2003010495A patent/UA74836C2/uk unknown
- 2001-07-18 NZ NZ52402801A patent/NZ524028A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 CN CNB018141870A patent/CN1230449C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-18 DK DK01955436.9T patent/DK1307491T3/da active
- 2001-07-18 DZ DZ013411A patent/DZ3411A1/fr active
- 2001-07-18 PT PT01955436T patent/PT1307491E/pt unknown
- 2001-07-18 EA EA200300178A patent/EA005995B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 BR BRPI0112612-1A patent/BR0112612B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 AU AU7760201A patent/AU7760201A/xx active Pending
- 2001-07-18 PL PL365561A patent/PL202471B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-07-19 TW TW090117709A patent/TWI307278B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-07-20 AR ARP010103476A patent/AR029865A1/es active IP Right Grant
-
2003
- 2003-01-10 MA MA26996A patent/MA26928A1/fr unknown
- 2003-01-13 IL IL153922A patent/IL153922A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-01-14 HR HR20030019A patent/HRP20030019A2/xx not_active Application Discontinuation
- 2003-01-20 NO NO20030296A patent/NO20030296L/no not_active Application Discontinuation
- 2003-01-20 EC EC2003004442A patent/ECSP034442A/es unknown
- 2003-01-31 ZA ZA200300898A patent/ZA200300898B/en unknown
-
2004
- 2004-03-24 HK HK04102179A patent/HK1059273A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2004-05-19 CL CL200401154A patent/CL2004001154A1/es unknown
-
2010
- 2010-09-09 CY CY20101100819T patent/CY1110774T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL202471B1 (pl) | Mieszaniny siarczanowanych polisacharydów, sposób ich wytwarzania oraz kompozycja farmaceutyczna | |
| US7812007B2 (en) | Compositions of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| JP5389140B2 (ja) | ヘパリン誘導多糖類混合物、その製造およびそれを含有する医薬組成物 | |
| US8003623B2 (en) | Mixtures of sulfated oligosaccharides | |
| JP4865552B2 (ja) | ヘパリン−誘導オリゴ糖混合物、その製造およびその混合物を含有する医薬組成物 | |
| KR101104107B1 (ko) | 헤파린으로부터 유도된 다당류의 혼합물, 이의 제조방법 및이를 함유하는 약제학적 조성물 | |
| NZ537411A (en) | Heparin-derived polysaccharide mixtures and preparation method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20130718 |