UA74836C2 - A mixture of polysaccharides based on heparin, a method for the preparation thereof and a pharmaceutical composition - Google Patents
A mixture of polysaccharides based on heparin, a method for the preparation thereof and a pharmaceutical composition Download PDFInfo
- Publication number
- UA74836C2 UA74836C2 UA2003010495A UA2003010495A UA74836C2 UA 74836 C2 UA74836 C2 UA 74836C2 UA 2003010495 A UA2003010495 A UA 2003010495A UA 2003010495 A UA2003010495 A UA 2003010495A UA 74836 C2 UA74836 C2 UA 74836C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- heparin
- activity
- range
- mixture
- salt
- Prior art date
Links
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims abstract description 65
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 52
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title claims abstract description 47
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 17
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 5
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 51
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- -1 alkaline earth metal salt Chemical class 0.000 claims description 29
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 claims description 25
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 20
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 claims description 17
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 14
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 14
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 229960003872 benzethonium Drugs 0.000 claims description 13
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 10
- SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N dimethyl-(phenylmethyl)-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]ammonium Chemical compound C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 7
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- DIBHLCJAJIKHGB-UHFFFAOYSA-N dec-5-ene Chemical compound [CH2]CCCC=CCCCC DIBHLCJAJIKHGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ITAWMPSVROAMOE-UHFFFAOYSA-N sodium;imidazol-3-ide Chemical compound [Na+].C1=C[N-]C=N1 ITAWMPSVROAMOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VSCBATMPTLKTOV-UHFFFAOYSA-N 2-tert-butylimino-n,n-diethyl-1,3-dimethyl-1,3,2$l^{5}-diazaphosphinan-2-amine Chemical compound CCN(CC)P1(=NC(C)(C)C)N(C)CCCN1C VSCBATMPTLKTOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N cetylpyridinium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004830 cetylpyridinium Drugs 0.000 claims description 3
- RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N cetyltrimethylammonium ion Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical class OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 claims description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 2
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 177
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 62
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 47
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 44
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 31
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 31
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 26
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 26
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 13
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 9
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 6
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 4
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 3
- GKTNLYAAZKKMTQ-UHFFFAOYSA-N n-[bis(dimethylamino)phosphinimyl]-n-methylmethanamine Chemical compound CN(C)P(=N)(N(C)C)N(C)C GKTNLYAAZKKMTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- IIPYXGDZVMZOAP-UHFFFAOYSA-N lithium nitrate Chemical compound [Li+].[O-][N+]([O-])=O IIPYXGDZVMZOAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940127217 antithrombotic drug Drugs 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M cetyltrimethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012691 depolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 description 1
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 229960000610 enoxaparin Drugs 0.000 description 1
- 238000006266 etherification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical class NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000001067 neuroprotector Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940045627 porcine heparin Drugs 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 229940061706 sulfated mucopolysaccharides Drugs 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
- C08B37/0078—Degradation products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/727—Heparin; Heparan
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Даний винахід стосується сумішей полісахаридів на основі гепарину, способу їх одержання і фармацевтичних 2 композицій, що їх містять.The present invention relates to mixtures of polysaccharides based on heparin, the method of their preparation and pharmaceutical 2 compositions containing them.
Гепарин являє собою суміш сульфатованих мукополісахаридів тваринного походження, використовувану, зокрема, через її антикоагуляційні й антитромботичні властивості.Heparin is a mixture of sulfated mucopolysaccharides of animal origin, used, in particular, because of its anticoagulant and antithrombotic properties.
Проте гепарин має недолікию, що обмежують умови його застосування. Зокрема, його значна антикоагуляційна активність (активність анти-Іа) може викликати кровотечі. 70 Були запропоновані (ЕР40144) низькомолекулярні гепарини, отримані лужною деполімеризацією складних ефірів гепарину; проте дані продукти ще мають значну активність анти-Па.However, heparin has a disadvantage that limits the conditions of its use. In particular, its significant anticoagulant activity (anti-Ia activity) can cause bleeding. 70 Low molecular weight heparins obtained by alkaline depolymerization of heparin esters were proposed (EP40144); however, these products still have significant anti-Pa activity.
Винахід стосується сумішей полісахаридів на основі гепарину, що мають активність, більш вибіркову щодо активованого чинника Х (чинник Ха) й активованого чинника І! (чинник Іа), ніж у гепарину.The invention relates to mixtures of polysaccharides based on heparin, which have activity that is more selective for activated factor X (factor Xa) and activated factor I! (factor Ia) than heparin.
Більш конкретно, предметом даного винаходу є суміші сульфатованих полісахаридів, які мають звичайну 19 структуру полісахаридів, що входять до складу гепарину й мають такі характеристики: - вони мають середню молекулярну масу в діапазоні від 1500 до З00ОДальтон, активність анти-Ха в діапазоні від 100 до 15О0МЕ/мг, активність анти-Ма в діапазоні від 0 до 1ОМЕ/мг і відношення активність анти-Ха/ активність анти-Іа більше 10, - полісахариди, що входять до складу сумішей, містять від 2 до 26 сахаридних ланок і мають на одному з їхніх кінців ланку 2-О-сульфату 4,5-ненасиченої глюкуронової кислоти, в формі солі лужного або лужноземельного металу.More specifically, the subject of this invention are mixtures of sulfated polysaccharides that have the usual structure of polysaccharides that are part of heparin and have the following characteristics: - they have an average molecular weight in the range from 1500 to 300 OD, anti-Xa activity in the range from 100 to 15O0ME/mg, anti-Ma activity in the range from 0 to 1OME/mg and the ratio of anti-Xa activity/anti-Ia activity is greater than 10, - polysaccharides included in the mixture contain from 2 to 26 saccharide units and have on one from their ends of the 2-O-sulfate link of 4,5-unsaturated glucuronic acid, in the form of an alkali or alkaline earth metal salt.
В якості солей лужного або лужноземельного металу кращими є солі натрію, калію, кальцію і магнію.Sodium, potassium, calcium and magnesium salts are preferred as alkali or alkaline earth metal salts.
Середню молекулярну масу визначають методом рідинної хроматографії при високому тиску з використанням двох послідовно з'єднаних колонок, наприклад колонок, що поставляються під назвою Т5К с (53000 ХІ ї ТЯК 02000 Хі. Детекцію здійснюють рефрактометрично. Використовуваний елюент являє собою Ге) нітрат літію, і витрата складає О,бмл/хв. Систему калібрують по стандартах, отриманих хроматографічним фракціонуванням еноксапарину (АМЕМТІ5) на поліакриламід-агарозному гелі (ІВЕ). Згадане одержання здійснюють відповідно до методики, описаної в статті Ваггом/сійе еї соїЇ., Тпготр. Кевз., 12, 27-36 (1977-78) або в статті О.А. апе еї сої, Тпготр. Кев., 12, 257-271 (1977-78). Результати обчислюють із використанням ее, програмного забезпечення СРС (Регкіп ЕІтег). соThe average molecular weight is determined by the method of liquid chromatography at high pressure using two columns connected in series, for example, columns supplied under the name T5K s (53000 ХИ and ТЯК 02000 Х. Detection is carried out refractometrically. The eluent used is lithium nitrate, and consumption is O.bml/min. The system is calibrated according to standards obtained by chromatographic fractionation of enoxaparin (AMEMTI5) on a polyacrylamide-agarose gel (IVE). The above-mentioned preparation is carried out according to the method described in the article by Waggom/siye ei soiY., Tpgotr. Kevz., 12, 27-36 (1977-78) or in the article by O.A. ape her soy, Tpgotr. Kev., 12, 257-271 (1977-78). The results are calculated using ee, SRS software (Regkeep EITeg). co
Активність анти-Ха вимірюють амідолітичним методом на хромогенному субстраті, описаному в статті Теіеп еї сої, ТготЬ. Кев., 10, 399-410 (1977), з використанням як еталону першого міжнародного еталону со низькомолекулярних гепаринів. «ІThe activity of anti-Xa is measured by the amidolytic method on the chromogenic substrate described in the article Teiep eyi soi, Tgotb. Kev., 10, 399-410 (1977), using as a standard the first international standard of low molecular weight heparins. "AND
Активність анти-Ма вимірюють технікою, описаною Апдегвзеп І.О. еї соїЇ.,, ТйготбЬ.Кев., 15, 531-541 (1979), з використанням як еталону першого міжнародного еталону низькомолекулярних гепаринів. -Anti-Ma activity is measured by the technique described by Apdegvzep I.O. ei soiY.,, Tygotb.Kev., 15, 531-541 (1979), using as a standard the first international standard of low-molecular-weight heparins. -
Переважно, суміші, як-от описані вище, мають активність анти-Ха в інтервалі від 125 до 15ОМЕ/мг.Preferably, mixtures such as those described above have anti-Xa activity in the range of 125 to 15 OME/mg.
Зокрема, суміші, як-от описані вище, мають активність анти-Ха в інтервалі від 140 до 150МЕ/мг і середню молекулярну масу в діапазоні від 2000 до 3000 Дальтон. «In particular, mixtures such as those described above have anti-Xa activity in the range of 140 to 150 IU/mg and an average molecular weight in the range of 2000 to 3000 Daltons. "
Переважно, суміші відповідно до винаходу мають активність анти-Іа від О до 5МЕ/мг. З 50 Ще більш переважно, суміші мають відношення активність анти-Ха/активність анти-Іа більше 25. с Суміші олігосахаридів відповідно до винаходу можуть бути отримані деполімеризацією четвертинноїPreferably, the mixtures according to the invention have anti-Ia activity from 0 to 5 IU/mg. With 50 Even more preferably, the mixtures have a ratio of anti-Xa activity/anti-Ia activity greater than 25. c Mixtures of oligosaccharides according to the invention can be obtained by depolymerization of quaternary
Із» амонієвої солі складного бензилового ефіру гепарину в органічному середовищі за допомогою сильної органічної основи з рКа»20 або імідазолату натрію, перетворенням деполімеризованої четвертинної амонієвої солі складного бензилового ефіру гепарину на натрієву сіль, омиленням складного ефіру й, у разі потреби, очищенням. і Четвертинна амонієва сіль складного бензилового ефіру гепарину являє собою, переважно, сіль бензетонію, «» цетилпіридинію або цетилтриметиламонію.From the ammonium salt of the complex benzyl ether of heparin in an organic medium with the help of a strong organic base with pKa»20 or sodium imidazolate, the conversion of the depolymerized quaternary ammonium salt of the complex benzyl ether of heparin to the sodium salt, saponification of the complex ester and, if necessary, purification. and Quaternary ammonium salt of the complex benzyl ether of heparin is, preferably, a benzethonium, cetylpyridinium or cetyltrimethylammonium salt.
Зазвичай деполімеризацію здійснюють у середовищі інертного органічного розчинника, як-от хлоровмісний бо розчинник (наприклад, дихлорметан), тетрагідрофуран, анізол, при температурі від -202С до 4096. (4) 50 У якості сильної органічної основи з рКа більше 20 можна використовуватиDepolymerization is usually carried out in an environment of an inert organic solvent, such as a chlorine-containing solvent (for example, dichloromethane), tetrahydrofuran, anisole, at a temperature from -202C to 4096. (4) 50 can be used as a strong organic base with a pKa greater than 20
Ф 1,5,7-триазабіцикло|4.4.0|дец-5-ен, 2-трет-бутиліміно-2-діетиламіно-1,3-диметилпергідро-1,3,2-діазафосфорин, основи сімейства гуанідину й фосфазенів.Ф 1,5,7-triazabicyclo|4.4.0|dec-5-ene, 2-tert-butylimino-2-diethylamino-1,3-dimethylperhydro-1,3,2-diazaphosphorine, bases of the guanidine and phosphazene family.
Основи сімейства гуанідинів являють собою, переважно, основи формули:The bases of the guanidine family are mainly the bases of the formula:
Кк о МKk about M
Й Ж ю ВБ є т кгY Z yu VB is t kg
Ка КЗ бо де В! означає водень або алкіл, 2, ВУ, В і В», однакові або різні, означають алкільний радикал.Ka KZ because where is V! means hydrogen or alkyl, 2, VU, B and B", the same or different, means an alkyl radical.
Більш конкретно, В означає водень і 2, ВЕУ, В" і 2? являють собою метильні радикали.More specifically, B represents hydrogen and 2, BEU, B" and 2" represent methyl radicals.
Сильні органічні основи, що належать до сімейства фосфазенів, визначені, наприклад, відповідно доStrong organic bases belonging to the phosphazene family are defined, for example, according to
К.Зспугевзіпдег еї соїЇ, Апдем. Спет. пі Ей. Епої., 26, 1167-1169 (1987), К.Зспугезіпдег еї соїЇ.,, Апдем.K. Zspugevzipdeg her soy, Apdem. Spent pi Hey. Epoi., 26, 1167-1169 (1987), K. Zspugezipdeg ei soiYi.,, Apdem.
СПпет., 105, 1420 (1993).SPpet., 105, 1420 (1993).
Серед основ сімейства фосфазенів використовують, переважно, основи формули:Among the bases of the phosphazene family, bases of the formula are mainly used:
КЗ ке Гм ві-м--Р-щ--К5 іKZ ke Hm vi-m--R-sh--K5 i
М-к6M-k6
Кк? не 157 ! ! ни у якій радикали К'/-К" є однаковими або різними і являють собою алкільні радикали.Kk? not 157! ! in which radicals K'/-K" are the same or different and are alkyl radicals.
В попередніх формулах алкільні радикали містять від 1 до б атомів вуглецю в нерозгалуженому або в розгалуженому ланцюзі.In the previous formulas, alkyl radicals contain from 1 to b carbon atoms in an unbranched or branched chain.
Переважно, молярне відношення сильна органічна основа з рКа більше 20 або |імідазолат натрію/четвертинна амонієва сіль складного бензилового ефіру гепарину знаходиться в інтервалі від0,2 добі, сч 29 переважно, від 1 до 4. Ге)Preferably, the molar ratio of a strong organic base with a pKa of more than 20 or sodium imidazolate/quaternary ammonium salt of the complex benzyl ether of heparin is in the range of 0.2 dobi, pH 29 preferably, from 1 to 4. Ge)
Більш конкретно, ступінь етерифікації четвертинної амонієвої солі складного бензилового ефіру гепарину знаходиться в інтервалі від 50 до 10095 і, переважно, в інтервалі від 70 до 9095. Даний ступінь етерифікації відповідає молярному відсотку етерифікації уронових кислот гепарину.More specifically, the degree of esterification of the quaternary ammonium salt of the complex benzyl ether of heparin is in the range from 50 to 10095 and, preferably, in the range from 70 to 9095. This degree of esterification corresponds to the molar percentage of esterification of the uronic acids of heparin.
Перетворення деполімеризованої четвертинної амонієвої солі складного бензилового ефіру гепарину на ї-о натрієву сіль звичайно здійснюють обробкою реакційного середовища спиртовим розчином ацетату натрію, «9 переважно 1096-ним розчином ацетату натрію в метанолі (маса/об'єм) при температурі в інтервалі від 15 до со 25920. Масовий еквівалент ацетату, що додається, переважно, втричі більший від маси четвертинної амонієвої солі складного бензилового ефіру гепарину, що вводиться в реакцію деполімеризації. «The conversion of the depolymerized quaternary ammonium salt of the complex benzyl ester of heparin into the sodium salt is usually carried out by treating the reaction medium with an alcoholic solution of sodium acetate, preferably with a 1096 solution of sodium acetate in methanol (mass/volume) at a temperature in the range from 15 to so 25920. The mass equivalent of the added acetate is preferably three times greater than the mass of the quaternary ammonium salt of the complex benzyl ether of heparin, which is introduced into the depolymerization reaction. "
Омилення звичайно здійснюють за допомогою гідроксиду лужного металу, як-от гідроксид натрію, гідроксид їч- калію, гідроксид літію, у водному середовищі при температурі в інтервалі від О до 202С, переважно від 0 до 1022. Звичайно використовують від 1 до 5 молярних еквівалентів гідроксиду лужного металу. Переважно, омилення здійснюють за наявності 2-3 молярних еквівалентів гідроксиду лужного металу.Saponification is usually carried out with the help of an alkali metal hydroxide, such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide, in an aqueous medium at a temperature in the range from 0 to 202C, preferably from 0 to 1022. Usually from 1 to 5 molar equivalents of hydroxide are used alkali metal. Preferably, saponification is carried out in the presence of 2-3 molar equivalents of alkali metal hydroxide.
Кінцевий продукт, у разі потреби, може бути очищений будь-яким відомим способом очищення « деполімеризованих гепаринів, зокрема способом, описаним у європейському патенті ЕРООЗ7319. Переважно Ще с очищають за допомогою пероксиду водню у водному середовищі при температурі від 10 до 502С. Переважно, ц зазначену операцію здійснюють в інтервалі від 20 до 4096. ,» Четвертинна амонієва сіль складного бензилового ефіру гепарину може бути отримана відповідно до такої реакційної схеми: а) перетворення гепарину в формі натрієвої солі за допомогою бензетонійхлориду з одержанням гепаринату -І бензетонію, ї» б) етерифікація бензетонієвої солі, отриманої перед цим, за допомогою бензилхлориду й обробка спиртовим розчином ацетату натрію з одержанням натрієвої солі складного бензилового ефіру гепарину, (ее) в) перетворення натрієвої солі складного бензилового ефіру гепарину на четвертинну амонієву сіль, переважно на сіль бензетонію, цетилпіридинію або цетилтриметиламонію.The final product, if necessary, can be purified by any known method of purification of depolymerized heparins, in particular, by the method described in the European patent ЕРООЗ7319. It is mostly cleaned with hydrogen peroxide in an aqueous environment at a temperature of 10 to 502C. Preferably, this specified operation is carried out in the interval from 20 to 4096. The quaternary ammonium salt of the complex benzyl ether of heparin can be obtained according to the following reaction scheme: a) conversion of heparin in the form of a sodium salt with the help of benzethonium chloride to obtain benzethonium heparinate, i » b) esterification of the benzethonium salt, obtained before that, with the help of benzyl chloride and treatment with an alcoholic solution of sodium acetate to obtain the sodium salt of the complex benzyl ether of heparin, (ee) c) the conversion of the sodium salt of the complex benzyl ether of heparin into a quaternary ammonium salt, preferably into a benzethonium salt , cetylpyridinium or cetyltrimethylammonium.
Мн Реакцію стадії а) здійснюють у водному середовищі дією бензетонійхлориду, взятого з надлишком, на 4) гепарин у формі натрієвої солі при температурі, близькій до температури в інтервалі від 15 до 2520. Переважно, молярне відношення бензетонійхлорид/гепарин у формі натрієвої солі знаходиться в інтервалі від 2 до З і, більш конкретно, дорівнює 2,5.Mn The reaction of stage a) is carried out in an aqueous medium by the action of benzethonium chloride, taken in excess, on 4) heparin in the form of a sodium salt at a temperature close to a temperature in the range from 15 to 2520. Preferably, the molar ratio of benzethonium chloride/heparin in the form of a sodium salt is in interval from 2 to 3 and, more specifically, equal to 2.5.
Використовуваний вихідний гепарин у формі натрієвої солі являє собою, переважно, свинячий гепарин. о Вихідний гепарин може бути попередньо очищений з метою зменшення відсоткового вмісту в ньому дерматансульфату відповідно до способу, описаного у французькому патенті ЕК 2663639. іме) Етерифікацію стадії б) здійснюють, переважно, в середовищі хлоровмісного органічного розчинника (наприклад, хлороформ, метиленхлорид) при температурі в інтервалі від 25 до 4590 і, переважно, в інтервалі 60 від 30 до 402С. Складний ефір у формі натрієвої солі виділяють потім осадженням 1095-ним, маса/об'єм, розчином ацетату натрію в спирті, як-от метанол. Звичайно використовують від 1 до 1,2 об'єму спирту на один об'єм реакційного середовища. Кількість бензилхлориду й час реакції підібрані для одержання ступеня етерифікації в інтервалі від 50 до 10095 і, переважно, від 70 до 9095. Переважно, використовують від 0,5 до 1,5 масових частин бензилхлориду на 1 масову частину бензетонієвої солі гепарину. Також, переважно, час реакції бо знаходиться в інтервалі від 10 до 35 годин.The used source heparin in the form of sodium salt is mainly porcine heparin. o The starting heparin can be pre-purified in order to reduce the percentage content of dermatan sulfate in it in accordance with the method described in the French patent EC 2663639. i.e.) Etherification of stage b) is carried out, preferably, in an environment containing a chlorine-containing organic solvent (for example, chloroform, methylene chloride) at a temperature in the interval from 25 to 4590 and, preferably, in the interval 60 from 30 to 402С. The ester in the form of the sodium salt is then isolated by precipitation with a 1095 wt/v solution of sodium acetate in an alcohol such as methanol. Typically, 1 to 1.2 volumes of alcohol per volume of the reaction medium are used. The amount of benzyl chloride and the reaction time are selected to obtain a degree of esterification in the range from 50 to 10095 and, preferably, from 70 to 9095. Preferably, 0.5 to 1.5 parts by mass of benzyl chloride per 1 part by mass of benzethonium salt of heparin are used. Also, mostly, the reaction time is in the interval from 10 to 35 hours.
Перетворення однієї солі на іншу на стадії в) здійснюють за допомогою хлориду четвертинного амонію і,The transformation of one salt into another at stage c) is carried out with the help of quaternary ammonium chloride and,
переважно, за допомогою бензетонійхлориду, цетилпіридинійхлориду або цетилтриметиламонійхлориду, У водному середовищі при температурі в інтервалі від 10 до 259С. Переважно, молярне відношення хлорид четвертинного амонію/натрієва сіль складного бензилового ефіру гепарину знаходиться в інтервалі від 2 до 3.preferably, with the help of benzethonium chloride, cetylpyridinium chloride or cetyltrimethylammonium chloride, in an aqueous environment at a temperature in the range from 10 to 259C. Preferably, the quaternary ammonium chloride/sodium salt of heparin benzyl ester molar ratio is in the range of 2 to 3.
Суміші відповідно до винаходу в формі натрієвої солі можуть бути перетворені на іншу сіль лужного або лужноземельного металу. В разі потреби, від однієї солі до іншої переходять, використовуючи спосіб, описаний в американському патенті О5 4168377.Mixtures according to the invention in the form of a sodium salt can be transformed into another salt of an alkali or alkaline earth metal. If necessary, from one salt to another pass, using the method described in the American patent O5 4168377.
Суміші відповідно до винаходу нетоксичні й, таким чином, можуть бути використані як лікарські засоби.The mixtures according to the invention are non-toxic and, thus, can be used as medicinal products.
Суміші за даним винаходом можуть бути використані як антитромботичні препарати. Зокрема, їх 7/0 використовують для профілактики венозних тромбозів, ускладнень, пов'язаних з артеріальним тромбозом, зокрема, у випадку інфаркту міокарда. їх також використовують при профілактиці й лікуванні проліферації гладких м'язових клітин, ангіогенезу, а також як нейропротектори атеросклерозу й артеріосклерозу.The mixtures according to the present invention can be used as antithrombotic drugs. In particular, their 7/0 is used for the prevention of venous thrombosis, complications associated with arterial thrombosis, in particular, in the case of myocardial infarction. they are also used in the prevention and treatment of smooth muscle cell proliferation, angiogenesis, and also as neuroprotectors of atherosclerosis and arteriosclerosis.
Даний винахід стосується також фармацевтичних композицій, що містять у якості діючого начала суміш полісахаридів відповідно до винаходу, в разі потреби, в поєднанні з одним або декількома інертними 7/5 ексципієнтами.The present invention also relates to pharmaceutical compositions containing as an active principle a mixture of polysaccharides according to the invention, if necessary, in combination with one or more inert 7/5 excipients.
Фармацевтичні композиції являють собою, наприклад, розчини, придатні для підшкірного або внутрішньовенного ін'єктування. Так само їх використовують для введення легеневим шляхом (інгаляція).Pharmaceutical compositions are, for example, solutions suitable for subcutaneous or intravenous injection. They are also used for pulmonary administration (inhalation).
Дозування може варіюватися залежно від віку, ваги і стану здоров'я пацієнта. Для дорослого вона звичайно складає від 20 до 10Омг на день внутрішньом'язово або підшкірно.The dosage may vary depending on the patient's age, weight and health. For an adult, it is usually from 20 to 10 Ωg per day intramuscularly or subcutaneously.
Наступні приклади ілюструють винахід.The following examples illustrate the invention.
Приклад АExample A
Одержання бензетонієвої солі складного бензилового ефіру гепаринуPreparation of the benzethonium salt of the complex benzyl ester of heparin
Гепаринат бензетоніюBenzethonium heparinate
До розчину 10г гепарину в формі натрієвої солі в 100мл води при температурі, близькій до 202С, додають с 285 розчин 25г хлориду бензетонію в 125мл води. Продукт фільтрують, промивають водою і сушать.A solution of 25 g of benzethonium chloride in 125 ml of water is added to a solution of 10 g of heparin in the form of sodium salt in 100 ml of water at a temperature close to 202C. The product is filtered, washed with water and dried.
Складний бензиловий ефір гепарину (натрієва сіль) і)Complex benzyl ester of heparin (sodium salt) and)
До розчину 20г гепаринату бензетонію у 8Омл метиленхлориду додають 1бмл бензилхлориду. Розчин нагрівають при температурі 302С протягом 12 годин. Тоді додають 108мл 1095-ного розчину ацетату натрію в метанолі, фільтрують, промивають метанолом і сушать. У такий спосіб одержують 7,бг складного бензилового «(о ефіру гепарину в формі натрієвої солі, ступінь етерифікації якого дорівнює 77905.1 ml of benzyl chloride is added to a solution of 20 g of benzethonium heparinate in 8 ml of methylene chloride. The solution is heated at a temperature of 302C for 12 hours. Then add 108 ml of a 1095 solution of sodium acetate in methanol, filter, wash with methanol and dry. In this way, 7.bg of the complex benzyl "(o) ether of heparin is obtained in the form of a sodium salt, the degree of esterification of which is equal to 77905.
Складний бензиловий ефір гепарину (бензетонієва сіль) оComplex benzyl ether of heparin (benzethonium salt) o
У колбу Ерленмейєра А об'ємом 2л вводять Збг (0,0549моль) складного бензилового ефіру гепарину (се) (натрієва сіль) і 540мл дистильованої води. Після гомогенізації при температурі близько 209 одержують блідо-жовтий розчин. При перемішуванні на магнітній мішалці в колбі Ерленмейєра В об'ємом 1л готують розчин ч 64,45г (0,143вмоль) хлориду бензетонію в 450мл води. Розчин з колби Ерленмейєра В приблизно за 35 хвилин їх» при перемішуванні доливають до розчину, що знаходиться в колбі Ерленмейєра А. Спостерігають утворення рясного білого осаду. Колбу Ерленмейєра В обполіскують 200мл дистильованої води і промивну воду вводять у колбу Ерленмейєра А. Перемішування припиняють і суспензію залишають осідати протягом 12 годин. Прозору « частину супернатанту відбирають і видаляють. До осілого осаду (зовнішній вигляд кашки) додають 56бОмл води і перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом ЗО хвилин. Супернатант - с відбирають і видаляють (5б0мл). З осілим осадом двічі повторюють описану операцію промивання приблизно и 5бОмл дистильованої води. При останній операції промивання залишають осад у суспензії і фільтрують через є» фільтр з пористого скла Мо3. Осад потім промивають 4 рази 200мл дистильованої води. Вологу білу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 602С. Після 12 годин сушіння одержують 87,5г бензетонієвої солі складного бензилового ефіру гепарину. Отриманий вихід -і складає 94,995. їз Приклад 1 Деполімеризація й перетворення на натрієву сільZbg (0.0549 mol) of complex benzyl ether of heparin (se) (sodium salt) and 540 ml of distilled water are introduced into Erlenmeyer flask A with a volume of 2 l. After homogenization at a temperature of about 209, a pale yellow solution is obtained. A solution of 64.45 g (0.143 vmol) of benzethonium chloride in 450 ml of water is prepared while stirring on a magnetic stirrer in a 1-liter Erlenmeyer flask. The solution from Erlenmeyer flask B is added to the solution in Erlenmeyer flask A in about 35 minutes while stirring. The formation of an abundant white precipitate is observed. Erlenmeyer flask B is rinsed with 200 ml of distilled water and the washing water is introduced into Erlenmeyer flask A. Stirring is stopped and the suspension is left to settle for 12 hours. The transparent part of the supernatant is selected and removed. Add 56 bOml of water to the settled sediment (the appearance of mush) and stir for 20 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 30 minutes. Supernatant - c is selected and removed (5b0ml). With the settled sediment, the described washing operation is repeated twice with approximately 5 bOml of distilled water. During the last washing operation, the sediment is left in suspension and filtered through a filter made of porous Mo3 glass. The precipitate is then washed 4 times with 200 ml of distilled water. The wet white solid is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 602C. After 12 hours of drying, 87.5 g of benzethonium salt of complex benzyl ester of heparin is obtained. The resulting output is 94.995. Example 1 Depolymerization and conversion to sodium salt
В колбу Ерленмейєра А об'ємом 50мл уводять 28мл дихлорметану. При перемішуванні повільно вводять 4г со (0,00238моль) складного бензилового ефіру гепарину (ступінь етерифікації: 7795, бензетонієва сіль), отриманого о 20 як описано в прикладі А. Після повного розчинення додають 1,32г (0,00948моль) 1,5,7-триазабіцикло|4.4.0|дец-5-ену. Перемішують при температурі, близькій до 202С, протягом З годин 30 0 хвилин. Протягом цього часу при 49С у колбі Ерленмейєра В готують розчин 12г ацетату натрію в 120мл метанолу. При перемішуванні на магнітній мішалці реакційну суміш, що знаходиться в колбі Ерленмейєра А, доливають до метанольного розчину ацетату натрію. З'являється квазіпрозорий драглистий жовтий осад. 255 Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом однієї години. Прозору частину супернатантуAdd 28 ml of dichloromethane to a 50 ml Erlenmeyer flask A. With stirring, slowly introduce 4 g (0.00238 mol) of complex benzyl ester of heparin (degree of esterification: 7795, benzethonium salt), obtained at 20 as described in example A. After complete dissolution, add 1.32 g (0.00948 mol) of 1.5, 7-triazabicyclo|4.4.0|dec-5-ene. Stir at a temperature close to 202C for 3 hours 30 0 minutes. During this time, a solution of 12g of sodium acetate in 120ml of methanol is prepared in an Erlenmeyer flask B at 49C. When stirring on a magnetic stirrer, the reaction mixture in the Erlenmeyer flask A is added to the methanol solution of sodium acetate. A semi-transparent gelatinous yellow precipitate appears. 255 Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for one hour. The clear part of the supernatant
ГФ) відбирають і видаляють (б2мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтої кашки) додають 5О0мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом ЗО хвилин. Супернатант ді відбирають і видаляють (49мл). До осілого осаду додають 5О0мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин.HF) are selected and removed (b2ml). Add 500 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of a yellow slurry) and stir for 20 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 30 minutes. The supernatant is collected and removed (49 ml). Add 500 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes.
Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо4. Отриманий золотаво-жовтий осад 60 потім двічі промивають 25мл метанолу. Вологу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 602. Після 12 годин сушіння отримують 1,21г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль). Отриманий вихід складає 77,2905.Then the sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous glass Mo4. The obtained golden-yellow precipitate 60 is then washed twice with 25 ml of methanol. The wet solid is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 602. After 12 hours of drying, 1.21 g of depolymerized heparin (benzyl ether, sodium salt) are obtained. The output is 77.2905.
ОмиленняSaponification
В колбу Ерленмейєра об'ємом 25мл уводять 1,21г (0,0018моль) деполімеризованого гепарину (складний бо бензиловий ефір, натрієва сіль), отриманого перед цим, і 11мл води. При перемішуванні на магнітній мішалці вводять 0,1З8мл (0,0018моль) З090-ного натрового лугу. Після додавання суміш охолоджують до 4 С і перемішують протягом 2 годин. Додають 1,43г Масі і нейтралізують розчин додаванням розчину Тмоль/л НСІ (14мл). Суміш переливають у колбу Ерленмейєра об'ємом 100мл і додають 52мл метанолу. Спостерігають утворення жовтого осаду. Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом 12 годин при температурі, близькій до 2020. Потім супернатант відбирають і видаляють (44мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтої кашки) додають 25мл метанолу і перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом 30 хвилин. Супернатант відбирають і видаляють (21мл). До осілого осаду додають 25мМл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого 70 скла Мо3. Отриманий світло-жовтий осад промивають потім двічі їОмл метанолу. Вологу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 6020.1.21 g (0.0018 mol) of depolymerized heparin (complex bo benzyl ether, sodium salt) and 11 ml of water are introduced into a 25 ml Erlenmeyer flask. When stirring on a magnetic stirrer, 0.138 ml (0.0018 mol) of 3090 sodium hydroxide solution is introduced. After addition, the mixture is cooled to 4 C and stirred for 2 hours. Add 1.43 g of Mass and neutralize the solution by adding a solution of Tmol/l HCI (14 ml). The mixture is poured into a 100 ml Erlenmeyer flask and 52 ml of methanol is added. The formation of a yellow precipitate is observed. Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for 12 hours at a temperature close to 2020. The supernatant is then collected and removed (44 ml). Add 25 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of a yellow slurry) and stir for 20 minutes. Allow the precipitate to settle again for about 30 minutes. The supernatant is collected and removed (21 ml). Add 25 mL of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes. Then the sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous 70 glass Mo3. The resulting light yellow precipitate is then washed twice with 10 ml of methanol. The wet solid is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 6020.
Після 12 годин сушіння одержують 0,6бг неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль).After 12 hours of drying, 0.6 bg of crude depolymerized heparin (sodium salt) is obtained.
Отриманий вихід складає 6095.The output is 6095.
ОчищенняCleaning
В колбу Ерленмейєра об'ємом 1Омл уводять 0,6бг неочищеного деполімеризованого гепарину, отриманого перед цим, і 5,9мл дистильованої води. Суміш підтримують при 402С при перемішуванні на магнітній мішалці.0.6 mg of crude depolymerized heparin, obtained before, and 5.9 ml of distilled water are introduced into an Erlenmeyer flask with a volume of 1 Oml. The mixture is maintained at 402C with stirring on a magnetic stirrer.
Додаванням розчину О0,1моль/л гідроксиду натрію створюють рН в інтервалі від У до 10 і додають ЗЗмклBy adding a solution of O0.1 mol/l sodium hydroxide, the pH is created in the range from U to 10 and 33 ml
ЗОдо-ного водного розчину пероксиду водню. Приблизно після 2 годин перемішування додають 0,65г хлориду натрію. Потім суміш нейтралізують додаванням розчину 0,Тмоль/л НОЇ. Потім розчин фільтрують і переливають у колбу Ерленмейєра об'ємом 25мл. Вливають 23,3мл метанолу. Спостерігають утворення білого осаду.of an aqueous solution of hydrogen peroxide. After approximately 2 hours of stirring, 0.65 g of sodium chloride is added. Then the mixture is neutralized by adding a solution of 0.Tmol/l NOI. Then the solution is filtered and poured into a 25 ml Erlenmeyer flask. Pour 23.3 ml of methanol. The formation of a white precipitate is observed.
Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом 12 годин при температурі, близькій до 20920. Потім відбирають і видаляють супернатант (5мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд кашки) додають 5мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом ЗО хвилин. Супернатант відбирають і видаляють (бмл). До осілого осаду додають 5мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. сStirring is stopped and the suspension is allowed to settle for 12 hours at a temperature close to 20920. Then the supernatant (5 ml) is collected and removed. 5 ml of methanol is added to the settled precipitate (the appearance of mush) and stirred for 20 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 30 minutes. The supernatant is collected and discarded (bml). Add 5 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes. with
Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо3. Отриманий білий осад промивають о потім двічі Бмл метанолу. Вологу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 602С. Після 12 годин сушіння одержують 0,51г очищеної суміші полісахаридів (натрієва сіль). Отриманий вихід складає 77,2905.Then the sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous glass Mo3. The obtained white precipitate is then washed twice with Bml of methanol. The wet solid is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 602C. After 12 hours of drying, 0.51 g of purified mixture of polysaccharides (sodium salt) is obtained. The output is 77.2905.
Характеристики отриманої суміші такі: ре) - середня молекулярна маса: 1600 Дальтон; со - активність анти-Ха: 94 МЕ/мг; - активність анти-Па: «0,1 МЕ/мг; со - відношення активність анти-Ха/активність анти-ІМа: 2100. «The characteristics of the obtained mixture are as follows: d) - average molecular weight: 1600 Daltons; so - anti-Xa activity: 94 IU/mg; - anti-Pa activity: "0.1 IU/mg; so - the ratio of anti-Xa activity/anti-IMa activity: 2100.
Приклад 2 Деполімеризація й перетворення на натрієву сільExample 2 Depolymerization and conversion to sodium salt
Зо В колбу Ерленмейєра А об'ємом 100мл уводять 7Омл дихлорметану. При перемішуванні повільно вводять в. 10г (0,00595моль) складного бензилового ефіру гепарину (ступінь етерифікації: 7790, бензетонієва сіль), отриманого як описано в прикладі А. Після повного розчинення додають 1,/мл (0,00587моль) 2-трет-бутиліміно-2-діетиламіно-1,3-диметилпергідро-1,3,2-діазафосфорину. При температурі, близькій до 209С, « дозволяють реакції відбуватися, приблизно, протягом З годин 30 хвилин. Протягом цього часу при 4 С в колбі 50 Ерленмейєра В готують розчин З0г ацетату натрію в ЗООбмл метанолу. При перемішуванні на магнітній мішалці З с реакційну суміш, що знаходиться в колбі Ерленмейєра А, доливають до метанольного розчину ацетату натрію.Z In Erlenmeyer flask A with a volume of 100 ml, 7 Oml of dichloromethane is introduced. While stirring, slowly enter into. 10 g (0.00595 mol) of complex benzyl ether of heparin (degree of esterification: 7790, benzethonium salt), obtained as described in example A. After complete dissolution, add 1./ml (0.00587 mol) of 2-tert-butylimino-2-diethylamino- 1,3-dimethylperhydro-1,3,2-diazaphosphorine. At a temperature close to 209C, reactions are allowed to take place for approximately 3 hours and 30 minutes. During this time, a solution of 30 g of sodium acetate in 30 ml of methanol is prepared in a 50 Erlenmeyer flask at 4 C. When stirring on a magnetic stirrer C, the reaction mixture in the Erlenmeyer flask A is added to the methanol solution of sodium acetate.
Із» З'являється квазіпрозорий драглистий жовтий осад. Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом однієї години. Прозору частину супернатанту відбирають і видаляють (204мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтої кашки) додають 125мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом 30 хвилин. Супернатант відбирають і видаляють (162мл). і До осілого осаду додають 125мл метанолу і перемішують протягом 20 хвилин. «» Потім драглистий осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо3. Отриманий жовтий драглистий осад промивають потім 2 порціями метанолу по бЗмл. Драглисту тверду речовину віджимають і потім бо сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 602С. Після 12 годин сушіння одержують (4) 50 3,34г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль). Отриманий вихід складає 85,3905.A semi-transparent gelatinous yellow precipitate appears. Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for one hour. The clear part of the supernatant is collected and removed (204 ml). Add 125 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of a yellow slurry) and stir for 20 minutes. Allow the precipitate to settle again for about 30 minutes. The supernatant is collected and removed (162 ml). and Add 125 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes. "" Then the gelatinous sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous Mo3 glass. The obtained yellow gelatinous precipitate is then washed with 2 portions of methanol per bZml. The precious solid substance is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 602C. After 12 hours of drying, (4) 50 3.34 g of depolymerized heparin (complex benzyl ether, sodium salt) are obtained. The obtained output is 85.3905.
Омилення с Омилюють 1,67г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль), отриманого перед цим, відповідно до способу омилення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,94г світло-жовтого порошку. Вихід неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль) складає 61905. 99 ОчищенняSaponification c Saponify 1.67 g of depolymerized heparin (benzyl ether, sodium salt), obtained before, according to the method of saponification described in example 1. 0.94 g of light yellow powder is obtained. The yield of crude depolymerized heparin (sodium salt) is 61905. 99 Purification
ГФ) Очищають 0,94г неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль), отриманого перед цим, т відповідно до способу очищення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,71г білого порошку. Вихід складає 75,5905.GF) Purify 0.94 g of crude depolymerized heparin (sodium salt), obtained before this, according to the purification method described in example 1. 0.71 g of white powder is obtained. The output is 75.5905.
Отримана очищена суміш полісахаридів (натрієва сіль) має такі характеристики: - середня молекулярна маса: 2500 Дальтон; 60 - активність анти-Ха: 146,6 МЕ/мг; - активність анти-Іа: 2,15 МЕ/мг; - відношення активність анти-Ха/активність анти-Іа: 68.The resulting purified mixture of polysaccharides (sodium salt) has the following characteristics: - average molecular weight: 2500 Daltons; 60 - anti-Xa activity: 146.6 IU/mg; - anti-Ia activity: 2.15 IU/mg; - the ratio of anti-Xa activity/anti-Ia activity: 68.
Приклад З Деполімеризація й перетворення на натрієву сільExample C Depolymerization and conversion to sodium salt
В колбу Ерленмейєра А об'ємом 50мл уводять 28мл дихлорметану. При перемішуванні повільно вводять 4г бо (0,00238моль) складного бензилового ефіру гепарину (ступінь етерифікації: 7795, бензетонієва сіль), отриманого відповідно до прикладу А. Після повного розчинення й охолодження до 2 С додають 0,33Зг (0,00239моль) 1,5,7-триазабіцикло|4.4.0|дец-5-ену. При температурі, близькій до 209С, дозволяють реакції відбуватися приблизно протягом З годин 30 хвилин. Протягом цього часу при 42С в колбі Ерленмейєра В готують розчин 12г ацетату натрію в 120мл метанолу. При перемішуванні на магнітній мішалці реакційну суміш, що знаходиться в колбі Ерленмейєра А, доливають до метанольного розчину ацетату натрію. З'являється жовтий осад.Add 28 ml of dichloromethane to a 50 ml Erlenmeyer flask A. With stirring, slowly introduce 4 g (0.00238 mol) of the complex benzyl ether of heparin (degree of esterification: 7795, benzethonium salt), obtained according to example A. After complete dissolution and cooling to 2 C, add 0.33 g (0.00239 mol) 1, 5,7-triazabicyclo|4.4.0|dec-5-ene. At a temperature close to 209C, the reactions are allowed to take place for approximately 3 hours and 30 minutes. During this time, a solution of 12g of sodium acetate in 120ml of methanol is prepared in an Erlenmeyer flask B at 42C. When stirring on a magnetic stirrer, the reaction mixture in the Erlenmeyer flask A is added to the methanol solution of sodium acetate. A yellow precipitate appears.
Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом однієї години. Прозору частину супернатанту відбирають і видаляють (9Омл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтої кашки) додають 5О0мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом ЗО хвилин. Супернатант 70 відбирають і видаляють (б1імл). До осілого осаду додають 5О0мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин.Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for one hour. The clear part of the supernatant is taken and removed (9 Oml). Add 500 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of a yellow slurry) and stir for 20 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 30 minutes. Supernatant 70 is selected and removed (b1ml). Add 500 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes.
Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо4. Отриманий осад промивають потім двічі 25мл метанолу. Вологу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 602С. Після 12 годин сушіння одержують 1,19г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль). Тверда речовина має інтенсивне жовте забарвлення. Отриманий вихід складає 75 75,99.Then the sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous glass Mo4. The obtained precipitate is then washed twice with 25 ml of methanol. The wet solid is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 602C. After 12 hours of drying, 1.19 g of depolymerized heparin (complex benzyl ether, sodium salt) are obtained. The solid substance has an intense yellow color. The output is 75 75.99.
ОмиленняSaponification
Омилюють 1,19г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль), отриманого перед цим, відповідно до способу омилення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,78г світло-жовтого порошку. Вихід неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль) складає 71,5905.Saponify 1.19 g of depolymerized heparin (complex benzyl ether, sodium salt), obtained before this, according to the saponification method described in example 1. 0.78 g of light yellow powder is obtained. The yield of crude depolymerized heparin (sodium salt) is 71.5905.
ОчищенняCleaning
Очищають 0,78г неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль), отриманого перед цим, відповідно до способу очищення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,58г білого порошку. Вихід складає 72,5905.0.78 g of crude depolymerized heparin (sodium salt) obtained before this is purified according to the purification method described in example 1. 0.58 g of white powder is obtained. The output is 72.5905.
Отримана очищена суміш полісахаридів (натрієва сіль) має такі характеристики: - середня молекулярна маса: 2700 Дальтон; Ге - активність анти-Ха: 100,1 МЕ/мг; (5) - активність анти-ІІа: 3,3 МЕ/мг; - відношення активність анти-Ха/активність анти-Іа 27,3.The resulting purified mixture of polysaccharides (sodium salt) has the following characteristics: - average molecular weight: 2700 Daltons; He - anti-Xa activity: 100.1 IU/mg; (5) - anti-IIa activity: 3.3 IU/mg; - the ratio of anti-Xa activity/anti-Ia activity is 27.3.
Приклад 4 Деполімеризація й перетворення на натрієву сільExample 4 Depolymerization and conversion to sodium salt
В колбу Ерленмейєра А об'ємом 50мл уводять 28мл дихлорметану. При перемішуванні повільно вводять 4г (Се) (0,00238моль) складного бензилового ефіру гепарину (ступінь етерифікації: 7790, бензетонієва сіль), отриманого с як описано в прикладі А. Після повного розчинення і при 2 об додають О,6бмл (0,00222моль) 2-трет-бутиліміно-трисідиметиламіно)фосфорану. При температурі, близькій до 09С, дозволяють реакції г) відбуватися, приблизно, протягом З годин ЗО хвилин. Протягом цього часу при 4 С в колбі Ерленмейєра В « готують розчин 12г ацетату натрію в 120мл метанолу. При перемішуванні на магнітній мішалці реакційну суміш, що знаходиться в колбі Ерленмейєра А, доливають до метанольного розчину ацетату натрію. З'являється - квазіпрозорий драглистий жовтий осад. Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом однієї години. Прозору частину супернатанту відбирають і видаляють (108мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтуватої кашки) додають 5бО0мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти « приблизно протягом 30 хвилин. Супернатант відбирають і видаляють (бОмл). До осілого осаду додають 5О0мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Потім жовтувато-білий осад у формі суспензії фільтрують через З с фільтр із пористого скла Мо4. Отриманий осад промивають потім двічі 25мл метанолу. Тверду речовину з» віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кКПа) при температурі, близькій до 6б02С. Після 12 годин сушіння одержують 1,22г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль). Отриманий вихід складає 77,8905.Add 28 ml of dichloromethane to a 50 ml Erlenmeyer flask A. With stirring, slowly introduce 4 g (Ce) (0.00238 mol) of complex benzyl ether of heparin (degree of esterification: 7790, benzethonium salt), obtained with as described in example A. After complete dissolution and at 2 rpm, add 0.6 bml (0.00222 mol ) of 2-tert-butylimino-trisidimethylamino)phosphorane. At a temperature close to 09C, reactions d) are allowed to take place, approximately, within 3 hours and 30 minutes. During this time, a solution of 12 g of sodium acetate in 120 ml of methanol is prepared in an Erlenmeyer flask at 4 C. When stirring on a magnetic stirrer, the reaction mixture in the Erlenmeyer flask A is added to the methanol solution of sodium acetate. A semi-transparent gelatinous yellow precipitate appears. Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for one hour. The clear part of the supernatant is collected and removed (108 ml). Add 50 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of a yellowish slurry) and stir for 20 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 30 minutes. The supernatant is collected and discarded (bOml). Add 500 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes. Then the yellowish-white precipitate in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous Mo4 glass. The obtained precipitate is then washed twice with 25 ml of methanol. The solid substance from" is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 6б02С. After 12 hours of drying, 1.22 g of depolymerized heparin (complex benzyl ether, sodium salt) is obtained. The obtained output is 77.8905.
Омилення і Омилюють 1,22г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль), отриманого перед «» цим, відповідно до способу омилення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,69г дуже світлого жовтого порошку.Saponification and saponification of 1.22 g of depolymerized heparin (benzyl ether, sodium salt), obtained before this, according to the method of saponification described in example 1. 0.69 g of a very light yellow powder is obtained.
Вихід неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль) складає 61,6905. бо Очищення со 20 Очищають 0,69г неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль), отриманого перед цим, відповідно до способу очищення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,67г білого порошку. Вихід складає 97,1905. щи Отримана очищена суміш полісахаридів (натрієва сіль) має такі характеристики: - середня молекулярна маса: 2900 Дальтон; - активність анти-Ха: 145,2 МЕ/мг; 52 - активність анти-ІІа: 4,5 МЕ/мг;The yield of crude depolymerized heparin (sodium salt) is 61.6905. bo Purification with 20 Purify 0.69 g of crude depolymerized heparin (sodium salt), obtained before this, according to the purification method described in example 1. 0.67 g of white powder is obtained. The output is 97.1905. The resulting purified mixture of polysaccharides (sodium salt) has the following characteristics: - average molecular weight: 2900 Daltons; - anti-Xa activity: 145.2 IU/mg; 52 - anti-IIa activity: 4.5 IU/mg;
ГФ) - відношення активність анти-Ха/активність анти-ІІа: 32,6.HF) - the ratio of anti-Xa activity/anti-IIa activity: 32.6.
Приклад 5 Деполімеризація й перетворення на натрієву сіль о В колбу А об'ємом 50мл уводять 28мл дихлорметану. При перемішуванні повільно вводять 4г (0,0023 вмоль) бензилгепаринату (ступінь етерифікації: 7795, бензетонієва сіль). Після повного розчинення і при 402 додають 60 0,95г (0,00949моль) імідазолату натрію. При зрошенні дихлорметаном дозволяють реакції відбуватися приблизно протягом 4 годин. Протягом цього часу при 4 2С у колбі Ерленмейєра В готують розчин 12г ацетату натрію в 120мл метанолу. При перемішуванні на магнітній мішалці реакційну суміш, що знаходиться в колбіExample 5 Depolymerization and conversion to sodium salt 28 ml of dichloromethane are introduced into flask A with a volume of 50 ml. With stirring, slowly introduce 4 g (0.0023 vmol) of benzyl heparinate (degree of esterification: 7795, benzethonium salt). After complete dissolution and at 402, add 60 0.95 g (0.00949 mol) of sodium imidazolate. When irrigated with dichloromethane, the reactions are allowed to take place for approximately 4 hours. During this time, a solution of 12 g of sodium acetate in 120 ml of methanol is prepared in an Erlenmeyer flask B at 4 2 C. When stirring on a magnetic stirrer, the reaction mixture in the flask
Ерленмейєра А, доливають до метанольного розчину ацетату натрію. З'являється квазіпрозорий драглистий жовтий осад. Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом однієї години. Прозору частину бо жовтогарячого супернатанту відбирають і видаляють (88мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд оранжевої кашки) додають 5О0мл метанолу і перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом 30 хвилин. Супернатант відбирають і видаляють (5імл). До осілого осаду додають 5О0мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Потім оранжевий осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо4. Отриманий осад промивають потім двічі 25мл метанолу. Тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 6б02С. Після 12 годин сушіння одержують 1,34г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль). Отриманий вихід складає 76,6905.Erlenmeyer A, added to the methanol solution of sodium acetate. A semi-transparent gelatinous yellow precipitate appears. Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for one hour. The transparent part of the yellow-hot supernatant is taken and removed (88 ml). Add 500 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of an orange slurry) and stir for 20 minutes. Allow the precipitate to settle again for about 30 minutes. The supernatant is collected and removed (5 ml). Add 500 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes. Then, the orange precipitate in the form of a suspension is filtered through a porous Mo4 glass filter. The obtained precipitate is then washed twice with 25 ml of methanol. The solid substance is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 6б02С. After 12 hours of drying, 1.34 g of depolymerized heparin (complex benzyl ether, sodium salt) is obtained. The obtained output is 76.6905.
ОмиленняSaponification
Омилюють 1,2г деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль), отриманого перед 70 Цим, відповідно до способу омилення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,63г бежевого порошку. Вихід неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль) складає 52,590.Saponify 1.2 g of depolymerized heparin (benzyl ether, sodium salt), obtained before 70 C, according to the saponification method described in example 1. 0.63 g of beige powder is obtained. The yield of crude depolymerized heparin (sodium salt) is 52,590.
ОчищенняCleaning
Очищають 0,63г неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль), отриманого перед цим, відповідно до способу очищення, описаного в прикладі 1. Одержують 0,42г чистого бежевого порошку. Вихід 75 складає 66,7905.0.63 g of crude depolymerized heparin (sodium salt) obtained before this is purified according to the purification method described in example 1. 0.42 g of pure beige powder is obtained. Output 75 is 66.7905.
Отримана очищена суміш полісахаридів (натрієва сіль) має такі характеристики: - середня молекулярна маса: 2250 Дальтон; - активність анти-Ха: 134,5 МЕ/мг; - активність анти-Іа: 1,5 МЕ/мг; - відношення активність анти-Ха/активність анти-ПІа: 90,5.The resulting purified mixture of polysaccharides (sodium salt) has the following characteristics: - average molecular weight: 2250 Daltons; - anti-Xa activity: 134.5 IU/mg; - anti-Ia activity: 1.5 IU/mg; - the ratio of anti-Xa activity/anti-PIa activity: 90.5.
Приклад 6 Деполімеризація й перетворення на натрієву сільExample 6 Depolymerization and conversion to sodium salt
В колбу Ерленмейєра А об'ємом 50мл уводять 28мл дихлорметану. При перемішуванні повільно вводять 4г (0,00238моль) складного бензилового ефіру гепарину (ступінь етерифікації: 7795, бензетонієва сіль), отриманого як описано в прикладі А. Після повного розчинення додають 1,33г (0,0095бмоль) с 1,5,7-триазабіцикло|4.4.0)дец-5-ену. Перемішують при температурі, близькій до 202С, протягом З годин ЗО о хвилин. Протягом цього часу при 42С в колбі Ерленмейєра В готують розчин 12г ацетату натрію в 120мл метанолу. При перемішуванні на магнітній мішалці реакційну суміш, що знаходиться в колбі Ерленмейєра А, доливають до метанольного розчину ацетату натрію. З'являється квазіпрозорий драглистий жовтий осад.Add 28 ml of dichloromethane to a 50 ml Erlenmeyer flask A. With stirring, slowly introduce 4 g (0.00238 mol) of complex benzyl ether of heparin (degree of esterification: 7795, benzethonium salt), obtained as described in example A. After complete dissolution, add 1.33 g (0.0095 b mol) of 1,5,7- triazabicyclo|4.4.0)dec-5-ene. Stir at a temperature close to 202C for 3 hours 30 minutes. During this time, a solution of 12g of sodium acetate in 120ml of methanol is prepared in an Erlenmeyer flask B at 42C. When stirring on a magnetic stirrer, the reaction mixture in the Erlenmeyer flask A is added to the methanol solution of sodium acetate. A semi-transparent gelatinous yellow precipitate appears.
Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом однієї години. Прозору частину супернатанту (Се) відбирають і видаляють (5бмл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтої кашки) додають бОмл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом ЗО хвилин. Супернатант о відбирають і видаляють (7Омл). До осілого осаду додають 5О0мл метанолу й перемішують протягом 15 хвилин. (се)Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for one hour. The clear part of the supernatant (Se) is taken and removed (5 bml). To the settled sediment (the appearance of a yellow slurry) add 100 ml of methanol and stir for 20 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 30 minutes. The supernatant is collected and removed (7 Oml). Add 500 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 15 minutes. (se)
Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо4. Отриманий золотаво-жовтий осад промивають потім двічі ХОмл метанолу. Вологу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску З (2,7кПа) при температурі, близькій до 602С. Після 12 годин сушіння одержують 0,92г де полімеризованого ч- гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль). Отриманий вихід складає 6490.Then the sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous glass Mo4. The obtained golden-yellow precipitate is then washed twice with 10 ml of methanol. The wet solid is squeezed out and then dried under reduced pressure C (2.7kPa) at a temperature close to 602C. After 12 hours of drying, 0.92 g of de-polymerized h-heparin (complex benzyl ether, sodium salt) is obtained. The output is 6490.
ОмиленняSaponification
В колбу Ерленмейєра об'ємом 25мл уводять 0,92г (0,0014моль) деполімеризованого гепарину (складний « бензиловий ефір, натрієва сіль), отриманого перед цим, і 17,5мл води. При перемішуванні на магнітній мішалці вводять 0,3вмл (0,00379моль) З0906-ного натрового лугу. Після додавання суміш підтримують при температурі, - с близькій до 202, і перемішують протягом 5 годин. Додають 1,8г Масі і нейтралізують розчин додаванням ч концентрованої НСЇІ (кінцевий об'єм розчину близько 18мл). Суміш переливають у колбу Ерленмейєра об'ємом » 100мл і додають 4бмл метанолу. Спостерігають утворення жовтого осаду. Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом 12 годин при температурі, близькій до 202С. Потім відбирають і видаляють супернатант (Б2мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтої кашки) додають 25мл метанолу і перемішують протягом 20 - хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом год. Супернатант відбирають і видаляють (27мл). До їх осілого осаду додають 25мл метанолу і перемішують приблизно протягом год. Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо4. Отриманий осад промивають потім двічі їОмл метанолу. Вологу бо тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кКПа) при температурі, близькій до 6020.0.92 g (0.0014 mol) of depolymerized heparin (complex "benzyl ether, sodium salt) obtained earlier and 17.5 ml of water are introduced into a 25 ml Erlenmeyer flask. When stirring on a magnetic stirrer, 0.3 ml (0.00379 mol) of sodium hydroxide solution is added. After addition, the mixture is maintained at a temperature of - s close to 202, and stirred for 5 hours. Add 1.8 g of Mass and neutralize the solution by adding h of concentrated HCIII (the final volume of the solution is about 18 ml). The mixture is poured into an Erlenmeyer flask with a volume of » 100 ml and 4 bml of methanol is added. The formation of a yellow precipitate is observed. Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for 12 hours at a temperature close to 202C. Then select and remove the supernatant (B2ml). Add 25 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of a yellow slurry) and stir for 20 minutes. The sediment is allowed to settle again for about an hour. The supernatant is collected and removed (27 ml). Add 25 ml of methanol to their settled sediment and stir for about an hour. Then the sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous glass Mo4. The resulting precipitate is then washed twice with 10 ml of methanol. The wet or solid substance is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 6020.
Га 20 Після З годин сушіння одержують 0,42г неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль). Отриманий вихід складає 45,6 905. щи ОчищенняHa 20 After three hours of drying, 0.42 g of crude depolymerized heparin (sodium salt) is obtained. The obtained output is 45.6 905. schi Purification
В колбу Ерленмейєра об'ємом 1Омл уводять 0,42г неочищеного деполімеризованого гепарину, отриманого перед цим, і З,вмл дистильованої води. Суміш підтримують при 382С при перемішуванні на магнітній мішалці. 52 Додаванням розчину О0,1моль/л гідроксиду натрію створюють рН в інтервалі від У до 10 і додають 25мМкл0.42 g of crude depolymerized heparin, obtained before, and 3.vml of distilled water are introduced into an Erlenmeyer flask with a volume of 1 Oml. The mixture is maintained at 382C with stirring on a magnetic stirrer. 52 By adding a solution of O0.1 mol/l sodium hydroxide, create a pH in the range from U to 10 and add 25 mM
ГФ) ЗО096-ного водного розчину пероксиду водню. Приблизно після 2 годин ЗО хвилин перемішування додають 0,5г хлориду натрію. Потім суміш нейтралізують додаванням розчину 0,Тмоль/л НС. Потім розчин фільтрують і о переливають у колбу Ерленмейєра об'ємом 25мл. Вливають 11,3мл метанолу. Спостерігають утворення білого осаду. Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом 12 годин при температурі, близькій до 60 20с. Потім відбирають і видаляють супернатант (9,вмл). До осілого осаду (зовнішній вигляд кашки) додають бБмл метанолу й перемішують протягом 15 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом З годин.HF) ZO096 aqueous solution of hydrogen peroxide. After approximately 2 hours and 30 minutes of stirring, 0.5 g of sodium chloride is added. Then the mixture is neutralized by adding a solution of 0.Tmol/l HC. Then the solution is filtered and poured into a 25 ml Erlenmeyer flask. Pour 11.3 ml of methanol. The formation of a white precipitate is observed. Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for 12 hours at a temperature close to 60 20s. Then the supernatant (9.vml) is selected and removed. Add 10 ml of methanol to the settled precipitate (the appearance of the slurry) and stir for 15 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 3 hours.
Супернатант відбирають і видаляють (6,2мл). До осілого осаду додають 5мл метанолу й перемішують протягом 20 хвилин. Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо3. Отриманий білий осад промивають потім двічі бмл метанолу. Вологу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску бо (2,7кПа) при температурі, близькій до 602С. Після, приблизно, 2 годин 20 хвилин сушіння одержують 0,39г чистого деполімеризованого гепарину (натрієва сіль). Отриманий вихід складає 92,8965.The supernatant is collected and removed (6.2 ml). Add 5 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 20 minutes. Then the sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous glass Mo3. The resulting white precipitate is then washed twice with methanol. The wet solid is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 602C. After approximately 2 hours and 20 minutes of drying, 0.39 g of pure depolymerized heparin (sodium salt) is obtained. The output is 92.8965.
Характеристики деполімеризованого гепарину, отриманого таким чином, наступні: - середня молекулярна маса: 1950 Дальтон; - активність анти-Ха: 115,6 МЕ/мг; - активність анти-Па «2 МЕ/мг; - відношення активність анти-Ха/активність анти-ІМа: »57.The characteristics of the depolymerized heparin obtained in this way are as follows: - average molecular weight: 1950 Dalton; - anti-Xa activity: 115.6 IU/mg; - anti-Pa activity "2 IU/mg; - the ratio of anti-Xa activity/anti-IMa activity: »57.
Приклад 7 Деполімеризація й перетворення на натрієву сільExample 7 Depolymerization and conversion to sodium salt
В реактор А об'ємом 400мл уводять 140мл дихлорметану. При перемішуванні повільно вводять 20г 7/0. «0,0119моль) складного бензилового ефіру гепарину (ступінь етерифікації: 7790, бензетонієва сіль), отриманого як описано в прикладі А. Після повного розчинення, методом Карла Фішера (Каг! Різпег) вимірюють вміст води в реакційній суміші Отримана величина складає 0,195 (води). Додають Збмл (0,0121моль) 2-трет-бутиліміно-2-діетиламіно-1,3-диметилпергідро-1,3,2-діазафосфорину. При температурі, близькій до 259С, дозволяють реакції відбуватися приблизно протягом 24 годин. Протягом цього часу при 42С в колбі Ерленмейєра 75 В готують розчин ЗОг ацетату натрію в ЗбООмл метанолу. При перемішуванні на магнітній мішалці половину реакційної суміші, що знаходиться в реакторі А, доливають до метанольного розчину ацетату натрію.140 ml of dichloromethane is introduced into reactor A with a volume of 400 ml. 20g of 7/0 is slowly introduced while stirring. "0.0119 mol) of the complex benzyl ether of heparin (degree of esterification: 7790, benzethonium salt), obtained as described in example A. After complete dissolution, the water content in the reaction mixture is measured by the Karl Fischer method (Kag! Rizpeg). The obtained value is 0.195 (water ). Zbml (0.0121 mol) of 2-tert-butylimino-2-diethylamino-1,3-dimethylperhydro-1,3,2-diazaphosphorine is added. At a temperature close to 259C, the reactions are allowed to take place for approximately 24 hours. During this time, a solution of 30 g of sodium acetate in 10 ml of methanol is prepared in a 75 V Erlenmeyer flask at 42C. When stirring on a magnetic stirrer, half of the reaction mixture in reactor A is added to the methanol solution of sodium acetate.
З'являється квазіпрозорий драглистий жовтий осад. Перемішування підтримують протягом однієї години й дають суспензії осісти протягом приблизно 12 годин при 42С. Прозору частину супернатанту відбирають і видаляють (220мл). До осілого осаду (зовнішній вигляд жовтої кашки) додають 220мл метанолу й перемішують протягом 50 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом 40 хвилин. Супернатант відбирають і видаляють (204мл). До осілого осаду додають 204мл метанолу й перемішують протягом 40 хвилин. Потім драглистий осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо3. Отриманий жовтий драглистий осад промивають потім 2 порціями метанолу по 10О0мл. Драглисту тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 6б0еС. Після приблизно 12 годин сушіння одержують 2,6бг Ге Ддеполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль). Отриманий вихід складає 70,695 о (обчислений у розрахунку на оброблену половину реакційної суміші).A semi-transparent gelatinous yellow precipitate appears. Stirring is maintained for one hour and the suspension is allowed to settle for approximately 12 hours at 42C. The transparent part of the supernatant is selected and removed (220 ml). Add 220 ml of methanol to the settled sediment (the appearance of a yellow slurry) and stir for 50 minutes. Allow the precipitate to settle again for about 40 minutes. The supernatant is collected and removed (204 ml). Add 204 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 40 minutes. Then the gelatinous sediment in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous glass Mo3. The resulting yellow gelatinous precipitate is then washed with 2 portions of methanol of 1000 ml each. The precious solid substance is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 6°C. After approximately 12 hours of drying, 2.6 g of depolymerized heparin (complex benzyl ether, sodium salt) are obtained. The obtained yield is 70.695 o (calculated on the basis of the treated half of the reaction mixture).
ОмиленняSaponification
Омилюють 2,6бг деполімеризованого гепарину (складний бензиловий ефір, натрієва сіль), отриманого перед цим, відповідно до способу омилення, описаного в прикладі 1. Одержують 1,48г світло-жовтого порошку. Вихід (се) неочищеного деполімеризованого гепарину (натрієва сіль) складає 62,9905. сSaponify 2.6 g of depolymerized heparin (benzyl ether, sodium salt), obtained before, according to the saponification method described in example 1. 1.48 g of light yellow powder is obtained. The yield (se) of crude depolymerized heparin (sodium salt) is 62.9905. with
ОчищенняCleaning
В колбу Ерленмейєра об'ємом 5Омл уводять 1,48г неочищеного деполімеризованого гепарину, отриманого (ее) перед цим, і 15мл дистильованої води. Суміш підтримують при 402С при перемішуванні на магнітній мішалці. «1.48 g of crude depolymerized heparin, obtained (ee) before, and 15 ml of distilled water are introduced into an Erlenmeyer flask with a volume of 5 Oml. The mixture is maintained at 402C with stirring on a magnetic stirrer. "
Додаванням розчину моль/л гідроксиду натрію, створюють рН в інтервалі від 9 до 10. Розчин фільтрують через фільтраційну мембрану з розміром пор 1мкм. Потім додають 7бмкл 3095-ного водного розчину пероксиду водню. ЇїBy adding a solution of mol/l sodium hydroxide, create a pH in the range from 9 to 10. The solution is filtered through a filtration membrane with a pore size of 1 μm. Then add 7 ml of a 3095% aqueous solution of hydrogen peroxide. her
Приблизно після 2 годин перемішування додають 1,5г хлориду натрію. Потім суміш нейтралізують додаванням розчину Імоль/л НС. Розчин фільтрують через фільтраційну мембрану з розміром пор їмкм. Вливають Звмл метанолу. Спостерігають утворення білого осаду. Перемішування припиняють і дають суспензії осісти протягом « 1год. при температурі, близькій до 2020. Потім відбирають і видаляють супернатант (37мл). До осілого осаду додають 37мл метанолу й перемішують протягом 45 хвилин. Дають осаду повторно осісти приблизно протягом о) с 45 хвилин. Супернатант відбирають і видаляють (3З4мл). До осілого осаду додають З4мл метанолу й "» перемішують протягом 15 хвилин. Потім осад у формі суспензії фільтрують через фільтр із пористого скла Мо3. " Отриманий білий осад промивають потім двічі 25мл метанолу. Вологу тверду речовину віджимають і потім сушать при зниженому тиску (2,7кПа) при температурі, близькій до 602С. Після 12 годин сушіння одержують 1,29г чистого деполімеризованого гепарину (натрієва сіль). Отриманий вихід складає 87,295. це. Отриманий очищений деполімеризований гепарин має такі характеристики: їз - середня молекулярна маса: 2250 Дальтон - активність анти-Ха: 149,6 МЕ/мг; со - активність анти-ІМа: 0,85 МЕ/мг;After approximately 2 hours of stirring, 1.5 g of sodium chloride is added. Then the mixture is neutralized by adding a solution of Imol/l HC. The solution is filtered through a filtration membrane with a pore size of mm. Pour in 1 ml of methanol. The formation of a white precipitate is observed. Stirring is stopped and the suspension is allowed to settle for 1 hour. at a temperature close to 2020. Then the supernatant (37 ml) is collected and removed. Add 37 ml of methanol to the settled precipitate and stir for 45 minutes. The sediment is allowed to settle again for about 45 minutes. The supernatant is collected and removed (3-4 ml). 34 ml of methanol is added to the settled precipitate and stirred for 15 minutes. Then the precipitate in the form of a suspension is filtered through a filter made of porous Mo3 glass. The obtained white precipitate is then washed twice with 25 ml of methanol. The wet solid is squeezed out and then dried under reduced pressure (2.7kPa) at a temperature close to 602C. After 12 hours of drying, 1.29 g of pure depolymerized heparin (sodium salt) are obtained. The output is 87,295. it. The resulting purified depolymerized heparin has the following characteristics: iz - average molecular weight: 2250 Dalton - anti-Xa activity: 149.6 IU/mg; so - anti-IMa activity: 0.85 IU/mg;
Га 20 - відношення активність анти-Ха/активність анти-Іа: 176.Ha 20 - the ratio of anti-Xa activity/anti-Ia activity: 176.
Claims (20)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0009572A FR2811992B1 (en) | 2000-07-21 | 2000-07-21 | MIXTURES OF HEPARIN-DERIVED POLYSACCHARIDES, THEIR PREPARATION AND THE PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM |
| PCT/FR2001/002332 WO2002008295A1 (en) | 2000-07-21 | 2001-07-18 | Heparin-derived polysaccharide mixtures, preparation method and pharmaceutical compositions containing same |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA74836C2 true UA74836C2 (en) | 2006-02-15 |
Family
ID=8852768
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2003010495A UA74836C2 (en) | 2000-07-21 | 2001-07-18 | A mixture of polysaccharides based on heparin, a method for the preparation thereof and a pharmaceutical composition |
Country Status (36)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1307491B2 (en) |
| JP (1) | JP5279160B2 (en) |
| KR (1) | KR100853585B1 (en) |
| CN (1) | CN1230449C (en) |
| AP (1) | AP1703A (en) |
| AR (1) | AR029865A1 (en) |
| AT (1) | ATE470679T1 (en) |
| AU (2) | AU2001277602B2 (en) |
| BR (1) | BR0112612B1 (en) |
| CA (1) | CA2416673C (en) |
| CL (1) | CL2004001154A1 (en) |
| CY (1) | CY1110774T1 (en) |
| DE (1) | DE60142340D1 (en) |
| DK (1) | DK1307491T3 (en) |
| DZ (1) | DZ3411A1 (en) |
| EA (1) | EA005995B1 (en) |
| EC (1) | ECSP034442A (en) |
| ES (1) | ES2347134T5 (en) |
| FR (1) | FR2811992B1 (en) |
| HK (1) | HK1059273A1 (en) |
| HR (1) | HRP20030019A2 (en) |
| HU (1) | HUP0300755A3 (en) |
| IL (2) | IL153922A0 (en) |
| MA (1) | MA26928A1 (en) |
| MX (1) | MXPA03000579A (en) |
| NO (1) | NO20030296D0 (en) |
| NZ (1) | NZ524028A (en) |
| OA (1) | OA12340A (en) |
| PL (1) | PL202471B1 (en) |
| PT (1) | PT1307491E (en) |
| SI (1) | SI1307491T1 (en) |
| TW (1) | TWI307278B (en) |
| UA (1) | UA74836C2 (en) |
| WO (1) | WO2002008295A1 (en) |
| YU (1) | YU2903A (en) |
| ZA (1) | ZA200300898B (en) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6969705B2 (en) | 2000-07-21 | 2005-11-29 | Aventis Pharma S.A. | Compositions of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| ATE356150T1 (en) * | 2002-06-20 | 2007-03-15 | Chemi Spa | METHOD FOR PRODUCING HEPARINE ESTERS |
| KR101104107B1 (en) | 2002-10-10 | 2012-01-12 | 아방티 파르마 소시에테 아노님 | Heparin-derived polysaccharide mixtures, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing same |
| FR2845686B1 (en) * | 2002-10-10 | 2013-08-30 | Aventis Pharma Sa | MIXTURES OF HEPARIN-DERIVED POLYSACCHARIDES, THEIR PREPARATION AND THE PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM |
| US20040171819A1 (en) | 2002-10-10 | 2004-09-02 | Aventis Pharma S.A. | Mixtures of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2857971B1 (en) * | 2003-07-24 | 2005-08-26 | Aventis Pharma Sa | MIXTURES OF HEPARIN DERIVED OLIGOSACCHARIDES, THEIR PREPARATION AND THE PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM |
| US7956046B2 (en) * | 2003-07-24 | 2011-06-07 | Aventis Pharma S.A. | Oligosaccharide mixtures derived from heparin, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them |
| DE102004059134B4 (en) | 2004-12-08 | 2011-12-15 | Siemens Ag | Expansion device for an X-ray machine and X-ray source |
| JP2009538386A (en) * | 2006-05-25 | 2009-11-05 | モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Low molecular weight heparin compositions and uses thereof |
| CN101824099B (en) * | 2010-02-12 | 2011-11-30 | 淮安麦德森化学有限公司 | Method for purifying crude product heparin sodium |
| CN101824446B (en) * | 2010-02-24 | 2012-12-12 | 淮安麦德森化学有限公司 | Method for producing chondroitin sulfate by reverse precipitation |
| EP2399591A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for the extended prevention of a mortality and/or morbidity event in a patient having undergone hip fracture surgery |
| EP2399592A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for use as an antithrombotic treatment in hip replacement surgery with improved safety in terms of clinically relevant bleedings and major bleedings |
| EP2399590A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for the prevention of a mortality and/or morbidity event in a patient undergoing major orthopaedic surgery |
| EP2399593A1 (en) | 2010-06-28 | 2011-12-28 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for use as an antithrombotic treatment in orthopaedic surgery with improved benefit-risk profile |
| CN102399379B (en) * | 2010-09-09 | 2016-08-31 | 上海喜恩医药科技发展有限公司 | Polysaccharide mixture of a kind of heparin derivative and preparation method thereof and pharmaceutical composition |
| EP3144325B1 (en) * | 2010-09-14 | 2020-11-04 | University Of Miyazaki | High purity heparin and production method therefor |
| EP2446891A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-02 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for use as an antithrombotic treatment in major abdominal surgery with improved safety in terms of clinically relevant bleedings and major bleedings |
| WO2012055843A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-03 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for the prevention of major venous thromboembolism in a patient undergoing major abdominal surgery |
| EP2548561A1 (en) | 2011-07-22 | 2013-01-23 | Aventis Pharma S.A. | Semuloparin for improving the survival of patients with locally advanced cancer |
| ES2445494B1 (en) * | 2012-08-02 | 2015-03-06 | Rovi Lab Farmaceut Sa | Procedure for obtaining low and very low molecular weight heparins |
| CN103175925B (en) * | 2013-03-20 | 2014-12-03 | 山东辰中生物制药有限公司 | Method for detecting esterification rate of heparin benzyl ester in production process of enoxaparin sodium |
| FR3016632A1 (en) * | 2014-01-21 | 2015-07-24 | IFP Energies Nouvelles | PROCESS FOR TRANSFORMING POLYSACCHARIDES TO OXYGENIC MOLECULES IN THE PRESENCE OF NEUTRAL ORGANIC SUPERBASES |
| CZ306662B6 (en) * | 2015-06-26 | 2017-04-26 | Contipro A.S. | Sulphated polysaccharides derivatives, the method of their preparation, the method of their modification and the use |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2478646A2 (en) * | 1980-03-20 | 1981-09-25 | Choay Sa | MUCOPOLYSACCHARIDIC COMPOSITION HAVING A COAGULATION REGULATING ACTIVITY, MEDICAMENT CONTAINING THE SAME, AND METHOD FOR OBTAINING THE SAME |
| IL61201A (en) * | 1979-10-05 | 1984-09-30 | Choay Sa | Oligosaccharides having no more than 8 saccharide moieties,their obtention from heparin and pharmaceutical compositions containing them |
| FR2482611B1 (en) * | 1980-05-14 | 1986-03-07 | Pharmindustrie | NOVEL SULFATED POLYSACCHARIDES, METHODS FOR THEIR PREPARATION AND THEIR USE AS MEDICAMENTS |
| US4916219A (en) * | 1985-03-28 | 1990-04-10 | University Of Iowa Research Foundation | Oligosaccharide heparin fragments as inhibitors of complement cascade |
| EP0337327A1 (en) * | 1988-04-09 | 1989-10-18 | Bioiberica, S.A. | Process for the preparation of new oligosaccharide fractions by controlled chemical depolimerization of heparin |
| ES2077533B1 (en) * | 1994-02-28 | 1996-07-01 | Bioiberica | PROCEDURE FOR OBTAINING OLIGOSACCHARIDE FRACTIONS BY CHEMICAL DEPOLYMERIZATION OF HEPARIN. |
| JP4897991B2 (en) * | 1999-07-23 | 2012-03-14 | ラボラトリオス ファルマセウティコス ロビ ソシエダッド アノニマ | Ultra low molecular weight heparin composition |
| ES2161615B1 (en) * | 1999-07-23 | 2003-03-16 | Rovi Lab Farmaceut Sa | COMPOSITIONS OF HEPARINS OF VERY LOW MOLECULAR WEIGHT. |
-
2000
- 2000-07-21 FR FR0009572A patent/FR2811992B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-07-18 UA UA2003010495A patent/UA74836C2/en unknown
- 2001-07-18 SI SI200130977T patent/SI1307491T1/en unknown
- 2001-07-18 PL PL365561A patent/PL202471B1/en not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 DE DE60142340T patent/DE60142340D1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-18 AU AU2001277602A patent/AU2001277602B2/en not_active Ceased
- 2001-07-18 EP EP01955436.9A patent/EP1307491B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-18 ES ES01955436.9T patent/ES2347134T5/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-18 AP APAP/P/2003/002744A patent/AP1703A/en active
- 2001-07-18 DZ DZ013411A patent/DZ3411A1/en active
- 2001-07-18 IL IL15392201A patent/IL153922A0/en unknown
- 2001-07-18 MX MXPA03000579A patent/MXPA03000579A/en active IP Right Grant
- 2001-07-18 OA OA1200300012A patent/OA12340A/en unknown
- 2001-07-18 DK DK01955436.9T patent/DK1307491T3/en active
- 2001-07-18 AU AU7760201A patent/AU7760201A/en active Pending
- 2001-07-18 HU HU0300755A patent/HUP0300755A3/en unknown
- 2001-07-18 CN CNB018141870A patent/CN1230449C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-18 YU YU2903A patent/YU2903A/en unknown
- 2001-07-18 EA EA200300178A patent/EA005995B1/en not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 JP JP2002514199A patent/JP5279160B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-18 CA CA2416673A patent/CA2416673C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-18 NZ NZ52402801A patent/NZ524028A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 BR BRPI0112612-1A patent/BR0112612B1/en not_active IP Right Cessation
- 2001-07-18 PT PT01955436T patent/PT1307491E/en unknown
- 2001-07-18 AT AT01955436T patent/ATE470679T1/en active
- 2001-07-18 WO PCT/FR2001/002332 patent/WO2002008295A1/en active IP Right Grant
- 2001-07-18 KR KR1020037000689A patent/KR100853585B1/en not_active IP Right Cessation
- 2001-07-19 TW TW090117709A patent/TWI307278B/en not_active IP Right Cessation
- 2001-07-20 AR ARP010103476A patent/AR029865A1/en active IP Right Grant
-
2003
- 2003-01-10 MA MA26996A patent/MA26928A1/en unknown
- 2003-01-13 IL IL153922A patent/IL153922A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-01-14 HR HR20030019A patent/HRP20030019A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-01-20 NO NO20030296A patent/NO20030296D0/en not_active Application Discontinuation
- 2003-01-20 EC EC2003004442A patent/ECSP034442A/en unknown
- 2003-01-31 ZA ZA200300898A patent/ZA200300898B/en unknown
-
2004
- 2004-03-24 HK HK04102179A patent/HK1059273A1/en not_active IP Right Cessation
- 2004-05-19 CL CL200401154A patent/CL2004001154A1/en unknown
-
2010
- 2010-09-09 CY CY20101100819T patent/CY1110774T1/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA74836C2 (en) | A mixture of polysaccharides based on heparin, a method for the preparation thereof and a pharmaceutical composition | |
| JP5389140B2 (en) | Heparin-derived polysaccharide mixture, its production and pharmaceutical composition containing it | |
| US7812007B2 (en) | Compositions of polysaccharides derived from heparin, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| JPS63278901A (en) | Normal structure low molecular weight heparin, manufacture and biological application | |
| KR0148799B1 (en) | Novel dermatan sulfate and heparin oligosaccharides having antiatherosclerotic activity | |
| US8003623B2 (en) | Mixtures of sulfated oligosaccharides | |
| AU2004259111B2 (en) | Heparin-derived oligosaccharide mixtures, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing said mixtures | |
| JP2005536577A (en) | Method for producing N-acyl- (epi) K5-amine-O-sulfate derivative and N-acyl- (epi) K5-amine-O-sulfate derivative | |
| KR101104107B1 (en) | Heparin-derived polysaccharide mixtures, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing same | |
| NZ537411A (en) | Heparin-derived polysaccharide mixtures and preparation method |