PL132246B1

PL132246B1 - Process for preparing phosphatidylcholine of high purity

Info

Publication number: PL132246B1
Application number: PL1981234217A
Authority: PL
Original assignee: Nattermann A & Cie
Priority date: 1980-12-13
Filing date: 1981-12-12
Publication date: 1985-02-28
Also published as: DK551081A; GR76944B; ES8207187A1; FI68160B; EP0054770A3; DK155490C; EP0054770A2; DK155490B; IE51980B1; FI813930L; FI68160C; JPH0244316B2; IE812831L; US4425276A; JPS57123194A; PL234217A1; BR8108065A; ATE12451T1; EP0054770B1; HU195826B

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywa¬ nia fosfatydylocholiny o wysokim stopniu czystosci z zawierajacych olej i/lub fosfatydyloetanoloamine, rozpuszczalnych w alkoholu surowych produktów fosfatydylocholinowych na1 drodze chromatografii adsorpcyjnej, tzn. przez oddzielenie na tej drodze oleju i/lub fosfatydyloetanoloaminy.Roslinne fosfatydy surowe, otrzymywane pod¬ czas wytwarzania oleju jadalnego, zawieraja obok fosfatydylocholiny równiez fosfatydyloetanoloaminy i mono-, dwu- i trójglicerydy (olej) oraz fosfatydy- loinozyt i inne fosfory zawierajace estry gliceryny i substancje, takie jak peptydy, aminokwasy, ste¬ role, estry steroli, wolne kwasy tluszczowe i pocho¬ dne weglowodanowe. Dla zastosowania w przemysle farmaceutycznym potrzeba fosfatydylocholiny o wy¬ sokim stopniu czystosci uwolnionej zwlaszcza od oleju i od fosfatydyloaminy.Opisano juz liczne sposoby oddzielania zawartych w surowym fosfatydzie substancji towarzyszacych.Z reguly odoleja sie roslinny surowy fosfatyd w pierwszym etapie w acetonie (wylozeniowy opis Re¬ publiki Federalnej Niemiec DE-AS nr 1053299, opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 3268335, wylozeniowy opis Republiki Federalnej Niemiec DE-AS nr 1047597) i nastepnie w drugim etapie ekstrahuje etanolem (opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 2724649). W trze¬ cim etapie frakcje fosfatydu rozpuszczalna w eta¬ nolu poddaje sie chromatografii kolumnowej w tem¬ peraturze nie przewyzszajacej 35°C (opis patentowy 30 St. Zjedn. Am. nr 3031478). Sposób ten przewiduje odolejanie surowego fosfatydu acetonem, ekstrak¬ cje odolejonego fosfatydu surowego etanolem i po¬ zostawienie tego ekstraktu w ciagu kilku dni. Uni¬ kano przewyzszania temperatury 35°C, poniewaz panowal poglad, ze w temperaturze powyzej 35°C zachodzi rozklad fosfatydylocholiny. W przypadku acetonowego odolejania tworza sie w malych ilos¬ ciach produkty nastepcze acetonu, takie jak tlenek mezytylu, alkohol dwuacetonowy, foron i inne. Usu¬ wanie tych toksycznych i z powodu charakterys¬ tycznego zapachu wlasnego przeszkadzajaco dziala¬ jacych substancji wymaga bardzo wysokich nakla¬ dów, a niekiedy nawet nie jest mozliwe. Poza tym acetonowe odolejanie jest zwiazane ze wzrostem ilosci nadtlenków, których niekorzystne oddzialy¬ wania fizjologiczne sa znane.Alkoholowa ekstrakcja roslinnych fosfatydów su¬ rowych prowadzi do zawierajacej olej frakcji fos¬ fatydu (ogloszeniowy opis Republiki Federalnej Niemiec DE-OS nr 2718797, opis patentowy Repu¬ bliki Federalnej Niemiec DE-PS nr 1492952, wylo¬ zeniowy opis Republiki Federalnej Niemiec DE-AS nr 1692568), z której po chromatograficznej obróbce w temperaturze pokojowej mozna otrzymac zawie¬ rajaca olej fosfatydylocholine uwolniona od fosfa¬ tydyloetanoloaminy. W próbach wlasnych stwier¬ dzono, ze udaje sie wydzielanie oleju droga dodania malych ilosci wody i otrzymywanie bezolejowej fosfatydylocholiny o wysokim stopniu czystosci. 132 2463 132 246 4 Lacznie jednak to wodne odolejenie, dobrze nada¬ jace sie do wytwarzania okreslonych frakcji i fos¬ fatydu., stanowi w przypadku uzyskiwania bezole- jovleA ^fj^$;j^o«lieJi\y proces trzyetapowy (eks¬ trakcja, chromatografii, odolejanie), który dodatko¬ wej zwiazany jest z (Jbróbka wodnych roztworów etanatowjfeltrl j*.. f; j Ofrz^riferiflg' Tifcystej |fosfatydylocholiny jest uwa¬ runkowane chromatograficznym oddzieleniem sub¬ stancji towarzyszacych, zawartych w rozpuszczal¬ nej w etanolu frakcji fosfatydu. Jako adsorbent sto¬ suje sie zasadniczo tlenek glinowy. Oczyszczanie nastepuje zarówno na drodze chromatografii kolum¬ nowej jak i na drodze mieszania ze srodkiem roz¬ dzielajacym, kazdorazowo w temperaturze pokojo¬ wej.W skali technicznej stosuje sie zasadowy tlenek glinowy. Takze tu chromatografie zawsze prowadzi sie w temperaturze pokojowej. Poniewaz tlenek gli¬ nowy po tej chromatografii jest obciazony zanie¬ czyszczeniami, zwlaszcza fosfatydyloetanoloamina, to trzeba go odrzucac. Dalsza niedogodnosc tkwi w tworzeniu lizofosfatydylocholiny podczas tej chro¬ matografii [O. Renkonen, J. Lipid. Res. 3, 181-3 (1962), D. Van Damme i wspólpracownicy, Int. Symp. Chro- matogr. Elektrophoresis, 5 th, 1968 (Pub. 1969), 268— —78].Chromatografii na zelu krzemionkowym przypi¬ sywano dotychczas tylko znaczenie analityczne i preparacyjne. I tak fosfatydy w heksanowych roz¬ tworach nie adsorbuja sie na zelu krzemionkowym (japonski opis patentowy nr 77012202, opis patento¬ wy St. Zjedn. Am. nr 3869482), natomiast fosfatydy w roztworach alkoholowych zatrzymuja sie na zelu krzemionkowym [H. Richter i wspólpracownicy, Pharmazie, 1977, 32 (3), 164]. To rozmaite zachowanie nalezy wyjasniac tworzeniem lipofilowych, wielo- czasteczkowych micel fosfatydu w heksanie w po¬ równaniu z wystepujacymi w postaci czasteczkowej fosfatydami w alkoholu. Chromatografie te równiez i tu prowadzi sie w temperaturze pokojowej. Roz¬ dzielanie i selektywna desorpcja fosfatydów w przy¬ padku stosowania alkoholowych roztworów fosfaty¬ du nastepuje albo za pomoca ukladu alkohol/amo¬ niak (japonski opis patentowy JA 49093400) albo za pomoca mieszanin chloroformu z metanolem [C. H.Lea i wspólpracownicy, Biochem. J. 60, 353—63 (1965)] lub mieszanin chloroform/metanol/woda (opis paten¬ towy Niemieckiej Republiki Demokratycznej DD-PS nr 79916). Ta droga postepowania nie miala dotych¬ czas zadnego znaczenia, poniewaz jako eluent zaw¬ sze stosowano mieszanine substancji toksycznych, takich jak amoniak lub chloroform, których odzys¬ kanie i usuniecie z lecytyny jest bardzo naklado- chlonne.Dostepne w handlu surowe produkty fosfatydy- locholinowe, zwlaszcza z fosfatydów sojowych, sta¬ nowia produkty otrzymane droga ekstrakcji alkoho¬ lem, które sa rozpuszczalne w alkoholu oraz zawie¬ raja olej i fosfatydyloetanoloamine jako glówne za¬ nieczyszczenie. Sa jednakze tez takie surowe pro¬ dukty fosfatydylocholinowe, które, jak juz wspom¬ niano, zawieraja jeszcze tylko jeden z dwóch glów¬ nych zanieczyszczen.Celem niniejszego wynalazku jest opracowanie sposobu otrzymywania fosfatydylocholiny o wyso¬ kim stopniu czystosci droga oddzielania oleju i/lub fosfatydyloetanoloaminy, ewentualnie zawartych w fosfatydylocholinowych produktach rozpuszczal¬ nych w alkoholu. Z wszystkimi dotychczas opisany¬ mi sposobami wiaze sie ta niedogodnosc, ze dla uzy¬ skania czystego, uwolnionego od oleju i od fosfaty¬ dyloetanoloaminy produktu wymagaja one uciazli¬ wych etapów postepowania, przy czym nalezy li¬ czyc sie z tworzeniem lub pozostaniem produktów toksycznych. Tlenek glinowy, stosowany podczas chromatograficznego oczyszczania, musialby nadto byc odrzucony.Stwierdzono nieoczekiwanie, ze z rozpuszczalnych w alkoholu frakcji fosfatydowych, zawierajacych olej i/lub fosfatydyloetanoloamine, za pomoca chro¬ matografii kolumnowej na zelu krzemionkowym w wysokiej temperaturze otrzymuje sie bezolejowa fosfatydylocholine o wysokim stopniu czystosci, uwolniona od fosfatydyloetanoloaminy.Sposób otrzymywania fosfatydylocholiny o wyso¬ kim stopniu czystosci z zawierajacych olej i/lub fo¬ sfatydyloetanoloamine, rozpuszczalnych w alkoholu, surowych produktów fosfatydylocholinowych na drodze chromatografii odsorpcyjnej polega wedlug wynalazku na tym, ze roztwór, zawierajacego olej i/lub fosfatydyloetanoloamine i w alkoholu rozpusz¬ czalnego, produktu fosfatydylocholinowego w niz¬ szym alkanolu o 1—4 atomach wegla lub w miesza¬ ninie kilku nizszych alkanoli o 1—4 atomach wegla, ewentualnie zmieszanym lub zmieszanej z co najwy¬ zej 20% objetosciowymi wody, wprowadza sie w temperaturze 60—90°C na kolumne z zelem krzemionkowym, w tej temperaturze kolumne te eluuje sie za pomoca nizszego alkanolu o 1—4 atomach wegla, ewentualnie zawierajacego co naj¬ wyzej 20% objetosciowych wody, lub za pomoca ta¬ kiej mieszaniny kilku nizszych alkanoli o 1—4 ato¬ mach wegla i oddziela sie przy tym wstepny odciek, zawierajacy oddzielane olej i/lub fosfatydyloetano¬ loamine, po czym kontynuuje sie eluowanie i zbiera sie uwolniony od oleju i/lub fosfatydyloetanoloa¬ miny eluat, zawierajacy czysta fosfatydylocholine, a z tego eluatu na znanej drodze oddziela sie roz¬ puszczalnik.Wprowadzanie roztworu na kolumne z zelem krzemionkowym i jej eluowanie prowadzi sie w temperaturze 60—90°C, korzystnie w temperatu¬ rze 60—70°C. Jako eluent wprowadza sie stosowany rozpuszczalnik, co szczególnie upraszcza postepowa¬ nie. Jako nizszy alkanol o 1—4 atomach wegla sto¬ suje sie korzystnie etanol.Ilosc wstepnego odcieku zalezy od wprowadzone¬ go produktu fosfatydylocholinowego. Droga latwych metod analitycznych mozna ustalic, od którego mo¬ mentu eluat jest wolny od oddzielanych substancji towarzyszacych i praktycznie zawiera tylko fosfa¬ tydylocholine. Zgodnie z doswiadczeniem wstepny odciek stanowi okolo 20—25% calkowitej objetosci eluatu. W odcieku wstepnym, w zaleznosci od za¬ stosowanego produktu fosfatydylocholinowego, znaj¬ duja sie takze inne, zwykle obecne substancje to¬ warzyszace, takie jak sterole, pochodne steroli, gli¬ kolipidy i fosfolipidy, które mozna doprowadzac do dalszego stosowania. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60132 246 Jako zel krzemionkowy mozna stosowac trady¬ cyjne produkty o rozmaitym uziarnieniu do celów chromatografii albo tez prasowany zel krzemionko¬ wy, ewentualnie zaktywowany lub dezaktywowany.Korzystnie stosuje sie obojetne produkty z zelu 5 krzemionkowego.Sposób wedlug wynalazku mozna przeprowadzac pod cisnieniem normalnym lub tez pod cisnieniem zwiekszonym. Zupelnie szczególna zaleta sposobu wedlug wynalazku polega na tym, ze zel krzemion- 10 kowy po przeprowadzonej chromatografii mozna stosowac ponownie. Wszystkie zanieczyszczenia zo¬ staja wychwycone we wstepnym odcieku; po zebra¬ niu eluatu glównego zel pozostaje obciazony tylko nieznaczna iloscia szczatkowa fosfatydylocholiny. 15 Dalsza zaleta zelu krzemionkowego tkwi w bar¬ dzo wysokiej obciazalnosci tego srodka sorpcyjnego.I tak w kolumnowym rozdzielaniu chromatogra¬ ficznym za pomoca 100 czesci zelu krzemionkowego oddziela sie okolo 60 czesci substancji stalej z roz- 20 puszczalnej w alkoholu frakcji i fosfatydu.Jako produkty fosfatydylocholinowe mozna sto¬ sowac produkty otrzymane droga ekstrakcji i za pomoca alkoholu z np. soi, orzechów ziemnych, slo¬ necznika lub rzepaku. Fosfatyd ten rozpuszcza sie 25 za pomoca nizszych alkoholi alifatycznych, takich jak metanol, etanol, n-propanol lub izopropanol, a zwlaszcza za pomoca 94—96% objetosciowego etanolu. Roztwór ten uwalnia sie od osadu, a kla¬ rowna warstwe alkoholowa, taka lub w postaci kon- 30 centratu, doprowadza sie do sposobu wedlug wyna¬ lazku. Rozpuszczalnik, stosowany podczas ekstrak¬ cji, mozna usunac calkowicie, a otrzymany produkt mozna ponownie rozpuscic w jednym lub kilku, ewentualnie co najwyzej 20% objetosciowych wody 35 zawierajacym nizszym alkanolu o 1—4 atomach we¬ gla.Otrzymywanie czystej fosfatydylocholiny z za¬ równo olej jak i fosfatydyloetanoloamine zawiera¬ jacych surowych produktów fosfatydylocholinowych 40 upraszcza sie w porównaniu ze znanymi sposobami zwlaszcza dzieki zlaczeniu w sposobie etapów od- olejenia i oczyszczania. Dalsza zaleta, która wyste¬ puje równiez w przypadku stosowania takich pro¬ duktów fosfatydylocholinowych, z których juz na 45 innej drodze oddzielono jedna z dwóch substancji towarzyszacych, jest ponowne stosowanie zelu krze¬ mionkowego.Przyklady.Metody analityczne. Fosfatydy ana¬ lizowano na drodze chromatografii cienkowarstwo- 50 wej. Zawartosc oleju porównywano z zawartoscia dajaca sie dializowac. Wode oznaczano metoda Karl'a Fischer'a, a resztkowa zawartosc etanolu okreslono droga chromatografii gazowej.Chromatografia kolumnowa. Stosowano kolumne 55 chromatograficzna o pdwójnym plaszczu (wewnetrz¬ na srednica 4,5 cm, wysokosc 37 cm). Przed kolum¬ na wlaczono wymiennik ciepla w celu zapewnienia jednakowej temperatury zasilania i temperatury kolumny. Kolumne napelniono zawiesina 200 g zelu 60 krzemionkowego (firmy Merck) w kazdorazowo po¬ danym rozpuszczalniku. Po zakonczonej chromato¬ grafii mozna zel krzemionkowy wykorzystac ponow¬ nie.Substrat. Surowy fosfatyd sojowy ekstrahuje sie 85 w temperaturze 35°C za pomoca 95% objetoscio¬ wo etanolu w stosunku wagowym 1:2, 5 (su¬ rowy fosfatyd: etanol). Osad oddziela sie w tempe¬ raturze pokojowej od nad nim polozonej warstwy etanolowej. Warstwe etanolowa odparowuje sie.Przy tym otrzymana substancja stala ma nastepu¬ jacy sklad: fosfatydylocholina (PC): 43% fosfatydyloetanoloamina (PE): 12% olej: 21% Te substancje stala, zanieczyszczona olejem i fos¬ fatydyloetanoloamina, stosowano w przykladach I—IV. Stosowana w przykladzie V substancje stala, odolejona lecz zanieczyszczona przez fosfatydylo¬ etanoloamine, wytworzono w sposób omówiony ni¬ zej.Z surowego fosfatydu sojowego oddziela sie olej acetonem i nastepnie odolejony fosfatyd ekstrahuje sie za pomoca 95% objetosciowo etanolu. Rozpusz¬ czalna w etanolu frakcje fosfatydowa odparowuje sie i poddaje analizie: zawartosc PC: 52% zawartosc PE: 20% Stosowana, w przykladzie VI substancje fosfaty- dylocholinowa, zawierajaca olej lecz uwolniona od fosfatydyloetanoloaminy, wytworzono odpowiednio do ogloszeniowego opisu Republiki Federalnej Nie¬ miec DE-OS nr 2718797 (przyklad 3): zawartosc PC: 68% zawartosc oleju: 28% Stosowanie w przykladach V i VI. substratów fosfatydylocholinowych, zanieczyszczonych albo tyl¬ ko olejem albo tylko fosfatydyloetanoloamina, swiadczy o mozUwosci wykorzystania w sposobie wedlug wynalazku surowych produktów fosfatydo- wych z róznych zródel pochodzenia.Przyklad I. Chromatografie kolumnowa pro¬ wadzi sie w temperaturze podwyzszonej: zasilanie kolumny: 118g substancji stalej w 275 g 95% objetosciowo eta¬ nolu, 95% objetosciowo etanol dla 4 litrów eluatu, 70°C odcieku wstepnego odbiera sie lacznie 3 litry odcieku glównego. Odciek glówny odparowuje sie i poddaje analizie, wydajnosc substancji 34% wydajnosci teoretycz¬ nej 92% < 1% < 1% eluent: temperatura kolumny: Po zebraniu 1 litra stalej: zawartosc PC zawartosc PE zawartosc oleju: wydajnosc PC w odnie sieniu do substancji stalej substratu: Przyklad II.Zasilanie kolumny: 72% wydajnosci teoretycz¬ nej. 118 g substancji stalej w 1280 g 95% objetosciowo etanolu, eluent: 95% objetosciowo etanol ¦ * . ¦ ¦ dla 4 litrów eluatu, temperatura kolumny: 65°C Po zebraniu 2 litrów odcieku wstepnego odbiera132 246 sie lacznie 2 litry odcieku glównego. Odciek glówny odparowuje sie i poddaje analizie. wydajnosc substancji stalej: 22% wydajnosci teoretycz¬ nej 90% <1% <1% zawartosc PC: zawartosc PE: zawartosc oleju: wydajnosc PC w odnie sieniu do substancji stalej substratu: Przyklad III.Zasilanie kolumny: 46% wydajnosci teoretycz¬ nej eluent: temperatura kolumny: 118 g substancji stalej w 29 g 95% objetosciowo etanolu, 95% objetosciowo etanol dla 4 litrów eluatu, 65°C Po zebraniu 0,5 litra odcieku wstepnego odbiera sie lacznie 3,5 litra odcieku glównego. Odciek glów¬ ny odparowuje sie i poddaje analizie: wydajnosc substancji 33% wydajnosci teoretycz¬ nej 87% <1% <1% stalej: zawartosc PC: zawartosc PE: zawartosc oleju: wydajnosc PC w odnie sieniu do substancji stalej substratu: Przyklad IV.Zasilanie kolumny: eluent: 77% wydajnosci teoretycz¬ nej 118 g substancji stalej w 50 g n-propanolu n-propanol dla pierwszego eluatu (1 litr), nastepnie 85% objetosciowo wodny roztwór n-propanolu dla 3 litrów eluatu, temperatura kolumny: 90°C Po zebraniu 1 litra wstepnego odcieku odbiera sie lacznie 3 litry odcieku glównego (w 85% objetos¬ ciowo n-propanolu). Odciek glówny odparowuje sie i poddaje analizie: wydajnosc substancji stalej: zawartosc PC: zawartosc PE: zawartosc oleju: wydajnosc PC w odnie¬ sieniu do substancji stalej substratu: Przyklad V.Zasilanie kolumny: eluent: temperatura kolumny: 45% wydajnosci teoretycz¬ nej 86% <1% <1% 90% wydajnosci teoretycz¬ nej 110 g substancji stalej (w etanolu rozpuszczalnej frakcji z odolejonego suro¬ wego fosfatydu sojowego) w 40 g 95% objetosciowo etanolu, 95% objetosciowo etanol dla 4 litrów eluatu, 65°C 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8 Po zebraniu 1 litra odcieku wstepnego odbiera sie 3 litry odcieku glównego. Odciek glówny odparo¬ wuje sie i poddaje analizie: wydajnosc substancji stalej: zawartosc PC: zawartosc PE: zawartosc oleju: wydajnosc PC w odnie¬ sieniu do substancji stalej substratu: Przyklad VI.Zasilanie kolumny: 43% wydajnosci teoretycz¬ nej 92% <1% <1% 60% wydajnosci teoretycz¬ nej 80 g substancji stalej (wy¬ tworzonej wedlug DE-OS nr 2718797, przyklad 3) w 30 g 95% objetosciowo etanolu, eluent: 95% objetosciowo etanol dla 4 litrów eluatu, temperatura kolumny: 65°C.Po zebraniu 1 litra odcieku wstepnego odbiera sie 3 litry odcieku glównego (odciek pozostaly). Odciek glówny odparowuje sie i poddaje analizie: wydajnosc substancji stalej: 44% wydajnosci teoretycz¬ nej 93% <1% zawartosc PC: zawartosc oleju: wydajnosc PC w odnie¬ sieniu do substancji stalej substratu: 75 % wydajnosci teoretycz¬ nej.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymywania fosfatydylocholiny o wy¬ sokim stopniu czystosci z zawierajacych olej i/lub fosfatydyloetanoloamine, rozpuszczalnych w alko¬ holu, surowych produktów fosfatydylocholinowych na drodze chromatografii adsorpcyjnej, znamienny tym, ze roztwór, zawierajacego olej i/lub fosfatydy¬ loetanoloamine i w alkoholu rozpuszczalnego pro¬ duktu fosfatydylocholinowego w nizszym alkanolu o 1—4 atomach wegla lub w mieszaninie kilku niz¬ szych alkanoli o 1—4 atomach wegla, ewentualnie zmieszanym lub zmieszanej z co najwyzej 20% obje¬ tosciowymi wody, wprowadza sie w temperaturze 80—90°C na kolumne z zelem krzemionkowym, w tej temperaturze kolumne te eluuje sie za pomo¬ ca nizszego alkanolu o 1—4 atomach wegla, ewen¬ tualnie zawierajacego co najwyzej 20% objetoscio¬ wych wody, lub za pomoca takiej mieszaniny kilku nizszych alkanoli o 1—4 atomach wegla i oddziela sie przy tym wstepny odciek, zawierajacy oddzie¬ lane olej i/lub fosfatydyloetanoloamine, po czym kontynuuje sie eluowanie i zbiera sie uwolniony od oleju i/lub fosfatydyloetanoloaminy eluat zawiera¬ jacy czysta fosfatydylocholine, a z tego eluatu na znanej drodze oddziela sie rozpuszczalnik. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze roztwór oczyszczonego produktu fosfatydylocholi-132 246 9 10 nowego wprowadza sie na kolumne z zelem krze¬ mionkowym w temperaturze 60—70°C i w tej tem¬ peraturze prowadzi sie jej eluowanie. 3. Sposób wedlug zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, ze stosuje sie taki sam rozpuszczalnik do rozpusz¬ czania oczyszczanego produktu fosfatydylocholino- wego i do eluowania. 4. Sposób wedlug zastrz. 1 albo 2 albo 3, znamien¬ ny tym, ze jako nizszy alkanol o 1—4 atomach we¬ gla stosuje sie etanol. 5 PL

Claims

Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymywania fosfatydylocholiny o wy¬ sokim stopniu czystosci z zawierajacych olej i/lub fosfatydyloetanoloamine, rozpuszczalnych w alko¬ holu, surowych produktów fosfatydylocholinowych na drodze chromatografii adsorpcyjnej, znamienny tym, ze roztwór, zawierajacego olej i/lub fosfatydy¬ loetanoloamine i w alkoholu rozpuszczalnego pro¬ duktu fosfatydylocholinowego w nizszym alkanolu o 1—4 atomach wegla lub w mieszaninie kilku niz¬ szych alkanoli o 1—4 atomach wegla, ewentualnie zmieszanym lub zmieszanej z co najwyzej 20% obje¬ tosciowymi wody, wprowadza sie w temperaturze 80—90°C na kolumne z zelem krzemionkowym, w tej temperaturze kolumne te eluuje sie za pomo¬ ca nizszego alkanolu o 1—4 atomach wegla, ewen¬ tualnie zawierajacego co najwyzej 20% objetoscio¬ wych wody, lub za pomoca takiej mieszaniny kilku nizszych alkanoli o 1—4 atomach wegla i oddziela sie przy tym wstepny odciek, zawierajacy oddzie¬ lane olej i/lub fosfatydyloetanoloamine, po czym kontynuuje sie eluowanie i zbiera sie uwolniony od oleju i/lub fosfatydyloetanoloaminy eluat zawiera¬ jacy czysta fosfatydylocholine, a z tego eluatu na znanej drodze oddziela sie rozpuszczalnik.
2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze roztwór oczyszczonego produktu fosfatydylocholi-132 246 9 10 nowego wprowadza sie na kolumne z zelem krze¬ mionkowym w temperaturze 60—70°C i w tej tem¬ peraturze prowadzi sie jej eluowanie.
3. Sposób wedlug zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, ze stosuje sie taki sam rozpuszczalnik do rozpusz¬ czania oczyszczanego produktu fosfatydylocholino- wego i do eluowania.
4. Sposób wedlug zastrz. 1 albo 2 albo 3, znamien¬ ny tym, ze jako nizszy alkanol o 1—4 atomach we¬ gla stosuje sie etanol. 5 PL