UA57698C2 - Фрагмент інсектицидного гібридного токсину bacillus thuringiensis (варіанти), рекомбінантна днк (варіанти), мікроорганізм, рослинна клітина - Google Patents
Фрагмент інсектицидного гібридного токсину bacillus thuringiensis (варіанти), рекомбінантна днк (варіанти), мікроорганізм, рослинна клітина Download PDFInfo
- Publication number
- UA57698C2 UA57698C2 UA96010346A UA96010346A UA57698C2 UA 57698 C2 UA57698 C2 UA 57698C2 UA 96010346 A UA96010346 A UA 96010346A UA 96010346 A UA96010346 A UA 96010346A UA 57698 C2 UA57698 C2 UA 57698C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- biu
- avr
- uai
- avp
- tut
- Prior art date
Links
- 239000003053 toxin Substances 0.000 title claims abstract description 71
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 title claims abstract description 69
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 title claims description 17
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 3
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 title 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 title 1
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 20
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 15
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 15
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 9
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 2
- 229940125377 Selective β-Amyloid-Lowering Agent Drugs 0.000 claims 5
- 235000008001 rakum palm Nutrition 0.000 claims 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- RYXHOMYVWAEKHL-UHFFFAOYSA-N astatine atom Chemical compound [At] RYXHOMYVWAEKHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 claims 2
- YDHOAQXHVQTASS-UHFFFAOYSA-N 3-amino-n-hydroxypropanamide Chemical compound NCCC(=O)NO YDHOAQXHVQTASS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101150018711 AASS gene Proteins 0.000 claims 1
- 241001103870 Adia Species 0.000 claims 1
- 241001310771 Astata Species 0.000 claims 1
- 101100492787 Caenorhabditis elegans mai-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101000711796 Homo sapiens Sclerostin Proteins 0.000 claims 1
- 101150063042 NR0B1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100026747 Osteomodulin Human genes 0.000 claims 1
- 101710114565 Osteomodulin Proteins 0.000 claims 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims 1
- 101150098533 SOST gene Proteins 0.000 claims 1
- 241001549442 Salassa Species 0.000 claims 1
- 240000005499 Sasa Species 0.000 claims 1
- 102100034201 Sclerostin Human genes 0.000 claims 1
- 108010016828 adenylyl sulfate-ammonia adenylyltransferase Proteins 0.000 claims 1
- JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N bbip Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)C=2C=CC(=CC=2)C(=O)C=2C=CC=CC=2)CCC1 JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N 0.000 claims 1
- JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N mmai Chemical compound C1=C(C)C(OC)=CC2=C1CC(N)C2 JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 150
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 120
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 3
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 abstract 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 115
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 54
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 31
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 18
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 18
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 13
- 101710151559 Crystal protein Proteins 0.000 description 12
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 8
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 7
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 2
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 101150090724 3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 101100258093 Drosophila melanogaster stum gene Proteins 0.000 description 1
- 241000462967 Ekhidna Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100025297 Mannose-P-dolichol utilization defect 1 protein Human genes 0.000 description 1
- 101710089919 Mannose-P-dolichol utilization defect 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101100258095 Mus musculus Stum gene Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 102100034574 P protein Human genes 0.000 description 1
- 101710181008 P protein Proteins 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101150005009 STUA gene Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000348346 Suta Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001679 anti-nematodal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 108091006004 biotinylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 101150028208 hesA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Описано фрагмент гібридного інсектицидного токсину Bacillus thuringiensis, який включає З-термінальний домен III першого Cry білка або частину цього домена, або білок, істотно схожий на цей домен, за умови, що N-термінальна область цього фрагмента є N-термінальною областю другого Cry – білка або частини цієї області, або білком, істотно схожим на цю область.
Description
Опис винаходу
Изобретение относится к фрагментам гибридного токсина и содержащим зти фрагменть! токсинам, 2 полученньїм из инсектицидньїх кристаллических белков Васіїив5 (пигіпдіепвів.
Васійив (Пигіпдіепзізв(далее В.) способна продуцировать белки, накапливаемье внутри клеток в виде кристаллов. Зти кристаллические белки токсичньї для личинок многих насекомьїх. Кристаллические белки подразделяют на различнье классьі на основе гомологических рядов и типов токсичности. Наийболее изучен
СтгуІ-класс белков, которьій представлен протоксинами с молекулярной массой 140кДа и зффективен против лепидоптер.
В некоторой степени принцип действия кристаллических белков обьясним. После перорального приема кристалль! растворяются в щелочной среде средней кишки личинки. Раствореннье белки затем под действием пищеварительной протеиназь! превращаются в устойчивьй к протеиназе токсичньій фрагмент с молекулярной массой приблизительно б5кДа, которьій связьшвается с рецепторами зпителиальньїх клеток в средней кишке 719 насекомого и проникает сквозь мембрань клеток. Зто приводит к разрьву клеток и гибели личинки.
Спектр действия конкретного кристаллического белка во многом зависит от наличия рецепторов на зпителиальньїх клетках пищеварительного тракта пораженньїх насекомьх. Указанньй спектр совместно обусловлен растворимостью кристаллического белка и его протеолитической активацией іп мімо.
Важность связьшвания кристаллического белка с пищеварительньми зпителиальньми рецепторами дополнительно подтверждаєтся тем, что у насекомьх, характеризуемьх устойчивостью Кк одному из кристаллических белков, связи кристаллических белков с зпителиальньми клетками средней кишки существенно ослаблень.
Считается, что токсичнье фрагменть! кристаллических белков состоят из трех определенньїх структурньйх доменов. Домен І, с крайний М-терминальньй, состоит из 7 о-спиралей. Домен ІІ содержит З р-складки, а домен І (крайний (9
С-терминальньй) складчато сложен (свернут) в Д-слоистую структуру. При положении на СгуІ-последовательности домен занимает положения аминокислотньїх остатков с 28 по 260, домен ІЇ приблизительно с 260 по 460 и домен ЇЇ приблизительно с 460 по 600. со
Предлагаемое изобретение относится, в частности, но не исключительно, к гибридньм кристаллическим Ге) белкам, включая СтуїЇС и СтуїЕ или СтуїА. Последовательность (далее зтот термин обозначаєтся ЗЕО с соответствующими латинскими индексами) нуклеотидов СгуІС-гена В.і8цирер. епіотосідиз 60.5 приведень! в ї-о
ЗЕО ІО. Мо 1, а соответствующая последовательность аминокислот белка, кодированная указанной - последовательностью нуклеотидов, приведена в ЗЕО ІЮ. Мо 2. Последовательность нуклеотидов СтуІЕ-гена В. ї. зирер. Кепуае 4ГІ приведена в ЗЕО ІЮО Мо 3, а соответствующая последовательность аминокислот белка, ю кодированная указанной последовательностью нуклеотидов, приведена в ЗЕО ІЮ. Мо 4. Зти белки токсичнь! для лепидоптер, но внутри зтого вида насекомьх каждьй белок специфически активен. В частности, Стус зффективен против 5.ехідца и М.Бгазвісае. « дю Согласно изобретению предложен фрагмент гибридного токсина В.., содержащий на его С-конце домен ЇЇ з первого Сту-белка, или часть зтого домена, или белок, существенно сходньй с зтим доменом, при условиийи, что с М-терминальная область фрагмента представлена М-терминальной областью второго Сту-белка, или частью :з» области, или белком, существенно сходньім с зтой областью. Предпочтительньій фрагмент - зто фрагмент, которьій не связьшается с местом связьшвания СтуЇС во внутренностях насекомого, когда зтот фрагмент содержит на его С-конце домен ІІЇ белка Стус, или часть зтого домена, или белок, существенно сходньй с зтим сл 15 доменом; или фрагмент, которьій не связьівается с местом связьмшвания белка СтгуіА, когда зтот фрагмент содержит на своем С-конце домен ІЇЇ белка СгуІА, или часть домена, или белок, существенно сходньй с зтим -| доменом. б» Термин "существенно сходньй" относится к чистьім белкам, имеющим аминокислотную последовательность по меньшей мере на 75956 сходную с последовательностью белков согласно изобретению. Предпочтительна (се) 50 степень сходства не менее на 8595, более предпочтительна - не менее 9095 и еще более предпочтительна - не со менее 9596.
В контексте предлагаемого изобретения две аминокислотнье последовательности, которье по меньшей мере на 7595, 8595, 9095 и 95906 сходньі одна с другой, имеют по меньшей мере 7595, 8595, 9095 и 9590 идентичньїх, или рационально замененньїх аминокислотньїх остатков в тех же положениях при их оптгимальном введений в цепь с образованием до б брешей при условийи, что образующиеся бреши в общем не затрагивают
ГФ) более 15 остатков аминокислот. Рациональную замену аминокислот в соответствии с целью изобретения можно 7 произвести в следующих группах (І) серии и треонин (ІЇ) г'лутаминовая кислота и аспарагиновая кислота 60 (І) аргинин и лизин (ІМ) аспарагин и глутамин (М) изолейцин, лейцин, валин и метионин (МІ) фенилаланин, тирозин и триптофан (МІ) аланин и глицин бо при условийи, что в 5ЕО ІЮ Мо 6 рационально заменень в положений 620 Зег и Туг, а Аа и Си - в положений
618; и что в 5ЕО ІЮ Мо 8 Зег и Туг рационально замещень в положений 627, а Аа и Си -в положений 625.
Термин "часть" белка обозначает пептид, образованньйй указанньім белком и непрерьівньій не менее, чем в 8095 своей последовательности.
Термин "место связьівания" обозначает участок молекуль!, с которьім токсин образует обратимую связь при
Ка между ними порядка по меньшей мере 10 дм моль «1.
Фрагмент токсина может содержать на своем М-конце М-терминальную область любьїх инсектицидньх белков В.і., известньїх как "Сгу" или "Су, среди которьїх: СгуіА(а), СтуіА(Б), СтуіА(с), Сту!В, Сту!С, Стую,
Стує, Суб, Стуїб, СтгуіНн, СтуПА, СтгуПВ, СтгупС, СтуША, СтуВ, СтгуПВ(Б), СтуМА, СтумВ, Сгумс, 7/0 ЄтУМО, СУТА, Стух(ПС), Стух2(ПО), Стгухз, Стум и Стуха; или часть зтой области, или белок, существенно сходньйй с зтой областью. Он также может содержать на своем С-конце домен ПІІ белка СтуЇС или часть домена, или белок, существенно сходньй с зтим доменом.
Таким образом фрагмент может включать домен ІІ белка СтуІЕ, СтуІВ, СтуіЮ или СтуЇА, или часть домена, или белок, существенно сходньій с зтим доменом, и домен ІІ белка Сту1С или часть зтого домена І, или белок, 7/5 бущественно сходньій с доменом І. В частности предпочтительно, чтобьї фрагмент содержал домень | и ЇЇ белков СтуУІЕ, СтуІВ, СтуіЮ или СтуїА, или их часть, или белок, существенно сходньй с зтими доменами, и домен
П белка СтуІС или его часть, или белок, существенно сходньй с доменом ІІ.
Найболее предпочтительно, чтобь! токсичньЬІй фрагмент имел на своем С-конце область, содержащую последовательность аминокислотного от 454 до до 602 белка СтуЇС, или последовательность, существенно- 2о бходную с указанной последовательностью. Фрагмент может иметь на своем С-конце область, содержащую последовательность аминокислот от 478 до 602 белка СгуІС, или последовательность, существенно сходную с указанной последовательностью, при условии, что непосредственное обьединение последовательности, включающей аминокислоть! от 478 до 602 белка СтуІС, с С-концом домена ІЇ белков СтуА, Сту!В, Стус, Сту!Ю,
СтуїЕ, даст продукт слияния, отвечающий условиям получения инсектицидного компонента фрагмента. с
Специалисту понятно, что может возникнуть необходимость добавить пептидную область к С-концу домена І, которая отдаляет С-терминальную область белка СтуІС, позволяя ей сформироваться таким образом, чтобь о проявилась инсектицидная активность.
Особенно предпочтительно, чтобьї токсичньій фрагмент согласно изобретению содержал:
І) последовательность аминокислот приблизительно от 1 до примерно 620 в ЗЕО ІЮО Мо 6, или со зр последовательность аминокислот приблизительно от 1 до приблизительно 620 в ЗЕО ІЮО Мо б, в которьх произведена по меньшей мере одна из следующих замен: ме)
Не в положений 609 замещен І! еи; Ге
Аа в положенийи 618 замещен іс;
Зег в положений 620 замещен Туг, или ї-
І) последовательность аминокислот от приблизительно 1 до примерно 627 в ЗЕО ІЮО Мо 8, или ю последовательность аминокислот от приблизительно 1 до приблизительно 627 в 5ЕО ІЮО Мо 8, в которьх произведена по меньшей мере одна из следующих замен:
Не в положений 616 замещен І! еи;
Аа в положений 625 замещен іс; «
Зег в положений 627 замещен Туг. з с Какими бьї ни бьіли допустимье заменьі аминокислот, один или более из следующих остатков (имеющих отношение к указанной последовательности в связи с последовательностью белка СтгуІС) не подлежат ;» изменению: Рпе(501); МаІ(478); Тгр(479) и Тиг(486).
Изобретение таюке относится к гибридному токсину, содержащему указанньй фрагмент или токсин по меньшей мере на 8595 сходньій с таким гибридньм токсином, которьій имеет существенно близкую с инсектицидную активность или может связьввать рецепторь.
Кроме того, изобретение относится к чистьм белкам, которье по меньшей мере на 9095 идентичнь - фрагментам токсина или гибридньїм токсинам согласно изобретению. б Изобретение относится и к рекомбинантной ДНК, содержащей последовательность, кодирующую белок, имеющий последовательность аминокислот раскрьїтьїх вьіше токсинов или их фрагментов. Изобретение также се) относится к рекомбинантной ДНК, содержащей последовательность от нуклеотида 1 до нуклеотида 1860, в ЗЕО с ІЮО Мо.5 или к ДНК, сходной с ней, кодирующей существенно сходньій белок, или к рекомбинантной ДНК, содержащей последовательность от нуклеотида 1 до нуклеотида 1881 в ЗЕО ІЮ Мо. 7, или к ДНК, сходной с ней, кодирующей существенно сходньй белок.
Термин "сходная ДНК" обозначает контрольую последовательность, которая способна образовьівать гибрид с рекомбинантной последовательностью согласно изобретению. Когда контрольная и предложенная
Ф) последовательности имеют форму двойньх нитей, нуклейновая кислота, образующая контрольную ка последовательность, имеет ТМ в пределах 207"С ТМ предложенной последовательности. В том случає, когда контрольную и предложенную последовательности смешивают и одновременно денатурируют, значения ТМ бо Зтих последовательностей находятся предпочтительно в пределах 10"С одна по отношению к другой. Более предпочтительно гибридизацию проводят в жестких условиях, причем предпочтительно фиксируют контрольную или предлагаемую ДНК. Таким образом денатурированную либо контрольную, либо предлагаемую последовательности предпочтительно связьшвают с основой первьіми и гибридизацию проводят в течение определенного периода времени при температуре 50 - 70"С в буферном солевом растворе с двойной 65 концентрацией цитрата, содержащем 0,195 додецилсульфата натрия, после чего основу промьівают при той же температуре, но в буферном растворе с пониженной концентрацией цитрата, в зависимости от необходимой жесткости условий и, следовательно степени сходства последовательностей, обьічно вьібирают буфернье растворьії, содержащие 0,196 додецилсульфата натрия, с одинарной концентрацией цитрата, разбавленнье вдвое и в десять раз. К последовательностям, имеющим наийвьісшую степень сходства, относятся такие, на Пибридизацию которьїх менее всего влияет промьвка в буферньх растворах пониженной концентрации.
Найиболее предпочтительно, чтобь! контрольная и предлагаемая последовательности бьіли сходньї настолько, что промьівка или.инкубация в десятикратно разбавленном буферном растворе цитрата натрия, содержащем 0,195 додецилсульфата натрия, не может существенно повлиять на их гибридизацию.
Рекомбинантная ДНК может также кодировать белок, обладающий гербицидной устойчивостью, 7/0 Сстимулирующий рост растений, обладающий фунгицидньми, бактерицидньми, антивирусньми и/или антинематодньми свойствами. В случає, когда ДНК требуется ввести в гетерологичньй организм, ее модифицируют, чтобь исключить известнье основнье злементьі нестабильности мРНК (например,
АТ-насьіщеннье области), и сигнальї полиаденилирования и/или кодоньі, предпочтительнье для организма, которому зта рекомбинантная ДНК предназначена, используют так, что зкспрессией такой модифицированной 7/5 ДНК в указанном организме синтезируется белок, по существу сходньй с белком, синтезируемьм при зкспрессий немодифицированной рекомбинантной ДНК в организме, содержащем зндогеннье компоненть белка гибридного токсина или фрагментов токсина.
Кроме того, изобретение относится Кк последовательности ДНК, комплементарной такой последовательности, которая гибридизирована в жестких условиях с рекомбинантной ДНК согласно 2о Мзобретению.
Изобретение также касается: вектора, содержащего такую рекомбинантную (или комплементарную ей) последовательность ДНК; растения или микроорганизма, которне включают и в которьїх возможна зкспрессия
ДНК; растений, трансформированньїх с помощью такой ДНК; потомства таких растений, которое содержит ДНК, устойчиво внедренную и способную нести наследственнье признаки по Менделю, и/или семян таких растений и с об такого потомства.
Кроме того, изобретение относится к белку, полученному зкспрессией указанной ДНК, и инсектицидному і) белку, полученному зкспрессией рекомбинантной ДНК в растениях, трансформированньх зтим белком.
Кроме того, изобретение относится к инсектицидной композиции, содержащей один или более токсичньх фрагментов или содержащих их токсинов согласно изобретению; к способу борьбь! с насекомьми, которьй о зо Ззаключается в обработке их такими фрагментами или токсинами, или композициями, и способу зкстракции инсектицидньїх белков из содержащего их органического материала, заключающемуся в том, что зтот материал б» вьмачивают и зкстрагируют растворителем. «о
Далее изобретение будет описано на примере получения фрагментов гибридньїх токсинов В. ї. согласно изобретению со ссьілками на соответствующие чертежи и перечень последовательностей. -
На фигуре 1 показана схема образования генов гибридного кристаллического белка через рекомбинацию іп цу мімо. Образованьі! спаренньіе плазмидьі (РВО56О и рВО 650), несущие два укороченньїх гена кристаллического белка, имеющих ориентацию с прямьім поворотом. 5-ген (контурньій прямоугольник), не имеет области, кодирующей протоксин (сплошной прямоугольник), а у 3-гена (заштрихованньій прямоугольник) часть области, кодирующей домен І, удалена. Рекомбинация іп мімо между гомологичньіми областями (домень! ЇЇ и ІІ) имеет «
Место в гесА Ж штамм /М101. Отбор на основе перекомбинантов гидролитическим расщеплением с помощью пт») с МОЇ и ВатнНі с последующей трансформацией дает ряд плазмид, кодирующих гибриднье кристаллические белки. ;» На фигуре 2 показано расположение остатков аминокислот в положениях от 420 до 630 белков СтуІЕ и Стус.
Граница между доменами ЇЇ и ІІЇ обозначена. Показань! только те аминокислотньсе остатки белков СтуІС, которье
Оотличаются от белка СтуІЕ, одинаковье остатки обозначеньі пунктиром. Положения кроссовера (527, НІ13, Н7, с На, НІ17 и Н21) в фрагментах гибридного токсина белков СтуІЕ-СтуЇС согласно изобретению также показань.
На фигуре З показано расположение остатков аминокислот в положениях от 420 до 630 белков СтіуІЕ и Стус.
Ш- Граница между доменами ЇЇ и ІІЇ обозначена. Показань! только те аминокислотньсе остатки белков СтуІС, которье
Ге» отличаются от белка СІуІЕ, одинаковье остатки обозначеньі пунктиром. Положения кроссовера (Е59, Е71, Е2б и
ЕТ) в фрагментах гибридного токсина белков СтуІЕ-СтуЇС согласно изобретению также показань. і, На фигуре 4 показань результатьь некоторьїх гетерологичньїх конкурентньїх зкспериментов. с Биотинилированньй белок Стус (табло А) и кроссовер 027 (табло В) инкубируют с пузьірьками 5. ехідаа ВВММ в отсутствий (цепочка а) или в присутствий избьтка немеченного белка, как показано на табло. После инкубации пузьірьки промьвают, загружают в полиакриламидньюи гель с додецилсульфатом натрия и блотируют на в нИТроцеллюлознье мембраньі. Биотинилированнье кристаллические белки, повторно отделеннье пузьірьками, визуализируют коньюгатом стрептавидин-пероксидаза. На фиг.4 они помечень! стрелкой.
Ф) На фигуре 5 показана карта плазмидьі реВ456, которая кодирует фрагмент гибридного токсина 527 и ка используется для трансформации кристаллического токсина, за исключением признаков наследственности
В.51. во ЗЕО ІЮ Мо. 1 показьівает последовательность нуклеотидов СтуІС-гена из В.і.8ирегр. епіотосідиз 60.5.
ЗЕО ІЮ Мо. 2 показьівает последовательность аминокислот белка, кодированного СтуС-геном, имеющимся в
ЗЕО ІО Мо.1.
ЗЕО ІЮ Мо. З показьівает последовательность нуклеотидов СтуІС-гена из В.і.зирегр. Кепуаеє АРІ.
ЗЕО ІЮ Мо. 4 показьівает последовательность аминокислот белка, кодированного СгуІС-геном, показанньм в 65 ЗЕО ПО Мо.3.
ЗЕО ІЮО Мо. 5 показьівает последовательность нуклеотидов, кодирующую предпочтительньй фрагмент гибридного токсина СтуІЕ/СтуІС В. согласно изобретению.
ЗЕО ІЮО Мо. 6 показьівает последовательность аминокислот белка, кодированного последовательностью нуклеотидов, показанной в ЗЕО ІЮ Мо.5.
ЗЕО ІО Мо. 7 показьшвает последовательность нуклеотидов фрагмента гибридного токсина СтуіА/СтуЇС согласно изобретению.
ЗЕО ІЮО Мо. 8 показьівает последовательность аминокислот белка, кодированного последовательностью нуклеотидов согласно ЗЕО ІЮ Мо.7.
Получение плазмид, кодирующих фрагменть! гибридного токсина 70 При получений плазмид, несущих СтуЇС или СтуІЕ геньї, используют ЕзспПегіспіа соїї ХІ І-голубой (Зігаїадепе
Іпс.) в качестве хозяина, исключая тот случай, когда штамм /М101 используют как гесАжфон. Вектор для зкспрессии кристаллических белков в Е.соїї получают из рКК233-2 (Рпаптасіа /КВ Віоїесппоіоду). Размер рккК233-2 уменьшают, удаляя ЕсоКІ-Рмуці! фрагмент, несущий ген, кодирующий устойчивость к тетрациклину.
Впоследствий 6 рр линкер Хпо! встраивают в сайт Ніпаїї, получая РВОІО. Плазмиду ВКи образуют, встраивая /5 линкер ВДІЇ в сайт бай в Віпезсгірі ЗК (Зігаїадепе Іпс.). Полилинкер плаз-мидьі ВК на участке от Ва! до
Хпо! встрайвают в сайт МсоІ-ХпоЇ в рВО10. Полученньй зкспрессирующий вектор рВО11 содержит ярко вніраженньй ігс промотор, место связьівания на Іас7 рибосоме и инициирующий АТО кодон. Инициирующий кодон частично перекрьівается сайтом Мсо! и за ним следует полилинкер, что облегчает включение вставок в вектор. Транскрипция заканчивается гпВ терминалом транскрипции.
Геньі сгуЇїС и сгуїЕ клонируют соответственно из В. ї. вибвр. епіотосідиз 60.5 и Кепуа 4Е1, как ранее описано (Нопее еї аї., 1990 (Аррі.Епмігоп.Місгоріої. 56, рр 823-825); Мівзег еї аїЇ.,, 1990 (7. ВасіегіоЇ. 172, рр 6783-6788)). Для клонирования мутагенезом іп міго бьіл создан сайт Мсо!ї, частично перекрьвающийся с инициирующим кодоном гена сгуІС. Сайт Ва біл создан непосредственно за терминирующим кодоном белка сту!С сайт-специфическим мутагенезом, в результате чего била получена последовательность АТААСАТСТОТТ сч (терминирующий кодон подчеркнут). Фрагмент Мсо1-ВаїІІ, содержащий сгуЇС кодирующую область, встраивают в вектор рВОЇЇ, получая плазмиду рРВОІЗО, дающую возможность зкспрессии белка СгуЇС. Плазмида рВО155 і) является производной от РВО150, в которой последовательность 3' полилинкеров гена сгуС удалена.
Фрагмент Ога| плазмидь! рРЕМ14 (Міззег еї аіІ., 1990), содержащий полньій ген сгуїЕ, клонируется в сайте
ЕсокМ плазмидьй ЗК, в результате чего получается плазмида рЕМ15. Впоследствии сайт Мсо! вводят со зо сайтспецифическим мутагенезом в инициирующий кодон зтого гена, и сгу ІЕ переносят как фрагмент Мсо1І-ХпоЇ! в вектор рВОЇІ, получая плазмиду РВО160, дающую возможность зкспрессии белка СтуЕ. Ме
Полученьї плазмидьі, несущие только области, кодирующие токсичньій фрагмент сгу! генов. Линкерь! ВОЇЇ! Ге встроень в сайть! Хтіії, представленнье в Бр положений 1835 гена сіуІС, и в сайт НдіА! в положений 1839 гена сту ІЕ. Впоследствии, фрагменть! МесоІ-ВаіІ, содержащие области, кодирующие токсичнье фрагменть! генов ї- сус (1835 рр) и сгуїє (1839 рр), встрайивают в вектор рВОїЇ, получая соответственно плазмидь! рВОїІБІ и ю рВО161, как описано ниже.
Пару плазмид, используемьїх для получения гибридньїх генов сгуЇС-сгуІЕ, кодируют следующим образом.
Линкерьі Ватні. лигируют в плазмиде рВО160, гидролизованной с помощью Нраї. Зту ДНК инкубируют с Ватні. и Хпої, а укороченньй ген сіуїЕ, начинающийся от Бр 704, встраивают в плазмиду рВОІ5І, получая плазмиду « 0 РВОББбО. Чтобьї сконструировать пару плазмид для получения гибридов сгу ІЕ-сгуЇїС, плазмиду рВО155 з с гидролизуют с помощью МвеіЇ и ХпоЇ. Фрагмент, несущий укороченньій ген сгуїС, начинающийся от Бр 266, встраийивают в плазмиду рВоОЇїбї, гидролизованную рзій/Хної, получая плазмиду рРВО650. Присутствие уникальньх ;» мест рестрикции на Мої и Ватні между укороченньми генами сгу! в паре плазмид рВО5бО и рВвОб650 обусловлено последовательностями полилинкеров .
Манипулирование ДНК и конструирование гибридного токсина с Все приемь! манипулирования рекомбинантной ДНК проводили в соответствии с ЗатбгоокК еї а1.1989 (в "МоїІесшаг Сіопіпу, А Іарогагу Мапиаі!: Сой Зргіпд Нагроиг Ргевзв, СоЇй Зргіпд Нагроцг), причем
Ш- последовательность ДНК расшифровьшвали дидезок-ситрифосфатньм методом с о флуоресцентньм б окрашиванием дидезокси-нуклеотидов, используя анализатор последовательности нуклеоти-дов Арріїєй Віозувіетз З7ОА. і, Вьіявленная степень подобия сгу! генов позволяет проводить внутримолекулярную рекомбинацию іп мімо. В с результате получают пару плазмид, каждая из которьїх несет два укороченньїх гена кристаллических белков, перекрьівающиеся только в доменах ІІ и І. Таким образом, рекомбинация происходит только в областях, кодирующих домень ІЇ и І. Рамочнье рекомбинации, которье можно отбирать, используя рестриктазь! для ов Гпидролиза, производят плазмидь, дающие возможность зкспрессии полномерньїх гибридньїх протоксинов с молекулярной массой 140кДа. Для получения іп мімо рекомбинантов парную плазмиду (РВО56О или рВОб650;
Ф) Фиг.2) переносят в )М101. ДНК в количестве бмкг вьіделяют из отдельно полученньїх рекомбинантов и ка гидролизуют с помощью Мої! и Ватні, делая разрез между двумя укороченньїми сгу!Ї генами для селекции на основе нерекомбинантов, и ДНК трансформируется в Е.соїї Хі 1-голубую. Затем вьіращивают 5 отдельньх бор /Колоний и анализируют характер белков и содержание плазмид.
Гибридньсе токсиньі СтуЇС-СтуІЕ и СтуІЕ-СтуЇС получают с использованием соответственно парньїх плазмид рРВОБбО и рВОб650, допуская их рекомбинацию в гесАжфон, вьіделяют ДНК, гидролизуют и переносят в штамм гесА, как описано вьіше. 100 колоний из 20 отдельньїх зкспериментов анализируют злектрофорезом в полиакриламидном геле с 65 додецилсульфатом натрия. Из зтих колоний 85956 дают белок молекулярной массой 140кДа, задаваемьй рамочньми рекомбинациями соответственно генов сгуЇС и сгуїЕ, сгуїІЕ и сгуІС. Е. соїї продуцируют белки Стуї в виде кристаллов, растворяющихся іп міїго при вьісоких значениях рН. Приблизительно 1595 гибридньїх токсинов, полученньїх описанньм способом, растворяются при вьісоких значениях рН. Рекомбинантьі, продуцирующие растворимье гибридньсе токсиньії, сначала классифицируют с использованием рестриктазьі, затем определяют положение кроссовера в селекционированньїх гибридах каждого класса, анализируя последовательность ДНК.
Все кроссоверьі, которне приводят к получению растворимьїх гибридньїх токсинов, проявляются очень близко от домена І или в нем.
Очистка и анализ белков
Кристаллические белки вьіделяют в основном по методу Сопмепіз еї а! (9.Віої.Спет. 265, рр 1369-1375; Еиг. 7/0. Віо-спет. 195, рр 631-635). Вкратце, рекомбинантнье Е.соїї виращивают при З0"С в 250мл в ТВ-среде до
О0066010"15. Кристалльі, вьіделеннье из лизата Е.соїї, растворяют при инкубации в течение 2 часов в присутствиий 20 мМоль Ма»СО53, 10мМоль дитиотреитола, 100мМоль Масі, при рНІТО и температуре 3770. рн раствора понижают до 8 с помощью 100мМоль буфера Ттіз-НСЇІ, и инкубируют в присутствии трипсина. Раствор токсина диализируют против 20мМоль буфера Тгіз-НСІ и 100мМоль Масі при рНе. Затем токсичньій фрагмент /5 Очищают на колонке Мопо С 5/5, включенной в систему (ЕРІ С) скоростной жидкостной хроматографии белков (Ріпаптасіа І КВ Віоїеснпоіоду). Белки вьіделяют злектрофорезом в полиакриламидном геле, содержащем 7,590 додецилсульфата натрия.
Биохимический анализ и вьіделение токсичньїх фрагментов с молекулярной массой б5кДа
Вьіделеннье кристалльь очищенньїх белков СтгуїС, СтуїЕ и гибриднье белки растворяют при вьісоком 2о значений рН и инкубируют с трипсином. Подобно белкам СтуЇС и СтуІЕ все растворимье гибридньсе токсинь! от кроссоверов в домене І конвертируют в устойчивье фрагменть! с молекулярной массой б5кДа. Фрагменть! с молекулярной массой б5кДа можно очищать анионообменной хроматографией при таких же условиях, как и родительские белки. Трипсин полностью разрушаеєет гибридь Е59 и Е71, которне имеют кроссоверь! в домене ІІ.
Несмотря на то, что зти гибридьій не осаждаются в виде нерастворимьх агрегаций, по-видимому с г МнДдуцированнье трипсином места расщепления в родительских белках могут подвергнуться действию трипсина. Позтому І фрагменть! с молекулярной массой 65КДА не могут бьїть вьіделеньї из гибридов Е59НЕ71. і)
В таблице 1 показана структура 5 гибридньїх токсинов СтгуіЕ-СтуЇС (527, НВ, НІ17, Н7) и 4 СтуІС-Сту гибридньїх токсинов (Б59, Е71, 26, Е7) в сравнении с белками СтуїЕ и СгуС, из которьїх они получень.
Аминокислотнье последовательности гибридньїх токсинов СтгуІЕ-СтуЇС, содержащих токсичнье фрагменть со зо богласно изобретению, занимают положения до аминокислоть! 1189 родительского белка СтуІС, а гибридньх токсинов СтуїС-СтуІЕ - до аминокислотьі 1171 родительского белка СтуїЕ. В таблице 1 приведеньі! также Ме значения относительной инсектицидной активности зтих гибридньїх токсинов в сравнений с І белками СЕ и (о
Стус. ча з ю 619 ве 1 єв «
ВИ ПИ ПОН НОЯ ПОН НО о с лавах 00 ї» Ст вю0 вавя 03001 не вт вве | 171 4 яв вивя 0001
І; пи ПО ПОН ПОН ПОН КО ве жа 1 11 т и ро явяа яю | 1111
Ф пи ПО ПОН ПОН ПОН КО вав ооавветнт) яв 1 о
ІЧ е)
Большинство биологических анализов бьіли проведеньі на очищенньїх фрагментах токсинов. Белки сгуС занимают положения от приблизительно аминокислотьі 28 до 627, а сгуїЕ - до 612. Полная длина последовательностей протоксинов указана в скобках.
Определение токсичности для насекомьх и инсектицидная активность сгуІСісгуїЕ продуктов гибридньх іФ) генов.
ГФ 0.6
Бактериальнье культурьіь концентрируют до ОЮбво и 1О0Омкл наносят в виде точек на искусственную питательную среду на матрас для культурь! тканей, имеющий 24 лунки. Наряду с зтим, разбавленнье образць 60 очищенньх токсинов наносят сна питательную среду. Личинки во втором инстаре насекомьх 5.ехідча,
М.Бгаз-зісае или М.зехіа содержат на зтой питательной среде (16-кратное разбавление на образец) 5 дней, после чего учитьвают массу личинок. Относительньй рост (равновесную концентрацию, снижающую рост на 5090) определяют по отношению средней массь! личинок, содержащихся на питательной среде с токсином, к средней массе контрольньїх личинок, содержащихся на питательной среде без токсина. Насекомьх вида бо М.зехіа для кладки яйц поставляет Сагоїїпа Віоіодіса! Зирріу Сотрапу, Мопій Сагоїїпа, 05.
Токсичнье фрагментьї, кодированнье продуктами гибридньх генов, испьітьївают на активность против трех различньїх видов насекомьїх, описанньїх вьіше. Насекомое вида М.зехіа восприимчивь! как к СтуЇС, так и СтуІЕ.
По их чувствительности к трипсину можно предположить, что гибридьі Е59 и Е71 не обладают активностью против зтого насекомого (Таблица!). Несмотря на то, что Н7 конвертируется трипсином в устойчивье белки с молекулярной массой 6б5кДа, он не токсичен для М.зехіа, Все остальнье гибридь, представленньсе в Таблице 1, токсичнь и, по-видимому, имеют-нативную, биологически активную конформация.
Фрагмент белка СтуЇС молекулярной массой б5кДа в отличие от белка СгуІЕ вьісокотоксичен по отношению к видам 5. ехідпа и М.Бгаззісае. Токсин 527 (Таблица 1; Фиг.2), гибрид СтуІЕ-СтуЇїС с кроссовером в месте 7/0 соединения доменов ЇЇ и ЇЇ - активен по отношению к обоим видам насекомьїх. Зто указьіваєт на то, что домен
Ш белка СтуЇС придаєт ему полную активность по отношению к 5. ехідша и М.Бгаззісае. Гибрид НВ, которьй отличается от 527 только тремя аминокислотньіми остатками (см. Фиг.3), будучи активньім против М.зехіа, не активен против 5.ехідца и М.бБгазвзісає.
Антипод гибрида 27 - гибрид Е26 (Таблица 1, Фиг.3), в котором домен ІІ белка СтуЇС заменен доменом ІІ белка СтгуІЕ, не активен против 5. ехідца или М.Ббгазвзісае. Несмотря на то, что он токсичен по отношению к
М.зехіа, последовательности белка СтуЇС, включающие положения от аминокислот 28 до 462, вероятно, не достаточньі для поражения З.ехідна и М.Бгаззісае Последовательности белка СгуїС только тогда восстановливают инсектицид-ную активность против зтих насекомьїх, когда в зтом гибриде (Е7) присутствуют аминокислотнье остатки не ниже положения 602. В зто описаний показано, что аминокислотнье остатки в 2о положениях 478-602 последовательности белка СтуЇС могут придать белку СтуІЕ; вьісокую инсектицидную активность против 5. вхідна и М.бБгазвзісає.
Биотинилирование кристаллических белков и их анализ по степени связьівания.
Биотинилирование проводят с использованием биотин-М-гидроксисукцинимиидного зфира по существу таким образом, как оно описано изготовителем (Атегепат). тмг кристаллического белка инкубируют в течение с ов ОДНОГО часа с 40 мкл биотинилирую-щего реагента в присутствимй ХоОмМоль МансСоОз, 15мМоль Масі при рнНа и температуре 202С. Раствор заливают в колонку, заполненную Зерпадех 25, уравновешенньій тем же буфером, і) содержащим 0,195 бьічьего сьівороточного альбумина для удаления несвязанного биотина, и образць! фракций наносят пятнами на нитроцеллюлозную мембрану. Фракции, содержащие биотинилированнье кристаллические белки, визуализируют с помощью коньюгата стрептавидин-пероксидаза (Атегейат), которьй катализирует о окисление люмино-ла, віізьівающего хемипоминещенцию (ЕС, АтегеНат), и сливают.
Мембраннье пузьірьки собирают по УУоГегзрегдег еї аі. (Сотр. Віоспет. РПузіоІ.8ба, рр 301-308, 1987) и, іа кроме того, еще раз промьивают изолирующим буфером, содержащим 0,195 Средьі Тм'ееп-20. Связьівание Ге) биотинилированньїх кристаллических белков с мембранньіми пузьірьками (10Омкг/мл) проводят в 100мкл средь!
РВ5, содержащей 1905 бьічьего сьівороточного альбумина и 0,195 средьі! Ту'ееп-20 при рН7,6. Пузьірьки (20мкг в белка) инкубируют с 10 мг биотинилированньїх кристаллических белков в течениє одного часа при 20'Св (З присутствий или отсутствии 1000-кратного избьтка немеченньїх кристаллических белков. Затем пузьірьки снова отделяют центрифугированием в течение 1Омин. при 140009 в центрифуге Еррепадоїпї, дваждьі промьівают связующим буфером, снова суспендируют в образцовом буфере, денатурируют нагреванием и вводят в 7,5956-вій полиакриламидньїй гель. После злектрофореза белки блотируют на нитроцеллюлознье мембрань, и « биотинилированньюе кристаллические белки, которье повторно вьіделеньй с пузьірьками, визуа-лизуют, Ше) с инкубируя нитроцеллюлозу с коньюгатом стрептавидинпероксидаза (Атегепат), которьй катализирует й окисление люминола, вьізьівающего хемилюминесценцию (ЕСІ,, Атегзпат). "» Поскольку связьівание с зпителиальньми клетками средней кишки - основная часть механизма действия кристаллических белков, их связьвшание мембранньми пузьірьками З.ехідпа исследуют в гетерологичньх
Конкурентньїх зкспериментах. Конкурентнье зксперименть! показьівают, что связьвваниє меченного белка Стус сл (Фиг.4А, цепочка а) и меченного гибрида Е26 (не показан) может бьіть исключено при избьітке немеченного белка Стус (цепочка Б) или гибрида Е26 (цепочка е),, но не при избьтке гибрида 527 (цепочка с) или белка
Ше СІугЕ (цепочка 4). Кроме того, связьівание меченного гибрида 527 (Фиг.46, цепочка а) и меченного белка СтуІЕ б (не показан) может бьіть исключено при избьіїтке гибрида 527 (цепочка Б) или белка СіуЕ (цепочка 4), но не при МиЗбьтке белка Сту1С (цепочка а) или гибрида Р26 (цепочка е). Зто позволяеєет сделать вьівод, что 527 и СтуІЕ о "узнают" те же места связьівания на мембранах средней кишки 5. ехідпа и что зти места отличаются от мест, со "узнаваемьх" белком СтгуЇїС и гибридом Е26. Совместнье испьтания на токсичность и степень связьівания показьивают, что (327 обладаєт такой же токсичностью, как и СгуіС, но связьівается с иньім рецептором.
Поскольку насекомье могут приобретать сопротивляемость к кристаллическим белкам, изменяя показатели связьвания рецепторов, 327 может бьіть полезен для контроля сопротивляемости насекомьх в качестве варианта замень Стус. іФ) Зкспрессия генов гибридного токсина сгуІЕ/сгуС в гетерологичньїх системах. ко Ген сгуїЕ/сгуЇС гибридного токсина 527 зкспрессируется в Е.соїї, и генньій продукт проявляет по меньшей мере такую же ин-сектицидную активность (по меньшей мере против Зродоріега)| как СтуЇС. Более того, зтот бо продукт проявляєт повьшенную активность; если ген зкспрессируєтся в штамме Васійуз (Нпигіпдіепзевз (см. ниже). Ген, коюодирующий гибридньїй токсин 527, вводят в подходящий вектор-челнок, которьій затем вводят в соответствующего хозяина В.ї. Такие трансформированнье клетки культивируют, а получаемьй от обеих цельньїх культур токсин и очищеннье кристалль! проверяют на инсектицидную активность.
Конструирование вектора-ч-елнока, содержащего 527, трансформация штамма Ві 51 и очистка от него б5 токсичного белка.
Ген, кодирующий гибрид 527 (3400 пар оснований), отщепляют от плазмидьії, индуцирующей зкспрессию рКК233 Е/соїї, с использованием МсоіЇ и ХпоЇ. Сайт Хпо! заполняют фрагментом Кленова, т.е. фрагментом
ДНК-полимеразь І от Е.соїї. Полученньій фрагмент лигируют с Мсо/Зтаї! гидролизованной равВ635 (рВіцезсгірі
КЗ, Регуіїс и СтуІА(с) терминатор). Полученную плазмиду роВ454 гидролизуют с Араї и Мої, образуя фрагмент с 4200 пар оснований, несущий промотор, гибрид 527 и терминатор. Зтот фрагмент лигируют с Араї / Мої! гидролизованной роВвб634 (челнок-вектор, содержащий рВС16.1 и рВіпезсгірі КЗ), образуя РЗВ456 (см. Фиг.5).
Плазмиду ДНК, вьіделенную из Е.соїї, ДНІОВ, используют для трансформации кристаллическиого токсина за исключением признаков наследственности В.51. Положительнье изолятьі устойчив8 к тетрациклину, проявляют присутствие рОВ456 и содержат большие включения, соответствующие белку с молекулярной 70 массой 135кДа (вьіявлено с помощью злектрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия).
Образцьі гибридного токсина (527 готовят из культур трансформированного штамма ВІіб51, вьірращенного спорообразованием при З0"С в среде цистеин-тетрациклині . Биологический анализ инсектицидности (Таблица 2) проводят как на полньїх цельньїх культурах, так и на отмьїтьїх препаратах кристаллического белка.
Контрольньсе образцьї включают ВІ51 (реВ440), содержащий токсин СгуТсС, и ВІ51 (рЗВб63б), содержащий СтуЕ. 7/5 Концентрацию токсина определяют злектрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. приблизительно на 5095 более зффективен, чем токсинь! белков СтуІЕ или СтуС по меньшей мере в отношений Зродорівєга Зр 0000 мельнеяюлнураняу 0000000 | отмотьйкристаллический белок(мл) сч дв (8)
Несмотря на то, что изобретение описано на примере получения гибридного токсина 527, специалисту будет понятно, что, пользуясь информацией из зтого описания, можно получить многие другие гибриднье токсиньї с улучшенньіми инсектицидньми показателями. Например, в ЗЕО ІО Мо.7 и 8 представлень! другие со 20 гибридньсе токсинь!ї согласно изобретению, которье обладают повьішенной ин-сектицидной активностью. Можно получить гибриднье токсиньї, содержащие домен ІІ белка СтуЇС и М-конец любого иного белка Сгту. Что касается -Ф) биологических испьітаний, гибридньій токсин, несущий трансформанть!, можно вьірастить в БОР средах для с ускорения испьітаний и уменьшения обьемов используемого материала. Кроме того, ген, кодирующий 527 и/или другие гибриднье токсиньі, согласно изобретению можно перенести в кодирующиє токсин штаммь! Ві. и/или їм» зв Мнтегрировать в хромосому вьіведенньх штамов Ві. или даже ввести в геномь! растений для обеспечения ою инсектицидной активности іп зйш в зтом растений. В зтом случае особенно предпочтительно рекомбинантную
ДНК, кодирующую токсиньі, модифицировать так, чтобь!ї кодоньї, предпочтительньсе для растения, которому зта рекомбинантная ДНК предназначена, бьіли использовань так, что зкспрессией такой модифицированной ДНК в указанном растений синтезируется белок, по существу сходньій с белком, синтезируемьм при зкспрессий « 20 немодифицированной рекомбинантной ДНК в организме, содержащем зндогеннье компоненть! фрагментов -в гибридного токсина или токсина. с ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ :з» (1) ОСНОВНАЯ ИНФОРМАЦИЯ () ЗАЯВИТЕЛЬ (А) НАИМЕНОВАНИЕ: Сандос Лтд. сл (В) УЛИЦА: Лихтжтрассе 35 (С) ГОРОД: Базель -і (0) КАНТОН: Базель
Фу (Е) СТРАНА: Швейцария (Р) ПОЧТОВЬБІИ ИНДЕКС: 40002 се) (б) ТЕЛЕФОН: 061-324-1111 со (Н) ТЕЛЕФАКС: 061-322-7532 (А) НАИМЕНОВАНИЕ: Сандос Патент ГМВХ (В) УЛИЦА: Гумбольтштрассе З 5 (С) ГОРОД: Лоррах (Е) СТРАНА: Германия (Ф) (Р) ПОЧТОВЬЙЙ ИНДЕКС: 7850
Ге (А) НАИМЕНОВАНИЕ: Сандос Зрфиндунген Форвальтунгсгезельшафт МБХ. (В) УЛИЦА: Бруннерштрассе 35 во (С) ГОРОД: Вена (Е) СТРАНА: Австрия (Р) ПОЧТОВЬЙ ИНДЕКС: 1230 (ї) НАЗВАНИЄ ИЗОБРЕТЕНИЯ: Гибридньй токсин (ї) КОЛИЧЕСТВО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ: 8 в5 (м) ФОРМА ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ИНФОРМАЦИИ: (А) ТИП НОСИТЕЛЯ: гибкий диск
(В) КОМПЬЮТЕР: ІВМ РО-совместимьй (С) ОПЕРАЦИОННАЯ СИСТЕМА: РО-БО5/М5-БО5 (0) ПРОГРАММНЬЕ СРЕДСТВА: Раїепіїп Кеїеазе 41.0, Мегвіоп 41.25 (ЕРО)
ИНФОРМАЦИЯ ПО 5ЕО ІО Мо. 1: () ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: (А) ПРОТЯЖЕННОСТЬ: 3567 комплементарньмх пар (В) ТИП: нуклеиновая кислота (С) КОЛИЧЕСТВО НИТЕЙ: одна 70 (6) ТОПОЛОГИЯ: неизвестна (ї) ТИП МОЛЕКУЛЬ!: кКДдНнК (ії ГИПОТЕТИЧНОСТЬ: нет (її) КОЛИЧЕСТВО АНТИСМЬІСЛОВЬХ НИТЕЙ: нет (мі) ИСХОДНЬЙ МАТЕРИАЛ: (А) ОРГАНИЗМ: ВасіЙйив (пигіпдіепвіа (їХ) ПРИЗНАК: (А) ИМЯ/КЛЮЧ: СО5 (В) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1..3567 (хі) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕО ІО Мо -1
Claims (1)
- Формула винаходу1. Фрагмент інсектицидного гібридного токсину Васійиве (Пигіпдіепзіз, який відрізняється тим, що має сч амінокислотну послідовність від амінокислоти 1 до амінокислоти 620 в 5БО ІО Мо б, яка має наступну послідовність: о сМес бів І1їе Маї Авп Азп о біп Авп бід Сув Уві Рго Тух Авп Сув Гей 1 5 10 15 с зо Азп о АвпоРго бі Азп біз І1їе цец Авр І1е бі) Акго бег Авп Зег ТІ 20 25 зо Ме. Уаї Аїа Тих Азп Іїе Аза Пеп бі Іїе 5ехг Агу цеч цей Аза бек А12 що45. т зе ТВт Рго Іїе бі1у С1У І1єе цеш цецш сіу це Рпе Ар Аїа І1є Ттр Сіу ю 50 55 60 : Бех І1їе біу Рго Бех біп ТЕр Авр Цец РБе це Сіц Сіп І1е бі5 Пец «65. 70 75 во 70 рреш Іїе Азр біп цу Іїіе 01) Сі Рпе Аза Агу Ап обіп Аїа Ізїе Бех 8 с 5 90 . 95 з Аго це біц с1у І1їе бек бек цем Тут біу І1е Тут Тих біз Аза Рбе 100 105 110 . Агу біц Ттр біб Аїа Авр Рго Ту Авп о Рко Аїа Гец ув Сі бі Мес і-й 115 120. 125 -і - . Аху Тих біп Рпе Авп Авр Мес АвБп бех І11е Пец уаї. Тих А1їа Іїе Рго б 130 135 140 7 грец Рре бег уаї біп Авп Тух Сіп уаї Рго Ре Пеш Зехг Уаї Тут Уаї 145 150 7 155 160 ІЧ е) | ! біп Аїа А1а Або це Ні Пец бехг Уаії це Ахгу АБр Уаї бег Уаі1ї Ре 165 170 175 , Ге) сіу Сів Аїа Тер сіу Рпе Авр І1е Аза ТЬг І1їе Або бехг Аку Тут Авп кю 180 185 190 Авр реч Тих Аку ем І1е Ркго І1їіе Тухк Трх Авзр Тух А1ї1а Уа1ї Аг9 ТІр 195 200 20560 . тут Азп ТПІ б1іу Пеш Авр Аку Пец Рхо Аку Ту біу б1у Пес Ах9 АБп 210 215 220 ТіІр А1їа Аку Рпе Авп біп Рпе Аку Аху бі Пец ТБх І1е бек Уаії це бо 225 230 235 240Ар І1е Іїе бБехг Ре Ріе Аг Авп Тух Авр бех Ату Пез Тух Ртго І1е 245 250 255 Рго ТпПІ Бех Зехт біп Пеш Твх Агу біш Уаї Тут Тих Авр Ркго МУаї І1еє 260 265 270 АБп о І1е Тпх АБр Тух Аху Маї біу Рко бек Рре бі Авп І1е бій Авп 275 280 285 0 бек діа Іїе Аху бех Рхо Нів це Мес Авр Рре цец Аєп Авп цей Тог 290 295 Зоо І1їе Азр ТІ Азр Пец І1е Агу біу Маї Нів Тут Ттр Аїа сіу Нів Ахуд 305 310 315 | ' 320 Уаї ТвІ бек Ніз Рпе ТіПх біу бет бех біп Уа1! І1е Тпх Тпг Ркго біп ше 325 330 ! 335 Тут біу І1е Тпх Аїа Авп Аіїа біу Рко Аху Агу ТІ І16 Аїа Рго 5ехг | 340 345 350 ТіПх Ре Рго біу цей Авп оце) Рре Тух Аху ТБх Пец бек Авп Рко Рпе 355 360 : 365 Рпе Ак Агу бек бій Авзп Іїе Тіх Рхо ТПхІ Гец біу І1є Азп Уаії Уаї1ї с 370 375 380 ' Го) біп сіу Уаї біу Рпе І1їе б3)іп Рко Авп Авп Аза біо Уаї цец Тут Ах9 385 390 395 400 бег Ако бСіу Тих Уа1 Авр бег Гец Ап Сіц цец Рго І1є Авр сС1у бі со 405 410 415 Ф Азп обех цем Уаї біу Тут бЗехї Нібв Аху цей бехт Ні Маї ТБхІ Цен ТЕ со : 420 425 ! 430 м Агу Бех ем Тут Авп Тіт Авп Іїе ТпПтІ бехг Пец Рго ТІ Рпе Уаії ТІгр ю435. 440 445 Ті Нів Нів бех А1їа Трх Авп ТБх Авп ТВІ І1 Авп о Рго Авр І1е І1е 450 455 ' 460 « 0 Таж біп І1їе Рхо Пец Уаї цЦув біу Ріе Аху Уа! Тгр біу б1іу Тіх 5ег 7 с 465 | 470 г. 475 480 ;» Уаї Іїе Тйг б1у Рго біу Ріе Трх біу б1у Ар Ії цеш Аку Аку АБп 485 490 | 495 ТаІ Рпе біу Авр Рпе Уаї бек Пе біп уаї Авп І1еє Авп беї Рго І1е с 500 505 610 Ш- ТрІ біп Аку Тух Акгу Пец Аку Рпе Агу Тух А1а Бех бек Аху Авр Аза о І 515 | 520 525 СО 70 Агу Уаї Іїе Уаї цеш ТБтІ біу Аїа Аїа бек Трх Сіу Уаї біу біу біп со ' 530 535 ' 540 Уаї бех Уа1ї Авп Мес Рго Пец біп Цув Тбх Мес біш І1їе б1у бі Авп 545 550 555 560 59 реп Тих бег Аку ТІ Рае Агу Тут ТіПх Авр Ріе бег Авп Рго РПе 5ег ГФ! 565 . 570 575 о Рпе Агу А1а Азп Рго Ар І1їе Ізе б1у І1е Бех біц біп Ркго цес Ре 580 585 590 во б5Ссіу Аїа біу Зег І1еє бег бек б1іу б1ц Пец Туг І)Зе Азр цув І1є бі 595 6о0 "605 Ще Іїе Іїе цей Аза Авр Аїа Тих Рпе біц Аїа бі) бех Авр ей бі Аху 9 610 615 620 Аїа біп цуз А1їа Уа1ї Авп Аза Пец Рпе Твх Бех Бех Авп Сіп І1е біу 625 630 635 -: 640 у/л . цеч цув ТіПх Авр Уа1ї Ту Азр Тут Нів Ії11е6 Авр біп Уаії бех Авп їв 645 650 655 Уаї АБр Суз Пец Бех Авр біо Ріпе Суз Гей Азр сіш Був Агу б1ч Тейч 660 665 | 670 щі бех біз цувз Уаї цув Нів Аїа цув Ах9у це бек Авр сім АгУу Авпоїейз : 675 680 | 685 реч біп Азр Рго Авап Ріе Агуд Сіу І1їе Авп Агу Сбіп Рхо Авр Ахо С1У ю- 590 695 .- 700 Ттр Агу біу бек Тпх Авр І1е ТІ І1е біп біу біу Азр Авр Маї Рре 705 710 715 720 цуз біз АБп оТух Маї Тк Пец Рхо біу Тпх Уаї Авр біш Сув Тух рРхо 725 730 735 с й о ТвІ Тут цец Тух біп Цув І1е Азр біц бех ПЦуз Ццец ув Аїа Тух ТВх 740 745 750 Ах тТухгт біц цес Агу біу Тут Іїе біц Авр Зек біп Авр цеш біз І1е со зо 755 760 165 : ' (о) Тут цец Іїе Ак Тут Авп Аії4а цуз Нів бі ІЇ1є Уаї Авп УМаї Рго б1У 770 775 780 Ф Тах біу бех рез Ттр Рго Пец бех Аіїа біп 5ег Рко І1їе б1у цув Сув - 785 790 795 800 юю сіу бі Рко Авп Аку Суб Аза Рго Ніз цею бій Ттр Авп Рго Авр ех . 805 810 - 815... АБр Сув бек Суз Аку Авр с1у Сіш Муз Сув Аїа Нів Нів бЗег Нів Нів ч 820 ! 825 830 не) с | ' ! й ч» Ре Трх це Азр о І1е Авр Уаії біу Сув Тих АДяр Пен. Авоп бій Авр цей " 835 840 . 845 віу Уаї Тхр Маї Іїе Рпе Ццузв І1е Пцув Тіх бів Авр біу Нізв Аіїа Ах9 о 850 855 860 і Пец біу Ап Пец Сіш РБе це біцш бій ув Рко цеш Пец б1у біз Аї1а Ф 865 870 | 875 880 СО о рез Азїа Ак уаї ув Аху Аїа бій був ув Ткр Ахуд Авр Цув Аку С1и со ! | 885 ! 890 895 цув цец біп цеш біш ТБх Авп о І1еє Уаї Тут цЦув бі діа цуз бі бек 900: 905 І 91055 . уаї Азр А1їа Пец Рпе Уа1ї Авп бек біп Тух Авр Аху їв біп УМаї Авр (Ф) 915 ! 920 925 ко ТБІ Авп о І11е Аїа Мес Іїе Нів Аїа Аза Авр Пцуз Аху Маї Нів Аху І1е во 930 ! 935 | 940 Агу січ Аїа Тух Пец Рхо б1іц Пцеш бЗех Уаї Іїе Рго сіу уаї Авп Аза 945 950 955 960 б5А1їа Іїе Рпе бі 610 Пец бі) біу Ак Ії Рпе Тіх Аї4а Тух 5ег Ге й 965 . 970 975 Тут Авр А1а Акуд АвпоУаї І16є цув Авп біу Авр Рпе Авп Авп біУу Геи 980 985 990 . цем Сув Ттр Ап Уаї ув Сіу Нів Уаї Авр уаї біц бій біп Авп Авп 995 1000 й 1005 0 нів Агу Зех Уаі цеи УМаї І1є Рго бій Тгр біц Аіїа біц Ууаї бех біп 1010 о 1015 1020 , бі уаї Агу Уаї Суз Рго біу Акгу біу Тут І1 Пец Аку Уаї Тах Аза 1025 1030 : 1035 104015 . Гуз бі біу Тух біу бій с1іу Сув уаї Тих ї16є Нів біо ІїІ1є вій Тут й 1045 1050 1055 АБр Ап ТпІ Авр бі Пец ПЦув РБе Бех Авп Суз уаї біц біз біч Уа) Ко 1060 1065 1070 ! Тут Рго Авп Авп оТВах Уаї Тіх Сув Аяп Азп Тук ТАх. сіу Твх біп бі ! 1075 | 1080 1085 т сч бів Сі сіу Твх Тух ТВжх бек Аку Авп біп б1у Тух Ар О1а А1їа 7 1090 1095 1100 ше о Сіу Ап АБп о Рто Зех Уаї Рго Аіа Азр Тух Аїа Зех Уаї Тут бів 1105 У : 1110 . у 1115 | 1120 со біз ув бек Тут Тіт АБр біу Ату Ахуд бій Авп о Рко Сув бі бег Авп о 1125 1130 І 1135 й Агу біу Тут Б1іУу АБр Тут Тіжх Рго Це Рко Аїа біу Тут Маії Тпх цу 1140 11455 1150 - 7 Ар це бі Тук Рпе Рго бій Трх АБр ув Чаї Ттр І1є 01» І1е 01У о х 1155 1160 1165 бі Тпг біц сіу ТрІ Рре ІЗїе Уаі1і Ар Зехг Уаі біш ви ецш ей Мес « 40 1170 1175 ше 1180 І - - біч 61 | . "» 1185 45 або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, що має зазначену послідовність із щонайменше однією з с таких замін: Пе в позиції 609 змінено на ГГ еи, - Аа в позиції 618 замінено на си, Ге» Зег в позиції 620 замінено на Туг, або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, який щонайменше на 8590 50 подібний до вищезазначеного фрагменту інсектицидного гібридного токсину та який приєднується до тих самих ік зв'язувальних сайтів рецепторів.с 2. Фрагмент інсектицидного гібридного токсину Васіїйив (пигіпдіепзіз, який відрізняється тим, що має амінокислотну послідовність від амінокислоти 1 до амінокислоти 627 в 5БО ІО Мо 8, яка має наступну послідовність: 55 Мес АБр АБп Азп РІО Ап оЇ1е Авп обі Суб ІЗе Рко Тут Азп Су5з Гей 1 5 10 15 ГФ) . Гх) бех Авп Рко бій Ма1ї біц Уа) цеш біу біу бі Аго І1е бі ТпІі б1У 20 25 зо щ Тут Тік Рхто І1е Авр І1е бек цей бек це Тих біп Рпе еп рем 5ехг б5 бі Рпе Уа1 Рго с01у Аї1а біу Рве Ууаі ви біу гео Уаї Азр І1е6е І1е 50 55 60 Тгр біу Іїе РрБе Сіу Рго Ббег біп Тгр АБр Аїа Рпе це Маії біп І1е 65 ' 70 75 | 80 біц біп Ге І1ї1е лав біп Аку Ї1е біц б310 Рпе Аза Агу Ап о біп Аза 90 95 / Іїе Бех Ат Пец бій С1у Цехш 5ег Авп цец Тухт біп Іїе Туг Аїа бі 100 105 110 бех Рпе Агу б1ц Тер 610 А1їа А5р Рго Тру Ап Рто Аїа Пец Агу бій 115 120 125 7 дів мес Аг Ізе біп Ре АБп АБр Мех Ап бег Аіа це ТБг Твг діа 130 135 140 І1їе Ркго цеч Рбе Аза Уаї біп АБп Тут бСіп уаї Рго цец пцец бек Маї1ї145... 150 155 160 Тух Маї біп Аза Аіа Авп оце Ніз еп бех Ууаїі цец Агуд Авр Уаї 5ег 165 170 175 Уаї Рре біу біп Аку Тер б1у Ре АБр Аза Аза Трт І1еє Ап Зег Аг9 сч 180 185 190 Тут АБп Азр цез Тіт Ах Це І1е Сіу Авп Тут Тпх Азр Ніз діа Уаї і9) 195 200 205 Аго ТтІр Тут Авп ТВІ біу цею бій Агу Уаї Ткр об1іу Рго АБр бег Ак9 со зо 210 215 220 (о) Азр Тгр ї11еє Ахгу Тут АБп о біп Ре Агу Аг бі ев ТБті Пец ТпІ Уаї со 225 230 235 | 240 - з5 Пе Авр І1е Ма1 бех Пец Рпе Рхо Авп Тут Авр бех Агу Тит Тух Ркго ю 245 250 | 255 І1е Агу Тпх УМаї Бех біп Ццеш Трх Аку бій ІЗе Тут ТВі АБп Ркго Уа! « 260 | 265 27040 . - с Пец бі Азоп о Рпе АБр біу бек Ріре Агу бсіу 5ег Аза біп біу ІЗ1е сі і 275 . 280 285 но сіу Бех І1е Аку Бех Рко Нів цей Мес Авр І1е Пец Азп бех І1е ТБх 299 295 300 (5! Іїе Тут ТІ Азр Аіїа Нів Ак біу біз Тух Тут Ттр бег біу Нів біп 305 310 315 320 -І (о) со 50 Іїе мес Аїа бЗех Рго Маї біу Рпе бек біу Рго Сіш Рре Тік Рре Рго 325 330 335 со Пец Тут біу ТпІ Мес б1іу АБп Аза Аза Рхо біп біп Агу І1е Ма1ї Аїа 340 345 350 о Сіп це біу біп біу Уаї Тут Ако Тйх Пец Бех бек Тих цей Тут АхгЧ кю . 355 360 365 Ах Рго Рпе Авп І1е біу Т1їе Авп Авп біп Сіп еп бек Уаі цей АБр во 370 375 380 біу Тах бі Рпе Аіїа Тут сіу Тих бех бех Авп опем Ртго Бех Аїа Уа1 385 | 390 395 400 в5 Тут Ахч цуз Бех б1іу ТпІ Уаї Авр бек Пец Авр біц І1е Рго Рго сід 405 410 415АБп Азп оАвп оУаї Рго Рко Акуд біп б1іу Рре бех Ніз Акд Пеп беїг Ні 420 425 430 Й Ууаї бехт Мес Ріе Агу бег біу РиБе бех Авп бехт бег Уаї бек Іїеє І1еє 435 440 445 Ага Аіїа Ркго Мес Ре Бех Ттр І1їе Нібв Агку бех Аіа ТІ це ТП АБпП 450 455 460 70 ТЬх І1їе Ар Рко Сі Аку І1е Ав5п біп І1е рго це уаї ув біу Рібе 465 . 470 475 480 Ах Маї Тер б1у С1Уу ТЬІ Бех Уаї І1еє Тк біу Рго сб1у Рібе Тих Ссіу 485 490 ' 495 " бі1у АБр І1їіе рей Ахгу Агу Азп о Тіг Рпе біу Абвр Ре Уаїі бек Пец біп 500 5О5 510 Уаї Авп І1е АБп бек Рхо І1е ТБІ біп Аку Тук Агу Бей Аг9 Рре Ахгу 515 520 525 І Тут Аїа бекг бек Акгу АБр А1а Агуд Уаі1ї Іїе уаї цеш ТпІ біу Аіїа А1їа 530 535 540 бех Ті біу Уаї1ї біу біу Сіп Уа1ї бек Уаї Абзп Мес Рго цем біп ГЦув Га545. 550 555 560 о ТрІ Мес бі Іїе б1іу бій АБі; це ТІ беїх,Аку ТпІ Рпе Аку Тут ТПг 555 570 575 Авзр Рпе Бех Ав Рго Рпе Бех Рпе Аху А1їа АвБп Рго АБр І1е Ії1е б1У со ! 580 585 590 : (о) Іїе бех бі біп Рко Пец Рпе біу А1їа Сіу бек Ііїєе бех бех С01у біц «со 595 600 605 , Кк рецш Тут І1е Ар цує Ї11е біз І1е І1їе цеш Аїа Авр Аза ТПпг Рре сі 610 615 | 620 юю Аїа бі) бек Азр.Гей Сі Агу Аїа бід Був Аїа Уаії. Аяп Аза еп Ріє 625 630 635 640 « тду беї Бех АБп біп Іїе бі1у Пец цув Тік Авр о уаї Твг Авр Тут Нів З с 645 650 655 2» ще І1ї1е Азр біп Маі 5ех АБп цей Уаї Авр Сув цей Бех Авр 511 Ре Сув 15 66о 665 670 1 цей АБр січ Пув Акуд 01 Се бек бі Був Уаї цПув Нів Аіїа цув Ах9д ш- 675 6во 685 І Ге») НЯ ем бЗехт Авр бій Аху Авп реп цец біп Авр Рго Авп Рре Агу С1у І1е ї-о 690 695 700 со Авп Аку біп Рго Ар Агу біу Тур Аку Сіу бек Твту Авр І1е ТБг І1е 705 710 . 715 ! 720 бдіп біу сСіу Азвр Азр Ууаї Ре ПЦув бій Авп Тух Уа) Тіт Цез Рго б1у Ге) 725 730 735 з ТпІ УМаї АБвр бій Сув Тут Рко ТБх Тут Пец Тух біп цув І1е Авр бі 740 745 .- 750 бо б5 бех Пув Пеп Пув А1їа Тут Тіх Аку Тут Січ Ге Аку біу Тух І1е біцш. 155 760 765 АБр бЗех біп Ар реп о біц І1е Тух цЦец І1їе Аху Тут Азп А1а Гцуз Нів 770 775 780 біб І1їе Маі Азп Уаї Рко біу Тих біу бег цей Тер Рго Пец Бех Аїа 785 , 790 795 800 0 біп 5Бег Рго Іїе біу цуз Сув біу біц Рго Авп Аху Сув Аїа Рго Нів 805 810 ' 815 реч січ Тгр Авп Рго Авр Пец Ар Сув бег Сув Аху Авр б1у 01 уз 18 820 825 830 Суз Аза Ніз Ніє Зехт Ніз Нібв Ріе ТІ це Ар І1їе Авр Уаї С1Уу Су 835 840 845 ТіПІ Азр о Бец Авп бі Авр Ге біу Уаї Тхр Уаї Іїе Рпе був І1е Був 20 850. 855 860 ТІ біп АБр біу Ні5 Аїа Акгу це біу Ап ореп бій Рпе еп біз бій 865 870 875 88о ; І с 25 Муз Рко Пец Геп біу бі А1ї1а Тез Аїа Аку уаї Гув Ах9 Аіїа бі цуз о в85 890 895 цуз Ттр Акуд Авр цуз Ахо б1ц Був еп біп цез бі Тах Азп о І11е Маї 900 905 910 со й Тут цуз біш А1їа Пцуз б1ц бек Маії А5р Аїа їею Рпе Ма1 АБп беїх біп Ф 915 920 925 со Тут Азр Ах Пес біп Уа)! Авр Тих Ап І1їе Аіїа Мес І1є Ніз Аїа Аї1їа - 930 935 ' 940 35 ю Авр ув Агу Уаї Ніб Аку І1є Ах біц Аза Тут цец Ркго біц Пец 5ег 945 950 8955 960 Уаї І1їе Рхо сіу Уа1ї Азп Аза Аїа ї1еєе Рре Сі Сі Пец Сіш С1іУу Аг9д ч 40 965 970 975 З с- Іїе с Рвре Тих Аїа Тут бехт Пец Тут Азр Аза Аку Авп уаї І16є цЦув АБпП з» ! 980 985 990 сіу Авр Рпе Авп Авп с1у Пей Пец Суз Тур Аєп Уаії цув Сіу Нів Уаї 995 1000 10051 . АБр Маії бі біш біп Авп Авп о Нів Аку бех Уаї цец уаї ї1еє Рго С) -І 1010 1015 1020 ' Фо - Тжр біз А1ї1а біч Уаї Бех біп С1іц Уаії Агу Уаї Сув Рхго біу Акд СсСіу со 020 1025 1030 1035 .1040 (4) Тут І1еє ес Аго Уаії Тпх А1їа Тух Ццув бій біу Тух с1у б1и б1у Сув5 1045 1050 1055 Ууаї Твх ІїІ1ї1е Нів 6310 І1е бій Авр Аєп Тах Авр бій пе цув Ре бек 1060 1065 1070 о Авп Сув уаї біц бій бій Маї Тут Рхго Ап Азп Тбг уаї Твг Суб Ап ко 1075 1080 1085 во Авп Тух ТІ б1іу ТБх біп біш бій Тут біш біу Твх Тух Тк бЗег Агд 1090 1095 1100 Азп біп б1іу Тут Авр бій Аїа Тух біу Авп Авп Рго бек Уаї Рко Аїа 1105 1110 1115 1120 б5Ар Тут А1ї1а бек Маії Тут 0б1з Сі цув бек Тух Трх Авр б1у Ак АкЧ 1125 1130 | 1135 біц Авп Рхто Сув бій Бех Авп Агу біу Тут Сіу Авр Тух ТВі Рко Цеч 1150 1145 1150 Рхто А1а біу Тут Маї ТПпІ Цув Авр еп біц Тут Рпе Рго біц Тих Авр 1155 1160 1165: у) Шув Маї Тер І1е бій Іїе біу біц ТБх бій біу ТЬІ Ре І1є уаї Авр 1170 1175 1180 бехг Маії б)іш цей цей це Месє сі с31ц5 1185 1190... або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, що має вказану послідовність із щонайменше однією з таких замін: Пе в позиції 617 замінено на ГГ еи, Аа в позиції 625 замінено на си, Зег в позиції 627 замінено на Туг, або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, який щонайменше на 8590 2о подібний до вищезазначеного фрагменту інсектицидного гібридного токсину та який приєднується до тих самих зв'язувальних сайтів рецепторів.3. Рекомбінантна ДНК, яка відрізняється тим, що кодує фрагмент інсектицидного гібридного токсину, що має амінокислотну послідовність від амінокислоти 1 до амінокислоти 620 в 5ЕО ІЮО Моб, яка має наступну послідовність: сч Мек бю І1їе Маї АБп Авп о біп Ап обід Суб Уаї Рго Тух Авп Сув їеч о 1 5 ! 10 : 15 Авп о АхпоРго ше АБп Січ І1їе цец Ар І1е 01ц Аху бек Авп бег ТБх 25 30 с зо Маї Аїа Тих Азп І1е Аїа цем біш І1е 5ех Агу Пец цец А1а бек Аза Ф Тиг Рго І1е б1іу С1У І1є цеш Цей біу Пец Рпе Аєр діа І1є Ттр С1У ї-о 60 їм Бех І1є б1іу Рхо бек біп Ткр Азр Пец РБе цец біц біп І1єе 010 Цей 35 65 70 75 80 іс) ем Іїе Авр біп Пув І1є біш біб Рре діа Агу АБп біп Аїа Ії 5ег85. 90 95 « Аху пес біз б1у І1їе Зех бех цем Тут біу І1еє Тухг Твх бій Аїа Ре 40 100 105 110 . - с Аху біш Ттр біб Аїа Авр Рко ТІ Авп о Рто А1іа цей був біш б3)и Мес :з» 115 120 й 125 І Ак Тах біп Рпе Авп Авр Меї Авп бех І1е Пец Уаії ТВх Аїа І1е Ркго 45 130 135 140 й Пец Рпе бЗех Уаї Сіп Авп Тух Сіп Уаї Рго Ріе їв бех Уаї Тут Уаї -І 145 150 155 160 Ф від Аїа діа Авп Пец Нів ей Бех Уаї цем Ах Ар Уаї бег Уаі1ї РБе 50 165 170 175 се) сіу біп Аїа Тхр с1у Рре Ар І1їе Аіїа Тр ІЗїе Аяп бех Аху Тут Авп со 180 185 190 Авр еп ТВх Аху цем Ізїе Ро І1 Тут ТБх Азр Тух Аіїа Уаії Ак9 Тер 195 | 200 І ' 20555 . тут Авп ТІ б1іу Печ Авр Ату Пец Рко Аку Твх біу біу Мей Ак9 Авп і) 210 215 220 з Тер Азїа Аку Рпе Аяп біп Рпе Ах Аг Сі Пец ТІ І1е бБехг Уа1ї цей 225 230 235 240 60 АБр І16є І1їе бек Ріпе Рпе Агу Авп Тут Авр Зех Агу Пец Тук Рго Іїе 245 250 255 б5Ркго ТпІ Бех бек біп цеш Тіт Ак9 біш Уа1ї Тух Тіт Авр Рго Уа1ї І1еє 260 265 270 Ап І1їе Тих Авр Тух Аху МУаї б1у Рко Бех Рпе бі Авп Ї1е бій Авп 2715 280 285 бек А1їа І1еє Агу бех Рхо Нів Цеш Мес Авр Рпе цем Аєп Ап Пец ТИХ 290 295 300 Іїе АБр Тртг Азр Пец І1е Аку Сіу Маї Нів Туг Ттр Аїа Сіу Нів Ахуд /0 305 310 315 | ' 320 Ууаї Твх бек Ніз Рпе Трах біу бег бег біп Ууаї Іїе ТВі Тіг Ркго б3)п І 325 330 335 Тут біу І1е ТІ Аза Авп Аїа біо Рго Агу Аку ТВг І1е Аза Ркго 5ех 340 345 350ТвІ Рпе Рго біу Пец Авпопец Рпе Тут Агу ТЬх Меп бег Авп Рко Ре 355 360 : 365 Рпе Акд Ах бек бі Авп І1е Тіт Рко Тпх це) біу І1е Авп Маї Маї 370 375 380 сіп біу уаї б1у Ре І1е біп Рко Азп Ап Аза біц Маї еп Тут Ахг9 385 390 395 400 беїг Аку біу Тах Маї Ар Зетг Цец Авп бС1іц це Ркго ІзЗе Авр біу бі 405 410 415 сч 29 деп 5ех це Уаї Сіу Тух бех Ніз Аху еп бех Ні Уаії Тпх еп ТІ о 420 425 430 Ату бех ем Тух Авп Тпт Авп о Ї1е Тйт бек цей Рго Тпх Рре уаї Тгр з 435. 440 445 со тп Нів Нів бек Аїа Тпх Авп Торт Авп о ТЬх І1є Аяп Рго Ар І1е І1їеЄ Ф 450 455 460 (се) Тих біп І1е Рхо цей Маї цув с1іу Ріпе Аку Уаї Тгр біу б1у ТБбх 5ег - з5 865 470 , 475 .480 Я ІФ) уаї Іїе Тих біу Рго біу Рпе Трх біу б1іу Авр Іїе ви Агу Агу Азп 485 490 | 495 Тит Рре біу АБр Рпе Уаї Зег цеп біп Уаї Авп І1е Авп бег Ркго І1е « 500 505 510 - с тру Сіп Агу Тут Агуд Пеп Агу Ре Агу Тух А1а бех Зег Аху АБр Аїа "з 515 520 525... Ах уаї Ізїе Уаїі цеч Тву біу Аза Азїа Зех Тих б1іу Уа1ї б1)у С01у біп 15 530 535 540 й Уаї бех Уаії Абп Мес Рхо цез іп цув Трх Меб Сі ІзЗе сС1іу біч Авп -І 545 550 555 560 Фо Пец Тву бег Ах ТЬх Ріе Акгу Тут Тк Авр Ріе бег Авп Рго Рпе 5ег 565 . 570 575 (Се) со Рпе Агу Аїа Авп Рго Авр Іїе Іїе біу Іїе бех бі біп Рго еп Ре 580 585 590 с1у Аїа біУу беїх І1є бег бек С1у бій Пец Тух І1є Азр Був І1е Сі 595 600 605 о Іїе Ізїе цец А1а Авр діа Ту Ре Сі Аїа сій бех Авр Іец бі Аг г) 610 615 : 620 Аіїа біп цуз Аїа Ууаї Азп Аіїа Гей Рпе Тру бЗег Бех Авп біп Іїе біу 60 625 630 635 : 640 65Геч Ццув ТІ Авр Ма1! Тіх Авр Тух Нів І1їеє Авр біп Уа1! ех Авп цей 645 650 655 Уаї Авр Суз цем бех Авр бій Рбе Суб Пец Азр віш цув Агу б1ч ївеч5. 66о 665 670 Бек бі цув уаї цув Нів Аїа Цув Аку Пец бех Авр бій Агу Азп цез 675 во. ! 685 /0 ем біп АБр Рко Авп Ріе Аху біу Іїе Авп Агу біп Рко Авр Ах б1У 690 695 - 700 Ттр Аху біу бетг ТрІ Авр ІТе ТЬІ І1еє біп біу біу Азр Авр Маії Ре 705 710 715 720 /5 Муз біз Авп ТУт Уаї ТІ цем Рго біу Трт Уаї Азр бі Сув Тух Рхо 725 730 735 ТвІ Тут це Тух біп цуз І1їе Авр бі бехг Цув це Цув Аїа Тут тТх 740 745 750 20 Ах Тут бій це Ах біу Тух Ії Сіц Авр Бех С1іп Авр Гез Січ І1е 755 760 1765 Тут Пец І1е Аг Тух Авп Аіїа Цув Нів бі І1е Уаї Авп Маї Рхо б01У 770 775 | 780 се Таж біу Бех Пеш Ттр Рго Пец бех Аїа біп бехг Рго І1е С1у Цуз Су с 785 790 | 795 800 Ге) біу бій Рко Авп Агу Суз Аїа Рго Нів Пец бій Ттр Азп Рго Ар Гей . 805 810 815 . . с 30 Авр Сув бек Суз Ату Авр Сіу бій Ідув Сув Азїа Нів Нів 5Бех Нів Нів Ф 820 825 830 Ре Тих Пем Авр о І1е Авр Уаї біу Сув Тіх Авр Пец. Авп 61 Авр ви м 835 840 . 845 35 сіу Уаї Ттр Маї І1їе Рпе ПЦув І1їе Пцув Тих біп Авр б1у Нів Аїа Ах9 й 850 855 860 рец біу Авп цец біш Ре Пеш біш бій Цув Рго йеш Пец б1у бі Аіа « 20 865 870 875 880 З і- Пец Аїа Аку уаї цув Агу Аїа бій ув ув Тгр Аку Авр був Аго б1 ;» | 885 890 895 цув бец біп рес бі Тах Авп ЇІ1е Уаї Тут Був бі А1їа був Сіш бег сл 900: 905 г. 910 . -І Уаї Азр Аїа цею Рпе Уа1ї Авп бек біп Тук Авр Агу и бів Уаї Авр 815 ! 920 925 (22) 50 Тих Авп Іїе Аїа Меєс І1їе Ніз Азїа Аза Авр ув Аху Уаї Ніз Аку І1е ї-о 930 935 940 ІЧ е) : Аку біз Аїа Тут цей Рко біц Пец бек Уаї І1їе Рко б1іу Уаї! Аяп Аіа 945 950 : 955 960 Аїа І1їе Рре біцш бій Це бій С1іу Акб І16є Рбе ТІ Аїа Тух Зех це Ф) ' 965 970 975 іме) бо б5Тух Авр Аза Аху Авп о Уаї І1їе ув Аєп біу Авр Ріпе Аяп Авп б1у Мей 980 985 990 Тез Сув Тхр Авєп Уа1ї ПцПув сіу Ніз Уаї Авзр Уаї бі бій біп Авп Авп 995 1000 ; 1005 Нів Ако бех УМаї цем Маї Ії1є Рхо біу Ткр 01 Аіа сій уаї Бек сіп 1010 1015 1020 , 2 біц уаї Агу Уаї Суз Рго біу Аху біу Тух І1е цей Аху Маї Тих Аза 1025 | 1030. ' 1035 1040 Тух цуз біц Сіу Тут біу біц сіу Сув Уаії ТІ І1є Нів бі І1е сії 1045 1050 1055АБр АБп Тпх Авр біц Ццеп цув Рпе бЗехг Авп Сув Уаї бі бій 610 Уаї 1060 1065 1070 Тут Рго Авп Авп о ТВІ Уаї Тіх Сув Азп Азп Тух ТВх б1іу ТВх біп бій р 1075 1080 1085 біо Тухг бі біу ТБг Тут Твах Зег Агу Авп обіп біу ТУх Авр б) Аза 1090 1095 1100 Тут біу Азп Ап Рго Бех Маї Рго А1а Авр Тук А1їа Зехк Уаї Тут іш сч 1105 1110 1115 1120 о Сі ув бекх Тут ТІ АБр біу Ако Агу бі Авоп Рко Сув Сі) бех Авп 1125 1130 1135 с ' Аху біу Тут б1у Авр ТУт ТВх Рго Пец Рго Аза біу Тух Ма)! Тпх Гуз Ме 1140 1145 1150 «о Ар Пец бі Тут Ре Рто сіц Тіт АБр цув Уаї Ттр І1е біц І1їе біу ч- 1155 1160 1165 й ою бі Твт бі біу ТБх Ре І1є Уаї Авр Зех Уаї біз Пец це Гей Мес 1170 1175 | 1180 біз бі щ « 1185 -о с або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, що має вказану послідовність з щонайменше однією з таких ч замін: Б Пе в позиції 609 замінено на ГГ еи, Аа в позиції 618 замінено на си, Зег в позиції 620 замінено на Туг, або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, що має амінокислотну о послідовність від амінокислоти 1 до амінокислоти 627 в 5ЕО ІЮО Мо8, яка має наступну послідовність: -І , Мес Авр Азп о АБп о Рго АБПпоОЇ1е Авзп обі Субз ІЗе Рго Тут Авп Суз Те о 1 5 10 15 о 50 й « бег Ап Рко біц Уа1 біц Уаї Пец біу б1у біб Агу І1е бі Тпх біу со І 20 25 30 Тут ТІ Рго І1їе Авр І16 бЗетг цем бех Пец Трх біп Ріпе еп їез 5ег 35 40 45 о "бій Рве Уа! Рго 01у Аїа Сіу Рве Уаї Гец біу цецп уаї Ар І1е І1е о) 50 55 бо бо б5Ттр біу І1їє Рре С1У Рго бех біп Тур Ар Аїа Рре Пец Уаї біп І1е 65 70 75 80 біз біп їз І1е ве Сіп Ахо І11е бі бі Рре А1а Аку Авп біп Аза 90 95 Іїе 5ег Агу еп бі біу цеюш бет Авп це Тут біп Іїе Тут Аїа б1Ш 100 105 110 то бег Рпє Ах бі Тер бі Аїа Азр Рко Тру АБп о Рго Аза цез Агу січ 115 120 125 бі Мес Аго І1е біп РБе АБп АвБр Ме АБп бехг А1іа Меп ТрпІ ТБ А1а 130 135 140 то Ії Рго цей Рре Аза Уаії біп АБ Тут біп уаї Рго це цей Бех Маї 145 150 155 160 Тух Маії біп Аїа Аіїа Ап цею Ніз Цец бек Уаї цец Агу АБр о Маі1і 5ек 165 170 175 70 уаї врре біу біп Аку Ткр біу Рре АБвр Аза Аза ТЬІ І1є Ап бег Акд 180 185 190 Тут А5п А5р Пес ТВх Ат Пеш І1їе біу АБп Тут ТрІ Азр Ні Аза Уаї 195 200 205 с ох о) Атхо Ттгр Тут АБп оті біу цею бій Аку Уаїі Тер б1у Рго АБр 5еї Аг9 2023 215 220 Азр Тхтр І11еє Аку Тут Авзп обіп Рбе Агу Аго біз цез ТпПх Пец ТвтІ Уаї со Ф 225 230 235 240 с Пец Ар І1їе Уа1ї бех Пец Ррбе Рго Авп Тут Авр Бех Аку Тапх Тут Ркго ї- 245 250 | 255 ю І1їе Агу Твх Маї Бех біп Пец Трх Агу біц І)е Тух ТБт АБп о Рго Уа1 260 | 265 . 270 « цем біц АБп Ре Ар біу бег Рре Аку Сіу бег А1їа біп б1у Іїе сіш З с 40 - 275 , 280 285 й біу Бех І1е Аку бех Рхто Нів Пец Мек Авр І1е Пец Авзп Бех Іїе Так "» 290 295 300 Іїе Тут ТІ Азвр Аїа Нів Агу б1іу бі Тух Тух Ттр Бех біу Нів біп сл 305. 310 315 320 і І1їе Мес А1їа бек Рко Уаі біу Рре бех Сіу Рго біц Ріе Тіт Рпе Рго б» 325 330 335 ' ОО теу Тут біу Тпг Мес б1у Абвп А1їа Аїа Рго біп біп Агу І1е Уаї Аїа со 340 345 350 біп це біу біп б1іу Уа1ї Тут Агу ТВх Пец бехт бек Тпт Пец Тут Аг - 355 360 365Агуу Рко Рпе Азп І1їе С1у І1їе Авп Авп біп біп Пец бек Уаії цей АБр о 370 375 380 ко й біу Тпх бі Ре Аїа Тут біу Тиг Бех 5бег Авп Пец Рго Бех Аїа Уаі1 во 385. 390 395 400 Тут Аху Пуз Зек біу Тіх Уаї А5р бЗегт Цей Авр бі І1е Ркго Рго біп 405 410 415 б5 о АБп АБп о АБпоУуаії Рко Ркго Агуд біп б1іу Ре бех Нівз Агу Пец бег Нів 420 425 430 уаї бех Мес Рпе Аг бет біу Рпе бет Авп бег бех УМа1і бех Іїе Іїе 435 . 440 445 Ах А1їа Рто Мес Ре б5еїт Тур І1еє Ні5з Аку бек АДіа Тіх це Тих Авп 450 455 460 0 ТвнІ Ії АБр Рго Сіц Акгу І1їе Авп біп І1е Ргто еп Уаї був біу Ре465. 470 475 480 Ах Уаї Ттр б1у б1У ТВх бетх Уаї І1е Тих біу Рго біу Рре ТіПх бі1у ів 485 490 495 б1і1у АБр І1їе Пец Аку Ак Азп ТІ Ре біу Азр Рре Уа1і бех Печ біп 500 505 510 Уаї Авп І1е Авп бех Рхо І1е ТрБг біп Аку Туг Агу Пец Аг Рве Ахо 515 520 525 Тут А1а Бех бек Агу Абр Аіїа Агуд УМа1ї Іїе уаї це) Тих сіу Азїа Аїа 530 535 540 в бех ТрІ біу Уа1 біу біу ббіп Уаї бек уаї Азп Мес Рго рей біп Гуз см 545 550 555 560 (8) ТВІ Мес біз Іїе біу бій Абзп реп ТІ бех,Ахку Тпх Рре Аку Тут Та х 565 570 575 со дер Рпе бег АБп Рго Рре бег Рре Агу Аїа Ап Рго Авр І1є І1є б1У Ф 580 585 | 590 со І1їе Бех біш біп Рго Пец Рпе біу Аза сіу бек Іїе Бех бех б1у 61 ї- 595 600 605 , ІС о) Бец Тух Іїе АБр Був І1е біз І1е І1є Ццеш Аїа Авр Аїа Тпг Рре бі 610 615 І 620 Аїа біз бек Азвр. Пе» біц Аг Аза біп Був Аза Уаї. Аяп Аза Пейп Ріє - с 0 в25 630 635 640 "» Тпг беїг бех АБп біп І1е б1у цей цув Тпх Авр Уаї Тпх Авр Тут Нів " | 645 650 - 655 5 І1е Авр біп Уаї бех Авп Пец УМаї Авр Сув Пец Бех Авр бійц Ріе Су 5 66о 665 670 і Пец Авр сім цув Аку 01 Пец бек біц Пув Уаї ув Нів Аїа цуб Ахг9д б 675 680 . 685 Фо Бррец бБехг АБр біц Аху Авп Сем цею біп Авр Рго. Авп Рпе АгдФ сіу Іїе со 690 695 700 Азп о Аху біп Рго Азр Аху біу Тер Агу біу бехг Таіхг Авр І1е ТЬх І1еє 705 1710 . 715 720 Ф) Сіп сіу С1у Авр Авр Уа! Рпе Пув бій Авзп о Тух Уа)! Тйхг еп Рго біу т 125 730 735 бо б5ТІ Уаї АБр бі Сув Тут Ркго ТБх Тух Пец Тут біп Пцув І1е Авр бі 740 745 750 Бех цув цем ув А1їа Тут ТЕХ Аку Тут бій Пец Аку біу Тух І1е бій 755 760 765 АБр Бех біп АБр Бей біцш І1їе Тух Пцец І1їе Аку Тут Авп Аза цу Нів 770 775 78010 . бів І1їе Ууаі Азп Маїії Рхо біу Тпх біу бБег Цеи Ттр Рго цец беїг А1їа 785 790 795 во біп бек Рко Іїе с1у цуз Сув біу біз Рхо Авп Аху Сув Аїа Ркго Нів 75 805 810 ' 815 це біш Тр АБп Рго Авр Пец Ар Суб бех Сув Агу Авр б1іу бій Був 820 825 830 Сув Аїа Ніз НіБ бех Ні Нів Рпе ТрІ Пез Авр І1еє Авр Уаї б1Уу Су 835 840 845 ТвтІ Азр Без АбБп о бій АБр це біу Уа1і Тер Уа) Іїе Ріе Гуз Іїе Цуг 850 855 ве с Тку біп Авр біу Нів Аїа Аху Пе біу АБп еп б1іц Рпе Пейп бій бій о 865 870 875 880 цубв Рхо цец реп б1у біш А1а Пец Аїа Аху Уаї цув Аку Аїа бій Буз в85 890 895 со цуз Тер Аку Ар цуз Агу біз Гув реп біп це бій ТвВх Авзп ІЗе Маї о 900 905 910 со Тут Був біш А1а цуБ біц бек Уаї Азр Аїа Ген Рпе Уаї АБп бех біп - 915 920 925 ою Тут АБр Агу еп біп Уаї Авр Тіг АБп Ізе Аїа Меб І1е НіБ Аїа Аїа. 930 935 940 « АБр цу Аг Уаї Ніз Акд І1е Агу бій Аїа Туг цец Ркго біш Пец бег в) с 945 950 955 960 Б Уаї Ії Рко біу Уа1 Абзп Азїа А1їа І1е рРре бі Сіш Пец бі С1у Агд : 965 970 975 й і-й Іїіе Рре Тих А1а Тух бег цеп Тут Азр Аза Ак9 Авп Ма1ї І1є Цув Авп -1 980 985 990 Ф с1у Авр Рпе Азп АБп С1у Пцец цеш Сув Ттр Авп о Уаї Пцув сіу Нів Маї со о 995 1000 1005 со АБр Маї біш Сіц біп Аєп АБпоНів Агу бех Уаї цец уаї І1е Ркго бій 1010 1015 1020 Е (Ф) ко бо б5Ттр біз Аїа б1з Маії бек біп 015 Уаї Аху Уаї Сув Рго біу Акд б1у 1025 1030 1035 1040 Тут І1їе реч Агуд Маї ТБІ Аза Тут цЦув біц біу Тух біу бій 01Уу Су 1045 1050 1055 : Уаї ТІ ї11е Нів бі І1еєе бій Авр Ап Ту Ар обі рез був Рпе бек ю 1060 1065 1070 АБп Сув Маі бій бі бі Уаї Тут Рко Азп Азп Твх Уаі1ї ТБ Субв Ав5п 1075 1080. 1085 18 АБп Тух ТБІі біу Тіх біп б1іш біц Тух бі біу ТвБІ Тух ТбІ 5ег Аг 1090 1095 1100 АБп біп біу Тух АБр біч А1їа Тухк біу Авп Авп Рко бех Уаії Рко А1а 1105 1110 1115 1120 АБр Тут А1а бБегт Ма) Тут бі бі цув бех Тух Тих АБр біу Акг9 Аг9у 1125 1130 1135 біц АБп о Рго Суб біз Бех Авп Аку біу Тут біу Азр Тут Тіт Рго цец 1140 1145 1150 см - о Рго А1а сіу Тут Ма1 ТПх ЦувбБ АБр рез біц Тух Рре Рго біц Трх АБр 1155 1160 1165: з ЩМУв Маї Ттр І1е б1ц І1е б)у бій Ті біш біу ТБх Ре Ізе Уаї АБр. (9 1170 1175 1180 б» бехгт Уа1 бі цей цей цей Месє біц 61 що 1185 1190 м- або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, що має вказану послідовність з щонайменше однією з таких (У замін: Пе в позиції 617 замінено на ГГ еи, Аа в позиції 625 замінено на си, Зег в позиції 627 замінено на Туг, або фрагмент інсектицидного гібридного токсину, який щонайменше на 8590 « подібний до вищезазначеного фрагменту інсектицидного гібридного токсину та який приєднується до тих самих 7-3) с зв'язувальних сайтів рецепторів.4. Рекомбінантна ДНК за п. З, яка відрізняється тим, що містить послідовність від нуклеотиду 71 до ;» нуклеотиду 1860 в ЗЕО ІО Мо 5, яка має наступну послідовність: АТО САС АТА СТО ААТ ААТ САС ААТ САА ТОС СТО ССТ ТАТ ААТ ТоТ ТТА 48 сл Мес січ Іїе Уаї Аве Аяп біп Авп о біп Сув Уаі Рго Тух Авп сув ви 1 10 но 1В. ААТ ААТ ССТ САА ААТ САС АТА ТТА САТ АТТ САД АС ТсСА ААТ АСТ АСТ. 96 (с) Авп оАзпоРго 010 Авп обі І1є цей Авр ІЗе біц Ах Зех Ап оЗех ТОх с Й 20 | 25 30 «со СТА ОСА АСА ААС АТС ОСС ТО САС АТТ АСТ сот сто СТО ОСТ тес ОСА 144 Уаі Аїа ТІ Ап оОЇІ1е6е Аза цей біз І16 бег Ах Іо цес Аза бех Аїа ! 35 40 45 АСТ ССА АТА боб 60 АТТ ТТА ТТА ОСА ТТО ТТТ ОАТ ОСА АТА То 000 1924. Тіт Ркго І1їе б1у 01у І1є Пеш Пес біу Пец Рре Авр Аза І1е Тхр. б1У (Ф, 50 55 ' 60 з ТСТ АТА СОС ССТ ТСА САА ТОб ОАТ ТТА ТТТ ТТА САС САА АТТ САС СТА 240 бехг І1іее біу Рго бег біп Тхр Ажвр Пец Рі Пец біш біп Ії бі Паш: 60 65 70 75 во ТТО АТТ САС САА АЛА АТА САб бАА ТТ ОСТ АСА ААС САС ОСА АТТ ОТСТ 288 їн І1їе Авр б1іп цу Ії біц бі Ре ків Ахо лап бід ліа тре 5ег що б5АСА ТТО САА ббб АТА АбС АСТ СТО ТАС ОСА АТТ ТАТ АСА САА ОСТ ТТ 336 Агу Пем бій б1у І1їе бех бех це Тут с1у І16є Тут Трх бі Аїа Ріе 100 105 110 9 АСА САС ТОб бАА ОСА САТ ССТ АСТ ААТ ССА ОСА ТТА ААА САА САС АТО 384 Аг9у бів Тгр бі Аїа Авр Рго Тах Азп о Рко Аїа це цув бі б) Мес 115 120. 125 ССТ АСТ САА ТТТ ААТ БАС АТО ААС СТ АТтТ Ост СТА АСА ОСТ АТТ ССсТ 432 70 Ахо Тах біб РБе Авп Азр Мес Аєп бех І1еє цец уУаї Твї Азїа І1е Рко ; 130 135 . 140 СтТтТ ТТТ ТСА бТТ САА ААТ ТАТ САЛА СТО ССА ТТТ ТТА ТСА СТА ТАТ ТТ 480 Ге Рпе 5еїт Уаї біп Азп Тух біп Уаї Ркро Ріе цец бег Уаї Тух Уаї 145 150 155 . 160 І15 . САА ОСТ ОСА ААТ ТТА САТ ТТА ТСб СТІ ТТО АСА САТ соТТ ТСА сто ТТ 528 біп А1а Аїа Ап Бе Нібв цеу бех Уаї Пец Аку Авр Уаї бех Маї Рпе 165 170 | 175 ббС САС ост ТС ббА ТТТ САТ АТА СА АСА АТА ДАТ ОАСТ ССТ ТАТ КАТ 576 біу біп А1ї1а Ттр біу Ріе Авр І1е Аїа Торт І16 Азп бех Аху Тут Авп 180 185 190 бАТ СТО АСТ АСА СТТ АТТ ССТ АТА ТАТ АСА САТ ТАТ ОСТ СТА СОС тоб 624 Авр цей Тах Ак рез І1е Рко ІЗе Тух Твх Авр Тут Аіїа Уа1 Ак9у Тхр 195 | 200 205 сч25 . ТАС ААТ АСО ОСА ТТА САТ СОС ТТА ССА СбА АСТ ОСТ боб СТО СбА ЛАС 672 о тут Авп ТпІ біу рес Азр Ах це Рко Ахку Тах біу б1у ем Ах Ап 210 о 2г15 220 що ТС ОСА АСА ТТТ ААТ САС ТТТ АСА АСА САС ТТА АСА АТА ТСА СТА ТТА 720 о Тгр Аза Агу Рпе Авп біп Рпе Аку Агу 01 Пец Тру І16 бЗех Уаї Пец 225 230 235 240 (22) САТ АТТ АТТ ТСТ ТТТ ТТС АСА ААТ ТАС САТ ТСТ АСА ТТА ТАТ ССА АТ 168 ї-о Авр І1їеє І1є бег Рпе Ріе Аху Авзп Тут Авр бек Аху Пец Тут Рко І1є їм- 245 250 25535 . ю ССА АСА АОС ТОС САА ТТА АС СОС САА СТА ТАТ АСА САТ ССО СТА АТТ 816 Рго ТІ бек бек бій Пец ТБх Акгу бійц Маї Тут ТІ Авр Рго Ма1ї Іїе 260 265 270 оч і с ААТ АТА АСТ САС ТАТ АСА СТТ СОС ССС АОС ТТС САС ААТ АТТ САС АС у 864 З А5п о І1е ТІ Авр Тут Аку Уаї біу Рго Зек Ре бій Авп І1еє бій Авп хз (275 280 285 ТСА ССС АТТ АСА АОС ССС САС СТТ АТО САС ОТТО ТТА ААТ ААТ ОТТО АСС 912 бехг Аза І1їе Агу бег Рго Нів це Мес Ар Рпе еп Авп о Авп ей ТОПх о 290 . 295 300.В. АТТ САТ АСС САТ ТТО АТТ АСА СОТ СТТ САС ТАТ ТО ОСА 000 САТ СОТ 960. б Іїе Ар Тах Авр ви І1е Аку біу Уаї Нів Тух Тхр Аїа С1іу Нів Аг9 305 310 315 320 Ге) Ї . І СТА АСТ ТСТ САТ ТТТ АСА ОСТ АСТ ТСТ САА СТО АТА АСА АСС ССТ САА 1008 со Уаї ТнІ Зег Нів РБе Трх О1у Бех бек біп Уа) Ізе Трх Тр Рго біп 325 330 335 ТАТ соб АТА АСС ССА ААТ ССС САА ССА АСА ССА АСТ АТТ ОСТ ССТ АТ 1056 Тух біу І1їе Тих А1їа Ап Аїа б)і0 Ркго Аку Аку Твх І1е Аїа Рхо 5екх іФ) 340 345 , 350 о) | ' АСТ ТТТ ССА ОСТ СТТ ААС СТА ТТТ ТАТ АСА АСА ТТА ТСА ААТ ССТ ТС 1104 Трх Рпе Ркго біу Пец Авп еп Рре Тух Аху Твх еп Зех Авп Рго РБе бо 355 о. 360 365 65«ТС ССА АСА ТСА САА ААТ АТТ АСТ ССТ АСС ТТА бос АТА ААТ СТА СТА 1152... Ре Аку Акгу бек бі Авп о ЇІ1е Тит Рко Трх цец біу І1е Ап Ма1 Уа1ї 370 375 380САС СбА СТА боб ТТС АТТ САА ССА ААТ ААТ ОСТ САА СТІ СТА ТАТ АбА 1200 сіп біу Уаї б1іу Ре Іїе біп Рго Авп Азп'Аза бій Уаї Печй Тут Ах9 385 390 395 400 АСТ АСО СОС АСА СТА САТ ТСТ СТТ ААТ САС ТТА ССА АТТ САТ бО7 бАб 1248 бег Аг б1іу ТБх Уаї Авр Бех цем Азп Сі Пец Рго І1є Ар Сіу бій 405 410 415 ААТ ТСА ТТА СТТ ОСА ТАТ АСТ САТ ССА ТТА АСТ САТ СТТ АСА СТА дес 1296 АБп Зехг це Уаї б1іу Тух бЗехт Нів Агу Пец Бех Нів Маї ТПх ем твЕг 18 420 425 . 430 АСс о ТоС ТТА ТАТО ААТ АСТ ААТ АТА АСТ АСС СТО ССА АСА ТІТ стт тоб 1344 Ат Бех цецп Тухк Азп ТВх Ап о І1 ТрхІ бет Пец Рго ТВх Ре Уа) ТІр 435 440: 445 АСА САТ САС АСТ ОСТ АСТ ААТ АСА ААТ АСА АТТ ААТ ССА САТ АТТ АТТ 1392 720 Тпг Ніз Нів бех Аіа ТЬх Авп Трх АБп о ТпІ Ії Авп Рго Ажр І1е І1е 450 . 455 460 АСА САА АТА ССТОТТА СТО ААА ССА ТТТ АСА сТТ тоб сб бос АСС ТТ 1440 ТвІ біп Іїе Рко еп Уаї цЦув біу Ре Агу Уа1! Тхр 01У 91У Твх бег сч 25 465 470 475 480 (о) СТО АТТ АСА ССА ССА ОСА ТТТ АСА ОСА 00 САТ АТС СТТ ССА АБА ААТ 1488 Ууаї Іїе ТІ біу Рго біу Рпе ТвВх біу біу Азр І1е Пец Аг9 Ак9 Азвп 485 490 495 (ее) 30 АСС ТТТ ССтТ САТ ТТТ СТА ТСТ СТА САА СТО ААТ АТТ ААТ ТСА ССА АТТ 1536 ТвІ Ре сСіу Авр Рпе Уаї бЗехт цец біп Уаї Авп І1е Авп зЗет Рхго Іїе Ф 500 505 510 со АСС САА АСА ТАС ССТ ТТА АСА ТТТ ССТ ТАС ОСТ ТОС АСТ Або САТ ОСА 1584 м тах біп Агу Тут Ахо Пец Агу Рпе Аку Тух Аза Зек бег АхУ Авр Аїа 35 я. . т) 515 520 525 ССА СТТ АТА СТА ТТА АСА ОСА СО ОСА ТОС АСА ОСА СТО бСА Об САА 1632 « 40 Агу Маї Ії Уа! еп ТІ С1іу Аіа А1а Зех ТБтх С1у Уаї біу б1іу біп 2 с 530 535 540 . ;» СТТ АСТ СТА ААТ АТС ССТ СТТ САС ААА АСТ АТО ОЛА АТА СОб САС ААС 1680 Уаї Бех Уаїії Аєп Мес Рхго цез біп цуз Твіт Мес біц І1е сіу біч АБп 545 : 550 555 560 о ТТА АСА ТСТ АСА АСА ТТТ АСА ТАТ АСС САТ ТТТ АСТ ААТ ССТ ТТТ ТСА 1728 - Пец Тьх бек Аку Трт Ре Акуо Тут ТВх Авр Рбе Бех Авп Ро Рпе 5ехг 565 570. 575 (е)) | . ТТТ АСА ССТ ААТ ССА САТ АТА АТТ 000 АТА АСТ ОСАА САА ССТ СТА ТТ 1776 се) Рпе Агу А1а Авп Ркго Авр І16 І1е біу І1їе бех біш Сіп Рго ей Рпе со 580 585 590 ССТ ССА ССТ ТСТ АТТ АСТ АСС ССТ САА СТТ ТАТ АТА САТ ААА АТТ САХ 1824 біу Аїа біу бех І1їе бех бех сбіу бій Пец Тухк Іїе Авр ув І1е 01 | 595 600 605 (Ф) ко 6о 65АТТ АТТ СТА ОСА САТ ОСА АСА ТТТ САА ОСА САА ТСТ САТ. ТТА САА АСА 1872 І1е І1їе Пцеш Аїа Авр Аїа Ту Рпе Сі) Аїа бій бек Авр Це бі Ах 610 615 620 2 ССА САА ААС ОбСОо СТО ААТ ССС СТО ТТ АСТ ТСТ ТОС ААТ САА АТС Об 1920 Аїа біп цув А1їа Уаї Абп Аіїа Пес Рье Тиг бег бех Авп сіп. І1е с1У 625 630 635 640 ТТА АДА АСС САТ СТО АСО САТ ТАТ САТ АТТ САТ САА СТА ТОС ААТ ТА 1968 70 цен цув ТВЕх Авр Уа) Тих Авр Тух Нів Ії Авр бСіп Уаї 5ех Азп еп 645 . 650 655 СТС САТ ТТ ТТА ТСА САТ САА ТТТ ТсОТ СТО САТ САА ААС ССА СА То 2016 Уаї Авр Сув цем Бех Авр бі Рре Сув Пец Авр біц Ццуз Ах бі йем : 660 665 | 670 ТОС бАб ААА СТО ААА САТ бСб ААС СбА СТО АСТ ОАТ САС ССО ААТ ТТА 2064 бег бі цуз Маї1ї Пцуз Нізв Аїа Пцув Ахгу цей бЗех Авр б1ц Агу Авзп о Бем й 675 680 685 СТТ САА САТ ССА ААС ТТ АСА Об0 АТС ААТ АбА САА ССА САС СсстТ СОС 2112 ей біп Авр Рго Авп о Рпе Аху біу Іїе Авп Аху біп Рго Авр Аку біуУу 690 695 700 ТОС АСА ОСА АСТ АСА САТ АТТ АСС АТС САА ОСА ССА САТ САС СТА ТС 2160 Тур Агу бСіу бех Тіх Авзр І1е Тах Іїе біп біу біу Авзвр Авр Уа1ї Рпе 705 70 . 715 720 с но ААА САС ААТ ТАС СТО АСА СТА СОС ОСТ АСС СТТ САТ САС ТОС ТАТ ССА . 2208 і9) Був бій Авп Тух Уа1 ТІ Це Рго біу Ті УМаї Авр бій Сув Тут Рго 725 730 735 зр АСо ТАТ ТТА ТАТ САС ААА АТА САТ САС ТОО ААА ТТА ААА ОСТ ТАТ АСС 2256 со ТНІ Тут Пец Тух біп уз Ії Авр бі бех цЦуз цеч цуз А1їа ТУхХ тих Ге! 740 -745 750 о сст ТАТ САА ТТА АСА Сб ТАТ АТС бАА САТ АСТ САА САС ТТА бАА р: уко 2304 м Аго Тук біц цем Аго біу Тух Іїе бій Авр Зех біп Авр еч 01 І1е 155 760 | 765 ю ТАТ ТТ АТО ССТ ТАС ААТ СА ААА САС САА АТА СТА ААТ СТО ССА оос 2352 Тут Пец Іїе Аху Тут Ап Аіа Пуз Нів бі ІЗїе Уаі А5зпП уаї Рко 91У 770 775 -7во « І з с | і а АСс ост ТоС ТТА тоб СО СТТ ТСА ССС САА АСТ ССА АТС ОСА ААС тот 2400 ,» Тит сіу бек цец Тер Рго це Зехг Аїа біп бек Ркго І1їе Сіу цув Су 785 780 795 | 800 ие ССА САА ССС ААТ СОА ТОС ССО ССА САС ОСТІ САА ТОб ААТ ССТ САТ СТА 2448 -біу біц' Рго Авп о Аку Сув Аза Рхо Нів цец біш Ткр Авп Рго Авр Гей -І 805. 810 815 й (22) САТ ТСТ ТОС ТОС АСА САС обо САА ААА ТОТ ОСА САТ САТ ТОС САТ САТ 2496 со Авр Суз бЗекг Сув Аку Авр біу бій цуз Сув Аїа Нів Нів Бех Нів Нів 820 825 : 830 со ТТО АСо ТІо САТ АТТ САТ СТТ ОСА ТСТ АСА САС ОТТА ААТ САС САС ТТА 2544 Рре ТБх Пе Авр І1е Авр Чаї біу Сув Тіх Ашр цец Ап бій Авр Гей «7 835 840 | 845 ,' . о ССТ СТА ТОб СТО АТА ТТС ААС АТТ ААО АСО САА САТ ОС САТ ОСА АбА 2592 Сіу Уаї Ткр Уаії І1є Рре Цув І1еє Цуз Ту біп Авр б1іу Нів Аїа Аг9 0. о 850 й 855 860 ! во СТА 00 ААТ СТА САС ТТТ СТО САА САС ААА ССА ТТА ТТА 600 САА ОСА 2640 рец сіу Авп Пец Сіш Ре Пец біш бі Ммув Рго Пец пец біу бі А1їа 865 870 875: . 880. 65СТА ОСТ ССТ СТО ААА АСА ССО САС ААС ААС ТО АСА САС ААА ССА САС 2688 їеч Аїа Аку Уаї Був Аку Аза бій Цув цуз Тер Агу Авр о цЦув Аку б1и 885 890 895 9 АДА СТО САС ОТТО САА АСА ААТ АТТ ОСТТ ТАТ ААА САС ССА ААА бАА ТСтТ 2736 цуз цец біп Пец бі ТБт Ап І1їе Ууаї Тух був бій Аіа Гуз бій 5ех , 900 905 , 910 СТА САТ ССТ ТТА ТТТ СТА ААС ОТСТ ОСАД ТАТ САТ АСА ТТА САА СТО САТ 2784 - 70 уаї Авр Аїа цеш Рре Уаї Авп Зех біп Тух Авр Аху еп біп Уаї Авр 915 920 : 925 АСС ААС АТО ССО АТО АТТ САТ ССО ОСА САТ ААА СОС СТТ САТ АСА АТС 2832 Тпх Авп оЇ1є Аїа Мес І1є Нів Аіїа А1їа Авр Пцуєя Аху Уаї Нів Ак9 І1е 930 935 940ССС СА сСо ТАТ СТО ССА бАС ТТО ТСТ СТО АТТ ССА сосТ Сто ААТ осо 2880 Ак біш Аїа Тух це Рго бійц цем бех Уа) І1їе Рго б1у Уа! Авп Аза 945 950. 955 960 2 ССС АТТ ТТС САА САА ТТА САС ОСА ССТ АТТ ТТТ АСА СО ТАТ ТОС ТТА 2928 діа Іїе Рве біц біз цец б1іцш С01Уу Агу Ії Рпе ТПх Аїа Тут бех цеч . 965 г 970 975 ТАТ САТ ССС АСА ААТ СТО АТТ ААА ААТ ОбС САТ ТС ААТ ААТ СОС ТТА 2976 Тут Авр А1а Агу Азп о Уа1ї І16є ув Азп бСіу Авр Рре Аяп Авп С1іу це 980 985 990 сТТА ТОС тоб ААС СТО ААА ОСТ САТ СТА САТ СТА САА САС САЛА ААС ААС 3024 о рецш Сув Тгр Авп Уаї цуз Сіу Нів Уаї Авр Уа1ї б)іш біз бів Ап Авп 995 1000 ' 1005 САС СстТ тоб сто СТТ СТТ АТС ССА САА ТОб САС ОСА САЛА СТО ТСА САЛА 3072 со Ніз Аку бек Уаї Пец Уаї І1е Рхо біц Тгр бії Аза бій Уа1 5ех віп Фу 1010 1015 1020 . . (Се) САС сСтТт СстТ ОТО тот ССА ССТ СОТ СОС ТАТ АТО СТТ ССТ сто АСА ОСА 3120 бі Уаї Агу Уаі Сув Рго Сіу Аку біу Тух І1їе Пец Агу Ма1ї Трх А1а - 1025 1030 1035 1040 ою ТАТ ААА САС ОСА ТАТ БА бАб бос ТоС ТА АС АТС САТ САС АТС САА 3168 « тут цув січ біу Тух біу бі біу Сув Уа) Трх І1е Нів біб І1е б1ч - с 1045 1050 о 1055 2 САС ААТ АСА САС САА СТО АЛА ТТ АОС ААС ТОТОСТА САА САС САА СТА 3216 Авр Авп Тих Азр біз це Пув Рпе Зех Авп Сув Ма! б1и біш біш Ма) 1060 1065 І 1070 с ТАТ ССА ААС ААС АСА СТА АСО ТСТ ААТ ААТ ТАТ АСТ ССО АСТ САА бАА 3264 Тух Рго Азп АвпоТвВІ УМа1ї ТБх Сув Авєп Авп о Тух Твх біу Тпх б1п бі - з ьо75 ; 1080 1085 | ! Ф САА ТАТ САС ОСТ АСО ТАС АСТ ТСТ СОТ ЛАТ САА ОСА ТАТ САС САА ОСС 3312 со 070 біц-Тух біз б1у Тх Тук ТВх бехг Аху Ап бів б1у Тух Авр біз А1а 1090 1095 1100 с Й ТАТ ОСТ ААТ ААС ССТ ТОС СТА ССА ОСТ САТ ТАС ОСТ ТСА СТ ТАТ ПАХ 3360 Тут біу Авп Азп Рко Зек Уаї Рго А1їа Авр Тух А1іа бек Маї Тут 611. ря 1105 1110 1115 1120 о САА ААА ТС ТАТ АСА САТ ОСА ССА АСА САО ЛАТ ССТ ТСТ САА ТСТ ААС ОО. 3408 біз цуз бек Тут Тапг Азр біу Аг9 Агу О10 Азп Ро Сув бій Бех Авп г 1125 1130 1135 60 65АСА СОС ТАТ ССО САТ ТАС АСА ССА СТА сССо ссСтТ ОбтТ ТАТ СТА АСА АС 3456 Ах бСіу Тут біу Аяр Тут ТВх Рко Печ Рко Аїа б)1у Тут Уаї ТВх Гуз 1140 : 1145 ги. , 1150 9 САТ ТТА САС ТАС ТТС ССА САС АСС САТ ААС СТА ТО АТТ САС АТС ОСА 3504 Авр цем бі Тух Рпе Рго біцш Твх Авр Гуз Уа! Ттр 11е б10 І1е 01У 1155 1160 І 1165 САА АСА САЛА ССА АСА ТТС АТС СТО САТ АОС СТО САЛА ТТА СТО СТТ АТО 3552 біц ТвВЕ бі біу Тпхг Ре І1є Уаї Авр бек Уаї біц ви рес Пе Мес то 1170 | 1175 1180 САС САА 3558 515 61» | . 1185 або послідовністю від нуклеотиду 1 до нуклеотиду 1881 в 5ЕО ІО Мо 7, яка має наступну послідовність: АТС САТ ААС ААТ ССО ААС АТС ААТ САА Тос АТІ ССТ ТАТ ААТ ТсСТ ТТА 48 Ме Авр Авп Авп о Рго Авп Ії Авп бі Сув І16 Рго Тук Авп Сув Ге 1 З 10 15 АСТ ДАС ССТ САА СТА САА СТА ТТА ОСТ ОСА САА АСА АТА САА АСТ ОСТ 96 Бетг Авп РІО бів уаї 613 Ууаї реп біу б1у бі Ахо І1їе біс Таг біу ТАС АСС ССА АТС САТ АТТ ТСС ОТТО ТОб СТА АСО САА ТТТ СТТ ОТТО АСТ 144 Тух ТрВх Рто І1е Авр І1е Бех Цеш бех Пец Тнх Сіп Ре Цеч Пец бех с 25 35 40 45 о САА ТТТ СТТ ССС СОТ ОСТ ОСА ТТТ о СТо ТТА ОСА СТА СТТ САТ АТА АТА 192 сі Рре уаї Рко б1у Аіа віу ?Рпе Уаї цей біу цез Уаї Авр І1е І1є 6о0 й (ее) 30 ТОб бОА АТТ ТТТ СОТ ССС ТСТ о САА ТО САС ОСА ТТТ СТТ СТА САА ТТ 240 Тер Ф1у І1е Рпе С1Уу Рхо Бех біп Тур Авр Аза Рре Пец Уаї біп І1е б 65 70 75 во со САА САС ТТА АТТ ААС САА АСА АТА САА САА ТТС сСтТ АС ААС САА ОСС 288 їч- бі біп еп І11е Авп б1п Агу І1е біз біз Рде А1а Акуд Азпобіп А1а 85 90 95 ю АТТ ТСТ АСА ТТА САА ОСА СТА АС ААТ ОСТІ ТАТ САЛА АТТ ТАС ССА СА 336 Іїе Зег Ату цеш бі С1У Цей Зех Аз це) Тут біп І1є Тух Аїа бі х 100 105 110 «40 . ТСТ ТТІТ АбА БАС ТОб САА ОСА САТ ССТ АСТ ААТ ССА ОСА ТТА АСА САА 384 - с ІА "з Бех Рре Аку б1іц Ттгр біз Аза Авр Рго Тпг о АБп Ркго Аіа преш Аку 1 . " 115 | 120 125 САС АТО ССТ АТТ САА ТТС ААТ САС АТО ААС АСТ СС СТТ АСА дес ост 432 о біз Мес Агу І1е біг Рре Авзп Авр Мес Авп бехт А1а Пец ТБІ ТПх Аза 130 135 140 -І б» АТТ ССТ СТТ ТТТ ОСА СТІ САА ААТ ТАТ САА сТТ ССТ СТТ ТТА ТСА СТА 480 Іїієе Рго цей Рбе Аїа Уа1ї біп Авп Тук біп Уві Рко це Пец Бек Уаї1 со 020 145 | 150 155 ! 160 со ТАТ СТТ САА ОСТ ОСА ААТ ТТА САТ ТТА ТСА СТІ ТО АСА САТ СТТ ТсСА 528 Тут Уаї1 біп Аїа А1їа Аяп цей Нів Гей бехт Уаі ей Агу Авр Уа1 бех 165 170 175 Сто ТТТ ОбА САА АС тоб СА ТТТ САТ ОСС ССО АСТ АТС ААТ АСТ СсТ 576 ГФ) Уа1ї ВРпе біу біп Аху Тхр біу Рбе Авр Аїа Аїа ТрхІ І1е Абп бех Аг9 180 185 190 ко 60 65ТАТ ААТ САТ ТТА АСТ Або СТТ АТТ СОС ААС ТАТ АСА САТ САТ ОСТ СТА 624 Тут Авп АБр цем Тіг Аху Пец Іїе б1у Авп Тут ТрІ Авр Нів А1а Уаї 195 200 І 205 2 СОС ТО ТАС ААТ АС ОБА ТТА сло СОТ СТА ТО ОСА ССО САТ ТСТ АбА 672 Агу Тур Тут Авп оТпх біу це січ Ак Уаї Тхтр біу Рго Авр бег Агд 20: 25- 220. САТ ТСб АТА АбА ТАТ ААТ САА ТІТ АбА АСА САА ТТА АСА СТА АСТ ОТА 720 70 Азр Тгр І1е Агу Тук Авп обіп Ре Агу Аху Сіц це Трх рем Твх Маї1 225 230 235 и 240 ТТА САТ АТС СТТ ТСТ СТА ТТТ ССО ААС ТАТ САТ АСТ АСА АСО ТАТ ССА 768 рем Авзр І1їе Уаі1ї бек Ццец Рре Рко Авп Тут Авзр бех Аку Тіх Тук Рко 245 : 250. 255 АТТ ССА АСА СТТ ТОС САА ТТА АСА АСА САА АТТ ТАТ АСА ААС ОССА СТА 816 - І1їе Аху Трт Уаії Бех Сіп цецш Ту Акуд біш Іїе Тух Твт Авп о Рго Уаї 260 265 НИ 270 ТТА САА ААТ ТТТ АТ ОСТ АСТ ТТТ СА СОС тоб ОСТ САС СОС АТА СА 864 Пемп бі Азп Ре Авр біу бек Ре Агу біу бек Аїа біп біу І1е 61 275 280 285 СОА АСТ АТТ АбС АСТ ССА САТ ОТТО АТО САТ АТА СТТ ААСОАСТ АТА АС 912 біу Зег І1їе Аг бех Рго Нів Пец Ме Авр І1е Пец Авп бех І1є Тіх 290 295. 300 с | о АТС ТАТ АСО АТ ОСТ САТ АСА ОбА САА ТАТ ТАТ ТОб ТСА бо САТ САА 960 Іїе тут ТІ Азр Аіїа Ніз Аху б1іу біц Тух Тух Тур бБех б1у Ніз біп 305 310 315 320 АТА АТО ОСТ ТСтТ ССТ СТА обо ТТ тоб боб ССА бАА ТТо АСТ ТТ ССО 1008 со Зо Іїе Мес Аїа 5ег Рго Маї Сіу Рпе Бех біу Рго бій Ре Трт Ре Рко Ф 325 330 335 СТА ТАТ ОСА АСТ АТО ОСА ЛАТ ОСА ОСТ ССА САА САА ССТ АТТ ст ОСТ 1056 ї-о Пец Тут б1у Тпт Мес біу Авп Аіа Аза Рто біп біп Аху І1їеє Уаї Аїа ча 340 345 350 : ю САА СТА ОСТ САС ОСС ОТС ТАТ АСА АСА ТТА ТСО ТОС АСТ ТТА ТАТ АСА 1104 Сіп цец біу біп біу Уаї Тух Агу Тпх Цей бех бех Трх Пец Тут Ах9 355 360 365 « АСА ССТ ТТТ ААТ АТА бо АТА ААТ ААТ САА САА СТА ТСТ СТІ СТІ БАС 1152 Агу Рго Рпе Азп І1е біу Іїе Ап АБп біп біп Іец Зех Уа1ї еп Авр - с а 370 375 зво и"? Н бСС АСА САА ТТТ о ОСТ ТАТ ОСА АСС ТОС ТСА ААТ ОТТО ССА ТОС О ОСТ СТА 1200 75 б1у ТІ біш Ре Аїа Тут с1у ТНг бБег бек Авп цец Рко бех Аіїа Уа1 сл 385 390 395 400 -і ТАС АСА ААА АСС ССА АСО СТА САТ ТОб СТО САТ САА АТА ССО ССА САС 1248 Тут Аху ПцуБ Бек біу Тіт Уа1 Авр бехг Пец Авр біцш І1е Рго Рго б1пМе. - 405 410 415 Й | нш ї-о ААТ ААС ААС СТО ССА ССТ Або САА ОСА ТТТ АСТ САТ СбА ТТА АСС САТ 1296 Ге) Ап оАБзп оАБп Ууаії Рго Рго Аху біп б1іу РБе бЗех Ні Аку Пец Бех Нів 420 425 430 СТТ ТСА АТО ТТТ СОТ ТСА ОСС ТТТ АСТ ААТ АСТ АСТ СТА АСТ АТА АТА 1344 Уаї бехт Мес Рпе Аку бех бСіу Ррбе беїг Авп бек бек Ууаї бег І1е ІЗе. о 435 440 445 , ко 6о 65АСА сСтТ ССТ АТО ТІС ТСТ тоб АТА САТ СОТ АСТ СА АСТ ОСТТ АСА ААТ 1392 Агу Аїа Рхго Мес Рпе Бех Ттр І1їе Нів Аку бек Аїа ТБх Цей ТІ Азп ! 450 455 460 , й АСА АТТ САТ ССА САС АбА АТТ ААТ САА АТА ССТ ОТТА СТО ААА ОбА ТТ 1440 ТвІ І1е Азр Рго біц Аку І1е Аяп бій І16є Рго еп Уаї цув біу Рібе465. 470 475 . 480 АСА стТт тоб боб БОС АСС ТСТ СТО АТТ АСА ОСА ССА ОСА ТТТ АСА СА 1488 77 Агу Маї Ттр біу біу ТІ бЗех Уаї І1е Ту біу Рго біу Рпе Таг 01У 485 490 495 СО САТ АТС СТТ ССА АСА ААТ АСС ТТ ОСТ ОАТ ТТТ СТА ТСТ СТА САА 1536 сіу Аб5р І1еє Пец Аху Аху Ап Тік Ре б1іу Авр Рпе Уаї бех Пец біп /5 й 500 505 510 СТО ААТ АТТ ААТ ТСА ССА АТТ АСС САА АбА ТАС СОТ ТТА АСА ТТТ СОТ 1584 Ууаї Абвп І1е Авп бетг Рко І1еє Тих біп Аку Тух Аку Пе Агу Ре Ах9 515 520 й 525 го ТАС ост Тес АСТ АСС САТ ОСА СА СТТ АТА СТА ТТА АСА СА бСб СА 1632 тут А1їіа бег бек Аху Авр Аіїа Аку Уаії Ії Уаі Пец Тпх біу Аїа Аіїа 530 | 535 540: - ТСС АСА ОСА СТО ОСА СОС САА СТТ АСТ ОТА ААТ АТО ССТ ОСТІ САб ААА 1680 бег Тіх біу Ммаї біу біу біп Маії бех Ууаї Авп Мес Рхо цей біп цу с 545 550 555 560 і о) АСТ АТО САА АТА Об САС ААС ОТТА АСА ТСТ АСА АСА ТТТ АСА ТАТ СС 1728 ТАхІ Мес бі І1їє біу бі. Авп о Гжи Ту о Зет Аху Тпх Рпе Агу Тут тат 565 570 575 . с АТ ТТТ АСТ ААТ ССТ ТТТ ТСА ТТТ АСА ОСТ ААТ ССА САТ АТА АТТ обо 1776 о Авр Рре бег Авп Рго Рпе Бех Ре Аку Аїа Азп оРкго Авр І1е І1е б1У 580 585 590 Ге) АТА АСТ САА САА ССТ СТА ТТТ ОСТ ОСА ССТ ТСТ АТТ АСТ АС ОСТ ОА 1824 - з5 І1е Бех бі бСіп Ркго Пец Рре біу Аза б1іу Бех І1їе Бех Бек 01Уу біц ою 595 600 605 СТТ ТАТ АТА САТ ААА АТТ САА АТТ АТТ СТА ОСА САТ ССА АСА ТТТ САА 1872 цем Тут І1їе Азр ГУБ ІЗ1е бій Іїе Ії Ццецш Аза А5р Аїа Трг Ре бій « 610 615 620 шщ с бСА бАА ТСТ САТ ТТА САА АСА бСА САА ЛА о сСос сто ААТОбСС Сто ТТ 1920 ц діа Сіш бехг Азр еп б1іц Агу Аїа біп Ццув Аїа Ма) Авп Аїа Пеш РБе "» 625 630 635 640 1 -І (22) «со 20 ІЧ е) Ф) іме) 60 65АСТ ТСТ ТСС ААТ САА АТС СОС ТТА ААА АСС САТ Сто АСС САТ ТАТ САТ 1968 Тіт бек Зех Авп біп І1е С1у Пе ПЦує Твтх Авр Уаї Тих Авр Тух Нів 645 650 655 2 АТТ САТ САА СТА ТОСОААТ ТТА СТО САТ ТСТ ТТА ТСА САТ САА ТТТ ТСТ 2016 І1їе Авр біп УМаії бехт Авп цец Уаії Авр Сув Цей бег Авр біц Рре Сув 660 665 6570 СТО САТ бАА ААб о СбА САА ТТ ТОС САС ААА СТО ААА САТ ССО ААС СбА 2064 70 Пец Авр бі Ццув Агу с1ц Пви бек б) Був Уаї цув Нів Аїа Цув Ах 675 680 685 СТО АСТ САТ САС СОб ААТ ТТА СТТ ОСАА САТ ССА ААС ОТТО АСА 006 АТС 2112 Пем бек Авр бі Агу Авп цеи Пец біп Авр Рхо Авп Рапе Ах б1іу Ії11е «690 695 700 , Й ААТ АСА САА ССА САС СОТ СОС тоб АБбА ОбА АСТ АСА САТ АТТ АС АТС 2160 Авп оАку біп Рхо Авр Аку біу Тер Аху біу бег Трх Авр Ії ТОх І1є ' - 705 710 715 720. САА ОСА ОСА САТ САС СТА ТТС ААА САС ААТОТАС СТО АСА СТА СС ост 2208 біп сіу б1у Авр Авр МУМаії Ріе Цувз Суп Авп Тут Ууаї Тих цей Рго біу 725 730 . 735 АСС СТТ САТ БАС ТОС ТАТ ССА АСО ТАТ ТТА ТАТ СА ААА АТА САТ САС 2256 Тих Уаї Ар бі Суб Тух Ркго Тіт Тух Пец Туг біп цув ІЗе Авр сії 740 745 750 с з ТСС ААА ТТА ААА ССТ ТАТ АСС ССТ ТАТ САА ТТА АСА ССО ТАТ АТС САА 2304 о Бех цув цем Ццув Аїа Тух ТЕбх Агу Тух бі Пе Агу біу Тут І1є 61 755 760 765 САТ АСТ САА САС ТТА САА АТС ТАТ ОТТО АТС ССТ ТАС ААТ ССА АЛА САС 2352 (ее) зо Азр Бех біп Азр ей бі І1е Тут Це) І)їе Аку Тух Азп Аїа Пцув Нівє 770 775 | 780 Ф САА АТА СТА ААТ СТО ССА СОС АСО ОСТ ТОС ТТА Тбо ССО СТТ ТСА ОСС 2400 іш бі І1їе Маї Авп Маї Рго біу Тих біу бех Ццец Тур Рго ей бег Аїа ї- 785 790 795 оо 35 ! о САА АТ ССА АТС ООА АЛ ТОТ ОБА САА ССО ДАТ ССА ТОС ОСб ССА САС 2448 біп беї Ркго Іїе б1іу ПцЦув Сув біу бій Рго Авп Агу Суз АТа Рхо Нів 07 805 810: 15 « СТТ САА тоб ААТ ССТ САТ СТА САТ ТСТ ТСС ТОС АБА САС 000 САА АЛА 2496 40 це біб Тгр Авзоп Рго Авр Пец Авр Сузв Бех Сув Аку Авр біу Ми цуз - с що 820 825 830 а ТСТ ОСА САТ САЛО ТОС САТ САТ ТТ АСС ТТ САТ АТТ. САТ СТТ СПА ТТ 2544 «» Суз Аїа Ні Нів Бех Нів Ніз Рре Тіт Пец Авр І1е Азр Уаї б1іу Сув 835 840 845 45 АСА САС ТТА ААТ САС САС ТТА СОТ СТА ТСО СТО АТА ТТ ААС АТТ ААб 2592 1 ТрпІ АБр Пец Азп бі Авр Без біу Уаї Ттр уві ї11є Рпе Пцув І1е Цув 850 "855 86о -І й Ф АСС САА АТ БОС САТ ОСА АбА СТА 050 ААТ СТА САС ТТТ СТО БАХА сАС 2640 Твпг о біп Авр біу Нів Аза Аху цем біу Авп Пец біз Ре ец бі) 01 со о 865 870 875 880 со ААА ССА ТТА ТТА бо бАА ОСА СТА ОСТ СОТ Сто ААА АСА СО САС ААб 2688 цуз Рхо Пем цем сіу біб Аїа Пей Аїа Аху Уаї ув Ах9у Аїа біз ув 885 890 895 АС ОТОО АСА САС ААА ССА САС ААА СТО САС ОТТО САЛА АСА ААТ АТТ СТт 2736(Ф. ко 60 65Був Ттр Агу АБр цЦув Ах біз Цуб цей бід це) б3)із Тву Авп І1є6є Уаї 900 905 910: ТАТ ААА САС ОСА ААА САА ТСТ СТА САТ ОСТ ТТА ТТТ СТА ААСОТСТ САА 2784 Тут цув бій А1їа цув б) бехг Маї Авр Аза реп Рре Уаї Аяп бек біпП 815 920 925 ТАТ САТ АСА ТТА САА СТО САТ АСО ААС АТС ССО АТО АТТ САТ Сб ОСА 2832 Тут АБр Ах Пец біп Уаї АБр ТвВх АБпоЇ1е Аїа Ме І1е НіБ Аїа Аїа 930 й 935 940. -САТ ААА СОС СТТ САТ АБА АТС СОб БАА СО ТАТ СТО ССА САС То ТСТ 2880 Авр цуз Ату Маї Нів Аху І1е Аку бій Аза Тут цец Рхо Сі реч бег 9345 950 955 960 сто АТТ ССА ОСТ СТ ААТ ОСС ОСС АТТ ТС САА САА ТТА САС ОЗА СОТ. 2928 Уа1і1 Іїе Рго біу Маї Авзп Аіїа А1їа Ії Ре бі) бій Пец бі Сіу Ах ' 965 970 975. . АТТ ТТТ АСА СО ТАТ ТОС ТТА ТАТ САТ ССО АСА ААТ СТО АТТ ААА ЛАТ 2976 І1е Рпе ТПх Аїа Тут бек Пец Тух Авр Аза Агу Авп Уаї І1еє ПЦув Авп : 980 985 990 - бОС САТ ТТС ААТ ААТ БОС ТТА ТТА ТОС ТОб ААС СТО АДА СОСТ САТ СТА 3024 біу Авр Ріпе Ап Ап б1у цей Пеп Суз Тер Авп уаії Пув біу Нів Уаї 995 1000 1005. | сч САТ СТА САА САС САА ААС ААС САС СОТ ТСо сто СТТ СТ АТС ССА бАА 3072 о АБр Маїії бі біш біп Або АБ о Нів Аку бех Маї цем Уаї І1еє Рго бі 1010 1015 1020 ТОб САС ОСА САА СТО ТСА САА САС стТт сот сто тот СсСА ост сот бос 3120 Тр біш А1їа бі Уаї бЗег біп біц Уаї Аху Уаї Сув Рго С1у Ак9 сіу со 1025 1030 1035 1040 б ТАТ АТС СтТтІ СОТ СТО АСА ОСА ТАТ АДА САС ССА ТАТ СА баб об ТОс 3168 «со Тух І1їе цем Агу Маї ТОх Аїа Тут Ццув біш біу Тут біу біш біу Сув 1045 1050 1055 м. ОТА АСО АТС САТ САб АТС САА САС ААТ АСА САС САА СТО ААА ТТ АСС 3216 І в) Ма1ї ТВі Іїе Ні бі Іїе бі Авр Ап ТБх Азр біц це цув РБе 5ег 1060 1065 1070 ААС ТОТ СТА бАА САС бАА СТА ТАТ ССА ААС ААС АСА СТА АСС ОТОТ ААТ 3264 « Азп о Сув Ма1ї бі б3іш 016 Уа1ї Тух Рко Авп Абзп о ТБх Маї Тахо СуБ Абп 20 , 1075 1080 "1085 ш-в с ААТ ТАТ АСТ бОб АСТ САА бАА бАА ТАТ САб ОСТ АСС ТАС АСТ о ТСТ СсТ 3312 ч» Азп Тут ТІ біу Тпк біп біш бі Тух бі біу Тих Тут Тах бег Ах9" . 1090 1095 1100 ААТ САА ОбА ТАТ САС САА ОСС ТАТ ОСТ ААТ ААС ССТ ТоС СТА ССА ОСТ 3360 Азп біп біу Тут А5р біч Аїа Тух біу Авп Авп Рго Бех Уаї Рко А1їа і-й 1105 1110 1115 1120 - САТ ТАС ОСТ ТСА СТО ТАТ САА САА ААА ТСС ТАТ ДСА САТ ОСА СОА АСА 3408 б Ар Тут А1а бБег Уа1 ТУт бі бі Муз бех Тут Трх Авр б1у Аг9 Ах9 1125 1130 1135 со САС ААТ о ССТ о ТОТ бАА ТСТ ААС АбА БОС ТАТ СОС САТ ТАС АСА ССА СТА 3456 со бій Ап Рко Сув біц бег Авп Ако біу Тухг С1іу Авр Тух Трх Рго виш 1140 | 1145 1150 соб ост сСТ ТАТ СТА АСА ААС ОСАТ ТТА САС ТАС ТТ ССА бАб АС САТ 3504 Рго Аіа Сіу Тут Маї ТІ Цув АБр Пец біц Тух Рре Рко бі Тпх Авр (Ф) кю 1155 1160 1165 ААсС СТА тоб АТТ САС АТС ОСА ОАА АСА ОАА СА АСА ТС АТС СТО САТ 3552 во цуз УМаї Тгр І1е 610 ІЗе б1у бі Тву бі біу Тру Ре І1е Уаї А5р 1170 1175 1180 х АбС СТО САА ТТА СТО СТТ АТО САС ОДА 3579 Бех Уаї біз цем ек цей Мес б3и 011 1185 ' 1190 655. Рекомбінантна ДНК за пп. З або 4, яка відрізняється тим, що модифікована так, що відомі мРНК-сигнальні послідовності нестабільності або сигнали поліаденілування є вилученими або використовують кодони, що є переважними для організму, в який потрібно вставити рекомбінантну ДНК.6. Мікроорганізм, який відрізняється тим, що трансформований і здатний експресувати ДНК за будь-яким з пп.3-5.7. Рослинна клітина, яка відрізняється тим, що трансформована і здатна експресувати рекомбінантну ДНК за будь-яким з пп.3-5. с щі 6) (ее) (о) (Се) ча ІС в) -с . и? 1 -І (о) Фо ІЧ е) іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB939318207A GB9318207D0 (en) | 1993-09-02 | 1993-09-02 | Improvements in or relating to organic compounds |
| PCT/EP1994/002909 WO1995006730A1 (en) | 1993-09-02 | 1994-09-01 | Hybrid toxin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA57698C2 true UA57698C2 (uk) | 2003-07-15 |
Family
ID=10741404
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA96010346A UA57698C2 (uk) | 1993-09-02 | 1994-01-09 | Фрагмент інсектицидного гібридного токсину bacillus thuringiensis (варіанти), рекомбінантна днк (варіанти), мікроорганізм, рослинна клітина |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5736131A (uk) |
| EP (1) | EP0719335B1 (uk) |
| JP (1) | JPH09502343A (uk) |
| KR (1) | KR100360918B1 (uk) |
| AT (1) | ATE329033T1 (uk) |
| AU (1) | AU691522B2 (uk) |
| BR (1) | BR9407377A (uk) |
| CA (1) | CA2168011C (uk) |
| DE (1) | DE69434758T2 (uk) |
| ES (1) | ES2262136T3 (uk) |
| GB (1) | GB9318207D0 (uk) |
| IL (1) | IL110829A (uk) |
| PL (1) | PL181408B1 (uk) |
| RU (1) | RU2210593C2 (uk) |
| TW (1) | TW430669B (uk) |
| UA (1) | UA57698C2 (uk) |
| WO (1) | WO1995006730A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA946770B (uk) |
Families Citing this family (63)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0413019B1 (en) * | 1989-02-24 | 2001-10-04 | Monsanto Technology LLC | Synthetic plant genes and method for preparation |
| GB9318207D0 (en) | 1993-09-02 | 1993-10-20 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US6780408B1 (en) | 1993-09-02 | 2004-08-24 | Syngenta Participations Ag | Genes encoding hybrid bacillus thuringiensis toxins |
| US5593881A (en) * | 1994-05-06 | 1997-01-14 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis delta-endotoxin |
| US6063756A (en) | 1996-09-24 | 2000-05-16 | Monsanto Company | Bacillus thuringiensis cryET33 and cryET34 compositions and uses therefor |
| CA2272843C (en) * | 1996-11-20 | 2009-11-10 | Ecogen, Inc. | Broad-spectrum delta-endotoxins |
| US6713063B1 (en) | 1996-11-20 | 2004-03-30 | Monsanto Technology, Llc | Broad-spectrum δ-endotoxins |
| US6017534A (en) | 1996-11-20 | 2000-01-25 | Ecogen, Inc. | Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity |
| US5942664A (en) * | 1996-11-27 | 1999-08-24 | Ecogen, Inc. | Bacillus thuringiensis Cry1C compositions toxic to lepidopteran insects and methods for making Cry1C mutants |
| US6121436A (en) * | 1996-12-13 | 2000-09-19 | Monsanto Company | Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi |
| EP1555319A3 (en) * | 1997-10-20 | 2006-03-15 | GTC Biotherapeutics, Inc. | Modified nucleic acid sequences and method to increasing mRNA levels and protein expression in cell systems |
| US6218188B1 (en) | 1997-11-12 | 2001-04-17 | Mycogen Corporation | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins |
| AU774176B2 (en) * | 1997-11-12 | 2004-06-17 | Mycogen Corporation | Plant-optimised genes encoding pesticidal toxins |
| US6121521A (en) * | 1998-04-01 | 2000-09-19 | Novartis Ag | Chimeric insecticidal protein and DNA coding therefor |
| EP1099760A1 (en) * | 1999-11-09 | 2001-05-16 | Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro) | Bacillus thuringiensis Cry1Ia-Cry1Ba hybrid toxins |
| ES2243543T3 (es) * | 2000-08-25 | 2005-12-01 | Syngenta Participations Ag | Hibridos de proteinas cristalinas de bacillus thurigiensis. |
| CA2446215A1 (en) * | 2001-05-04 | 2002-11-14 | North Carolina State University | Polymer conjugates of insecticidal peptides or nucleic acids and methods of use thereof |
| US20030108585A1 (en) * | 2001-05-04 | 2003-06-12 | Roe R. Michael | Polymer conjugates of insecticidal peptides or nucleic acids or insecticides and methods of use thereof |
| US20060009409A1 (en) | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
| WO2003064621A2 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Ambion, Inc. | HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES |
| ATE508188T1 (de) * | 2002-02-01 | 2011-05-15 | Life Technologies Corp | Oligonukleotid-zusammensetzungen mit verbesserter wirksamkeit |
| US7557186B2 (en) * | 2002-03-27 | 2009-07-07 | Council Of Scientific & Industrial Research | Chimeric CrylE δ endotoxin and methods of controlling insects |
| US7053266B2 (en) * | 2002-03-27 | 2006-05-30 | Council Of Scientfic And Industrial Research | Chimeric cry1E δendotoxin and methods of controlling insects |
| US20040029275A1 (en) * | 2002-08-10 | 2004-02-12 | David Brown | Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs |
| US7393922B2 (en) * | 2003-08-29 | 2008-07-01 | The Ohio State University Research Foundation | Insecticidal Cry4Ba proteins with enhanced toxicity |
| CA2771677A1 (en) | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Monsanto Technology Llc | Nucleotide sequences encoding insecticidal proteins |
| CN100510081C (zh) | 2005-10-17 | 2009-07-08 | 华中农业大学 | 苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry7Bal |
| AU2007228981B2 (en) * | 2006-03-21 | 2012-10-04 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Novel genes encoding insecticidal proteins |
| EP2021476B1 (en) | 2006-05-26 | 2014-07-09 | Monsanto Technology, LLC | Corn plant and seed corresponding to transgenic event mon89034 and methods for detection and use thereof |
| US9522937B2 (en) | 2007-03-28 | 2016-12-20 | Syngenta Participations Ag | Insecticidal proteins |
| BRPI0809352B1 (pt) * | 2007-03-28 | 2017-03-28 | Syngenta Participations Ag | proteína inseticida híbrida projetada, molécula de ácido nucleico codificadora da dita proteína,cassete de expressão, vetor recombinante, célula hospedeira transgênica, composição inseticida, métodos de produção da dita proteína e de uma planta transgênica resistente a insetos e método de controle de insetos". |
| WO2008145406A1 (en) * | 2007-06-01 | 2008-12-04 | Bayer Bioscience N.V. | Novel genes encoding insecticidal proteins |
| MX348698B (es) | 2008-12-16 | 2017-06-26 | Syngenta Participations Ag | Evento 5307 del maiz. |
| AU2010221135A1 (en) | 2009-03-05 | 2011-09-29 | Metabolix, Inc. | Propagation of transgenic plants |
| DK2419441T3 (en) | 2009-04-17 | 2015-04-27 | Dow Agrosciences Llc | Insecticidal dig-3-cry toxins |
| BR112012009381A2 (pt) | 2009-10-02 | 2017-03-01 | Syngenta Participations Ag | "proteínas inseticidas" |
| KR20120115316A (ko) * | 2009-12-16 | 2012-10-17 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 밤나방 및 유럽 옥수수 천공충을 방제하기 위한 살곤충성 단백질 조합, 및 곤충 내성 관리 방법 |
| JP5969921B2 (ja) * | 2009-12-16 | 2016-08-17 | ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー | 抵抗性昆虫の対応のためのＣｒｙ１Ｂｅと組み合わせたＣｒｙ１Ｄａの使用 |
| AR079500A1 (es) * | 2009-12-16 | 2012-02-01 | Dow Agrosciences Llc | Uso combinado de proteinas cry1ca y cry1fa para el manejo de la resistencia de insectos |
| WO2011084622A1 (en) * | 2009-12-16 | 2011-07-14 | Dow Agrosciences Llc | Combined use of cry1ca and cry1ab proteins for insect resistance management |
| JP5907892B2 (ja) * | 2009-12-16 | 2016-04-26 | ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー | 抵抗性昆虫の対応のためのＣｒｙ１Ｂｅと組み合わせたＣｒｙ１Ａｂの使用 |
| US20120317682A1 (en) * | 2009-12-16 | 2012-12-13 | Dow Agrosciences Llc | Combined use of vip3ab and cry1fa for management of resistant insects |
| AR079505A1 (es) * | 2009-12-16 | 2012-02-01 | Dow Agrosciences Llc | Uso de cry1da en combinacion con cry1ca para el manejo de insectos resistentes |
| NZ601096A (en) * | 2009-12-16 | 2014-10-31 | Dow Agrosciences Llc | Combined use of cry1da and cry1fa proteins for insect resistance management |
| CA2782554A1 (en) | 2009-12-16 | 2011-07-14 | Dow Agrosciences Llc | Modified cry1ca insecticidal cry proteins |
| CA3049609C (en) * | 2010-02-18 | 2024-02-13 | Athenix Corp. | Axmi221z, axmi222z, axmi223z, axmi224z, and axmi225z delta-endotoxin genes and methods for their use |
| US8735560B1 (en) * | 2010-03-02 | 2014-05-27 | Monsanto Technology Llc | Multiple domain lepidopteran active toxin proteins |
| WO2011133892A1 (en) * | 2010-04-23 | 2011-10-27 | Dow Agrosciences Llc | Combinations including cry34ab/35ab and cry3ba proteins to prevent development of resistance in corn rootworms (diabrotica spp.) |
| US9234208B1 (en) | 2010-05-10 | 2016-01-12 | Dow Agrosciences Llc | DIG-13 insecticidal cry toxins |
| UA111592C2 (uk) * | 2010-07-07 | 2016-05-25 | Сінгента Партісіпейшнс Аг | Спосіб контролю над твердокрилими комахами-шкідниками |
| WO2012083219A1 (en) * | 2010-12-16 | 2012-06-21 | Dow Agrosciences Llc | Combined use of vip3ab and cry1ab for management of resistance insects |
| WO2012131619A1 (en) * | 2011-03-30 | 2012-10-04 | Metahelix Life Sciences Limited | A nucleotide sequence, expression cassette, transgenic events, cells and methods thereof |
| US10119149B2 (en) | 2011-08-05 | 2018-11-06 | Dow Agrosciences Llc | Use of DIG3 insecticidal crystal protein in combination with cry1Ab for management of resistance in european cornborer |
| MX2014001456A (es) * | 2011-08-05 | 2014-02-27 | Dow Agrosciences Llc | Uso de proteina cristalina insecticida dig3 en combinacion con cry1ab. |
| CN103923204B (zh) * | 2014-04-04 | 2016-06-08 | 湖北省生物农药工程研究中心 | 杀南方根结线虫的苏云金芽胞杆菌的活性物质及其应用 |
| SG10201913870RA (en) | 2014-10-16 | 2020-03-30 | Monsanto Technology Llc | Novel chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
| US10487123B2 (en) | 2014-10-16 | 2019-11-26 | Monsanto Technology Llc | Chimeric insecticidal proteins toxic or inhibitory to lepidopteran pests |
| TW201615095A (zh) | 2014-10-31 | 2016-05-01 | 陶氏農業科學公司 | Ｄｉｇ－３０３殺蟲ｃｒｙ毒素 |
| CN114213510A (zh) | 2014-12-30 | 2022-03-22 | 美国陶氏益农公司 | 可用于控制昆虫害虫的修饰的Cry1Ca毒素 |
| CN109952024B (zh) * | 2016-10-10 | 2023-11-03 | 孟山都技术公司 | 新型昆虫抑制蛋白 |
| US11692013B2 (en) | 2016-10-19 | 2023-07-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Broad spectrum insecticidal polypeptide against lepidopteran pests and methods of use thereof |
| CA3037371A1 (en) * | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Broad spectrum insecticidal polypeptide against lepidopteran pests and methods of use thereof |
| CN111465406A (zh) | 2017-12-15 | 2020-07-28 | 先正达参股股份有限公司 | 用于检测靶蛋白的非抗体配体 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1341092C (en) | 1985-12-12 | 2000-09-05 | David L. Edwards | Process for altering the host range of bacillus thuringiensis toxins, and novel toxins produced thereby |
| IT1231157B (it) * | 1989-07-20 | 1991-11-19 | Crc Ricerca Chim | Nuovi geni ibridi funzionali di bacillus thuringiensis ottenuti mediante ricombinazione in vivo. |
| HU220773B1 (hu) * | 1990-01-22 | 2002-05-28 | Dekalb Genetics Corporation | Eljárás termő transzgenikus kukoricanövények előállítására |
| GB9318207D0 (en) | 1993-09-02 | 1993-10-20 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US5593881A (en) * | 1994-05-06 | 1997-01-14 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis delta-endotoxin |
| US5527883A (en) | 1994-05-06 | 1996-06-18 | Mycogen Corporation | Delta-endotoxin expression in pseudomonas fluorescens |
| US5508264A (en) | 1994-12-06 | 1996-04-16 | Mycogen Corporation | Pesticidal compositions |
-
1993
- 1993-09-02 GB GB939318207A patent/GB9318207D0/en active Pending
-
1994
- 1994-01-09 UA UA96010346A patent/UA57698C2/uk unknown
- 1994-08-31 IL IL110829A patent/IL110829A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-01 AU AU76932/94A patent/AU691522B2/en not_active Expired
- 1994-09-01 JP JP7507955A patent/JPH09502343A/ja active Pending
- 1994-09-01 ES ES94927535T patent/ES2262136T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-01 PL PL94313317A patent/PL181408B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-09-01 RU RU96107260/13A patent/RU2210593C2/ru active
- 1994-09-01 WO PCT/EP1994/002909 patent/WO1995006730A1/en active IP Right Grant
- 1994-09-01 US US08/602,737 patent/US5736131A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-01 DE DE69434758T patent/DE69434758T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-01 AT AT94927535T patent/ATE329033T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-09-01 BR BR9407377A patent/BR9407377A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-09-01 EP EP94927535A patent/EP0719335B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-01 CA CA002168011A patent/CA2168011C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-01 KR KR1019960700973A patent/KR100360918B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-09-02 ZA ZA946770A patent/ZA946770B/xx unknown
- 1994-09-06 TW TW083108194A patent/TW430669B/zh not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-12-31 US US09/001,982 patent/US6204246B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL110829A0 (en) | 1994-11-11 |
| PL181408B1 (pl) | 2001-07-31 |
| PL313317A1 (en) | 1996-06-24 |
| DE69434758T2 (de) | 2006-11-09 |
| RU2210593C2 (ru) | 2003-08-20 |
| DE69434758D1 (de) | 2006-07-20 |
| ZA946770B (en) | 1996-03-04 |
| BR9407377A (pt) | 1996-07-16 |
| CA2168011C (en) | 2007-11-06 |
| CA2168011A1 (en) | 1995-03-09 |
| EP0719335A1 (en) | 1996-07-03 |
| EP0719335B1 (en) | 2006-06-07 |
| TW430669B (en) | 2001-04-21 |
| KR100360918B1 (ko) | 2005-01-15 |
| ES2262136T3 (es) | 2006-11-16 |
| GB9318207D0 (en) | 1993-10-20 |
| WO1995006730A1 (en) | 1995-03-09 |
| AU691522B2 (en) | 1998-05-21 |
| US6204246B1 (en) | 2001-03-20 |
| ATE329033T1 (de) | 2006-06-15 |
| IL110829A (en) | 2006-08-20 |
| JPH09502343A (ja) | 1997-03-11 |
| US5736131A (en) | 1998-04-07 |
| AU7693294A (en) | 1995-03-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA57698C2 (uk) | Фрагмент інсектицидного гібридного токсину bacillus thuringiensis (варіанти), рекомбінантна днк (варіанти), мікроорганізм, рослинна клітина | |
| King et al. | The interaction between aspartic acid 237 and lysine 358 in the lactose carrier of Escherichia coli | |
| Li et al. | Control of expression, glycosylation, and secretion of HIV-1 gp120 by homologous and heterologous signal sequences | |
| Sevier et al. | Efficient export of the vesicular stomatitis virus G protein from the endoplasmic reticulum requires a signal in the cytoplasmic tail that includes both tyrosine-based and di-acidic motifs | |
| Zoller et al. | Oligonucleotide-directed mutagenesis: a simple method using two oligonucleotide primers and a single-stranded DNA template | |
| AU656545B2 (en) | DNA expression systems based on alphaviruses | |
| Garrus et al. | Tsg101 and the vacuolar protein sorting pathway are essential for HIV-1 budding | |
| Ohkura et al. | All three variable regions of the TRIM5α B30. 2 domain can contribute to the specificity of retrovirus restriction | |
| Kääriäinen et al. | Functions of alphavirus nonstructural proteins in RNA replication | |
| Braakman et al. | Folding of viral envelope glycoproteins in the endoplasmic reticulum | |
| Thompson et al. | Targeting of the BclA and BclB proteins to the Bacillus anthracis spore surface | |
| Lipp et al. | Structural requirements for membrane assembly of proteins spanning the membrane several times. | |
| JPH05501799A (ja) | 融合タンパク質、その調製及び用途 | |
| CN1378593A (zh) | 构建融合文库的方法和组合物及该文库的用途 | |
| Schweizer et al. | Retention of p63 in an ER-Golgi intermediate compartment depends on the presence of all three of its domains and on its ability to form oligomers. | |
| CN103328649A (zh) | 用于改善重组酶及其它蛋白的蛋白表达和分泌的新的信号序列 | |
| EP0867510A1 (en) | Method of preparing plasmid having both expressing ability of retroviral gene and processing ability after translation, and resultant plasmid and expression products thereof | |
| JP2743164B2 (ja) | Ａｉｄｓの原因ウィルスの糖蛋白質をコードするウィルスベクター及び組換えｄｎａ、該ベクターにより感染された細胞培養物、並びに抗体 | |
| JPH0376580A (ja) | 大腸菌発現ベクターとそれを利用した抗ウイルス性タンパク質の製造方法 | |
| US6770283B1 (en) | DNA expression systems based on alphaviruses | |
| Zhang et al. | Correct insertion of a simple eukaryotic plasma-membrane protein into the cytoplasmic membrane of Escherichia coli | |
| Smith et al. | Oligohistidine tag mutagenesis of the λ holin gene | |
| Zhang et al. | Analysis of genes encoding the cell division protein FtsZ and a glutathione synthetase homologue in the cyanobacterium Anabaena sp. PCC 7120 | |
| BRPI9610977A2 (pt) | agonistas receptores hematopoiéticos multi-funcionais | |
| Ubbink et al. | Cloning, sequencing and expression studies of the genes encoding amicyanin and the β‐subunit of methylamine dehydrogenase from Thiobacillus versutus |