PL130776B1 - Method of obtaining natural liver extract - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania naturalnego ekstraktu watrobowego, stosowanego parenteralnie z witamine B12 do leczenia róznych form anemii, polegajecy na ekstrakcji cial czynnych wetroby wrzecym metanolem, oczyszczeniu ich z bialka, tluszczu, fosfolipidów oraz substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenia i uzyskaniu ste¬ zonego, naturalnego ekstraktu wetrobowego, z którego nastepnie w znany sposób usuwa sie chloroformem resztki tluszczu i fosfolipidów, oczyszcza z flory bakteryjnej, rozciencza wode i uzyskuje ostateczne postac ekstraktu. Naturalny ekstrakt wetrobowy przed wymie¬ szaniem z witamine B12 powinien zawierac w 1 cm roztworu nie mniej niz 144 mg suchej pozostalosci i nie wiecej niz 10 /jg substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenia.Z badan farmakologicznych róznych plynów iniekcyjnych wynika, ze dzialanie depresyj¬ ne na uklad krezenia wykazuje niektóre aminy, a szczególnie histamina 1 acetylocholina, które potocznie okresla sie nazwe substancji histaminopodobnych. Substancji tych ze wzgledu na ich bardzo male ilosc i róznorodnosc w plynach iniekcyjnych nie oznacza sie metodami fizyko-chemicznymi, a tylko farmakologicznymi.Znany sposób otrzymywania naturalnego ekstraktu wetrobowego stosowanego parenteral¬ nie z witamine B^ do leczenia róznych form anemii, opisany w polskim opisie patentowym nr 44 114, polegal na ekstrakcji cial czynnych wetroby wrzecym etanolem, oczyszczeniu Ich z bialka, rozpuszczeniu i dlugotrwalym wygrzewaniu wewrzecym etanolu w calu usunie¬ cia poprzez lnaktywacje termiczne substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenia.Roztwór etanolowy po Inaktywacji zatezano do calkowitego usuniecia rozpuszczalnika, oczy¬ szczano chloroformem, seczono przez filtr przeciwbekteryjny, rozcienczano do stezenia 144 mg suchej masy w i cm i otrzymywano naturalny ekstrakt cial czynnych wetroby zawie¬ rajecy w 1 cm3 roztworu 100-150 jug substancji dzialajacych depresyjnie na uklad krezenia.2 130 776 Wade tego sposobu byla ni9ka wydajnosc procesu, wynikajaca z termicznej denaturacji cial czynnych wetroby w procesach zatezania poszczególnych roztworów etanolowych, e gló- wnle w procesie lnaktywacji substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krazenia oraz nieskuteczny proces termicznej ich lnaktywacji, co w efekcie koncowym czesto dyskwalifi¬ kowalo tak otrzymany ekstrakt do perenterelnego-stosowania.Stwierdzono, ze mozna uzyskac z dwukrotnie wyzsze wydajnoscie naturalny ekstrakt wa¬ trobowy, stosowany parenteralnie z witamine B±2 do leczenia róznych form anemii, poprzez zastosowanie metanolu do ekstrakcji i oczyszczania cial czynnych wetroby, w którym se one lepiej rozpuszczalne, a ponadto ulegaje w mniejszym stopniu denaturacji ze wzgledu na mozliwosc stosowania lagodniejszych parametrów termicznych procesu. Równiez wprowa¬ dzenie jonosorpcji do usuwania substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenla w miejsce termicznej ich lnaktywacji wyeliminowalo deneturacje cial czynnych wetroby i pozwolilo uzyskac ekstrakt odpowiadajecy wymaganiom farmakologicznym.Sposobem wedlug wynalazku rozdrobnione wetrobe wolowe poddaje sie dwukrotnej ekstra¬ kcji wrzecym metanolem, ekstrakty oddziela przez filtracje, leczy razem, zateza pod pró¬ znie w temperaturze ponizej 45°C do 1/20 objetosci i schladza do temperatury ponizej 10°C. Wytrecony osad bialka, tluszczu i ^fosfolipidów oddziela i wyrzuca, a roztwór po filtracji miesza w temperaturze okolo 20°C z 3-krotne objetoscie metanolu. Wytrecony osad bialka odsecza sie i wyrzuca, a filtrat zateza jak wyzej do 1/4 objetosci, schla¬ dza do temperatury okolo 5°C,odsecza i wyrzuca wytrecony osad tluszczu i fosfolipidów.Filtrat zawierajecy w 1 cm okolo 100/jg substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenla przepuszcza sie przez kolumne wypelnione mocnym kationitem w formie sodowej, uzytym w ilosci 1/5 objetosci filtratu. Barwne wycieki z kolumny leczy sie razem, fil¬ truje, zateza jak wyzej do 1/4 ,objetosci i miesza w temperaturze wrzenie z 10-krotne objetoscie metanolu w celu wytrecenla reszty bialek i soli mineralnych.Po schlodzeniu do temperatury okolo 20°C wytrecony osad odsecza sie i wyrzuca, a filtrat zateza jak wyzsj do okolo 1/10 objetosci, dodaje 1,5-krotne objetosc wody re- destylowanej i dla calkowitego odpedzenia resztek metanolu dalej zateza do 2/3 objetosci.Cieply roztwór seczy sie i uzyskuje stezony wodny roztwór cial czynnych wetroby, za¬ wierajecy w 1 cm 280 - 300 mg suchej pozostalosci i 2 - 10 /jg substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenla, który nastepnie w znany sposób oczyszcza 9ie chloroformem z resztkowych ilosci tluezczu i fosfolipidów, przetrzymuje 14 dni w temperaturze okolo ?4°C, seczy przez filtr przeciwbakteryjny, rozciencza wode redestylowane i uzyskuje na¬ turalny ekstrakt wetrobowy zawierajecy w 1 cm powyzej 144 mg suchej pozostalosci i 1 - 5 /jg substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenla. Ekstrakt ten miesza sie z recepturowe iloscie zmianowanego roztworu naturalnej lub syntetycznej witaminy B12 * 0tr2ymuJe gotowe forme leku.Przyklad. Do 1200 kg zmielonej wetroby wolowej wlewa sie 1840 dm 84 % me¬ tanolu i miesza 1 godzine w temperaturze wrzenia mieszaniny, po czym odwirowuje sie osad i poddaje drugiej ekstrakcji 1200 dm3 54 % metanolu. Odwirowany po drugiej ekstrakcji osad wyrzuca sie, a filtraty leczy razem i zateza pod próznie w temperaturze ponizej 45°C do okolo 160-1. Otrzymany roztwór przetrzymuje sie przez 2-3 dni w temperaturze ponizej 10 C. Wytrecone w formie kozucha zanieczyszczenia zbiera sie i wyrzuca, roztwór seczy przez tkanine filtracyjne, a nastepnie miesza w temperaturze okolo 20°C z 3-krotne objetoscie metanolu i pozostawia w spokoju na 16 godzin. Wytrecony osad odsecza sie jak wyzej 1 wyrzuca, a filtrat zateza pod próznie w temperaturze ponizej 45°C do objetosci 80 - 100 dm3.Zatezony roztwór schladza sie do temperatury okolo 5°C 1 po 24 godzinach od&ecza wy¬ trecony osad i wyrzuca. Filtrat przepuszcza sie przez kolumne wypelnione 20 dm wcfftytu KPS w formie sodowej. Wycieki barwne z kolumny w ilosci okolo 150 dm leczy sie raze*i#130776 3 filtruje przez plytki EKf zateza Jak wyzej do okolo 40 dm i otrzymuje roztwór o konsy¬ stencji syropu, do którego wlewa sie 400 dm metanolu, ogrzewa do wrzenia i prowadzi ekstrakcje przez 1 godzine.Nastepnie schladza sie roztwór do temperatury okolo 20°C i pozostawia w spokoju na 16 godzin. Wytrecony osad odsecza sie 1 wyrzuca^ a klarowny filtrat zateza jak wyzej do okolo 40 dm , dodaje 1,5-krotne objetosc wody redestylowanej 1 dalej zateza do okolo 60 dm3. Cieply roztwór seczy sie przez filtr EK i uzyskuje sie stezony roztwór wodny cial czynnych wetroby.Roztwór ten oczyszcza sie w znany sposób chloroformem z resztkowych ilosci tluszczu i fosfolipidów, przetrzymuje 14 dni w temperaturze okolo +4°C, seczy przez filtr prze- ciwbakteryjny, rozciencza wode redestylowane i otrzymuje okolo 125 dm naturalnego ekstraktu wetrobowego zawierajecego w 1 cm powyzej 144 mg suchej pozostalosci i 1-5 ug substancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenia. Tak otrzymany ekstrakt wodny cial czynnych wetroby leczy sie w ustalonych ilosciach z roztworem naturalnej lub syn¬ tetycznej witaminy B±2 i stosuje parenteralnie do leczenia róznych form anemii.Zastrzezenie patentowe Sposób otrzymywania naturalnego ekstraktu wetrobowego, stosowanego parenteralnie z witamine B,2 do leczenia róznych form anemii, polegajecy na ekstrakcji cial czynnych wetroby wrzecym metanolem, oczyszczeniu ich z bialka, tluszczu, fosfolipidów oraz aub- stancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenia i uzyskaniu stezonego, naturalnego ekstraktu wetrobowego, z którego nastepnie w znany sposób usuwa sie chlorofOfpan rasz- tki tluszczu i fosfolipidów, oczyszcza z flory bakteryjnej, rozciencza wode 1 uzyskuja ostateczne postac ekstraktu, znamienny tym, ze rozdrobnione wetrobe wolo¬ we poddaje sie dwukrotnej ekstrakcji wrzecym metanolem, ekstrakty oddziela przez filtra* cje, leczy razem, zateza pod próznie w temperaturze ponizej 45°C do 1/20 objetosci, schladza do temperatury ponizej 10°C, roztwór oddziela, miesza w temperaturze okolo 20 C z 3-krotne objetoscie metanolu 1 filtruje,po czym filtrat zateza jak wyzej do 1/4 obje¬ tosci, schladza do temperatury okolo 5°C i ponownie filtruje, a nastepnie przepuszcza przez kolumne wypelnione mocnym kationltem w formie sodowejfnajkorzyetniej wofatytem KPS uzytym w ilosci okolo 1/5 objetosci filtratu, barwne wycieki z kolumny filtruje sie, za¬ teza jak wyzej do 1/4 objetosci, miesza w temperaturze wrzenia z 10-krotne objetoscie metanolu, schladza do temperatury okolo 20°C i filtruje, po czym filtrat zateza jak wy¬ zej do 1/10 objetosci, dodaje 1,5-krotne objetosc wody redestylowansj i dalej zateza do 2/3 objetosci, filtruje i uzyskuje stezony wodny roztwór cial czynnych wetroby, który po dodatkowym oczyszczeniu chloroformem z resztek tluszczu 1 fosfolipidów oraz usunie¬ ciu flory bakteryjnej rozciencza sie wode redestylowane do wymaganego stezenia. PL

Claims (2)

1. Zastrzezenie patentowe 1. Sposób otrzymywania naturalnego ekstraktu wetrobowego, stosowanego parenteralnie z witamine B,2 do leczenia róznych form anemii, polegajecy na ekstrakcji cial czynnych wetroby wrzecym metanolem, oczyszczeniu ich z bialka, tluszczu, fosfolipidów oraz aub- stancji dzialajecych depresyjnie na uklad krezenia i uzyskaniu stezonego, naturalnego ekstraktu wetrobowego, z którego nastepnie w znany sposób usuwa sie chlorofOfpan rasz- tki tluszczu i fosfolipidów, oczyszcza z flory bakteryjnej, rozciencza wode 1 uzyskuja ostateczne postac ekstraktu, znamienny tym, ze rozdrobnione wetrobe wolo¬ we poddaje sie dwukrotnej ekstrakcji wrzecym metanolem, ekstrakty oddziela przez filtra* cje, leczy razem, zateza pod próznie w temperaturze ponizej 45°C do 1/20 objetosci, schladza do temperatury ponizej 10°C, roztwór oddziela, miesza w temperaturze okolo 20 C z 3-krotne objetoscie metanolu 1 filtruje,po czym filtrat zateza jak wyzej do 1/4 obje¬ tosci, schladza do temperatury okolo 5°C i ponownie filtruje, a nastepnie przepuszcza przez kolumne wypelnione mocnym kationltem w formie sodowejfnajkorzyetniej wofatytem KPS uzytym w ilosci okolo 1/5 objetosci filtratu, barwne wycieki z kolumny filtruje sie, za¬ teza jak wyzej do 1/4 objetosci, miesza w temperaturze wrzenia z 10-krotne objetoscie metanolu, schladza do temperatury okolo 20°C i filtruje, po czym filtrat zateza jak wy¬ zej do 1/10 objetosci, dodaje 1,5-krotne objetosc wody redestylowansj i dalej zateza do
2. 2. /3 objetosci, filtruje i uzyskuje stezony wodny roztwór cial czynnych wetroby, który po dodatkowym oczyszczeniu chloroformem z resztek tluszczu 1 fosfolipidów oraz usunie¬ ciu flory bakteryjnej rozciencza sie wode redestylowane do wymaganego stezenia. PL