EA005009B1

EA005009B1 - Способ получения экстракта растения cyclamen europaeum l. и его применение для получения лекарственного средства для лечения синусита

Info

Publication number: EA005009B1
Application number: EA200200613A
Authority: EA
Inventors: Вахтанг Мчедлидзе
Original assignee: ХАРТИНГТОН БИЗНЕС Эс.Эл.
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2002-01-17
Publication date: 2004-10-28
Also published as: WO2002058713A1; CY1106619T1; EP1353682B1; EP1353682A1; EA200200613A1; US20040076697A1; CA2433454A1; ES2170726B1; DK1353682T3; UA74811C2; PT1353682E; DE60218427T2; CA2433454C; ES2170726A1; ES2282419T3; WO2002058713A8; US7105189B2; DE60218427D1; ATE355070T1

Abstract

Изобретение относится к способу получения экстракта растения Cyclamen europaeum L. и его применению в качестве терапевтического средства. В особенности, оно относится к применению выделенного экстракта для получения лекарственных препаратов для лечения синусита. Данное изобретение также относится к способу экстракции данного выделенного экстракта с помощью воды и спирта.

Description

Данное изобретение относится к способу получения экстракта растения Сус1атеп еигораеит Ь. и к его применению в качестве терапевтического средства. В особенности, оно относится к применению экстракта для получения лекарственного препарата для лечения синусита.

Данное изобретение также относится к способу экстракции данного экстракта водной и спиртовой экстракциями.

Предпосылки изобретения

Известны различные способы лечения воспаления слизистой оболочки или околоносовых пазух, в особенности синусита. Однако современные методики лечения синуситов как острых, так и хронических, концентрируются прежде всего на трех основных проблемах, от решения которых в большей или меньшей степени зависит эффективность и продолжительность лечения. Этими проблемами являются: повторное восстановление вентиляции (дыхания) и нормальное дренирование околоносовых пазух, приостановка процесса воспаления и разбухания слизистой оболочки и борьба с инфекционной микрофлорой.

Данные заболевания часто лечат консервативным путем, включающим применение противомикробных продуктов, которые не всегда эффективны, поскольку в некоторых случаях они стимулируют резистентность к патогенной микрофлоре данных продуктов, которые, в свою очередь, недостаточно безвредны.

В первые периоды острого синусита эти методики лечения предусматривают оральное введение антибиотиков первого поколения, как например, ампициллина и амоксициллина. Если это окажется неэффективным, тогда прописывают амоксициллин и клавулановую кислоту или цефалоспорины II и III поколений [Е11еп Я. \Уа1й. ΜΌ, Сйгошс кйшкШк ίη сйййгеп. 1оигпа1 оГ Рей1а!г1ск, 1995, 127 (3) 339; ЫехрепкАе ЛпбЫойск аге ак ЕГГесйсе ак Ие^ег, Моге ЕхрепкЯе Опек ш Тгеайпд Лси!е Вас(ег1а1 8шикй1к. Ргекк Яе1еаке, Магсй 23, 1999. Адепсу Гог Неайй Саге Ройсу апй Яекеагсй, ЯоскуШе, ΜΌ.; апй О1епп Иааскоп, ΜΌ, ЕЛЛР, ЕЛС8, 8шикй1к ш Сй11ййоой, Рей. Сйп. оГ N Ат., 1996, 43(6):1305].

Роль антибиотиков в лечении хронического синусита меньше, чем в случае острого синусита, поскольку основная цель состоит в повторном восстановлении нормальной вентиляции (дыхания) пазухи решетчатой кости, к концу локального действия которых применяют противоотечные лекарственные средства, которые, сопровождаемые лечением антибиотиками, ликвидирует набухание (отечность) слизистой оболочки, улучшает дренаж и повторное восстановление функционирования слуховой трубы и пазухи решетчатой кости носа. Однако применение локальных противоотечных лекарственных средств в течение более пяти дней может вызвать рениг. индуцированный медика ментом (2ещег Я.8., Ргокрес!к Гог апсШагу 1геа1теп! оГ кшикШк ш 1йе 1990к. I. А11егду С1ш. йптипо1., 1992, 90:478). В случае патологий при хроническом состоянии обращение за помощью состоит в хирургическом вмешательстве, очистке околоносовых пазух с помощью непосредственного прокалывания.

Ввиду всего того, что сказано выше, лечение острых и хронических синуситов является продолжительным и сложным процессом, который, вследствие тяжести, может протекать несколько лет. Кроме того, источники, принятые во внимание, были неспособны подтвердить полную эффективность лечений, применяемых в обычной практике.

Возможное решение проблем синуситов было найдено при поиске и исследовании новых способов лечения.

Известно применение альтернативных лечений, которые могут использовать биологически активные вещества природного происхождения. Однако не существует какой-либо библиографии по обширному большинству веществ природного происхождения.

Дикое растение Сус1атеп еигораеит Ь., в данном изобретении названное цикламеном, принадлежит к семейству Рпти1асеае, и хотя это очень популярное растение во многих странах мира, его применение ограничивается декоративными назначениями. Мало информации доступно по его медицинским свойствам и только имеется ссылка по применению сока или порошка, полученного из растения для лечения головной боли.

В известном уровне техники не существует продукта, альтернативного антибиотикам для лечения синусита.

Описание изобретения

Данное изобретение решает упомянутые выше проблемы, в то же время оно обеспечивает также другие преимущества, которые будут описаны ниже.

Первой целью данного изобретения является способ получения экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит Ь.

Второй целью данного изобретения является применение экстракта согласно изобретению для того, чтобы производить лекарственный препарат для лечения синусита.

В соответствии с первой целью изобретения разработан способ получения экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит Ь., который характеризуется тем, что проводят водную экстракцию, который включает:

а) первую стадию - отжим предварительно очищенного и подготовленного клубня;

б) вторую стадию - очистку жидкой фракции, полученной после отжима, которая включает:

б-1) прибавление этилового спирта к данной жидкой фракции;

б-2) ее последующее хранение в холодильной камере при температурах от 2 до 25°С, предпочтительно 4-8°С, в течение 10-48 ч, предпочтительно 18-20 ч; и б-3) наконец, фильтрацию.

Предпочтительно, когда стадию фильтрации б-3) проводят в два этапа: вначале через фильтр первичной очистки, а затем через мелкопористый бактерицидный фильтр тонкой очистки при давлении 0,25±0,005 МПа.

Полезно, когда проводят дополнительную стадию - отжим остатка твердой фракции, полученной после первоначального отжима, еще содержащей большое количество биологически активных веществ, извлечение которых при помощи водной экстракции дает увеличенный выход по способу, на основании которого можно получить экстракт, описанный в изобретении.

Данная дополнительная стадия включает:

а-1) подготовку твердой фракции, т.е. остатков от отжима, при которой прибавляют воду в соотношении 1:0,5-1,8, предпочтительно 1:0,64-0,66. Величина 1 относится к весу клубня в граммах до отжима, в то время как величины 0,5-1,8 или 0,64-0,66 относятся к объему воды, добавленной к твердой фракции, полученной после первого отжима - отжима клубня, а-2) контролирование с помощью термостата температуры приготовленной массы в интервале 20-80°С, предпочтительно 60-70°С, в течение одного часа и затем проведение второго отжима - отжима остатков, и а-3) наконец, перемешивание в перемешивающем реакторе жидкой фракции от отжима остатков, т. е. от второго отжима, называемой также экстрактом остатка, с жидкой фракцией от отжима клубня, т.е. первого отжима, называемой также соком.

С этого момента способ продолжается стадией б) - очисткой полученной жидкой фракции, описанной выше (см. фиг. 1).

Факультативно был разработан способ получения экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит В, характеризующийся тем, что проводят спиртовую экстракцию, и включающий:

а) первую стадию - растирание в порошок предварительно очищенного клубня;

б) вторую стадию - экстракцию биологически активных веществ, которая включает:

б-1) прибавление спирта, предпочтительно этанола, к растертым в порошок клубням в объемном соотношении клубень/растворитель от 1:1 до 1:5, предпочтительно 1:3;

б-2) доведение приготовленной массы до температуры кипения в спирте и выдерживание в течение одного часа прежде, чем проводят отжим спиртовой экстракции;

в) третью стадию - очистку экстракта, которая включает операции:

в-1) прибавление сорбента с тем, чтобы удалить красящие вещества из экстракта, в со отношении твердой массы сырья к массе сорбента, равной 30:0.5-30:2, предпочтительно 30:1;

в-2) очистка при кипячении с последующим охлаждением и в-3) наконец, фильтрация.

Выгодно, когда вторую экстракцию б-3) проводят в тех же условиях, в результате чего получают примерно 20% от общего количества сапонинов. В этом случае экстракты первой и второй экстракции смешивают в смесительном аппарате прежде, чем перейти к стадии очистки (см. фиг.2).

Сорбент, применяемый для очистки, выбирают из группы, состоящей из: активированного угля, силикагеля, глины и окиси алюминия чистоты (сорта) II, причем лучшие результаты получают с окисью алюминия чистоты (сорта) II.

Контрольное (стандартное) определение количества биологически активных веществ, экстрагируемых из растения, выполняют на основе гемолитического показателя. Клубни разновидностей цикламена содержат цикламенсапонин, который гидролизуют с образованием цикламиретин сапогенина и углеводов (глюкоз и арабинозы). Помимо сапонина были обнаружены сахара (глюкоза, фруктоза и другие полисахариды) вместе со смолистыми веществами, красящими веществами и фенольными соединениями. Содержание воды в клубнях превышало 70%.

Гемолитический показатель показывает соотношение экстрагируемых сапонинов. При гемолитическом показателе ниже 300 единиц нет коммерческой (промышленной) выгоды в повторном процессе отжима или получении второго экстракта, так как после двух стадий отжима или экстракции было получено до 9698% биологически активных веществ из растения.

После первого отжима или получения первого экстракта, жидкая фракция имеет гемолитический показатель в пределах 8000-12000 единиц, а после второго отжима или получения второго экстракта жидкая фракция имеет гемолитический показатель в пределах 300-500 единиц. Дополнительные стадии отжима или получение третьего экстракта не позволят поэтому получить жидкую фракцию с величинами гемолитического показателя, пригодного с экономической точки зрения.

Таким образом, полученный выделенный экстракт имеет гемолитический показатель в пределах 6000-12000 и величину кислотности от 5,0 до 6,8.

Второй целью данного изобретения является применение экстракта, полученного в соответствии с любым из описанных способов, для производства лекарственного препарата для лечения синусита.

Для этой цели изобретение предлагает экстракт дикого растения Сус1атеп еигораеит В, который включает более высокую концентрацию сапонинов, но который также содержит сахара (глюкозу, фруктозу и другие полисахариды), смолистые и красящие вещества, фенольные комплексы и другие невыявленные добавки, но которые тем не менее наделяют выделенный экстракт терапевтическими свойствами, пригодными для производства лекарственного препарата для лечения синусита.

Краткое описание чертежей

Для лучшего понимания всего того, что было описано, приложены два рисунка, которые схематически и исключительно как неограничивающий пример показывают практический вариант осуществления изобретения.

На фиг. 1 изображена технологическая схема способа, описанного в изобретении, для получения экстракта водной экстракцией.

На фиг. 2 изображена технологическая схема способа, описанного в изобретении, для получения экстракта спиртовой экстракцией.

Ниже приводится более подробное описание способа получения экстракта с помощью водной экстракции и с помощью спиртовой экстракции.

Предпочтительные варианты изобретения

Далее следует описание предпочтительного варианта способа получения экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит Ь. водной экстракцией.

В первом варианте изобретения, клубень цикламенового растения очищают струей водопроводной воды до тех пор, пока земля, песок и другие загрязнения полностью не будут удалены с него, с последующей чисткой жесткой щеткой для того, чтобы удалить микрочастицы земли, песка и т.д.. Клубни далее промывают дистиллированной водой и оставляют высыхать на воздухе. Сухие клубни далее помещают в ванну и полностью заливают 95% этанолом и оставляют на один час.

Очищенные клубни помещают в пресс, в котором механически выжимается сок. Процентное содержание полученного сока или жидкой фракции изменяется в пределах 55-65% относительно твердой массы или твердой фракции после отжима.

Вследствие высокой гемолитической активности полученных остатков, экстракцию сапонинов проводят обессоленной водой. Подходящее соотношение твердой массы и объема жидкости, необходимой для экстракции, определяли в ходе исследования, и это соотношение составило 1:0,64-0,66.

Найдено, что это соотношение обеспечивает наибольшую гемолитическую активность образцов. Оптимальные температуры экстракции находятся в пределах 60-70°С, при времени экстракции в 60 мин. Отмечалось, что использование таких температур и времени приводит к максимальному изменению сапонинов при водной экстракции. Те же самые параметры также являлись оптимальными с технологической точки зрения, поскольку, если температура достигает 80°С, экстракт становится вязким и его трудно фильтровать вследствие частичного гидролиза полисахаридов, в то время как пролонгирование приводит к увеличению потери сапонинов.

Найдено, что вторичная экстракция остатков водой обеспечивает гемолитический показатель в 300-500 единиц, что указывает на необходимость только в одной экстракции.

Если экстракция была проведена, массу остатков помещают в пресс и подвергают отжиму. Сок и экстракт от остатков смешивают в реакторе, снабженном мешалкой, проводя общие экстракции из них.

Полученные жидкие фракции (сок клубней + экстракт от остатков), как конечные продукты, содержат основные возможные примеси и поэтому требуют дополнительной очистки.

Большую часть примесей можно исключить прибавлением к полученному экстракту 15% этилового спирта крепостью 96% и затем выдерживанием в холодильной камере в течение 18-20 ч. Как только это время истекает, полученную жидкую фракцию фильтруют через фильтр первичной очистки и затем через мелкопористый бактерицидный фильтр тонкой очистки. Эту последнюю стерилизующую фильтрацию полученного экстракта проводят при давлении 0,25±0,005 МПа.

Фильтрации дают прозрачный раствор, который остается стабильным в течение двух месяцев при выдерживании в холодильной камере при температуре 4-8°С. Данный раствор, т.е. полученный экстракт, служит в качестве основного вещества для приготовления лекарственного препарата для лечения синусита.

Во втором варианте изобретения предложен способ получения экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит Ь. спиртовой экстракцией.

Как только клубни очищены и подготовлены, их разрезают на маленькие кусочки, помещают в банку и заливают растворителем - 96% этиловым спиртом в соотношении масса твердого вещества (сырье) и объем растворителя 1:3 соответственно. Смесь нагревают до тех пор, пока растворитель закипит, и затем оставляют на 60 мин. Затем в тех же самых условиях проводят вторую экстракцию, в результате которой получают в среднем 20% от общих сапонинов.

Экстракты, полученные в результате первой и второй экстракций, объединяют и очищают при нагревании с последующим охлаждением для устранения красящих веществ.

Очистку проводят окисью алюминия чистоты (сорта) II при температуре 40-50°С и повторяют три раза, каждый раз по 15-20 мин. Оптимальное соотношение массы сырья к массе сорбента составляет 30:1, соответственно.

Ί

Очищенный экстракт служит в качестве основного вещества для получения лекарственного препарата для лечения синусита. Данный экстракт остается стабильным в течение двух месяцев при выдерживании в охладительной камере при температуре 4-8°С.

Фармакологические результаты

Исследование фармакологических свойств полученного экстракта, описанного в изобретении, показало, что применение его слабого концентрата вызывает рефлексивную секрецию из носовой полости. С помощью данного экстракта возможно получить растворы различных концентраций или, другими словами, персонализировать дозу.

Исследование рефлексивной реакции, проведенное при помещении 2-3 капель лекарственного препарата, полученного из экстракта, описанного в изобретении, в носовую полость кроликов и собак, показало, что ни латентный период реакции, ни продолжительность секреции не дают никаких изменений, независимо от того, вводят ли препарат ежедневно (каждые 24 часа) или через день.

Информация из гистологического исследования показывает, что применение препарата не вызывает побочных действий или раздражения, и вызывает меньшее воспаление слизистой оболочки.

Второе введение в носовую полость рекомендуемых доз препарата экстракта, описанного в изобретении, не вызывает побочных изменений общего состояния или поведения животных.

Терапевтическое действие препарата, который включает экстракт, описанный в изобретении, основано на стимуляции (раздражении) секретивной активности покровного (оболочечного) эпителия слизистой оболочки вообще, вместе с сывороткой и подслизистыми железами, которое облегчит сильное дренирование околоносовых пазух. Согласно гистологической информации, оптимальный период для второго интраназального введения составляет 48 ч.

Концентрации препарата сохраняют эффективность в растворах в пределах 1:100 и 1:500.

Условия применения препарата вместе с характеристиками реакций его введения практически исключают любую возможность адсорбции его с поверхности слизистой оболочки и продуцирования нежелательного системного действия.

Токсикологическое исследование

Системные токсические свойства экстракта и лекарственного препарата, содержащего его, были исследованы на мышах-альбиносах и кроликах посредством интраперитонеального, внутривенного и орального введения, поскольку невозможно вводить достаточно большие дозы интраназально, т.е. способом, рекомендуемым для клинического испытания.

Токсические проявления во всех способах введения обычно были проявлениями, свойственными сапонинам: распространенная депрессия центральной нервной системы и задержка (до 3 дней) летальности в случае интраабдоминального и орального введения; внутрисосудистый гемолиз и немедленная летальность в случае внутривенного введения; локализованное раздражающее действие в отношении слизистых оболочек.

Летальная разовая доза при оральном введении, применяемая для мышей, составляет:

(а) Спиртовый экстракт: ЬИ50 -1337,7±23 мг/кг; ЬИ84 -1894 мг/кг; ЬИ16 -781 мг/кг;

(б) Водный экстракт: ЬИ50 -1466,5±37 мг/кг; ЬИ84 -2107 мг/кг; ЬИ16 - 826 мг/кг;

(в) Лекарственный препарат: ЬИ50 2386,84±85 мг/кг; ЬИ84-3852 мг/кг; ЬИ16-920 мг/кг.

Согласно общей токсикологической классификации ЬИ50 индексов экстракт и лекарственный препарат, который его содержит, относятся к элементам умеренной или слабой токсичности с локализованным раздражающим действием средней степени.

Разовая нетоксичная, неэффективная доза лекарственного препарата, применяемая для мышей, составляет 10 мг/кг, т.е. 1/250 ЬИ50 и превышает максимальную разовую терапевтическую дозу (0,03 мг/кг), рекомендуемую для клинических испытаний, примерно в 350 раз.

Полутоксичность нетоксичной дозы лекарственного препарата исследовали на мышах в эксперименте по терапевтическому интраназальному применению, проведенному в пределах курса из двух недель, и были установлены случаи нежелательного проникновения препарата через носовую полость в желудок.

Второе оральное введение лекарственного средства в течение 14 дней в дозе 10 мг/кг было полностью безвредным для мышей.

Безвредность экстракта и лекарственного препарата, введенного пять раз, была показана с помощью результатов исследования специфической фармакологической активности этих препаратов в случае применения максимальных терапевтических концентраций.

Локализованное раздражающее действие лекарственного препарата проявляется в наивысшей степени на соединительной ткани, но не было обнаружено в слизистой оболочке желудка, тогда как слизистая оболочка носовой полости, вероятно, находится между ними двумя по степени раздражимости.

Клинические испытания лекарственного препарата в растворах 1:100-1:500, которые примерно эквивалентны 1/350-1/500 нетоксичной оральной дозы, применяемой для мышей, можно считать полностью безвредными, особенно, если практически невозможно учесть препарат, который абсорбирован или проглочен из носовой полости.

Несмотря на тот факт, что конкретный вариант данного изобретения был описан и показан, очевидно, что специалисты смогут внести изменения и модификации или заменить детали другими деталями, которые технически эквивалентны, без отступления от объема защиты, определяемого приложенной формулой изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит Ь. для лечения синусита, характеризующийся тем, что он включает стадии

а) первую стадию - отжим предварительно очищенного клубня с последующей водной экстракцией, включающей а-1) прибавление воды к твердой фракции остатков от отжима клубня в соотношении 1:0,5-1,8, а-2) контролирование с помощью термо стата температуры полученной массы в интервале 20-80°С с последующим отжимом остатков, а-3) смешивание в смесителе жидкой фракции от отжима остатков с жидкой фракцией от отжима клубня,

б) вторую стадию-очистку полученной жидкой фракции, которая включает б-1) прибавление спирта к упомянутой жидкой фракции, б-2) ее последующее хранение в холодильной камере, и б-3) фильтрацию.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадию б-2) проводят при температуре от 2 до 25°С, предпочтительно 4-8°С, в течение 10-48 ч, предпочтительно 18-20 ч.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадию фильтрации б-3) проводят в два этапа: вначале через фильтр первичной очистки и затем через микропористый бактерицидный фильтр тонкой очистки при давлении 0,25±0,005 МПа.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в стадиях а-1) воду прибавляют к твердой фракции в соотношении 1:0,64-0,66 и а-2) полученную массу контролируют с помощью термостата при температуре 60-70°С в течение одного часа и затем проводят отжим остатков.
5. Способ получения экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит Ь. для лечения синусита, характеризующийся тем, что проводят спиртовую экстракцию, включающую

а) первую стадию - растирание в порошок предварительно очищенного клубня,

б) вторую стадию - экстракцию биологически активных веществ, которая включает следующие действия б-1) прибавляют растворитель к растертым в порошок клубням в объемном соотношении клубень/растворитель от 1:1 до 1:5, при этом в качестве растворителя используют спирт, б-2) полученную массу доводят до температуры кипения, выдерживают и проводят отжим спиртового экстракта,

в) третью стадию - очистку спиртового экстракта, которая включает стадии:

в-1) прибавление сорбента в соотношении твердой массы сырья клубня к массе сорбента, равном 30:0,5 и 30:2, в-2) очистка при нагревании с последующим охлаждением и в-3) фильтрация.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что в стадиях б-1) прибавление спирта к растертым в порошок клубням осуществляют в объемном соотношении клубень/спирт 1:3, б-2) полученную массу кипятят в течение одного часа прежде, чем проводят отжим спиртового экстракта, и в стадии в-1) прибавление сорбента проводят при соотношении твердой массы сырья клубня к массе сорбента, равном 30:1.
7. Способ по п.5, отличающийся тем, что проводят вторую экстракцию на стадии б-3) в тех же условиях, что и экстракцию на стадиях б-1) и б-2), и осуществляют смешивание обеих жидких фракций в смесителе.
8. Способ по любому из пп.5 или 6, отличающийся тем, что сорбент выбирают из группы, состоящей из активированного угля, силикагеля, глины и окиси алюминия чистоты II, причем окись алюминия чистоты II предпочтительнее.
9. Применение экстракта дикого растения Сус1атеп еигораеит Ь. по любому из предыдущих пунктов для получения лекарственного средства для лечения синусита.