KR810000333B1 - 은행엽에서 플라보노이드 화합물을 추출 정제하는 방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

은행엽에서 플라보노이드 화합물을 추출 정제하는 방법

본 발명은 은행엽에서 화합물을 추출 정제하는 방법에 관한 것이다.

현재 약용식물에서 화학물리적 방법으로 유효성분을 추출 및 분리하여 의약품으로 사용되고 있으며 또한 민간에서는 약용식물을 그대로 사용하거나 절단해서 한약 또는 생약으로써 질병치료에 이용하고 있다.

특히 고려 인삼은 화학적 처리를 거쳐 약용성분을 추출하여 인삼 추출물로 국내외에서 널리 사용하고 있음은 잘 알려진 사실이다.

한국 은행나무는 중국원산으로 현재까지 존재하는 매우 오래된 나무로써 병충해 및 질병 등에 매우 강한 저항력을 갖고 있으며 번식력과 생활력이 좋아서 한국 어디서나 잘 자라고 있다.

은행나무의 은행열매는 옛부터 약용 및 식용으로 사용하여 왔으며 특히 은행엽을 알콜로 추출한 물질을 농약 및 비료 첨가제로 많이 사용하여 왔다. 이러한 살충효과를 나타내는 것은 은행엽에 유기산이 많이 함유하고 있기 때문이다.

이 외에는 은행잎에는 각종 지방족 알콜 및 지방족 케톤, 징코라이드(Ginkgolide)와 플라보노이드(Flavonoid), 플라본 비배당체(Fiavon) 화합물이 함유되고 있으며 플라보노이드 중에는 플라본배당체(Flavon Glycoside), 플라보놀(Flavonol) 및 비플라본(Biflavon)과 같은 비배당체 등이 주로 함유되어 있음이 알려져 있다.

이러한 플라보노이드 화합물은 식품색소첨가제, 항산화제 및 비료로도 사용되고 있으나 혈관 및 혈류장애에 특히 효과가 있으며 근육 조직의 항 경련작용 등이 있어 의약품으로써 말초혈관장애 및 고혈압 등 순환기계 질환의 치료재로 사용되고 있다.

본 플라보노이드 화합물을 은행엽으로부터 추출, 분리, 정제하는 방법이 본 발명의 특징이다. 본 발명을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

신선한 은행엽의 건조된 것을 저지방족 케톤 또는 저지방족 알콜 수용액에 넣고 40°-80℃에서 추출한 후 다시 20°-40℃에서 물에 불용성인 유기 용매로 추출하여 지방성 물질을 제거한 다음 수용액을 저 진공하에서 증발건조시켜 수용성 유기화합물을 얻는다.

이 물질 속에는 주로 페놀성 화합물(phenolic Compound), 캄프레놀(Kampterol) 및 이소탐네틴(Isorhamnetin)과 같은 플라보놀(Flavonol), 플라본화합물(Flavon Compound), 투레오틴 및 스테로이드 배당체등이 함유되어 있음을 확인하였다.

이 추출물은 액제, 정제 또는 당의정 등으로 경구 투여할 수 있으나 주사제로는 부적합하다.

실험 실적방법으로는 은행엽을 잘게 분쇄하여 20-50% 저 지방 케톤 또는 저 지방족 알콜 수용액으로 40°-100℃에서 2-6시간 추출한 후 여과하여 여액을 물에 불용성 유기용매를 적당량 가하여 15-50℃에서 혼합 교반한 다음 분리한다. 분리용매로는 클로로포름, 메칠에칠로라이드, 또는 사염화탄소가 적합하다.

위에서 얻은 추출물인 수용액에 황산암모늄과 디메칠케톤 또는 메칠에칠케톤 등 유기용매를 넣고 혼합 교반시킨 후 분리한다. 분리된 유기용매층을 색소물질로 제거하기 위해 흡착제 물질로 통과시켜 세라이트(Celite)층으로 여과한 후 여액을 농축 건조시켜 에칠알콜에 용해시킨 다음 수산화납 또는 특수 폴리아마이드를 넣고 처리한다. 생성된 침전물을 제거한 후 농축 건조시킨 후 에칠알콜로 용해시켜 녹은 부분만을 회수한 다음 감압건조시켜 순수 플라보노이드 화합물의 분말을 얻는다.

특히 위의 흡착제로는 알루미나, 탄산칼슘, 슈크로오즈를 사용함이 좋다.

실험실적 방법으로는 위에서 일단 추출한 수용액층에 황산 암모늄과 디메칠케톤 또는 메칠에칠케톤을 넣어 40-60℃에서 혼합교반 후 유기용매층을 분리, 분리된 용액을 흡착물질과 세라이트 여과층을 통과시킨 후 여액을 감압 건조시킨다.

건조된 물질을 에칠알콜로 용해시킨 후 초산납 또는 수산화납 등 납화합물 현탁액을 넣고 처리하여 생성된 침전물을 제거하고 황산 암모늄과 메칠에칠케톤을 넣고 혼합한 후 메칠에칠케톤-알콜층을 분리한 후 증발 농축시키거나 또는 에칠알콜 용액에 고분자 폴리아마이드 분말을 넣고 처리한 후 여과하여 여액을 증발 농축시킨다. 이렇게 처리한 다음 얻어진 건조물을 다시 에칠 알콜로 용해시켜 1일간 방치 후에 녹지 않는 부분을 제거한 후 여과하여 여액을 감압 건조시킨다.

여기서 얻어진 물질은 불순물인 단백질, 폴리페놀 등을 함유하지 않고 다만 순수한 플라보노이드 화합물만으로 이루어져 있다. 또한 이 물질은 물에 잘 녹으며 주사용 제제로도 적합하다.

[실시예 1]

은행엽 분말 50㎏에 50% 에칠알콜 수용액 200ℓ를 넣고 약 70-80℃에서 역류시키면서 추출 후 여과한다. 여액에 20ℓ씩 두번 클로로포름을 넣고 분리시킨다. 분리된 수용액층을 1/3 정도 농축시킨 후 암실에서 하루밤 방치한 후에 생성된 침전물을 여과하여 제거한 후 여액에 50% 황산 등 수용액을 20ℓ를 넣은 다음 메칠에칠케톤으로 분리시켜 상등액을 황산나트륨으로 수분을 흡수시킨다.

수분을 제거한 상등액을 증발 건조시킨 후 에칠알콜을 넣어 용해시키고 녹지 않은 침전물을 여과제거한다. 여액을 증발농축시키면 5㎏의 고체물질을 얻는다.

[실시예 2]

은행엽 분말 50㎏에 50% 아세톤 수용액을 160ℓ 넣고 약 40-60℃에서 역류시키면서 추출한 후 여과한다. 여액에 30ℓ씩 2번 사염화탄소로 추출한 후 수용액층을 감압건조시킨 후 50% 에칠알콜 수용액을 넣어 용해시킨 다음 불용성 물질을 제거하고 남은 여액에 황산암모늄 20㎏과 메칠에칠케톤 50ℓ를 넣어 혼합교반시킨다. 방치한 다음 분리된 메칠에칠케톤층을 증발 농축시킨 후 에칠알콜을 넣어 용해시킨 다음 녹지않는 물질을 여과하여 제거한 후 여액을 증발 농축시키면 5.5㎏의 고체물질을 얻는다.

[실시예 3]

위에서 얻은 고체 분말 1㎏을 에칠알콜 3ℓ에 녹이고 아래와 같이 제조된 특수 흡착제에 통과시킨다. 통과한 용액을 증발 건조시킨 후 에칠알콜을 넣어 용해시켜 20% 용액으로 만들고 여과하여 여액에 10% 초산납 수용액 3ℓ를 넣고 질소 기류하에서 혼합교반시킨다.

방치한 후 생성된 침전물을 여과하여 여액인 에칠알콜 용액을 증발 농축시켜 2/3 분량으로 만든 다음 황산암모늄 3㎏과 메칠에칠케톤 4ℓ를 넣고 혼합 교반시켜 메칠에칠케톤층을 분리시킨다. 다시 수용액층에 메칠에칠케톤 2ℓ를 넣어 재차 분리시킨 후 먼저 분리시킨 것과 합치고 다시 황산암모늄 1㎏과 증류수 1ℓ를 넣고 혼합 교반시켜 수용액층을 제거해 버린다.

얻어진 메칠에칠케톤층에 300g의 망초를 넣어 수분을 제거시킨 후 감압 건조시킨다. 건조시킨 것에 에칠알콜 2ℓ를 넣어 용해시킨 후 1일 밤 방치하여 여과한다. 여액을 감압 건조시키면 약 90g의 순수한 유효물질을 얻는다.

[특수 흡착제 제조]

색소 흡착용 물질인 알루미나 2㎏, 염화칼슘 1.5㎏, 슈크로오즈 500g을 5ℓ의 클로로포름에 넣어 혼합한 후, 셀라이트 100g을 넓이 20㎝ 높이 50㎝ 원통에 미리 장치한다.

이 원통에 클로로포름에 섞은 흡착제 혼합물을 서서히 붓고 용매를 통과시킨 후 5ℓ의 클로로포름으로 다시 넣어 흘려 보낸 다음 2ℓ의 에칠알콜을 넣어 역시 통과시켜 버린다.

용매가 다 통과한 후 원통 위에 여지를 올려 놓는다.

[실시예 4]

실시예 1과 2에서 얻어진 고체분말 1㎏을 에칠알콜 3ℓ에 용해시킨 후 특수 흡착제에 통과시킨다. 통과한 용액을 증발 건조시킨 다음 다시 에칠알콜에 용해시켜 10% 농도의 용액으로 만든다. 이 에칠알콜 용액에 입자 크기가 적은 특수 폴리아마이드 분말 1㎏을 넣고 혼합 교반시킨다. 2시간 혼합한 다음 여과하여 여액을 감압 건조시킨다.

건조된 것을 에칠알콜 2ℓ로 용해시킨 후 1일 밤 방치하여 여과한다. 여액을 감압 건조시키면 약 120g의 순수한 유효물질의 분말을 얻는다.

[특수 폴리아마이드 제조]

2-4% 희염산 5ℓ에 특수 폴리아마이드 1㎏을 넣고 60-80℃에서 가온 교반하여 부분 가수분해를 시킨다. 그 다음 7% 염화칼슘 2ℓ와 10% 메칠알콜 2ℓ를 넣고 70-90℃에서 역류시키면서 약 2시간 반응시킨다. 냉각시킨 다음 냉각수 3ℓ를 넣어 희석시키고 1일 밤 방치한다. 이 물질을 분산시키면서 10ℓ의 물에 넣고 교반시키면 점성의 액체가 미세한 분말로 되면서 침전되기 시작한다.

침전물을 여과한 후 수차례 증류수로 씻고 약알카리 용액으로 씻은 다음 다시 증류수로 2-3번 씻어 직경 0.5㎜ 이하인 분말만을 모은다. 이 분말을 감압하에서 건조시킨다.

[실시예 5]

위에서 얻어진 순수 유효물질 40g을 무수 에칠알콜 0.5㎏에 우선 용해시킨 다음 0.1N-수산화나트륨 수용액 0.3㎏을 가해서 중성이 되도록 한다. 50% 솔비톨 용액 1㎏이 함유되어 있는 주사용 증류수 10㎏을 위 용액에 넣고 잘 섞은 다음 주사용 용기에 여과 멸균시키면서 주입한다. 주입 후 120-130℃에서 10-20분간 멸균시킨다. 위에서 얻은 은행엽 추출물은 현재 정맥을 강화하는 특성과 평활근에 경련 유발시키는 각종 물질에 대해서 길항작용을 갖고 있음이 입증되었으며 특히 말초혈관 및 모세혈관의 혈류량을 현저하게 증가시키는 작용은 말초혈관 장애 및 혈류 장애, 고혈압 등에 치료효과를 나타내고 있음이 역시 입증되고 있다. 또한 그밖의 약리작용으로는 이뇨작용, 혈관운동신경에 대한 작용 및 혈관보호작용 등이 있음이 이미 보고되었다.

이와 같이 은행엽으로부터 위와 같은 약리작용을 갖고 있는 순수 플라보노이드 화합물을 추출, 분리해냄과 동시에 정제, 액제 뿐만 아니라 주사제까지 제제화 할 수 있게 되어 특히 순환기계 질환을 치료할 수 있게 되는 지대한 효과가 있는 것이다.

Claims (1)

1. 은행엽을 저 지방족 케톤 또는 저 지방족 알콜 수용액으로 40-80℃에서 추출한 후 여과한 여액에 물에 불용성인 유기용매를 넣어 다시 20-40℃에서 혼합 교반한 다음 분리시키고 이 분리된 수용액층에 황산암모늄과 디메칠케톤 또는 메칠에칠케톤을 넣어 분리시킨 다음 상등액을 취하여서 특수흡착제층에 통과시킨 후 이 여액을 초산납 또는 수산화납으로 처리하거나 특수 폴리아마이드로 처리하여 여과한 다음 여액을 감압 건조시킨 후에 에칠알콜로 용해시켜 1일 밤 방치한 후 침전물을 여과한 다음 여액을 감압 건조시키는 것을 특징으로 하여 은행엽에서 플라보노이드 화합물을 추출정제하는 방법.