CH639852A5 - Medicament contre les maladies infectieuses des voies urinaires et digestives. - Google Patents

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Description

La présente invention concerne un médicament contre des maladies infectieuses des voies urinaires et digestives, tel que défini dans la revendication 1.
De préférence, les lysats proviennent de toutes les souches mentionnées dans la revendication 1.
Les souches NCTC sont cataloguées par la National Collection of Type Cultures, Central Public Health Laboratory, Colindale Avenue, NW9 5HT Londres, et accessibles au public, tandis que les souches I ont été déposées par le titulaire du présent brevet le 7 mars 1979 auprès de la Collection nationale de culture de microorganismes, Institut Pasteur, 28, rue du Docteur-Roux. F-75724 Paris Cedex 15.
Les cultures bactériennes sont faites selon les techniques bactériologiques courantes, dans les conditions les mieux adaptées à la multiplication des germes.
Le traitement des cultures pour l'obtention des lysats se fait de préférence dans un milieu selon l'une des revendications 4 ou 5, en fermenteur par exemple à 35-37° C pendant 8-14 h, ou en flacons de Roux par exemple, à 33-37° C pendant 24-48 h.
Les cultures sont récoltées selon les méthodes usuelles. Les suspensions bactériennes ainsi obtenues sont dénombrées souche par souche et soumises à la lyse alcaline (pH 9 à 10) progressive à une température pouvant varier entre 20 et 40° C, avec, entre autres : soude caustique, potasse caustique, aminés primaires, secondaires et tertiaires. La lyse est poursuivie pendant 1 à 5 d sous contrôle microscopique.
Le volume des lysats de chaque souche bactérienne entrant dans le concentré final est calculé en fonction des résultats des dénombrements.
Le traitement des cultures pour l'obtention des lysats par autolyse se fait de préférence dans un milieu selon la revendication 6.
Les cultures ensemencées sont incubées pendant 3 mois à 37° C. Le surnageant filtré de ces cultures constitue le lysat.
Préparation du concentré de lysats bactériens
Les lysats de chaque souche bactérienne obtenus en milieu solide et/ou en milieu liquide sont mélangés dans des proportions appropriées pour obtenir les médicaments selon la revendication 1. Les quantités de germes des souches utilisées en association peuvent varier entre certaines limites pour une prise journalière humaine (adulte) : de 1 à 50 milliards de germes.
Le mélange des lysats constitue un concentré natif qui est clarifié par centrifugation et filtration en profondeur. Le concentré clarifié est stérilisé par filtration sur membrane et constitue le concentré de lysats bactériens servant de base à la préparation des différentes formes galéniques.
Formes galéniques
L'administration se fait de préférence par voie orale, sous forme de comprimés, capsules, gélules, granulés, contenant le lysat sous forme lyophilisée ou de soluté buvable sous forme d'ampoules monodoses de sirop ou de gouttes contenant le lysat. L'administration peut également se faire par voie parentérale, ou encore par voie rectale sous forme de suppositoires. La dose journalière pour un adulte, prise de préférence en une fois, peut contenir au total un lysat variant entre 1 et 50 milliards d'équivalents-germes.
La dose enfant est la moitié de la dose adulte.
Une étude expérimentale de l'état immunitaire a été effectuée chez la souris Balb/c après stimulation orale par le lysat défini selon les revendications 1 et 2. Cette étude couvre l'immunité à médiation humorale et l'immunité à médiation cellulaire, tant spécifique que non spécifique.
Test de protection
Les souris ont été traitées par voie orale avec 150 mg/kg pendant 5 d. Il a été montré que le lysat a un pouvoir protecteur statistiquement significatif vis-à-vis d'une infection par Escherichia coli injecté par voie intrapéritonéale 10 et 30 d après le début du traitement, ou par Salmonella typhimurium inoculé par voie entérale 30 d après le début du traitement.
Test Plaque forming Cells
Cette technique a permis de montrer une augmentation en fonction du temps du nombre de cellules spléniques produisant des plaques de lyse chez les souris traitées avec 150 mg/kg de lysat, pendant 5 d, par voie orale. Le test a été effectué 14 d après le début du traitement.
Test de phagocytose in vivo au carbone colloïdal
Le carbone colloïdal injecté à une souris est éliminé du système vasculaire par les cellules de Küpffer. La cinétique d'élimination du colloïde est donc le reflet de l'activité du système réticulo-endothélial. On a traité des souris par voie orale pendant 5 d avec 150 mg/kg de lysat. 10 et 30 d après le début du traitement, le test est réalisé. L'indice phagocytaire est augmenté de façon statistiquement significative.
Etude de l'activité des macrophages
Des souris ont été traitées avec 150 mg/kg de lysat par voie orale pendant 5 d. Les macrophages intrapéritonéaux ont été prélevés 10 et 30 d après le début du traitement.
L'étude des capacités d'adhérence et de phagocytose in vitro (Candida albicans) des macrophages a montré que le lysat utilisé a une action immunostimulante au niveau cellulaire.
Il a également été montré une chute caractéristique des activités enzymatiques de ces macrophages due probablement à un épuisement de ces cellules trop sollicitées. Des contrôles effectués en microscopie électronique de transmission ont pu confirmer cette hypothèse; les macrophages activés présentent de fortes vacuolisations.
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Etude de la toxicité chronique
Le lysat a été administré à des doses de 100 et 1000 fois la dose thérapeutique humaine à des rats, et à des doses de 20 et 200 fois à des chiens par voie orale pendant 13 semaines.
Aucune altération fonctionnelle ou organique n'a été décelée au cours du traitement.
Essais cliniques
17 malades souffrant d'infection urinaire chronique ont été traités à raison de 1 dose par jour de lysat pendant 8-12 mois à raison de 10 à 15 d de traitement par mois. Les récidives ont été totalement 5 éliminées dans 14 cas et espacées dans 3 cas.
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Claims (6)

639 852
1. Médicament immunobiothêrapique contre les maladies infectieuses des voies urinaires et digestives, contenant comme principe actif un lysat bactérien provenant d'au moins une des souches suivantes à'Escherichia coli:
— NCTC; 8603, 8621, 8622, 8623, 9026, 9111, 9119, 9707, 9708.
— CNCM: 1-081,1-082,1-083,1-084,1-085,1-086,1-087,1-088, 1-089.
2. Médicament selon la revendication 1, caractérisé par le fait que ledit principe actif et constitué par un mélange de lysats de toutes les souches mentionnées.
2
REVENDICATIONS
3. Procédé de fabrication d'un médicament selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait que lesdites souches sont incubées dans un milieu de culture solide ou liquide, qu'elles subissent une lyse et/ou une autolyse, et qu'on récolte les lysats ainsi obtenus.
4. Milieu de culture pour exécuter le procédé selon la revendication 3, contenant par litre d'eau: extrait de viande 22,5 g, extrait de levure 7,5 g, chlorure de sodium 2,5 g, acétate de sodium 0,5 g, mo-nohydrogénophosphate de sodium 2,0 g, lactate de sodium 70% p/p 2,0 ml, lactate d'ammonium 50% p/p 2,0 ml, aneurine 3,0 mg, acide nicotinique 3,0 mg, glucose 3,0 g, ces chiffres pouvant varier de
5. Milieu selon la revendication 4, contenant en plus, par litre d'eau: gélatine 2,0 g et gélose 24,0 g, afin de le rendre solide.
± 5%.
6. Milieu de culture liquide pour exécuter le procédé selon la revendication 3, par autolyse, contenant, par litre d'eau: extrait de viande 25,0 g, chlorure de sodium 5,0 g, monohydrogénophosphate de sodium 1,0 g, ces chiffres pouvant varier de + 5%.
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