NO851655L - Mikrobiologisk fremgangsmaate til fremstilling av antracyklin-derivater. - Google Patents
Mikrobiologisk fremgangsmaate til fremstilling av antracyklin-derivater.Info
- Publication number
- NO851655L NO851655L NO851655A NO851655A NO851655L NO 851655 L NO851655 L NO 851655L NO 851655 A NO851655 A NO 851655A NO 851655 A NO851655 A NO 851655A NO 851655 L NO851655 L NO 851655L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- roa
- rod
- cina
- acu
- cytorhodin
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 title 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 25
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims description 9
- 241001467544 Streptomyces galilaeus Species 0.000 claims description 8
- 241000187410 Streptomyces purpurascens Species 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 7
- ATPYMFXOZQEWIG-LFRDXLMFSA-N (2s,5r,6s)-5,6-dihydroxy-2-methyloxan-3-one Chemical compound C[C@@H]1O[C@H](O)[C@H](O)CC1=O ATPYMFXOZQEWIG-LFRDXLMFSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims description 3
- XXIHHRIZGBRENI-WDSKDSINSA-N L-rhodinose Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)CCC=O XXIHHRIZGBRENI-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 6
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 5
- 229950006191 gluconic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 229940099563 lactobionic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 4
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N (4z)-4-[[2-methoxy-5-(phenylcarbamoyl)phenyl]hydrazinylidene]-n-(3-nitrophenyl)-3-oxonaphthalene-2-carboxamide Chemical compound COC1=CC=C(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)C=C1N\N=C(C1=CC=CC=C1C=1)/C(=O)C=1C(=O)NC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZYECOAILUNWEAL-NUDFZHEQSA-N 0.000 description 2
- MWMZEHHNWIPABX-IHIFUPQISA-N (7s,9r,10r)-7-[(2r,4s,5s,6s)-4-(dimethylamino)-5-[5-(5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-10-[(4s,5s,6s)-4-(dimethylamino)-5-[5-(5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-9-ethyl-6,9 Chemical compound O([C@H]1[C@H](C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1C[C@]([C@@H](C2=C(O)C=3C(=O)C4=CC=CC=C4C(=O)C=3C(O)=C21)OC1O[C@@H](C)[C@@H](OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)CC3)CC2)[C@H](C1)N(C)C)(O)CC)N(C)C)C(OC1C)CCC1OC1CCC(O)C(C)O1 MWMZEHHNWIPABX-IHIFUPQISA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229940086542 triethylamine Drugs 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 3-bromoimidazo[1,2-a]pyridine-6-carbonitrile Chemical compound C1=CC(C#N)=CN2C(Br)=CN=C21 UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid trimethyl ester Natural products COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940050176 methyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N n-(9,10-dioxoanthracen-1-yl)-4-[4-[[4-[4-[(9,10-dioxoanthracen-1-yl)carbamoyl]phenyl]phenyl]diazenyl]phenyl]benzamide Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2NC(=O)C(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1N=NC(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC2=C1C(=O)C1=CC=CC=C1C2=O AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001043 yellow dye Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører en mikrobiologisk fremgangsmåte til fremstilling av forbindelsen med formel I
hvori R betyr hydrogen eller hydroksy og R1og R2er like eller forskjellige, og betyr sukkerkombinasjoner av følgende sammensetning:
-Roa-dF-CinA
-Roa-dF-Acu
-Roa-dF=CinB
-Roa-Rod-CinA eller
-Roa-Rod-Acu
eller R2har overnevnte betydninger og R^betyr sukkerkombina-sjonen av følgende sammensetning:
-Roa-dF-Rod
-Roa-dF-CinB
-Roa-dF-Acu
-Roa-Rod-Acy
-Roa-dF-CinA
-Roa-Rod-Rod eller
-Roa-Rod-CinA
idet Roa betyr rhodosamin, dF betyr desoksyfucose, Rod betyr rhodinose, Acu betyr aculose, ConA betyr cinerulose, A og CinB betyr cinerulose B, og dF betyr CinB, at de sukkerbyggestener desoksyfucose og cinerulose B er sammenknyttet med en ekstra eterbro ved siden av den vanlige glykosidiske binding, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat en forbindelse med formel II
hvori R har den under formel I nevnte betydning, og R^ og R^
er like eller forskjellige og betyr sukkerkombinasjoner med følgende sammensetning:
-Roa-dF-Rod
-Roa-Rod-Rod
-Roa-dF-CinA eller
-Roa-Rod-CinA
eller bare R^eller bare R^har nevnte betydninger og den andre substituent resp. betyr
-Roa-dF-Rod
-Roa-dF-CinB
-Roa-dF-Acu
-Roa-Rod-Acu
-Roa-dF-CinA
-Roa-Rod-Rod eller
-Roa-Rod-CinA
omsettese med en spesifikk oksidoreduktase og den dannede forbindelse isoleres fra reaksjonsmediet på i og for seg kjent måte ved ekstrahering og renses.
Oksydasjonen av terminale sukkermolekyler antracyklin-triglyko-sider ved omsetning med en oksidoreduktase eller allerede kjent (A. Yoshimoto et al., The Journal of Antibiotics Vol. XXXII, 472 (1979)). Herved dreier det seg imidlertid om et antra-cyklinderivat som bare ensidig er substituert med triglyko-sider.
Overraskende er det imidlertid ved anvendelse av denne fremgangsmåte på antracyklin-derivater med to triglykosidkjeder på molekylet mulig en selektiv oksydasjon av terminale sukkermole kyler. Således oksyderes eksempelvis ved omsetning av et cytorhodin med formel II med et oksidoreduktase-preparat, fremstillet fra kulturfiltratet av Streptomyces galilaeus (ATCC 31133) bare den nedre av triglykosid-sidekjede (-R3)•
Som oksidoreduktaser egner det seg oksyderende enzymer, og enzym-preparater som f. eks. cytoplasmamembran-suspensjoner, som isoleres på vanlig måte fra kulturfiltratet av mikroorganismer, fortrinnsvis av Streptomyces purpurascens (DSM 2658) eller av Streptomyces galilaeus (ATCC 31133).
Den enzymatiske fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen gjennomføres ved temperaturer på 20-45°C, fortrinnsvis 37°C og en pH på 4-7, fortrinnsvis 5-6, reaksjonstiden kan utgjøre noen timer til 3 dager. For økning av utbyttene kan ytterligere enzym etter-doseres. Etter avslutning av reaksjonen isoleres de ønskede forbindelser fra reaksjonsmediet ved ekstrahering og eventuelt ved søylekromatografi, fortrinnsvis på kiselgel eller på kjémisk bundne omvendtfaser ("reversed-phase"-Adsorbentien), eller ved dryppe-motstands-kromatografi, skilles og renses.
Man får ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen f. eks. følgende forbindelser: Cytorhodin U (forbindelse med formel I, hvori R.^= -Roa-Rod-Rod
og R2betyr -Roa-dF=CinB).
Cytorhodin V (forbindelse med formel I, hvori R^betyr -Roa-Rod-Rod og R2betyr -Roa-Rod-Acu).
Cytorhodin P (forbindelse med formel I, hvori R, betyr -Roa-Rod-Acu og R2betyr -Roa-dF-CinA).
Cytorhodin D (forbindelse med formel I, hvori R-^betyr -Roa-Rod-Acu, og R2betyr -Roa-dF-CinB).
1-hydroksy-cytorhodin V
1-hydroksy-cytorhodin P
1-hydroksy-cytorhodin D
1-hydroksy-cytorhodin B (forbindélse med - formel I, hvori betyr Roa-Rod-Rod, og R2betyr Roa-dF-CinA).
De ifølge oppfinnelsen oppnådde cytorhodiner utmerker seg ved høy cytostatisk<1->virkning.
Utgangsforbindelsene med formel-II med R=H kan fremstilles ifølge tysk Offenlegungsschrift DE 33 23 025 ved fermentering av mikro-organismen •Streptomyces purpurascens~(DSM 2658) og etterfølgende isolering.
Ifølge denne publikasjon fermenteres stammen Streptomyces purpurascens (DSM 2658) i et næringsmedium på vanlig måte, ved temperaturer på ca. 24-40°C ved en pH på 6,5-8,5, og aerobe be-tingelser overholdes. Fra det adskilte mycel ekstraheres antra-cyklinforbiridelser (cytorhodiner) ved ekstrahering eksempelvis med vandig aceton ved en pH på 3,5, acetonet fjernes, og den vandige fase ekstraheres ved en pH 7,5 med etylacetat. Kulturfiltratet ekstraherer man ved en pH-verdi på 7,5, fortrinnsvis med etylacetat. Etylacetatekstraktene fra mycel og kulturfiltratet forenes og gir inndampet til tørrhet et rått residuu. Fortrinnsvis videreopparbeider man residuet som eventuelt omtalt i det nevnte tyske patentsøknad.
Følgelig oppløses rå residuu i toluen og ekstraheres med en acetatpuffer (pH 3,5), idet man får en toluenfase og en vandig fase. Den vandige fase videreopparbeides på følgende måte: Etter innstilling av pH på 7,5, ekstraheres igjen metylacetat
og etylacetatfasen konsentreres, idet man får et såkalt cytorhodin-råblanding, hvorfra på kromatografisk måte antracyklin-derivatene (cytorhodiner) med formel II utvinnes.
Utgangsforbindelsene med formel II med R = OH (ifølge tysk søknad P 34 25 357.2) fremstilles analogt overnevnte fremgangs måte med den forskjell at fermenteringen gjennomføres ved en øket luftningsgrad fra 0,8 til 1,2 vvm over en tid på 70 til 130, fortrinnsvis 90 til 110 timer.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av følgende eksempler:
Eksempel 1
Isoleringen av oksydoreduktase fra Streptomyces galilaeus ATCC 31133.
Streptomyces galilaeus - ATCC 31133 ble overpodet som sporesuspensjon i en 2000 ml erlenmeyerkolbe med 500 ml av følgende næringsoppløsning:
og inkuberes 48 timer ved 28°C og 200 omdr. pr. min. på en rota-sjonsrister. 900 ml av denne forkultur tjente som inokum for en 12-liters fermenterer som var fylt med 9 liter kulturoppløsning: Sporelementoppløsning
Etter en fermenteringsvarighet på 3-4 dager ved 28°C, 400 omdr. pr. min. og en luftningsgrad på 0,5 vvm, høstes kulturoppløs-ningen, sentrifugeres og kulturfiltratet konsentreres ti ganger. Dette konsentrat ble med ammoniumsulfa't bragt til en metning
på 50 %, det overstående kassert, utfellingen opptatt i tris-HCl-puffer, pH 7,4 (10 mM), og dialysert mot 100-ganger volumet av samme puffer. Enzymoppløsningen ble deretter utrørt med avionisert DE 52 (Whatman) i en porsjonsblanding, ikke bundet protein fjernet med overnevnte puffer under tilsetning av NaCl (20 mM) ved vasking, deretter spesifikke oksidoreduktase eluert med den samme puffer under tilsetning av NaCl (250 mM) og konsen-trert ved hjelp av en felling av ammoniumsulfat (80%). Den resulterende enzymoppløsning med 130 mU/mg protein ble lyofili-
sert og lagret ved -18°C. Bestemmelsen av oksidoreduktase-aktiviteten foregikk ved måling av det med substratet cytorhodin B dannede ^C^, SOm over^^res i en koplet reaksjon ved hjelp av peroksydase til 6-fenylendiamin. Konsentrasjonen av det dannede gule farvestoff direkte proposjonal den av enzymet dannede mengde Yi^ O^. 1 int. enhet av enzymaktiviteten tilsvarer omsetningen av 1 ymol substrat/minutt.
Eksempel 2
Fremstilling av et oksidoreduktase-preparat fra Streptomyces purpurascens - DSM 2658.
Streptomyces purpurascens - DSM 2658 ble hatt på gjær-malt-agar med følgende sammensetning:
Dertil ble mediet fordelt på Roux-flasker og sterilisert 30 minuter ved 121°C, avkjølt, podet med en sporesuspensjon og inkubert 7-14 dager ved 25°C. Deretter kunne man fastslå en god vekst og en god sporedannelse. Av denne stamkultur ble det fremstillet en sporesuspensjon med 10 7 sporer/ml i steril NaCl (0,8 %-ig) . 2 ml tjente som inokulum av 50 ml av følgende for-kulturmedium: Hvergang 50 ml av overnevnte"medium ble fordelt på 300 ml Erlenmeyerkolber og sterilisert 30 minutter ved 121°C. De -podede kolber ble inkubert 2-3 dager ved 25°C og 200 omdreininger pr. minutt på en rotasjonsryster. 10 ml av den vandige forkultur ble anvendt som inokulum for
-følgende - hovedkultur:
Hver gang 500 ml av overnevnte medium ble fordelt på 2000 ml Erlenmeyerkolber og sterilisert 30 minutter ved 121°C. De podede kolber ble inkubert 4-5 dager ved 25°C, og 200 omdreininger pr. minutt på en rotasjonsryster.
De vaskede kulturer ble høstet, sentrifugert, og cellene vasket med NaCl.
For de enzymatiske omsetninger ble det anvendt enten hele cellene eller mebranfraksjoner av disse celler.
Eksempel 3:
Fremstilling av cytorodin U.
35 mg cytorodin B (forbindelse med formel II hvori R3 betyr
-Roa-Rod-Rod og R4betyr -Roa-df-CinA) ble oppløst i 5 ml 9 6 %-ig etanol oppfyllet med 30 ml citrat-NaOH-puffer pH 5,5, og ved tilsetning av 1,4 ml oksidoreduktase fra Streptomyces galileus (1,6 U/ml) omrørt ved 37°C med 150 omdreininger pr. minutt. Omsetningen ble fulgt med HPLC (Lichrosorb, Si 6 0 7 y (Merck), kloroform: metanol:eddiksyre (96 %):vann:tri-etylamin i forhold 80:10:10:2:0.01, strømning 0,5-1,5 ml. de-teksjon ved hjelp av gjennomstrømsfotometer ved 495 nm). Etter 48 timer kunne utgangsforbindelsene ikke mer påvises.
Reaksjonsoppløsningen ble blandet med 200 yl 0,1 mol EDTA-oppløsning, innstilt med 1-N NaOH på pH 7,5, ekstrahert 3 ganger med hver gang 10 ml eddiksyreetylester. Eddikester-fasen ble tørket med Na2SO^, befridd for tørkemiddel og inndampet forsiktig i vakuum.
Residuet (25 mg) ble oppløst i overnevnte mobile fase, og kromatografert på 35 g kiselgel "Lichrosorb" Si 60, 7 y (Merck)
i en stålsøyle 16 x 250 mm, ved en strømning på 10 ml/minutt. Fraksjonene 60-70 (hver 2 ml) som ifølge analytisk HPLC inne-holder forbindelsen Cytorodin U forenes, inndampes i vakuum, residuet opptas med 4 ml Na-acetat-oppløsning, pH 3,5. Opp-løsningen ble blandet med 0,1 ml 1 mM EDTA-oppløsning, og vasket med toluen fett- og mykningsmiddel fritt, innstillet med IN NaOH på pH 7,5, og det rå produkt ekstrahert med metylen-klorid. Etter vanlig tørkning over Na2S04og inndampning i vakuum, får man rent cytorodin U (1 mg).
Cytorhodin U:
rødt amorf stoff, lett oppløselig metanol, etylacetat, kloroform og toluen, uoppløselig i vann og heksan, oppløselig i 1 %
vandig D-glucinsyre eller D-lactobionsyre.
Tynnsj iktkromatografi:
Kieselgel 60 F254~ferdigplater "Merck", system kloroform: metanol:eddiksyre (96 %): vann 80:10:10:2, RF = 0,25.
<1>H-NMR: fig. 1.
Absorbsjonsspektrum:
a) 234 (4,67) 253 (SCH) 295 (3,86) 495 (4,10 b) 235 (4,68) 253 (SCH) 295 (3,92) 495 (4,18) c) 244 (4,70) - 290 (SCH3,84) 580, 610 (4,18
(FAB-MS bekreftet)
<C>60<H>84<N>2°21 M ber'1168
Cytorhodin. U har. formel. I, hvori ;.R1 betyr -Roa-Rod-Rod
og R2betyr -Roa-df-CinB.
Eksempel. 4
Fremstilling åv cytorhodin' V.. -
6?. mg Cytorhodin A (forbindelse med formel II, hvori R^og R^hver betyr -Roa-Rod-Rod) som D-glukonat (tilsvarende 54 mg cytorhodin A fri base), oppløses i 45 ml citrat NaOH-puffer pH 5,5, og omrøres etter tilsetning av 2 ml av en oppløsning av oksidoreduktase av Streptomyces galilaeus ved 37°C med 150 omdreininger pr. minutt. Omsetningen ble fulgt med HPLC. Etter 48 timer var 35 % av utgangsforbindelsen omsatt. Reak-sjonsoppløsningen ble oppbevart innfrosset. Etter opptining ble det tilsatt 0,2 ml av en 0,1 mM EDTA-oppløsning, pH innstillet med 1-N NaOH på pH 7,5, og ekstrahert med eddiksyreetylester. (3 ganger hver 30 ml). Den adskilte organiske fase ble tørket med Na2SO^, og, inndampet forsiktig under nedsatt trykk.
Residuet (33 mg) ble som i eksempel 3 oppløst i den mobile fase, oppdelt ved preparativ HPLC.
Fraksjonene 30 - 45 inneholdt omsetningsproduktet,
fraksjonene 90 - 120 inneholdt ikke-omsatt utgangsforbindelse.
Omsetningsproduktet ble som i eksempel 3 vasket fett- og myk-ningsmiddelfri og isolert som amorft rødt pulver (1,0 mg).
Cytorhodin V:
rødt, amorft stoff, lett oppløselig metanol, etylacetat, kloroform og toluen, uoppløselig i vann og heksan, oppløselig i 1%vandig D-gluconsyre eller D-lactodionsyre.
Tynnsjiktkromatografi som i eksempel 4: RF = 0,21.
<1>H-NMR; fig. 2
Absorbsionsspektrum
Cytorhodin V har formel I, hvori betyr -Roa-Rod-Rod og R2betyr Roa-Rod-Acu.
Eksempel 5
Fremstilling av cytorhodin P og D.
2 5 ml cytorhodin B (forbindelse med formel II hvori R^ betyr
-Roa-Rod-Rod og R4betyr -Roa-df-CinA) oppløses i 3 ml 90 %-ig etanol, blandes med 20 ml citrat-NaOH-puffer pH 5,5, og oksyderes ved 37°C med 2,5 ml suspensjon av cellemembraner (0,5 g/ ml) fra Streptomyces purpurascens - DSM 2658 (eks. 2) under omrøring (150 omdreininger/min). Ifølge HPLC var etter 24
timer ennå 21 % av utgangsforbindelsen tilstede og forbindelsene Cytorhodin P og Cytorhodin D dannet i forhold ca. 5 : 1.
Blandingen av produktet ble som i eksempel 3 og 4 isolert fra reaksjonsoppløsningen, oppdelt ved preparativ HPLC, og produktet isolert i ren form.
Det ble dannet av rene forbindelser Cytorhodin D (0,7 mg), Cytorhodin P (1,9 mg) og ikke-omsatt Cytorhodin B (1,2 mg).
Cytorhodin P:
rødt, amorft stoff, lett oppløselig i metanol, etylacetat, kloroform og toluen, uoppløselig i vann og heksan, oppløselig i 1 %-ig vandig D-gluconsyre eller D-lactobionsyre.
Tynnsjiktkromatografi kan ved eksempel 4: RF - 0,27.
^H-NMR: fig. 3'
Absorbsjonsspektrum
Cytorhodin P av formel I, hvori betyr -Roa-Rod-Acu og
R2betyr -Roa-dF-CinA.
Cytorhodin D har formel I, hvori R^ betyr -Roa-Rod-Acu og
R2betyr -Roa-dF=CinB.
Eksempel 6
Fremstilling av 1-hydroksy-cytorhodin U og 1-hydroksy-cytorhodin B
50 mg av en 1:1 blanding av 1-hydroksy-cytorhodin N (forbindelse med II, hvori R^betyr Roa-dF-Rod og R^betyr Roa-Rod-Rod) og 1-hydroksy-cytorhodin 0 (forbindelse med formel II hvori R^betyr Roa-Rod-Rod, og R^ betyr Roa-dF-Rod), ble opp-løst med 3 ml 96 %-ig etanol, oppfylt med 30 ml citrat-NaOH-puffer, pH 5,5, og ved tilsetning av 2 ml oksidoreduktase fra Str. galilaeus (1,6/ml) omrørt ved 37°C med 150 omdreininger/ minutt. Omsetningen ble fulgt med HPLC (Lichrosorb Si 60
7y (Merck), kloroform:metanol:eddiksyre (96 %):vann:trietyl-amin i forhold 80:10:10:2:0,01, strømning 0,5 - 1,5 ml,deteksjon ved hjelp av gjennomstrømningsfotometer ved 495 nm). Etter 17 timer var utgangsforbindelsen ikke mere påvisbar, og forbindelsene 1-hydroksy-cytorhodin B og 1-hydroksy-cytorhodin 0 var nydannet i forhold 3:6.
Reaksjonsoppløsningen ble blandet med 200 yl, 0,1 mol EDTA-oppløsning, med I-N NaOH innstillet på pH 7,5, og ekstra-
hert tre ganger med hver gang 10 ml eddiksyreetylester.Eddik-
esterfasen ble tørket med Na2S04, befridd for tørkemiddel og inndampet forsiktig i vakuum.
Residuet (45 mg) ble oppløst i overnevnte fase, kromatografert på 35 g kiselgel "Lichrosorb" Si 60, 7y (Merck) i en stål-søyle 16 x 250 mm ved en strømning på 10 ml/min. Fraksjonene (hver 2 ml) som ifølge analytisk HPLC inneholdt de nye forbindelsene ble forenet, inndampet i vakuum, residuet opptatt med 4 ml Na-acetat-oppløsning pH 3,5. Løsningen ble blandet med 0,1 ml 1 mM EDTA-oppløsning, og vasket fett- og myknings-middelfritt med toluen, 1-N NaOH, innstillet på pH 7,5, og det rå produkt ekstrahert med metylklorid. Etter vanlig tørk-ning over Na2S04og inndampning i vakuum får man ren 1-hydroksy-cytorhodin U (3,5 mg) og 1-hydroksy-cytorhodin B (2 mg).
1- hydroksy- cytorhodin U og 1- hydroksy- cytorhodin B: rødfiolette, amorfe stoffer, lett oppløslige i metanol, etylacetat, kloroform og toluen, uoppløselig i vann og heksan, opp-løselig i 1 %-ig vandig D-gluconsyre eller Lactobionsyre.
Tynnsjiktkromatografi: kiselgel 60 F254~^erdi9Plate "Merck" system kloroform:metanol:eddiksyre (96 %) i vann, 80:10:10: 2, RF = 0,2 5 (1-hydroksy-cytorhodin U) og RF er 0,18 (1-hydroksy-cytorhodin B).
1- hydroksy- cytorhodin U:
Absorbsjonsspektrum:
1-hydroksy-cytorhodin U av formel I, hvori R^betyr -Roa-Rod-Rod og R2betyr -Roa-dF=CinB.
1- hydroksy- cytorhodin B
Absorbsjonsspektrum:
1-hydroksy-cytorhodin B av formel I, hvori betyr Roa-Rod^Rod og R2 betyr Roa-df-CinA. Eksempel 7 Fremstilling av 1-hydroksy-cytorhodin P og 1-hydroksy-cytorhodin D 25 mg 1-hydroksy-cytorhodin B (forbindelse med formel II, hvori R3 betyr -Roa-Rod-Rod og R4betyr -Roa-dF-CinA) oppløses i 3 ml 90 %-ig etanol, blandes med 20 ml citrat-NaOH-puffer pH 5,5, oksyderes med 2,5 ml suspensjon av cellemembranet (0,5 g/ml) fra Streptomyces purpurascens - DSM 26 58 (eksempel 2) under omrøring (15 0 omdreininger/min). Ifølge HPLC var det etter 24 timer dessuten ca. 22 % av utgangsforbindelsen tilstede, og forbindelsene cytorhodin P og cytorhodin D nydannet i forhold ca. 4,5 : 1.
Blandingen av produktene ble isolert som angitt i eksempel 3 - 6 fra reaksjonsoppløsningen, oppdelt ved preparativ HPLC og produktene isolert i ren form.
Det ble dannet av rene forbindelser 1-hydroksy-cytorhodin D (0,9 mg), cytorhodin P (3,2 mg), og ikke-omsatt cytorhodin B (1,5 mg).
1- hydroksy- cytorhodin P og - D
fiolette, amorfe stoffer, lett oppløselig i metanol, etylacetat, kloroform og toluen, uoppløselig i vann og heksan, oppløselig i 1-%-vandig D-gluconsyre og D-lactobionsyre.
Tynnsjiktkromatografi som ved eksempel 4: RF = 0,27 (1-hydroksy-cytorhodin P) og 0,35 (1-hydroksy-cytorhodin D).
1- OH- P;
Absorbsjonsspektrum:
Eksempel 8
Fremstilling av 1- hydroksy- cytorhodin V:
50 mg 1-hydroksy-cytorhodin A (forbindelse med formel II hvori R^og R^hver betyr -Roa-Rod-Rod) som D-glukonat (tilsvarer 37 mg 1-OH-cytorhodin A fri base) ble oppløst i 40 ml citrat-NaOH-puffer, pH 5,5, og ved tilsetning av 2 ml av en oppløsning av oksidoreduktase fra Streptomyces galilaeus om-rørt ved 37°C med 150 omdreininger pr.minutt. Omsetningen ble fulgt med HPLC. Etter 48 timer var ca. 35 % av utgangsforbindelsene omsatt. Reaksjonsoppløsningen ble blandet med 0,2 ml av en 0,1 mM EDTA-oppløsning, pH innstillet med IN NaOH
på pH 7,5, og ekstrahert med eddiksyreetylester (3 ganger å 30 ml). Den adskilte organiske fase ble tørket med Na^SO^, og forsiktig inndampet under nedsatt trykk.
Residuet (35 g) ble som i eksempel 3 oppløst i den mobile fase og oppdelt ved preparativ HPLC. Fraksjonene 32-47 inneholdt omsetningsproduktet fraksjonene 88-110 ikke omsatte utgangs-forbindelser.
Omsetningsproduktet ble som i eksempel 3 vasket fett- og myk- ningsmiddelfri isolert som amorft rødt pulver (2,0 mg).
1- hydroksy- cytorhodin V:
rødfiolett, amorft stoff, lett oppløselig metanol, etylacetat, kloroform og toluen, uoppløselig i vann og heksan, oppløselig i 1 vandig G-gluconsyre eller D-lactobionsyre.
Tynnsjiktkromatografi som i eksempel 4: RF = 0,21.
Absorbsjonsspektrum:
Identifiseringen av komponentene i de overnevnte eksempler foregikk under nedenfor omtalte målebetingelser: Proton-resonansspektre (^H-NMR-spektre) ble målt på en HX-270 Bruker Fourier-transform kjerneresonansspektrometer ved 270 MHZ. Konsentrasjonen utgjør 2-4 mg/0,5 ml 99,8 % CDC13, oppløsningene ble med en gang etter fremstilling rystet med 0,1 ml 5 % Na2C03i 99,5 % D20.
De på figurene med en stjerne utstyrte signaler stammer fra lavmolekylære forurensninger i % 0-området og av oppløsnings-middelrester.
Massespektrene ble målt på massespektrometer MS-902 S,AEIunder anvendelse av en FAB-(fast-atombombardement) ione-kilde. Stoffene ble innbragt i en matrix, og tioglycerol i ionekilden, delvis under tilsetning av ammoniumklorid.
Absorbsjonsspektrene ble målt i området 200-700 nm.
a) vann-metanol 1 : 9
b) 10 % 1 n HC1 i metanol
c) 10 % 1 n NaOH i metanol.
Stoffkonsentrasjonene utgjorde 10 - 30 mg/l, angitt av absorb-sjonsmaksima i nm og de molare ekstinksjonskoeffisienter (log e).
Fastslåelse av den cytotoksiske aktivitet:
Bestemmelsen av den cytostatiske virkning av de her omtalte forbindelser foregikk på L1210 leukemiceller hos mus. I
detalj anvendes følgende prøvesystemer:
a) Proliferasjonsutstyr.
Ved denne metode fastslås in vitro etter inkubasjon av cellene
med forskjellige konsentrasjoner av prøvestoffet hvor vidt cellene kan innbygge radioaktive DNA-forløpere (f. eks.<14>C markert Thymidin). Ubehandlede L1210 celler ble underkastet samme prøvebetingelser og tjener som kontroll. I det følgende er metoden kort omtalt: L1210 celler i eksponensiell vekstfase (5 x 10<3>/ml i RPMI 1640) inkuberes i en mikrotiterplate 72 timer med forskjellige konsentrasjoner av prøvestoffet (37°C, 5 % C02, 95 % relativ luftfuktighet) . Kontrollen består av celler som bare inkuberes med friskt medium. Alle bestemmelser gjennomføres som 4-ganger
14
bestemmelse. Etter 65 timer tilsettes 50 yl C-l-Thymidin (1,5 yc/ml), for radioaktivt å markere cellenes DNA. Etter 7 timers inkubasjon frasuges cellene, DNA felles med 5 %-ig trikloreddiksyre og vaskes i rekkefølge med vann resp. metanol. Etter tørkning ved 50°C, fastslås den i DNA innbygde radio-aktivitet etter tilsetning av 5 ml szintillasjonsvæske.
Resultatene angis i forhold av szintillasjonsindeksen etter inkubasjon med prøvestoffet i prosent av ubehandlede kontroller. Fra de således fastslåtte måleverdier fastslås szintervirknings- kurven og grafisk fastslås IC5g'dvs. den konsentrasjon som ved prøvebetingelsene senker innbygningen av radioaktivt Thymidin rundt 5 % i forhold til kontrollene. IC^^-verdien
av de her omtalte forbindelsene sammenlignet til adriamycin (ADM) sammenfattes i tabell 1. b) Kolonidannelse av L1210 leukemiceller i bløtagar. Denne metoden tjener til påvisning av en innvirkning av prøvestoffet
på vektforholdet av cellene over flere generasjoner (ved en cellecyklustid på 10-12 timer, iakttatt i prøvetiden på 7 dager i ca, 14 på hverandre følgende generasjoner).
Cytostatiske virksomme stoffer bevirker i denne prøven reduk-sjon av de iakttatte kolonitall i forhold til ubehandlede kontroller. I detalj gjennomføres prøven som følger: 500 leukemiceller pr. plate inkuberes med forskjellige konsentrasjoner av prøvestoff i 1 time ved ca. 30°C. Deretter vaskes etter to ganger med McCoy 5A medium, og helles ut i Petri-skåler etter tilsetning av 0,3 % agar. Kontroller inkuberes bare i friskt medium. I steden for 1 times inkubasjon tilblandes i mange tilfeller forskjellige konsentrasjoner og prøvestoff av det øvre agarsjikt for således å oppnå en kon-tinuerlig eksposisjon av cellene over den samlede inkubasjons-tid. Etter agarens stivning inkuberes platene i dyrkeskap i 7 dager ved 37°C (5 % CC>2, 95 % relativ luftfuktighet). Deretter telles antallet dannede kolonier med en diamter 60 y. Resultatene angis som kolonitall i behandlede agarplater i % av ubehandlede kontroller. Av den således, oppnådde dosis-virkningskurve fastslås IC5 rn 0 som mål for virkningen av stoffet. Resultatene for de her omtalte forbindelser sammenlignet til adriamycin er sammenfattet i tabell 1.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av forbindelse med formel
I
hvori R betyr hydrogen eller hydroksy og R.^ og R2 er like eller forskjellige og betyr sukkerkombinasjoner av følgende sammensetning:
-Roa-dF-CinA
-Roa-dF-Acu
-Roa-dF=CinB
-Roa-Rod-CinA eller
-Roa-Rod-Acu
eller R2 har overnevnte betydning, og betyr sukkerkombinasjoner av følgende sammensetning:
-Roa-dF-Rod
-Roa-dF-CinB
-Roa-dF-Acu
-Roa-Rod-Acu
-Roa-dF-CinA
-Roa-Rod-Rod eller
-Roa-Rod-CinA
idet Roa betyr rhodosamin, dF betyr desoksyfucose, Rod betyr Rhodinose, Acu betyr aculose, CinA cinerulose A og CinB betyr cinerulose B og dF betyrC inB , at de to sukkerbyggestenene desoksyfucose og cinerulose B er sammenknyttet ved hjelp av en ekstra eterbro ved siden av den vanlige glycosidiske binding, karakterisert ved at en forbindelse med formel II
hvori R betyrhydrogen eller hydroksy og R^ og R^ er like eller forskjellige og betyr sukkerkombinasjoner av følgende sammensetning :
-Roa-dF-Rod
-Roa-Rod-Rod
-Roa-dF-CinA eller
-Roa-Rod-CinA
eller bare R^ eller bare R^ har nevnte betydninger og den andre substituent resp. betyr
-Roa-dF-Rod
-Roa-dF=CinB
-Roa-dF-Acu
-Roa-Rod-Acu
-Roa-dF-CinA
-Roa-Rod-Rod eller
-Roa-Rod-CinA
omsettes med en spesifikk oksidoreduktase og den eller de dannede forbindelser isoleres fra reaksjonsmediet på i og for seg kjent måte ved ekstrahering og renses.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den enzymatiske omsetning gjennomføres ved en tempera-tur på 20-45°C, en pH på 4-7 og en reaksjonsvarighet på noen timer inntil 3 dager.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 og 2, karakterisert ved at det anvendes oksidoreduktasen utvunnet fra kulturfiltratet av Streptomyces galilaeus (ATCC 31133) eller Streptomyces purpurascens (DSM 2658) .
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1 og 2, karakterisert ved at ved fremstilling av en forbindelse med formel I hvori betyr en av sukkerkombinasjonene
-Roa-dF-Rod
-Roa-dF-CinB
-Roa-dF-Acu
-Roa-dF-CinA
-Roa-Rod-Acu
-Roa-Rod-Rod eller
-Roa-Rod-CinA
og R_ betyr en av sukkerkombinas jonene
-Roa-dF -CinA
-Roa-dF-Acu
-Roa-dF=CinB
-Roa-Rod-CinA eller
-Roa-Rod-Acu
omsettes med en forbindelse med formel II, hvori R^ har overnevnte for R^ nevnte betydninger og R4 betyr en av sukkerkombinas jonene
-Roa-dF-Rod
-Roa-dF-CinA
-Roa-Rod-Rod eller
-Roa-Rod-CinA
med en oksidoreduktase som er utvunnet fra kulturfiltratet av Streptomyces galilaeus (ATCC 31133) .
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843415544 DE3415544A1 (de) | 1984-04-26 | 1984-04-26 | Mikrobiologisches verfahren zur herstellung von anthracyclin-derivaten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO851655L true NO851655L (no) | 1985-10-28 |
Family
ID=6234422
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO851655A NO851655L (no) | 1984-04-26 | 1985-04-25 | Mikrobiologisk fremgangsmaate til fremstilling av antracyklin-derivater. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR920009515B1 (no) |
| AT (1) | AT388175B (no) |
| CA (1) | CA1247028A (no) |
| DE (1) | DE3415544A1 (no) |
| ES (1) | ES8603576A1 (no) |
| FI (1) | FI851613L (no) |
| GR (1) | GR851003B (no) |
| HU (1) | HU195537B (no) |
| MX (1) | MX7305E (no) |
| NO (1) | NO851655L (no) |
| PT (1) | PT80357B (no) |
-
1984
- 1984-04-26 DE DE19843415544 patent/DE3415544A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-04-19 HU HU851527A patent/HU195537B/hu unknown
- 1985-04-24 FI FI851613A patent/FI851613L/fi not_active Application Discontinuation
- 1985-04-24 CA CA000479936A patent/CA1247028A/en not_active Expired
- 1985-04-24 ES ES542523A patent/ES8603576A1/es not_active Expired
- 1985-04-25 MX MX851153U patent/MX7305E/es unknown
- 1985-04-25 KR KR1019850002800A patent/KR920009515B1/ko active IP Right Grant
- 1985-04-25 GR GR851003A patent/GR851003B/el unknown
- 1985-04-25 NO NO851655A patent/NO851655L/no unknown
- 1985-04-25 AT AT0124185A patent/AT388175B/de active
- 1985-04-26 PT PT80357A patent/PT80357B/pt not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES542523A0 (es) | 1985-12-16 |
| CA1247028A (en) | 1988-12-20 |
| AT388175B (de) | 1989-05-10 |
| HUT37818A (en) | 1986-02-28 |
| PT80357A (de) | 1985-05-01 |
| KR850007613A (ko) | 1985-12-07 |
| ES8603576A1 (es) | 1985-12-16 |
| FI851613L (fi) | 1985-10-27 |
| KR920009515B1 (ko) | 1992-10-17 |
| ATA124185A (de) | 1988-10-15 |
| FI851613A0 (fi) | 1985-04-24 |
| HU195537B (en) | 1988-05-30 |
| GR851003B (no) | 1985-11-25 |
| MX7305E (es) | 1988-04-29 |
| PT80357B (de) | 1987-02-11 |
| DE3415544A1 (de) | 1985-11-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1151218A3 (ru) | Способ получени антибиотика-макролида | |
| Keller-Juslen et al. | Tetronomycin, a novel polyether of unusual structure | |
| NO160011B (no) | Mikrobiologisk fremgangsmaate for fremstilling av antracyklin-derivater. | |
| NO135318B (no) | ||
| KR100311067B1 (ko) | 콜히치노이드화합물들을그와상응하는3-글리코실유도체로만드는생물학적변환과정 | |
| NO851655L (no) | Mikrobiologisk fremgangsmaate til fremstilling av antracyklin-derivater. | |
| Furumai et al. | STUDIES ON THE BIOSYNTHESIS OF BASIC 16-MEMBERED MACROLIDE ANTIBIOTICS, PLATENOMYCINS. III PRODUCTION, ISOLATION AND STRUCTURES OF PLATENOLIDES I AND II | |
| KR101116424B1 (ko) | 콜키시노이드 화합물들의 생체내변환방법 | |
| KR100670413B1 (ko) | 루스쿠스 아쿨레아투스 스테로이드 배당체 유도체의제조방법 | |
| EP0083019A2 (en) | Process for optically active anthracycline glycosides, the novel 4-deoxy-aclacinomycins A and B and pharmaceutical preparations | |
| KR20010030710A (ko) | 콜히콘 화합물로부터 효소법에 의한 대응하는 3-글리코실유도체로의 변형방법 | |
| NO852758L (no) | 1-hydroksy-cytorodiner, en mikrobiologisk fremgangsmaate til deres fremstilling, og deres anvendelse som cytostatika | |
| US4001246A (en) | Derivatives of 24-methylene-14a-aza-d-homo-cholestadienes | |
| US4923403A (en) | Microbiological process for degradation of steroids | |
| Maatooq et al. | Microbial transformation of cucurbitacin E 2-O-β-D-glucopyranoside | |
| TW200525036A (en) | Microbial method for hydrolysis and oxidation of androst-5-ene and pregn-5-ene steroid esters | |
| KR970001001B1 (ko) | I-디옥시만노딜리마이신의 제법 | |
| US3780026A (en) | Biochemical aldosterone synthesis | |
| ASAI et al. | MICROBIOLOGICAL HYDROXYLATION OF STEROID IX. HYDROXYLATION OF STEROID BY SYNCEPHALASTRUM RACEMOSUM.(2) | |
| Albrecht et al. | Transformation of 12‐deoxycardenolids with Streptomyces purpurascens | |
| JPS63188695A (ja) | エリスロマイシンｂ誘導体およびその製造方法 | |
| EP0284358A1 (en) | Novel anti-tumor compounds, method for the preparation thereof, and pharmaceutical preparations containing them | |
| JPH02257887A (ja) | ストレプトミセス属菌からの新規アングサイクリノンおよびその製造方法 | |
| HU204575B (en) | Process for producing 1-methyl-1,4-androstadiene-3,17-dion | |
| JPS6351395A (ja) | 抗生物質ｓｆ−２４１５物質およびその製造法 |