PL187439B1 - Zastosowanie rybawiryny - Google Patents
Zastosowanie rybawirynyInfo
- Publication number
- PL187439B1 PL187439B1 PL97328003A PL32800397A PL187439B1 PL 187439 B1 PL187439 B1 PL 187439B1 PL 97328003 A PL97328003 A PL 97328003A PL 32800397 A PL32800397 A PL 32800397A PL 187439 B1 PL187439 B1 PL 187439B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ribavirin
- cells
- expression
- pma
- activated
- Prior art date
Links
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 title claims abstract description 77
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 title claims abstract description 64
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 title claims abstract description 64
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title description 40
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims abstract description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims abstract 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 49
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims description 19
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims description 19
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 12
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 37
- 108040006852 interleukin-4 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 28
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 27
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 11
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 8
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 7
- -1 ribavirin nucleoside Chemical class 0.000 description 7
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 5
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 5
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 4
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 2
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 208000009388 Job Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 229910006074 SO2NH2 Inorganic materials 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100054666 Streptomyces halstedii sch3 gene Proteins 0.000 description 2
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 2
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N aminyl Chemical compound [NH2] MDFFNEOEWAXZRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 206010051040 hyper-IgE syndrome Diseases 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 2
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 229940100050 virazole Drugs 0.000 description 2
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- SDSVJYOOAPRSDA-RPCQODIISA-N 13-Acetylphorbol Chemical compound C1=C(CO)C[C@]2(O)C(=O)C(C)=C[C@H]2[C@@]2(O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@]3(OC(C)=O)C(C)(C)[C@H]3[C@@H]21 SDSVJYOOAPRSDA-RPCQODIISA-N 0.000 description 1
- ZBNZAJFNDPPMDT-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-5-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CNC=N1 ZBNZAJFNDPPMDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229910014033 C-OH Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006519 CCH3 Chemical group 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 229910014570 C—OH Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000000291 Nematode infections Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUQJULCGNZMBEF-UHFFFAOYSA-N Prostratin Natural products COC(=O)C12CC(C)C3(O)C(C=C(CO)CC4(O)C3C=C(C)C4=O)C1C2(C)C NUQJULCGNZMBEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037075 Protozoal infections Diseases 0.000 description 1
- XESARGFCSKSFID-UHFFFAOYSA-N Pyrazofurin Natural products OC1=C(C(=O)N)NN=C1C1C(O)C(O)C(CO)O1 XESARGFCSKSFID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101001095258 Rattus norvegicus Prolyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 206010038910 Retinitis Diseases 0.000 description 1
- 108020001027 Ribosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010054979 Secondary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000002955 autoallergenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003028 elevating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003090 exacerbative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002391 heterocyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 229940105132 myristate Drugs 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- XESARGFCSKSFID-FLLFQEBCSA-N pirazofurin Chemical compound OC1=C(C(=O)N)NN=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 XESARGFCSKSFID-FLLFQEBCSA-N 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229910052714 tellurium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
- A61K31/52—Purines, e.g. adenine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/052—Imidazole radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/056—Triazole or tetrazole radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
1 . Zastosowanie rybawiryny do wy- twarzania leku do leczenia choroby cha- rakteryzujacej sie hamowaniem odpowie- dzi Th1 i pobudzeniem odpowiedzi Th2, zwlaszcza alergii, choroby autoimmuno- logicznej i robaczycy, przy czym lek spreparowany jest do podawania w daw- ce, która pobudza odpowiedz Th1 a ha- muje odpowiedz Th2. Fig. 6A Fig. 6B Fig 6C Fig 6D Fig. 6 PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie rybawiryny do wytwarzania leku do leczenia choroby charakteryzującej się hamowaniem odpowiedzi Thl i pobudzeniem odpowiedzi Th2, zwłaszcza alergii, choroby autoimmunologicznej i robaczycy.
Limfokiny stanowią grupę polipeptydów należącą do rodziny cytokin, tzn. cząsteczek podobnych do hormonów, które mogą wpływać na rozliczne funkcje komórkowe oraz umożliwiają komunikację pomiędzy różnymi komórkami. Ostatnie badania pomogły wyjaśnić rolę jaką limfoliny pełnią w reakcji immunologicznej. Wytwarzanie limfokin przez komórki pomocnicze CD4 (jak również CD8+) przebiega często w zgodzie z jednym z dwóch fenotypów, Thl lub Th2, tak u myszy jak i u ludzi (Romagnani, 1991, Immunol. Today 12:256-257, Mosmann, 1989, Annu. Rev. Immunol., 7:145-173). Komórki Thl wytwarzają interleukinę 2 (IL-2), czynnik martwicy raka (TNFa) oraz interferon gamma (IFNy) i są one w pierwszym rzędzie odpowiedzialne za odporność komórkową, taka jak odczyn opóźnionej nadwrażliwości. Komórki Th2 wytwarzają interleukiny IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 oraz IL-13 i są przede wszystkim zaangażowane w proces zapewnienia optymalnego wsparcia humoralnych reakcji immunologicznych, takich jak izotypowe przełączanie przeciwciał typu IgE oraz IgG4 (Mosmann, 1989, Annu. Rev. Immunol., 7:145-173).
Silnie spolaryzowane reakcje Thl oraz Th2 nie tylko odgrywają różne role w blokadzie ochronnej ale i prowokują również różne reakcje immunopatologiczne. Reakcje typu Thl występują w specyficznych dla danych organów procesach autoimmunizacji, takich jak doświadczalne autoalergiczne zapalenie błony naczyniowej siatkówki (Dubey et al., 1991, Eur. Cytokine Network 2:147-12), doświadczalne autoalergiczne zapalenie mózgu (EAE) (Beraud et al., 1991, Celi Immunol. 133:379-389), oraz cukrzyca insulinozależna (Hahn et al., 1987, Eur. J.Immunol. 18:2037-2042), w kontaktowym zapaleniu skóry Kapsenberg et al., Immunol. Today 12:392-395), oraz w niektórych przewlekłych stanach zapalnych. Z kolei reakcje typu Th2 odpowiedzialne są za wywoływanie alergicznych zaburzeń atopowych (skierowanych przeciw pospolitym alergenom środowiskowym) takich jak astma alergiczna (Walker et al., 1992, Am. Rev. Resp. Dis. 148:109-115) oraz atopowe zapalenie skóry (van der Heijden et al., 1991, J. Invest. Derm. 97:389-394), podejrzane są o zaostrzanie związanych z opuchlizną stanów zapalnych wywołanych pierwotniakami takimi jak pasożyty jelitowe (helminths) (Finkelman et al., 1991,
187 439
Immunoparasitol. Today 12: A62-66) czy leiszmania wielkie (Caceres-Dittmar et al., Clin. Exp. Immunol. 91:500-505), indukowane są w pewnych przypadkach pierwotnych niedoborów odporności, takich jak zespół hiper-IgE (Del Prete et al., 1989, J. Clin.. Invest. 84:18301835) oraz zespół OmennOs (Schandene et al., 1993, Eur J. Immunol. 23:56-60) oraz są związane ze zredUkowanym zespołem hiper-IgE (Del Prete et al., 1989, J. Clin. Invest. 84:18301835) oraz zespołem OmennOs (Schandene et al., 1993, Eur. J. Immunol. 23:56-60) a także są związane ze zmniejszona zdolnością do powstrzymywania replikacji wirusa HTV (Barker et al., 1995, Proc. Soc. Nat. Acad. Sei. USA 92:11135-11139).
Jest więc oczywiste, że w przypadku wspomnianych powyżej stanów chorobowych modulacja profili limfokin może przynosić korzyści terapeutyczne. Pobudzenie odpowiedzi Th1 będzie najprawdopodobniej prowadziło do odwrócenia fenotypu Th2 i na odwrót. Zostało wykazane, że monoklonalne przeciwciała (mAb) przeciwko limfokinom, same limfokiny a także inne czynniki, takie jak antyutleniacze tiolowe (Jeannin et al., 1995, J. Exp. Med. 182:1785-1792) odwracają patogenezę pewnych chorób poprzez inhibicję pewnych, promujących chorobę efektów cytokiny, czy to typu Th1 czy też Th2. Dla przykładu, wewnątrzkomórkowe infekcje pierwotniakowe ograniczne są za pomocą IFNy, zaostrzane zaś za pomocą IL-4, podczas gdy infekcje nicieniowe kontrolowane są za pomocą IL-4, zaostrzane zaś za pomocą IFNy (Heinzel et al., 1989, J. Exp. Med. 162:59-72, Else et al., 1994, J. Exp. Med. 179:347351. Cukrzycę insulinozależną u myszy NOD oraz EAE u myszy i szczurów można złagodzić podawaniem IL-4 oraz antylFNymAb zanim choroba się rozwinie (Rapoport et al., 1993, J Exp. Med. 178:87-99, Racke et al., 1994, J. Exp. Med. 180:1961-1966, Campbell et al., 1991, J. Clin. Invest. 87:739-742). Dodatkowo, reakcja przeszczepu przeciw gospodarzowi (GVHD), która charakteryzuje się zespołem typu toczenia rumieniowatego związana jest z wytwarzaniem limfokiny Th2 i jest ona hamowana za pomocą przeciwciała anty-IL-4 (Umland et al., Clin. Immunol.. lmmunopathol. 63:66-73). Z drugiej strony, cytokiny Th1 wytwarzane są w ostrych przypadkach GVHD, w których donorowe komórki T typu CD8+ rozwijają się w CTL po czym niszczą system odpornościowy biorcy. Leczenie za pomocą przeciwciał monoklonalnych mAb typu anty-IFNy lub antyTFNa łagodzi przebieg choroby, zaś leczenie za pomocą przeciwciał monoklonalnych mAb typu anty-IL2 przekształca GVHD o ostrym przebiegu w GVHD typu autoalergicznego (Via i Finkelman, 1993, Int.Immunol. 5:565-572).
Kliniczne próby leczenia za pomocą IL-2, zarówno natywnego jak i rekombinacyjnego, pacjentów zakażonych wirusem HIV prowadzone są od roku 1993 (Volberding et al., 1987, AIDS Res. Hum. Retroviruses, 3:115-124). Wykorzystywany jest tu opisywany w literaturze związek pomiędzy rozwojem AIDS a zmianą obrazu wytwarzania limfokiny (Clerici and Shearer, 1994, Immunol. Today 15:575-581). U zarażonego osobnika, u którego następuje rozwój choroby z czasem ma miejsce obniżka ekspresji limfokin Th1, takich jak IL-2 (Maggi et al., 1987, Immunol. Today 17:1685-1690, Gruters et al., 1990, Eur. J. Iwnunol . 20:1039-1044, Clerici et al., 1993, J. Clin. Invest. 91:759-765), której towarzyszy wzrost wytwarzania limfokin Th2, takich jak IL-4 oraz IL-10 (Clerici et al., 1994, J. Clin. Invest. 93:768-775, Hoffman et al., 1985, Wrology 147:326-335). Komórki typu T u leczonych za pomocą IL-2 pacjentów bezobjawowych oraz przeżywających dłuższe okresy czasu wzmacniały swoje działanie przeciw wirusowi HIV, zaś podawanie IL-4 oraz IL-10 obniżało ich zdolność do powstrzymywania replikacji wirusa i do wytwarzania IL-2 (Barker et al., 1995, Proc. Soc. Nat. Acad. Sci. USA 92:11135-11139).
Te obecnie stosowane immunomodulacyjne metody terapii (przeciwciała monoklonalne mAb oraz cytokiny rekombinacyjne) mają jednak również swoje ograniczenia. Na przykład przy przewlekłym podawaniu przeciwciał monoklonalnych, organizm zwierzęcia zaczyna wytwarzać własne przeciwciała przeciw tym przeciwciałom monoklonalnym ograniczając tym samym ich użyteczność. Opracowane zostały humanizowane przeciwciała monoklonalne, które wyraźnie obniżają ryzyko wywołania reakcji odpornościowej. Znajdują się one jednak ciągle w stadium rozwoju, a w dodatku te nowe przeciwciała monoklonalne typu mAb pozostają dużymi cząsteczkami białka co może utrudniać ich dotarcie na miejsce przeznaczenia. Leczenie w oparciu o cytokiny ma również swoje ograniczenia. Dla przykładu, leczenie autoalergicznej odmiany GVHD u myszy za pomocą IL-12 prowadzi do ostrych GVHD.
187 439
Rybawiryna (1-b-D-rybofuranosylo-1,2,4-triazolo-3-karboksyamid) jest syntetycznym nukleozydem zdolnym do hamowania replikacji wirusowego RNA oraz DNA (Huffman et al., 1973, Antimicrob. Agents Chemother., 3:235, Sidwell et al., 1972, Science 177:705). My potwierdziliśmy obserwacje innych badaczy, którzy sugerowali, że oprócz działania przeciwwirusowego rybawiryna wykazuje wpływ na pewne reakcje odpornościowe (patrz: Jolley i Suchil, 1984, Clinical Application of Ribavirin : str. 93-96). Potwierdziliśmy również obserwacje innych, którzy donosili, że rybawiryna wpływa na proliferację limfocytów T oraz B aktywowanych mitogenami i antygenami. (Tam et al., 1995 (wyniki nie zostały pokazane), Peavy et al., 1980, Infection and Immuniy 29: 583-589), a następnie w kombinacji z cyklosporyną. Rybawiryna wykazywała skuteczność w długotrwałych przyjęciach aloprzeszczepów (Jolley et al., 1988, Transplantation Proc. 20: 703-706).
Dodatkowo udało nam się znacznie posunąć badania do przodu w stosunku do poprzedniego stanu wiedzy poprzez wykazanie, że rybawiryna moduluje wzorzec cytokinowy reakcji immunologicznej przynajmniej częściowo poprzez wspieranie reakcji typu Th1 oraz ograniczanie reakcji typu Th2. Odkrycie to nie pozostaje w sprzecznści z dotychczasowym stanem wiedzy. Po pierwsze wiadomo, że rybawiryna hamuje obie funkcjonalne humoralne reakcje immunologiczne (Peavy et al., 1981, J. Immunol. 126: 861-864, Powers et al, 1982, Antimicrob. Agents Chemother., 22:108-114) jak również modulację wydzielania komórek sutkowych za pomocą IgE (Marquardt et al., 1987, J. Pharmacol. Exp. Therapeutics 240:145-149, (w obu procesach pośredniczą limfokiny Th2). Po drugie, rybawiryna antagonizuje przeciwirusowe działanie azydotymidyny (AZT) w limfocytach krwi obwodowej pobranej od pacjentów zarażonych wirusem HTV (Vogt et al., 1987, Science 235:1376-1379). Odkrycie to jest o tyle istotne, że AZT zmniejsza ekspresję receptora IL-2 (IL,-2R), lecz nie samego IL-2 (Viora and Camponeschi, 1995, Celi Imnunol. 163:289-295). Jest więc możliwe, że rybawiryna antagonizuje AZT poprzez modulowanie ekspresji IL-2 oraz podniesienie obniżonych poziomów IL2R. Po trzecie, leczenie za pomocą rybawiryny pacjentów o upośledzonym układzie odpornościowym chorych na przewlekłe GVHD (zaburzenie, w którym pośredniczy Th2) prowadzi do gwałtownego zatrzymania choroby, przy czym skutek ten nie był osiągany za pomocą konwencjonalnego leczenia immunosupresyjnego, takiego jak podawanie cyklosporyny oraz glukokortykoidów (Cassano, 1991, Bone Marrow Transplantation 7:247-248). Wreszcie leczenie za pomocą rybawiryny (przez okres jednego roku) pacjentów chorych na cukrzycę typu C (HCV) prowadziło do znacznie mniejszej liczby agregatów limfocytowych oraz do znacznie bardziej ograniczonych uszkodzeń wątroby niż miało to miejsce w przypadku pacjentów, którym podawano placebo (Dusheiko et al., 1994, Hepatology 20:206A). Obserwacja ta może odzwierciedlać fakt, że mimo iż zasadnicza reakcja immunologiczna na cukrzycę C odbywa się za pośrednictwen limfokin Th1, komórki T fenotypu Th0/Th2 mogą być zainfekowane przez HCV (Zignego et al., 1994, dane nieopublikowane) i że ta infekcja może spowodować dalsze zniszczenia hepatocytów za pomocą przeciwciał.
Zwięzły opis rysunków.
Tabela 1 przedstawia poziomy limfokin, IL-2, IL-4, TNFa oraz IFNy (pg/ml), spoczynkowe oraz aktywowane za pomocą układu PMA/jonomycyna, mierzone w supernatantach pozakomórkowych po upływie 48 oraz 72 godzin, jak również expresję powierzchniową receptorów IL-2 (IL-2R) oraz IL-4 (IL-4R) z ludzkich komórek typu T, mierzoną średnią intensywnością fluorescencji.
Figura 1 stanowi graficzne przedstawienie wpływu rybawiryny oraz interferonu alfa na pozakomórkową ekspresję IL-2, IL-4, TNFa oraz IFNy w limfocytach typu T aktywowanych za pomocą układu PMA/jonomycyna. Wyniki przedstawiono jako procent wzrostu ekspresji limfokin spowodowanego wyłącznie podaniem układu PMA/jonomycyna.
Figura 2 stanowi graficzne przedstawienie wpływu dawek rybawiryny wynoszących odpowiednio 2, 10 lub 50 mM, podawanych w obecności 2000 U/ml interferonu alfą (panele lewe) oraz wpływu dawek interferonu alfa wynoszących odpowiednio 500, 1000 lub 2000 U/ml, podawanych w obecności 10 mM rybawiryny (panele prawe) na pozakomórkową ekspresję IL-2 (A i C) oraz IL-4 (B i D) w limfocytach typu T aktywowanych za pomocą układu pMa /jonomycyna.
187 439
Figura 3 stanowi graficzne przedstawienie wpływu rybawiryny oraz interferonu alfa na ekspresję IL-2, IL-4, TNFa oraz IFNy w mRNA limfocytów typu T aktywowanych za pomocą układu PMAjonomycyna.
Figura 4 stanowi graficzne przedstawienie wpływu rybawiryny oraz interferonu alfa na powierzchniową ekspresję receptorów IL-2, IL-4 w limfocytach typu T aktywowanych za pomocą układu PMAjonomycyna. Wyniki przedstawiono jako procent wzrostu ekspresji limfokin spowodowanego wyłącznie podaniem układu PMA/jonomycyna.
Figura 5 stanowi graficzne przedstawienie wewnątrzkomórkowej ekspresji IL-2 w komórkach typu T spoczynkowych (A i E) oraz aktywowanych za pomocą CD4‘ (panel górny) lub CD8+ (panel dolny) traktowanych wyłącznie układem PMAjonomycyna (B i F) lub też układem PMA/jonomycyna w obecności 10 mM rybawiryny (C i G) albo w obecności 5000 U/ml interferonu alfa (D i H). Wyniki z jednego eksperymentu przedstawione są w postaci udziału procentowego komórek wykazujących podwójny pozytywny efekt wybarwienia dla IL-2 oraz dla CD4 lub CD8.
Figura 6 przedstawia wzory graficzne rozważanych analogów ryba\viryny.
Figura 7 stanowi zbiór wykresów przedstawiających wpływ różnych stężeń analogów rybawiryny na IL-2, TNFa, IFNy, IL-4 oraz IL-5.
Skrócony opis wynalazku.
Według jednego z aspektów niniejszego wynalazku nukleozyd rybawiryna podawana jest pacjentowi w takim zakresie dawek, który skutecznie moduluje ekspresję limfokin w aktywowanych komórkach typu T. W szczególności rybawiryna jest stosowana w celu ograniczenia reakcji komórek typu T, przebiegających za pośrednictwem fenotypu Th2 oraz wspierania reakcji komórek typu T, przebiegających za pośrednictwem fenotypu Thl.
Zamiast wiec podawać rybawirynę w jej dobrze znanej roli czynnika przeciwwirusowego używa się rybawiryny do leczenia zaburzeń równowagi ekspresji limfokin. Takie odchylenia od równowagi mogą towarzyszyć atopowym zaburzeniom alergicznym, takim jak astma alergiczna czy atopowe zapalenie skóry, infekcjom pasożytów takim jak robaczyca czy leiszmanioza oraz rozlicznym pierwotnym lub wtórnym niedoborom odpornościowym, które mogą lecz nie muszą być związane z zakażeniem wirusowym.
Według innych aspektów niniejszego wynalazku jeden analog rybawiryny lub też większa ich liczba podawany jest pacjentowi w takim zakresie dawek, który skutecznie moduluje ekspresje limfokin w aktywowanych komórkach typu T. Ten analog rybawiryny może być stosowany zarówno do ograniczenia jak i do wspomagania reakcji komórek typu T, przebiegających za pośrednictwem fenotypu Thl lub za pośrednictwem fenotypu Th2.
Szczegółowy opis wynalazku.
W zalecanym wariancie wykonania niniejszego wynalazku rybawiryna podawana jest pacjentowi doustnie w dawce pozwalającej osiągnąć poziom w płynie surowiczym wynoszący od 0,25 do 12,5 pM, ze szczególnym zaleceniem aby wynosił on w przybliżeniu 2,5 pM. W przypadku typowych osobników ten optymalny poziom w płynie surowiczym osiągnąć można podając w przybliżeniu 4,5 mg/kg wagi ciała dziennie w dawkach wynoszących od 200 do 1200 mg. Zalecane jest dzielenie dawek całkowitych na mniejsze dawki podawane kilkakrotnie w ciągu dnia.
Ponieważ rybawiryna od kilku lat znajduje się w handlu, znanych jest wiele jej form podawania jak i wiele różnych rodzajów dawek. Wszystkie te formy podawania oraz rodzaje dawek mogą być użyte. Dla przykładu, obok podawania doustnego rybawirynę podawać można dożylnie, domięśniowo, dootrzewnowo, miejscowo oraz tym podobnie, przy czym wszystkie te formy są znane. Kompozycje farmaceutyczne zawierające rybawirynę mogą również zawierać jeden lub większą liczbę farmakologicznie dopuszczalnych nośników, które mogą obejmować zarobki takie jak środki stabilizujące (w celu umożliwienia przechowywania długoterminowego), emulgatory, środki wiążące, środki zagęszczające, sole, konserwanty, rozpuszczalniki, środki dyspergujące, powleczenia, środki przeciwbakteryjne oraz przeciwgrzybiczne, czynniki izotoniczne oraz opóźniające absorpcję oraz tym podobne. Użycie tych nośników oraz odczynników wraz z substancjami aktywnymi farmakologicznie znane jest specjalistom w tej dziedzinie. Za wyjątkiem sytuacji kiedy nośnik lub odczynnik jest niekompaty6
187 439 bilny z rybawiryną rozważane jest jego użycie w kompozycjach oraz preparatach terapeutycznych. Do tych kompozycji lub preparatów dodawać można również dodatkowe składniki czynne.
Oprócz rozważanego w niniejszym opisie leczniczego uż.ycia rybawiryny może ona również być używana jako narzędzie laboratoryjne do badania absorpcji, rozkładu, wychwytu komórkowego oraz skuteczności.
Odkryto również, że pewna liczba analogów Wirazolu (dawniej znanych lub nieznanych), które zostały uprzednio odrzucone jako wykazujące minimalną aktywność charakteryzują się znaczną aktywnością w stosunku do cytokin. Badania nasze pokazują, że istnieją całe klasy pochodnych Wirazolu, które wykazują taką aktywność, zaś przykłady podane są poniżej pod nagłówkiem Analogi Rybawiryny,. Przykłady te mają scharakteryzowć typowe pozycje, w których można modyfikować cząsteczkę Wirazolu, tak aby otrzymać kompozycje aktywne, niniejszy wynalazek nie jest więc ograniczony wyłącznie do tych specyficznych modyfikacji, które są pokazane. Rozważane jest zastosowanie tych modyfikacji zarówno do standardowej formy D Wirazolu jak i do jego formy L.
Przykłady
Linie komórkowe oraz oczyszczanie komórek typu T.
Po odwirowaniu krwii 60 ml zdrowych dawców w gradiencie gęstości Ficollu-Hypaque'a, z kożuszka wydzielono komórki jednojądrzaste (PBMC) krwii obwodowej. Następnie komórki typu T odczyszczono od PBMc za pomocą odczynnika do wydzielania limfocytów Lymphokwik, specyficznego dla komórek typu T (LK-25T, One Lambda, Canoga Park CA). W celu usunięcia zanieczyszczeń komórkowych średni zbiór zawierający 40-60 x 106 komórek typu T inkubowano przez całą noc w temperaturze 37°C T w 20-30 ml układu RPMI-AP5 (pożywka RPMI-1640 (ICN, Costa Mesa CA) zawierającego 20mM buforu HEPES o pH=7,4, 5% surowicy autologicznej, 1%> L-glutaminy, 1%o mieszaniny penicylina/streptomycyna oraz 0,05% 2-merkaptoetanolu). We wszystkich doświadczeniach komórki typu T przemywano za pomocą odczynnika ROMI-AP5, a następnie rozprowadzano na mikropłytkach zawierających po 96 dołków stosując stężenie komórek wynoszące 1 x 106 komórek/ml.
Aktywacja komórek typu T oraz traktowanie ich Rybawiryną®.
Komórki typu T aktywowano poprzez dodanie 500 ng jonomycyny oraz 10 ng 12-mirystanianu 13-octanu forbolu (PMA) (Calbiochem, La Jolla, CA) oraz inkubowanie przez okres 48-72 godzin w temperaturze 37°C. Komórki typu T ząktywowąne układem jonomycyna/PMA natychmiast po aktywacji potraktowano rybawiryną w ilościach od 0,5 do 50 mM oraz, jako próbę kontrolną, 10000 U/ml interferonu alfa (Accurate Westbury, NY), po czym po upływie 24 godzin ponownie potraktowano je w ten sam sposób. Komórki typu T z każdego dołka poddano analizie immunofluorescencyjnej, zaś supernatant użyto do pomiarów cytokiny międzykomórkowej. Po aktywacji, 900 ml supematantu komórkowego z każdej mikropłytki przeniesiono na inną mikropłytkę w celu poddania analizie na komórkowe wytwarzanie cytokin. Komórki te zostały następnie użyte do analiz immunofluorescencyjnych w celu zbadania wewnątrzkomórkowych poziomów cytokiny oraz ekspresji receptorów cytokiny.
Analiza cytokiny międzykomórkowej.
W supernatantach komórkowych z każdej mikropłytki oznaczono stężenia ludzkiej cytokiny komórkowej. Indukowane aktywacją zmiany poziomów interleukiny-2 (IL-2) oznaczano za pomocą dostępnego w handlu zestawu ELISA (zestaw Quantikine R&D systems, Minneapolis, MN) lub też za pomocą biotestu stosując linie komórkową CTLL-2 (ATCC, Rockville, MD). Indukowane aktywacją zmiany poziomów interleukiny-4 (IL-4), czynnika martwicy raka (TNFa), interleukiny-8 (IL-8) (zestaw Quantikine R&D systems, Minneapolis, MN) oraz interferonu gamma (IFNy) (Endogen, Cambridge, MA) oznaczano za pomocą zestawów ELISA. Wszystkie wyniki dla testu ELISA zostały wyrażone w jednostkach pg/ml zaś dla biotestu CTLL-2 w ilości zliczeń na minutę odpowiadającej uzależnionej od IL-2 komórkowej inkorporacji 3H-tymidyny (ICN, Costa Mesa, CA) do komórek CTLL-2.
Bezpośrednie badania immunofluorescencyjne (receptorów cytokiny).
W celu bezpośredniego wybarwiania powierzchniowych antygenów komórkowych fluorescencyjnie sprzężonymi przeciwciałami komórki przemyto dwukrotnie za pomocą izotonicznego roztworu soli o odczynie pH równym 7,4 (Becton Dickinson, Mansfield, MA), po
187 439 czym ponownie utworzono z nich zawiesinę w 50 ml izotonicznego roztworu soli, którą następnie podzielono na dwie próbki. Pierwszą próbkę zabarwiono za pomocą przeciwciała PEanty CD25/FITC-anty CD4 lub też za pomocą szczurzego przeciwciała PE przeciw mysiego IgG + anty-CDwl24/FITC-anty CD4 mAb, po czym mierzono niespecyficzną fluorescencję poprzez zabarwienie drugiej próbki za pomocą dopasowanego izotypowo kontrolnego przeciwciała monoklonalnego znaczonego za pomocą PE/FITC. Wszystkie znaczone fluorescencyjnie przeciwciała monoklonalne uzyskano z firmy Becton Dickinson (San Hose, CA) z wyjątkiem przeciwciała anty-CDwl24, które otrzymano od Pharmingen, San Diego. Inkubacje przeprowadzano przez 45 minut w temperaturze 4°C, przy użyciu nasyconych stężeń mAb. Przed przystąpieniem do pomiarów prowadzonych przy użyciu cytometru przepływowego FACScan (Becton Dickinson) nieprzyłączoną substancję znaczącą usuwano odmywając ją za pomocą PBS.
Gęstość przeciwciał oznaczano drogą pośrednią w bramkowanych żywych komórkach typu CD4+T oraz wyrażano jako główny kanał fluorescencji (MCF). Ekspresja powierzchniowa specyficznego przeciwciała (CDwl24, CD25) wyrażona była za pomocą przesunięcia głównego kanału (MCS), uzyskanego przez odjęcie MCF dla izotypowo dopasowanych (IgGl) znaczonych za pomocą PE lub za pomocą FITC komórek kontrolnych wybarwianych przy użyciu mAb od MCF dla izotypowo dopasowanych (IgGl) znaczonych za pomocą PE lub za pomocą FITC antygenowe specyficznych komórek wybarwianych przy użyciu mAb. Jako alternatywę, poprzez odjęcie MCF dla komórek CD28 CD4’ od MCF dla komórek CD28‘ CD4' oznaczano ekspresję powierzchniową podgrupy komórek CD4 barwionych za pomocą mAb CD28.
Żywotność komórek kontrolnych, nietraktowanych rybawiryną oraz interferonem a oznaczano w każdej próbie wszystkich oligonukleotydów w wielokrotnych donorach poprzez zabarwianie barwnikiem przeżyciowym, jodkiem propidium (końcowe stężenie 5 mg/ml). Procentowy udział żywych komórek, które odrzuciły jodek propidium oznaczono za pomocą cytometrii przepływowej i po potraktowaniu wszystkimi stosowanymi stężeniami wynosił on >90% (zakres 90-99%).
Immunofluorescencyjna analiza wewnątrzkomórkowej ekspresji cytokiny.
Aby przeprowadzić analizę wewnątrzkomórkowej ekspresji IL-2 w podgrupach CD4+ oraz CD8+ komórek typu T, komórki typu T przez ostatnie 4 godziny trwającej od 48 do 72 godzin aktywacji traktowane były 10 miligramami Brefeldyny A (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) w celu zminimalizowania wydzielania świeżo zsyntetyzowanych IL-2 do środowiska międzykomórkowego. Po zakończeniu aktywacji z każdej mikropłytki po 900 ml supematantu komórkowego przeniesiono na inną mikropłytkę w celu oznaczenia komórkowego wytwarzania cytokin. Zanim przystąpiono do bezpośredniego wybarwiania powierzchniowych antygenów komórkowych CD4 oraz CD8 (30 minut, 4°C, w ciemności) za pomocą przeciwciał sprzężonych z FITC, komórki przemyto dwukrotnie za pomocą izotonicznego roztworu soli o odczynie pH równym 7,4, po czym ponownie utworzono z nich zawiesinę w 100-150 ml buforu barwiącego roztwór soli buforowany fosforanami, o odczynie pH równym 7,4, zawierający 1% cielęcej surowicy płodowej (FCS, Hyclone, Logan, UT) oraz 0,1% azydku sodowego, którą następnie podzielono na dwie próbki. Wybarwione komórki przemyto w 1 ml buforu barwiącego po czym granulki komórek zawieszono ponownie w 100 ml buforu utrwalającego (4% paraformaldehydu w PBS), a następnie odessano spematant. Utrwalone komórki przetrzymywano przez 20 minut w temperaturze 4°C a następnie przemyto w 1 ml buforu barwiącego, zaś granulki komórek zawieszono ponownie, mieszając, w 50 ml buforu do wywołania przepuszczalności (0,1% roztwór saponiny (ICN, Costa Mesa, CA) w PBS).
Komórki poddane permabilizacji wybarwiano przez 30 minut, w ciemności oraz w temperaturze 4°C, przy użyciu przeciwciała IL-2 znaczonego za pomocą PE następnie zaś, przed dokonaniem analizy FACS, przemyto je w 1 ml buforu do wywołania przepuszczalności po czym zawieszono ponownie w 250 ml buforu barwiącego.
Analiza mRNA cytokinowego.
Całkowitą ilość RNA wyekstrahowano z komórek typu T, zarówno spoczynkowych jak i aktywowanych traktowanych lub nietraktowanych rybawiryną oraz interferonem a, stosując
187 439 handlową odmianę techniki ekstrakcyjnej z użyciem tiocyjanianu guanidyny oraz fenolu (odczynnik Trizol, GIBCO/BRL). RNA przemyto 70% etanolem a następnie zawieszono ponownie w wodzie potraktowanej 10 pl DEPC.
Reakcję syntezy cDNA przeprowadzono według instrukcji producenta (Promega, Madion, WI). W skrócie, 1 pg całkowitego RNA ogrzewano przez 10 minut w temperaturze 65°C po czym ochłodzono lodem, a następnie zmieszano z 2 pl 10X buforu transkrypcji odwrotnej (100 mM Tris HCl (pH 8,8), 500 mM KC1, 1% Triton X-100), 0,5 pl inhibitora RNazy, 1 pl oligo (dT) i5primera (0,5 pg/pg RNA) oraz 0,65 pl odwrotnej transkryptazy AMV (H.C.). Mieszaninę reakcyjną inkubowano przez 1 godzinę w temperaturze 42°C, następnie przez 10 minut w temperaturze 95°C, na zakończenie zaś przez 5 minut w lodzie.
Reakcję PCR przeprowadzono stosując zestaw PCR Gene Amp (Perkin Elmer Cetus, Foster City, CA). W świeżej probówce mieszaninę reakcyjną RT (3 pl) połączono z 5 pl buforu PCR 10X (500 mM KC1, 100mM Tris-HCl, pH=8, 3,15 mM MgCl2 oraz 0,01% (wagowo/objętościowych) żelatyny), 1 pl 10 mM dNTP oraz 1U polimerazy DNATaq. Zastosowano następujące primery: interleukiny-2, interleukiny-4, (ludzkiego)interferonu g (Stratagene, La Jolla,CA) oraz genu rybosomalnego pHE7. Stosowano następujące warunki amplifikacji: 35 cykli po 45 sekund w temperaturze 94°C, 1 minucie w temperaturze 57°C oraz 2 minuty w temperaturze 72°C a następnie 8 minut w temperaturze 72°C. Produkty PCR analizowne były na 2% żelu agarozy zawierającym bromek etidiowy. Po przeprowadzeniu elektroforezy produkty PCR przeniesiono ma membranę Hybond N+ (Amersham, Arlington Heights, IL) zanurzoną przez noc w 20 X SSC i unieruchamiano przy użyciu 0,4 M NaOH. Plamki hybrydyzowano przez 1 godzinę w temperaturze 42°C ze znakowaną 32P-yATP sondą oligonukleotydową w buforze typu Rąpid - hyb (Amersham). Każda z mieszanin primerów cytokinowych używana była jako sonda radioaktywna (tak jak nakazuje instrukcja). Ekwiwalentny ładunek szacowany był po hybrydyzacji sondą generowaną z sensownego primera pHE7. Odmyte plamki analizowano następnie przy użyciu analizatora Phosphorlmager.
Wpływ rybawiryny na międzykomórkowe poziomy cytokin w aktywowanych komórkach typu T.
Działanie układu PMA/jonomycyna (48-72 godzin) na ludzkie komórki typu T znacznie podniosło poziomy wszystkich analizowanych cytokin, tzn, IL-2, IL-4, TNFa wszystkich analizowanych cytokin, tzn, IL-2, IL-4, TNFa oraz IFNy (Tabela 2). Pierwsza liczba przy każdej z komórek oznacza średnią arytmetyczną zaś liczby w nawiasach oznaczają odpowiedni zakres. N = 4. W reprezentatywnym doświadczeniu, przedstawionym na Fig. 1, dodanie rybawiryny, w zakresie dawek od 0,5 do 50 mM, zwiększało maksymalnie aktywowane poziomy cytokin typu Th1, IL-2 oraz TNFa odpowiednio przy stężeniach 5 mM (30%) oraz 20 mM (36%). W przeciwieństwie do tego podanie interferonu-α hamowało ekspresję IL-2 oraz TNFa w sposób zależny od dawki (zakres 250-10000 U/ml, maksimum inhibicji odpowiednio 33 oraz 38%) w porównaniu do poziomów w kontrolnych aktywowanych komórkach typu T. W dodatku, rybawiryna pośredniczyła w towarzyszącym spadku aktywowanych poziomów cytokiny typu Th2, IL-4 (maksimum inhibicji 74% przy stężeniu 2 mM), zaś podanie interferonu-α maksymalnie podnosiło poziom międzykomórkowego IL-4 o 26% (przy stężeniu 10000 U/ml).
Stosując kombinację rybawiryny oraz interferonu alfa, Fig. 2 pokazuje, że stała dawka interferonu alfa wynosząca 2000 U/ml ogranicza wzrost aktywowanych poziomów IL-2 zależnych od dawki rybawiryny (A) oraz odwraca inhibicję aktywowanych poziomów IL-4 (C). W podobny sposób stała dawka rybawiryny wynosząca 10 mM zawraca inhibicję aktywowanych poziomów IL-2 zależnych od dawki interferonu alfa (B) oraz ogranicza wzrost aktywowanych poziomów IL-4 (D).
Wpływ rybawiryny na poziomy cytokinowego mRNA w aktywowanych komórkach typu T.
Przedstawione powyżej skierowane przeciwnie działanie rybawiryny oraz interferonu-a na aktywowane pozakomórkowe poziomy cytokin obserwowano również na poziomie transkrypcji. Fig. 3 pokazuje, że traktowanie ludzkich komórek typu T układem PMA/jonomycyna znacznie podnosi poziomy mRNA typu IL-2, IL-4 oraz IFNy. Podanie rybawiryny (2,5 oraz 10 mM) po aktywacji komórek typu T podnosi poziom mRNA typu IL-2, obniża poziom mRNA typu IL-4, zaś na poziom mRNA typu IFNy nie ma wpływu. W przeciwieństwie do tego, podanie interfe187 439 ronu-α w dawkach 1000, 2000 oraz 5000 U/ml obniża poziom mRNA typu IL-2, podnosi poziom mRNA typu IL-4 oraz obniża poziom mRNA typu IFNy. Odpowiednie, uzależnione od dawki, wpływy rybawiryny oraz interferonu-α na ekspresję mRNA typu IL-2, typu TNFa oraz typu IL-4 są więc podobne do analiz ELISA. Dane te sugerują, że w aktywowanych ludzkich komórkach typu T rybawiryna promuje syntezę cytokin typu Th1, takich jak IL-2 oraz TNFa, oraz hamuje ekspresję cytokiny typu Th2, takiej jak IL-4.
Wpływ rybawiryny na poziomy receptorów IL-2 oraz IL-4 w aktywowanych komórkach typu T.
Przy użyciu analizy FACS porównaliśmy wpływ rybawiryny oraz interferonu-a na ekspresję receptorów IL-2 (CD25) oraz IL-4 (CDw124) w aktywowanych komórkach typu T. Działanie układu PMA/jonomycyna podnosi ekspresję CD25 oraz CDwl24 od poziomów spoczynkowych wynoszących 50,16 ± 0,45 i 62,31 ± 1,46 do poziomów aktywowanych wynoszących odpowiednio 162,48 ± 2,89 i 87,53 ± 3,98 (n=4). Fig. 4 pokazuje, że rybawiryna (w zakresie dawek od 1 do 50 5 mM) ma niewielki wpływ na aktywowane poziomy receptorów IL-2 oraz IL-4, podczas gdy interferon-α w zakresie dawek od 250 do 10000 U/ml, obniża w sposób zależny od dawki ekspresję receptorów IL-2 oraz podwyższa ekspresję receptorów IL-4 w stosunku do poziomów receptorów w kontrolnych aktywowanych komórkach typu T. Dane te dowodzą wiec, że wpływ rybawiryny na syntezę cytokin realizuje się niezależnie od ekspresji receptorów cytokin, w przeciwieństwie do wpływu podawania interferonu-α na receptory IL-2 oraz IL-4, który dobrze koreluje z jego obserwowanym wpływem na ekspresje aktywowanych IL-2 oraz IL-4.
Wpływ rybawiryny na wewnątrzkomórkowe poziomy IL-2 w podgrupach CD4 oraz CD8+ aktywowanych komórek typu T.
Zbadaliśmy czy wpływ rybawiryny na ekspresje IL-2 jest specyficzny dla komórek typu CD4 lub CD8+ 'Wewnątrzkomórkową ekspresję IL-2 w utrwalonych oraz permabilizowanych aktywowanych komórkach typu T oznaczono przy użyciu dwubarwnej cytometrii przepływowej stosując fluorescencyjnie znaczone przeciwciała przeciw CD4 lub CD8 oraz przeciw IL-2. Fig. 5 pokazuje, że po podaniu rybawiryny w dawce wynoszącej 10 mM procentowy udział komórek T typu CD4+ wykazujących ekspresje IL-2 wzrósł z 82% do 91%, zaś udział komórek typu CD8 wykazujących ekspresję IL-2 wzrósł z 81% do 91%. Dla kontrastu, udział komórek typu CD4f oraz typu CD8’f wykazujących ekspresję IL-2 po podaniu interferonu-α wynosił odpowiednio 81% oraz 71%. Dane te pokazują, że rybawiryna wpływa na ekspresję wewnątrzkomórkowej IL-2, który nie rozróżnia pomiędzy podgrupami komórek CD4’ oraz CD8+. Dla kontrastu, podawanie interferonu-α ma niewielki wpływ na komórki T typu CD4+ zaś w przypadku podgrupy komórkowej CD8+ nawet obniża ekspresję IL-2.
Analogi Rybawiryny®.
Istnieje kilka klas analogów Rybawiryny®, które są rozważane jako preparaty klinicznie skuteczne w modulowaniu reakcji komórek typu T przebiegających za pośrednictwem Th1 oraz Th2. Obejmują one cząsteczki o wzorze ogólnym przedstawionym na Fig. 6, w którym X oznacza O, S, CH2, CHOH lub N-CO-R11; A, B oraz C oznaczają, niezależnie od siebie, N, P, CH, C-OH, C-CH3, C-alkil, C-alkenyl, C-CH2-CN, C-chlorowiec, C-CN, C-COOCH3, CNH2, C-SNH2, C-SO2-NH2, C-CO-NH2, C-CS-NH2, C-C(NH)-NH2, C-PO2-NH2 lub układ Cpierścień heterocykliczny; D oznacza S, Se, Te, PH, NH lub NR12; R1 oznacza H, (CH2)p(OH), chlorowiec, CN, (CH2)pONH2, (CH2)pNH2, CH3, CH2SPH, lub układ (CH^-pierścień heterocykliczny; R2 oznacza H, Oh, OCH3, SH, SCH3, chlorowiec, CN, NH2, ONH2, NHCH3, (CH2)OH, (CH2)pNH2, CH3 lub COOMe; R3, R4, R5, IR,, R7 oraz Rg, niezależnie od siebie, oznaczają H, OH, OCH3, SH, SCH3, chlorowiec, CN, NH2, ONH2, NHCH3, (CH2)OH, (CH2)PNH2, CH3, COOMe lub fenyl; R9 oznacza H, chlorowiec, NH2, CH3, CONH, CSNH2, COOMe, SNH2, SO2NH2, P02NH2, (CH2)p, układ (CH2)p- pierścień heterocykliczny lub (CH2)p-glukoza; R10 oznacza H, chlorowiec, NH2, CH3, CoNh, CSNH2, COOMe, SNH2, SO2NH2, PO2NH2, (CH2)p, układ (CH2)p-pierścień heterocykliczny, (CH2)p-glukoza, O-CH3, O-CH2CH3 lub aminokwas; Y oznacza O, S, NH-HCl, NOH, NOCH 3 lubNOCH2PH, Rmoraz Y w kombinacji tworzą układ pierścienia heterocyklicznego taki jak tiazol, imidazol, etc.; R11 oznacza CH3(CH2)pNH2,(CH2)p-pierścień heterocykliczny, (CH2)p-aminokwas, (CH2)p-cukier
187 439 (glukoza, etc.); p oznacza liczbę całkowitą od 0 do 8, zaś powyższe oznaczenia dotyczą nukleozydów o konfiguracji L oraz D.
Takie cząsteczki wytwarzać można według jednego lub większej liczby następujących schematów przykładowych.
1. Synteza ICN1369 (Pyrazomycyna): Metodologia syntetyczna tego związku opisana jest w następujących odnośnikach : (a) J. Farkas, Z. Flegelova i F. Sorm, Tetrahedron Letters., 22,2279 (1972); (b) S. DeBemardo i M. Weigele, J Org. Chem. , 41, 287 (1976); (c) J.G Buchanan, A. Stobie i R.H. Wightman, J. Chem. Soc. Chem.. Commun., 916 (1980); N. Karagiri, T. Takashima, T. Haneda i T. Kato, J. Chem. Soc. Perkin. Trans.\, 553 (1984).
2. Synteza ICN3438 (1-|3-D-ksylofuranozylo-1,2,4-triazolo-3-karboksyamid): Syntezy tego związku dokonano postępując według procedury opisanej w: J.T. Witkowski, M. Fuertes, P.D. Cook i R.K. Robins, J.Carbohydr. Nucleosides, Nucleotites 2(1), 1 (1975).
3. Synteza ICN3844 [1(5-0-sulfamoilo-e-D-rybofuranozylo)-1,2,4-triazolo-3-karboksyamid]: Związek ten zsyntetyzowano postępując według procedury ujawnionej w: D.G Kini, M.B. Henry, R.K. Robins, S.B. Larson, J.J. Marr, R.L. Berens, C.J. Bacchi, H.C. Nathan oraz W.J. Keithly, J.Med. Chem. 22, 44 (1990).
4. Synteza ICN4625 [1(3-deoksy-P-D-crytropento-furanozylo)-1,2,4-triazolo-3-karboksyamid]: Związek ten wytworzono dokonano stosując następującą drogę syntetyczną:
5. Synteza ICN5531 (5-amino-1-e-D-rybofuranozylo-pirazolo-4-karboksyamid]: W celu wytworzenia tego związku użyto procedury syntetycznej podanej w: B.K.Bhattacharya, R.K. Robins oraz G.R. Revankar, J.Heterocyclic. Chem. 21, 795 (1990).
6. Synteza ICN5676 (1-e-D-arabinofuranozylo-1,2,4-triazolo-3-karboksyamid): Syntezy tego związku dokonano według procedury syntetycznej podanej w: J. T. Witkowski, M. Fuertes, P. D. Cook i R. K. Robins, J.Carbohydr.Nucleosides, Nucleotites 2(1), 1 (1975).
187 439
7. SynteSa tCN5839 (1-9-D-erytroeuranouylo-l,2lo-3-karboksyamicl): Syntezy tego związku dokonano według przedstawionej poniżej sekwencji syntetycznej:
8. SyntezS ICN6 24C (2-4komo-l-β-D-lyrofur2bOfulN-imldozolo-kgrbokssrbnid2: Związek ^^242 został zsyntetyzowany według następującego sposobu, który jest przedstawiony poniżej:
187 439
9. Synteza ICN1808 (1-e-D-rybofuranozylo-pirazolo-3,4-dikarboksyamid): Synteza tego związku opisana została w.Y.S. Sanghvi, B.K. Bhattacharya, GD. Kini, S.S.Matsumoto, S.B. Larson, W.J. Jolley, R.K. Robins oraz GR. Revankar, J. Med. Chem. 33, 336 (1990) i zgodnie z tym opisem związek ten został wytworzony.
10. Synteza ICN12204 [2-(e-D-rybofuranozylo)imidazolo-5-karboksyamid)]: Syntezy tego związku dokonano zgodnie z procedurą przedstawioną w: J. Igoleo, T.H. Dinh, A. Keib oraz C. Perreur, Chimie Therapeutique. 207 (1972).
W celu uzyskania karboksylowych pochodnych analogów rybawiryny typu 4'-tiocukier lub 4'-azacukier następujące cukry można poddać reakcji kondensacji z odpowiednimi związkami heterocyklicznymi po czym uzyskany produkt poddać derywatywizacj i zgodnie z przedstawionymi powyżej schematami reakcji oraz odnośnikami literaturowymi.
Cukier karbocykliczny
' -tiocukier
4'-azacukier
1. Cukry karbocykliczne można wytwarzać zgodnie z procedurą literaturową przedstawioną w następujących odnośnikach: M. Yoshikawa, Y. Yoshikawa, Y. Inoue, S. Yamaguchi oraz N. Murakami, Tetrahedron, 50, 9961 (1994); oraz R. Agrofoglio, E. Suhas, A. Parese, R. Condom, S.R. Challand, R.A. Earl oraz R. Guedj, Tetrahedron, 50, 10611 (1994).
2. 4-Azacukier wytworzono zgodnie z procedurą literaturową przedstawioną w następującym odnośniku: E.J. Reist, D.E. Gufflroy oraz L. Goodman, J. Am. Chem. Soc, 87, 677 (1965).
3. 4-Tiocukier wytworzono zgodnie z procedurą literaturową dostępną w następującym odnośniku: M. Hobek i R.L. Whistler w: Methods in Carbohydrate Chemistry, Tom 1,292 (1962).
Dowody na skuteczność analogów rybawiryny w modulowaniu cytokin TH1 oraz TH2 przedstawione są na Fig 7. oraz w poniższej tabeli. Podane poniżej wyniki dotyczą krótkiej listy 35 testowanych analogów Rybawiryny®, zaś każdy test wykonywany był trzykrotnie. W ogólności widać, że badane związki zaliczyć można do trzech głównych kategorii: (1) związki takie jak ICN1369 oraz ICN3844, które tłumią IFNy, IL-2, IL-S oraz TNFa; (2) związki takie jak rybawiryna które pobudzają IL-2 oraz TNFa, tłumią zaś ILA oraz IL-5; oraz (3) związki takie jak ICN6242, ICN3839 oraz ICN3531, które pobudzają IL-2 oraz IFNy, tłumią zaś IL-4 oraz IL-5. Takie działanie jak wyszczególnione powyżej mogłoby potencjalnie przynosić korzyści w tych wskazaniach, w których modulacja cytokin miałaby jakikolwiek wpływ na odpowiednią reakcję immunologiczną.
187 439
Tabela 1
Stężenie komórek w dołku = 2 x 1)6 x 24 = 48 x 1)6 w 48 ml (Całkowita objętość każdego dołka=2000 μί)
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| A | Media | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA |
| ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | ||
| 10pM 1369 | 5μΗ 1369 | 2pM 1369 | ||||
| B | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA |
| ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | |
| 10μΜ 3438 | 5pM 3438 | 2μM 3438 | 10pM 3844 | 5μM 3844 | 2pM 3844 | |
| C | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA |
| ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | |
| 10μΜ 4625 | 5pM 4625 | 2pM 4625 | 10HM 5531 | 5|iM 5531 | 2pM 5531 | |
| D | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA |
| ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | |
| 1)μΜ 5676 | 5pM 5676 | 2pM 5676 | 10pM 5839 | 5μM 5839 | 2pM 5839 | |
| Stężenie komórek w dołku = | 2 x 106 x 24 | = 48 x 106 | w 4 8 ml |
(Całkowita objętość każdego dołka=2))0 μΐ)
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| A | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA |
| ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | |
| 10pM 6242 | 5pM 6242 | 2pM 6242 | 10pM 11808 | 5pM 11808 | 2pM 11808 | |
| A | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA | PMA |
| ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | ICN | |
| 10pM 12204 | 5pM 12204 | 2pM 12204 | 10pM RIB | 5pM RIB | 2pM RIB |
187 439
Zostało więc wykazane, że zarówno rybawiryna jak i analogi iybawiryny skutecznie modyfikują ekspresję limfokin w aktywowanych komórkach typu T. Mimo, iż przedstawione zostały specyficzne warianty wykonania oraz zastosowania, dla specjalistów w tej dziedzinie będzie to oczywiste, że w ramach przedstawionych w niniejszym opisie koncepcji wynalazczych, i bez odstępstwa od tych koncepcji, możliwych jest znacznie więcej modyfikacji. Niniejszy wynalazek nie może więc zostać ograniczony inaczej niż w zgodzie z duchem załączonych zastrzeżeń patentowych.
187 439
187 439 pg/ml
pg/ml
l o Fig. 2B pg/ml
pg/ml
Fig-2
500
400300-1
200
100-
Fig. 2D
187 439 g IFN-α
IL-2
IL-4
Fig· 3
187 439
| Λ . | IL-2R | |||
| U % aktywowanego *θ wzorca -20· -30 J | ηΠ| i i~rn rrrr | ~r | τ | “TT |
-r,u,2R8
I-1
Rybawiryną (μΜ)Ι-1
IFNa (U) Fig. 4A
IL-4R %
aktywowanego wzorca
Rybawiryną IFNa (UJ
Fig. 4B
Fig. 4
187 439
Fig· 5E Fig. 5F Fig. 5G Fig. 5H
187 439
Fig. 6
187 439
TNF-α IFN-γ
«ηκχ* κβι* >0111 ♦ aa*· «κ* »Ι9ί* tcc* &ot* mc* >oc* «α* MOf/WU «B»ui
Γόη £
§ i nta* ront*
Mtn*
Tra+ etif*
MC»
ICC* swr* mc* icrc* «ci*
NOirrru »5WM
Γόη
E
Uł
S r*
anta* ront* »0811 *
Wt»*
6OC* mc»
Kit*
Π9Τ+ mc*
KK* «CI * tsouyya ’ψ»» ai
Γ;
oh £
Γoh £
pySd anta* ront* ««♦ iwr*
6OC*
M9C* icsc*
CWt* mc* ICri* 490 * NOIWU trpou· <
Γoh £
jw/T4 anta* «πει* »o»tt* τιτ?* «ac*
MC*
ICC*
5Z9T* mc*
KK« «a · noi/yiu «gnoi
Q r,ob £
187 439 %
aktywowanego wzorca
IFNa (U) %
aktywowanego wzorca
Rybawiryna (JiM)*·
IFNa (U)
Fig.lA
| % | |
| aktywowanego | -25- |
| wzorca | -50- |
| -75- |
I I I I I I I I I I I I '-‘'‘«eas? |
Rybawiryna φιΜ)·-1
IFNa (U) %
aktywowanego wzorca
Fig. 1B
Fig.1C
I_I
Rybawiryna -I
IFNa (U)
Fig.1D
Fig.1
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (6)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowanie rybawiryny do wytwarzania leku do leczenia choroby charakteryzującej się hamowaniem odpowiedzi Thl i pobudzeniem odpowiedzi Th2, zwłaszcza alergii, choroby autoimmunologicznej i robaczycy, przy czym lek spreparowany jest do podawania w dawce, która pobudza odpowiedź Thl a hamuje odpowiedź Th2.
- 2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że obejmuje ponadto podawanie pacjentowi interferonu alfa.
- 3. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że ludzki pacjent zainfekowany jest wirusem wątroby typu C.
- 4. Zastosowanie według zastrz. 3, znamienne tym, że dawkę stanowi w przybliżeniu 4,5 mg rybawiryny/kg masy ciała pacjenta dziennie.
- 5. Zastosowanie według zastrz. 3, znamienne tym, że dawka zapewnia osiągnięcie stężenia rybawiryny w surowicy krwi pacjenta średnio w przybliżeniu 0,25 - 6,7 ug/ml.
- 6. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że pobudzenie odpowiedzi Thl charakteryzuje się zwiększeniem produkcji interleukiny 2 (IL-2), czynnika martwicy nowotworu (TNFa) oraz interferonu gamma (IFNy).
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/590,449 US5767097A (en) | 1996-01-23 | 1996-01-23 | Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by ribavirin in activated T-lymphocytes |
| US3609497P | 1997-01-17 | 1997-01-17 | |
| PCT/US1997/000600 WO1997026883A1 (en) | 1996-01-23 | 1997-01-21 | Modulation of th1/th2 cytokine expression by ribavirin® and ribavirin® analogs in activated t-lymphocytes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL328003A1 PL328003A1 (en) | 1999-01-04 |
| PL187439B1 true PL187439B1 (pl) | 2004-07-30 |
Family
ID=26712784
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97328003A PL187439B1 (pl) | 1996-01-23 | 1997-01-21 | Zastosowanie rybawiryny |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0879056B1 (pl) |
| KR (1) | KR100298158B1 (pl) |
| CN (1) | CN1190198C (pl) |
| AT (1) | ATE216886T1 (pl) |
| BR (1) | BR9707154A (pl) |
| CA (1) | CA2246162C (pl) |
| CZ (1) | CZ293584B6 (pl) |
| DE (1) | DE69712316T2 (pl) |
| DK (1) | DK0879056T3 (pl) |
| ES (1) | ES2172764T3 (pl) |
| HU (1) | HU220105B (pl) |
| IL (1) | IL125088A0 (pl) |
| NO (1) | NO983372L (pl) |
| NZ (1) | NZ330784A (pl) |
| PL (1) | PL187439B1 (pl) |
| PT (1) | PT879056E (pl) |
| RU (1) | RU2186569C2 (pl) |
| SI (1) | SI9720013A (pl) |
| SK (1) | SK283342B6 (pl) |
| UA (1) | UA46815C2 (pl) |
| WO (1) | WO1997026883A1 (pl) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1254911A1 (en) * | 1996-10-16 | 2002-11-06 | ICN Pharmaceuticals, Inc. | Monocyclic L-nucleosides, analogs and uses thereof |
| IL129319A0 (en) | 1996-10-25 | 2000-02-17 | Minnesota Mining & Mfg | Immune response modifier compounds for treatment of TH2 mediated and related diseases |
| MXPA01007211A (es) * | 1999-01-29 | 2002-05-06 | Icn Pharmaceuticals | Modulacion de la respuesta inmune por ribavirina. |
| US7638496B2 (en) | 2000-02-15 | 2009-12-29 | Valeant Pharmaceuticals North America | Nucleoside analogs with carboxamidine modified monocyclic base |
| US6455508B1 (en) * | 2000-02-15 | 2002-09-24 | Kanda S. Ramasamy | Methods for treating diseases with tirazole and pyrrolo-pyrimidine ribofuranosyl nucleosides |
| AU9215101A (en) * | 2000-08-17 | 2002-02-25 | Tripep Ab | Vaccines containing ribavirin and methods of use thereof |
| US6680059B2 (en) | 2000-08-29 | 2004-01-20 | Tripep Ab | Vaccines containing ribavirin and methods of use thereof |
| US6858590B2 (en) | 2000-08-17 | 2005-02-22 | Tripep Ab | Vaccines containing ribavirin and methods of use thereof |
| US7022830B2 (en) | 2000-08-17 | 2006-04-04 | Tripep Ab | Hepatitis C virus codon optimized non-structural NS3/4A fusion gene |
| EP1450856B1 (en) | 2001-09-14 | 2009-11-11 | Cytos Biotechnology AG | Packaging of immunostimulatory cpg into virus-like particles: method of preparation and use |
| AU2004224575A1 (en) * | 2003-03-28 | 2004-10-07 | Pharmasset Ltd. | Compounds for the treatment of flaviviridae infections |
| US20050182252A1 (en) | 2004-02-13 | 2005-08-18 | Reddy K. R. | Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives |
| AU2006325225B2 (en) | 2005-12-14 | 2013-07-04 | Cytos Biotechnology Ag | Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity |
| BRPI0708363A2 (pt) * | 2006-03-09 | 2011-05-24 | Om Pharma | processo para o tratamento de animais de sangue quente, incluindo seres humanos, sofrendo de uma doença relativa a uma superprodução de citocinas inflamatórias |
| MX2008015529A (es) | 2006-06-12 | 2009-01-13 | Cytos Biotechnology Ag | Procesos para empacar oligonucleotidos en particulas similares a virus de bacteriofagos de arn. |
| WO2009022236A2 (en) | 2007-08-16 | 2009-02-19 | Tripep Ab | Immunogen platform |
| UA117095C2 (uk) | 2011-12-22 | 2018-06-25 | Аліос Біофарма, Інк. | Нуклеозидна сполука або її фармацевтично прийнятна сіль |
| US9441007B2 (en) | 2012-03-21 | 2016-09-13 | Alios Biopharma, Inc. | Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof |
| USRE48171E1 (en) | 2012-03-21 | 2020-08-25 | Janssen Biopharma, Inc. | Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof |
| WO2013174962A1 (en) | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Janssen R&D Ireland | Uracyl spirooxetane nucleosides |
| LT2935303T (lt) | 2012-12-21 | 2021-03-25 | Janssen Biopharma, Inc. | 4'-fluor-nukleozidai, 4'-fluor-nukleotidai ir jų analogai, skirti hcv gydymui |
| KR102314960B1 (ko) | 2013-10-11 | 2021-10-19 | 얀센 바이오파마, 인코퍼레이트. | 치환된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 이의 유사체 |
| EP3143404B1 (en) | 2014-05-16 | 2018-08-29 | Amgen Inc. | Assay for detecting th1 and th2 cell populations |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69232706T2 (de) * | 1991-05-01 | 2002-11-28 | Jackson H M Found Military Med | Verfahren zur behandlung infektiöser respiratorischer erkrankungen |
-
1997
- 1997-01-21 SI SI9720013A patent/SI9720013A/sl not_active IP Right Cessation
- 1997-01-21 EP EP97904765A patent/EP0879056B1/en not_active Revoked
- 1997-01-21 ES ES97904765T patent/ES2172764T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-21 WO PCT/US1997/000600 patent/WO1997026883A1/en active IP Right Grant
- 1997-01-21 PT PT97904765T patent/PT879056E/pt unknown
- 1997-01-21 CN CNB971917760A patent/CN1190198C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-01-21 SK SK1004-98A patent/SK283342B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-01-21 IL IL12508897A patent/IL125088A0/xx unknown
- 1997-01-21 RU RU98115594/14A patent/RU2186569C2/ru active
- 1997-01-21 NZ NZ330784A patent/NZ330784A/xx unknown
- 1997-01-21 DE DE69712316T patent/DE69712316T2/de not_active Revoked
- 1997-01-21 DK DK97904765T patent/DK0879056T3/da active
- 1997-01-21 UA UA98073815A patent/UA46815C2/uk unknown
- 1997-01-21 KR KR1019980705645A patent/KR100298158B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-01-21 BR BR9707154A patent/BR9707154A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-01-21 HU HU9900681A patent/HU220105B/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-01-21 AT AT97904765T patent/ATE216886T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-01-21 CZ CZ19982329A patent/CZ293584B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-01-21 CA CA002246162A patent/CA2246162C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-21 PL PL97328003A patent/PL187439B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-07-22 NO NO983372A patent/NO983372L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| UA46815C2 (uk) | 2002-06-17 |
| NO983372D0 (no) | 1998-07-22 |
| ES2172764T3 (es) | 2002-10-01 |
| CA2246162C (en) | 2000-04-04 |
| BR9707154A (pt) | 1999-05-25 |
| DE69712316T2 (de) | 2003-01-02 |
| AU1747897A (en) | 1997-08-20 |
| HUP9900681A2 (hu) | 1999-07-28 |
| SK100498A3 (en) | 2001-03-12 |
| NZ330784A (en) | 1999-02-25 |
| EP0879056A4 (en) | 1999-01-13 |
| HU220105B (hu) | 2001-10-28 |
| CN1190198C (zh) | 2005-02-23 |
| DK0879056T3 (da) | 2002-08-19 |
| HUP9900681A3 (en) | 1999-12-28 |
| SI9720013A (sl) | 1999-06-30 |
| WO1997026883A1 (en) | 1997-07-31 |
| CN1209747A (zh) | 1999-03-03 |
| PT879056E (pt) | 2002-10-31 |
| IL125088A0 (en) | 1999-01-26 |
| DE69712316D1 (en) | 2002-06-06 |
| CZ293584B6 (cs) | 2004-06-16 |
| CA2246162A1 (en) | 1997-07-31 |
| EP0879056A1 (en) | 1998-11-25 |
| PL328003A1 (en) | 1999-01-04 |
| SK283342B6 (sk) | 2003-06-03 |
| ATE216886T1 (de) | 2002-05-15 |
| RU2186569C2 (ru) | 2002-08-10 |
| KR19990081930A (ko) | 1999-11-15 |
| CZ232998A3 (cs) | 1999-04-14 |
| AU700642B2 (en) | 1999-01-14 |
| EP0879056B1 (en) | 2002-05-02 |
| NO983372L (no) | 1998-09-21 |
| KR100298158B1 (ko) | 2001-09-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL187439B1 (pl) | Zastosowanie rybawiryny | |
| US5767097A (en) | Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by ribavirin in activated T-lymphocytes | |
| US6150337A (en) | Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by Ribavirin in activated T-lymphocytes | |
| Sliva et al. | Inosine pranobex: a key player in the game against a wide range of viral infections and non-infectious diseases | |
| Miller et al. | Review article imiquimod applied topically: a novel immune response modifier and new class of drug | |
| Gosselin et al. | Interleukin-15 as an activator of natural killer cell-mediated antiviral response | |
| SK11572002A3 (sk) | Nukleozidové analógy s bicyklickou bázou modifikovanou karboxamidínom | |
| SE513429C2 (sv) | Preparat för aktivering av naturliga mördarceller, vilket preparat innehåller interferon alfa och biogena aminer | |
| JP2008133293A (ja) | 活性化ｔリンパ球におけるリバビリン及びリバビリン類似体によるｔｈ１型／ｔｈ２型サイトカインの発現の調節 | |
| Neuman et al. | Inflammation and repair in viral hepatitis C | |
| Swinnen et al. | OKT3 monoclonal antibodies induce interleukin-6 and interleukin-10: a possible cause of lymphoproliferative disorders associated with transplantation | |
| US20030092644A1 (en) | Treatment of viral infections using levovirin | |
| Davis | The antiviral prophylaxis of post-transplant lymphoproliferative disorder | |
| Vieillard et al. | Transfer of human CD4+ T lymphocytes producing beta interferon in Hu-PBL-SCID mice controls human immunodeficiency virus infection | |
| US20030212015A1 (en) | Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by ribavirin in activated T-lymphocytes | |
| Chew et al. | Effects of brief adjunctive metformin therapy in virologically suppressed HIV-infected adults on polyfunctional HIV-specific CD8 T cell responses to PD-L1 blockade | |
| Ank et al. | Age-dependent role for CCR5 in antiviral host defense against herpes simplex virus type 2 | |
| AU700642C (en) | Modulation of TH1/TH2 cytokine expression by ribavirin and ribavirin analogs in activated T-lymphocytes | |
| EP1174141A2 (en) | Modulation of TH1/TH2 cytokine expression by ribavirin and ribavirin analogs in activated t-lymphocytes | |
| Goodwin | Immunologic effects of nonsteroidal anti-inflammatory agents | |
| Zhang et al. | Change of peripheral blood mononuclear cells IFN-γ, IL-10, and TGF-β1 mRNA expression levels with active human cytomegalovirus infection in orthotopic liver transplantation | |
| Yuk et al. | TNF in human tuberculosis: a double-edged sword | |
| Shiffman et al. | Alpha interferon combined with ribavirin potentiates proliferative suppression but not cytokine production in mitogenically stimulated human lymphocytes | |
| Bergeret et al. | Interferon effect on cytolytic T lymphocytes in a single cycle assay. | |
| Majde | Cytokine Biology Conferences in France and Italy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20100121 |