PL189184B1 - Kompozycja szczepionki polinukleotydowej dla bydła podawana drogą śródskórną, przenośna jednostka do szczepienia bydła oraz zastosowanie plazmidu do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej - Google Patents

Kompozycja szczepionki polinukleotydowej dla bydła podawana drogą śródskórną, przenośna jednostka do szczepienia bydła oraz zastosowanie plazmidu do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej

Info

Publication number
PL189184B1
PL189184B1 PL97331237A PL33123797A PL189184B1 PL 189184 B1 PL189184 B1 PL 189184B1 PL 97331237 A PL97331237 A PL 97331237A PL 33123797 A PL33123797 A PL 33123797A PL 189184 B1 PL189184 B1 PL 189184B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
vaccine composition
virus
plasmid
dna sequence
immunogen
Prior art date
Application number
PL97331237A
Other languages
English (en)
Other versions
PL331237A1 (en
Inventor
Franciscus Antonius Maria Rijsewijk
Remco Siebren Schrijver
Oirschot Johannes Theodorus Van
Original Assignee
Id Dlo Inst Of Animal Science
Merial Sas
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Id Dlo Inst Of Animal Science, Merial Sas filed Critical Id Dlo Inst Of Animal Science
Publication of PL331237A1 publication Critical patent/PL331237A1/xx
Publication of PL189184B1 publication Critical patent/PL189184B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A61K39/265—Infectious rhinotracheitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16741—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/16743—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18541—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2760/18543—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Kompozycja szczepionki polinukleotydowej przeznaczonej dla bydla, znamienna tym, ze obejmuje skuteczna sródskórnie ilosc plazmidu zawierajacego sekwencje DNA kodujaca immunogen czynnika patogennego bydla oraz funkcjonalnie polaczony promotor eukariotyczny umozliwiajacy ekspresje tego immunogenu in vivo w komórkach skóry i przeznaczona do sródskórnego podawania urzadzeniem do strugowego podawania plynu. 2. Kompozycja szczepionki wedlug zastrz. 1, znamienna tym, ze plazmid wystepu- je w nosniku przydatnym do podawania droga sródskórna w objetosci dawki od 0,1 do 0,9 ml, korzystnie od 0,2 do 0,6, jeszcze korzystniej od 0,4 i 0,5 ml, przy czym mozna ja podawac sródskórnie w strudze plynu. 11. Przenosna jednostka do szczepienia bydla, znamienna tym, ze obejmuje zestaw do strugowego podawania plynów i odpowiednia fiolke obejmujaca kilka, dawek kompozy cji szczepionki okreslonej w zastrz. 1, przy czym urzadzenie do podawania zaprojektowane jest w taki sposób, ze dostarcza dawke kompozycji szczepionki sródskórnie. 13. Zastosowanie plazmidu obejmujacego sekwencje DNA kodujaca immunogen by dlecy i promotor umozliwiajacy wyrazanie tego immunogenu, do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej przydatnej do podawania sródskómego urzadzeniem do strugowego dostarczania plynów. PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest kompozycja szczepionki polinukleotydowej dla bydła podawana drogą śródskómą, przenośna jednostka do szczepienia bydła oraz zastosowanie plazmidu do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej.
Immunizacja albo szczepienie, przez bezpośrednie podanie sekwencji nukleotydowych kodujących białko immunogenne (zwane szczepieniem DNA albo polinukleotydami) opisano w zgłoszeniu patentowym WO-A-90 11092. Białko kodowane przez wprowadzoną sekwencję nukleotydową jest zdolne do bycia wyrażanym w komórkach oraz do wywołania reakcji odpornościowej. Niniejsze zgłoszenie obejmuje zastosowanie nagiego DNA albo DNA w liposomach. Korzystnie, DNA wprowadza się do mięśni. DNA można również wprowadzać do skóry, do pewnych narządów albo do krwi, co umożliwia przeprowadzenie wstrzyknięcia różnymi drogami, takimi jak droga śródskómą, przezskóma, dożylna itp. Badania, które nastąpiły po pierwszym opisie tej techniki wykazywały korzyści zastosowania drogi domięśniowej do wstrzykiwania DNA albo metody zwanej „gene gun”, która obejmuje wstrzeliwanie metalowych mikropocisków, takich jak złote mikropociski pokryte DNA, bezpośrednio w powierzchniową warstwę skóry.
Ulmer i in., Science, 259: 1745-1749, 1993, Cox i in., J. Virol. 67, 9: 5664-5667, 1993 i Xiang, Virol. 199: 132-140, 1994, opisali próby szczepienia DNA drogą domięśniową. Szeroko wykazano, że droga domięśniowa daje lepsze wyniki w porównaniu z drogą śródskómą, ale w końcowej analizie, najbardziej obiecującą drogą jest zastosowanie „gene gun”, ponieważ przy użyciu tej techniki podawane dawki są znacznie mniejsze niż dawki wymagane do podawania domięśniowego (Fynan i in., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 11478—11482, 1993; WO-A-95/20660). Podobnie, Tang i in., Nature 356: 152-154, 1992, wykazali brak reakcji odpornościowej po podaniu ludzkiego hormonu wzrostu drogą śródskómą, przy użyciu igły podskórnej. Z drugiej strony, autorzy wykazali brak uzyskania reakcji odpornościowej przy użyciu techniki „gene gun”. Jedynie Raz i in., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91: 9519-9523, 1994, opisali, że śródskóme podanie może wywołać wysokie miana przeciwciał.
Technika „gene gun” posiada pewne wady oraz trudności w przeprowadzeniu i jest kosztowna, ponieważ wymaga wytworzenia i zastosowania cząstek ze złota, pokrytych DNA i ich podania przy użyciu odpowiedniego urządzenia. Stąd niektórzy autorzy opracowali alternatywną technikę, którą obejmuje zastosowanie przyrządu do strugowego podawania płynu. Można tu wymienić Furth i in., Anal. Biochem. 205: 365-368, 1992, którzy opisują urządzenie zwane Ped-o-jet, które to jest urządzeniem do wstrzykiwania szczepionek ludzkich do tkanki mięśniowej, do podawania szczepionek DNA. Autorzy donoszą, że urządzenie strugowe może wprowadzić DNA przez skórę do mięśni, tkanki tłuszczowej i tkanki gruczołu sutkowego żywych zwierząt. Valshing i in., J. Immunol. Meth. 75: 11-22, 1994, opisują zastosowanie urządzenia Med.-E-Jet do podawania przeskómego i domięśniowego.
Można również wspomnieć Jenkins i in., Vaccine 13, 17: 1658-1664, 1995, którzy opisują zastosowanie szczepienia wtryskowego do mięśni. Bydlęcy wirus oddechowy BRSV występuje na całym świecie i może powodować ciężką chorobę dolnych dróg oddechowych u bydła, przy czym choroba przypomina chorobę spowodowaną ludzkim wirusem oddechowym HRSV u dzieci. Podczas jednego z badań stwierdzono, że ponad 95% 2-letnich cieląt było zakażonych wirusem BRSV (van der Poel i in., Archives of Virology 133: 309-321, 1993).
Zapotrzebowanie na szczepionkę przeciwko wirusowi BRSV jest zauważalne, ale nie spowodowało opracowania skutecznych szczepionek. Pierwsze próby szczepienia dzieci doprowadziły do wystąpienia zaostrzenia choroby po naturalnym zakażeniu, co sugeruje, że szczepienie może być niebezpieczne (Andersen i in., J. Infect. Dis. 1995, 171: 1-7). Wiadomo jednakże, ze przeciwciała przeciwko dwóm głównym giikoproteinom powie.rzchnio wym, F (białko fuzji) i G (białko przylegania) mogą odgrywać rolę w ochronie (Kimman i Westenbrink, Archiv. Virol. 1990, 112: 1-25). Przeprowadzono również liczne badania na modelach zwierzęcych myszy, psów i norek. Z drugiej strony, próby szczepienia bydła oczyszczonym białkiem F nie dały ostatecznych wyników ponieważ, podobnie jak dzieci szczepione przeciwko HRSV, cielęta rozwinęły przeciwciała neutralizujące i nie neutralizujące, które mogą zakłócać reakcję odpornościową podczas kolejnego zakażenia wirusem (Nelson i in., Am. J. Vet. Res. 53, 8: 1315-1321, 1992).
Celem wynalazku jest ulepszenie szczepienia bydła przy użyciu DNA, co zapewnienia szczepienia, które jest co najmniej równie skuteczne co szczepienie drogą domięśniową albo techniką „gene gun”, ale jest łatwiejsze i tańsze w stosowaniu.
Innym celem wynalazku jest dostarczenie takiego ulepszenia prowadzącego do zwiększonego bezpieczeństwa, zasadniczo w odniesieniu do pozostałości szczepienia obecnych w tkankach.
Innym celem wynalazku, który dotyczy szczepienia zwierząt przeznaczonych do konsumpcji jest również zapewnienie bezpieczeństwa, w taki sposób, że szczepienie nie wywiera niekorzystnego wpływu na wygląd mięsa.
Innym celem wynalazku jest zapewnienie sposobu masowego szczepienia.
Konkretnym celem wynalazku jest dostarczenie takiej szczepionki, która umożliwia ochronę bydła przed wirusem BRSV, wirusem IBR, wirusem BVD albo wirusem PI-3.
Zgłaszający stwierdzili, że możliwe jest spełnienie tych celów wynalazku przez podawanie szczepionki drogą śródskómą, przy użyciu bezigłowego urządzenia strugowego do podawania płynu, zapewniającego w 5 punktach rozmieszczenie szczepionki zasadniczo w naskórku, skórze i warstwie podskórnej. Badania w dziedzinie szczepienia bydła (bydlęcy wirus oddechowy, BRSV), przeprowadzone przez Zgłaszających umożliwiły tą drogą otrzymanie doskonałych wyników immunizacji w porównaniu z drogą domięśniową.
Wynalazek proponuje po raz pierwszy szczepienie bydła szczepionkami polinukleotydowymi (albo szczepionkami DNA, albo szczepionkami plazmidowymi) przeznaczonymi do i podawanymi drogą śródskómą przy użyciu bezigłowego urządzenia wtryskującego płyny.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja szczepionki polinukleotydowej przeznaczonej dla bydła obejmująca skuteczną śródskómie ilość plazmidu zawierającego sekwencję DNA kodującą immunogen czynnika patogennego bydła oraz funkcjonalnie połączony promotor eukariotyczny umożliwiający ekspresję tego immunogenu in vivo w komórkach skóry i przeznaczona do śródskómego podawania urządzeniem do strugowego podawania płynu.
Metoda podawania śródskómego w szczególności dotyczy komórek naskórka, skóry i warstwy podskórnej. Podawanie przeznaczone jest do prezentacji wyrażanych antygenów komórkom dendrytycznym Langerhansa w skórze, które są zasadniczo położone w naskórku.
W korzystnym wykonaniu kompozycja szczepionki według wynalazku charakteryzuje się tym, że plazmid występuje w nośniku przydatnym do podawania drogą śródskómą w objętości dawki od 0,1 do 0,9 ml, korzystnie od 0,2 do 0,6, jeszcze korzystniej od 0,4 i 0,5 ml, przy czym można ją podawać śródskómie w strudze płynu.
Wymaga to nośnika przydatnego do podawania drogą śródskómą, takiego jak woda, bufor, sól fizjologiczna, liposomy, lipidy kationowe i ogólnie nośnik o niskiej lepkości, zwłaszcza równoważnej albo zbliżonej do lepkości wody i w objętości dawki, która jest przydatna i skuteczna przy podawaniu tą drogą.
Kompozycja szczepionki według wynalazku korzystnie obejmuje śródskómie skuteczną ilość plazmidu, ogólnie od 10 ng do 1 mg, korzystnie od 100 ng do 500 pg, korzystniej od 0,5 pg do 50 pg. W korzystnym wykonaniu kompozycja szczepionki według wynalazku charakteryzuje się tym, że sekwencja DNA koduje immunogen czynnika patogennego wybranego z grupy obejmującej wirusa BRSV, wirusa IBR, wirusa BVD i wirusa PI-3 albo korzystnie koduje gen gB i/lub gen gD wirusa IBR lub korzystnie koduje gen G i/lub gen F BRSV, lub korzystnie koduje E2 i/lub El z wirusa BVD, albo korzystnie koduje HN i/lub F z wirusa PI-3.
W innym korzystnym wykonaniu kompozycji szczepionki według wynalazku promotor jest silnym promotorem eukariotycznym, takim jak promotor IE hCMV.
W typowym przypadku wykonania wynalazku sekwencją DNA kodującą immunogen jest sekwencja wirusa BRSV, w szczególności gen G i/lub F tego wirusa (przykładowo, szczepu 391-2; Lerch i in., Virol. 1991, 181: 118-131).
W innym typowym wykonaniu wynalazku sekwencją DNA jest sekwencja kodującą immunogen wirusa zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy bydła (IBR) albo bydlęcego wirusa herpes (BHV), w szczególności genu gB i/lub gD (przykładowo, szczepu ST; Leung-Tack i in., Virol. 1994, 199: 409-421).
Innym typowym przypadkiem wynalazku jest sekwencja DNA kodująca immunogen wirusa choroby śluzówek (BVD), w szczególności genu E2 i/lub genu El (przykładowo, szczepu
189 184
Osloss; De Moerlooze i in., J. Gen. Virol. 1993, 74: 1433-1438). Możliwe jest również połączenie genów z różnych podtypów BVD, przykładowo z Ameryki Północnej oraz Europy (Dekker i in., Vet. Microbiol. 1995, 47: 317-329).
Jeszcze innym typowym przykładem wynalazku jest sekwencja DNA kodująca immunogen wirusa paragrypy typu 3 (PI-3), w szczególności dla genu HN i/lub genu F, korzystnie genu HN (sekwencja genów F i HN, którą zdeponował Shibuta w 1987, numer dostępu GeneBank Y00115).
W przypadku kombinacji dwóch genów, przykładowo F i G z BRSV, HN i F z PI-3 albo gD i gB z IBR, odpowiednie sekwencje można wprowadzać do tego samego plazmidu albo do różnych plazmidów.
Gen czynnika chorobotwórczego oznacza nie tylko kompletny gen, ale również różne sekwencje nukleotydowe, w tym fragmenty, które zachowują zdolność do wywoływania reakcji ochronnej. Uwaga o genie obejmuje sekwencje nukleotydowe równoważne z opisanymi szczegółowo w przykładach, tj. sekwencje, które są inne, ale kodują to samo białko. Obejmuje również sekwencje nukleotydowe innych szczepów rozważanego patogenu, które zapewniają ochronę krzyżową albo ochronę swoistą dla szczepu albo grupy szczepów. Obejmuje to również sekwencje nukleotydowe, które zmodyfikowano w celu ułatwienia ekspresji in vivo przez organizm biorcy, który koduje to białko.
Zrozumiałe jest również, że wynalazek obejmuje adaptację szczepionek DNA ze stanu techniki do podawania śródskómego urządzeniem do podawania strugowego płynu. O ile powoduje to zmianę składu szczepionki, zaś w szczególności lepkości, ilości DNA i podawanej objętości dawki, oczywiste jest, że wynalazek stosuje się ponadto do każdej szczepionki DNA opisanej w stanie techniki. Specjaliści mogą w ten sposób odnieść się do stanu techniki w dziedzinie szczepienia przy użyciu DNA, zaś w szczególności do cytowanych tu dokumentów. Kompozycję szczepionki według wynalazku można pakować w fiolki wielodawkowe, przykładowo od 10 do 100 dawek, pasujących do urządzenia do strugowego podawania śródskórnie płynów, korzystnie Pigjet.
Urządzenie zwane Pigjet jest wytwarzane i rozprowadzane przez Endoscoptic, Laons, Francja, lecz stosowane mogą być równoważne urządzenia dostarczające szczepionkę przez głowicę o pięciu dyszach w warunkach równoważnych z zapewnianymi przez Pigjet. Ogólnie, kompozycje szczepionki według wynalazku są przydatne do podawania urządzeniem do wstrzykiwania płynów przez od 1do 10 dysz, korzystnie od 4 do 6, jeszcze korzystniej od 5 do 6.
W szczególności, choć nie wyłącznie, przy użyciu aparatu o 5 albo 6 dyszach, tzn. podającego dawkę przez 5 albo 6 otworów w postaci 5 albo 6 strug o identycznej objętości, objętość dawki może korzystnie wynosić od 0,2 ml do 0,6 ml, korzystnie w zakresie od 0,4 do 0,5 ml.
Zwykle, według wynalazku podaje się kompozycję szczepionki w kilka punktów, aby zoptymalizować transfekcję komórek plazmidem. Powoduje to korzystne zastosowanie głowicy wstrzykującej z kilkoma otworami. Można to również połączyć z wielokrotnym zastosowaniem urządzenia, tzn. z rozmieszczeniem dawki szczepiennej w więcej niż jednym podaniu w różne miejsca. W szczególnie korzystnym sposobie, możliwe jest zastosowanie urządzenia z 5 albo 6 otworami w pojedynczym albo wielokrotnym zastosowaniu, korzystnie w podwójnym zastosowaniu. W zakres wynalazku wchodzi również przenośna jednostka do szczepienia bydła, obejmująca zestaw do strugowego podawania płynów z odpowiednią fiolką obejmującą kilka dawek kompozycji szczepionki według wynalazku, przy czym urządzenie do podawania jest zaprojektowane w taki sposób, że dostarcza dawkę szczepionki śródskómie.
Korzystnie, urządzenie do podawania wchodzące w skład zestawu obejmuje głowicę do wstrzykiwania wyposażoną w od 1 do 10 dysz, w szczególności od 4 do 6, korzystnie w 5 do 6.
Zestawy do podawania mogą mieć różne charakterystyki podane w szczegółowym opisie. Korzystnymi rodzajami urządzeń wchodzącymi w skład zestawu do podawania są takie, które mają warunki podawania identyczne jak urządzenie Pigjet.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie plazmidu obejmującego sekwencję DNA kodującą immunogen bydlęcy i promotor umożliwiający wyrażanie tego immunogenu, do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej przydatnej do podawania śródskómego urządzeniem do strugowego dostarczania płynów.
189 184
W korzystnym wykonaniu wynalazku plazmidu według wynalazku w kompozycji szczepionki występuje w ilości obejmującej od 10 ng do 1 mg, korzystnie od 100 ng do 500 pg, korzystniej od 0,5 pg do 50 pg w objętości od 0,1 do 0,9 ml, korzystnie od 0,2 do 0,6, jeszcze korzystniej od 0,4 i 0,5 ml.
W następnym kolejnym korzystnym wykonaniu zastosowany plazmid według wynalazku obejmuje sekwencję DNA, która koduje immunogen czynnika patogennego wybranego z grupy obejmującej wirusa BRSV, wirusa IBR, wirusa BVD i wirusa PI-3.
Wynalazek zostanie dalej opisany bardziej szczegółowo przy pomocy nie ograniczających wykonań, w odniesieniu do towarzyszących rysunków, w których:
figura 1 opisuje plazmid obejmujący gen G wirusa BRSV pod kontrolą promotora hCMV do szczepienia bydła przeciwko temu wirusowi;
figura 2 przedstawia wykres pokazujący skuteczność szczepienia przeciwko wirusowi BRSV drogą domięśniową (zwierzę 1349) oraz drogą śródskórną (zwierzęta 1352 i 1353), przy czym dni zaznaczono na osi x, zaś miano zakaźne na osi y.
Wytwarzanie syntetycznego genu G BRSV
Bydlęcy wirus oddechowy jest pneumowirusem z rodziny paranyxowirusów. Jest to otoczkowy wirus, który replikuje w cytoplazmie i posiada jednoniciowy genomowy RNA w odwrotnej orientacji. Genom BRSV koduje dwie główne glikoproteiny śródbłonowe, białko fuzji F i białko przylegania G
Syntetyczną konwersję genu G wytworzono przez usunięcie z tego genu potencjalnych sygnałów składania transkryptu (G Keil, Federal Research Centre for Virus Disease of Animals, Friedrich Loeffler Institute, D-17498, Insel Riems, Niemcy).
Region kodujący gen G został określony przez Lerch i in. (J. Virol. 1990, 64: 5559-5569). Region kodujący odpowiada 257 aminokwasom oraz charakterystyce glikoproteiny śródbłonowej typu U. Posiada ona domenę cytoplazmatyczną na końcu N, wielkości 40 aminokwasów, poprzedzającą domenę śródbłonową wielkości 25 aminokwasów. Pozostałość, 192 aminokwasy końca C, tworzą domenę zewnątrzkomórkową białka G Syntetyzowano sekwencję DNA, posiadającą otwartą ramkę odczytu kodującą dokładnie te same 257 aminokwasów co opisane przez Lerch i in., ale bez potencjalnego miejsca składania transkryptu. Przeprowadzono odwrotną translację 257 aminokwasów na wszystkie możliwe sekwencje DNA kodujące taką sekwencję aminokwasową. Przeprowadzono to stosując program do odwrotnej translacji sekwencji białkowej RTRaNs PCGene A. Bairoch, University of Geneva, Szwajcaria (In^^lliGenet^cs, Inc.). Potencjalne miejsca składania określono stosując program do analizy kwasu nukleinowego „Signal”. Program ten oparty jest na metodzie ważonej macierzy Stadena (1984, Nuci. Acids Res. 12: 505-519). Program ten identyfikuje potencjalne miejsca donorowe składania transkryptu (granice introin/egzon) i potencjalne miejsca akceptorowe składania (granice egzon/intron). Przy pomocy tych danych możliwe było mutowanie wszystkich potencjalnych silnych sygnałów składania bez modyfikowania zdolności kodowania białka. W szczególności, dinukleotydy GT, które mogą tworzyć końce 5' intronu oraz dinukleotydy AG, które mogą tworzyć końce 3' intronu usunięto, gdy było to możliwe.
W celu syntetyzowania odpowiedniej sekwencji nukleotydowej kodującej białko G syntetyzowano oligonukleotydy długości około 100 reszt, pokrywające dwie nici kompletnej sekwencji, przy użyciu syntezatora DNA (przykładowo 381A DNA Synthesizer Perkin Elmer/Applied Biosystems; możliwe jest również zastosowanie oligonukleotydów dostępnych w handlu). Oligonukleotydy komplementarne hybrydyzowano w taki sposób, że wytworzyły fragment dwuniciowy i klonowano do wektorów prokariotycznych, takich jak pUCIS albo pUC 19. Stosując odpowiednie miejsca enzymów restrykcyjnych, klonowane fragmenty DNA połączono ze sobą w prawidłowej kolejności stosując standardowe procedury klonowania (Sambrook i in., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. 2, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Sekwencję nukleotydową fragmentu DNA, który z nich powstał określono przy użyciu standardowych procedur sekwencjonowania (Sambrook i in.) w celu sprawdzenia prawidłowości sekwencji.
Konstruowanie euariotycznego wektora ekspresyjnego, obejmującego gen G po promotorze hCMV
189 184
W celu zapewnienia ekspresji, syntetyczny gen G klonowano do wektora. W tym wstępnym badaniu zastosowano wektor bezpośrednio dostępny w laboratorium, eukariotyczny wektor ekspresyjny 175hCMV. Wektor plazmidowy zawierał dwa fragmenty pochodzące z wirusa BHV1, które otaczały początek glikoproteiny E z holenderskiego szczepu BHV1 zwanego Lam (Van Engelenburg i in., 1994, J. Gen. Virol. 75: 3211-2318). Fragment flankujący z lewej strony (Cterm gl) rozpoczynał się w miejscu Pstl, położonym w otwartej ramce odczytu glikoproteiny gl i kończył się w miejscu BstBI (albo AsuII), 17 nukleotydów powyżej początku otwartej ramki odczytu genu gE. Fragment ten oznaczono Cterm gl. Fragment flankujący po prawej stronie rozpoczynał się w miejscu EcoNI, położonym na poziomie kodonu stop otwartej ramki odczytu gE i kończył się na poziomie pierwszego miejsca Smal powyżej we fragmencie powtórzeń końcowych (Tr). Fragment ten kodował gen US9. Fragment ten zaznaczono US9 i TR. Te dwa fragmenty klonowano w miejsce Pstl i EcoRI (tępo zakończone) pUC18. Pomiędzy miejscem BstBI i miejscem EcoNI, klonowano fragment Asel (tępo zakończony) wielkości 720 bp, zawierający większą część ludzkiego promotora bezpośrednio wczesnego wirusa cytomegalii (hCMV-P) z regionem łącznikowym i kończący się sygnałem poliadenylacji (PoliA). Syntetyczny gen G klonowano w określonej orientacji wewnątrz miejsca Smal regionu łącznikowego. Otrzymany plazmid nazwano PR608; patrz figura 1.
Kontrola ekspresji in vitro G z plazmidu PR608
Przeprowadzono badanie przemijającej ekspresji w celu zbadania, czy plazmid PR608 może wyrażać białko G. W tym celu, 1,5 pg oczyszczonego DNA plazmidu PR608 transfekowano do jednowarstwy bydlęcych płodowych komórek tchawicy (EBTr) w hodowli. Te komórki EBTr hodowano w minimalnej niezbędnej pożywce Eagle'a z 10% płodową surowicą bydlęcą (Integra) i antybiotykami (125 IU penicyliny (Gist-Brocades), 125 pg streptomycyny (Biochemie), 37,5 IU nystatyny (Sigma) i 37,5 g kanamycyny (Sigma) na ml). Transfekcję przeprowadzono według standardowej metody precypitacji fosforanem wapnia według Grahama i van der Eb (1973, Virol. 52: 456-467). Po transfekcji, plazmidowy DNA przenoszony jest do jądra komórek transfekowanych i kodowane białka wyrażane są przy użyciu mechanizmu komórki gospodarza. Normalnie, jedynie 0,01% do 0,1% komórek transfekowanej jednowarstwy intemalizuje DNA i wyraża kodowane geny.
Preparatyka DNA do szczepienia polinukleotydem
DNA plazmidu PR608 wytworzono przez dodanie 100 p1 banku E. coli KI2 w glicerynie, komórek DH5aF- zawierających plazmid PR608, do 2 litrów pożywki LB, która jest standardową pożywką do hodowli bakterii. Tę 2-Iitrową hodowlę inkubowano w 37°C przez 20 godzin i amplifikowane komórki zebrano stosując butelki 250-ml i wirówkę IEC Centra8 R ustawioną na maksymalną prędkość. DNA plazmidu PR608 izolowano z komórek osadu po przeprowadzeniu standardowej lizy alkalicznej metodą Birmboima i Doły (Sambrook i in., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. 2, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Wyizolowany plazmidowy DNA rozpuszczono w 20 ml TE (10 mM Tris i 1 mM EDTA, pH 7,4) i poddano elektroforezie w celu określenia stężenia DNA i oceny jakości DNA. Z normalnej hodowli 2-litrowej możliwe jest wyizolowanie 40 mg plazmidu; około 60% plazmidu PR608 znajduje się w postaci superskręconej, zaś około 30% w postaci kolistej, rozluźnionej.
Preparat plazmidu przechowuje się w -20°C. Przed zastosowaniem DNA plazmidu PR608, roztwór DNA rozcieńcza się do 0,5 mg/ml w 1XPBS i TE. Tak buforowany roztwór DNA pipetuje się do 10 ml butelek pasujących do urządzenia Pigjet i przechowuje w 4°C do zastosowania w ciągu 1 -2 godzin.
Urządzenie do podawania Pigjet
Urządzenie typu Pigjet, typu przenośnego, do podawania, obejmuje obudowę zaopatrzoną w uchwyt, komorę kalibrowaną na 0,2 ml i tłok utrzymywany w pozycji wewnątrz komory przez sprężynę połączoną integralnie z tłokiem.
Urządzenie obejmuje oprócz tego głowicę z 5 dyszami, przeznaczoną do kalibracji strugi, tzn. jedną głowicę z 1 dyszą i urządzeniem filtrującym w celu uniknięcia wstrzyknięcia jakichkolwiek zanieczyszczeń. Dysze są od siebie nieco oddzielone.
Ciśnienie strugi u wylotu dyszy można ustalić na 100 bar w przypadku Pigjet z 1 dyszą.
189 184
Doprowadzone odpowiednim sposobem ciśnienie sprężyny powoduje ruch tłoka i aspirację dawki szczepionki z odpowiedniego zbiornika albo fiolki podłączonej do obudowy.
Zwolnienie sprężyny powoduje powrót tłoka i wyrzucenie dawki przez dyszę(e).
Badania szczepienia i prowokacji cielęta wolne od swoistych organizmów patogennych otrzymane z Caesarean, pozbawione pokarmu matczynego hodowano w odosobnieniu. Cielęta szczepiono 6-krotnie w odstępach 1-tygodniowych, począwszy od wieku 6 tygodni. 2 zwierzęta szczepiono drogą śródskómą przy użyciu Pigjet z jedną dyszą (Endoscoptic, Laons, Francja), zaś 2 zwierzęta szczepiono droga domięśniową przy użyciu igły 25-gauge. Pigjet ustawiano w taki sposób, że głowica pozostawała w kontakcie ze skórą i prostopadle do niej, w taki sposób, żeby struga szczepionki miała kierunek prostopadły do skóry. Każde szczepienie obejmowało 500 pg plazmidowego DNA w 1 ml buforu fosforanowego PBS. Szczepienie śródskóme obejmowało 5 wstrzyknięć po 0,2 ml w skórę tylnej nogi, zaś szczepienie domięśniowe obejmowało 1 wstrzyknięcie w mięsień łydki. Przed wstrzyknięciem golono skórę.
Miana przeciwciał pokazane w tabeli 1 otrzymano przez:
- szczepienie w tygodniu 0,1, 2, 3, 4, 5;
- ekspozycję w tygodniu 6;
e śledzenie miana przeciwciała w tygodniach 0-8.
0 1 2 3 4 5 6 7 8
cielę 1352 Pigjet <5 <5 <5 80 640 1280 640 1280 >5120
cielę 1453 Pigjet <5 <5 <5 40 1280 640 640 640 a
cielę 1349 IM <5 <5 <5 <5 <5 <5 <5 <5 <5
cielę 1350 IM <5 <5 <5 a
a: cielęta te zabito z powodu wystąpienia problemów zdrowotnych związanych ze szczepieniem
Po wstrzyknięciach DNA, wystąpienie przeciwciał obserwowano pod koniec 3 tygodnia u zwierząt szczepionych drogą ID, zaś pojawienie się wysokich mian obserwowano od 4 tygodnia, po czym osiągały one plateau.
Cielęta poddano ekspozycji na zakaźnego wirusa BRSV. Zakażenie wirusem przeprowadzono w 6 tygodniu po pierwszym szczepieniu, przez donosowe wkroplenie 1 ml szczepu wirusa Odijk (103,8 TCFD5o/ml) do każdego z nozdrzy.
W celu oceny skuteczności szczepienia, wydzielanego wirusa śledzono przez określanie miana zakaźnego TCIDso/ml przez 12 dni po zakażeniu, w wymazach nosowo-krtaniowych na wacikach (sw) oraz w płynie płuczącym z płuc (Lav) (figura 2).
Można było wykazać, że plazmid kodujący białko G BRSV podawany drogą śródskómą w strudze płynu chronił przed prowokacją tym wirusem. Szczepienie śródskóme przy użyciu urządzenia do podawania z głowicą o pojedynczej dyszy gwałtownie wywoływało wysokie miana przeciwciał przeciwko białku G, czego nie obserwowano przy wstrzykiwaniu domięśniowym. Oprócz tego, zakaźne miana wirusa BRSV w płynie płuczącym z płuc oraz w wymazach nosowo-krtaniowych były wysokie u cieląt szczepionych droga domięśniową i praktycznie nieobecne u cieląt szczepionych droga śródskómą. Objawy kliniczne były mierne i nie różniły się istotnie między zwierzętami.
Bardzo dobre bezpieczeństwo obserwowano również, guy stosowano Pigjet, technika ta nie wymagała wstępnego wywołania stanu zapalnego w indukowanej tkance, jak ma to miejsce w przypadku cząstek ze złota.
Oprócz tego, co jest warte zaznaczenia, uzyskano ochronę przy użyciu białka G, które nie jest bardzo immunogenne (Collins w: The Paramyxoviruses, 1991, wyd. Kingsbury, Nowy York, Plenum Press), zaś wysokie miano przeciwciał otrzymane po szczepieniu śródskómym jest porównywalne z otrzymanym podczas naturalnej infekcji albo szczepienia żywą szczepionką.
189 184
189 184
Figura 2
TCIDso/πιΙ
-o-IM/sw(1349) -B-IM/lav(1349)
ID/sw (1352+1353) - ID/lav (1352) hCMV-P PoliA
pUC18
Figura 1
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 2,00 zł.

Claims (15)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Kompozycja szczepionki polinukleotydowej przeznaczonej dla bydła, znamienna tym, że obejmuje skuteczną śródskómie ilość plazmidu zawierającego sekwencję DNA kodującą immunogen czynnika patogennego bydła oraz funkcjonalnie połączony promotor eukariotyczny umożliwiający ekspresję tego immunogenu in vivo w komórkach skóry i przeznaczona do śródskómego podawania urządzeniem do strugowego podawania płynu.
  2. 2. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1, znamienna tym, że plazmid występuje w nośniku przydatnym do podawania drogą śródskórną w objętości dawki od 0,1 do 0,9 ml, korzystnie od 0,2 do 0,6, jeszcze korzystniej od 0,4 i 0,5 ml, przy czym można ją podawać śródskómie w strudze płynu.
  3. 3. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, że plazmid występuje w kompozycji szczepionki w ilości skutecznej śródskómie od 10 ng do 1 mg, korzystnie od 100 ng do 500 pg, korzystniej od 0,5 μ-g do 50 pg.
  4. 4. Kompozycja szczepionki według zastrz. 3, znamienna tym, że sekwencja DNA koduje immunogen czynnika patogennego wybranego z grupy obejmującej wirusa BRSV, wirusa IBR, wirusa BVD i wirusa PI-3.
  5. 5. Kompozycja szczepionki według zastrz. 4, znamienna tym, że sekwencja DNA koduje gen gB i/lub gen gD wirusa IBR.
  6. 6. Kompozycja szczepionki według zastrz. 4, znamienna tym, że sekwencja DNA koduje gen G i/lub gen F BRSV.
  7. 7. Kompozycja szczepionki według zastrz. 4, znamienna tym, że sekwencja DNA koduje E2 i/lub El z wirusa bVd.
  8. 8. Kompozycja szczepionki według zastrz. 4, znamienna tym, że sekwencja DNA koduje HN i/lub F z wirusa PI-3.
  9. 9. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1, znamienna tym, że promotor jest silnym promotorem eukariotycznym, takim jak promotor IE hCMV
  10. 10. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1, znamienna tym, że jest zapakowana do fiolek wielodawkowych pasujących do urządzenia do strugowego podawania płynów, korzystnie Pigjet.
  11. 11. Przenośna jednostka do szczepienia bydła, znamienna tym, że obejmuje zestaw do strugowego podawania płynów i odpowiednią fiolkę obejmującą kilką dawek kompozycji szczepionki określonej w zastrz. 1, przy czym urządzenie do podawania zaprojektowane jest w taki sposób, że dostarcza dawkę kompozycji szczepionki śródskómie.
  12. 12. Przenośna jednostka do szczepienia bydła według zastrz. 11, znamienna tym, że zestaw obejmuje głowicę uwalniającą wyposażoną w od 1 do 10 dysz, zwłaszcza 4 do 6, korzystnie 5 albo 6.
  13. 13. Zastosowanie plazmidu obejmującego sekwencję DNA kodującą immunogen bydlęcy i promotor umożliwiający wyrażanie tego immunogenu, do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej przydatnej do podawania śródskómego urządzeniem do strugowego dostarczania płynów.
  14. 14. Zastosowanie według zastrz. 13, znamienne tym, że plazmid w kompozycji szczepionki występuje w ilości od 10 ng do 1 mg, korzystnie od 100 ng do 500 pg, korzystniej od 0,5 fig do 50 pg w objętości od 0,1 do 0,9 ml, korzystnie od 0,2 do 0,6, jeszcze korzystniej od 0.4 do 0,5 ml.
  15. 15. Zastosowanie według zastrz. 13, znamienne tym, że sekwencja DNA koduje immunogen czynnika patogennego wybranego z grupy obejmującej wirusa BRSV, wirusa IBR, wirusa BVD i wirusa PI-3.
    189 184
PL97331237A 1996-07-19 1997-07-16 Kompozycja szczepionki polinukleotydowej dla bydła podawana drogą śródskórną, przenośna jednostka do szczepienia bydła oraz zastosowanie plazmidu do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej PL189184B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609402A FR2751228B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique
PCT/FR1997/001322 WO1998003196A1 (fr) 1996-07-19 1997-07-16 Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL331237A1 PL331237A1 (en) 1999-07-05
PL189184B1 true PL189184B1 (pl) 2005-07-29

Family

ID=9494496

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97331237A PL189184B1 (pl) 1996-07-19 1997-07-16 Kompozycja szczepionki polinukleotydowej dla bydła podawana drogą śródskórną, przenośna jednostka do szczepienia bydła oraz zastosowanie plazmidu do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej

Country Status (23)

Country Link
US (2) US6451770B1 (pl)
EP (1) EP0918540B1 (pl)
JP (1) JP2000515522A (pl)
AP (1) AP9701045A0 (pl)
AR (1) AR007863A1 (pl)
AT (1) ATE224732T1 (pl)
AU (1) AU722878B2 (pl)
BR (1) BR9710498A (pl)
CA (1) CA2261334C (pl)
CO (1) CO4700344A1 (pl)
CZ (1) CZ298216B6 (pl)
DE (1) DE69715879T2 (pl)
ES (1) ES2184122T3 (pl)
FR (1) FR2751228B1 (pl)
HU (1) HU224833B1 (pl)
ID (1) ID19427A (pl)
IL (1) IL127914A (pl)
MA (1) MA24271A1 (pl)
MX (1) MXPA99000684A (pl)
NZ (1) NZ333752A (pl)
PL (1) PL189184B1 (pl)
WO (1) WO1998003196A1 (pl)
ZA (1) ZA976285B (pl)

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7294338B2 (en) * 1996-07-19 2007-11-13 Merial Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
FR2751228B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-20 Rhone Merieux Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique
US7078388B2 (en) * 2000-01-21 2006-07-18 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
FR2804028B1 (fr) * 2000-01-21 2004-06-04 Merial Sas Vaccins adn ameliores pour animaux de rente
US6852705B2 (en) 2000-01-21 2005-02-08 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP1606419A1 (en) 2003-03-18 2005-12-21 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
WO2005049794A2 (en) 2003-11-13 2005-06-02 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods of characterizing infectious bursal disease virus
ATE510928T1 (de) 2004-02-19 2011-06-15 Univ Alberta Leptinpromotor-polymorphismen und verwendungen davon
CA2570156C (en) * 2004-06-04 2014-09-30 Merial Limited Needle-free administration of felv vaccines
ES2343270T3 (es) 2005-04-25 2010-07-27 Merial Ltd. Vacunas contra el virus nipah.
US8591457B2 (en) 2005-08-10 2013-11-26 Alza Corporation Method for making a needle-free jet injection drug delivery device
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
EP3147296A1 (en) 2005-11-14 2017-03-29 Merial, Inc. Gene therapy for renal failure
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
KR101445903B1 (ko) 2007-05-02 2014-09-29 메리얼 리미티드 향상된 발현 및 안정성을 갖는 ｄｎａ 플라스미드
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
EP2367566B2 (en) 2008-11-28 2019-11-27 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Recombinant avian influenza vaccine and uses thereof
CN102428099B (zh) 2009-04-03 2016-03-16 梅里亚有限公司 运载新城疫病毒的禽疫苗
CA2785653C (en) 2009-12-28 2018-05-01 Merial Limited Recombinant ndv antigen and uses thereof
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
CN103492410A (zh) 2010-03-12 2014-01-01 梅里亚有限公司 蓝舌病毒重组疫苗和其使用
MX344103B (es) 2010-08-31 2016-12-05 Merial Ltd Vacunas de virus herpes vectorizado con virus de enfermedad de newcastle.
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
EP2694678A2 (en) 2011-04-04 2014-02-12 Netherland Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
AU2012240240A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
US9216213B2 (en) 2011-04-20 2015-12-22 Merial, Inc. Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
CN103945864A (zh) 2011-04-25 2014-07-23 先进生物学实验室股份有限公司 截短的hiv包膜蛋白(env)、其相关方法和组合物
CA2837582C (en) 2011-05-27 2021-03-02 Merial Limited Genetic vaccines against hendra virus and nipah virus
US9669085B2 (en) 2011-06-01 2017-06-06 Merial Inc. Needle-free administration of PRRSV vaccines
CN103841963B (zh) 2011-08-12 2018-04-24 梅里亚股份有限公司 用于生物产品特别是疫苗的真空辅助保存
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
NZ628270A (en) 2012-02-14 2016-09-30 Merial Inc Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and ox40 proteins, and vaccines made therefrom
MX353786B (es) 2012-02-14 2018-01-29 Merial Inc Vacunas de subunidades de rotavirus, metodos de preparacion y uso de las mismas.
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
EP2861248B1 (en) 2012-06-13 2017-11-15 Merial, Inc. Reassortant btv and ahsv vaccines
EP2968514A1 (en) 2013-03-12 2016-01-20 Merial, Inc. Reverse genetics schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof
NZ731659A (en) 2014-11-03 2018-10-26 Merial Inc Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
PL3313864T3 (pl) 2015-06-23 2022-01-03 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Rekombinowane wektory wirusowe zawierające drugorzędne białko prrsv oraz sposoby ich wytwarzania i zastosowania
CA2996143A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Merial, Inc. Fcv recombinant vaccines and uses thereof
FI3355915T3 (fi) 2015-09-29 2024-01-12 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Koirien parvoviruksen (CPV) viruksen kaltaisten hiukkasten (VLP) rokotteet ja niiden käytöt
KR102153303B1 (ko) 2015-11-23 2020-09-09 뵈링거 잉겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인코포레이티드 Fmdv 및 e2 융합 단백질 및 이의 용도
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2348709A1 (fr) * 1976-04-23 1977-11-18 Pistor Michel Procede de traitement mesotherapique et dispositif d'injection,formant micro-injecteur automatique,en comportant application
FR2652257B1 (fr) * 1989-09-26 1992-11-27 Rhone Merieux Installation portative de vaccination porcine.
WO1992001471A1 (en) * 1990-07-24 1992-02-06 The Uab Research Foundation Methods of use of bovine respiratory syncytial virus recombinant dna, proteins vaccines, antibodies, and transformed cells
GB9118204D0 (en) * 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
US5643578A (en) * 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
ES2152323T3 (es) * 1993-07-31 2001-02-01 Weston Medical Ltd Inyector sin aguja.
WO1995020660A2 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit
US5736524A (en) * 1994-11-14 1998-04-07 Merck & Co.,. Inc. Polynucleotide tuberculosis vaccine
FR2751228B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-20 Rhone Merieux Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique

Also Published As

Publication number Publication date
NZ333752A (en) 2000-06-23
US6451770B1 (en) 2002-09-17
ES2184122T3 (es) 2003-04-01
IL127914A0 (en) 1999-11-30
US6803361B2 (en) 2004-10-12
CO4700344A1 (es) 1998-12-29
CA2261334A1 (en) 1998-01-29
IL127914A (en) 2001-05-20
MXPA99000684A (es) 2006-02-10
JP2000515522A (ja) 2000-11-21
HUP9902792A3 (en) 2000-03-28
EP0918540B1 (fr) 2002-09-25
US20020137716A1 (en) 2002-09-26
ATE224732T1 (de) 2002-10-15
WO1998003196A1 (fr) 1998-01-29
HUP9902792A2 (hu) 1999-12-28
AR007863A1 (es) 1999-11-24
AU722878B2 (en) 2000-08-10
DE69715879T2 (de) 2003-01-23
CA2261334C (en) 2010-11-16
FR2751228B1 (fr) 1998-11-20
DE69715879D1 (de) 2002-10-31
ID19427A (id) 1998-07-09
CZ298216B6 (cs) 2007-07-25
HU224833B1 (en) 2006-03-28
BR9710498A (pt) 2000-01-18
EP0918540A1 (fr) 1999-06-02
ZA976285B (en) 1999-01-19
MA24271A1 (fr) 1998-04-01
FR2751228A1 (fr) 1998-01-23
PL331237A1 (en) 1999-07-05
CZ10699A3 (cs) 1999-04-14
AP9701045A0 (en) 1997-07-31
AU3773297A (en) 1998-02-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL189184B1 (pl) Kompozycja szczepionki polinukleotydowej dla bydła podawana drogą śródskórną, przenośna jednostka do szczepienia bydła oraz zastosowanie plazmidu do wytwarzania kompozycji szczepionki polinukleotydowej
RU2305559C2 (ru) Вакцина свиней против респираторных патологий и патологий репродукции свиней
RU2312676C2 (ru) Формула кошачьей вакцины
KR100620302B1 (ko) 개 질병, 특히 호흡기 및 소화성 질병 치료용폴리뉴클레오티드 백신 제제
ES2210548T3 (es) Formula de vacuna polinucleotidica, particularmente para el tratamiento de la patologia respiratoria en los bovinos.
JP2000516199A (ja) ウマの予防用ポリヌクレオチドワクチン製剤
KR20000065258A (ko) 조류 폴리뉴클레오티드 백신 제제
Andrew et al. Protection of pigs against classical swine fever with DNA-delivered gp55
ES2283150T3 (es) Mutantes del virus de la rabia atenuados estables y vacunas vivas de los mismos.
US20050070700A1 (en) Equine arteritis virus vaccine
DeMartini et al. Raccoon poxvirus rabies virus glycoprotein recombinant vaccine in sheep
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
EP1346998B1 (en) Equine arteritis virus vaccine
AU762901B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating porcine respiratory and reproductive diseases
Chhabilal Patel et al. Cloning and expression of fusion gene of Newcastle disease virus in a eukaryotic expression system.
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter