PL201716B1 - Zastosowanie przeciwciała specyficznie wiążącego się do integryny alfa 6 w leczeniu zwłóknienia wątroby - Google Patents
Zastosowanie przeciwciała specyficznie wiążącego się do integryny alfa 6 w leczeniu zwłóknienia wątrobyInfo
- Publication number
- PL201716B1 PL201716B1 PL384372A PL38437298A PL201716B1 PL 201716 B1 PL201716 B1 PL 201716B1 PL 384372 A PL384372 A PL 384372A PL 38437298 A PL38437298 A PL 38437298A PL 201716 B1 PL201716 B1 PL 201716B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mice
- αvβ6
- cells
- bleomycin
- cell
- Prior art date
Links
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 7
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 title 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 abstract description 9
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 abstract description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 27
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 25
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 25
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 25
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 21
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 12
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 10
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 6
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 6
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 6
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 6
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- -1 elixirs Substances 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 3
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 3
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 3
- 108010021309 integrin beta6 Proteins 0.000 description 3
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- IOUUIFSIQMVYKP-UHFFFAOYSA-N Tetradecyl acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOC(C)=O IOUUIFSIQMVYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 2
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 238000010232 migration assay Methods 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 238000011714 129 mouse Methods 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100504320 Caenorhabditis elegans mcp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100034221 Growth-regulated alpha protein Human genes 0.000 description 1
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101001069921 Homo sapiens Growth-regulated alpha protein Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010042918 Integrin alpha5beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 description 1
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 102000007000 Tenascin Human genes 0.000 description 1
- 108010008125 Tenascin Proteins 0.000 description 1
- 108010087298 Tn receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010052664 Vascular shunt Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000003092 anti-cytokine Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 244000144987 brood Species 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000003352 cell adhesion assay Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003503 early effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 230000008442 fetal wound healing Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 108700016226 indium-bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000013546 insoluble monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002889 oleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 230000007047 pulmonary toxicity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 108010008268 transforming growth factor type e Proteins 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2839—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the integrin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70546—Integrin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Abstract
1. Zastosowanie przeciwcia la, które specyficznie wiaze si e do integryny a? ß6 i blokuje wi azanie ligandu do integryny av ß6 do wytwarzania leku do leczenia zw lóknienia w atroby u pacjenta. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie przeciwciała, które specyficznie wiąże się do integryny ανβ6 i blokuje wiązanie ligandu do integryny ανβ6 w leczeniu zwłóknienia wątroby u pacjenta.
Integryny są heterodimerycznymi receptorami adhezji komórkowej złożonymi z dwóch podjednostek, α i β. Integryna ανβ6 jest receptorem fibronektyny i tenascyny ujawnianym głównie przez komórki nabłonka. W zdrowych tkankach naczelnych β6 mRNA i proteina są rzadko wykrywane, aczkolwiek β6 jest ujawniana podczas rozwoju płodu, gojenia się rany i przy pewnych nowotworach nabłonka. Jeśli podjednostka β6 jest ujawniana przez linię komórkową raka okrężnicy, gdzie normalnie nie występuje, ujawnianie podjednostki nadaje zwiększoną zdolność do proliferacji. Terminalna -COOH regionu 11 aminokwasu, unikatowa w podjednostce β6, jest niezbędna do zwiększenia aktywności proliferacyjnej integryny ανβ6 (Agrez, et al., J. Cell. Biol., 127: 547-556 (1994). Ekspresja β6 jest indukowana w komórkach nabłonka pęcherzyków podczas urazu wywołanego iniekcją żywych bakterii oraz ekspresja β6 jest obserwowana w ogniskach podklinicznych stanów zapalnych, jak również w rozmaitych próbkach klinicznych od pacjentów z przewlekł ym lub ostrym stanem zapalnym pł uc lub nerek (Breuss, et al., J. Cell Sci., 108: 2241-2251 (1995)).
Huang, et al. (J. Cell Biol., 133: 921-928 (1996)) ujawnił homozygotyczne myszy, o nieistotnych mutacjach genu kodującego podjednostkę β6, z brakiem młodzieńczego owłosienia związanym z infiltracją makrofagów do skóry oraz z akumulowanymi aktywowanymi limfocytami wokół przewodzących dróg oddechowych w płucach.
Zwłóknienie płuc jest typowym zaburzeniem uważanym za skutek destruktywnego działania produktów uwalnianych przez leukocyty (patrz na przykład Marshall, et al., Int. J. Biochem. Cell Bio., 29: 107-120 (1997)). Indukowany bleomycyną uraz płuc i zwłóknienie płuc są powiązane i mogą zależeć od gromadzenia i aktywacji limfocytów (Schrier, D.J., et al., Am. J. Pathol., 116: 270-278 (1984)). Wśród proponowanych terapii wobec miąższowego urazu płuc i zwłóknienia płuc istnieją terapeutyczne podejścia „antycytokinowe (Coker, et al., Thorax, 52(2): 294-296 (1997)).
Jednakże, aktualne terapie wobec ostrego urazu płuc i zwłóknienia płuc są w większości niewłaściwe (patrz na przykład King, et al., „Idiopathyic Pulmonary Fibrosis and other Interstinial Lung Diseases of Unknown Etiology w Textbook of Respiratory Medicine, Murray i Nadel, ed., W.B. Saunders, Filadelfia, PA, str. 1827-1839 (1994)). Zatem istnieje zapotrzebowanie na terapie wobec ostrego urazu płuc i zwłóknienia płuc. Do tego i innych zapotrzebowań odnosi się obecny wynalazek.
Jednym aspektem obecnego wynalazku jest sposób leczenia ostrego urazu płuc pacjenta, obejmujący podawanie pacjentowi dawki terapeutycznej antagonisty ανβ6. Wynalazek dostarcza również sposoby inhibitowania przerzutów płucnych obejmujące podawanie pacjentowi terapeutycznej dawki antagonisty ανβ6. Dalszym aspektem wynalazku jest sposób leczenia zwłóknienia płuc pacjenta, obejmujący podawanie pacjentowi terapeutycznej dawki antagonisty ανβ6.
Dalszym aspektem wynalazku jest ciało monoklonalne wytwarzane przez hybrydomę ATCC HB 12382.
Dalszym aspektem wynalazku jest hybrydoma ATCC HB 12382.
Krótki opis rysunków
Fig. 1A jest wykresem porównującym zawartość płucnej hydroksyproliny u myszy ujawniających nieistotne mutacje genu podjednostki integryny β6 z myszami kontrolnymi w obecności bleomycyny (blm) lub solanki (sal).
Fig. 1B jest fotografią trichromowego wybarwienia sekcji dolnych płuc, demonstrującym gęste akumulowanie kolagenowych matryc zewnątrzkomórkowych w płucach traktowanych bleomycyną myszy typu ulicznego (β6 +/+) ale nie β6-/- w 30 dni po podaniu.
Fig. 2 jest wykresem porównującym przyrost wody w płucach u myszy typu ulicznego (β6+/+) w porównaniu z β 6-/- w obecnoś ci bleomycyny (blm) lub solanki (sal).
Fig. 3 jest wykresem porównującym gromadzenie się limfocytów u myszy typu ulicznego (β6+/+) i β 6-/- po podaniu bleomycyny (blm) lub solanki (sal).
Szczegółowy opis wynalazku
Obecny wynalazek dostarcza sposoby i kompozycje do leczenia ostrego urazu płuc, takiego jak (nie ograniczając zakresu) uraz płuc wynikły z zakażenia bakteryjnego, wstrząsu krwotocznego, inhalacji środków toksycznych i indukowanego bleomycyną i innymi lekami urazu płuc. W dodatku, kompozycje według wynalazku są użyteczne w leczeniu zwłóknienia w nabłonkach organów, takich jak płuco, wątroba, nerka, pęcherz i przełyk.
PL 201 716 B1
Kompozycje takie mogą być dostarczane profilaktycznie lub terapeutycznie pacjentom, mającym lub zagrożonym pojawieniem się objawów ostrego urazu lub zwłóknienia płuc. Na przykład pacjenci, którzy byli eksponowani na toksyczny środek inhalacyjny, byliby prawdopodobnie leczeni po takiej ekspozycji, podczas gdy pacjent otrzymujący bleomycynę mógłby być leczony profilaktycznie i/lub terapeutycznie. Zazwyczaj kompozycje według wynalazku są podawane w reżymie dziennym przez co najmniej okres 1-5 dni, aczkolwiek pacjenci ze zdiagnozowanym zwłóknieniem płuc, chorobą postępującą, mogą otrzymywać terapeutyczne dawki przez okresy miesięcy i lat. Niniejszym używana „dawka terapeutyczna oznacza dawkę, która zapobiega, łagodzi, zmniejsza objawy lub inaczej ogranicza powagę objawów u pacjenta.
W pewnych praktycznych realizacjach według wynalazku s ą dostarczone antagoniści ανβ6. Tacy antagoniści stanowią (nie ograniczając zakresu) przeciwciała, które specyficznie wiążą się z β6; przeciwciała, które specyficznie wiążą się z ligandem ανβ6; ligandy ανβ6; antysensowne kwasy nukleinowe; niepeptydowe i mimetyzujące peptydy analogi takich ligandów.
Przeciwciała mogą być syntetyczne, monoklononalne lub poliklonalne, i mogą być wytwarzane technikami dobrze znanymi w dziedzinie. W korzystnej praktycznej realizacji antagonista jest przeciwciałem, które specyficznie rozpoznaje region cytoplazmatyczny podjednostki β6 (na przykład patrz Weinacker, et al., J. Cell. Bio., 269: 1-9 (1994)). Do celów terapeutycznych „ludzkie przeciwciała monoklonalne mające ludzkie niezmienne i zmienne regiony są często korzystne, ponieważ minimizują reakcję immunologiczną pacjenta względem tych przeciwciał. Przeciwciała takie mogą być generowane przez immunizację zwierząt transgenicznych, które mają ludzkie geny immunoglobuliny. Patrz Jakobovits, et al., Ann. NY Acad. Sci., 764: 525-535 (1995). W połączeniu z syntetycznymi i półsyntetycznymi przeciwciałami, terminy takie winny objąć, nie ograniczając zakresu, fragmenty przeciwciał, izotypowo przekształcone przeciwciała, przeciwciała humanizowane (np. mysz-człowiek, człowiekmysz i podobne), hybrydy, przeciwciała o mnogiej specyficzności, pseudocząsteczki-całkowicie syntetyczne przeciwciała i podobne.
Zgodnie z poniższym omówieniem, przeciwciała mogą być poddane skriningowi co do zdolności blokowania wiązania ligandu do ανβ6 i/lub innych właściwości, takich jak zdolność do zapobiegania in vivo indukowanemu bleomycyną zwłóknieniu płuc. Przykładowym przeciw-e6 przeciwciałem monoklonalnym jest 10D5 (depozyt w ATCC, nr HB 12382, zdeponowany 6 sierpnia 1997).
W innych praktycznych realizacjach według wynalazku stosowanymi antagonistami są peptydy, polipeptydy lub cząstki mimetyzujące peptydy, zaprojektowane jako ligandy ανβ6 na podstawie obecności domeny komórki adhezji, kwasu arginino-glicyno-asparaginowego (RGD). Projektowanie takich cząsteczek jako ligandów integryn jest zilustrowane, na przykład, w Pierschbacher, et al., J. Cell. Biochem., 56: 150-154 (1994); Ruoslahti, Ann. Rev. Cell. Dev. Biol., 12: 697-715 (1996); Chorev, et al., Biopolymers, 37: 367-375 (1995); Pasqualini, et al., J. Cell. Biol., 130: 1189-1196 (1995); i Smith, et al., J. Biol. Chem., 269: 32788-32795 (1994).
W pewnych praktycznych realizacjach według wynalazku cząsteczki antysensownych kwasów nukleinowych są używane jako antagoniści ανβ6. Cząsteczki antysensownych kwasów nukleinowych są komplementarnymi łańcuchami kwasów nukleinowych zaprojektowanymi do wiązania ze specyficzną sekwencją nukleotydów w celu inhibitowania wytwarzania docelowej proteiny. Sekwencja nukleotydowa podjednostki integryny β6 została ujawniona w U.S.S.N 07/728 215, złożonym 11 lipca 1991, który odnośnik jest niniejszym w całości dołączony. Środki te mogą być stosowane samodzielnie lub w połączeniu z innymi antagonistami. Antysensowny antagonista może być dostarczony jako antysensowny nukleotyd, taki jak RNA (patrz na przykład Murayama, et al., Antisence Nucleic Acid Drug. Dev., 7: 109-114 (1997)). Antysensowne geny mogą być również dostarczone w wirusowym wektorze, jak na przykład w wirusie zapalenia wątroby B (patrz na przykład Ji, et al., J. Viral. Hepat., 4: 167-173 (1997)); w adenowirusie (patrz na przykład Xiao, et al., Brain Res., 756: 76-83 (1997); lub w innych układach obejmujących, nie ograniczając zakresu, HVJ (wirus Sendai)-układ liposomowego dostarczania genu (patrz na przykład Kaneda, et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., 811: 299-308 (1997)); „wektor peptydowy (patrz na przykład Vidal, et al., CR Acad. Sci., III 32: 279-287 (1997)); jako gen w episomie lub plazmidowy wektor (patrz na przykład Cooper, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 94: 6450-6455 (1997), Yew, et al., Hum. Gene Ther., 8: 575-584 (1997)); jako gen w agregacie peptyd-DNA (patrz na przykład Niidome, et al., J. Biol. Chem., 272: 15307-15312 (1997)); jako „nagi DNA (patrz na przykład U.S. 5 580 859 i U.S. 5 589 466); oraz w lipidowych układach wektorowych (patrz na przykład Lee, et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 14: 173-206 (1997)).
PL 201 716 B1
Działanie potencjalnych antagonistów ανβ6 może być poddane skriningowi z użyciem rozmaitych technik znanych w dziedzinie i/lub ujawnionych w obrębie obecnego zgłoszenia, takich jak zabezpieczanie przez zwłóknieniem indukowanym bleomycyną na modelu myszy; inhibitowanie proliferacji komórek nowotworowych (Agrez, et al., J. Cell. Bio., 127: 547-556 (1994)); i inhibitowanie migracji komórek i/lub inhibitowanie adhezji komórek (patrz część eksperymentalna - przykłady).
Liczne właściwe postacie preparatów antagonistów według wynalazku znajdują w preparatyce znanej wszystkim chemikom-farmaceutom: Remington's Pharmaceutical Sciences (15-te wydanie, Mack Publishing Company, Easton, Pensylwania (1975)), szczególnie w części 87 autorstwa Blaug'a i Seymour'a. Preparaty te obejmują na przykł ad proszki, pasty, maś ci, galaretki, woski, oleje, lipidy, bezwodne bazy absorpcyjne, emulsje olej w wodzie i woda w oleju, emulsje z karbowaksami (glikole polietylenowe o zróżnicowanych ciężarach cząsteczkowych), półstałe żele i półstałe mieszaniny zawierające karbowaks.
Ilości składnika aktywnego niezbędne dla skutecznej terapii będą uzależnione od wielu czynników, łącznie ze sposobem podawania, rejonem docelowym, stanem fizjologicznym pacjenta i innymi podawanymi lekarstwami. A zatem podawane dawki winny być odmiareczkowywane w celu zoptymalizowania bezpieczeństwa i skuteczności. Zwykle, dawki stosowane in vitro mogą stanowić użyteczna wskazówkę co do ilości użytecznych przy podawaniu in situ składników aktywnych. Testy na zwierzętach pod względem skutecznych dawek w leczeniu konkretnych zaburzeń, dostarczają dalszych wskazań do przewidywania dawek dla ludzi. Rozmaite uwarunkowania są ujawnione na przykład w Goodman and Gilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics, 7-me wydanie (1985), MacMillian Publishing Company, Nowy Jork i Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-te wydanie (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pensylwania. Omówione są tam sposoby podawania, łącznie z podawaniem doustnym, dożylnym, dootrzewnowym, domięśniowym, przezskórnym, donosowym, jonoforetycznym i podobnymi.
Kompozycje według wynalazku mogą być podawane w rozmaitych dawkach jednostkowych, zależnie od sposobu podawania. Na przykład postacie dawek jednostkowych odpowiednie do podawania doustnego obejmują stałe postacie dawek, takie jak proszki, tabletki, pigułki, kapsułki i drażetki oraz ciekłe postacie dawek, takie jak eliksiry, syropy i zawiesiny. Składniki aktywne mogą być również podawane pozajelitowo w sterylnych, ciekłych postaciach dawek. Kapsułki żelatynowe zawierają składnik aktywny oraz, jako składniki nieaktywne, sproszkowane nośniki, takie jak glukoza, laktoza, sukroza, mannitol, skrobia, celuloza lub pochodne celulozy, stearynian magnezowy, kwas stearynowy, sól sodowa sacharyny, talk, węglan magnezowy i podobne. Przykładami dodatkowych składników nieaktywnych, które mogą być dodane w celu zapewnienia żądanego koloru, smaku, stabilności, zdolności buforowej, dyspergowalności lub innych znanych żądanych cech, są czerwony tlenek żelaza, żel krzemionkowy, laurylosiarczan sodowy, ditlenek tytanu, jadalna biała farba i podobne. Podobne rozcieńczalniki mogą być użyte do wytworzenia prasowanych tabletek. Zarówno tabletki i kapsułki mogą być wytwarzane jako produkty o przedłużonym uwalnianiu w celu zapewnienia ciągłego uwalniania lekarstwa przez okres godzin. Tabletki prasowane mogą być powlekane cukrem lub powlekane filmem w celu zamaskowania jakiegokolwiek nieprzyjemnego smaku i zabezpieczenia tabletek przed czynnikami atmosferycznymi, lub powlekane dojelitowo w celu uzyskania selektywnej dezintegracji w drogach żołądkowo-jelitowych. Ciekłe postacie dawek do podawania doustnego mogą zawierać środki barwiące i smakowe, dla ułatwienia przyjmowania przez pacjenta.
Stężenie kompozycji według wynalazku w preparatach farmaceutycznych może być szeroko zróżnicowane, tj. od poniżej około 0,1%, zwykle lub co najmniej około 2% do aż 20% do 50% wagowych lub więcej, i jest dobierane głównie pod kątem objętości płynu, lepkości itd., odpowiednio do danego, wybranego sposobu podawania.
Kompozycje według wynalazku mogą być podawane poprzez liposomy. Liposomy obejmują emulsje, pianki, micelle, nierozpuszczalne warstwy monomolekularne, ciekłe kryształy, dyspersje fosfolipidowe, warstwy o strukturze płytkowej i podobne. W tych preparatach kompozycja według wynalazku, która ma być dostarczana, jest wbudowana jako część liposomu, sama lub w połączeniu z cząsteczką, która wiąże się z żądanym celem, takim jak przeciwciało, lub z innymi kompozycjami terapeutycznymi lub immunogenicznymi. Zatem, liposomy zarówno wypełnione lub pokryte żądaną kompozycją według wynalazku mogą być dostarczane ogólnoustrojowo, lub mogą być skierowane do danej tkanki, do której liposomy dostarczają wybrane kompozycje peptydowe - terapeutyczne/immunogeniczne.
PL 201 716 B1
Liposomy stosowane według wynalazku są tworzone ze standardowych lipidów tworzących pęcherzyki, które ogólnie obejmują nienaładowane i naładowane ujemnie fosfolipidy oraz sterol, taki jak cholesterol. Przy doborze lipidów należy kierować się np. wielkością liposomu, labilnością wobec kwasów i stabilnością liposomów w strumieniu krwi. Rozmaite sposoby otrzymywania liposomów są dostępne i ujawnione w np. Szoka, et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980), opis patentowy U.S. nr 4 235 871, 4 501 728, 4 837 028 i 5 019 369, które odnośniki są niniejszym dołączone.
Zawiesina liposomowa zawierająca kompozycje według wynalazku może być podawana dożylnie, lokalnie, miejscowo itd. w dawce, która zmienia się w zależności między innymi od sposobu podawania, dostarczanej kompozycji według wynalazku i zaawansowania leczonej choroby.
W przypadku kompozycji stałych mogą być użyte typowe nietoksyczne nośniki stałe klasy farmaceutycznej, które obejmują na przykład mannitol, laktozę, skrobię, stearynian magnezowy, sól sodową sacharyny, talk, celulozę, glukozę, węglan magnezowy i podobne. W przypadku podawania doustnego, farmaceutycznie dopuszczalna nietoksyczna kompozycja jest tworzona poprzez dołączenie jakichkolwiek zwykle stosowanych zaróbek, takich jak te nośniki uprzednio wyliczone, oraz zwykle 10-95% składnika aktywnego, to jest jednej lub więcej kompozycji według wynalazku, a bardziej korzystnie w stężeniu 25%-75%.
Do podawania aerozolowego kompozycje według wynalazku są korzystnie dostarczane w postaci subtelnego proszku, łącznie z surfaktantem i propelentem. Typowe składy procentowe kompozycji według wynalazku to 0,01%-20% wagowych, korzystnie 1%-10%. Surfaktant, oczywiście, musi być nietoksyczny i korzystnie rozpuszczalny w propelencie. Reprezentatywnymi środkami tego rodzaju są estry lub częściowe estry kwasów tłuszczowych, zawierające od 6 do 22 atomów węgla, takich kwasów jak kapronowy, oktanowy, laurynowy, palmitynowy, stearynowy, linolowy, linolenowy, oleostearynowy i oleinowy, z alifatycznym alkoholem wielowodorotlenowym lub jego cyklicznym bezwodnikiem. Mogą być używane estry mieszane, takie jak mieszane lub naturalne glicerydy. Surfaktanty mogą stanowić 0,1%-20% wagowych kompozycji, korzystnie 0,25-5%. Resztę kompozycji stanowi zwykle propelent. Może być również dodany nośnik, jeśli żądane, jak np. lecytyna do dostarczania donosowego.
Produkty według wynalazku mogą być w dodatku dostarczane jako układy depotowe, w postaci kapsułkowanej lub jako implanty, z użyciem technik dobrze znanych w dziedzinie. Podobnie produkty mogą być dostarczane pompą do danej tkanki.
Jakikolwiek z powyższych preparatów może być odpowiedni do leczenia i terapii według obecnego wynalazku, pod warunkiem, że składnik aktywny w preparacie nie jest dezaktywowany przez preparat i preparat jest fizjologicznie kompatybilny.
Poniższe przykłady są dostarczone w celu zilustrowania pewnych aspektów obecnego wynalazku i nie stanowią ograniczenia jego zakresu.
Przykłady eksperymentalne
I. Wprowadzenie
Zwłóknienie płuc jest typowym zaburzeniem, którego przyczyną, jak uważa się, są destruktywne działania produktów uwalnianych przez leukocyty. Aczkolwiek nabłonek oddechowy jest uszkadzany w trakcie rozwoju zwłóknienia, to jak uprzednio wykazano, same komórki nabłonka nie uczestniczą w tym procesie. Zbadaliś my działanie bleomycyny - leku, który wywołuje zwłóknienie płuc, na myszach ujawniających nieistotne mutacje pojedynczego genu podjednostki integryny (β6), że jest wyłącznie ograniczone do komórek nabłonka. Myszy β6-/- były niezwykle chronione przed zwłóknieniem indukowanym bleomycyną. Terapie nakierowane na tę integrynę mogłyby zatem dostarczyć nowe podejścia do leczenia tego na ogół nieuleczalnego zaburzenia.
Integryna ανβ6 jest ujawniana wyłącznie przez komórki nabłonka, z reguły podczas organogenezy i reakcji urazowej. Myszy β6-/- wykazywały nadmierne reakcje zapalne na urazy skórne i dróg oddechowych, ale rozwijały się i rozmnażały normalnie (Huang, X.Z., et al., J. Cell Biol., 133: 921-928 (1996)).
II. Dezaktywowanie genu podjednostki integryny β6 zabezpiecza myszy przed zwłóknieniem płuc indukowanym bleomycyną.
Toksyczność płucna bleomycyny była badana poprzez iniekcję dotchawiczną (0,03 jednostek (u) w 60 μ l solanki) lub zaróbki - solanki (60 μ l) myszom ulicznego typu (β 6+/+) i PS-/- w róż nym wieku i różnej pł ci szczepu 129SVEMS. Zwł óknienie p ł uc oceniano 15, 30 i 60 dnia po podaniu poprzez zbadanie morfologii płuc i poprzez pomiar zawartości hydroksyproliny oraz wskaźnika depozytu kolagenu. Zwłóknienie było znaczne u myszy typu ulicznego traktowanych bleomycyną po 30 dniach i postępo6
PL 201 716 B1 wało do 60 dnia (fig. 1A - 1B). W przeciwieństwie, morfologia płuc myszy β6-/- pozostawała prawie normalna w trakcie eksperymentu, jedynie z niewielkimi plamami zwłóknienia; zawartość płucna hydroksyproliny nie była istotnie różna w żadnym momencie od tej zmierzonej dla myszy traktowanych solanką. To odkrycie nie było szczególnym dla myszy 129 czystej rasy, ponieważ podobne wyniki otrzymano dla potomków po skrzyżowaniu 129 z C57B1/6. Te nieoczekiwane wyniki wskazały, że ekspresja integryny ανβ6 jest konieczna do indukowania zwłóknienia płuc.
W celu określenia roli ανβ6 we wczesnych stadiach zwłóknienia indukowanego bleomycyną, zbadaliśmy zawartość wody płucnej, markera obrzęku płucnego, będącej wynikiem zwiększonej przepuszczalności naczyniowej, 1, 5 i 15 dnia po podaniu bleomycyny lub solanki. U myszy typu ulicznego woda płucna zwiększała się do maksimum przez 5 dni i pozostawała zwiększona do 15 dni po podaniu bleomycyny (fig. 2). Jak i przed zwłóknieniem płuc, myszy β6-/- były w większości zabezpieczone przed tym wczesnym efektem bleomycyny, co dowodziło roli nabłonkowego ανβ6 przed rozwinięciem przecieku naczyniowego indukowanego bleomycyną.
Uprzednio podaliśmy, że myszy β6-/- wykazują nadmierne reakcje zapalne komórek monojądrowych na skórze i w drogach oddechowych (Huang, X.Z., et al., J. Cell Biol., 133: 921-928 (1996)). Indukowany bleomycyną uraz płuc i zwłóknienie płuc są powiązane i mogą zależeć od gromadzenia się i aktywacji limfocytów (Schrier, D.J., et al., Am. J. Pathol., 116: 270-278 (1984)). W celu określenia, czy odporność myszy β6-/- na uraz indukowany bleomycyną i zwłóknienie płuc jest wynikiem zmiany w gromadzeniu lub aktywacji limfocytów, zliczyliś my limfocyty CD4+ i CD8+ i oceniliś my aktywację limfocytów poprzez pomiar ekspresji receptora interleukiny-2 (CD25) w komórkach otrzymanych z rozdrobnionych pł uc myszy traktowanych solanką lub bleomycyną 5 i 15 dnia po podaniu. Zgodnie z naszym uprzednim doniesieniem więcej komórek CD4+, CD8+ i CD25+ było w płucach myszy β6-/niż zwierząt typu ulicznego. Bleomycyną indukuje olbrzymi przyrost ilości limfocytów ujawniających CD4 i CD8 i znaczący przyrost procentowego udziału limfocytów ujawniających CD25 (fig. 3), zarówno u myszy ulicznego typu jak i β 6-/-. Zarówno u myszy ulicznego typu jak i β 6-/- gromadzenie i aktywacja limfocytów w płucach były maksymalne w 5 dni po podaniu bleomycyny i zaczynały ustępować dnia 15. Nie ograniczając się do żadnej teorii, dane te sugerują, że brak gromadzenia lub aktywacji limfocytów u myszy β6-/- prawdopodobnie nie jest efektem, w wyniku którego są one chronione przed działaniem bleomycyny uszkadzającym płuca.
Oddziaływanie integryn z ich matrycowymi ligandami pośredniczy w szeregu ważnych funkcjach komórkowych, łącznie z proliferacją (Agrez, M., et al., J. Cell Blol., 127: 547-556 (1994)), przetrwaniem (Lukacs, N.W., et al., Eur. J. Immunol., 25: 245-251 (1995)) i ekspresją cytokin (Miyake, S., et al., J. Exp. Med., 177: 863-868 (1993)) i metaloproteinaz (Werb, Z., et al., J. Cell. Biol., 109: 877-889 (1989)). Podjednostka β6, jak doniesiono, tworzy pojedynczy heterodimer integryny, ανβ6 i jest ograniczona do komórek nabłonka. Równolegle z szybkim indukowaniem ekspresji ανβ6 w następstwie urazu nabłonka, lokalne stężenia co najmniej dwóch ligandów tej integryny (fibronektyny i tenascyny) zwiększają się. Uprzednio podaliśmy, że ekspresja ανβ6 odgrywa rolę w terminacji reakcji zapalnych komórek monojądrowych skóry i dróg oddechowych płuc (Huang, X.Z., et al., J. Cell. Biol., 133: 921928 (1996)). Wyniki tutaj podane wskazują, że ta integryna również odgrywa krytyczną rolę w indukowaniu urazu płuc i zwłóknienia płuc w reakcji na bleomycynę.
Komórki nabłonka oddechowego przez długi czas były uważane za składniki biernej bariery, oddzielającej inne komórki płuc od potencjalnie toksycznych składników wdychanego powietrza. Jednakże, na tej powierzchni rozdzielającej komórki są właściwie umiejscowione do inicjowania i pośredniczenia w lokalnych reakcjach na uraz. Ostatnie dowody sugerują, że komórki nabłonka oddechowego mają zdolność do syntetyzowania i wydzielania licznych protein, które mogą inicjować i pośredniczyć w reakcjach na uraz, łącznie z chemokinami (np. interleukina-8, GROa, GROy, RANTES, GMCSF, MlP-1a i MCP-1), innymi cytokinami (np. IL-6, IL-11 i IL-15) oraz czynnikami wzrostu (np. TGFe).
Nie ograniczając się do żadnej teorii, jednym możliwym mechanizmem według którego ανβ6 może uczestniczyć w rozwoju urazu płuc i zwłóknienia płuc, jest pośredniczenie w ekspresji jednej lub więcej z tych protein.
Obecne terapie przy zwłóknieniu płuc są na ogół niewłaściwe. Wyniki obecnego badania wskazują, że komórki nabłonka oddechowego i nabłonkowe integryny ανβ6 odgrywają istotną rolę w patogenezie miąższowego urazu płuc i zwłóknieniu płuc, i że terapie specyficznie wyznaczone do oddziaływania z funkcjonowaniem tej integryny są użyteczne w leczeniu tych na ogół nieuleczalnych chorób płuc.
PL 201 716 B1
III. Wytwarzanie przeciwciała blokującego
A. Wytwarzanie przeciwciała monoklonalnego
W celu wytworzenia przeciwciał przeciw ανβ6, myszy β6-/- immunizowano zarówno keratynocytami otrzymanymi z myszy typu ulicznego lub rekombinacyjnym wydzielonym ludzkim ανβ6 (Weinacker, et al., J. Biol. Chem., 269: 6940-6948 (1994)) w adiuwancie Freunda. Zebrano limfocyty śledzionowe myszy i łączono z komórkami szpiczaka zgodnie ze standardowymi procedurami. Komórki SW
480 e6-trasfekowane i szablonem użyto do skriningu supernatantu z użyciem cytometrii przepływowej. Przeciwciała, które rozpoznawały komórki SW480 e6-transfekowane, ale nie rozpoznawały transfekowanych szablonem były używane w dalszych eksperymentach.
B. Charakterystyka przeciwciał monoklonalnych
W celu wytworzenia przeciwciał przeciw mysiemu ανβ6, użyto wydzielonego ludzkiego ανβ6 i mysich keratynocytów jako immunogenów u myszy β6-/- pochodzenia 129/C57. Supernatanty z wygenerowanych hybrydom poddano skriningowi co do różnicującego wybarwiania dla komórek SW480 transfekowanych szablonem i β6. Uzyskane przeciwciała CSe6 i 10D5 wybarwiały zarówno ludzki β6 ujawniany na komórkach SW480 i mysi β6 na keratynocytach typu ulicznego. CSe6 był dalej charakteryzowany poprzez immunoprecypitację mysiego lizatu keratynocytowego znaczonego (35S). To przeciwciało wytrąca heterodimery o odpowiedniej masie cząsteczkowej, będące ανβ6, z keratynocytów β6+/+, ale nie z keratynocytów β6-/-, wskazując, że te przeciwciała są specyficzne dla integryny ανβ6.
Zbadaliśmy również Cse6 i 10D5 pod względem aktywności blokowania poprzez przeprowadzenie oznaczeń adhezji komórek z komórkami SW480 e6-transfekowanymi i mysimi keratynocytami na fibronektynie. Jednakże, tylko 10D5 wykazywał aktywność blokowania na mysich komórkach. 10d5 inhibitował migrację keratynocytów typu ulicznego na fibronektynie w tym samym stopniu, co obserwowany dla β6-/- keratynocytów.
C. Oznaczenie adhezji komórkowej
96-studzienkowe polistyrenowe płytki mikromiareczkowe do hodowli nie-tkankowych (Linbro/Titerek, Flow Laboratories, McLean, VA) powleczono witronektyną, fibronektyną lub kolagenem. 100 μl roztworu zawierającego różne ilości matrycy dodano do studzienek i inkubowano w 37°C przez 1 godzinę. Po inkubowaniu, studzienki spłukano PBS, następnie blokowano 1% BSA w pozbawionym surowicy DMEM w 37°C przez 30 minut. Studzienki kontrolne napełniono 1% BSA w DMEM. Komórki zebrano tak, jak przy oznaczeniu migracji i zawieszono ponownie w pozbawionym surowicy KGM, a następnie dodano do każdej powleczonej proteiną studzienki w obecności lub w nieobecności PMA. Do eksperymentów blokowania komórki inkubowano z przeciwciałami przez 5 minut w 4°C przed wyłożeniem na płytki. Płytki wirowano (wierzchem do góry), przy 10 x g przez 5 minut, a następnie inkubowano przez 1 godzinę w 34°C w wilgotnym 7% CO2. Komórki nie przylegające oddzielono przez wirowanie wierzchem na dół, przy 48 x g przez 5 minut. Komórki przylegające utrwalono 1% formaldehydem i wybarwiono 0,5% fioletem krystalicznym, a następnie studzienki spłukano PBS. Względna liczba komórek w każdej studzience została oceniona poprzez pomiar absorbancji przy 595 nm czytnikiem płytek (Microplate Reader, Bio-Rad).
D. Oznaczenie migracji
Oznaczenie migracji komórek przeprowadzono na płytkach ze studzienkami porowatymi powleczonych matrycą (pory 8 μm, Costar, Cambridge, MA). Spodnią powierzchnię membrany powleczono kolagenem (10 μg/ml), fibronektyną (10 μg/ml) lub witronektyną (10 μg/ml) w PBS na 1 godzinę w 37°C i blokowano 1% BSA. Pierwotne, hodowane keratynocyty zebrano trypsyną/EDTA i trypsynę dezaktywowano sojowym inhibitoren trypsyny. Komórki zawieszono w pozbawionym surowicy KGM i rozłożono na płytkach w górnej komorze z gęstością 3,6 x 104/studzienka w 100 μl środowiska, w obecności lub w nieobecności octanu mirystylu (PMA, 10 ng/ml). W eksperymentach inhibitowania, przeciwciała dodano do górnej i dolnej komory w obecności PMA. Po 6 godzinach inkubowania komórki utrwalono 2% formaldehydem i wybarwiono 0,5% fioletem krystalicznym w 1% formaldehydzie. Komórki z górnej komory usunięto, a komórki na spodniej powierzchni zliczono przy użyciu siatki 10x i silnego powiększenia (40x). Pola wielokrotne zliczono i uśredniono dla każdych badanych warunków.
IV. Myszy pozbawione β6 wykazują obniżoną zapadalność na przerzuty płucne.
Linia myszy transgenicznych, która spontanicznie rozwija raka piersi z przerzutami (myszy MMTV-mTAg) została skrzyżowana wsobnie z myszami pozbawionymi beta-6. Potomstwo myszy pozbawione β6 rozwijało szybko wzrastający pierwotny nowotwór sutka, ale wykazywało znacznie obniżoną zapadalność i rozszerzanie się przerzutów płucnych w porównaniu z wylęgiem, który ujawniał β6.
PL 201 716 B1
Immunohistochemia wykazywała, że β6 jest silnie ujawniany wokół brzegów przerzutowych zmian chorobowych. Sugeruje to, że β6 jest potrzebne do zmaksymalizowania przerzutów w tym modelu.
Ponieważ myszy pozbawione β6 mają przewlekłe zapalenie płuc, jest możliwe, że ograniczenie przerzutów wynika z występowania stanu zapalnego płuc oddziaływującego z rozwojem przerzutów. Przeprowadzono dwa eksperymenty w celu wyjaśnienia tego problemu:
1. Linia komórkowa ujawniająca β6 pochodząca od pierwotnego nowotworu została wstrzyknięta myszom syngenicznym, które były zarówno ulicznego typu lub pozbawione β6. Przerzuty płucne szybko pojawiły się w obu grupach myszy, sugerując, że występowanie stanu zapalnego u myszy pozbawionych β6 nie oddziaływuje z rozwojem komórek nowotworowych w płucach.
2. Linie komórkowe pochodzące z nowotworów myszy zarówno pozbawionych β6 lub typu ulicznego wstrzyknięto syngenicznym myszom typu ulicznego. Linie komórkowe typu ulicznego niezmiennie prowadziły do nowotworu płuc, podczas gdy linie komórkowe pozbawione β6 nie. Eksperyment ten sugeruje, że komórka nowotworowa β6 jest konieczna do zmaksymalizowania przerzutów w tym układzie.
Wszystkie odnośniki (obejmujące książki, artykuły, publikacje, opisy patentowe i zgłoszenia patentowe) tu cytowane są w całości niniejszym dołączone.
Aczkolwiek wynalazek został ujawniony w połączeniu z jego konkretnymi praktycznymi realizacjami, jest zrozumiałe, że możliwe są dalsze modyfikacje i obecne zgłoszenie obejmuje jakiekolwiek odmiany, zastosowania lub adaptacje wynalazku naśladujące jego podstawowe zasady, i obejmuje takie odejścia od obecnego wynalazku, jakie wynikają ze znanej lub typowej praktyki w dziedzinie, której wynalazek dotyczy, i jakie mogą mieć zastosowanie do zasadniczych cech powyżej przytoczonych oraz jakie mieszczą się w zakresie wynalazku i w granicach załączonych zastrzeżeń patentowych.
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowanie przeciwciała, które specyficznie wiąże się do integryny ανβ6 i blokuje wiązanie ligandu do integryny avp6 do wytwarzania leku do leczenia zwłóknienia wątroby u pacjenta.
- 2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że przeciwciało jest przeciwciałem monoklonalnym.
- 3. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że przeciwciało podaje się terapeutycznie.
- 4. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że przeciwciało podaje się profilaktycznie.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US5506097P | 1997-08-08 | 1997-08-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL201716B1 true PL201716B1 (pl) | 2009-05-29 |
Family
ID=21995323
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL341029A PL199014B1 (pl) | 1997-08-08 | 1998-08-07 | Przeciwciało monoklonalne specyficznie wiążące się do integryny αvß6, hybrydoma je wytwarzająca oraz zastosowanie przeciwciała |
| PL384372A PL201716B1 (pl) | 1997-08-08 | 1998-08-07 | Zastosowanie przeciwciała specyficznie wiążącego się do integryny alfa 6 w leczeniu zwłóknienia wątroby |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL341029A PL199014B1 (pl) | 1997-08-08 | 1998-08-07 | Przeciwciało monoklonalne specyficznie wiążące się do integryny αvß6, hybrydoma je wytwarzająca oraz zastosowanie przeciwciała |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US20020004482A1 (pl) |
| EP (3) | EP1504764B1 (pl) |
| JP (2) | JP2001513333A (pl) |
| KR (1) | KR100586202B1 (pl) |
| CN (1) | CN1267224A (pl) |
| AT (3) | ATE410179T1 (pl) |
| AU (1) | AU739283B2 (pl) |
| BR (1) | BR9814040A (pl) |
| CA (1) | CA2297736A1 (pl) |
| CY (2) | CY1110462T1 (pl) |
| CZ (1) | CZ299768B6 (pl) |
| DE (2) | DE69840113D1 (pl) |
| DK (2) | DK1930022T3 (pl) |
| EE (1) | EE04752B1 (pl) |
| ES (3) | ES2364703T3 (pl) |
| HU (1) | HU228900B1 (pl) |
| IL (2) | IL134288A0 (pl) |
| NZ (2) | NZ502546A (pl) |
| PL (2) | PL199014B1 (pl) |
| PT (3) | PT1930022E (pl) |
| RU (1) | RU2221589C2 (pl) |
| TR (2) | TR200202323T2 (pl) |
| WO (1) | WO1999007405A1 (pl) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5962643A (en) * | 1991-07-11 | 1999-10-05 | The Regents Of The University Of California | Integrin β subunit and uses thereof |
| ATE410179T1 (de) * | 1997-08-08 | 2008-10-15 | Univ California | Behandlung von leberfibrose mit anti-alpha v beta 6 integrin antikörpern |
| SK287328B6 (sk) * | 1999-04-22 | 2010-07-07 | Biogen Idec Ma Inc. | Použitie kompozície obsahujúcej homológ protilátky, ktorý je antagonistom interakcie medzi integrínom nesúcim podjednotku alfa4 a ligandom pre integrín nesúci podjednotku alfa4 |
| DE19929410A1 (de) * | 1999-06-26 | 2000-12-28 | Merck Patent Gmbh | Inhibitoren des Integrins avß6 |
| US20030114410A1 (en) | 2000-08-08 | 2003-06-19 | Technion Research And Development Foundation Ltd. | Pharmaceutical compositions and methods useful for modulating angiogenesis and inhibiting metastasis and tumor fibrosis |
| AUPR230500A0 (en) * | 2000-12-22 | 2001-01-25 | University Of Newcastle Research Associates Limited, The | A method of modulating map kinase mediated cellular activity and agents useful in same |
| WO2002088307A2 (en) * | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Eli Lilly And Company | Humanized antibodies |
| AU2003261071C1 (en) | 2002-03-13 | 2008-12-11 | Biogen Idec Ma Inc. | Anti-AlphavBeta6 antibodies |
| CA2481922A1 (en) * | 2002-04-12 | 2003-10-23 | Raven Biotechnologies, Inc. | Antibodies that bind to integrin alpha-v-beta-6 and methods of use thereof |
| RS52918B (en) * | 2004-04-02 | 2014-02-28 | The Regents Of The University Of California | PROCEDURES AND MIXTURES FOR TREATMENT AND PREVENTION OF DISEASES ASSOCIATED WITH ALFA V BETA 5 INTEGRINE |
| CN102875681A (zh) | 2005-07-08 | 2013-01-16 | 拜奥根Idec马萨诸塞公司 | 抗-αvβ6抗体及其用途 |
| US8795668B2 (en) * | 2005-12-23 | 2014-08-05 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods for treating pulmonary fibrosis |
| JP2009542810A (ja) | 2006-07-10 | 2009-12-03 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | Ｓｍａｄ４欠損癌の増殖を阻害するための組成物および方法 |
| AU2007348941B2 (en) * | 2006-08-03 | 2011-08-04 | Medimmune Limited | Antibodies directed to alphaVbeta6 and uses thereof |
| EP2087008A1 (en) * | 2006-10-19 | 2009-08-12 | The Regents of the University of California | TREATMENT AND PREVENTION OF CHRONIC ASTHMA USING ANTAGONISTS OF INTEGRIN alphaVbeta6 |
| AU2008299784B9 (en) | 2007-08-02 | 2015-06-18 | Gilead Biologics, Inc. | LOX and LOXL2 inhibitors and uses thereof |
| KR101046317B1 (ko) * | 2008-07-04 | 2011-07-05 | 이종대 | 조력발전 방법 및 그 장치 |
| US9107935B2 (en) | 2009-01-06 | 2015-08-18 | Gilead Biologics, Inc. | Chemotherapeutic methods and compositions |
| IN2012DN00303A (pl) | 2009-07-24 | 2015-05-08 | Univ California | |
| EP2470218A4 (en) * | 2009-08-21 | 2013-04-03 | Gilead Biologics Inc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF PULMONARY FIBROGEN DISORDERS |
| RU2012110585A (ru) | 2009-08-21 | 2013-09-27 | Джилид Байолоджикс, Инк. | Каталичические домены лизилоксидазы и loxl2 |
| AU2011212830B2 (en) * | 2010-02-04 | 2014-05-22 | Gilead Biologics, Inc. | Antibodies that bind to lysyl oxidase-like 2 (LOXL2) and methods of use therefor |
| EP2814509B1 (en) | 2012-02-17 | 2018-05-16 | Seattle Genetics, Inc. | Antibodies to integrin v 6 and use of same to treat cancer |
| WO2014144466A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Biogen Idec Ma Inc. | Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof |
| WO2014143739A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Biogen Idec Ma Inc. | Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof |
| EP2784511A1 (en) | 2013-03-27 | 2014-10-01 | Universität Zürich | Integrin alpha-v-beta6 for diagnosis/prognosis of colorectal carcinoma |
| JP6104312B2 (ja) * | 2014-06-19 | 2017-03-29 | 日東電工株式会社 | 組織再生促進剤 |
| KR20200044066A (ko) | 2017-08-22 | 2020-04-28 | 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 | 항-알파(v)베타(6) 항체를 함유하는 약제학적 조성물 및 투약 요법 |
| WO2021113697A1 (en) | 2019-12-05 | 2021-06-10 | Seagen Inc. | Anti-avb6 antibodies and antibody-drug conjugates |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
| US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
| US5019369A (en) | 1984-10-22 | 1991-05-28 | Vestar, Inc. | Method of targeting tumors in humans |
| US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
| US5654270A (en) * | 1988-06-28 | 1997-08-05 | La Jolla Cancer Research Foundation | Use of fibromodulin to prevent or reduce dermal scarring |
| EP0449973B1 (en) | 1988-12-20 | 1996-03-20 | La Jolla Cancer Research Foundation | Polypeptide-polymer conjugates active in wound healing |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| US5514788A (en) * | 1993-05-17 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide modulation of cell adhesion |
| US5962643A (en) | 1991-07-11 | 1999-10-05 | The Regents Of The University Of California | Integrin β subunit and uses thereof |
| US5770565A (en) * | 1994-04-13 | 1998-06-23 | La Jolla Cancer Research Center | Peptides for reducing or inhibiting bone resorption |
| US6492332B1 (en) * | 1995-12-12 | 2002-12-10 | Omeros Corporation | Irrigation solution and methods for inhibition of tumor cell adhesion, pain and inflammation |
| ES2202336T3 (es) * | 1994-12-20 | 2004-04-01 | Merck Patent Gmbh | Anticuerpo monoclonal contra la integrina alfa-v. |
| ATE410179T1 (de) * | 1997-08-08 | 2008-10-15 | Univ California | Behandlung von leberfibrose mit anti-alpha v beta 6 integrin antikörpern |
-
1998
- 1998-08-07 AT AT04022921T patent/ATE410179T1/de active
- 1998-08-07 ES ES08004714T patent/ES2364703T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 CZ CZ20000413A patent/CZ299768B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 AU AU87743/98A patent/AU739283B2/en not_active Expired
- 1998-08-07 PL PL341029A patent/PL199014B1/pl unknown
- 1998-08-07 ES ES98939278T patent/ES2235350T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 ES ES04022921T patent/ES2311131T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 IL IL13428898A patent/IL134288A0/xx unknown
- 1998-08-07 CN CN98807892A patent/CN1267224A/zh active Pending
- 1998-08-07 EE EEP200000068A patent/EE04752B1/xx unknown
- 1998-08-07 TR TR2002/02323T patent/TR200202323T2/xx unknown
- 1998-08-07 AT AT08004714T patent/ATE511850T1/de active
- 1998-08-07 JP JP2000506994A patent/JP2001513333A/ja not_active Withdrawn
- 1998-08-07 HU HU0003547A patent/HU228900B1/hu unknown
- 1998-08-07 CA CA002297736A patent/CA2297736A1/en not_active Abandoned
- 1998-08-07 EP EP04022921A patent/EP1504764B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 PL PL384372A patent/PL201716B1/pl unknown
- 1998-08-07 NZ NZ502546A patent/NZ502546A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 DK DK08004714.5T patent/DK1930022T3/da active
- 1998-08-07 EP EP98939278A patent/EP0996460B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 DE DE69840113T patent/DE69840113D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 US US09/130,870 patent/US20020004482A1/en not_active Abandoned
- 1998-08-07 EP EP08004714A patent/EP1930022B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 NZ NZ515955A patent/NZ515955A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 RU RU2000105905/14A patent/RU2221589C2/ru active
- 1998-08-07 PT PT08004714T patent/PT1930022E/pt unknown
- 1998-08-07 DK DK04022921T patent/DK1504764T3/da active
- 1998-08-07 DE DE69828614T patent/DE69828614T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 AT AT98939278T patent/ATE286742T1/de active
- 1998-08-07 BR BR9814040-0A patent/BR9814040A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-08-07 KR KR1020007001337A patent/KR100586202B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 PT PT04022921T patent/PT1504764E/pt unknown
- 1998-08-07 TR TR2000/00374T patent/TR200000374T2/xx unknown
- 1998-08-07 WO PCT/US1998/016439 patent/WO1999007405A1/en active Application Filing
- 1998-08-07 PT PT98939278T patent/PT996460E/pt unknown
-
1999
- 1999-08-02 US US09/365,695 patent/US6316601B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-01-30 IL IL134288A patent/IL134288A/en not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-27 US US09/818,416 patent/US6692741B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-01-09 US US10/754,435 patent/US7150871B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-11-13 US US11/559,172 patent/US7544358B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-11 JP JP2008206826A patent/JP2009001587A/ja active Pending
-
2009
- 2009-01-08 CY CY20091100011T patent/CY1110462T1/el unknown
-
2011
- 2011-08-26 CY CY20111100822T patent/CY1111792T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7544358B2 (en) | Treatment of acute lung injury, fibrosis and metastasis with antagonists of αvβ6 | |
| US6475488B1 (en) | Methods of inhibiting angiogenesis and ameliorating cancer by using superfibronectin | |
| JP2001513333A5 (pl) | ||
| US20020068703A1 (en) | Methods of inhibiting phagocytosis | |
| PT1150714E (pt) | Métodos para inibir crescimento de tumor cerebral | |
| SK287328B6 (sk) | Použitie kompozície obsahujúcej homológ protilátky, ktorý je antagonistom interakcie medzi integrínom nesúcim podjednotku alfa4 a ligandom pre integrín nesúci podjednotku alfa4 | |
| US7824680B2 (en) | Methods for inhibiting angiogenesis | |
| BG63622B1 (bg) | Супресия на растежа на туморни клетки посредствомсиндекан- 1 ектоучастък | |
| US6537551B2 (en) | Anti-tumor agent comprising salmosin as an active ingredient | |
| MXPA00001196A (es) | Tratamiento de lesion agudadel pulmon y de la fibrosis con antagonistas de alfavbeta6 | |
| UA73300C2 (en) | Use of composition containing homolog of antibody antagonizing interaction between integrin with alpha-4 subunit and its ligand for treating fibrosis | |
| ZA200106069B (en) | Methods for inhibiting brain tumor growth by using selected integrin antagonists. |