RU2221589C2 - Способ лечения острого повреждения легких и способ лечения фиброза, моноклональное антитело, гибридома атсс нв12382 - Google Patents
Способ лечения острого повреждения легких и способ лечения фиброза, моноклональное антитело, гибридома атсс нв12382 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2221589C2 RU2221589C2 RU2000105905/14A RU2000105905A RU2221589C2 RU 2221589 C2 RU2221589 C2 RU 2221589C2 RU 2000105905/14 A RU2000105905/14 A RU 2000105905/14A RU 2000105905 A RU2000105905 A RU 2000105905A RU 2221589 C2 RU2221589 C2 RU 2221589C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- αvβ6
- mice
- fibrosis
- treating
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 7
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 title claims description 14
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 title claims description 12
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 title description 4
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 claims abstract description 8
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims description 23
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 claims description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 5
- 108010021309 integrin beta6 Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 39
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 25
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 25
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 24
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 17
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 15
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 15
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 8
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 6
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 4
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 3
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 3
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 3
- 230000008458 response to injury Effects 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- FTLYMKDSHNWQKD-UHFFFAOYSA-N (2,4,5-trichlorophenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl FTLYMKDSHNWQKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 102000007000 Tenascin Human genes 0.000 description 2
- 108010008125 Tenascin Proteins 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 2
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- -1 elixirs Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 2
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008817 pulmonary damage Effects 0.000 description 2
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 229940085605 saccharin sodium Drugs 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 238000011714 129 mouse Methods 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 description 1
- 108010014419 Chemokine CXCL1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000020060 Increased inflammatory response Diseases 0.000 description 1
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000017347 Integrin beta-6 subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 description 1
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 210000002588 alveolar type II cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003092 anti-cytokine Effects 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 201000005008 bacterial sepsis Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000003352 cell adhesion assay Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002281 colonystimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003503 early effect Effects 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 230000008378 epithelial damage Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009501 film coating Methods 0.000 description 1
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000000576 food coloring agent Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 108700016226 indium-bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000013546 insoluble monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000010232 migration assay Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000023578 negative regulation of cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000013152 negative regulation of cell migration Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002889 oleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000007047 pulmonary toxicity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 238000009495 sugar coating Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2839—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the integrin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70546—Integrin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к терапии и пульмонологии, и касается лечения острого повреждения легких и фиброза. Для этого предлагают вводить пациенту терапевтическую дозу антитела, специфически связывающего αvβ6. Предложена также гибридома - продуцент указанного антитела. Способ обеспечивает подавление интегринового рецептора αvβ6, что приводит к купированию процессов фиброза и также явлений острого повреждения легких. 4 с. и 8 з.п.ф-лы, 3 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области медицины, в частности касается способов лечения острого повреждения легких и фиброза с использованием антагонистов αvβ6.
Данная работа частично поддерживается грантами NIH (Национального института здравоохранения) HL47412 и HL53949. Правительство США может иметь определенные права на данное изобретение.
Изобретение относится к области медицины, в частности касается способов лечения острого повреждения легких и фиброза с использованием антагонистов αvβ6.
Данная работа частично поддерживается грантами NIH (Национального института здравоохранения) HL47412 и HL53949. Правительство США может иметь определенные права на данное изобретение.
Уровень техники
Интегрины представляют собой гетеродимерные рецепторы клеточной адгезии, состоящие из двух субъединиц, α и β. Интегрин αvβ6 представляет собой рецептор фибронектина и тенасцина, экспрессирующийся в основном в эпителиальных клетках. В здоровых тканях взрослых приматов редко определяются мРНК и белок β6, хотя β6 экспрессируется во время развития эмбриона, заживления ран и в некоторых эпителиальных опухолях. Когда β6-субъединица экспрессируется в линии клеток карциномы толстой кишки, в которой она в норме отсутствует, экспрессия субъединицы обусловливает повышенную способность к пролиферации. Карбоксильный концевой участок из 11 аминокислот, уникальный для β6-субъединицы, является необходимым для активности интегрина αvβ6 в отношении повышения пролиферации (см. статью Agrez и соавт., J. Cell Biol., 127: 547-556, 1994). Экспрессия β6 индуцируется в альвеолярных эпителиальных клетках типа II при повреждениях, вызываемых инъекцией живых бактерий, и экспрессию β6 наблюдают в локальных участках субклинического воспаления, а также в ряде клинических образцов, полученных от пациентов с хроническим или острым воспалением легких или почек (см. статью Breuss и соавт., J. Cell Sci., 108:2241-2251, 1995).
Интегрины представляют собой гетеродимерные рецепторы клеточной адгезии, состоящие из двух субъединиц, α и β. Интегрин αvβ6 представляет собой рецептор фибронектина и тенасцина, экспрессирующийся в основном в эпителиальных клетках. В здоровых тканях взрослых приматов редко определяются мРНК и белок β6, хотя β6 экспрессируется во время развития эмбриона, заживления ран и в некоторых эпителиальных опухолях. Когда β6-субъединица экспрессируется в линии клеток карциномы толстой кишки, в которой она в норме отсутствует, экспрессия субъединицы обусловливает повышенную способность к пролиферации. Карбоксильный концевой участок из 11 аминокислот, уникальный для β6-субъединицы, является необходимым для активности интегрина αvβ6 в отношении повышения пролиферации (см. статью Agrez и соавт., J. Cell Biol., 127: 547-556, 1994). Экспрессия β6 индуцируется в альвеолярных эпителиальных клетках типа II при повреждениях, вызываемых инъекцией живых бактерий, и экспрессию β6 наблюдают в локальных участках субклинического воспаления, а также в ряде клинических образцов, полученных от пациентов с хроническим или острым воспалением легких или почек (см. статью Breuss и соавт., J. Cell Sci., 108:2241-2251, 1995).
Huang и соавт. (J. Cell Biol., 133:921-928, 1996) обнаружили, что у мышей, гомозиготных по нулевой мутации в гене, кодирующем β6-субъединицу, было ювенильное облысение, связанное с инфильтрацией макрофагов в кожу, и у них накапливались активированные лимфоциты вокруг проводящих дыхательных путей в легких.
Фиброз легких представляет собой обычное нарушение, обусловленное, как полагают, деструктивными эффектами продуктов, выделяющихся из лейкоцитов (см. , например, статью Marshall и соавт., Int. J. Biochem. Cell Bio., 29: 107-120, 1997). Индуцированные блеомицином повреждение легких и фиброз легких ассоциированы и могут зависеть от рекрутинга и активации лимфоцитов (см. статью Schrier D.J. и соавт., Am. J. Pathol., 116:270-278, 1984). Среди предлагаемых способов терапии повреждений паренхимы легких и фиброза легких находится применение "антицитокиновых" терапевтических подходов (см. статью Coker и соавт., Thorax, 52(2):294-296, 1997).
Однако современные способы терапии острого повреждения легких и фиброза легких являются в значительной мере неадекватными (см., например, King и соавт. "Идиопатический фиброз легких и другие интерстициальные заболевания легких неизвестной этиологии" (Idiopathyic Pulmonary Fibrosis and other Interstitial Lung Diseases of Unknown Etiology) в Руководстве по терапии дыхательной системы (Textbook of Respiratory Medicine) под ред. Murray и Nadel, W. B. Saunders, Philadelphia, PA, стр. 1827-1839, 1994). Таким образом, существует необходимость в способах терапии острого легочного повреждения и фиброза легких. Настоящее изобретение направлено на решение данной задачи и других проблем.
Сущность изобретения
Одним объектом изобретения является способ лечения острого повреждения легких у пациента, предусматривающий введение пациенту терапевтической дозы антагониста αvβ6. В изобретении представлены также способы ингибирования метастазов в легких, предусматривающие введение пациенту терапевтической дозы антагониста αvβ6.
Следующим объектом изобретения является способ лечения фиброза у пациента, который включает введение пациенту терапевтической дозы антагониста αvβ6.
Другим объектом изобретения является моноклональное антитело, продуцируемое гибридомой АТСС НВ12382.
Одним объектом изобретения является способ лечения острого повреждения легких у пациента, предусматривающий введение пациенту терапевтической дозы антагониста αvβ6. В изобретении представлены также способы ингибирования метастазов в легких, предусматривающие введение пациенту терапевтической дозы антагониста αvβ6.
Следующим объектом изобретения является способ лечения фиброза у пациента, который включает введение пациенту терапевтической дозы антагониста αvβ6.
Другим объектом изобретения является моноклональное антитело, продуцируемое гибридомой АТСС НВ12382.
Еще одним объектом изобретения является гибридома АТСС НВ12382.
Перечень чертежей и иных материалов
На фиг. 1.1 представлен график сравнения содержания гидроксипролина в легких у мышей, экспрессирующих нулевую мутацию гена субъединицы интегрина β6, с контрольными мышами в присутствии блеомицина (blm) или физиологического раствора (sal).
На фиг. 1.1 представлен график сравнения содержания гидроксипролина в легких у мышей, экспрессирующих нулевую мутацию гена субъединицы интегрина β6, с контрольными мышами в присутствии блеомицина (blm) или физиологического раствора (sal).
Фиг. 1.2 представляет собой фотографию трехцветного окрашивания срезов легких при низком увеличении, которая демонстрирует непроницаемое накопление коллагенового экстрацеллюларного матрикса в легких леченных блеомицином мышей дикого типа (β6+/+), но не у мышей β6-/- через 30 дней после лечения.
На фиг. 2 представлен график сравнения повышения содержания воды в легких у мышей дикого типа (β6+/+) относительно мышей β6-/- в присутствии блеомицина (blm) или физиологического раствора (sal).
На фиг. 3 представлен график сравнения рекрутинга лимфоцитов у мышей дикого типа (β6+/+) и мышей β6-/- после введения блеомицина (blm) или физиологического раствора (sal).
Сведения, подтверждающие возможность использования изобретения
Настоящее изобретение представляет способы и композиции для лечения острого легочного повреждения, такого как, но не ограничиваясь, повреждение легких в результате бактериального сепсиса, геморрагического шока, вдыхания токсических веществ и индуцированных блеомицином и другими лекарственными веществами повреждений легких. Кроме того, композиции, соответствующие изобретению, используют при лечении фиброза в эпителиальных органах, таких как легкие, печень, почки, мочевой пузырь и пищевод.
Настоящее изобретение представляет способы и композиции для лечения острого легочного повреждения, такого как, но не ограничиваясь, повреждение легких в результате бактериального сепсиса, геморрагического шока, вдыхания токсических веществ и индуцированных блеомицином и другими лекарственными веществами повреждений легких. Кроме того, композиции, соответствующие изобретению, используют при лечении фиброза в эпителиальных органах, таких как легкие, печень, почки, мочевой пузырь и пищевод.
Данные композиции могут быть прописаны с профилактической или терапевтической целью пациентам с симптомами острого повреждения легких или фиброза, или при их риске. Например, пациентов, подвергшихся воздействию токсического аспирата (средства, применяемого при вдыхании), вероятно, следовало бы лечить после данного воздействия, тогда как пациент, получающий блеомицин, может проходить профилактическое или терапевтическое лечение. Обычно композиции, соответствующие данному изобретению, вводят ежедневно в период 1-5 дней, хотя пациенты с развившимся фиброзом легких, прогрессирующим заболеванием, могут получать терапевтические дозы в периоды от нескольких месяцев до нескольких лет. Как используют в данном контексте, "терапевтическая доза" представляет собой дозу, которая предупреждает, облегчает, ослабляет или иным образом снижает остроту симптомов у пациента.
В некоторых вариантах осуществления изобретения представлены антагонисты αvβ6. Данные антагонисты включают, но не ограничиваются антителами, которые специфически связывают β6; антителами, которые специфически связывают лиганд αvβ6; лигандами для αvβ6; антисмысловыми нуклеиновыми кислотами и пептидными, непептидными и пептидомиметическими аналогами таких лигандов.
Антитела могут быть синтетическими, моноклональными или поликлональными и могут быть получены с помощью известных в уровне техники способов. В предпочтительном варианте осуществления антагонист представляет собой антитело, которое специфически распознает цитоплазматический участок субъединицы β6 (см., например, статью Weinacker и соавт., J. Cell Bio., 269:1-9, 1994). Для терапевтического применения "человеческие" моноклональные антитела, имеющие человеческие константный и вариабельный участки, часто являются предпочтительными в плане минимизации иммунного ответа пациента в отношении антитела. Данные антитела могут быть получены путем иммунизации трансгенных животных, которые несут гены человеческого иммуноглобулина. См. статью Jakobovits и соавт. , Ann. NY Acad. Sci., 764:525-535 (1995). В связи с синтетическими и полусинтетическими антителами данные термины предназначены для того, чтобы охватывать, но не ограничиваются фрагментами антител, антителами с переключенным изотипом, гуманизированными антителами (например, типа мышь-человек, человек-мышь и т.п.), гибридами, антителами, имеющими множество специфичностей, полностью синтетическими молекулами, подобными антителам и т.п.
Как обсуждают ниже, антитела могут быть отобраны по способности блокировать связывание лиганда с αvβ6 и/или другим свойствам, таким как способность защищать in vivo от индуцированного блеомицином фиброза легких. Примером моноклонального антитела против β6 является 10D5 (депозит АТСС No HB12382, депонированный 6 августа 1997 г.).
В других вариантах осуществления изобретения используют агонисты, представленные пептидами, полипептидами, белками или пептидомиметиками, разработанными в качестве лигандов для αvβ6 на основе наличия домена клеточной адгезии аргинин-глицин-аспарагиновая кислота (RGD). Примеры конструирования таких молекул, как лиганды для интегринов, приведены, в частности, в работах Pierschbacher и соавт. , J. Cell. Biochem., 56:150-154 (1994); Ruoslahti, Ann. Rev. Cell. Dev. Biol., 12:697-715 (1996); Chorev и соавт., Biopolymers, 37: 367-375 (1995); Pasqualini и соавт. , J. Cell. Biol., 130:1189-1196 (1995), и Smith и соавт., J. Biol. Chem., 269:32788-32795 (1994).
В некоторых вариантах осуществления изобретения антисмысловые молекулы нуклеиновых кислот используют в качестве антагонистов αvβ6. Антисмыловые молекулы нуклеиновых кислот комплементарны олигонуклеотидным нитям нуклеиновых кислот, сконструированных для связывания специфической последовательности нуклеотидов с целью ингибирования образования белка-мишени. Нуклеотидная последовательность β6-субъединицы интегрина была описана в заявке USSN 07/728215, поданной 11 июля 1991 г., включенной в данный контекст в виде ссылки во всей ее полноте. Данные агенты могут быть использованы в виде монокомпонента или в комбинации с другими антагонистами. Антисмысловой антагонист может быть получен как антисмысловой олигонуклеотид, такой как РНК (см. , например, статью Murayama и соавт., Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 7: 109-114, 1997). Антисмысловые гены могут быть также получены в вирусном векторе, таком, например, как в вирусе гепатита В (см., например, статью Ji и соавт., J. Viral. Hepat., 4:167-173, 1997); в аденоассоциированном вирусе (см. , например, статью Xiao и соавт., Brain Res., 756:76-83, 1997) или в других системах, включающих, но не ограниченных системой доставки генов HVJ(вируc Sеndai)-липосома (см., например, статью Kaneda и соавт., Ann. NY Acad. Sci., 811:299-308, 1997); "пептидным вектором" (см., например, статью Vidal и соавт., CR Acad. Sci. III, 32:279-287, 1997); доставкой в виде гена в эписомном или плазмидном векторе (см., например, статьи Cooper и соавт., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:6450-6455, 1997), Yew и соавт., Hum. Gene Ther. , 8:575-584, 1997); доставкой в виде гена в агрегате пептид-ДНК (см., например, статью Niidome и соавт., J. Biol. Chem., 272:15307-15312, 1997), доставкой в виде депротеинизированной ДНК(см., например, патенты США 5580859 и 5589466) и в липидных векторных системах (см., например, статью Lee и соавт., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 14:173-206, 1997).
Скрининг кандидатных антагонистов αvβ6 может быть проведен по функции рядом способов, известных в уровне техники и/или описанных в данной заявке, таких как защита от индуцированного блеомицином фиброза на модели на мышах, ингибирование пролиферации опухолевых клеток (см. статью Agrez и соавт., J. Cell Bio., 127:547-556, 1994) и ингибирование миграции клеток и/или ингибирование клеточной адгезии (см. раздел Экспериментальные примеры).
Множество подходящих препаратов антагонистов, соответствующих изобретению, может быть обнаружено в фармакологическом справочнике, известном всем фармацевтам - "Фармацевтические науки" Ремингтона (Remington's Pharmaceutical Sciences), (15-e издание, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1975), в частности в главе 87 справочника, написанной Blaug, Seymour. Данные препараты включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, безводные адсорбирующие основы, эмульсии типа масло в воде или вода в масле, эмульсии типа карбовакс (полиэтиленгликоли различных молекулярных масс), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс.
Количества активного ингредиента, необходимые для эффективной терапии, будут зависеть от многих различных факторов, включая средства введения, участок-мишень, физиологическое состояние пациента и другие применяемые лекарственные препараты. Таким образом, лечебные дозы должны быть определены с целью оптимизации безопасности и эффективности. Обычно дозами, применяемыми in vitro, можно успешно руководствоваться в плане количеств активных ингредиентов, используемых для введения in situ. Тестирование на животных эффективных доз для лечения определенных нарушений будет служить следующим критерием для предсказания дозы для человека. Различные мнения обсуждаются, например, в монографии Goodman и Gilman "Фармакологические основы терапии" (Pharmacological Basis of Therapeutics), 7-ое изд., MacMillan Publishing Company, New York, (1985) и в справочнике "Фармацевтические науки" Ремингтона (Remington's Pharmaceutical Sciences), (18-oe издание, Mack Publishing Co, Easton, Penn., 1990). Способы введения обсуждаются в данном контексте, включая пероральное, внутривенное, внутрибрюшинное, внутримышечное, чрескожное, назальное, ионофоретическое введение и т.п.
Композиции, соответствующие изобретению, могут вводиться в различных дозированных лекарственных формах в зависимости от способа введения. Например, дозированные лекарственные формы, пригодные для перорального введения, включают твердые лекарственные формы, такие как порошок, таблетки, пилюли, капсулы и драже, и жидкие лекарственные формы, такие как эликсиры, сиропы и суспензии. Активные ингредиенты могут также вводиться парентерально в стерильных жидких лекарственных формах. Желатиновые капсулы содержат активный ингредиент и в качестве неактивных ингредиентов носители в виде порошка, такие как глюкоза, лактоза, сахароза, маннит, крахмал, целлюлоза или производные целлюлозы, стеарат магния, стеариновая кислота, натриевая соль сахарина, тальк, карбонат магния и т.п. Примерами дополнительных неактивных ингредиентов, которые могут быть добавлены для получения желательного цвета, вкуса, стабильности, буферной емкости, дисперсии или других известных желательных признаков, являются красный оксид железа, силикагель, лаурилсульфат натрия, диоксид титана, пищевой белый краситель и т.п. Подобные наполнители могут быть использованы для получения прессованных таблеток. Как таблетки, так и капсулы можно производить как продукты с задержанным выходом для получения непрерывного выхода лекарственного вещества в течение нескольких часов. Прессованные таблетки могут иметь сахарную оболочку или оболочку из пленки, чтобы замаскировать какой-либо неприятный вкус и защитить таблетку от воздействия атмосферных условий, или энтеросолюбильную оболочку для избирательного разрушения в желудочно-кищечном тракте. Жидкие лекарственные формы для перорального применения могут содержать окрашивающий и придающий вкус и запах компонент для повышения привлекательности для пациента.
Концентрация композиций, соответствующих изобретению, в фармацевтических препаратах может широко варьировать, т.е. от менее чем приблизительно 0,1%, обычно около 2% или, по меньшей мере, приблизительно 2% до таких больших значений, как 20-50% или более по массе, и должна выбираться прежде всего по объемам жидкости, вязкости и т.п. в соответствии с определенным выбранным способом введения.
Композиции, соответствующие изобретению, могут также вводиться с помощью липосом. Липосомы включают эмульсии, пены, мицеллы, нерастворимые монослои, жидкие кристаллы, фосфолипидные дисперсии, ламеллярные слои и т.п. В данных препаратах предназначенную для доставки композицию, соответствующую изобретению, инкорпорируют в липосому как ее часть, в виде монокомпонента или в сочетании с молекулой, которая связывает желаемую мишень, такой как антитело, или с другими терапевтическими или имуногенными композициями. Таким образом, липосомы, либо наполненные, либо "декорированные" желаемой композицией, соответствующей изобретению, могут быть доставлены системно или могут быть направлены на ткань, представляющую интерес, в которую липосомы могут затем доставить выбранные терапевтические/ иммуногенные пептидные композиции.
Липосомы для использования в изобретении формируют из стандартных образующих пузырек липидов, которые в основном включают нейтральные и отрицательно заряженные фосфолипиды и стерол, такой как холестерин. При выборе липидов в основном руководствуются соображениями относительно, например, размера липосом, кислотной лабильности и стабильности липосом в кровотоке. Существует ряд способов приготовления липосом, описанных, например, в статье Szoka и соавт. , Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9:467 (1980), и патентах США 4235871, 4501728, 4837028 и 5019369, включенных в данный контекст в виде ссылки.
Суспензия липосом, содержащая композицию, соответствующую изобретению, может быть введена внутривенно, местно, наружно и т.п. в дозе, которая изменяется в соответствии inter alia со способом введения, доставляемой композицией, соответствующей изобретению, и стадией заболевания, которое лечат.
Для твердых композиций могут быть использованы традиционные нетоксичные твердые носители, которые включают, например, маннит, лактозу, крахмал, стеарат магния, натриевую соль сахарина, тальк, целлюлозу, глюкозу, сахарозу, карбонат магния и т.п. фармацевтического качества. Для перорального введения фармацевтически приемлемую нетоксичную композицию получают путем включения каких-либо обычно используемых наполнителей, таких как вышеперечисленные носители, и в основном 10-95% активного ингредиента, как в одной или более композиций, соответствующих изобретению, и более предпочтительно в концентрации 25-75%.
Для аэрозольного введения композиции, соответствующие изобретению, предпочтительно применяют в мелко измельченной форме вместе с поверхностно-активным веществом и газом-вытеснителем (пропеллантом). Типичным процентным содержанием композиций, соответствующих изобретению, является 0,01-20% по массе, предпочтительно 1-10%. Поверхностно-активное вещество должно быть, конечно, нетоксичным и растворимым в пропелланте. Представителями таких агентов являются сложные эфиры или частичные сложные эфиры жирных кислот, содержащих от 6 до 22 атомов углерода, такие как капроновая, октановая, лауриновая, пальмитиновая, стеариновая, линолевая, линоленовая, олеостеариновая и олеиновая кислоты с алифатическим многоатомным спиртом или его циклическим ангидридом. Могут быть использованы смешанные сложные эфиры, такие как смешанные или природные глицериды. Поверхностно-активное вещество может составлять 0,1-20% от массы композиции, предпочтительно 0,25-5%. Баланс композиции обычно обеспечивает пропеллант. Возможно также включение носителя, если это желательно, как, например, при использовании лецитина для интраназальной доставки.
Конструкции, соответствующие изобретению, могут дополнительно доставляться в системе депо-типа, инкапсулированной форме или в имплантате известными в уровне техники способами. Аналогично конструкции могут быть доставлены с помощью насоса в представляющую интерес ткань.
Любой из вышеописанных составов может подходить для способов лечения и терапевтических средств, соответствующих данному изобретению, при условии, что активный агент в составе композиции не инактивируется составом и состав является физиологически совместимым.
Следующие примеры представлены для иллюстрации некоторых аспектов данного изобретения и не предназначаются для ограничения его объема.
Экспериментальные примеры
I. Введение.
I. Введение.
Фиброз легких представляет собой обычное нарушение, которое, как полагают, обусловлено деструктивными действиями продуктов, выделяемых лейкоцитами. Хотя респираторный эпителий повреждается при развитии фиброза, ранее не показано, что сами эпителиальные клетки участвуют в данном процессе. Мы исследуем эффекты блеомицина, лекарства, которое, как известно, вызывает фиброз легких, на мышах, экспрессирующих нулевую мутацию одного гена субъединицы интегрина (β6), который полностью ограничен эпителиальными клетками. Мыши β6-/- со всей очевидностью защищены от индуцированного блеомицином фиброза. Терапевтические средства с направленностью на этот интегрин могут, следовательно, обеспечить новые подходы к лечению данного в большинстве случаев неизлечимого нарушения.
Интегрин αvβ6 экспрессируется исключительно на эпителиальных клетках в основном во время органогенеза и в ответ на повреждения. Мыши β6-/- проявляют повышенные воспалительные реакции на повреждения кожи и дыхательных путей, но нормально развиваются и размножаются (см. статью Huang X.Z. и соавт. , J. Cell Biol., 133:921-925, 1996).
II. Инактивация гена субъединицы интегрина β6 защищает мышей от индуцированного блеомицином фиброза легких.
Легочную токсичность блеомицина (0,03 единицы (u) в 60 мкл физиологического раствора) или физиологического раствора-носителя (60 мкл), введенного путем внутритрахеальной инъекции, исследуют у соответствующих по возрасту и полу мышей дикого типа (β6+/+) и мышей β6-/- линии 129SVEMS/ter. Фиброз легких оценивают через 15, 30 и 60 дней после лечения посредством исследования морфологии легких и измерения содержания гидроксипролина, показателя отложения коллагена. Фиброз является значительным у леченных блеомицином мышей дикого типа к 30-му дню и развивается к 60-му дню (фиг. 1.1 и 1.2). Напротив, у мышей β6-/- морфология легких остается почти нормальной в течение эксперимента с лишь небольшими участками фиброза, а содержание гидроксипролина в легких существенно не отличается от определенного у леченных физиологическим раствором животных в любой точке времени. Данный факт не является уникальным для мышей линии 129, поскольку аналогичные результаты получают для потомства, полученного при перекрестном скрещивании линий 129 и С57В1/6. Данные неожиданные результаты указывают на то, что экспрессия интегрина αvβ6 является необходимой для индукции фиброза легких.
Для определения роли αvβ6 на ранних стадиях индуцированного блеомицином фиброза измеряют содержание воды в легких, как показателя легочного отека, обусловленного повышенной проницаемостью сосудов, на 1, 5 и 15 дни после введения блеомицина или физиологического раствора. У мышей дикого типа содержание воды в легких максимально повышается на 5-й день и остается повышенным до 15-го дня после введения блеомицина (фиг. 2). Относительно фиброза легких мыши β6-/- в значительной степени защищены от данного раннего эффекта блеомицина, что указывает на роль эпителиального αvβ6 в развитии индуцированного блеомицином истечения из сосудов.
Ранее нами показано, что мыши β6-/- демонстрируют повышенные воспалительные реакции мононуклеарных клеток в коже и дыхательных путях (см. статью Huang X. Z. и соавт. , J. Cell Biol., 133:921-928, 1996). Индуцированные блеомицином повреждение легких и фиброз легких ассоциированы и могут зависеть от рекрутинга и активации лимфоцитов (см. статью Schrier D.J. и соавт., Am. J. Pathol. , 116:270-278, 1984). Для определения, является ли устойчивость мышей β6-/- к индуцированным блеомицином повреждениям и фиброзу обусловленной рекрутингом или активацией лимфоцитов, подсчитывают лимфоциты CD4+ и CD8+ и оценивают активацию лимфоцитов путем измерения экспрессии рецептора интерлейкина-2 (CD25) в клетках, полученных из измельченных легких мышей, леченных физиологическим раствором или блеомицином на 5- и 15-й дни после лечения. В легких мышей β6-/- имеется больше клеток CD4+, CD8+ и CD25+, чем у животных дикого типа, что согласуется с нашим предшествующим сообщением. Блеомицин индуцирует значительное повышение числа лимфоцитов, экспрессирующих CD4 и CD8, и заметное повышение процента лимфоцитов, экспрессирующих CD25 (фиг. 3), у мышей как дикого типа, так и β6-/-. У мышей как дикого типа, так и β6-/- рекрутинг и активация легочных лимфоцитов имеет максимум через 5 дней после введения блеомицина и начинает снижаться через 15 дней. Не ограничиваясь какой-либо одной теорией, данные результаты допускают, что маловероятным является то, что недостаточные рекрутинг и активация лимфоцитов у мышей β6-/- представляют собой основу их защиты от эффектов блеомицина в плане повреждения легких.
Взаимодействие интегринов с их лигандами матрикса модулирует ряд важных функций клетки, включая пролиферацию (см. статью Agrez M. и соавт., J. Cell Biol., 127:547-556, 1994), жизнеспособность (см. статью Lukacs N.W. и соавт. , Eur. J. Immunol. , 25:245-251, 1995) и экспрессию цитокинов (см. статью Miyake S. и соавт., J. Exp. Med., 177:863-868, 1993) и металлопротеиназ (см. статью Werb Z. и соавт., J. Cell Biol., 109:877-889, 1989). Для β6-субъединицы описано только то, что она образует единственный гетеродимер интегрина, αvβ6 и ограничена эпителиальными клетками. Параллельно с быстрой индукцией экспрессии αvβ6 после повреждения эпителия повышаются локальные концентрации, по меньшей мере, двух лигандов интегрина (фибронектина и тенасцина). Ранее мы показывали, что экспрессия αvβ6 играет роль в терминации воспалительных реакций мононуклеарных клеток в коже и проводящих дыхательных путях легких (см. статью Huang X.Z. и соавт., J. Cell Biol., 133:921-928, 1996). Опубликованные результаты показывают, что интегрин также играет критическую роль в индукции повреждения легких и фиброза легких в реакции на блеомицин.
Клетки респираторного эпителия давно считают главным образом компонентами пассивного барьера, отделяющего другие клетки легких от потенциально токсичных компонентов вдыхаемого воздуха. Однако, на этой поверхности данные клетки подходящим образом расположены для инициации и модуляции локальных реакций на повреждение. На основании недавно полученных результатов предполагают, что клетки респираторного эпителия обладают способностью синтезировать и секретировать ряд белков, которые могут инициировать и модулировать реакции на повреждение, включая хемокины (например, интерлейкин-8, GROα GROλ, RANTES, GMCSF (колониестимулирующий фактор гранулоцитов-макрофагов, ГМ-КСФ), МIР-1α (белок торможения миграции-1α) и МСР-1 (белок цитотоксичности макрофагов-1), другие цитокины (например, ИЛ-6 (интерлейкин-6), ИЛ-11 и ИЛ-15) и факторы роста (например, TGFβ (трансформирующий фактор роста-β). Не ограничиваясь какой-либо одной теорией, одним из возможных механизмов, с помощью которого эпителиальный αvβ6 может участвовать в развитии повреждения легких и фиброза легких, является модуляция экспрессии одного или более данных белков.
Современные способы терапии фиброза легких являются в значительной мере неадекватными. Результаты данного исследования показывают, что клетки респираторного эпителия и эпителиальный интегрин αvβ6 играют важные роли в патогенезе повреждения паренхимы легких и фиброза легких и что способы терапии, специально разработанные для нарушения функции интегрина, применимы при лечении данных в большинстве случаев неизлечимых заболеваний легких.
III. Получение блокирующего антитела.
А. Получение моноклонального антитела.
Для получения антител против αvβ6 мышей β6-/- иммунизируют либо кератиноцитами, полученными от мышей дикого типа, либо рекомбинантным секретируемым человеческим αvβ6 (см. статью Weinacker и соавт., J. Biol. Chem., 269:6940-6948, 1994) в адъюванте Фрейнда. Мышиные спленоциты собирают и сливают с клетками мышиной миеломы SP2/0 в соответствии со стандартными процедурами. Трансфицированные β6 и псевдотрансфицированные клетки SW480 используют для скрининга полученного супернатанта с помощью проточной цитометрии. Антитела, которые, как показано, распознают β6-трансфицированные, но не псевдотрансфицированные клетки SW480, используют в последующих экспериментах.
В. Характеризация моноклональных антител.
Для создания антител против мышиного αvβ6 в качестве иммуногенов используют секретируемый человеческий αvβ6 и мышиные кератиноциты на мышах β6-/- на основе 129/С57. Проводят скрининг полученных супернатантов гибридом на дифференцированное окрашивание псевдо- и β6-трансфицированных клеток SW480. Полученные в результате антитела CSβ6 и 10D5 окрашивают как β6 человека, экспрессирующийся на клетках SW480, так и β6 мыши на кератиноцитах дикого типа. CSβ6 далее характеризуют по иммунопреципитации лизата (35S)-меченных мышиных кератиноцитов. Данное антитело преципитирует гетеродимеры соответствующей молекулярной массы, являющиеся αvβ6, отделяя их от β6+/+ - кератиноцитов, но не от β6-/- -кератиноцитов, указывая на то, что данные антитела являются специфическими в отношении интегрина αvβ6.
Как Csβ6, так и 10D5 анализируют также на блокирующую активность посредством проведения анализов клеточной адгезии с β6-трансфицированными клетками SW480 и мышиными кератиноцитами на фибронектине. Однако только 10D5 проявляет блокирующую активность на мышиных клетках. 10D5 ингибирует миграцию кератиноцитов дикого типа на фибронектине до степени, идентичной показанной на β6-/- -кератиноцитах.
Как Csβ6, так и 10D5 анализируют также на блокирующую активность посредством проведения анализов клеточной адгезии с β6-трансфицированными клетками SW480 и мышиными кератиноцитами на фибронектине. Однако только 10D5 проявляет блокирующую активность на мышиных клетках. 10D5 ингибирует миграцию кератиноцитов дикого типа на фибронектине до степени, идентичной показанной на β6-/- -кератиноцитах.
С. Анализ клеточной адгезии.
Обработанные полистиролом многолуночные планшеты для микротитрования не для культур ткани на 96 лунок (Linbro/Titertek, Flow Laboratories, McLean, VA) покрывают витронектином, фибронектином или коллагеном. 100 мкл раствора, содержащего различные количества матрикса, вносят в лунки и инкубируют при 37oС в течение 1 часа. После инкубирования лунки промывают PBS (забуференным фосфатом физиологическим раствором), затем блокируют 1% BSA (бычьим сывороточным альбумином) в бессывороточной DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) при 37oС в течение 30 минут. Контрольные лунки заполняют 1% BSA в DMEM. Клетки собирают таким же образом, как для анализа миграции, и ресуспендируют в бессывороточной КGМ, а затем добавляют в каждую покрытую белком лунку в присутствии или в отсутствие РМА (форболмиристатацетат, ФМА). Для экспериментов по блокированию клетки инкубируют с антителами в течение 5 минут при 4oС перед помещением в лунки. Планшеты центрифугируют (в положении верхней стороной наверх) при 10 х g в течение 5 минут перед инкубированием, в течение 1 часа при 34oС во влажной атмосфере с содержанием 7% CO2. Неадгезионные клетки удаляют центрифугированием в положении верхней стороной вниз при 48 х g в течение 5 минут. Связанные клетки фиксируют 1% формальдегидом и окрашивают 0,5% кристаллическим фиолетовым, после чего лунки промывают PBS. Относительное число клеток в каждой лунке оценивают, измеряя поглощение при 595 нм в ридере для микропланшетов (Bio-Rad).
D. Анализ миграции.
Анализы миграции клеток проводят с использованием покрытых матриксом планшетов с сообщающимися лунками (поры 8 мкм, Costar, Cambridge, MA). Внутреннюю поверхность мембраны покрывают коллагеном (10 мкг/мл), фибронектином (10 мкг/мл) или витронектином (10 мкг/мл) в PBS в течение 1 часа при 37oС и блокируют с помощью 1% BSA. Сначала культивируемые кератиноциты собирают с помощью трипсина/EDTA (этилендиаминтетрауксусной кислоты) и инактивируют трипсин ингибитором трипсина сои. Клетки суспендируют в бессывороточной КGМ и помещают в верхнюю камеру при густоте 3,6•104/лунку в 100 мкл среды в присутствии или в отсутствие форболмиристатацетата (РМА, 10 нг/мл). В экспериментах по ингибированию антитела добавляют в верхнюю и нижнюю камеры в присутствии РМА. Через 6 часов инкубирования клетки фиксируют 2% параформальдегидом и окрашивают 0,5% кристаллическим фиолетовым в 1% формальдегиде. Клетки из верхней камеры удаляют и клетки на нижней поверхности подсчитывают с использованием сетки 10х при сильном увеличении (40х). Просчитывают множество полей зрения и усредняют данные для каждого исследованного условия.
IV. β6-нокаутированные мыши имеют пониженную частоту метастазов.
Линию трансгенных мышей, у которых спонтанно развивается метастазирующий рак молочной железы (мыши MMTV-mTAg), перекрестно скрещивают в β6-нокаутированными мышами. У потомства мышей с отсутствием β6 развиваются быстрорастущие первичные опухоли молочной железы при значительно сниженных частоте и степени развития метастазов в легких по сравнению с однопометными животными, которые экспрессируют β6. Данные иммуногистохимии показывают, что β6 сильно экспрессируется на границе метастатических поражений. Это предполагает, что β6 требуется для максимального метастазирования на данной модели.
Поскольку β6-нокаутированные мыши имеют хроническое воспаление легких, возможно, что снижение метастазирования обусловлено присутствием воспаления в легких, которое нарушает рост метастазов. Для подтверждения данного тезиса проводят два эксперимента.
1. Линию β6-экспрессирующих клеток, выделенную из первичной опухоли, инъецируют сингенным мышам, которые либо являются диким типом, либо β6-нокаутированными. Метастазы в легких быстро появляются у мышей обеих групп, что предполагает, что присутствие воспаления у нокаутированных мышей не нарушает роста опухолевых клеток в легком.
2. Клеточные линии, выделенные из опухолей либо β6-нокаутированных мышей, либо мышей дикого типа, инъецируют сингенным мышам дикого типа. Линии клеток дикого типа неизменно приводят к появлению опухолей легких, тогда как линии нокаутированных клеток не приводят. Результаты данного эксперимента предполагают, что опухолевые клетки β6 требуются для максимального метастазирования в данной системе.
Все ссылки (включая книги, статьи, тезисы, патенты и патентные заявки), приведенные в данном контексте, таким образом, специально включены в виде ссылок во всей их полноте для всех целей.
Поскольку изобретение описано в связи с его специфическими вариантами осуществления, будет понятно, что оно может быть далее модифицировано и данная заявка предназначена для того, чтобы охватить любые варианты, способы применения или адаптации изобретения, следуя в основном принципам изобретения и включая такие новые направления, отходящие от данного описания, как те, которые находятся в границах принятой практики в уровне техники, к которой относится изобретение, и как те, которые могут относиться к основным признакам, представленным в данном описании, и как те, которые входят в объем изобретения и рамки прилагаемой формулы изобретения.
Claims (12)
1. Способ лечения острого повреждения легких у пациента, отличающийся тем, что пациенту вводят терапевтическую дозу антитела, специфически связывающего αvβ6.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве антитела используют моноклональное антитело.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что антитело вводят терапевтически.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что антитело вводят профилактически.
5. Способ лечения фиброза у пациента, отличающийся тем, что пациенту вводят терапевтическую дозу антитела, специфически связывающего αvβ6.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что фиброз представлен фиброзом легких.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что фиброз легких является результатом острого повреждения легких.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве антитела используют моноклональное антитело.
9. Способ по п.5, отличающийся тем, что антитело вводят терапевтически.
10. Способ по п.5, отличающийся тем, что антитело вводят профилактически.
11. Моноклональное антитело против β6 субъединицы интегрина αvβ6, продуцируемое гибридомой АТСС НВ 12382.
12. Культура гибридомы АТСС НВ 12382 - продуцент моноклонального антитела против β6 субъединицы интегрина αvβ6.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US5506097P | 1997-08-08 | 1997-08-08 | |
| US60/055,060 | 1997-08-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000105905A RU2000105905A (ru) | 2001-11-27 |
| RU2221589C2 true RU2221589C2 (ru) | 2004-01-20 |
Family
ID=21995323
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000105905/14A RU2221589C2 (ru) | 1997-08-08 | 1998-08-07 | Способ лечения острого повреждения легких и способ лечения фиброза, моноклональное антитело, гибридома атсс нв12382 |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US20020004482A1 (ru) |
| EP (3) | EP1930022B1 (ru) |
| JP (2) | JP2001513333A (ru) |
| KR (1) | KR100586202B1 (ru) |
| CN (1) | CN1267224A (ru) |
| AT (3) | ATE511850T1 (ru) |
| AU (1) | AU739283B2 (ru) |
| BR (1) | BR9814040A (ru) |
| CA (1) | CA2297736A1 (ru) |
| CY (2) | CY1110462T1 (ru) |
| CZ (1) | CZ299768B6 (ru) |
| DE (2) | DE69840113D1 (ru) |
| DK (2) | DK1504764T3 (ru) |
| EE (1) | EE04752B1 (ru) |
| ES (3) | ES2235350T3 (ru) |
| HU (1) | HU228900B1 (ru) |
| IL (2) | IL134288A0 (ru) |
| NZ (2) | NZ502546A (ru) |
| PL (2) | PL201716B1 (ru) |
| PT (3) | PT996460E (ru) |
| RU (1) | RU2221589C2 (ru) |
| TR (2) | TR200202323T2 (ru) |
| WO (1) | WO1999007405A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2446825C2 (ru) * | 2005-12-23 | 2012-04-10 | Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Мичиган | Материалы и способы лечения хронических фиброзных заболеваний |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5962643A (en) * | 1991-07-11 | 1999-10-05 | The Regents Of The University Of California | Integrin β subunit and uses thereof |
| ATE511850T1 (de) * | 1997-08-08 | 2011-06-15 | Univ California | Behandlung von blasenfibrose mit antikörpern gegen alpha-v-beta-6-integrin |
| KR20070102760A (ko) * | 1999-04-22 | 2007-10-19 | 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 | 인테그린 알파-4 서브유닛의 길항 물질을 사용하는섬유증의 치료 방법 |
| DE19929410A1 (de) * | 1999-06-26 | 2000-12-28 | Merck Patent Gmbh | Inhibitoren des Integrins avß6 |
| US20030114410A1 (en) | 2000-08-08 | 2003-06-19 | Technion Research And Development Foundation Ltd. | Pharmaceutical compositions and methods useful for modulating angiogenesis and inhibiting metastasis and tumor fibrosis |
| AUPR230500A0 (en) * | 2000-12-22 | 2001-01-25 | University Of Newcastle Research Associates Limited, The | A method of modulating map kinase mediated cellular activity and agents useful in same |
| EP1385544B1 (en) * | 2001-04-30 | 2008-09-24 | Eli Lilly And Company | Humanized antibodies |
| CN1646160A (zh) * | 2002-03-13 | 2005-07-27 | 拜奥根Idec马萨诸塞公司 | 抗αvβ6抗体 |
| US20090028853A1 (en) * | 2006-10-19 | 2009-01-29 | The Regents Of The University Of California, A California Corporation | TREATMENT AND PREVENTION OF CHRONIC ASTHMA USING ANTAGONISTS OF INTEGRIN ALPHAvBETA6 |
| US20040048312A1 (en) * | 2002-04-12 | 2004-03-11 | Ronghao Li | Antibodies that bind to integrin alpha-v-beta-6 and methods of use thereof |
| JP5223072B2 (ja) * | 2004-04-02 | 2013-06-26 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | ａｖβ５インテグリンに関連のある疾患を治療および予防するための方法および組成物 |
| CN104072614B (zh) | 2005-07-08 | 2017-04-26 | 生物基因Ma公司 | 抗-αvβ6 抗体及其用途 |
| AU2007272995B2 (en) | 2006-07-10 | 2013-02-07 | Biogen Idec Ma Inc. | Compositions and methods for inhibiting growth of smad4-deficient cancers |
| BRPI0715141A2 (pt) * | 2006-08-03 | 2013-06-04 | Astrazeneca Ab | agente de ligaÇço alvejante, anticorpo isolado, fragmento de anticorpo isolado, molÉcula de Ácido nucleico, vetor, cÉlula hospedeira, mÉtodos para produzir um agente de ligaÇço alvejado, para produzir um anticorpo, para produzir um fragmento de anticorpo, para tratar um tumor maligno em um animal, para tratar inflamaÇço, e para inibir a interaÇço de alfabeta6 com seu ligando, e, conjugado |
| PT2537529T (pt) * | 2007-08-02 | 2018-12-12 | Gilead Biologics Inc | Anticorpos inibidores de loxl2 e suas utilizações |
| KR101046317B1 (ko) * | 2008-07-04 | 2011-07-05 | 이종대 | 조력발전 방법 및 그 장치 |
| US9107935B2 (en) | 2009-01-06 | 2015-08-18 | Gilead Biologics, Inc. | Chemotherapeutic methods and compositions |
| AU2010275367B2 (en) | 2009-07-24 | 2015-09-03 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for treating and preventing disease associated with avB5 integrin |
| KR20120089274A (ko) * | 2009-08-21 | 2012-08-09 | 길리아드 바이오로직스, 인크. | 생체내 스크리닝 검정 |
| WO2011022667A2 (en) | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Arresto Biosciences, Inc | Catalytic domains from lysyl oxidase and loxl2 |
| KR20130008021A (ko) * | 2010-02-04 | 2013-01-21 | 길리아드 바이오로직스, 인크. | 리실 산화효소-유사 2 (ｌｏｘｌ2)에 결합하는 항체, 및 그를 위한 사용 방법 |
| CN105017420B (zh) | 2012-02-17 | 2019-05-28 | 西雅图基因公司 | 针对整联蛋白αvβ6的抗体和使用该抗体治疗癌症 |
| US10035859B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-07-31 | Biogen Ma Inc. | Anti-alpha V beta 6 antibodies and uses thereof |
| WO2014143739A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Biogen Idec Ma Inc. | Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof |
| EP2784511A1 (en) | 2013-03-27 | 2014-10-01 | Universität Zürich | Integrin alpha-v-beta6 for diagnosis/prognosis of colorectal carcinoma |
| JP6104312B2 (ja) * | 2014-06-19 | 2017-03-29 | 日東電工株式会社 | 組織再生促進剤 |
| JP7034914B2 (ja) * | 2015-11-23 | 2022-03-14 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 線維症および／または線維性疾患の治療のための抗α－ｖインテグリン抗体 |
| WO2019040608A1 (en) | 2017-08-22 | 2019-02-28 | Biogen Ma Inc. | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND DOSAGE SCHEMES CONTAINING ANTI-ALPHA (V) BETA ANTIBODIES (6) |
| JP7551750B2 (ja) | 2019-12-05 | 2024-09-17 | シージェン インコーポレイテッド | 抗αｖβ６抗体及び抗体薬物コンジュゲート |
| WO2021225912A1 (en) * | 2020-05-07 | 2021-11-11 | Pliant Therapeutics, Inc. | Treatment of respiratory diseases with amino acid compounds |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
| US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
| US5019369A (en) | 1984-10-22 | 1991-05-28 | Vestar, Inc. | Method of targeting tumors in humans |
| US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
| US5654270A (en) * | 1988-06-28 | 1997-08-05 | La Jolla Cancer Research Foundation | Use of fibromodulin to prevent or reduce dermal scarring |
| EP0449973B1 (en) | 1988-12-20 | 1996-03-20 | La Jolla Cancer Research Foundation | Polypeptide-polymer conjugates active in wound healing |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| US5514788A (en) * | 1993-05-17 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide modulation of cell adhesion |
| US5962643A (en) | 1991-07-11 | 1999-10-05 | The Regents Of The University Of California | Integrin β subunit and uses thereof |
| US5770565A (en) * | 1994-04-13 | 1998-06-23 | La Jolla Cancer Research Center | Peptides for reducing or inhibiting bone resorption |
| US6492332B1 (en) * | 1995-12-12 | 2002-12-10 | Omeros Corporation | Irrigation solution and methods for inhibition of tumor cell adhesion, pain and inflammation |
| ES2202336T3 (es) * | 1994-12-20 | 2004-04-01 | Merck Patent Gmbh | Anticuerpo monoclonal contra la integrina alfa-v. |
| ATE511850T1 (de) * | 1997-08-08 | 2011-06-15 | Univ California | Behandlung von blasenfibrose mit antikörpern gegen alpha-v-beta-6-integrin |
-
1998
- 1998-08-07 AT AT08004714T patent/ATE511850T1/de active
- 1998-08-07 WO PCT/US1998/016439 patent/WO1999007405A1/en active Application Filing
- 1998-08-07 DE DE69840113T patent/DE69840113D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 IL IL13428898A patent/IL134288A0/xx unknown
- 1998-08-07 DE DE69828614T patent/DE69828614T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 PT PT98939278T patent/PT996460E/pt unknown
- 1998-08-07 CZ CZ20000413A patent/CZ299768B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 RU RU2000105905/14A patent/RU2221589C2/ru active
- 1998-08-07 PT PT08004714T patent/PT1930022E/pt unknown
- 1998-08-07 HU HU0003547A patent/HU228900B1/hu unknown
- 1998-08-07 US US09/130,870 patent/US20020004482A1/en not_active Abandoned
- 1998-08-07 NZ NZ502546A patent/NZ502546A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 TR TR2002/02323T patent/TR200202323T2/xx unknown
- 1998-08-07 PT PT04022921T patent/PT1504764E/pt unknown
- 1998-08-07 NZ NZ515955A patent/NZ515955A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 BR BR9814040-0A patent/BR9814040A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-08-07 AT AT98939278T patent/ATE286742T1/de active
- 1998-08-07 DK DK04022921T patent/DK1504764T3/da active
- 1998-08-07 JP JP2000506994A patent/JP2001513333A/ja not_active Withdrawn
- 1998-08-07 EP EP08004714A patent/EP1930022B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 PL PL384372A patent/PL201716B1/pl unknown
- 1998-08-07 EP EP04022921A patent/EP1504764B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 DK DK08004714.5T patent/DK1930022T3/da active
- 1998-08-07 AT AT04022921T patent/ATE410179T1/de active
- 1998-08-07 PL PL341029A patent/PL199014B1/pl unknown
- 1998-08-07 ES ES98939278T patent/ES2235350T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 EE EEP200000068A patent/EE04752B1/xx unknown
- 1998-08-07 KR KR1020007001337A patent/KR100586202B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 CN CN98807892A patent/CN1267224A/zh active Pending
- 1998-08-07 AU AU87743/98A patent/AU739283B2/en not_active Expired
- 1998-08-07 ES ES04022921T patent/ES2311131T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 CA CA002297736A patent/CA2297736A1/en not_active Abandoned
- 1998-08-07 ES ES08004714T patent/ES2364703T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 TR TR2000/00374T patent/TR200000374T2/xx unknown
- 1998-08-07 EP EP98939278A patent/EP0996460B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-08-02 US US09/365,695 patent/US6316601B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-01-30 IL IL134288A patent/IL134288A/en not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-27 US US09/818,416 patent/US6692741B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-01-09 US US10/754,435 patent/US7150871B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-11-13 US US11/559,172 patent/US7544358B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-11 JP JP2008206826A patent/JP2009001587A/ja active Pending
-
2009
- 2009-01-08 CY CY20091100011T patent/CY1110462T1/el unknown
-
2011
- 2011-08-26 CY CY20111100822T patent/CY1111792T1/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BREUSS J.M. et al. J. Cell. Science, 1995, v.108, abstract. WANG A. et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 1996, v.15, abstract. LEHMANN M. et al. Cancer Res., 1994, Apr.15, 54(8), abstract. PILEWSKI J.M. et al. Am. J. Physiol, 1997, Jul, 273, (1Pt1) abstract. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2446825C2 (ru) * | 2005-12-23 | 2012-04-10 | Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Мичиган | Материалы и способы лечения хронических фиброзных заболеваний |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2221589C2 (ru) | Способ лечения острого повреждения легких и способ лечения фиброза, моноклональное антитело, гибридома атсс нв12382 | |
| CA2360146C (en) | Methods for inhibiting brain tumor growth by using selected integrin antagonists | |
| US20130177565A1 (en) | Administering anti-placental growth factor antibodies | |
| JP2001513333A5 (ru) | ||
| WO2009059425A1 (en) | Stat3 inhibitors for the treatment of fibrosis | |
| US7824680B2 (en) | Methods for inhibiting angiogenesis | |
| AU2004278748B2 (en) | Methods for altering hematopoietic progenitor cell adhesion, differentiation, and migration | |
| WO2003068262A1 (en) | Alpha1beta1 antagonists for treatment of atherosclerosis | |
| MXPA00001196A (es) | Tratamiento de lesion agudadel pulmon y de la fibrosis con antagonistas de alfavbeta6 |