PL181408B1 - Fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis i rekombinant DNA kodujacy fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis PL PL PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents

Fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis i rekombinant DNA kodujacy fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis PL PL PL PL PL PL PL PL PL

Info

Publication number
PL181408B1
PL181408B1 PL94313317A PL31331794A PL181408B1 PL 181408 B1 PL181408 B1 PL 181408B1 PL 94313317 A PL94313317 A PL 94313317A PL 31331794 A PL31331794 A PL 31331794A PL 181408 B1 PL181408 B1 PL 181408B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
leu
glu
asn
gly
ala
Prior art date
Application number
PL94313317A
Other languages
English (en)
Other versions
PL313317A1 (en
Inventor
Hendrik J Bosch
Willem J Stiekema
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of PL313317A1 publication Critical patent/PL313317A1/xx
Publication of PL181408B1 publication Critical patent/PL181408B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/82—Proteins from microorganisms
    • Y10S530/825—Bacteria

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

1 F ragm ent hybrydow ej toksyny B acillus thuringiensis m ajacy sekw encje am inokw asó w od am inokw asu 1 do am inokw asu 620 o kreslona w Sek ID N r 6 lub m ajacy te sekw encje z co najm niej je d n a z nastepujacych zm ian I le w pozycji 609 je s t zastapiona przez Leu, A la w pozycji 6 1 8 je s t zastapiona przez Glu, Ser w pozycji 620 je s t zastapiona przez Tyr lub toksyna p o dobna w co naim m ej 85% do niej, która m a podobna aktyw nosc ow adobojcza lub p o d o b n a zdolnosc w iazania w blonie je lita srodkow ego ow ada 2 F ragm ent hybrydow ej toksyny B acillus thuringiensis m ajacy sekw encje am inokw asów od am inokw asu 1 do am inokw asu 627, o kreslona w Sek ID N r 8 lub m ajacy te sekw encje z co najm niej je d n a z nastepujacych zm ian Ile w pozycji 617 jest zastapiona przez Leu, A la w pozycji 625 je s t zastapiona przez Glu, Ser w pozycji 627 je s t zastapiona przez t yr lub toksyna p o d o b n a w co najm niej 85% do nich która m a podobna aktyw nosc ow adobójc z a lub p o d o b n a zdolnosc w ia zania w blonie je lita srodkow ego ow ada 3 R ekom binant DNA kodujacy fragm ent hybrydow ej toksyny B acillus thuringiensis m ajacy sekw encje am in o k w asów od am inokw asu 1 do am inokw asu 620 okreslona w Sek ID N r 6 lub m ajacy te sekw encje z co n ajm n iej je d n a z nastep u jacych zm ian Ile w pozycji 609 jest zastapiona przez Leu, A la w pozycji 618 je st zastapiona przez Glu, Ser w pozycji 620 je s t zastapiona przez Tyr lub kodujacy frag m en t hybrydow ej toksyny B acillus thuringiensis m ajacy sekw encje am inokw asów od am inokw asu okolo 1 do am in o k w a- su okolo 627 o kreslona w Sek ID N r 8 lub m ajacy te sekw encje z co najm niej je d n a z nastepujacych zm ian I le w pozycji 617 je s t zastapiona przez Leu, A la w pozycji 625 je s t zastapiona przez Glu, Ser w pozycji 627 je s t zastapiona przez T yr lub toksyne p o d o b n a w co najm niej 85% do nich, która m a podobna aktyw nosc ow adobójcza lub p o d o b n a zdolnosc w iazania w blonie je lita srodkow ego ow ada 4 R ek o m b in an t D N A w edlug zastrz 3, znamienny tym, ze zaw iera sekw encje od nukleotydu 1 do nukleotydu 1860 okreslona w Sek ID N r 5 lub sekw encje od nukleotydu 1 do nukleotydu 1881 w Sek ID N r 7 PL PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis i rekombinant DNA kodujący fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis.
Fragmenty hybrydowej toksyny oraz toksyn zawierające te fragmenty, pochodzą od owadobójczych białek krystalicznych Bacillus thuringiensis
Bacillus thuringiensis (dalej B. t.) jest zdolny do wytwarzania białek, które są akumulowane wewnątrz komórki w postaci kryształów. Te krystaliczne białka są toksyczne dla wielu larw owadów. W oparciu o homologię sekwencji i specyficzność działania owadobójczego białka krystaliczne zostały zaliczone do różnych klas. Najlepiej zbadana jest klasa białek Cry1, które są wytwarzane jako protoksyny o masie 140 kD i wykazują aktywność wobec motyli.
181 408
Sposób działania białek krystalicznych został częściowo wyjaśniony. Po spożyciu kryształy rozpuszczają się w alkalicznym środowisku jelita larwy. Rozpuszczone białka są następnie przekształcane przez proteinazy jelita w oporny na proteinazę toksyczny fragment o wielkości około 65 kD, który wiąże się z receptorami komórek nabłonkowych jelita owada i wnika do błony komórkowej. To prowadzi ostatecznie do pękania komórek i śmierci larwy.
Zakres aktywności poszczególnych białek krystalicznych jest w dużej mierze określony przez występowanie receptorów na powierzchni komórek nabłonkowych jelita wrażliwych owadów Zakres ten jest jednocześnie określony przez wydajność rozpuszczania kryształu białkowego i jego proteolitycznej aktywacji in vivo.
Istotne znaczenie wiązania kryształu białkowego do reecptorów nabłonkowych jelita jest dalej wykazane dla owadów, które rozwinęły oporność najedno z białek Ikystallcznych, a mianowicie wiązanie białek krystalicznych do komórek nabłonkowych jelita owadów opornych jest znacząco obniżone.
Zgodnie z wynalazkiem fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiposis ma sekwencję aminokwasów od aminokwasu 1 do aminokwasu 620 określoną w Sek. ID Nr 6 lub ma tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian:
Ile w pozycji 609 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 618 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 620 jest zastąpiona przez Tyr lub toksyna podobna w co najmniej 85% do niej, która ma podobną aktywność owadobójczą lub podobną zdolność wiązania w błonie jelita środkowego owada.
Zgodnie z wynalazkiem fragment hybrydowej toksyny Bacillus thurmgipntis ma sekwencję aminokwasów od aminokwasu 1 do aminokwasu 627, określoną w Sek. ID Nr 8 lub ma tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian·
Ile w pozycji 617 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 625 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 627 jest zastąpiona przez Tyr lub toksyna podobna w co najmniej 85% do nich, która ma podobną aktywność owadobójczą lub podobną zdolność wiązania w błonie jelita środkowego owada.
Rekombinant DNA według wynalazku koduje fragment hybrydowej toksyny Bacillus mający sekwencję aminokwasów od aminokwasu 1 do aminokwasu 620 określoną w Sek. ID Nr 6 lub mający tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian
Ile w pozycji 609 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 618 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 620 jest zastąpiona przez Tyr lub kodujący fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuriogientit mający sekwencję aminokwasów od aminokwasu około 1 do aminokwasu około 627 określoną w Sek ID Nr 8 lub mający tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian:
Ile w pozycji 617 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 625 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 627 jest zastąpiona przez Tyr lub toksynę podobną w co najmniej 85% do nich, która ma podobną aktywność owadobójczą lub podobną zdolność wiązania w błonie jelita środkowego owada, przy czym korzystnie rekombinant. DNA zawiera sekwencję od nukleotydu 1 do nukleotydu 1860 określoną w Sek. ID Nr 5 lub sekwencję od nukleotydu 1 do nukleotydu 1881 w Sek. ID Nr 7.
Uważa się, ze toksyczne fragmenty białek krystalicznych składają się z trzech odrębnych domen strukturalnych Domena I, skrajna N-końcowa domena składa się z 7 a-heliksów Domena II zawiera 3 b-kartki, a domena III (C-końcowa) fałduje się tworząc b-kanapkę (ang sandwich). Jeżeli przełożyć to na sekwencję Cry1, domena I rozciąga się w przybliżeniu od aminokwasu 28 do 260, domena II od 260 do 460, a domena III od 460 do 600
Poniżej jest podana sekwencja nukleotydowa genu Cry1C z B t podgat entomocidus 60 5 oznaczona jako SEQ ID Nr 1, a odpowiadająca sekwencja aminokwasowa białka kodowanego przez tę sekwencję nukleotydową jest podana jako SEQ ID Nr 2 Sekwencja nukleotydowa genu CrylE z B. t. podgat kenyae 4FI jest podana jako SEQ ID Nr 3, a odpowiadają4
181 408 ca sekwencja aminokwasów białka kodowanego przez tą sekwencję nukleotydowąjest podana jako SEQ ID Nr 4. Białka te są toksyczne dla motyli, ale w obrębie tego rzędu owadów każde białko ma odmienną specyficzność CrylC jest szczególnie aktywne w stosunku do S exigua i M brassicae.
Hybrydowy fragment toksyny, zawiera na swoim końcu C domenę III pierwszego białka Cry lub część tej domeny lub białko zasadniczo podobne do tej domeny, przy założeniu, ze N-końcowy region fragmentu jest N-końcowym regionem drugiego białka Cry lub częścią tego regionu lub białkiem zasadniczo podobnym do tego regionu. Preferowanym fragmentem jest taki, który nie wiąże się z miejscem wiązania dla Cry1C w jelicie owada, gdy zawiera na swoim końcu C domenę III Cry1C lub część tej domeny lub białko zasadniczo podobne do tej domeny; lub taki, który nie wiąże się z miejscem wiązania dla Cry1A, gdy zawiera na swoim końcu C domenę III Cry1A lub część tej domeny lub białko zasadniczo podobne do tej domeny
Jako pojęcie „zasadniczo podobne”, rozumiane są czyste białka mające sekwencję aminokwasowąw co najmniej 75% podobną do sekwencji białek według wynalazku. Korzystne jest, jeżeli stopień podobieństwa wynosi co najmniej 85%, korzystniejsze, jeżeli stopień podobieństwa wynosi co najmniej 90%, a jeszcze bardziej korzystne, jeżeli stopień podobieństwa wynosi co najmniej 95%.
W kontekście niniejszego wynalazku, dwie sekwencje aminokwasowe o wzajemnym podobieństwie co najmniej 75%, 85%, 90% lub 95% mają co najmniej 75%, 85%, 90% lub 95% identycznych reszt aminokwasowych lub konserwatywnych podstawień w podobnej pozycji przy optymalnym dopasowaniu, dopuszczającym co najwyżej 6 przerw, przy założeniu, ze przerwy obejmują nie więcej niż 15 reszt aminokwasowych. Dla celów niniejszego wynalazku, konserwatywne podstawienia mogą być dokonywane między aminokwasami w obrębie następujących grup.
I) seryna i treonina,
II) kwas glutaminowy i kwas asparaginowy;
III) arginina i lizyna;
IV) asparagina i glutamina;
V) izoleucyna, leucyna, walina i metionina;
VI) fenyloalanina, tyrozyna i tryptofan;
VII) alanina i glicyna.
przy założeniu, ze w SEQ ID Nr 6 Ser i Tyr są konserwatywnymi podstawieniami w pozycji 620, a Ala i Glu są konserwatywnymi podstawieniami w pozycji 618 oraz, ze w SEQ ID Nr 8 Ser i Tyr są konserwatywnymi podstawieniami w pozycji 627, a Ala i Glu są konserwatywnymi podstawieniami w pozycji 625.
Część białka oznacza peptyd zawarty w tym białku i stanowiący co najmniej 80% jego ciągłej sekwencji.
Miejsce wiązania się oznacza miejsce w cząsteczce, dla którego wiązanie się z toksynąjest odwracalne, tak ze Ka dla tego miejsca i toksyny jest rzędu co najmniej 104 dm3 mol‘r
Fragment toksyny może zawierać na swoim końcu N N-końcowy region dowolnego białka owadobójczego z B. t., powszechnie znanego jako Cry lub Cyt, włączając w to: CryIA(a), CryIA(b), CryIA(c), CryIB, CryIC, CryID, CryIE, CryIF, CryIG, CryIH, CryIIA, CryIIB, CryIIC, CryIIIA, CryIIIB, CryIIIB(b), CryIVA, CryIVB, CryIVC, CryIVD, CYTA, CryXI(IIIC), CryX2(IIID), CryX3, CryV i CryX4 lub część tego regionu lub białko zasadniczo podobne do tego regionu, a C-końcowym fragmentem jest domena III CryIC lub część tej domeny lub białko zasadniczo podobne do tej domeny
Fragment taki może zawierać domenę II z CryIE, CryIB, CryID lub CryIA lub część tej domeny lub białko zasadniczo podobne do tej domeny oraz domenę III z CryIC lub część tej domeny III lub białko zasadniczo podobne do tej domeny III. Jest szczególnie korzystne, jeżeli fragment zawiera domeny I i II z CryIE, CryIB, CryID lub CryIA lub ich części lub białka zasadniczo podobne do tych domen oraz domenę III z CryIC lub jej część lub białko zasadniczo podobne do tej domeny III
Jest najbardziej korzystne, jeżeli fragment toksyny zawiera na swoim końcu C region obejmujący sekwencję aminokwasów od pozycji 454 do pozycji 602 CryIC lub sekwencję
181 408 zasadniczo podobną do tej sekwencji Fragment może zawierać na swoim końcu C region obejmujący sekwencję aminokwasów od pozycji 478 do pozycji 602 CryIC lub sekwencję zasadniczo podobną do tej sekwencji, przy założeniu, ze jeżeli sekwencja zawiera aminokwasy od 478 do 602 CryIC dołączone bezpośrednio do końca C domeny II z CryIA, CryIB, CryID lub CryIE, następuje odpowiednie fałdowanie produktu fuzji, prowadząc do powstania w obrębie tego fragmentu odcinka owadobójczego Znawca może stwierdzić zaistnienie konieczności dodania peptydu do C-końcowej domeny II, który oddaliłby C-końcowy region cryIC, umożliwiając takie jego pofałdowanie, ze wykazywałby on aktywność owadobójczą
Jakkolwiek zmiany aminokwasowe są dopuszczalne, jednakże jedna lub więcej z następujących reszt wskazanych w odniesieniu do sekwencji CryIC me może podlegać zmianom Phe (501); Val (478) Trp (479) i Thr (486).
Wynalazek znajduje zastosowanie do otrzymywania czystych białek, które są w co najmniej 90% identyczne z fragmentami toksyny według wynalazku lub hybrydowymi toksynami, do otrzymywania zrekombinowanego DNA zawierającego sekwencję kodującą białko mające sekwencję aminokwasową przedstawionych powyżej toksyn lub ich fragmentów, a zwłaszcza zrekombinowanego DNA zawierającego sekwencję od nukleotydu około 1 do nukleotydu około 1860 w SEQ ID Nr 5 lub DNA do niego podobnego, kodującego zasadniczo podobne białko, lub zrekombinowanego DNA zawierającego sekwencję od nukleotydu około 1 do nukleotydu około 1881 w SEQ ID Nr 7 lub DNA do niego podobnego kodującego zasadniczo podobne białko
Określenie podobny DNA oznacza badaną sekwencję, która ma zdolność do hydrydyzowania z sekwencją będącą przedmiotem wynalazku. Gdy sekwencje, badana i będąca przedmiotem wynalazku są dwumciowe, kwas nukleinowy stanowiący sekwencję badaną powinien mieć TM w granicach 20°C w stosunku do sekwencji będącej przedmiotem wynalazku. W przypadku zmieszania razem sekwencji badanej i będącej przedmiotem wynalazku i równoczesnej denaturacji wartości TM sekwencji powinny być w granicach 10°C jedna w stosunku do drugiej. Korzystniej, jeżeli hybrydyzacja jest prowadzona w warunkach ostrych, przy czym dobrze, jeżeli bądź DNA badany bądź będący przedmiotem wynalazku jest w formie związanej. A zatem korzystne jest, jeżeli bądź DNA badany bądź będący przedmiotem wynalazku jest związany z nośnikiem i hybrydyzacja jest prowadzona przez określony okres czasu w temperaturze pomiędzy 50 i 70°C w dwukrotnie stężonym roztworze soli buforowanym cytrynianem, zawierającym 0,1% SDS, po czym następuje płukanie nośnika w tej samej temperaturze, ale buforem mającym obniżone stężenie SC. W zależności od wymaganego stopnia ostrości warunków, a zatem stopnia podobieństwa sekwencji, takie obniżone stężenie soli to zwykle jeden raz SC zawierający 0,1% SDS, dwukrotnie rozcieńczony SC zawierający 0,1% SDS i dziesięciokrotnie rozcieńczony SC zawierający 0,1% SDS. Sekwencjami mającymi większy stopień podobieństwa są takie, dla których płukanie w buforach o zmniejszonym stężeniu ma mniejszy wpływ na hybrydyzację. Najkorzystniej, jeżeli sekwencje badana i będąca przedmiotem wynalazku są tak podobne, ze na ich hybrydyzację nie ma wpływu płukanie lub inkubacja w dziesięciokrotnie rozcieńczonym roztworze cytrynianu sodu zawierającym 0,1% SDS.
Zrekombinowany DNA może ponadto kodować białko mające oporność na herbicydy, mające korzystny wpływ na wzrost roślin, własności przeciwgrzybiczne, przeciwbakteryjne. przeciwwirusowe i/lub przeciwnicieniowe. W przypadku, kiedy DNA ma być wprowadzane do organizmu heterologicznego, może być modyfikowane poprzez usunięcie znanych motywów powodujących niestabilność mRNA (takich jak regiony bogate w pary AT) i sygnałów poliadenylacji i/lub użycie kodonów, preferowanych przez organizm, do którego ma być wprowadzony zrekombinowany DNA, tak aby ekspresja tak zmodyfikowanego DNA w tym organizmie prowadziła do powstania białka zasadniczo podobnego do otrzymanego poprzez ekspresję nie zmodyfikowanego zrekombinowanego DNA w organizmie, w którym składniki białkowe toksyny hybrydowej lub fragmentów toksyny są endogenne.
Wynalazek znajduje dalej zastosowanie do wytwarzania sekwencji DNA, która jest komplementarna do tej, która hybrydyzuje w ostrych warunkach ze zrekombinowanym DNA według wynalazku, wektora zawierającego taką zrekombinowaną (lub komplementarną do
181 408 niej) sekwencję DNA oraz rośliny i/lub mikroorganizmu, który zawiera taki DNA i umożliwia jego ekspresję oraz potomstwa takich roślin, które zawiera DNA stabilnie włączony i dziedziczący się w sposób mendlowsk, a także nasion takich roślin lub ich potomstwa.
Wynalazek jest stosowany do wytwarzania białka będącego wynikiem ekspresji rekombinanta DNA według wynalazku i białka owadobójczego wytwarzanego poprzez ekspresję zrekombinowanego DNA w roślinach nim transformowanych oraz do wytwarzania kompozycji owadobójczych zawierających jeden lub więcej fragmentów hybrydowej toksyny według wynalazku Fragment toksyny według wynalazku może być stosowany do zwalczania owadów, przez wystawianie ich na działanie takich fragmentów toksyn lub kompozycji i do ekstrakcji prowadzącej do otrzymania białek owadobójczych z zawierającego je materiału organicznego, obejmujące poddawanie materiału maceracji i ekstrakcji rozpuszczalnikami
Wynalazek będzie dalej wyjaśniony poprzez następujący poniżej opis, który przedstawia wytwarzanie hybrydowych fragmentów toksyny według wynalazku, wraz z towarzyszącymi mu rysunkami i listami sekwencji
Figura 1 pokazuje powstawanie hybrydowych genów dla białka krystalicznego poprzez rekombinację in vivo. Skonstruowano tandemowe plazmidy (pBD560 i pBD650) niosące dwa skrócone geny dla białka krystalicznego, zorientowane jako proste powtórzenia. W genie znajdującym się po stronie 5' (niezaczerniony pasek) brakuje regionu kodującego protoksynę (zaczerniony pasek), a z genu znajdującego się po stronie 3' (zakreskowany pasek) usunięty jest region kodujący domenę I. W szczepie JM101 recAT następuje rekombinacja in vivo pomiędzy homologicznymi regionami (domeną II i III). Selekcja przeciwko plazmidom niezrekombinowanym poprzez trawienie NotI i BamHI i następująca potem transformacja daje w rezultacie serię plazmidów kodujących hybrydowe białko krystaliczne.
Figura 2 pokazuje wzajemne uszeregowanie reszt aminokwasowych od 420 do 630 w CryIE i CryIC Zaznaczone są granice pomiędzy domenami I i III. Przedstawiono tylko te reszty aminokwasowe CryIC, które różnią się od CryIE, reszty i identyczne zaznaczono kropkami Na rysunku zaznaczone są pozycje crossing over (G27, H13, H7, H8, H17 i H21) w hybrydowych fragmentach CryIE-CryIC toksyny według wynalazku.
Figura 3 pokazuje wzajemne uszeregowanie reszt aminokwasowych od 420 do 630 w CryIE i CryIC. Zaznaczone są granice pomiędzy domenami I i III. Przedstawiono tylko te reszty aminokwasowe CryIC, które różnią się od CryIE, reszty identyczne zaznaczono kropkami. Na rysunku zaznaczone są pozycje crossing over (F59, F71, F26 i E7) w hybrydowych fragmentach CryIC-CryIE toksyny według wynalazku.
Figura 4 pokazuje wyniki pewnych doświadczeń nad heterologicznym współzawodnictwem Biotynylowane CryIC (część A) i G27 (część B) inkubuje się z pęcherzykami BBMV S exigua w nieobecności (ścieżki a) lub obecności nadmiaru nie wyznakowanego białka, jak zaznaczono. Po inkubacji, pęcherzyki przemywa się, nakłada na żel SDS-poliakryloamid i przenosi na filtr nitrocelulozowy Biotynylowane białka krystaliczne, ponownie izolowane z pęcherzykami, są uwidocznione przy użyciu koniugatu streptawidyna-peroksydaza i zaznaczone na rysunku strzałką
Figura 5 pokazuje mapę plazmidu pSB456, który koduje fragment hybrydowej toksyny G27 i jest używany do transformacji szczepu B. t. 51 pozbawionego krystalicznej toksyny
SEQ ID Nr 1 przedstawia sekwencję nukleotydową genu CryIC z B. t. podgat entomocidus 60.5.
SEQ ID Nr 2 przedstawia sekwencję aminokwasową białka kodowanego przez gen CryIC pokazany w SEQ ID Nr 1
SEQ ID Nr 3 przedstawia sekwencję nukleotydową genu CryIE z B t podgat. kenyae 4FI.
SEQ ID Nr 4 przedstawia sekwencję aminokwasową białka kodowanego przez gen CryIE pokazany w SEQ ID Nr 3.
SEQ ID Nr 5 przedstawia sekwencję nukleotydową kodującą preferowany fragment hybrydowej toksyny CryIE/CryIC według wynalazku.
SEQ ID Nr 6 przedstawia sekwencję aminokwasową białka kodowanego przez sekwencję nukleotydową pokazaną w SEQ ID Nr 5
181 408
SEQ ID Nr 7 przedstawia sekwencję nukleotydową fragmentu hybrydowej toksyny CryIA/CryIC według wynalazku
SEQ ID Nr 8 przedstawia sekwencję aminokwasowa białka kodowanego przez sekwencję nukleotydową pokazaną jako SEQ ID Nr 7.
Wytwarzanie plazmidów kodujących fragmenty hybrydowej toksyny.
Przy wytwarzaniu plazmidów przenoszących geny CryIC lub CryIE jako gospodarza dla plazmidów stosowano Escherichia coli XLI-blue (Stratagene Inc.), z wyjątkiem przypadków gdzie używano JM101 ze względu na tło genetyczne rec/A Wektor do ekspresji białek krystalicznych w E coli pochodził od pKK233-2 (Pharmacia LKB Biotechnology) Wielkość pKK233-2 jest zredukowana poprzez usunięcie fragmentu EcoRI-PvuII, niosącego gen kodujący oporność na tetracyklinę. Następnie w miejscu HindIII dołączany jest poprzez ligację linker XhoI o długości 6 par zasad, czego rezultatem jest pBD10. Plazmid BK+jest utworzony poprzez wstawienie linkera BgIII w miejscu SacI plazmidu Bluescript SK+ (Stratagene Inc.). Polilinker z BK+, od BgIII do XhoI, jest wstawiony pomiędzy miejsca NcoI-XhoI w pBD10 Uzyskany w ten sposób wektor ekspresyjny pBDl 1 zawiera promotor trc o wysokim poziomie ekspresji, miejsce wiązania rybosomu z lacZ i kodon inicjacyjny ATG. Kodon inicjacyjny zachodzi na miejsce NcoI, a za nim znajduje się polilinker dla ułatwienia wstawiania fragmentów do wektora Transkrypcję kończy terminator transkrypcji rrnB.
Klonowanie genów' cryIC i crylE z B. t. podgat odpowiednio, entomocidus 60.5 i kenya 4F1, odbywa się jak opisano wcześniej (Honee i wsp., 1990 (Appl. Environ Microbiol. 56, str. 823-825); Visser i wsp. 1990 (J. Bacteriol. 172, str. 6783-6788)). Dla celów klonowania, miejsce NcoI zachodzące na kodon startu cryIC jest utworzone poprzez mutagenezę in vitro. Miejsce BgIII jest utworzone bezpośrednio poniżej kodonu terminacji translacji cryIC poprzez ukierunkowaną mutagenezę, w wyniku której powstaje sekwencja ATAAGATCTGtT (kodon stop podkreślony). Fragment NcoI-BgIII zawierający region kodujący cryIC jest dołączony poprzez ligację do pBD11, wynikiem czego jest plazmid pBD150 do ekspresji CryIC. pBD155 jest pochodną pBD150, z którego usunięte są sekwencje polilinkera po stronie 3' cryIC.
Fragment Dral z pEM14 (Visser i wsp 1990) zawierający kompletny gen cryIE jest sklonowany w miejscu EcoRV SK+, w wyniku czego powstaje plazmid pEM15 Następnie do kodonu startowego wprowadzane jest w wyniku ukierunkowanej mutagenezy miejsce NcoI i gen cryIE jest przeniesiony jako fragment NcoI-XhoI do pBD11, w wyniku czego powstaje pBD160, plazmid do ekspresji CryIE.
Skonstruowano plazmidy niosące jedynie regiony kodujące toksyczny fragment genów cryI W miejscach XmnI, obecnych w pozycji 1835 cryIC i w miejscu HgiAI w pozycji 1839 cryIE wstawiono poprzez ligację linkery BgIII Następnie fragmenty NcoI-BgIII, zawierające regiony kodujące toksyczne fragmenty cryIC (1835 bp) i cryIE (1939 bp), włączono w wyniku ligacji do pBD11, w wyniku czego powstały odpowiednio, pBD151 i pBD161, co jest opisane poniżej.
Tandemowe plazmidy użyte do wytworzenia hybrydowych genów cryIC-cryIE skonstruowano jak następuje. Do plazmidu pBD160 strawionego HpaI dołączono w wyniku ligacji linkery BamHI Taki DNA inkubowano z BamHI i XhoI i skrócony gen cryIE, biegnący od nukleotydu 704, włączono poprzez ligację do pBD151, w wyniku czego powstał pBD560. Celem skonstruowania tandemowego plazmidu do wytworzenia hybryd cryIE-cryIC, pBD155 strawiono NsiI i XhoI Fragment niosący skrócony gen CryIC, biegnący od nukleotydu 266, włączono poprzez ligację do pBD161 strawionego PstI/XhoI, w wyniku czego powstał plazmid pBD650 Dzięki sekwencjom polilinkera, pomiędzy skróconymi genami znajdującymi się w tandemowych plazmidach pDB560 i pDB650 obecne są unikalne miejsca restrykcyjne NotI i BamHI.
Techniki rekombinowania DNA i konstrukcja hybrydowych toksyn
Wszystkie techniki rekombinowania DNA są zgodne z opisanymi przez Sambrook i wsp 1989 (w Molecular Cloning, A Laboratory Manual: Cold Spring Harbour Press, Cold Spring Harbour), sekwencjonowanie DNA jest wykonywane metodą didedeoksytrifosforanów z fluorescencyjnymi barwnikami połączonymi z dideoksynukleotydami. Analiza jest prowa8
181 408 dzona automatycznie przy użyciu analizatora sekwencji nukleotydowej Applied Biosystem 370A.
Homologia występująca pomiędzy genami cryI umożliwia międzycząsteczkową rekombinację in vivo. Wytwarzane są dwa tandemowe plazmidy, każdy z nich niosący dwa skrócone geny dla białka krystalicznego, zachodzące na siebie jedynie na obszarze domen II i III. A zatem rekombinacja zachodzi jedynie na obszarze kodującym domeny II i III. Rekombinacja w fazie odczytu, którą można wyselekcjonować poprzez trawienie enzymami restrykcyjnymi, daje plazmidy, które wyrażają pełnej długości hybrydową toksynę o wielkości 140 kD Do wytworzenia rekombinantów in vivo tandemowy plazmid (pDB560 lub pBD650; fig 2) przenoszono do JM101. Celem wyselekcjonowania niezrekombinowanych plazmidów, z niezależnie powstałych rekombinantów izolowano 5 pg DNA i trawiono NotI i BamHI, tnąc pomiędzy dwoma skróconymi genami cryI, a następnie transformowano E. coli XI.1-blue. Założono hodowle z 5 pojedynczych kolonii i analizowano wzory białka i znajdujące się w nich plazmidy.
Używając tandemowych plazmidów pBD560 i pBD650 i umożliwiając ich rekombinację tle genetycznym recA+ wytworzono hybrydowe toksyny, odpowiednio, CryIC-CryIE i CryIE-CryIC. Następnie izolowano DNA, trawiono i przenoszono do szczepu recA- tak jak opisano wyżej.
100 kolonii z 20 niezależnych doświadczeń analizowano na żelu SDS-PAGE 85% tych klonów wytwarza białko o masie 140 kD, wskazując na zajście rekombinacji w fazie pomiędzy, odpowiednio, cryIC i cryIE oraz cryIE i cryIC. Białka CryI są wytwarzane w E. coli jako kryształy, które mogą rozpuszczać się w wysokim pH. W przybliżeniu 15% toksyn hybrydowych wytwarzanych jak wyżej jest rozpuszczalnych w wysokim pH Rekombinanty wytwarzające rozpuszczalną toksynę hybrydową są w pierwszym rzędzie klasyfikowane przy użyciu enzymów restrykcyjnych, a następnie dla każdej klasy określane jest miejsce rekombinacji selekcjonowanych hybryd poprzez analizę sekwencji DNA Wszystkie przypadki crossing over, w wyniku których powstaje rozpuszczalna toksyna hybrydowa mają miejsce w obrębie lub bardzo blisko domeny III.
Oczyszczanie i analiza białka.
Białka krystaliczne izolowano zasadniczo jak opisano w Convents i wsp (J Biol. Chem. 265, 1369-1375; Eur. J. Biochem. 195, str. 631-635). W skrócie, zrekombinowaną E. coli hodowano w 30°C w 250 ml pożywki TB do OD660 10-15. Kryształy izolowane z lizatów E. coli rozpuszczano w czasie inkubacji przez 2 godz. w 20 mM Na2CO 3, 10 mM ditiotreitol, 100 mM NaCl, pH 10 w 37°C. pH roztworu obniżano do 8 za pomocą Tris-HCl i inkubowano z trypsyną Roztwór toksyny dializowano wobec 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl pH 9 Następnie fragment toksyczny oczyszczano na kolumnie Mono Q 5/5 podłączonej do systemu chromatografii cieczowej (FpLC) (Pharmacia LKB Biotechnology) Białka rozdzielano poprzez elektroforezę w 7.5% żelu siarczan sodowy dodecylu-poliakryloamid.
Analiza biochemiczna i izolacja fragmentów toksycznych o masie 65 kD.
Wyizolowane kryształy oczyszczonej CryIC, CryIE i białek hybrydowych są upłynniane w wysokim pH i inkubowane z trypsyną. Podobnie, jak CryIC i CryIE, wszystkie rozpuszczalne hybrydowe toksyny po crossing over w domenie III są przekształcane do stabilnych fragmentów o masie 65 kD. Fragmenty 65 kD mogą być oczyszczane przy użyciu chromatografii anionowymiennej w podobnych warunkach jak białka wyjściowe. Hybrydy F59 i F71 po crossing over w domenie II są całkowicie degradowane przez trypsynę. Jak widać, jakkolwiek hybrydy te me wytrącają się jako nierozpuszczalne agregaty, miejsce cięcia dla trypsyny ukryte w białku wyjściowym może być wystawione na działanie trypsyny. Z powodu tego faktu fragmenty o wielkości 65 kD nie są izolowane z F59 i F71.
Tabela 1 pokazuje skład 5 hybrydowych toksyn CryIE-CryIC: (G27; H8, H17, H13; H7 i H21) i 4 hybrydowych toksyn CryIC-CryIE (F59; F71; F26, E7) z odniesieniem do białek CryIC i CryIE, z których pochodzą. Sekwencje aminokwasowe toksyn CryIE-CryIC, zawierających toksyczne fragmenty według niniejszego wynalazku, rozciągają się do aminokwasu 1189 wyjściowego białka CryIC Sekwencje aminokwasowe toksyn CryIC-CryIE, zawierających toksyczne fragmenty według niniejszego wynalazku, rozciągają się do aminokwasu 1171
181 408 wyjściowego białka CryIE. Tabela 1 pokazuje również względną skuteczność owadobójczą różnych hybrydowych toksyn w stosunku do białek CryIC i CryIE
Tabela 1
TOKS a a IE aa IC M sexta S exigua M brassicae
IC 0 28-627 ++ ++ ++
IE 29-612 0 ++ - -
G27 1-474 478-627 ++ ++(+) +(+)
H8 1-497 501-627 +f - -
H17 1-529 533-627 ++ - -
H7 1-577 588-627 - - -
H21 1-605 621-627
F59 421-612 1-423 - - -
F71 428-612 1-430 - - -
F26 455-612(1171) 1-458 ++ - -
E7 588-612(1171) 1-602 ++ ++ ++
Tabela 1. Skład i toksyczność hybrydowych toksyn w odniesieniu do wyjściowych białek. Większość testów biologicznych wykonywano z oczyszczonymi fragmentami toksyn W przypadku CryIC rozciągały się one od aminokwasu około 28 do aminokwasu około 627, a w przypadku CryIE do 612. Długość kompletnych protoksyn jest podana w nawiasach.
Testy toksyczności dla owadów i aktywności owadobójczej produktów hybrydowych genów cryIC/cryIE
Hodowle bakteryjne zagęszczano do OD660 6.0 i 100 pl nakrapla się na 2 cm2 syntetycznego pożywienia na płytce do hodowli tkankowych z 24 zagłębieniami. Alternatywnie, rozcieńczone próbki oczyszczonych toksyn dodaje się do pożywienia. Larwy drugiego stadium
S. exigua, M Ιγι^ϊ^ρ lub M. sexta karmi się tym pożywieniem (16 na jedno rozcieńczenie próbki) przez 5 dni, po czym określa się wagę larw. Względny wzrost (EC50, stężenie dające 50% redukcji wzrostu) określa się poprzez obliczenie stosunku pomiędzy średnią wagą larw hodowanych na pożywce z dodatkiem toksyny i średniej wagi larw kontrolnych hodowanych na pożywce bez toksyny Jaja M. sexta są dostarczone przez Carolina Biological Supply Company, North Carolina, US.
Toksyczne fragmenty kodowane przez produkty hybrydowych genów testuje się pod względem aktywności wobec trzech różnych gatunków owadów, tak jak to zostało opisane powyżej. M. sexta jest wrażliwy zarówno na CryIC jak i CryIE. Jak można wywnioskować z podatności na działanie trypsyny, hybrydy F59 i F71 nie wykazują aktywności w stosunku do tych owadów (tabela 1) Jakkolwiek H7 jest przekształcany przez trypsynę w stabilne białko o masie 65 kD, nie jest ono toksyczne dla M. tpχta. Wszystkie inne hybrydy, podane w tabeli 1 są toksyczne i maj^natywną, biologicznie czynną konformację
Fragment CryIC o masie 65 kD jest wysoce toksyczny wobec S. exigua i M brassicae, podczas gdy CryIE nie. G27 (tabela 1; fig. 2), hybryda cryIE-CryIC po crossing over w miejscu połączenia domen II i III, ma aktywność wobec obu owadów. Pokazuje to, ze domena III cryIC posiada pełną aktywność wobec S exigua i M δ^^^ρ Hybryda H8, która różni się
181 408 od G27 tylko trzema resztami aminokwasowymi (patrz fig. 3), jakkolwiek jest aktywna wobec M. sexta, me ma aktywności w stosunku do S. exigua i M. brassicae.
F26 (tabela 1, fig. 3), hybryda odwrotna w stosunku do G27, w której domena III z CryIC została zamieniona na domenę III z CryIE, nie wykazuje aktywności wobec S exigua lub M. brassicae. Widocznie, jakkolwiek białko jest toksyczne dla M. sexta, sekwencje rozciągające się na między aminokwasami 28-462 nie wystarczają do zabicia S exigua i M. brassicae Jedynie gdy w hybrydzie (E7) obecne są sekwencje CryIC aż do aminokwasu 602, przywrócona jest aktywność owadobójcza wobec do tych owadów.
Niniejszy wynalazek wskazuje, ze reszty aminokwasowe 478-602 CryIC mogą wykazywać wysoką aktywność owadobójczą wobec S exigua i M brassicae
Biotynylacja białek krystalicznych i test wiązania
Biotynylację wykonuje się przy zastosowaniu estru biotyna-N-hydroxysukcymmid zasadniczo jak opisane przez producenta (Amersham). 1 mg białka krystalicznego inkubuje się z 40 |al odczynnika do biotynylacji w 50 mM NaHCOs, 150 mM NaCl pH 8, przez jedną godzinę w temp. 20°C. Celem usunięcia nie związanej biotyny roztwór nakłada się na kolumnę Sephadex 25, zrównoważoną tym samym buforem zawierającym 0,1% BSA, i próbki frakcji nakrapla się na filtr nitrocelulozowy Frakcje zawierające biotynylowane białka krystaliczne są uwidaczniane przy użyciu koniugatu streptawidyna-peroksydaza (Amersham), który katalizuje utlenienie luminolu, rezultatem czego jest chemiluminiscencja (ECL, Amersham), i łączone
Pęcherzyki błony rąbka szczoteczkowego izolowano tak jak opisano przez Wolfersberger i wsp (1987) (Comp. Blochem. Physiol. 86a, str. 301-308), z tą różnicą, ze pęcherzyki płukano jeszcze raz buforem do izolacji zawierającym 0,1% Tween 20 Wiązanie biotynylowanych białek krystalicznych do pęcherzyków błony rąbka szczoteczkowego (100 pg/ml) wykonywano w 100 pl PBS zawierającego 1% BSA, 0,1% Tween-20 (pH 7,6). Pęcherzyki (20 pg białka pęcherzyków) inkubuje się z 10 ng biotynylowanych białek krystalicznych w obecności lub nieobecności 1000-krotnego nadmiaru nie wyznakowanego białka krystalicznego przez 1 godz. w 20°C. Następnie pęcherzyki izoluje się ponownie poprzez wirowanie przez 10 min przy 14000 g w wirówce Eppendorfa, przepłukuje raz buforem do wiązania, zawiesza ponownie w buforze do nanoszenia na żel, denaturuje poprzez ogrzewanie i nakłada na 7,5% żele poliakryloamidowe Po elektroforezie białka przenosi się na filtry nitrocelulozowe i biotynylowane białka krystaliczne, które są ponownie izolowane z pęcherzykami, uwidacznia się poprzez inkubację nitrocelulozy z koniugatem streptawidynaperoksydaza (Amersham), który katalizuje utlenienie luminolu, rezultatem czego jest chemiluminiscencja (ECL, Amersham).
Ponieważ wiązanie się z komórkami nabłonka jelita jest kluczowym etapem działania białek krystalicznych, wiązanie się białek krystalicznych z pęcherzykami błony rąbka szczoteczkowego S. exigua bada się w doświadczeniach z heterologicznym współzawodnictwem Doświadczenia ze współzadownictwem wykazują, ze wiązanie się wyznakowanego CryIC (fig 4A, ścieżka a) i wyznakowanego F26 (nie pokazane) może być wyeliminowane we współzawodnictwie z nadmiarem zarówno nie wyznakowanego CryIC (ścieżka b), jak i F26 (ścieżka e), ale nie z nadmiarem G27 (ścieżka c) lub CryIE (ścieżka d) Ponadto wiązanie wyznakowanego G27 (fig. 4B, ścieżka a) i wyznakowanego CryIE (ścieżka d) może być wyeliminowane przez współzawodnictwo z nadmiarem G27 (ścieżka b), lub CryIE (ścieżka d), ale nie z nadmiarem CryIC (ścieżka a) lub F26 (ścieżka e). Na podstawie tych wyników można wysnuć wniosek, ze G27 i CryIE rozpoznają te same miejsca wiązania w błonach jelita środkowego S. exigua i ze miejsca te różnią się od rozpoznawanych przez CryIC i F26. W połączeniu, toksyczność i testy wiązania pokazują, ze G27 jest toksyczne tak jak CryIC, ale ze wiąże się z odmiennym receptorem. Jeżeli owad rozwinie oporność wobec białek krystalicznych poprzez zmianę charakterystyki wiązania przez receptor, można stosować G27 jako alternatywę dla CryIC w programach postępowania przy oporności.
Ekspresja genów dla hybrydowej toksyny cryIE/cryIC w systemach heterologicznych.
Gen cryIE/cryIC dla hybrydowej toksyny G27 jest wyrażany w E coli i produkt genu wykazuje co najmniej taką samą aktywność owadobójczą (przynajmniej wobec Spodoptera) jak CryIC Ponadto, produkt ten wykazuje zwiększoną aktywność tego typu, jeżeli jest wyra181 408 zany w szczepie Bacillus thuringiensis (patrz poniżej). Gen kodujący hybrydową toksynę G27 wprowadza się do odpowiedniego systemu wektorów bifunkcjonalnych, które wprowadza się następnie do odpowiedniego gospodarza B t. Następnie tak stransformowane komórki hoduje się i uzyskaną w rezultacie toksynę z obu całych hodowli oraz oczyszczone kryształy testuje się na pod kątem aktywności owadobójczej
Konstrukcja wektora bifunkcjonalnego, zawierającego G27, transformacja B t 51 i oczyszczanie z niego toksycznego białka.
Gen kodujący hybrydę G27 (3, 4 kb) wycina się z plazmidu ekspresyjnego E. coli pKK233 przy użyciu NcoI i XhoI. Miejsce XhoI wypełnia się przy użyciu fragmentu Klenowa z DNA polimerazy I E. coli Uzyskany fragment poddaje się ligacji z pBS635 (pBluescriptKS+, PcryIC, i terminator transkrypcji CryIA(c)) strawionym NcoI/SmaI Powstały w rezultacie plazmid, pSB453, trawi się ApaI i NotI, uzyskując fragment o długości 4,2 kb niosący promotor, otwartą ramkę odczytu hybrydy G27 i terminator Fragment ten poddaje się ligacji z pSB634 (wektor bifunkcjonalny zawierający pBC16 1 i BlueccriptKS-), dając w rezultacie pSB456 (patrz fig. 5). Plazmidowy DNA, izolowany z E coli DH10B, używa się do transformowania szczepu B t minus pod względem krystalicznej toksyny, B. t. 51 Izolowane klony pozytywne są oporne na tetracyklinę, wykazują obecność pSB456 i zawierają duże inkluzje odpowiadające białku o wielkości 135kD (co określa się poprzez SDS-PAGE). Próbki hybrydowej toksyny G27 przygotowuje się z hodowli transformowanych B. t 51, hodowanych poprzez sporulację w 30°C w podłożu CYS-Tc10. Biologiczne testy owadobójcze (tabela 2) przeprowadza się zarówno dla całych hodowli, jak i preparatów wypłukanych białek krystalicznych Kontrole obejmują Bt51 (pSB440), zawierający toksynę CryIC oraz Bt51 (pSB636), zawierający CryIE Stężenia toksyny są szacowane na podstawie SDS-PAGE.
Tabela 2
Test biologiczny dla hybrydowej toksyny G27 w porównaniu z CryIC i CryIE Liczba próbek jest podana w nawiasach Hybrydowa toksyna G27 jest około 50% bardziej skuteczna niż CryIE i CryIC w odniesieniu do toksyczności co najmniej względem Spodoptera sp
Toksyna LC50
Całe hodowle (ppt) Wymyty kryształ białkowy (ppm)
CryIC 56(2) 36(2) 40(4) 7 8(2) 8 1(4)
CryIE 79(1) 78(1) 33(4) 11 1(6) 7 5(4)
G27 29 (2) 21 (2) 25(4) 4 7(4) 6 0(4)
Stosunek (IC/G27) 1 93 1 71 1 60 1 66 1 35
Jakkolwiek niniejszy wynalazek został szczegółowo opisany w odniesieniu do wytwarzania hybrydowej toksyny G27, znawca doceni, ze wiele innych toksyn hybrydowych, mających ulepszone właściwości owadobójcze może być wytwarzanych według niniejszego zgłoszenia Przykładowo, SEQ ID Nr 7 i 8 przedstawiają dalsze hybrydowe toksyny według wynalazku, które mają zwiększoną aktywność owadobójczą. Można wytwarzać hybrydowe toksyny zawierające domenę III z CryIC i N-końcową domenę z dowolnego innego białka Cry. Co się tyczy testu biologicznego, transformanty niosące hybrydowe toksyny można hodować na podłożu SOP celem przyspieszenia przeprowadzenia testu i zredukowania objętości wymaganego materiału Ponadto gen kodujący G27 i/lub inne hybrydowe toksyny według wynalazku może być przeniesiony do szczepów B t kodujących toksynę i/lub wbudowany do chromosomu wybranego szczepu B. t. lub rzeczywiście wprowadzony do genomów' roślinnych celem uzyskania aktywności owadobójczej in situ w samej roślinie Z tego względu jest szczególnie korzystne jeżeli zrekombinowany DNA kodujący toksyny jest w taki sposób zmodyfikowany, ze wykorzystywane sąkodony, które są preferowane przez roślinę, do której zrekombinowany DNA ma być wprowadzony, tak ze ekspresja w taki sposób zmodyfikowa12
181 408 zrekombinowany DNA ma być wprowadzony, tak ze ekspresja w taki sposób zmodyfikowanego DNA w takiej roślinie daje białko zasadniczo podobne do tego, które jest otrzymywane poprzez ekspresję me zmodyfikowanego zrekombinowanego DNA w organizmie, w którym składniki białkowe hybrydowej toksyny lub fragmenty toksyny są endogenne
181 408
WYKAZ SEKWENCJI (1) INFORMACJE OGÓLNE:
(i) ZGŁASZAJĄCY:
(A) NAZWA: Sandoz Ltd (B) ULICA: Lichtstrasse 35 (C) MIASTO: Bazylea (D) STAN: BS (E) KRAJ: Szwajcaria (F) KOD POCZTOWY (ZIP): CH-4002 (G) TELEFON: 061-324-1111 (H) TELEFAX: 061-322-7532 (I) TELEX: 965-05055 (A) NAZWA: Sandoz-Patent BMBH (B) ULICA: Humboltstrasse 3 (C) MIASTO: Lorrach (E) KRAJ: Niemcy (F) KOD POCZTOWY (ZIP): D-7850 (A) NAZWA: Sandoz Erfindungen Verwaltungsgesellschaft MBH (B) ULICA: Brunnerstrasse 59 (C) MIASTO: Wiedeń (E) KRAJ: Austria (F) KOD POCZTOWY (ZIP): A-1230 (ii) TYTUŁ WYNALAZKU: Toksyna hybrydowa (iii) LICZBA SEKWENCJI: 8 (iv) FORMA CZYTELNA DLA KOMPUTERA:
(A) TYP NOŚNIKA: dyskietka (B) KOMPUTER: kompatybilny z IBM PC (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: Patent In Release # 1.0, wersja #1.25 (EPO) (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3567 par podstawowych (B) TYP: kwas nukleinowy (C) TYP ŁAŃCUCHA: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: nieznana (ii) TYP CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iii) ANTI-SENSE: NIE (vi) ŹRÓDŁO PIERWOTNE:
(A) ORGANIZM: Bacillus thuringiersig (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3567 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 1:
ATG GAG GAA AAT AAT CAA AAT CAA TGC ATA CCT TAC AAT TGT TTA AGT Met Glu Glu Asn Asn Gln Asn Gln Gys Ile Pro Tyr Asn Cys Leu Ser
5 10 15
181 408
AAT Asn CCT Pro GAA GAA GTA CTT TTG GAT GGA GAA CGG ATA TCA ACT GGT AAT Asn 96
Glu Glu Val 20 Leu Leu Asp Gly 25 Glu Arg Ile Ser Thr 30 Gly
TCA TCA ATT GAT ATT TCT CTG TCA CTT GTT CAG TTT CTG GTA TCT AAC 144
Ser Ser Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Val Gln Phe Leu Val Ser Asn
35 40 45
TTT GTA CCA GGG GGA GGA TTT TTA GTT GGA TTA ATA GAT TTT GTA TGG 192
Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Leu Val Gly Leu Ile Asp Phe Val Trp
50 55 60
GGA ATA GTT GGC CCT TCT CAA TGG GAT GCA TTT CTA GTA CAA ATT GAA 240
Gly Ile Val Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe Leu Val Gln Ile Glu
65 70 75 80
CAA TTA ATT AAT GAA AGA ATA GCT GAA TTT GCT AGG AAT GCT GCT ATT 288
Gln Leu Ile Asn Glu Arg Ile Ala Glu Phe Ala Arg Asn Ala Ala Ile
85 90 95
GCT AAT TTA GAA GGA TTA GGA AAC AAT TTC AAT ATA TAT GTG GAA GCA 336
Ala Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Asn Phe Asn Ile Tyr Val Glu Ala
100 105 110
TTT AAA GAA TGG GAA GAA GAT CCT AAT AAT CCA GAA ACC AGG ACC AGA 384
Phe Lys Glu Trp Glu Glu Asp Pro Asn Asn Pro Glu Thr Arg Thr Arg
115 120 125
GTA ATT GAT CGC TTT CGT ATA CTT GAT GGG CTA CTT GAA AGG GAC ATT 432
Val Ile Asp Arg Phe Arg Ile Leu Asp Gly Leu Leu Glu Arg Asp Ile
130 135 140
CCT TCG TTT CGA ATT TCT GGA TTT GAA GTA CCC CTT TTA TCC GTT TAT 480
Pro Ser Phe Arg Ile Ser Gly Phe Glu Val Pro Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
GCT CAA GCG GCC AAT CTG CAT CTA GCT ATA TTA AGA GAT TCT GTA ATT 528
Ala Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Ile Leu Arg Asp Ser Val Ile
165 170 175
TTT GGA GAA AGA TGG GGA TTG ACA ACG ATA AAT GTC AAT GAA AAC TAT 576
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Thr Thr Ile Asn Val Asn Glu Asn Tyr
180 185 190
AAT AGA CTA ATT AGG CAT ATT GAT GAA TAT GCT GAT CAC TGT GCA AAT 624
Asn Arg Leu Ile Arg His Ile Asp Glu Tyr Ala Asp His Cys Ala Asn
195 200 205
ACG TAT AAT CGG CGA TTA AAT AAT TTA CCG AAA TCT ACG TAT CAA GAT 672
Thr Tyr Asn Asn Gly Leu Asn Asn Leu Pro Lys Ser Thr Tyr Gln Asp
210 215 220
TGG ATA ACA TAT AAT CGA TTA CGG AGA GAC TTA ACA TTG ACT GTA TTA 720
Trp Ile Thr Tyr Asn Arg Leu Arg Arg Asp Leu Thr Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
GAT ATC GCC GCT TTC TTT CCA AAC TAT GAC AAT AGG AGA TAT CCA ATT 768
Asp Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Asn Arg Arg Tyr Pro Ile
245 250 255
CAG CCA GTT GGT CAA CTA ACA AGG GAA GTT TAT ACG GAC CCA TTA ATT 816
Gln Pro Val Gly Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Thr Asp Pro Leu Ile
260 265 270
181 408
AAT TTT AAT Asn 275 CCA CAG TTA CAG Gln TCT GTA GCT CAA TTA CCT ACT TTT AAC 864
Asn Phe Pro Gln Leu Ser 280 Val Ala Gln Leu Pro 285 Thr Phe Asn
GTT ATG GAG AGC AGC GCA ATT AGA AAT CCT CAT TTA TTT GAT ATA TTG 912
Val Met Glu Ser Ser Ala Ile Arg Asn Pro His Leu Phe Asp Ile Leu
290 295 300
AAT AAT CTT ACA ATC TTT ACG GAT TGG TTT AGT GTT GGA CGC AAT TTT 960
Asn Asn Leu Thr Ile Phe Thr Asp Trp Pha Ser Val Gly Arg Asn Phe
305 310 315 320
TAT TGG GGA GGA CAT CGA GTA ATA TCT ACC CTT ATA GGA GGT GGT AAC 1008
Tyr Trp Gly Gly His Arg Val Ile Ser Ser Leu Ile Gly Gly Gly Asn
325 330 335
ATA ACA TCT CCT ATA TAT GGA AGA GAG GCG AAC CAG GAG CCT CCA AGA 1056
Ile Thr Ser Pro Ile Tyr Gly Arg Glu Ala Asn Gln Glu Pro Pro Arg
340 345 350
TCC TTT ACT TTT AAT GGA CCG GTA TTT AGG ACT TTA TCA AAT CCT ACT 1104
Ser Phe Thr Phe Asn Gly Pro Val Phe Arg Thr Leu Ser Asn Pro Thr
355 360 365
TTA CGA TTA TTA CAG CAA CCT TGG CCA GCG CCA CCA TTT AAT TTA CGT 1152
Leu Arg Leu Leu Gln Gln Pro Trp Pro Ala Pro Pro Phe Asn Leu Arg
370 375 380
GGT GTT GAA GGA GTA GAA TTT TCT ACA CCT ACA AAT AGC TTT ACG TAT 1200
Gly Val Glu Gly Val Glu Phe Ser Thr Pro Thr Asn Ser Phe Thr Tyr
385 390 395 400
CGA GGA AGA GGT ACG GTT GAT TCT TTA ACT GAA TTA CCG CCT GAG GAT 1248
Arg Gly Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Thr Glu Leu Pro Pro Glu Asp
405 410 415
AAT AGT GTG CCA CCT CGC GAA GGA TAT AGT CAT CGT TTA TGT CAT GCA 1296
Asn Ser Val Pro Pro Arg Glu Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala
420 425 430
ACT TTT GTT CAA AGA TCT GGA ACA CCT TTT TTA ACA ACT GGT GTA GTA 1344
Thr Phe Val Gln Arg Ser Gly Thr Pro Phe Leu Thr Thr Gly Val Val
435 440 445
TTT TCT TGG ACG CAT CGT AGT GCA ACT CTT ACA AAT ACA ATT GAT CCA 1392
Phe Ser Trp Thr His Arg Ser Ala Thr Leu Thr Asn Thr Ile Asp Pro
450 455 460
GAG AGA ATT AAT CAA ATA CCT TTA GTG AAA GGA TTT AGA GTT TGG GGG 1440
Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly Phe Arg Val Trp Gly
465 470 475 480
GGC ACC TCT GTC ATT ACA GGA CCA GGA TTT ACA GGA GGG GAT ATC CTT 1488
Gly Thr Ser Val Ile Thr Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu
485 490 495
CGA AGA AAT ACC TTT GGT GAT TTT GTA TCT CTA CAA GTC AAT ATT AAT 1536
Arg Arg Asn Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu Gln Val Asn Ile Asn
500 505 510
TCA CCA ATT ACC CAA AGA TAC CGT TTA AGA TTT CGT TAC GCT TCC AGT 1584
Ser Pro Ile Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Ser
515 520 525
181 408
AGG GAT GCA Arg Asp Ala CGA GTT ATA Ile GTA TTA ACA GGA GCG GCA TCC ACA GGA GTG 1632
Arg Val Val 535 Leu Thr Gly Ala Ala 540 Ser Thr Gly Val
530
GGA CGC CAA GTT AGT GTA AAT ATG CCT CTT CAG AAA ACT ATG GAA ATA 1680
Gly Gly Gln Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln Lys Thr Met Glu Ile
545 550 555 560
GGG GAG AAC TTA ACA TCT AGA ACA TTT AGA TAT ACC GAT TTT AGT AAT 1728
Gly Glu Asn Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr Thr Asp Phe Ser Asn
565 570 575
CCT TTT TAC TTT AGA GCT AAT CCA GAT ATA ATT GGG ATA AGT GAA CAA 1776
Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile Ile Gly Ile Ser Glu Gln
580 585 590
CCT CTA TTT GGT GCA GGT TCT ATT AGT AGC GGT GAA CTT TAT ATA GAT 1824
Pro Leu Phe Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly Glu Leu Tyr Ile Asp
595 600 605
AAA ATT GAA ATT ATT CTA GCA GAT GCA ACA TTT GAA GCA GAA TCT GAT 1872
Lys Ile Glu Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu Ala Glu Ser Asp
610 615 620
TTA GAA AGA GCA CAA AAG GCG GTG AAT GCC CTG TTT ACT TCT TCC AAT 1920
Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Ser Asn
625 630 635 640
CAA ATC GGG TTA AAA ACC GAT GTG ACG GAT TAT CAT ATT GAT CAA GTA 1968
Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val
645 650 655
TCC AAT TTA GTG GAT TGT TTA TCA GAT GAA TTT TGT CTG GAT GAA AAG 2016
Ser Asn Leu Val Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys
660 665 670
CGA GAA TTG TCC GAG AAA GTC AAA CAT GCG AAG CGA CTC AGT GAT GAG 2064
Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu
675 680 685
CGG AAT TTA CTT CAA GAT CCA AAC TTC AGA GGG ATC AAT AGA CAA CCA 2112
Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro
690 695 700
GAC GGT GGC TGG AGA GGA AGT ACA GAT ATT ACC ATC CAA GGA GGA GAT 2160
Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp
705 710 715 720
GAC GTA TTC AAA GAG AAT TAC GTC ACA CTA CCG GGT ACC GTT GAT GAG 2208
Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Val Asp Glu
725 730 735
TGC TAT CCA ACG TAT TTA TAT CAG AAA ATA GAT GAG TCG AAA TTA AAA 2256
Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys
740 745 750
GCT TAT ACC CGT TAT GAA TTA AGA GGG TAT ATC GAA GAT AGT CAA GAC 2304
Ala Tyr Thr Arg Tyr Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp
755 760 765
TTA GAA ATC TAT TTG ATC CGT TAC AAT GCA AAA CAC GAA ATA GTA AAT 2352
Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn
770 775 780
181 408
GTG CCA GGC ACG GGT TCC TTA TGG CCG CTT TCA GCC CAA AGT CCA Pro ATC Ile 800 240C
Val Pro Gly 785 Thr Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala Gln Ser
790 795
GGA AAG TGT GGA GAA CCG AAT CGA TGC GCG CCA CAC CTT GAA TGG AAT 2448
Gly Lys Cys Gly Glu Pro Asn Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn
805 810 815
CCT GAT CTA GAT TGT TCC TGC AGA GAC GGG GAA AAA TGT GCA CAT CAT 2496
Pro Asp Leu Asp Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His
820 825 830
TCC CAT CAT TTC ACC TTG GAT ATT GAT GTT CGA TGT ACA GAC TTA AAT 2544
Ser His His Phe Thr Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn
835 840 845
GAG GAC TTA GGT GTA TGG GTG ATA TTC AAG ATT AAG ACG CAA GAT GGC 2592
Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly
850 855 860
CAT GCA AGA CTA GGG AAT CTA GAG TTT CTC GAA GAG AAA CCA TTA TTA 264C
His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu
865 870 875 880
GGG GAA GCA CTA GCT CGT GTG AAA AGA GCG GAG AAG AAG TGG AGA GAC 2688
Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp
885 890 895
AAA CGA GAG AAA CTG CAG TTG GAA ACA ATT ATT GTT TAT AAA GAG GCA 2736
Lys Arg Glu Lys Leu Gln Leu Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala
900 905 910
AAA GAA TCT GTA GAT GCT TTA TTT GTA AAC TCT CAA TAT GAT AGA TTA 2784
Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu
915 920 925
CAA GTG GAT ACG AAC ATC GCG ATG ATT CAT GCG GCA GAT AAA CGC GTT 2832
Gln Val Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val
930 935 940
CAT AGA ATC CGG GAA GCG TAT CTG CCA GAG TTG TCT GTG ATT CCA GGT 2880
His Arg Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly
945 950 955 960
GTC AAT GCG GCC ATT TTC GAA GAA TTA GAG GGA CGT ATT TTT ACA GCG 2928
Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Pbe Thr Ala
965 970 975
TAT TCC TTA TAT GAT GCG AGA AAT GTC ATT AAA AAT GGC GAT TTC AAT 2976
Tyr Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn
980 985 990
AAT GGC TTA TTA ZGC TGG AAC GTG AAA GGT CAT GTA GAT GTA GAA GAG 3024
Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu
995 1000 1005
CAA AAC AAC CAC CGT TCG GTC CTT GTT ATC CCA GAA TGG GAG GCA GAA 3072
Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu
1010 1015 102C
GTG TCA CAA GAG GTT CGT GTC TGT CCA GGT CGT GGC TAT ATC CTT CGT 3120
Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg
1025 1030 1035 1040
181 408
GTC Val ACA GCA TAT AAA GAG GGA TAT GGA GAG GGC TGC GTA ACG ATC CAT 3168
Thr Ala Tyr Lys Glu 1045 Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His
1050 1055
GAG ATC GAA GAC AAT ACA GAC GAA CTG AAA TTC AGC AAC TGT GTA GAA 3216
Glu Ile Glu Asp Asn Thr 1060 Asp Glu Leu Lys Phe Ser 1065 Asn Cys Val Glu 1070
GAG GAA GTA TAT CCA AAC AAC ACA GTA ACG TGT AAT AAT TAT ACT GGG 3264
Glu Glu Val Zyr Pro Asn 1075 Asn Thr Val 1080 Thr Cys Asn Asn Tyr Thr Gly 1085
ACT CAA GAA GAA TAT GAG GGT ACG TAC ACT TCT CGT AAT CAA GGA TAT 3312
Thr Gln Glu Glu Tyr Glu 1090 Gly Thr 1095 Tyr Thr Ser Arg Asn Gln Gly Tyr 1100
GAC GAA GCC TAT GGT AAT AAC CCT TCC GTA CCA GCT GAT TAC GCT TCA 3360
Asp Glu Ala Tyr Gly Asn Asn 1105 1110 Pro Ser Val Pro Ala 1115 Asp Tyr Ala Ser 1120
GTC TAT GAA GAA AAA TCG TAT ACA GAT GGA CGA AGA GAG AAT CCT TGT 3408
Val Tyr Glu Glu Lys Ser 1125 Tyr Thr Asp Gly Arg Arg 1100 Glu Asn Pro Cys 1135
GAA TCT AAC AGA GGC TAT GGG GAT TAC ACA CCA CTA CCG GCT GGT TAT 3456
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr 1140 Gly Asp Tyr Thr Pro Leu 1145 Pro Ala Gly Tyr 1150
GTA ACA AAG GAT TTA GAG TAC TTC CCA GAG ACC GAT AAG GTA TGG ATT 3504
Val Thr Lys Asp Leu Glu 1155 Tyr Phe Pro 1160 Glu Thr Asp Lys Val Trp Ile 1165
GAG ATC GGA GAA ACA GAA GGA ACA TTC ATC GTG GAT AGC GTG GAA TTA 3552
Glu CTC Leu Ile Gly Glu Thr Glu 1170 CTT ATG GAG GAA Leu Met Glu Glu Gly Thr 1175 Phe Ile Val Asp Ser Val Glu Leu 1180 3567
1185 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 2:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1189 aminokwasów (B) TYP: aminokwasowa (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 2:
Met 1 Glu Glu Asn Asn 5 Gln Asn Gln Cys Ile 10 Pro Tyr Asn Cys Leu 15 Ser
Asn Pro Glu Glu 20 Val Leu Leu Asp Gly 25 Glu Arg Ile Ser Thr 30 Gly Asn
Ser Ser Ile 35 Asp Ile Ser Leu Ser 40 Leu Val Gln Phe Leu 45 Val Ser Asn
Phe Val 50 Pro Gly Gly Gly Phe 55 Leu Val Gly Leu Ile 60 Asp Phe Val Trp
181 408
Gly 65 Ile Val Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe Leu Val Gln Ile Glu 80
70 75
Gln Leu Ile Asn Glu Arg Ile Ala Glu Phe Ala Arg Asn Ala Ala Ile
85 90 95
Ala Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Asn Phe Aen Ile Tyr Val Glu Ala
100 105 110
Phe Lys Glu Trp Glu Glu Asp Pro Asn Asn Pro Glu Thr Arg Thr Arg
115 120 125
Val Ile Asp Arg Phe Arg Ile Leu Asp Gly Leu Leu Glu Arg Asp Ile
130 135 140
Pro Ser Phe Arg Ile Ser Gly Phe Glu Val Pro Leu Leu Ser Val Tyr
145 150 155 160
Ala Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Ile Leu Arg Asp Ser Val Ile
165 170 175
Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Thr Thr Ile Asn Val Asn Glu Asn Tyr
180 185 190
Asn Arg Leu Ile Arg His Ile Asp Glu Tyr Ala Asp His Gys Ala Asn
195 200 205
Thr Tyr Asn Arg Gly Leu Asn Asn Leu Pro Lys Ser Thr Tyr Gln Asp
210 215 220
Trp Ile Thr Tyr Asn Arg Leu Arg Arg Asp Leu Thr Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Asn Arg Agr Tyr Pro Ile
245 250 255
Gln Pro Val Gly Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Thr Asp Pro Leu Ile
260 265 270
Asn Phe Asn Pro Gln Leu Gln Ser Val Ala Gln Leu Pro Thr Phe Asn
275 280 285
Val Met Glu Ser Ser Ala Ile Arg Asn Pro His Leu Phe Asp Ile Leu
290 295 300
Asn Asn Leu Thr Ile Phe Thr Asp Trp Phe Ser Val Gly Arg Asn Phe
305 310 315 320
Tyr Trp Gly Gly His Arg Val Ile Ser Ser Leu Ile Gly Gly Gly Asn
325 330 335
Ile Thr Ser Pro Ile Tyr Gly Arg Glu Ala Asn Gln Glu Pro Pro Arg
340 345 350
Ser Phe Thr Phe Asn Gly Pro Val Phe Arg Thr Leu Ser Asn Pro Thr
355 360 365
Leu Arg Leu Leu Gln Gln Pro Trp Pro Ala Pro Pro Phe Asn Leu Arg
370 375 380
Gly Val Glu Gly Val Glu Phe Ser Thr Pro Thr Asn Ser Phe Thr Tyr
385 390 395 400
Arg Gly Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Thr Glu Leu Pro Pro Glu Asp
405 410 415
Asn Ser Val Pro Pro Arg Glu Gly Tyr Ser His Arg Leu Cys His Ala
420 425 430
181 408
Thr Phe Val Gln Arg Ser Gly Thr Pro Phe Leu Thr Thr Gly Val Val
435 440 445
Phe Ser Trp Thr His Arg Ser Ala Thr Leu Thr Asn Thr Ile Asp Pro
450 455 460
Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu Vol Lys Gly Phe Arg Val Trp Gly
465 470 475 480
Gly Thr Ser Val Ile Thr Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu
485 490 495
Arg Arg Asn Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu Gln Val Asn Ile Asn
500 505 510
Ser Pro Ile Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Ser
515 520 525
Arg Asp Ala Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala Ala Ser Thr Gly Val
530 535 540
Gly Gly Gln Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln Lys Thr Met Glu Ile
545 550 555 560
Gly Glu Asn Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr Thr Asp Phe Ser Asn
565 570 575
Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile Ile Gly Ile Ser Glu Gln
580 585 590
Pro Leu Phe Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly Glu Leu Tyr Ile Asp
595 600 605
Lys Ile Glu Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu Ala Glu Ser Asp
610 615 620
Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Ser Asn
625 630 635 640
Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val
645 650 655
Ser Asn Leu Val Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys
660 665 670
Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu
675 680 685
Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro
690 695 700
Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp
705 710 715 720
Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Val Asp Glu
725 730 735
Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys
740 745 750
Ala Tyr Thr Arg Arg Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp
755 760 765
Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn
770 775 780
Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala Gln Ser Pro Ile 785 790 795 800
181 408
Gly Lys Cys Gly Glu Pro Asn 805 Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn
810 815
Pro Asp Leu Asp Cys Ser Cys 820 Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala 825 830 His His
Ser His His 835 Phe Thr Leu Asp Ile Aep Val Gly Cys Thr Asp 840 845 Leu Asn
Glu Asp Leu 850 Gly Val Trp Val 855 Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln 860 Asp Gly
His Ala Arg 865 Leu Gly Asn Leu 870 Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro 875 Leu Leu 880
Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val 885 Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp 890 Arg Asp 895
Lys Arg Glu Lys Leu Gln Leu 900 Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys 905 910 Glu Ala
Lys Glu Ser 915 Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp 920 925 Arg Leu
Gln Val Asp 930 Thr Asn Ile Ala 935 Met Ile His Ala Ala Asp Lys 940 Arg Val
His Arg Ile 945 Arg Glu Ala Tyr 950 Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile 955 Pro Gly 960
Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu 965 Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe 970 Thr Ala 975
Tyr Ser Leu Tyr Asp Ala Arg 980 Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp 985 990 Phe Asn
Asn Gly Leu 995 Leu Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val 1000 1005 Glu Glu
Gln Asn Asn 1010 His Arg Ser Val Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu 1015 102C Ala Glu
Val Ser Gln 1025 Glu Val Arg Val 1030 Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile 1035 Leu Arg 1040
Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly 1045 Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr 1050 Ile His 1055
Glu Ile Glu Asp Asn Thr Asp 106C Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu 1065 107C
Glu Glu Val Tyr Pro Asn Asn 1075 Thr Val Thr Cys Asn Asn Tyr 108C 1085 Thr Gly
Thr Gln Glu 1090 Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Gln 1095 1100 Gly Tyr
Asp Glu Ala 1105 Tyr Gly Asn Asn 1110 Pro Ser Val Pro Ala Asp Tyr 1115 Ala Ser 1120
Val Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr 1125 Thr Asp Gly Arg Arg Glu Asn 1130 Pro Cys 1135
Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly 1140 Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala 1145 115C Gly Tyr 1
Val Thr Lys Asp Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp Ile 1155 1160 1165
181 408
Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val Glu Leu 1170 1175 1180
Leu Leu Met Glu Glu
1185 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 3:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3513 par podstawowych (B) TYP: kwas nukleinowy (C) TYP ŁAŃCUCHA: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: nieznana (ii) TYP CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iii) ANTI-SENSE: NIE (vi) ŹRÓDŁO PIERWOTNE:
(A) ORGANI2M1: Bacillus thuringiensis (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3513 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 3:
ATG GAG ATA GTG AAT AAT CAG AAT CAA TGC GTG CCT TAT AAT TGT TTA 48
Met Glu 1 Ile Val Asn 5 Asn Gln Asn Gln Cys Val 10 Pro Tyr Asn Cys 15 Leu
AAT AAT CCT GAA AAT GAG ATA TTA GAT ATT GAA AGG TCA AAT AGT ACT 96
Asn Asn Pro Glu Asn Glu Ile Leu Asp Ile Glu Arg Ser Asn Ser Thr
20 25 30
GTA GCA ACA AAC ATC GCC TTG GAG ATT AGT CGT CTG CTC GCT TCC GCA 144
Val Ala Thr Asn Ile Ala Leu Glu Ile Ser Arg Leu Leu Ala Ser Ala
35 40 45
ACT CCA ATA GGG GGG ATT TTA TTA GGA TTG TTT GAT GCA ATA TGG GGG 192
Thr Pro Ile Gly Gly Ile Leu Leu Gly Leu Phe Asp Ala Ile Trp Gly
50 55 60
TCT ATA GGC CCT TCA CAA TGG GAT TTA TTT TTA GAG CAA ATT GAG CTA 240
Ser Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Leu Phe Leu Glu Gln Ile Glu Leu
65 70 75 80
TTG ATT GAC CAA AAA ATA GAG GAA TTC GCT AGA AAC CAG GCA ATT TCT 288
Leu Ile Asp Gln Lys Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile Ser
85 90 95
AGA TTG GAA GGG ATA AGC AGT CTG TAC GGA ATT TAT ACA GAA GCT TTT 336
Arg Leu Glu Gly Ile Ser Ser Leu Tyr Gly Ile Tyr Thr Glu Ala Phe
100 105 110
AGA GAG TGG GAA GCA GAT CCT ACT AAT CCA GCA TTA AAA GAA GAG ATG 384
Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Lys Glu Glu Met
115 120 125
CGT ACT CAA TTT AAT GAC ATG AAC AGT ATT CTT GTA ACA GCT ATT CCT 432
Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ile Leu Val Thr Ala Ile Pro
130 135 140
181 408
CTT TTT TCA GTT CAA AAT TAT CAA GTC CCA TTT TTA TCA GTA TAT GTT 480
Leu 145 Phe Ser Val Gln Asn 150 Tyr Gln Val Pro Phe 155 Leu Ser Val Tyr Val 160
CAA GCT GCA AAT TTA CAT TTA TCG GTT TTG AGA GAT GTT TCA GTG TTT 528
Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu Arg Asp Val Ser Val Phe
165 170 175
GGA CAG GCT TGG GGA TTT GAT ATA GCA ACA ATA AAT AGT CGT TAT AAT 576
Gly Gln Ala Trp Gly Phe Asp Ile Ala Thr Ile Asn Ser Arg Tyr Asn
180 185 190
GAT CTG ACT AGA CTT ATT CCT ATA TAT ACA GAT TAT GCT GTA CGC TGG 624
Asp Leu Thr Arg Leu Ile Pro Ile Tyr Thr Asp Tyr Ala Val Arg Trp
195 200 205
TAC AAT ACG GGA TTA GAT CGC TTA CCA CGA ACT GGT GGG CTG CGA AAC 672
Tyr Asn Thr Gly Leu Asp Arg Leu Pro Arg Thr Gly Gly Leu Arg Asn
210 215 220
TGG GCA AGA TTT AAT CAG TTT AGA AGA GAG TTA ACA ATA TCA GTA TTA 720
Trp Ala Arg Phe Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
GAT ATT ATT TCT TTT TTC AGA AAT TAC GAT TCT AGA TTA TAT CCA ATT 768
Asp Ile Ile Ser Phe Phe Arg Asn Tyr Asp Ser Arg Leu Tyr Pro Ile
245 250 255
CCA ACA AGC TCC CAA TTA ACG CGG GAA GTA TAT ACA GAT CCG GTA ATT 816
Pro Thr Ser Ser Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Thr Asp Pro Val Ile
260 265 270
AAT ATA ACT GAC TAT AGA GTT GGC CCC AGC TTC GAG AAT ATT GAG AAC 864
Asn Ile Thr Asp Tyr Arg Val Gly Pro Ser Phe Glu Asn Ile Glu Asn
275 280 285
TCA GCC ATT AGA AGC CCC CAC CTT ATG GAC TTC TTA AAT AAT TTG ACC 912
Ser Ala Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Phe Leu Asn Asn Leu Thr
290 295 300
ATT GAT ACG GAT TTG ATT AGA GGT GTT CAC TAT TCG GCA GGG CAT CGT 960
Ile Asp Thr Asp Leu Ile Arg Gly Val His Tyr Trp Ala Gly His Arg
305 310 315 320
GTA ACT TCT CAT TTT ACA GGT AGT TCT CAA GTG ATA ACA ACC CCT CAA 1008
Val Thr Ser His Phe Thr Gly Ser Ser Gln Val Ile Thr Thr Pro Gln
325 330 335
TAT GGG ATA ACC GCA AAT GCG GAA CCA AGA CGA ACT ATT GCT CCT AGT 1056
Tyr Gly Ile Thr Ala Asn Ala Glu Pro Arg Arg Thr Ile Ala Pro Ser
340 345 350
ACT TTT CCA GGT CTT AAC CTA TTT TAT AGA ACA TTA TCA AAT CCT TTC 1104
Thr Phe Pro Gly Leu Asn Leu Phe Tyr Arg Thr Leu Ser Asn Pro Phe
355 360 365
TTC CGA AGA TCA GAA AAT ATT ACT CCT ACC TTA GGG ATA AAT GTA GTA 1152
Phe Arg Arg Ser Glu Asn Ile Thr Pro Thr Leu Gly Ile Asn Val Val
370 375 380
CAG GGA GTA GGG TTC ATT CAA CCA AAT AAT GCT GAA GTT CTA TAT AGA 1200
Gln Gly Val Gly Phe Ile Gln Pro Asn Asn Ala Glu Val Leu Tyr Arg
385 390 395 400
181 408
AGT Ser AGG Arg GGG ACA Gly Thr GTA GAT TCT CTT AAT GAG TTA CCA ATT GAT GGT GAG 1248
Val 405 Asp Ser Leu Asn Glu Leu Pro 410 Ile Asp Gly 415 Glu
AAT TCA TTA GTT GGA TAT AGT CAT CGA TTA AGT CAT GTT ACA CTA ACC 1296
Asn Ser Leu Val Gly Tyr Ser His Arg Leu Ser His Val Thr Leu Thr
420 425 430
AGG TCG TTA TAT AAT ACT AAT ATA ACT AGC CTG CCA ACA TTT GTT TGG 1344
Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Ser Leu Pro Thr Phe Val Trp
435 440 445
ACA CAT CAC AGT GCT ACT AAT ACA AAT ACA ATT AAT CCA GAT ATT ATT 1392
Thr His His Ser Ala Thr Asn Thr Asn Thr Ile Asn Pro Asp Ile Ile
450 455 460
ACA CAA ATA CCT TTA GTG AAA GGA TTT AGA CTT GGT GGT GGC ACC TCT 1440
Thr Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly Phe Arg Leu Gly Gly Gly Thr Ser
465 470 475 480
GTC ATT AAA GGA CCA GGA TTT ACA GGA GGG GAT ATC CTT CGA AGA AAT 1488
Val Ile Lys Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn
485 490 495
ACC ATT GGT GAG TTT GTG TCT TTA CAA GTC AAT ATT AAC TCA CCA ATT 1536
Thr Ile Gly Glu Phe Val Ser Leu Gln Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile
500 505 510
ACC CAA AGA TAC CGT TTA AGA TTT CGT TAT GCT TCC AGT AGG GAT GCA 1584
Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala
515 520 525
CGA ATT ACT GTA GCG ATA GGA GGA CAA ATT AGA GTA GAT ATG ACC CTT 1632
Arg Ile Thr Val Ala Ile Gly Gly Gln Ile Arg Val Asp Met Thr Leu
530 535 540
GAA AAA ACC ATG GAA ATT GGG GAG AGC TTA ACA TCT AGA ACA TTT AGC 1680
Glu Lys Thr Met Glu Ile Gly Glu Ser Leu Thr Ser Arg Thr Phe Ser
545 550 555 560
TAT ACC AAT TTT AGT AAT CCT TTT TCA TTT AGG GCT AAT CCA GAT ATA 1728
Tyr Thr Asn Phe Ser Asn Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile
565 570 575
ATT AGA ATA GCT GAA GAA CTT CCT ATT CGT GGT GGT GAG CTT TAT ATA 1776
Ile Arg Ile Ala Glu Glu Leu Pro Ile Arg Gly Gly Glu Leu Tyr Ile
580 585 590
GAT AAA ATT GAA CTT ATT CTA GCA GAT GCA ACA TTT GAA GAA GAA TAT 1824
Asp Lys Ile Glu Leu Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu Glu Glu Tyr
595 600 605
GAT TTG GAA AGA GCA CAG AAG GCG GTG AAT GCC CTG TTT ACT TCT ACA 1872
Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr
610 615 620
AAT CAA CTA GGG CTA AAA ACA GAT GTG ACG GAT TAT CAT ATT GAT CAA 1920
Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln
625 630 635 640
GTT TCC AAT TTA GTT GAG TGT TTA TCG GAT GAA TTT TGT CTG GAT GAA 1968
Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu
645 650 655
181 408
AAG Lys AGA Arg GAA TTA TCC GAG AAA GTC AAA CAT GCG AAG CGA CTC AGT GAT Asp 2016
Glu Leu Ser 660 Glu Lys Val Lys 665 His Ala Lys Arg Leu 670 Ser
GAA CGG AAT TTA CTT CAA GAT CCA AAC TTC AGA GGG ATC AAT AGG CAA 2064
Glu Arg Asn Leu Leu Gln Asp Pro Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln
675 680 685
CCA GAC CGT GGC TGG AGA GGA AGC ACG GAT ATT ACT ATC CAA GGT GGA 2112
Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly
690 695 700
GAT GAC GTA TTC AAA GAG AAT TAC GTC ACA TTA CCG GGT ACC TTT GAT 2160
Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp
705 710 715 720
GAG TGC TAT CCA ACG TAT TTA TAT CAA AAA ATA GAT GAG TCG AAG TTA 2208
Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu
725 730 735
AAA GCT TAT ACC CGC TAT GAA TTA AGA GGG TAT ATC GAG GAT AGT CAA 2256
Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln
740 745 750
GAC TTA GAA ATC TAT TTA ATT CGC TAC AAT GCA AAA CAC GAG ACA GTA 2304
Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Val
755 760 765
AAC GTG CCA GGT ACG GGT TCC TTA TGG CCG CTT TCA GCC CAA AGT CCA 2352
Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala Gln Ser Pro
770 775 780
ATC GGA AAG TGT GGA GAA CCG AAT CGA TGC GCG CCA CAC CTT GAA TGG 2400
Ile Gly Lys Cys Gly Glu Pro Asn Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp
785 790 795 800
AAT CCT AAT CTA GAT TGC TCC TCC AGA GAC GGG GAA AAA TGT GCC CAT 2448
Asn Pro Asn Leu Asp Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His
805 810 815
CAT TCC CAT CAT TTC TCC TTG GAC ATT GAT GTT GGA TGT ACA GAC TTA 2496
His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu
820 825 830
AAT GAG GAC TTA GGT GTA TGG GTG ATA TTC AAG ATT AAG ACA CAA GAT 2544
Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp
835 840 845
GGC TAT GCA AGA CTA GGA AAT CTA GAG TTT CTC GAA GAG AAC CCA CTA 2592
Gly Tyr Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Asn Pro Leu
850 855 860
TTA GGG GAA GCA CTA GCT CGT GTG AAA AGA GCG GAG AAA AAA TGG AGA 2640
Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg
865 870 875 880
GAC AAA TGC GAA AAA TTG GAA TGG GAA ACA AAT ATT GTT TAT AAA GAG 2688
Asp Lys Cys Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu
885 890 895
GCA AAA GAA TCT GTA GAT GCT TTA TTT GTA AAC TCT CAA TAT GAT AGA 2736
Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg
900 905 910
181 408
TTA CAA Leu Gln GCG GAT ACG AAT ATC GCG ATG ATT CAT GCG GCA GAT AAA CGC 2784
Ala 915 Asp Thr Asn Ile Ala Met 920 Ile His Ala Ala 925 Asp Lys Arg
GTT CAT AGC ATT CGA GAA GCG TAT CTG CCA GAG CTG TCT GTG ATT CCG 2832
Val His 930 Ser Ile Arg Glu Ala 935 Tyr Leu Pro Glu Leu 940 Ser Val Ile Pro
GGT GTC AAT GCG GCT ATT TTT GAA GAA TTA GAA GGG CGT ATT TTC ACT 2880
Gly Val 945 Asn Ala Ala Ile 950 Phe Glu Glu Leu Glu 955 Gly Arg Ile Phe Thr 960
GCA TTC TCC CTA TAT GAT GCG AGA AAT GTC ATT AAA AAT GGC GAT TTC 2928
Ala Phe Ser Leu Tyr Asp 965 Ala Arg Asn Val 970 Ile Lys Asn Gly Asp 975 Phe
AAT AAT GGC TTA TCA TGC TGG AAC GTG AAA GGG CAT GTA GAT GTA GAA 2976
Asn Asn Gly Leu 980 Ser Cys Trp Asn Val 985 Lys Gly His Val Asp 990 Val Glu
GAA CAG AAC AAC CAT CGT TCG GTC CTT GTT GTT CCA GAA TGG GAA GCA 3024
Glu Gln Asn 995 Asn His Arg Ser Val Leu 1000 Val Val Pro Glu Trp 1005 Glu Ala
GAA GTG TCA CAA GAA GTT CGT GTT TGT CCG GGT CGT GGC TAT ATC CTT 3072
Glu Val Ser 1010 Gln Glu Val Arg Val Cys 1015 Pro Gly Arg Gly 1020 Tyr Ile Leu
CGT GTT ACA GCG TAC AAA GAG GGA TAT GGA GAG GGC TGT GTA ACG ATT 3120
Arg Val 1025 Thr Ala Tyr Lys Glu 1030 Gly Tyr Gly Glu Gly 1035 Cys Val Thr Ile 1040
CAT GAG ATC GAA GAC AAT ACA GAC GAA CTG AAA TTC AGC AAC TGT GTA 3168
His Glu Ile Glu Asp Asn 1045 Thr Aap Glu Leu Lys 1050 Phe Ser Asn Cys Val 1055
GAA GAG GAA GTA TAT CCA AAC AAC ACG GTA ACG TGT AAT AAT TAT ACT 3216
Glu Glu Glu Val Tyr Pro 1060 Asn Asn Thr Val 1065 Thr Cys Asn Asn Tyr 1070 Thr
GCG ACT CAA GAA GAA CAT GAG GGT ACG TAC ACT TCC CGT AAT CGA GGA 3264
Ala Thr Gln Glu 1075 Glu His Glu Gly Thr 1080 Tyr Thr Ser Arg Asn 1085 Arg Gly
TAT GAC GAA GCC TAT GAA AGC AAT TCT TCT GTA CAT GCG TCA GTC TAT 3312
Tyr Asp Glu 1090 Ala Tyr Glu Ser Asn Ser 1095 Ser Val His Ala 1100 Ser Val Tyr
GAA GAA AAA TCG TAT ACA GAT AGA CGA AGA GAG AAT CCT TGT GAA TCT 3360
Glu Glu 1105 Lys Ser Tyr Thr Asp 1110 Arg Arg Arg Glu Asn 1115 Pro Cys Glu Ser 1120
AAC AGA GGA TAT GGG GAT TAC ACA CCA CTA CCA GCT GGC TAT GTG ACA 3408
Asn Arg Gly Tyr Gly Asp 1125 Tyr Thr Pro Leu Pro 1130 Ala Gly Tyr Val Thr 1135
AAA GAA TTA GAG TAC TTC CCA GAA ACC GAT AAG GTA TGG ATT GAG ATC 3456
Lys Glu Leu Glu Tyr Phe 1140 Pro Glu Thr Asp 1145 Lys Val Trp Ile Glu 1150 Ile
GGA GAA ACG GAA GGA ACA TTC ATC GTG GAC AGC GTG GAA TTA CTT CTT 3504
Gly Glu Thr 1155 Glu Gly Thr Phe Ile Val 1160 Asp Ser Val Glu 1165 Leu Leu Leu
ATG GAG GAA Met Glu Glu
1170
3513
181 408 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 4:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1171 aminokwasów (B) TYP: aminokwasowa (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 4:
Met Glu Ile Val 1 Asn Asn 5 Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
10 15
Asn Asn Pro Glu Asn Glu Ile Leu Asp Ile Glu Arg Ser Asn Ser Thr
20 25 30
Val Ala Thr Asn Ile Ala Leu Glu Ile Ser Arg Leu Leu Ala Ser Ala
35 40 45
Thr Pro Ile Gly Gly Ile Leu Leu Gly Leu Phe Asp Ala Ile Trp Gly
50 55 60
Ser Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Leu Phe Leu Glu Gln Ile Glu Leu
65 70 75 80
Leu Ile Asp Gln Lys Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile Ser
85 90 95
Arg Leu Glu Gly Ile Ser Ser Leu Tyr Gly Ile Tyr Thr Glu Ala Phe
100 105 110
Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Lys Glu Glu Met
115 120 125
Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ile Leu Val Thr Ala Ile Pro
130 135 140
Leu Phe Ser Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro Phe Leu Ser Val Tyr Val
145 150 155 160
Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu Arg Asp Val Ser Val Phe
165 170 175
Gly Gln Ala Trp Gly Phe Asp Ile Ala Thr Ile Asn Ser Arg Tyr Asn
180 185 190
Asp Leu Thr Arg Leu Ile Pro Ile Tyr Thr Asp Tyr Ala Val Arg Trp
195 200 205
Tyr Asn Thr Gly Leu Asp Arg Leu Pro Arg Thr Gly Gly Leu Arg Asn
210 215 220
Trp Ala Arg Phe Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Ile Ser Val Leu
Z25 230 235 240
Asp Ile Ile Ser Phe Phe Arg Asn Tyr Asp Ser Arg Leu Tyr Pro Ile
245 250 255
Pro Thr Ser Ser Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Thr Asp Pro Val Ile
260 265 270
Asn Ile Thr Asp Tyr Arg Val Gly Pro Ser Phe Glu Asn Ile Glu Asn
275 280 285
Ser Ala Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Phe Leu Asn Asn Leu Thr
290 295 300
181 408
Ile Asp Thr Asp Leu Ile Arg Gly Val His Tyr Trp Ala Gly His Arg
305 310 315 320
Val Thr Ser His Phe Thr Gly Ser Ser Gln Val Ile Thr Thr Pro Gln
325 330 335
Tyr Gly Ile Thr Ala Asn Ala Glu Pro Arg Arg Thr Ile Ala Pro Ser
340 345 350
Thr Phe Pro Gly Leu Asn Leu Phe Tyr Arg Thr Leu Ser Asn Pro Phe
355 360 365
Phe Arg Arg Ser Glu Asn Ile Thr Pro Thr Leu Gly Ile Asn Val Val
370 375 380
Gln Gly Val Gly Phe Ile Gln Pro Asn Asn Ala Glu Val Leu Tyr Arg
385 390 395 400
Ser Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Glu Leu Pro Ile Asp Gly Glu
405 410 415
Asn Ser Leu Val Gly Tyr Ser His Arg Leu Ser His Val Thr Leu Thr
420 425 430
Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Ser Leu Pro Thr Phe Val Trp
435 440 445
Thr His His Ser Ala Thr Asn Thr Asn Thr Ile Asn Pro Asp Ile Ils
450 455 460
Thr Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly Phe Arg Leu Gly Gly Gly Thr Ser
465 470 475 480
Val Ile Lys Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn
485 490 495
Thr Ile Gly Glu Phe Val Ser Leu Gln Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile
500 505 510
Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala
515 520 525
Arg Ile Thr Val Ala Ile Gly Gly Gln Ile Arg Val Asp Met Thr Leu
530 535 540
Glu Lys Thr Met Glu Ile Gly Glu Ser Leu Thr Ser Arg Thr Phe Ser
545 550 555 560
Tyr Thr Asn Phe Ser Asn Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile
565 570 575
Ile Arg Ile Ala Glu Glu Leu Pro Ile Arg Gly Gly Glu Leu Tyr Ile
580 585 590
Asp Lys Ile Glu Leu Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu Glu Glu Tyr
595 600 605
Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Thr
610 615 620
Asn Gln Leu Gly Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln
625 630 635 640
Val Ser Asn Leu Val Glu Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu
645 650 655
Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp
660 665 670
181 408
Glu Arg Asn Leu 675 Leu Gln Asp Pro 680 Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln 685
Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly
690 695 700
Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Phe Asp
705 710 715 720
Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu
725 730 735
Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln
740 745 750
Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Thr Val
755 760 765
Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala Gln Ser Pro
770 775 780
Ile Gly Lys Cys Gly Glu Pro Asn Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp
785 790 795 800
Asn Pro Asn Leu Asp Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His
805 810 815
His Ser His His Phe Ser Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu
820 825 830
Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp
835 840 845
Gly Tyr Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Asn Pro Leu
850 855 860
Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg
865 870 875 880
Asp Lys Cys Glu Lys Leu Glu Trp Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu
885 890 895
Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg
900 905 910
Leu Gln Ala Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg
915 920 925
Val His Ser Ile Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro
930 935 940
Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr
945 950 955 960
Ala Phe Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe
965 970 975
Asn Asn Gly Leu Ser Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu
980 985 990
Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu Val Val Pro Glu Trp Glu Ala
995 1000 1005
Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu
1010 1015 1020
Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile 1025 1030 1035 1040
181 408
His Glu Ile Glu Asp Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val
1045 1050 1055
Glu Glu Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asn Tyr Thr
1060 1065 1070
Ala Thr Gln Glu Glu His Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn Arg Gly
1075 1080 1085
Tyr Asp Glu Ala Tyr Glu Ser Asn Ser Ser Val His Ala Ser Val Tyr
1090 1095 1100
Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Arg Arg Arg Glu Asn Pro Cys Glu Ser
1105 1110 1115 1120
Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu Pro Ala Gly Tyr Val Thr
1125 1130 1135
Lys Glu Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp Lys Val Trp Ile Glu Ile
1140 1145 1150
Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu
1155 1160 1165
Met Glu Glu 1170 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 5:
(i ) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3558 par podstawowych (B) TYP: kwas nukleinowy (C) TYP ŁAŃCUCHA: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: nieznana (ii) TYP CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iii) ANTI-SENSE:' NIE (vi) ŹRÓDŁO PIERWOTNE:
(A) ORGANIZM: Sekwencja hybrydowa (ix) CECHA;
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3558 (ci) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 5:
ATG GAG ATA GTG AAT AAT CAG AAT CAA TGC GTG CCT TAT AAT TGT TTA Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu 48
Met 1 Glu Ile Val Asn 5 Asn Gln Asn Gln
10 15
AAT AAT CCT GAA AAT GAG ATA TTA GAT ATT GAA -AGG TCA AAT AGT ACT 96
Asn Asn Pro Glu Asn Glu Ile Leu Asp Ile Glu Arg Ser Asn Ser Thr
20 25 30
GTA GCA ACA AAC ATC GCC TTG GAG ATT AGT CGT CTG CTC GCT TCC GCA 144
Val Ala Thr Asn Ile Ala Leu Glu Ile Ser Arg Leu Leu Ala Ser Ala
35 40 45
ACT CCA ATA GGG GGG ATT TTA TTA GGA TTG TTT GAT GCA ATA TGG GCG 192
Thr Pro Ile Gly Gly Ile Leu Leu Gly Leu Phe Asp Ala Ile Trp Gly
50 55 60
181 408
TCT ATA GGC CCT TCA CAA TGG Gln Trp 70 GAT TTA TTT TTA GAG CAA ATT GAG CTA 240
Ser 65 Ile Gly Pro Ser Asp Leu Phe Leu 75 Glu Gln Ile Glu Leu 80
TTG ATT GAC CAA AAA ATA GAG GAA TTC GCT AGA AAC CAG GCA ATT TCT 288
Leu Ile Asp Gln Lys Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile Ser
85 90 95
AGA TTG GAA GGG ATA AGC AGT CTG TAC GGA ATT TAT ACA GAA GCT TTT 336
Arg Leu Glu Gly Ile Ser Ser Leu Tyr Gly Ile Tyr Thr Glu Ala Phe
100 105 110
AGA GAG TGG GAA GCA GAT CCT ACT AAT CCA GCA TTA AAA GAA GAG ATG 384
Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Lys Glu Glu Met
115 120 125
CGT ACT CAA TTT AAT GAC ATG AAC AGT ATT CTT GTA ACA GCT ATT CCT 432
Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ile Leu Val Thr Ala Ile Pro
130 135 140
CTT TTT TCA GTT CAA AAT TAT CAA GTC CCA TTT TTA TCA GTA TAT GTT 480
Leu Phe Ser Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro Phe Leu Ser Val Tyr Val
145 150 155 160
CAA GCT GCA AAT TTA CAT TTA TCG GTT TTG AGA GAT GTT TCA GTG TTT 528
Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu Arg Asp Val Ser Val Phe
165 170 175
GGG CAG GCT TGG GGA TTT GAT ATA GCA ACA ATA AAT AGT CGT TAT AAT 576
Gly Gln Ala Trp Gly Phe Asp Ile Ala Thr Ile Asn Ser Arg Tyr Asn
180 185 190
GAT CTG ACT AGA CTT ATT CCT ATA TAT ACA GAT TAT GCT GTA CGC TGG 624
Asp Leu Thr Arg Leu Ile Pro Ile Tyr Thr Asp Tyr Ala Val Arg Trp
195 200 205
TAC AAT ACG GGA TTA GAT CGC TTA CCA CGA ACT GGT GGG CTG CGA AAC 672
Tyr Asn Thr Gly Leu Asp Arg Leu Pro Arg Thr Gly Gly Leu Arg Asn
210 215 220
TGG GCA AGA TTT AAT CAG TTT AGA AGA GAG TTA ACA ATA TCA GTA TTA 720
Trp Ala Arg Phe Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
GAT ATT ATT TCT TTT TTC AGA AAT TAC GAT TCT AGA TTA TAT CCA ATT 768
Asp Ile Ile Ser Phe Phe Arg Asn Tyr Asp Ser Arg Leu Tyr Pro Ile
245 250 255
CCA ACA AGC TCC CAA TTA ACG CGG GAA GTA TAT ACA GAT CCG GTA ATT 816
Pro Thr Ser Ser Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Thr Asp Pro Val Ile
260 265 270
AAT ATA ACT GAC TAT AGA GTT GGC CCC AGC TTC GAG AAT ATT GAG AAC 864
Asn Ile Thr Asp Tyr Arg Val Gly Pro Ser Phe Glu Asn Ile Glu Asn
275 280 285
TCA GCC ATT AGA AGC CCC CAC CTT ATG GAC TTC TTA AAT AAT TTG ACC 912
Ser Ala Ile, Arg Ser Pro His Leu Met Asp Phe Leu Asn Asn Leu Thr
290 295 300
ATT GAT ACG GAT TTG ATT AGA GGT GTT CAC TAT TGG GCA GGG CAT CGT 960
Ile Asp Thr Asp Leu Ile Arg Gly Val His Tyr Trp Ala Gly His Arg
305 310 315 320
181 408
GTA Val ACT Thr TCT Ser CAT His TTT ACA GGT AGT TCT CAA GTG ATA ACA ACC CCT CAA 1008
Phe 325 Thr Gly Ser Ser Gln 330 Val Ile Thr Thr Pro 335 Gln
TAT GGG ATA ACC GCA AAT GCG GAA CCA AGA CGA ACT ATT GCT CCT AGT 1056
Tyr Gly Ile Thr Ala Asn Ala Glu Pro Arg Arg Thr Ile Ala Pro Ser
340 345 350
ACT TTT CCA GGT CTT AAC CTA TTT TAT AGA ACA TTA TCA AAT CCT TTC 1104
Thr Phe Pro Gly Leu Asn Leu Phe Tyr Arg Thr Leu Ser Asn Pro Phe
355 360 365
TTC CGA AGA TCA GAA AAT ATT ACT CCT ACC TTA GGG ATA AAT GTA GTA 1152
Phe Arg Arg Ser Glu Asn Ile Thr Pro Thr Leu Gly Ile Asn Val Val
370 375 380
CAG GGA GTA GGG TTC ATT CAA CCA AAT AAT GCT GAA GTT CTA TAT AGA 1200
Gln Gly Val Gly Phe Ile Gln Pro Asn Asn Ala Glu Val Leu Tyr Arg
385 390 395 400
AGT AGG GGG ACA GTA GAT TCT CTT AAT GAG TTA CCA ATT GAT GGT GAG 1248
Ser Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Glu Leu Pro Ile Asp Gly Glu
405 410 415
AAT TCA TTA GTT GGA TAT AGT CAT CGA TTA AGT CAT GTT ACA CTA ACC 1296
Asn Ser Leu Val Gly Tyr Ser His Arg Leu Ser His Val Thr Leu Thr
420 425 430
AGG TCG TTA TAT AAT ACT AAT ATA ACT AGC CTG CCA ACA TTT GTT TGG 1344
Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Ser Leu Pro Thr Phe Val Trp
435 440 445
ACA CAT CAC AGT GCT ACT AAT ACA AAT ACA ATT AAT CCA GAT ATT ATT 1392
Thr His His Ser Ala Thr Asn Thr Asn Thr Ile Asn Pro Asp Ile Ile
450 455 460
ACA CAA ATA CCT TTA GTG AAA GGA TTT AGA GTT TGG GGG GGC ACC TCT 1440
Thr Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly Phe Arg Val Trp Gly Gly Thr Ser
465 470 475 480
GTC ATT ACA GGA CCA GGA TTT ACA GGA GGG GAT ATC CTT CGA AGA AAT 1488
Val Ile Thr Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn
485 490 495
ACC TTT GGT GAT TTT GTA TCT CTA CAA GTC AAT ATT AAT TCA CCA ATT 1536
Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu Gln Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile
500 505 510
ACC CAA AGA TAC CGT TTA AGA TTT CGT TAC GCT TCC AGT AGG GAT GCA 1584
Thr Gln Arg Tyr Arg Le Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala
515 520 525
CGA GTT ATA GTA TTA ACA GGA GCG CCA TCC ACA GGA GTG GGA GGC CAA 1632
Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala Ala Ser Thr Gly Val Gly Gly Gln
530 535 540
GTT AGT GTA AAT ATG CCT CTT CAG AAA ACT ATG GAA ATA GGG GAG AAC 1680
Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln Lys Thr Met Glu Ile Gly Glu Asn
545 550 555 560
TTA ACA TCT AGA ACA TTT AGA TAT ACC GAT TTT AGT AAT CCT TTT TCA 1728
Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr Thr, Asp Phe Ser Asn Pro Phe Ser
565 570 575
181 408
TTT AGA Phe Arg GCT AAT CCA GAT ATA ATT GGG ATA AGT GAA CAA CCT CTA TTT 1776
Ala Asn 580 Pro Asp Ile Ile Gly 585 Ile Ser Glu Gln Pro 590 Leu Phe
GGT GCA GGT TCT ATT AGT AGC GGT GAA CTT TAT ATA GAT AAA ATT GAA 1824
Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly Glu Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu
595 600 605
ATT ATT CTA GCA GAT GCA ACA TTT GAA GCA GAA TCT GAT TTA GAA AGA 1872
Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg
610 615 620
GCA CAA AAG GCG GTG AAT GCC CTG TTT ACT TCT TCC AAT CAA ATC GGG 1920
Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly
625 630 635 640
TTA AAA ACC GAT GTG ACG GAT TAT CAT ATT GAT CAA GTA TCC AAT TTA 1968
Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu
645 650 655
GTG GAT TGT TTA TCA GAT GAA TTT TGT CTG GAT GAA AAG CGA GAA TTG 2016
Val Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu
660 665 670
TCC GAG AAA GTC AAA CAT GCG AAG CGA CTC AGT GAT GAG CGG AAT TTA 2064
Ser Glu Lys Val Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu
675 680 685
CTT CAA GAT CCA AAC TTC AGA GGG ATC AAT AGA CAA CCA GAC CGT GGC 2112
Leu Gln Asp Pro Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly
690 695 700
TGG AGA GGA AGT ACA GAT ATT ACC ATC CAA GGA GGA GAT GAC GTA TTC 2160
Trp Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe
705 710 715 720
AAA GAG AAT TAC GTC ACA CTA CCG GGT ACC GTT GAT GAG TGC TAT CCA 2208
Lys Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Val Asp Glu Cys Tyr Pro
725 730 735
ACG TAT TTA TAT CAG AAA ATA GAT GAG TCG AAA TTA AAA GCT TAT ACC 2256
Thr Tyr Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr
740 745 750
CGT TAT GAA TTA AGA GGG TAT ATC GAA GAT AGT CAA GAC TTA GAA ATC 2304
Arg Tyr Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile
755 760 765
TAT TTG ATC CGT TAC AAT GCA AAA CAC GAA ATA GTA AAT GTG CCA GGC 2352
Tyr Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly
770 775 780
ACG GGT TCC TTA TGG CCG CTT TCA GCC CAA AGT CCA ATC GGA AAG TGT 2400
Thr Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala Gln Ser Pro Ile Gly Lys Cys
785 790 795 800
GGA GAA CCG AAT CGA TGC GCG CCA CAC CTT GAA TGG AAT CCT GAT CTA 2448
Gly Glu Pro Asn Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu
805 810 815
GAT TGT TCC TGC AGA GAC GGG GAA AAA TGT GCA CAT CAT TCC CAT CAT 2496
Asp Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His
820 825 830
181 408
TTC ACC Phe Thr TTG GAT Leu Asp 835 ATT Ile GAT Asp GTT GGA TGT ACA GAC TTA AAT GAG GAC TTA 2544
Val Gly 840 Cys Thr Asp Leu Asn 845 Glu Asp Leu
GGT GTA TGG GTG ATA TTC AAG ATT AAG ACG CAA GAT GGC CAT GCA AGA 2592
Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg
850 855 860
CTA GGG AAT CTA GAG TTT CTC GAA GAG AAA CCA TTA TTA GGG GAA GCA 2640
Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala
865 870 875 880
CTA GCT CGT GTG AAA AGA GCG GAG AAG AAG TGG AGA GAC AAA CGA GAG 2688
Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu
885 890 895
AAA CTA CAG 1TG GAA ACA AAT ATT GTT TAT AAA GAG GCA AAA GAA TCT 2736
Lys Leu Gln Leu Glu Thr Asn Ile Val Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser
900 905 910
GTA GAT GCT TTA TTT GTA AAC TCT CAA TAT GAT AGA TTA CAA GTG GAT 2784
Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr Asp Arg Leu Gln Val Asp
915 920 925
ACG AAC ATC GCG ATG ATT CAT GCG GCA GAT AAA CGC GTT CAT AGA ATC 2832
Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala Asp Lys Arg Val His Arg Ile
930 935 940
CGG GAA GCG TAT CTG CCA GAG TIG TCT GTG ATT CCA GGT GTC AAT GCG 2880
Arg Glu Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val Ile Pro Gly Val Asn Ala
945 950 955 960
GCC ATT TTC GAA GAA TTA GAG GGA CGT ATT TTT ACA GCG TAT TCC TTA 2928
Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Tyr Ser Leu
965 970 975
TAT GAT GCG AGA AAT GTC ATT AAA AAT GGC GAT TTC AAT AAT GGC TTA 2976
Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu
980 985 990
TTA TGC TGG AAC GTG AAA GGT CAT GTA GAT GTA GAA GAG CAA AAC AAC 3024
Leu Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val Asp Val Glu Glu Gln Asn Asn
995 100 0 1005
CAC CGT TCG GTC CTT GTT ATC CCA GAA TGG GAG GCA GAA GTG TCA CAA 3072
His Arg Ser Val Leu Val Ile Pro Glu Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln
1010 1015 1020
GAG GTT CGT GTC TGT CCA GGT CGT GGC TAT ATC CTT CGT GTC ACA GCA 3120
Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala
1025 1030 1035 1040
TAT AAA GAG GGA TAT GGA GAG GGC TGC GTA ACG ATC CAT GAG ATC GAA 3168
Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr Ile His Glu Ile Glu
1045 1050 1055
GAC AAT ACA GAC GAA CTG AAA TTC AGC AAC TGT GTA GAA GAG GAA GTA 3216
Asp Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser Asn Cys Val Glu Glu Glu Val
1060 1065 1070
TAT CCA AAC AAC ACA GTA ACG 1GT AAT AAT TAT ACT GGG ACT CAA GAA 3264
Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn Asn Tyr Thr Gly Thr Gln Glu
1075 1080 1085
181 408
GAA TAT GAG GGT ACG TAC ACT TCT Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser CGT AAT Arg Asn CAA GGA TAT GAC GAA GCC 3312
Gln Gly Tyr 1100 Asp Glu Ala
1090 1095
TAT GGT AAT AAC CCT TCC GTA CCA GCT GAT TAC GCT TCA GTC TAT GAA 3360
Tyr Gly Asn Asn 1105 Pro Ser Val Pro 1110 Ala Asp Tyr Ala Ser 1115 Val Tyr Glu 1120
GAA AAA TCG TAT ACA GAT GGA CGA AGA GAG AAT CCT TGT GAA TCT AAC 3408
Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Gly Arg 1125 Arg Glu Asn 1130 Pro Cys Glu Ser Asn 1135
AGA GGC TAT GGG GAT TAC ACA CCA CTA CCG GCT GGT TAT GTA ACA AAG 3456
Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro 1140 Leu Pro 1145 Ala Gly Tyr Val Thr Lys 1150
GAT TTA GAG TAC TTC CCA GAG ACC GAT AAG GTA TGG ATT GAG ATC GGA 3504
Asp Leu Glu Tyr 1155 Phe Pro Glu Thr Asp Lys 1160 Val Trp Ile Glu Ile Gly 1165
GAA ACA GAA GGA ACA TTC ATC GTG GAT AGC GTG GAA TTA CTC CTT ATG 3552
Glu Thr Glu Gly 1170 Thr Phe Ile Val 1175 Asp Ser Val Glu Leu 1180 Leu Leu Met
GAG GAA 3558
Glu Glu
1185 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 6:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1186 aminokwasów (B) TYP: aminokwasowa (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 6:
Met 1 Glu Ile Val Asn 5 Asn Gln Asn Gln Cys Val Pro Tyr Asn Cys Leu
10 15
Asn Asn Pro Glu Asn Glu Ile Leu Asp Ile Glu Arg Ser Asn Ser Thr
20 25 30
Val Ala Thr Asn Ile Ala Leu Glu Ile Ser Arg Leu Leu Ala Ser Ala
35 40 45
Thr Pro Ile Gly Gly Ile Leu Leu Gly Leu Phe Asp Ala Ile Trp Gly
50 55 60
Ser Ile Gly Pro Ser Gln Trp Asp Leu Phe Leu Glu Gln Ile Glu Leu
65 70 75 80
Leu Ile Asp Gln Lys Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala Ile Ser
85 90 95
Arg Leu Glu Gly Ile Ser Ser Leu Tyr Gly Ile Tyr Thr Glu Ala Phe
100 105 110
Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Lys Glu Glu Met
115 120 125
Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ile Leu Val Thr Ala Ile Pro 130 135 140
181 408
Leu Phe Ser Val Gln Asn Tys Gln Val Pro Phe Leu Ser Val Tyr Val
145 150 155 160
Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu Arg Asp Val Ser Val Phe
165 170 175
Gly Gln Ala Trp Gly Phe Asp Ile Ala Thr Ile Asn Ser Arg Tyr Asn
180 185 190
Asp Leu Thr Arg Leu Ile Pro Ile Tyr Thr Asp Tyr Ala Val Arg Trp
195 200 205
Tyr Asn Thr Gly Leu Asp Arg Leu Pro Arg Thr Gly Gly Leu Arg Asn
210 215 220
Trp Ala Arg Phe Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Ile Ser Val Leu
225 230 235 240
Asp Ile Ile Ser Phe Phe Arg Asn Tyr Asp Ser Arg Leu Tyr Pro Ile
245 250 255
Pro Thr Ser Ser Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr Thr Asp Pro Val Ile
260 265 270
Asn Ile Thr Asp Tyr Arg Val Gly Pro Ser Phe Glu Asn Ile Glu Asn
275 280 285
Ser Ala Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Phe Leu Asn Asn Leu Thr
290 295 300
Ile Asp Thr Asp Leu Ile Arg Gly Val His Tyr Trp Ala Gly His Arg
305 310 315 320
Val Thr Ser His Phe Thr Gly Ser Ser Gln Val Ile Thr Thr Pro Gln
325 330 335
Tyr Gly Ile Thr Ala Asn Ala Glu Pro Arg Arg Thr Ile Ala Pro Ser
340 345 350
Thr Phe Pro Gly Leu Asn Leu Phe Tyr Arg Thr Leu Ser Asn Pro Phe
355 360 365
Phe Arg Arg Ser Glu Asn Ile Thr Pro Thr Leu Gly Ile Asn Val Val
370 375 380
Gln Gly Val Gly Phe Ile Gln Pro Asn Asn Ala Glu Val Leu Tyr Arg
385 390 395 400
Ser Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Glu Leu Pro Ile Asp Gly Glu
405 410 415
Asn Ser Leu Val Gly Tyr Ser His Arg Leu Ser His Val Thr Leu Thr
420 425 430
Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Ser Leu Pro Thr Phe Val Trp
435 440 445
Thr His His Ser Ala Thr Asn Thr Asn Thr Ile Asn Pro Asp Ile Ile
450 455 460
Thr Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly Phe Arg Val Trp Gly Gly Thr Ser
465 470 475 480
Val Ile Thr Gly Pro Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn
485 490 495
Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu Gln Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile
500 505 510
181 408
Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe Arg Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala
515 520 525
Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala Ala Ser Thr Gly Val Gly Gly Gln
530 535 540
Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln Lys Thr Met Glu Ile Gly Glu Asn
545 550 555 560
Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr Thr Asp Phe Ser Asn Pro Phe Ser
565 570 575
Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile Ile Gly Ile Ser Glu Gln Pro Leu Phe
580 585 590
Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly Glu Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu
595 600 605
Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg
610 615 620
Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly
625 630 635 640
Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu
645 650 655
Val Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu
660 665 670
Ser Glu Lys Val Lys His Ala Lys Arg Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu
675 680 685
Leu Gln Asp Pro Asn Phe Arg Gly Ile Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly
690 695 700
Trp Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe
705 710 715 720
Lys Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly Thr Val Asp Glu Cys Tyr Pro
725 730 735
Thr Tyr Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr
740 745 750
Arg Tyr Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile
755 760 765
Tyr Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His Glu Ile Val Asn Val Pro Gly
770 775 780
Thr Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala Gln Ser Pro Ile Gly Lys Cys
785 790 795 800
Gly Glu Pro Asn Arg Cys Ala Pro His Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu
805 810 815
Asp Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys Cys Ala His His Ser His His
820 825 830
Phe Thr Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu
835 840 845
Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys Thr Gln Asp Gly His Ala Arg
850 855 860
Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala
865 870 875 880
181 408
Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys Lys Trp Arg Asp Lys Arg 895 Glu
885 890
Lys Leu Gln Leu Glu 900 Thr Asn Ile Val Tyr 905 Lys Glu Ala Lys 910 Glu Ser
Val Asp Ala 915 Leu Phe Val Asn Ser Gln Tyr 920 Asp Arg Leu 925 Gln Val Asp
Thr Asn Ile 930 Ala Met Ile His Ala Ala Asp 935 Lys Arg Val 940 His Arg Ile
Arg Glu Ala 945 Tyr Leu Pro Glu Leu Ser Val 950 Ile 955 Pro Gly Val Asn Ala 960
Ala Ile Phe Glu Glu 965 Leu Glu Gly Arg Ile 970 Phe Thr Ala Tyr Ser 975 Leu
Tyr Asp Ala Arg Asn 980 Val Ile Lys Asn Gly 985 Asp Phe Asn Asn 990 Gly Leu
Leu Cys Trp 995 Asn Val Lys Gly His Val Asp 1000 Val Glu Glu Gln 1005 Asn Asn
His Arg Ser 1010 Val Leu Val Ile Pro Glu Trp 1015 Glu Ala Glu 1020 Val Ser Gln
Glu Val Arg 1025 Val Cys Pro Gly Arg Gly Tyr 1030 Ile Leu Arg 1035 Val Thr Ala 1040
Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys Val Thr 1045 1050 Ile His Glu Ile Glu 1055
Asp Asn Thr Asp Glu 1060 Leu Lys Phe Ser Asn 1065 Cys Val Glu Glu Glu 1070 Val
Tyr Pro Asn Asn Thr 1075 Val Thr Cys Asn Asn 1080 Tyr Thr Gly Thr 1085 Gln Glu
Glu Tyr Glu 1090 Gly Thr Tyr Thr Ser Arg Asn 1095 Gln Gly Tyr 1100 Asp Glu Ala
Tyr Gly Asn 1105 Asn Pro Ser Val Pro Ala Asp 1110 Tyr Ala Ser 1115 Val Tyr Glu 1120
Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Glu Asn 1125 1130 Pro Cys Glu Ser Asn 1135
Arg Gly Tyr Gly Asp 1140 Tyr Thr Pro Leu Pro 1145 Ala Gly Tyr Val Thr 1150 Lys
Asp Leu Glu Tyr Phe 1155 Pro Glu Thr Asp Lys 1100 Val Trp Ile Glu 1165 Ile Gly
Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp Ser Val Glu Leu Leu Leu Met
1170 1175 1180
Glu Glu 1185
181 408 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 7:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3579 par podstawowych (B) TYP: kwas nukleinowy (C) TYP ŁAŃCUCHA: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: nieznana (ii) TYP CZĄSTECZKI: cDNA (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iii) ANTI-SENSE: NIE (vi) ŹRÓDŁO PIERWOTNE:
(A) ORGANIZM: Toksyna hybrydowa (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) LOKALIZACJA: 1..3579 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 7:
ATG Met 1 GAT AAC AAT CCG AAC ATC AAT GAA TGC ATT CCT TAT AAT TGT TTA 48
Asp Asn Asn Pro Asn 5 Ile Asn Glu Cys 10 Ile Pro Tyr Asn Cys 15 Leu
AGT AAC CCT GAA GTA GAA GTA TTA GGT GGA GAA AGA ATA GAA ACT GGT 96
Ser Asn Pro Glu Val Glu Val Leu Gly Gly Glu Arg Ile Glu Thr Gly
20 25 30
TAC ACC CCA ATC GAT ATT TCC TTG TCG CTA ACG CAA TTT CTT TTG AGT 144
Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln Phe Leu Leu Ser
35 40 45
GAA TTT GTT CCC GGT GCT GGA TTT GTG TTA GGA CTA GTT GAT ATA ATA 192
Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu Val Asp Ile Ile
50 55 60
TGG GGA ATT TTT GGT CCC TCT CAA TGG GAC GCA TTT CTT GTA CAA ATT 240
Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe Leu Val Gln Ile
65 70 75 80
GAA CAG TTA ATT AAC CAA AGA ATA GAA GAA TTC GCT AGG AAC CAA GCC 288
Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala Arg Asn Gln Ala
85 90 95
ATT TCT AGA TTA GAA GGA CTA AGC AAT CTT TAT CAA ATT TAC GCA GAA 336
Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln Ile Tyr Ala Glu
100 105 110
TCT TTT AGA GAG TGG GAA GCA GAT CCT ACT AAT CCA GCA TTA AGA GAA 384
Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro Ala Leu Arg Glu
115 120 125
GAG ATG CGT ATT CAA TTC AAT GAC ATG AAC AGT GCC CTT ACA ACC GCT 432
Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala Leu Thr Thr Ala
130 135 140
ATT CCT CTT TTT GCA GTT CAA AAT TAT CAA GTT CCT CTT TTA TCA GTA 480
Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro Leu Leu Ser Val
145 150 155 160
TAT GTT CAA GCT GCA AAT TTA CAT TTA TCA GTT TTG AGA GAT GTT TCA 528
Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu Arg Asp Val Ser
165 170 175
181 408
GTG Val TTT GGA Phe Gly CAA AGG TGG GGA TTT GAT GCC GCG ACT Thr ATC Ile AAT AGT CGT 576
Gln 180 Arg Trp Gly Phe Asp 185 Ala Ala Asn 190 Ser Arg
TAT AAT GAT TTA ACT AGG CTT ATT GGC AAC TAT ACA GAT CAT GCT GTA 624
Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Tyr Thr Asp His Ala Val
195 200 205
CGC TGG TAC AAT ACG GGA TTA GAG CGT GTA TGG GGA CCG GAT TCT AGA 672
Arg Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Glu Arg Val Trp Gly Pro Asp Ser Arg
210 215 220
GAT TGG ATA AGA TAT AAT CAA TTT AGA AGA GAA TTA ACA CTA ACT GTA 720
Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu Thr Leu Thr Val
225 230 235 240
TTA GAT ATC GTT TCT CTA TTT CCG AAC TAT GAT AGT AGA ACG TAT CCA 768
Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser Arg Thr Tyr Pro
245 250 255
ATT CGA ACA GTT TCC CAA TTA ACA AGA GAA ATT TAT ACA AAC CCA GTA 816
Ile Arg Thr Val Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr Thr Asn Pro Val
260 265 270
TTA GAA AAT TTT GAT GGT AGT TTT CGA GGC TCG GCT CAG CGC ATA GAA 864
Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala Gln Gly Ile Glu
275 280 285
GGA AGT ATT AGG AGT CCA CAT TTG ATG GAT ATA CTT AAC AGT ATA ACC 912
Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu Asn Ser Ile Thr
290 295 300
ATC TAT ACG GAT GCT CAT AGA GGA GAA TAT TAT TGG TCA GGG CAT CAA 960
Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp Ser Gly His Gln
305 310 315 320
ATA ATG GCT TCT CCT GTA GGG TTT TCG GGG CCA GAA TTC ACT TTT CCG 1008
Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu Phe Thr Phe Pro
325 330 335
CTA TAT GGA ACT ATG GGA AAT GCA GCT CCA CAA CAA CGT ATT GTT GCT 1056
Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln Arg Ile Val Ala
340 345 350
CAA CTA GGT CAG GGC GTG TAT AGA ACA TTA TCG TCC ACT TTA TAT AGA 1104
Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser Thr Leu Tyr Arg
355 360 365
AGA CCT TTT AAT ATA GGG ATA AAT AAT CAA CAA CTA TCT GTT CTT GAC 1152
Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu Ser Val Leu Asp
370 375 380
GGG ACA GAA TTT GCT TAT GGA ACC TCC TCA AAT TTG CCA TCC GCT GTA 1200
Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu Pro Ser Ala Val
385 390 395 400
TAC AGA AAA AGC GGA ACG GTA GAT TCG CTG GAT GAA ATA CCG CCA CAG 1248
Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu Ile Pro Pro Gln
405 410 415
AAT AAC AAC GTG CCA CCT AGG CAA GGA TTT AGT CAT CGA TTA AGC CAT 1296
Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His Arg Leu Ser His
420 425 430
181 408
GTT TCA ATG TTT CGT TCA GGC TTT AGT AAT AGT AGT GTA AGT ATA ATA 1344
Val Ser Met 435 Phe Arg Ser Gly Phe 440 Ser Asn Ser Ser Val 445 Ser Ile Ile
AGA GCT CCT ATG TTC TCT TGG ATA CAT CGT AGT GCA ACT CTT ACA AAT 1392
Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala Thr Leu Thr Asn
450 455 460
ACA ATT GAT CCA GAG AGA ATT AAT CAA ATA CCT TTA GTG AAA GGA TTT 1440
Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly Phe
465 470 475 480
AGA GTT TGG GGG GGC ACC TCT GTC ATT ACA GGA CCA GGA TTT ACA GGA 1488
Arg Val Trp Gly Gly Thr Ser Val Ile Thr Gly Pro Gly Phe Thr Gly
485 490 495
GGG GAT ATC CTT CGA AGA AAT ACC TTT GGT GAT TTT GTA TCT CTA CAA 1536
Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu Gln
500 505 510
GTC AAT ATT AAT TCA CCA ATT ACC CAA AGA TAC CGT TTA AGA TTT CGT 1584
Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe Arg
515 520 525
TAC GCT TCC AGT AGG GAT GCA CGA GTT ATA GTA TTA ACA GGA GCG GCA 1632
Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala Ala
530 535 540
TCC ACA GGA GTG GGA GGC CAA GTT AGT GTA AAT ATG CCT CTT CAG AAA 1680
Ser Thr Gly Val Gly Gly Gln Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln Lys
545 550 555 560
ACT ATG GAA ATA GGG GAG AAC TTA ACA TCT AGA ACA TTT AGA TAT ACC 1728
Thr Met Glu Ile Gly Glu Asn Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr Thr
565 570 575
GAT TTT AGT AAT CCT TTT TCA TTT AGA GCT AAT CCA GAT ATA ATT GGG 1776
Asp Phe Ser Asn Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile Ile Gly
580 585 590
ATA AGT GAA CAA CCT CTA TTT GGT GCA GGT TCT ATT AGT AGC GGT GAA 1824
Ile Ser Glu Gln Pro Leu Phe Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly Glu
595 600 605
CTT TAT ATA GAT AAA ATT GAA ATT ATT CTA GCA GAT GCA ACA TTT GAA 1872
Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu Iln Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu
610 615 620
GCA GAA TCT GAT TTA GAA AGA GCA CAA AAG GCG GTG AAT GCC CTG TTT 1920
Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe
625 630 635 640
ACT TCT TCC AAT CAA ATC GGG TTA AAA ACC GAT GTG ACG GAT TAT CAT 1968
Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His
645 650 655
ATT GAT CAA GTA TCC AAT TTA GTG GAT TGT TTA TCA GAT GAA TTT TGT 2016
Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys
660 665 670
CTG GAT GAA AAG CGA GAA TTG TCC GAG AAA GTC AAA CAT GCG AAG CGA 2064
Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys His Ala Lys Arg
675 680 685
181 408
CTC AGT GAT GAG CGG AAT TTA CTT CAA GAT CCA AAC TTC AGA GGG ATC 2112
Leu Ser Asp Glu Arg Asn Leu 695 Leu Gln Asp Pro Asn 700 Phe Arg Gly Ile
690
AAT AGA CAA CCA GAC CGT GGC TGG AGA GGA AGT ACA GAT ATT ACC ATC 2160
Asn Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile
705 710 715 720
CAA GGA GGA GAT GAC GTA TTC AAA GAG AAT TAC GTC ACA CTA CCG GGT 2208
Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly
725 730 735
ACC GTT GAT GAG TGC TAT CCA ACG TAT TTA TAT CAG AAA ATA GAT GAG 2256
Thr Val Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu
740 745 750
TCG AAA TTA AAA GCT TAT ACC CGT TAT GAA TTA AGA GGG TAT ATC GAA 2304
Ser Lys Leu Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu
755 760 765
GAT AGT CAA GAC TTA GAA ATC TAT TTG ATC CGT TAC AAT GCA AAA CAC 2352
Asp Ser Gln Asp Leu Glu Ile Tyr Leu Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His
770 775 780
GAA ATA GTA AAT GTG CCA GGC ACG GGT TCC TTA TGG CCG CTT TCA GCC 2400
Glu Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala
785 790 795 800
CAA AGT CCA ATC GGA AAG TGT GGA GAA CCG AAT CGA TGC GCG CCA CAC 2448
Gln Ser Pro Ile Gly Lys Cys Gly Glu Pro Asn Arg Cys Ala Pro His
805 810 815
CTT GAA TGG AAT CCT GAT CTA GAT TGT TCC TGC AGA GAC GGG GAA AAA 2496
Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu Asp Cys Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys
820 825 830
TGT GCA CAT CAT TCC CAT CAT TTC ACC TTG GAT ATT GAT GTT GGA TGT 2544
Cys Ala His His Ser His His Phe Thr Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys
835 840 845
ACA GAC TTA AAT GAG GAC TTA GGT GTA TGG GTG ATA TTC AAG ATT AAG 2592
Thr Asp Leu Asn Glu Asp Leu Gly Val Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys
850 855 860
ACG CAA GAT GGC CAT GCA AGA CTA GGG AAT CTA GAG TTT CTC GAA GAG 2640
Thr Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu
865 870 875 880
AAA CCA TTA TTA GGG GAA GCA CTA GCT CGT GTG AAA AGA GCG GAG AAG 2688
Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys
885 890 895
AAG TGG AGA GAC AAA CGA GAG AAA CTG CAG TTG GAA ACA AAT ATT GTT 2736
Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Lys Leu Gln Leu Glu Thr Asn Ile Val
900 905 910
TAT AAA GAG GCA AAA GAA TCT GTA GAT GCT TTA TTT GTA AAC TCT CAA 2784
Tyr Lys Glu Ala Lys Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln
915 920 925
TAT GAT AGA TTA CAA GTG GAT ACG AAC ATC GCG ATG ATT CAT GCG GCA 2832
Tyr Asp Arg Leu Gln Val Asp Thr Asn Ile Ala Met Ile His Ala Ala
930 935 940
181 408
GAT AAA CGC GTT CAT AGA ATC CGG GAA GCG TAT CTG CCA GAG TTG TCT 2880
Asp Lys 945 Arg Val His Arg 950 Ile Arg Glu Ala Tyr 955 Leu Pro Glu Leu Ser 960
GTG ATT CCA GGT GTC AAT GCG GCC ATT TTC GAA GAA TTA GAG GGA CGT 2928
Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg
965 970 975
ATT TTT ACA GCG TAT TCC TTA TAT GAT GCG AGA AAT GTC ATT AAA AAT 2976
Ile Phe Thr Ala Tyr Ser Leu Tyr Asp Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn
980 985 990
GGC GAT TTC AAT AAT GGC TTA TTA TGC TGG AAC GTG AAA GGT CAT GTA 3024
Gly Asp Phe Asn Asn Gly Leu Leu Cys Trp Asn Val Lys Gly His Val
995 1000 1005
GAT GTA GAA GAG CAA AAC AAC CAC CGT TCG GTC CTT GTT ATC CCA GAA 3072
Asp Val Glu Glu Gln Asn Asn His Arg Ser Val Leu Val Ile Pro Glu
1010 1015 1020
TGG GAG GCA GAA GTG TCA CAA GAG GTT CGT GTC TGT CCA GGT CGT GGC 3120
Trp Glu Ala Glu Val Ser Gln Glu Val Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly
1025 1030 1035 1040
TAT ATC CTT CGT GTC ACA GCA TAT AAA GAG GGA TAT GGA GAG GGC TGC 3168
Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys
1045 1050 1055
GTA ACG ATC CAT GAG ATC GAA GAC AAT ACA GAC GAA CTG AAA TTC AGC 3216
Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asp Asn Thr Asp Glu Leu Lys Phe Ser
1060 1065 1070
AAC TGT GTA GAA GAG GAA GTA TAT CCA AAC AAC ACA GTA ACG TGT AAT 3264
Asn Cys Val Glu Glu Glu Val Tyr Pro Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn
1075 1080 1085
AAT TAT ACT GGG ACT CAA GAA GAA TAT GAG GGT ACG TAC ACT TCT CGT 3312
Asn Tyr Thr Gly Thr Gln Glu Glu Tyr Glu Gly Thr Tyr Thr Ser Arg
1090 1095 1100
AAT CAA GGA TAT GAC GAA GCC TAT GGT AAT AAC CCT TCC GTA CCA GCT 3360
Asn Gln Gly Tyr Asp Glu Ala Tyr Gly Asn Asn Pro Ser Val Pro Ala
1105 1110 1115 1120
GAT TAC GCT TCA GTC TAT GAA GAA AAA TCG TAT ACA GAT GGA CGA AGA 3408
Asp Tyr Ala Ser Val Tyr Glu Glu Lys Ser Tyr Thr Asp Gly Arg Arg
1125 1130 1135
GAG AAT CCT TGT GAA TCT AAC AGA GGC TAT GGG GAT TAC ACA CCA CTA 3456
Glu Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Pro Leu
1140 1145 1150
CCG GCT GGT TAT GTA ACA AAG GAT TTA GAG TAC TTC CCA GAG ACC GAT 3504
Pro Ala Gly Tyr Val Thr Lys Asp Leu Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp
1155 1160 1165
AAG GTA TGG ATT GAG ATC GGA GAA ACA GAA GGA ACA TTC ATC GTG GAT 3552
Lys Val Trp Ile Glu Ile Gly Glu Thr Glu Gly Thr Phe Ile Val Asp
1170 1175 1180
AGC GTG GAA TTA ATA ATT ATG GAG AAA 3579
Ser Val Glu Leu Leu Leu Met Glu Glu
1185 1190
181 408 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR: 8:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 1193 aminokwasów (B) TYP: aminokwasowa (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA ID NR: 8:
Met 1 Asp Asn Asn Pro 5 Asn Ile Asn
Ser Asn Pro Glu 20 Val Glu Val Leu
Tyr Thr Pro 35 Ile Asp Ile Ser Leu 40
Glu Phe 50 Val Pro Gly Ala Gly 55 Phe
Trp 65 Gly Ile Phe Gly Pro 70 Ser Gln
Glu Gln Leu Ile Asn 85 Gln Arg Ile
Ile Ser Arg Leu 100 Glu Gly Leu Ser
Ser Phe Arg 115 Glu Trp Glu Ala Asp 120
Glu Met 130 Arg Ile Gln Phe Asn 135 Asp
Ile 145 Pro Leu Phe Ala Val 150 Gln Asn
Tyr Val Gln Ala Ala 165 Asn Leu His
Val Phe Gly Gln 180 Arg Trp Gly Phe
Tyr Asn Asp 195 Leu Thr Arg Leu Ile 200
Arg Trp 210 Tyr Asn Thr Gly Leu 215 Glu
Asp 225 Trp Ile Arg Tyr Asn 230 Gln Phe
Leu Asp Ile Val Ser 245 Leu Phe Pro
Ile Arg Thr Val 260 Ser Gln Leu Thr
Leu Glu Asn 275 Phe Asp Gly Ser Phe 280
Gly Ser 290 Ile Arg Ser Pro His 295 Leu
Glu Cys 10 Ile Pro Tyr Asn Cys 15 Leu
Gly 25 Gly Glu Arg Ile Glu 30 Thr Gly
Ser Leu Thr Gln Phe 45 Leu Leu Ser
Val Leu Gly Leu 60 Val Asp Ile Ile
Trp Asp Ala 75 Phe Leu Val Gln Ile 80
Glu Glu 90 Phe Ala Arg Asn Gln 95 Ala
Asn 105 Leu Tyr Gln Ile Tyr 110 Ala Glu
Pro Thr Asn Pro Ala 125 Leu Arg Glu
Met Asn Ser Ala 140 Leu Thr Thr Ala
Tyr Gln Val 155 Pro Leu Leu Ser Val 160
Leu Ser 170 Val Leu Arg Asp Val 175 Ser
Asp 185 Ala Ala Thr Ile Asn 190 Ser Arg
Gly Asn Tyr Thr Asp 205 His Ala Val
Arg Val Trp Gly 220 Pro Asp Ser Arg
Arg Arg Glu 235 Leu Thr Leu Thr Val 240
Asn Tyr 250 Asp Ser Arg Thr Tyr 255 Pro
Arg 265 Glu Ile Tyr Thr Asn 270 Pro Val
Arg Gly Ser Ala Gln 285 Gly Ile Glu
Met Asp Ile Leu Asn Ser Ile Thr
300
181 408
Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp Ser Gly His Gln
305 310 315 320
Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu Phe Thr Phe Pro
325 330 335
Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln Arg Ile Val Ala
340 345 350
Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser Thr Leu Tyr Arg
355 360 365
Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu Ser Val Leu Asp
370 375 380
Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu Pro Ser Ala Val
385 390 395 400
Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu Ile Pro Pro Gln
405 410 415
Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His Arg Leu Ser His
420 425 430
Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser Val Ser Ile Ile
435 440 445
Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala Thr Leu Thr Asn
450 455 460
Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly Phe
465 470 475 480
Arg Val Trp Gly Gly Thr Ser Val Ile Thr Gly Pro Gly Phe Thr Gly
485 490 495
Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu Gln
500 505 510
Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe Arg
515 520 525
Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala Ala
530 535 540
Ser Thr Gly Val Gly Gly Gln Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln Lys
545 550 555 560
Thr Met Glu Ile Gly Glu Asn Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr Thr
565 570 575
Asp Phe Ser Asn Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile Ile Gly
580 585 590
Ile Ser Glu Gln Pro Leu Phe Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly Glu
595 600 605
Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe Glu
610 615 620
Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg Ala Gln Lys Ala Val Asn Ala Leu Phe
625 630 635 640
Thr Ser Ser Asn Gln Ile Gly Leu Lys Thr Asp Val Thr Asp Tyr His
645 650 655
Ile Asp Gln Val Ser Asn Leu Val Asp Cys Leu Ser Asp Glu Phe Cys
660 655 670
181 408
Leu Asp Glu Lys Arg Glu Leu Ser Glu Lys Val Lys His Ala Lys Arg
675 680 685
Leu Ser Asp 690 Glu Arg Asn Leu Leu Gln 695 Asp Pro Asn Phe Arg Gly Ile 700
Asn 705 Arg Gln Pro Asp Arg Gly Trp Arg 710 Gly Ser Thr Asp Ile Thr Ile 715 720
Gln Gly Gly Asp Asp Val Phe Lys Glu 725 Asn Tyr Val Thr Leu Pro Gly 730 735
Thr Val Asp Glu Cys Tyr Pro Thr Tyr 740 745 Leu Tyr Gln Lys Ile Asp Glu 750
Ser Lys Leu 755 Lys Ala Tyr Thr Arg Tyr 760 Glu Leu Arg Gly Tyr Ile Glu 765
Asp Ser Gln 770 Asp Leu Glu Ile Tyr Leu 775 Ile Arg Tyr Asn Ala Lys His 780
Glu 785 Ile Val Asn Val Pro Gly Thr Gly 79C Ser Leu Trp Pro Leu Ser Ala 795 800
Gln Ser Pro Ile Gly Lys Cys Gly Glu 805 Pro Asn Arg Cys Ala Pro His 810 815
Leu Glu Trp Asn Pro Asp Leu Asp Cys 820 825 Ser Cys Arg Asp Gly Glu Lys 830
Cys Ala His 835 His Ser His His Phe Thr 840 Leu Asp Ile Asp Val Gly Cys 845
Thr Asp Leu 850 Asn Glu Asp Leu Gly Val 855 Trp Val Ile Phe Lys Ile Lys 860
Thr 863 Gln Asp Gly His Ala Arg Leu Gly 870 Asn Leu Glu Phe Leu Glu Glu 875 880
Lys Pro Leu Leu Gly Glu Ala Leu Ala 885 Arg Val Lys Arg Ala Glu Lys 890 895
Lys Trp Arg Asp Lys Arg Glu Lys Leu 900 905 Gln Leu Glu Thr Asn Ile Val 910
Tyr Lys Glu 915 Ala Lys Glu Ser Val Asp 920 Ala Leu Phe Val Asn Ser Gln 925
Tyr Asp Arg 930 Leu Gln Val Asp Thr Asn 935 Ile Ala Met Ile His Ala Ala 940
Asp 945 Lys Arg Val His Arg Ile Arg Glu 950 Ala Tyr Leu Pro Glu Leu Ser 955 960
Val Ile Pro Gly Val Asn Ala Ala Ile 965 Phe Glu Glu Leu Glu Gly Arg 970 975
Ile Phe Thr Ala Tyr Ser Leu Tyr Asp 980 985 Ala Arg Asn Val Ile Lys Asn 990
Gly Asp Phe 995 Asn Asn Gly Leu Leu Cys 1000 Trp Asn Val Lys Gly His Val 1005
Asp Val Glu 1010 Glu Gln Asn Asn His Arg 1015 Ser Val Leu Val Ile Pro Glu 1020
Trp Glu Ala 1025 Glu Val Ser Gln Glu Val 1030 Arg Val Cys Pro Gly Arg Gly 1035 1040
181 408
Tyr Ile Leu Arg Val Thr Ala Tyr Lys Glu Gly Tyr Gly Glu Gly Cys
1045 1050 1055
Val Thr Ile His Glu Ile Glu Asp Asn Thr Asp Glu Leu 1060 1065 Lys Phe Ser 1070
Asn Cys Val Glu 1075 Glu Glu Val Tyr Pro 1080 Asn Asn Thr Val Thr Cys Asn 1085
Asn Tyr Thr 1090 Gly Thr Gln Glu Glu Tyr 1095 Glu Gly Thr Tyr 1100 Thr Ser Arg
Asn Gln 1105 Gly Tyr Asp Glu Ala Tyr Gly 1110 Asn Asn Pro Ser 1115 Val Pro Ala 1120
Asp Tyr Ala Ser Val Tyr Glu Glu Lys 1125 Ser Tyr Thr Asp 1130 Gly Arg Arg 1135
Glu Asn Pro Cys Glu Ser Asn Arg Gly Tyr Gly Asp Tyr 1140 1145 Thr Pro Leu 1150
Pro Ala Gly Tyr 1155 Val Thr Lys Asp Leu 1160 Glu Tyr Phe Pro Glu Thr Asp 1165
Lys Val Trp 1170 Ser Val Glu 1185 Ile Leu Glu Ile Gly Glu Thr 1175 Leu Leu Met Glu Glu 1190 Glu Gly Thr Phe 1180 Ile Val Asp
181 408
CM es ł— cs es es cxJ es
u.
es
£ es
κ» es ffi —» U.I tf»
U*
FIG. 2
U >>
u,
U ώ
>>
u, u
£ &
« fr” 0 « « (fi » s es ►M
I §1 δ
I &
a o
t δ
s« e
(s «
tf» o
l·· 3- t/J e •
es u. 0
v- •
s — es 0
(fi a
ł— 0
-i 0
(fi
UJ 0
es s
0
g a
w- 0
a& ! 8
UJ
e
¢- et,
ε e
o s
© 0
SC 60
W S>
θ’ s
es 0
| CS
1 2S
1 cs
| t*»
1 c/>
1 cc
I cc
CS 1
M h-
c -J
=> 0
t-“ 0o«
es •
« 0
o 0
es 0
(fi 0
SO
X —>
V %»
i»·» »A»> IA 09
© es CM CM
cm e\i tA tA
JT ·& 'to* <W>
<U* «Brf· uj es
uj es M ha)
t=ml £>
3-ł S>i t. ł_
Ł. Ł. es es es es
ŁA © v” es « «9
ω a cs » U. t~ · X O SS » SC “ es es k«·
U. es a. es as t~ os
UJ
3- (fi
UJ 0
UJ β
UJ e
V“ u. 0
CM 0
□Ξ —)> <s D
Ω 0
CS 0
uj
M · as >
o ° ·—I B
3- · »1 UJ -
es (fi
& (fi
>-< B
1 (fi
1 es
1 <£
1 es
| u.
o. _j
_J □_
UJ o
UJ 0
181 408 *o esi flC to* ω a a. » β
• a
a
CO o
LL
J=} toto
U.
U i
U toto >>
to,
U
Q £
W >**<
g T * 4» ffi · US · ee s *kł <1
Ϊ3 fiJ al toLU
OLA
Lu
I i
i i
UJ us a:
O k=<
o u
es i => i es i
US i ffi I ee <x · o * oe · es ·
**x » LA
os es CM CM
CM CM LA LA
j? kto» Sto
w* **» CS LU
es lu kto kto
to* «X =>> =A
»> =>» to to
to to es es es es
es LA
1—
ts> • -o •o
e: • to*»
s- 8
8
Lu se a
ee a ar a
«j a a 8
cc a BS a
> a LU a
ee • «J a
ar 8 O a
to” 9 us 3-
to* 8 UJ 8
CU 8 β ω
es 8 LU 8
Z 8 LU 8
ka* 9 to- 8
Z 8 ffi 8
=> 8 O 8
es* • ffi 8
8 xJ 8
US 8 toto 8
s> 9 to*
u. 9 LU 1
o LU kto B
es 9 se 8
u. M to- o 8
►— 8 UJ —» to* 8
Z 8 3- 9
oc 8 o_I 9
cc 8 LU 9
_J 8 es 9
toto 8 es C3
O • es CC
es 8 to* 9
es 8 us CU
ί— 8 es
Lu 8 cc ω
es 8 CS 1
CU 8 LU 1
es 8 tol I
to- se CU I
to* 8 cr 1
o 9 UJ 9
us us s
1“ 9 to* β
es 9 es X
es 9 kto 9
39 C3 to* a
£ «ί O 9
ee 8 a. 9
LU 8 z 9
es 8 ffi a
se 8 oc 8
181 408
FIG. 4
A IC*
181 408
Ncol
181 408
E.coll recA+
BamHI+Notl
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz.
Cena 6,00 zł.

Claims (4)

Zastrzezenia patentowe
1. Fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis mający sekwencję aminokwasów od aminokwasu 1 do aminokwasu 620 określoną w Sek. ID Nr 6 lub mający tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian:
Ile w pozycji 609 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 618 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 620 jest zastąpiona przez Tyr lub toksyna podobna w co najmniej 85% do niej, która ma podobną aktywność owadobójczą lub podobną zdolność wiązania w błonie jelita środkowego owada.
2. Fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis mający sekwencję aminokwasów od aminokwasu 1 do aminokwasu 627, określoną w Sek. ID Nr 8 lub mający tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian:
Ile w pozycji 617 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 625 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 627 jest zastąpiona przez Tyr lub toksyna podobna w co najmniej 85% do nich, która ma podobną aktywność owadobójczą lub podobną zdolność wiązania w błonie jelita środkowego owada.
3. Rekombinant DNA kodujący fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis mający sekwencję aminokwasów od aminokwasu 1 do aminokwasu 620 określoną w Sek ID Nr 6 lub mający tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian’
Ile w pozycji 609 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 618 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 620 jest zastąpiona przez Tyr lub kodujący fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis mający sekwencję aminokwasów od aminokwasu około 1 do aminokwasu około 627 określoną w Sek. ID Nr 8 lub mający tę sekwencję z co najmniej jedną z następujących zmian:
Ile w pozycji 617 jest zastąpiona przez Leu,
Ala w pozycji 625 jest zastąpiona przez Glu,
Ser w pozycji 627 jest zastąpiona przez Tyr lub toksynę podobną w co najmniej 85% do nich, która ma podobną aktywność owadobójczą lub podobną zdolność wiązania w błonie jelita środkowego owada.
4. Rekombinant DNA według zastrz. 3, znamienny tym, ze zawiera sekwencję od nukleotydu 1 do nukleotydu 1860 określoną w Sek. ID Nr 5 lub sekwencję od nukleotydu 1 do nukleotydu 1881 w Sek ID Nr 7.
* * *
PL94313317A 1993-09-02 1994-09-01 Fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis i rekombinant DNA kodujacy fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL181408B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB939318207A GB9318207D0 (en) 1993-09-02 1993-09-02 Improvements in or relating to organic compounds
PCT/EP1994/002909 WO1995006730A1 (en) 1993-09-02 1994-09-01 Hybrid toxin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL313317A1 PL313317A1 (en) 1996-06-24
PL181408B1 true PL181408B1 (pl) 2001-07-31

Family

ID=10741404

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL94313317A PL181408B1 (pl) 1993-09-02 1994-09-01 Fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis i rekombinant DNA kodujacy fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis PL PL PL PL PL PL PL PL PL

Country Status (18)

Country Link
US (2) US5736131A (pl)
EP (1) EP0719335B1 (pl)
JP (1) JPH09502343A (pl)
KR (1) KR100360918B1 (pl)
AT (1) ATE329033T1 (pl)
AU (1) AU691522B2 (pl)
BR (1) BR9407377A (pl)
CA (1) CA2168011C (pl)
DE (1) DE69434758T2 (pl)
ES (1) ES2262136T3 (pl)
GB (1) GB9318207D0 (pl)
IL (1) IL110829A (pl)
PL (1) PL181408B1 (pl)
RU (1) RU2210593C2 (pl)
TW (1) TW430669B (pl)
UA (1) UA57698C2 (pl)
WO (1) WO1995006730A1 (pl)
ZA (1) ZA946770B (pl)

Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0413019B1 (en) * 1989-02-24 2001-10-04 Monsanto Technology LLC Synthetic plant genes and method for preparation
GB9318207D0 (en) 1993-09-02 1993-10-20 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
US6780408B1 (en) 1993-09-02 2004-08-24 Syngenta Participations Ag Genes encoding hybrid bacillus thuringiensis toxins
US5593881A (en) * 1994-05-06 1997-01-14 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis delta-endotoxin
US6063756A (en) 1996-09-24 2000-05-16 Monsanto Company Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor
CA2272843C (en) * 1996-11-20 2009-11-10 Ecogen, Inc. Broad-spectrum delta-endotoxins
US6713063B1 (en) 1996-11-20 2004-03-30 Monsanto Technology, Llc Broad-spectrum δ-endotoxins
US6017534A (en) 1996-11-20 2000-01-25 Ecogen, Inc. Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity
US5942664A (en) * 1996-11-27 1999-08-24 Ecogen, Inc. Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants
US6121436A (en) * 1996-12-13 2000-09-19 Monsanto Company Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi
EP1555319A3 (en) * 1997-10-20 2006-03-15 GTC Biotherapeutics, Inc. Modified nucleic acid sequences and method to increasing mRNA levels and protein expression in cell systems
US6218188B1 (en) 1997-11-12 2001-04-17 Mycogen Corporation Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins
AU774176B2 (en) * 1997-11-12 2004-06-17 Mycogen Corporation Plant-optimised genes encoding pesticidal toxins
US6121521A (en) * 1998-04-01 2000-09-19 Novartis Ag Chimeric insecticidal protein and DNA coding therefor
EP1099760A1 (en) * 1999-11-09 2001-05-16 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro) Bacillus thuringiensis Cry1Ia-Cry1Ba hybrid toxins
ES2243543T3 (es) * 2000-08-25 2005-12-01 Syngenta Participations Ag Hibridos de proteinas cristalinas de bacillus thurigiensis.
CA2446215A1 (en) * 2001-05-04 2002-11-14 North Carolina State University Polymer conjugates of insecticidal peptides or nucleic acids and methods of use thereof
US20030108585A1 (en) * 2001-05-04 2003-06-12 Roe R. Michael Polymer conjugates of insecticidal peptides or nucleic acids or insecticides and methods of use thereof
US20060009409A1 (en) 2002-02-01 2006-01-12 Woolf Tod M Double-stranded oligonucleotides
WO2003064621A2 (en) * 2002-02-01 2003-08-07 Ambion, Inc. HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES
ATE508188T1 (de) * 2002-02-01 2011-05-15 Life Technologies Corp Oligonukleotid-zusammensetzungen mit verbesserter wirksamkeit
US7557186B2 (en) * 2002-03-27 2009-07-07 Council Of Scientific & Industrial Research Chimeric CrylE δ endotoxin and methods of controlling insects
US7053266B2 (en) * 2002-03-27 2006-05-30 Council Of Scientfic And Industrial Research Chimeric cry1E δendotoxin and methods of controlling insects
US20040029275A1 (en) * 2002-08-10 2004-02-12 David Brown Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs
US7393922B2 (en) * 2003-08-29 2008-07-01 The Ohio State University Research Foundation Insecticidal Cry4Ba proteins with enhanced toxicity
CA2771677A1 (en) 2005-08-31 2007-03-08 Monsanto Technology Llc Nucleotide sequences encoding insecticidal proteins
CN100510081C (zh) 2005-10-17 2009-07-08 华中农业大学 苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry7Bal
AU2007228981B2 (en) * 2006-03-21 2012-10-04 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Novel genes encoding insecticidal proteins
EP2021476B1 (en) 2006-05-26 2014-07-09 Monsanto Technology, LLC Corn plant and seed corresponding to transgenic event mon89034 and methods for detection and use thereof
US9522937B2 (en) 2007-03-28 2016-12-20 Syngenta Participations Ag Insecticidal proteins
BRPI0809352B1 (pt) * 2007-03-28 2017-03-28 Syngenta Participations Ag proteína inseticida híbrida projetada, molécula de ácido nucleico codificadora da dita proteína,cassete de expressão, vetor recombinante, célula hospedeira transgênica, composição inseticida, métodos de produção da dita proteína e de uma planta transgênica resistente a insetos e método de controle de insetos".
WO2008145406A1 (en) * 2007-06-01 2008-12-04 Bayer Bioscience N.V. Novel genes encoding insecticidal proteins
MX348698B (es) 2008-12-16 2017-06-26 Syngenta Participations Ag Evento 5307 del maiz.
AU2010221135A1 (en) 2009-03-05 2011-09-29 Metabolix, Inc. Propagation of transgenic plants
DK2419441T3 (en) 2009-04-17 2015-04-27 Dow Agrosciences Llc Insecticidal dig-3-cry toxins
BR112012009381A2 (pt) 2009-10-02 2017-03-01 Syngenta Participations Ag "proteínas inseticidas"
KR20120115316A (ko) * 2009-12-16 2012-10-17 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 밤나방 및 유럽 옥수수 천공충을 방제하기 위한 살곤충성 단백질 조합, 및 곤충 내성 관리 방법
JP5969921B2 (ja) * 2009-12-16 2016-08-17 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー 抵抗性昆虫の対応のためのＣｒｙ１Ｂｅと組み合わせたＣｒｙ１Ｄａの使用
AR079500A1 (es) * 2009-12-16 2012-02-01 Dow Agrosciences Llc Uso combinado de proteinas cry1ca y cry1fa para el manejo de la resistencia de insectos
WO2011084622A1 (en) * 2009-12-16 2011-07-14 Dow Agrosciences Llc Combined use of cry1ca and cry1ab proteins for insect resistance management
JP5907892B2 (ja) * 2009-12-16 2016-04-26 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー 抵抗性昆虫の対応のためのＣｒｙ１Ｂｅと組み合わせたＣｒｙ１Ａｂの使用
US20120317682A1 (en) * 2009-12-16 2012-12-13 Dow Agrosciences Llc Combined use of vip3ab and cry1fa for management of resistant insects
AR079505A1 (es) * 2009-12-16 2012-02-01 Dow Agrosciences Llc Uso de cry1da en combinacion con cry1ca para el manejo de insectos resistentes
NZ601096A (en) * 2009-12-16 2014-10-31 Dow Agrosciences Llc Combined use of cry1da and cry1fa proteins for insect resistance management
CA2782554A1 (en) 2009-12-16 2011-07-14 Dow Agrosciences Llc Modified cry1ca insecticidal cry proteins
CA3049609C (en) * 2010-02-18 2024-02-13 Athenix Corp. Axmi221z, axmi222z, axmi223z, axmi224z, and axmi225z delta-endotoxin genes and methods for their use
US8735560B1 (en) * 2010-03-02 2014-05-27 Monsanto Technology Llc Multiple domain lepidopteran active toxin proteins
WO2011133892A1 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 Dow Agrosciences Llc Combinations including cry34ab/35ab and cry3ba proteins to prevent development of resistance in corn rootworms (diabrotica spp.)
US9234208B1 (en) 2010-05-10 2016-01-12 Dow Agrosciences Llc DIG-13 insecticidal cry toxins
UA111592C2 (uk) * 2010-07-07 2016-05-25 Сінгента Партісіпейшнс Аг Спосіб контролю над твердокрилими комахами-шкідниками
WO2012083219A1 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Dow Agrosciences Llc Combined use of vip3ab and cry1ab for management of resistance insects
WO2012131619A1 (en) * 2011-03-30 2012-10-04 Metahelix Life Sciences Limited A nucleotide sequence, expression cassette, transgenic events, cells and methods thereof
US10119149B2 (en) 2011-08-05 2018-11-06 Dow Agrosciences Llc Use of DIG3 insecticidal crystal protein in combination with cry1Ab for management of resistance in european cornborer
MX2014001456A (es) * 2011-08-05 2014-02-27 Dow Agrosciences Llc Uso de proteina cristalina insecticida dig3 en combinacion con cry1ab.
CN103923204B (zh) * 2014-04-04 2016-06-08 湖北省生物农药工程研究中心 杀南方根结线虫的苏云金芽胞杆菌的活性物质及其应用
SG10201913870RA (en) 2014-10-16 2020-03-30 Monsanto Technology Llc Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests
US10487123B2 (en) 2014-10-16 2019-11-26 Monsanto Technology Llc Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests
TW201615095A (zh) 2014-10-31 2016-05-01 陶氏農業科學公司 Ｄｉｇ－３０３殺蟲ｃｒｙ毒素
CN114213510A (zh) 2014-12-30 2022-03-22 美国陶氏益农公司 可用于控制昆虫害虫的修饰的Cry1Ca毒素
CN109952024B (zh) * 2016-10-10 2023-11-03 孟山都技术公司 新型昆虫抑制蛋白
US11692013B2 (en) 2016-10-19 2023-07-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Broad spectrum insecticidal polypeptide against lepidopteran pests and methods of use thereof
CA3037371A1 (en) * 2016-10-19 2018-04-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Broad spectrum insecticidal polypeptide against lepidopteran pests and methods of use thereof
CN111465406A (zh) 2017-12-15 2020-07-28 先正达参股股份有限公司 用于检测靶蛋白的非抗体配体

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1341092C (en) 1985-12-12 2000-09-05 David L. Edwards Process for altering the host range of bacillus thuringiensis toxins, and novel toxins produced thereby
IT1231157B (it) * 1989-07-20 1991-11-19 Crc Ricerca Chim Nuovi geni ibridi funzionali di bacillus thuringiensis ottenuti mediante ricombinazione in vivo.
HU220773B1 (hu) * 1990-01-22 2002-05-28 Dekalb Genetics Corporation Eljárás termő transzgenikus kukoricanövények előállítására
GB9318207D0 (en) 1993-09-02 1993-10-20 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
US5593881A (en) * 1994-05-06 1997-01-14 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis delta-endotoxin
US5527883A (en) 1994-05-06 1996-06-18 Mycogen Corporation Delta-endotoxin expression in pseudomonas fluorescens
US5508264A (en) 1994-12-06 1996-04-16 Mycogen Corporation Pesticidal compositions

Also Published As

Publication number Publication date
IL110829A0 (en) 1994-11-11
PL313317A1 (en) 1996-06-24
DE69434758T2 (de) 2006-11-09
RU2210593C2 (ru) 2003-08-20
DE69434758D1 (de) 2006-07-20
UA57698C2 (uk) 2003-07-15
ZA946770B (en) 1996-03-04
BR9407377A (pt) 1996-07-16
CA2168011C (en) 2007-11-06
CA2168011A1 (en) 1995-03-09
EP0719335A1 (en) 1996-07-03
EP0719335B1 (en) 2006-06-07
TW430669B (en) 2001-04-21
KR100360918B1 (ko) 2005-01-15
ES2262136T3 (es) 2006-11-16
GB9318207D0 (en) 1993-10-20
WO1995006730A1 (en) 1995-03-09
AU691522B2 (en) 1998-05-21
US6204246B1 (en) 2001-03-20
ATE329033T1 (de) 2006-06-15
IL110829A (en) 2006-08-20
JPH09502343A (ja) 1997-03-11
US5736131A (en) 1998-04-07
AU7693294A (en) 1995-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL181408B1 (pl) Fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis i rekombinant DNA kodujacy fragment hybrydowej toksyny Bacillus thuringiensis PL PL PL PL PL PL PL PL PL
US5932209A (en) Bacillus thuringiensis δ-endotoxin
EP0758385B1 (en) Chimeric delta-endotoxin expression in pseudomonas fluorescens
US8796026B2 (en) Insecticidal proteins secreted from Bacillus thuringiensis and uses therefor
US5338544A (en) CryIIB protein, insecticidal compositions and methods of use thereof
CA1341388C (en) Hybrid pesticidal toxins
EP0871736B1 (en) PESTICIDAL COMPOSITION COMPRISING CryIF CHIMERIC AND CryIA(c) CHIMERIC BACILLUS THURINGIENSIS DELTA-ENDOTOXIN
WO1999024581A2 (en) Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins
CA2117270A1 (en) Use of bacillus thuringiensis isolates for controlling pests in the family aphididae
US6780408B1 (en) Genes encoding hybrid bacillus thuringiensis toxins
AU686213B2 (en) Materials and methods for the control of calliphoridae pests
US5731194A (en) Insecticide protein and gene
US6051556A (en) Hybrid pesticidal toxins
JPH08510637A (ja) バチルス・チュリンゲンシスの新菌株及びその殺虫性タンパク質
Je et al. Expression of a Recombinant Bacillus thuringiensis $\delta $-Endotoxin Fused with Enhanced Green Fluorescent Protein in Escherichia coli

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20060901