PL127520B1 - Process for preparing medicine against infectious diseases of urinary and gastro-intestinal tracts - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia leku przeciwko chorobom zakaznym przewo¬ dów rmoczowych i trawiennych, zawierajacego jako skladnik czynny lizat bakteryjny pochodzacy z co najmniej jednego ze szczepów Escherichia coli NCTC: 8603, 8621, 8622, 8623, 9111, 9119, 9707, 9708, oraz 1-081, 1-082, 1-083, 1-084, 1-085, 1-086, 1-087, 1-088, 1-089. Korzystnie, lizat pochodzi ze wszyst¬ kich powyzszych Sizczepów.Szczepy NCTC sa skatalogowane i ogólnie do¬ stepne w National Collection of Type Cultures, Donidyn, natomiast szczepy I zglaszajacy niniejszy wynalazek zlozyl w dniu 7 marca 1979 r. w Col- lection nationale de cultures demicrcHorganismes, Imstiitiut "Pasteur, Paryz. sposób wedlug wynalazku polega na zastosowa¬ niu konkretnej procedury technologicznej do co najmniej jednego z wymienionycn szczepów. W przypadku szczepów typu I, sa to szczepy zupelnie noiwe, zas szczepy typu NCTC zastaly specjalnie dobrane sposród szeregu znanych jako takie szczepów. Jednakze dotychczas nie bylo znane wytwarzanie 'leków przeciw wyzej wymienionym chorobom a zwlaszcza z zastosowaniem technologii bedacej przedmiotem wynalazku, z powyzszych szczepów NCTC.Dzieki zastosowaniu konkretnej technologii i do¬ braniu nowych i nie stosowanych dotychczas do tego celu szczepów bakteryjnych uzyskano nieocze¬ kiwanie bardzo (skuteczny lek przeciw chorobom 10 15 20 25 30 zakaznym przewodów moczowych i trawiennych Efekt ten jest absolutnie nieoczekiwany, gdyz na podistawie dotychczasowego stanu techniki, w zad¬ nym przypadku nie mozna bylo przewidziec, ze lizat i/iluib autolizat nowych, konkretnie dobranych szczepów wykaze skutecznosc przeciw powyzszym chorobom.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze co najmniej jeden ze szczepów Escherichia coli NCTC: 8603, 8621, 8622, 8623, 91ill,, 9119, 9707, 9708, oraz 1-081, 1-082, 1-083, 1-084, 1-085, 1-086, 1-087, 1-088, 1-089 poddaje sie hiodowili w pozywce stalej lub cieklej, a nastepnie otrzymane bakterie pod¬ daje sie lizie. i/lub autolizie, po czym zbiera sie otrzymany lizat i laczy z farmaceutycznie dopusz¬ czalnym nosnikiem.Korzystnie, prowadzi sie hodowle oraz lize i/lub autolize mieszaniny wszystkich wymienionych szczepów.W celu otrzymania lizatów hodowle kultur ko¬ rzystnie prowadzi sie w pozywce zawierajacej w 1 litrze wody 22,5 g ekstraktu miesnego 7,5 "g eks¬ traktu drozdzy, 2,5 g chlorku sodu, 0,5 ig octanu sodu, 2,0 g monowodorofosf.oranu sodu, 2,0 ml 70% roztworu mleczanu sodu, 2,0 ml 50% roztworu mle¬ czanu amonu, 3,0 mg aneuryny, 3,0 mg kwasu ni¬ kotynowego i 3,0 g glukozy, przy czyim wartosci te moga zmieniac sie w zakresie +5%. Jezeli pozada¬ ne jest srodowisko stale, mozna stosowac dodat- 127 520127 520 3 kowo 2,0 g zelatyny i 24,0 g agaru w 1 litrze wody.Hodowle w celu otrzymania1 lizatu w drodze auitializy przeprowadza sie korzystnie w pozywce , zawierajacej w 1 litrze wody ,25,0 g ekstraktu * miesnego, 5,0 g chlorku sodiu i 1,0 g monowodoro- I fosforanu sodu, z 'odchyleniami zawartosci kazde¬ go z tych skladników +5%.Wynalazek ilustruja, nie ograniczajac jego za¬ kresu, naistepujajce przyklady.Przyklad I. Prowadzi, sie hodowle kultur bakterii wyzej wymienionych typów na pozywce zawierajacej w 1 litrze wody: 22,5 g ekstraktu miesnego, 7,5 g ekstraktu drozdzy, 2,5 g NaCl, 0,5 g octanu sodu, 2,0 g monoWodorofosforanu . sodu, 2,0 ml 70% roztworu mleczanu sodu, 2,0 ml 50% kwasu nikotynowego i 3,0 g glukozy.Hodowle prowadzi sie w fermentorze, np. w cia¬ gu 8—14 godz. w 35^37°C w ciagu 24—48 godz. w 33—37°C.Hodowle zbiera sie zwyklymi sposobami,. Otrzy¬ mane zawiesiny bakteria mianuje sie szczep po szczepie i poddaje progresywnej lizie zasadowej (ph 9 do 19), w 20 do 40QC, za pomoca wodoro¬ tlenku sodu. Lize prowadzi sie w ciagu 5 dni, pod kontrola mikroskopowa.Objetosc lizatu kazdego ze szczepów bakteryj"- nych wchodzacych w sklad' koncowego koncentra¬ tu oblicza sie w zaleznosci od wyników miano¬ wania.Lizaty uzyskane z kazdego ze szczepów bakte¬ ryjnych hodowanych w pozywce cieklej miesza sie w odpowiednim stosunku. Sumaryczna dawka dzienna lizatów szczepów wynosi dla czlowieka doroslego odpowiednik 1 do 50 miliardów mikro¬ organizmów.Mieszanina lizatów stanowi koncentrat macie¬ rzysty, który klaruje sie przez wirowanie i sacze¬ nie. Sklarowany koncentrat sterylizuje sie przez saczenie przez membrane. Sterylny koncentrat li¬ zatów bakteryjnych stanowi podstawe do wytwa¬ rzania róznych form farmaceutycznych.Postepujac analogicznie, lecz prowadzac fermen¬ tacje w kolbach Roux, albo prowadzac lize zasa¬ dowa za pomoca wodorotlenku potasu oraz pierwszo- drugo- i trzeciorzedowych amin, a takze stosujac pozywke^ stala uzyskuje sie analogiczne wyniki. 1 Pr zy kl a d II. W celu otrzymania lizatu na drodze autolizy prowadza sie hodowle kultur bakT terii wyzej wymienionych ^typów na pozywce za¬ wierajacej w 1 litrze wody 25,0 g ekstraktu mies¬ nego, 5,0 g NaC^li 1,0 g monowodorofosfor,anu so¬ du. Posiana pozywke imkubuje sie w ciagu 3 mie¬ siecy w 37°C. Lizatem jest przesaczony plyn ho¬ dowlany. Dalej postepuje sie analogicznie jak w przykladzie I.Podawania preparatu dokonuje 'sie korzystnie droga doustna. Preparaty doustne maja postac tab¬ letek, kapsulek, pastylek lub granulek zawieraja¬ cych liofilizowany lizat, roztworów do picia w jednodaiwkowych ampulkach, syropu lub kropel za¬ wierajacych lizat. Podawania mozna dokonywac równiez droga pozajelitowa lub doodbytniczo, sto¬ sujac czopki. Dawka dzienna dla czlowieka do¬ roslego, korzystnie podawana jednorazowo, moze 4 zawierac lizat równowazny 1 do 50 miliardom mi¬ kroorganizmów. Dawka dla dziecka wynosi polowe dawki dla czlowieka doroslego.Badania farmakologiczne. 5 Badania doswiadczalne stanu odpornosci prze¬ prowadzono na myszach Balb/c po doustnej sty¬ mulacji lizatem wytworzonym sposobem wedlug wynalazku. Badania obejmowaly odpornosc humu- rakia i komórkowa, specyficzna i niespecyficzna. io Próba ochirony. Lizat podawano myszom doust¬ nie, w dawce 150 mg/kg, w ciagu 5 dni. Wykazano, ze lizat ma statystycznie znaczace dzialanie ochronne wobec zakazen bakteriami Escherichia coli, dokonywanych dootrzewnowa injekcja 10 !3 i 30 dnia po rozpoczeciu zabiegu oraz wobec bak¬ terii Salmonella ty£himuirium inokuiowanych dioje- Mtowo 30 dinia po rozpoczeciu zabiegu.Próba „komórek tworzacych plytki". Technika ta pozwolila wykazac zwiekszenie w funkcji czasu liczby komórek sledziony wytwarzajacych plytki lizy u myszy traktowanych lizatem w dawce 150 iwg/kg, w ciagu 5 dni, droga doustna. Próbe prze¬ prowadzano 14 dnia po rozpoczeciu zabiegu.Próba in vivo fagocytozy koloidalnego wegla, „ Koloidalny wegiel wstrzykiwany myszom jest eli- 25 minowany z ukladu naczyniowego przez komórki Kuepffera. Kinetyka eliminacji koloidu jest wyra¬ zem aktywnosci ukladu siateczkowo-sródlblonkowe- go. lizat 'podawano myszom doustnie w ciagu 5 dni, w dawce 150 mg/kg. Próbe przeprowadzano 30 10 i 30 dnia po rozpoczeciu zabiegu. Wskaznik fa¬ gocytozy zwiekszyl sie w sposób statystycznie zna¬ czacy.Badania czynnosci makirofagów. W ciagu 5 dni podawano myszom doustnie lizat, w dawce 150 35 mg/kg. 10 i 30 dnia po rozpoczeciu zabiegu ozna¬ czono liczbe makrofagów wewnatrzotrzewnowych.Badanie zdolnosci przywierania i fagocytozy in vitro (Candida allbicans) makrofagów wykazaly, ze Stosowany lizat dziala immunostyniuilujaco na po- 40 ziomiie komórkowym, Wykazano równiez charakterystyczny spadek ak¬ tywnosci enzymatycznej tych makrofagów,' praw¬ dopodobnie spowodowany wyczerpaniem tych bar¬ dzo pobudzonych komórek. Kontrole przeprowa- 45 dzone za pomoca transmisyjnej mikroskopii elek¬ tronicznej potwierdzily te hipoteze; aktywne ma- krofaigi wykazywaly silna wakuolizacje.Badanie toksycznosci chronicznej. Dizat poda¬ wano w dawkach 100 i. 1000 oraz 20 i 200-krotnie 50 wiekszej od dawki leczniczej dla czlowieka, odpo¬ wiednio szczurom i psom, doustnie, w ciagu 13 ty¬ godni. W czasie zabiegu nie wystapily zadne zmia¬ ny funkcjonalne lub organiczne.Badania kliniczne. 17 chorym cierpiacym na 55 chroniczne zakazenie dróg moczowych podawano 1 dawke lizatu dziennie, stosujac 'je przez 10—15 dni w miesiacu w ciagu 8—12 miesiecy, w 14 przy¬ padkach calkowicie wyeliminowano nawroty, w 3 przypadkach wydluzono czas do nawrotu cho- eo r°ky. iZ a s t r z e z e n i a patentowe 1. Sposób wytwarzania leku iprzeciwko choro¬ bom zakaznym przewodiów moczowych i trawien- 65 nych, znamienny tym, ze co najmniej jeden ze127 520 5 szczepów Escherichia coli NCTC: 8603, 8621, 8622, 8623, 9111, 9119, 9707, 9708 oraz 1-081, 1-082, 1-083, 1-084, 1-085, 1-086, 1-087, 1-088, 1-089, poddaje sie hodowli w pozywce stalej lub cieklej a nastepnie otrzymane bakterie poddaje sie lizie i/tLuib autolizie, po czyim zbiera otrzymany lizat i laczy z farma¬ ceutycznie dopuszczalnym nosnikiem. 2. sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze poddaje sie hodowli, lizie i laczeniu z nosnikiem miesizamime wszystkich szczepów wymienionych w zastrz,. 1. 3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako pozywke stosuje sie roztwór zawierajacy w 1 lltirze wody 22,5 g ekstraktu miesnego', 7,5 g eks¬ traktu z drozdzy, 2,5 g chlorku sodu* 0,5 g octanu sodu, 2,0 g monowodorofosforanu sodu, 2,0 ml 70% roztworu mleczainu sodu, 2,0 ml 50°/o roztwiotr.u mleczanu amonu, 3,0 mg anauryny, 3,0 mg kwasu nikotynowego i 3,0 g glukozy, przy czyim wartosci te moga zmieniac sie w zakresie +5%. 4. Sposób wedlug zastrz. 3, znamienny tym, ze jako pozyiwke stosuje sie roztwór zawierajacy po¬ nadto w 1 litrze wody 2,0 g zelatyny i 24,0 g agaru. 5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w przypadku prowadzenia autolizy jako pozywke stosuje sie roztwór zawierajacy w 1 litrze wody 25,0 g ekstraktu miejsinego, 5,0 g chlorku sodu i 1,0 g mionowodorofosforanu sodlu, przy czym po¬ wyzsze wartosci moga sie zmieniac w zakresie +5%. 10 PL PL PL

Claims (5)

1.Z a s t r z e z e n i a patentowe 1. Sposób wytwarzania leku iprzeciwko choro¬ bom zakaznym przewodiów moczowych i trawien- 65 nych, znamienny tym, ze co najmniej jeden ze127 520 5 szczepów Escherichia coli NCTC: 8603, 8621, 8622, 8623, 9111, 9119, 9707, 9708 oraz 1-081, 1-082, 1-083, 1-084, 1-085, 1-086, 1-087, 1-088, 1-089, poddaje sie hodowli w pozywce stalej lub cieklej a nastepnie otrzymane bakterie poddaje sie lizie i/tLuib autolizie, po czyim zbiera otrzymany lizat i laczy z farma¬ ceutycznie dopuszczalnym nosnikiem.

2. sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze poddaje sie hodowli, lizie i laczeniu z nosnikiem miesizamime wszystkich szczepów wymienionych w zastrz,. 1.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako pozywke stosuje sie roztwór zawierajacy w 1 lltirze wody 22,5 g ekstraktu miesnego', 7,5 g eks¬ traktu z drozdzy, 2,5 g chlorku sodu* 0,5 g octanu sodu, 2,0 g monowodorofosforanu sodu, 2,0 ml 70% roztworu mleczainu sodu, 2,0 ml 50°/o roztwiotr.u mleczanu amonu, 3,0 mg anauryny, 3,0 mg kwasu nikotynowego i 3,0 g glukozy, przy czyim wartosci te moga zmieniac sie w zakresie +5%.

4. Sposób wedlug zastrz. 3, znamienny tym, ze jako pozyiwke stosuje sie roztwór zawierajacy po¬ nadto w 1 litrze wody 2,0 g zelatyny i 24,0 g agaru.

5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w przypadku prowadzenia autolizy jako pozywke stosuje sie roztwór zawierajacy w 1 litrze wody 25,0 g ekstraktu miejsinego, 5,0 g chlorku sodu i 1,0 g mionowodorofosforanu sodlu, przy czym po¬ wyzsze wartosci moga sie zmieniac w zakresie +5%. 10 PL PL PL