NO820394L - Fremgangsmaate ved fremstilling av nye apovincamolderivater - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår nye apovincaminolderivater, en fremgangsmåte for fremstilling av disse og farmasøytiske preparater inneholdende disse.

Ifølge en side ved oppfinnelsen er det tilveiebragt nye apovincaminolderivater av generell formel I,

nemlig apovincaminol-3<1>,4',5<1->trimethoxy-benzoat, av formel Ia 9-nitro-apovincaminol-3451-trimethoxy-benzoat av formel Ib og 11-nitro-apovincaminol-3<1>,4<1>,5'-trimethoxy-benzoat av formel Ic

og syreaddisjonssalter derav.

1 " 2

I generell formel I betegner enten både R og R hydrogen, eller en av symbolene R 1 og R 9 betegner hydrogen og den andre betegner nitro.

Syreaddisjonssaltene av forbindelsen av generell formel I kan dannes med uorganiske eller organiske syrer.

Fra saltene dannet med uorganiske syrer er hydrokloridene, sulfatene og.fosfatene særlig anvendbare, mens blant saltene dannet med organiske syrer er hydrogentartratene, succinatene, citratene og ascorbatene særlig anvendbare.

Det er kjent at apovincaminol og dets acetat utviser en effekt på coronar-arterien (fransk patentskrift 2 035 784). Det er også kjent at apovincaminolbenzoat ut viser generelle, vasodilaterende egenskaper (ungarsk patentskrift 166 476; CA 82, 129 279. v (1975)) og at esterene av apovincaminol dannet med alkancarboxylsyrer med 3-12 carbon-atomer utviser cerebral vasodilaterende effekt (ungarsk patentskrift 171 662, det tilsvarende US patentskrift 4 108 996 og BR patentskrift 26 32 118).

Således utviser alle de kjente estere av apovincaminol-vasotrop effekt. På den annen side inhiberer de nye forbindelser enzymaktiviteten av fosfodiesterase og kan anvendes i første rekke ved behandling av hudsykdommer forbundet med den patologiske celledeling og ved en profylakse av nye tilfeller av slike sykdommer.

Sykdommer forbundet med patologisk celledeling av epidermis er relativt hyppige og innbefatter noen få % av be-folkningen. Disse sykdommer kan være av både godartet og ond-artet karakter slik som psoriasis atopias dermatitis, primær kontakt dermatitis, baso- og spinocellulær carcinoma, inchthyosi-s , premalign.hyperceratosis, lys fremkalt ceratosisk, acne og seborrhoeas dermatitis. Enkelte sykdommer oppstår bare i mennesker mens andre både i mennesker og dyr.

Da enkelte av hudsykdommene forbundet med patologisk celledeling (f.eks. psoriasis) ikke oppstår hos dyr, kan aktiviteten av forbindelsene mot psoriasis sannsynliggjøres bare indirekte i dyreforsøk.

Voorhees et al. (Arch. Perm. 104, 359-365, (1971)) har funnet at den patologiske celledeling ledsages av ned-settelsen av nivået av cycliske adenozinmonofosfat (c-AMP). Det er kjent at c-AMP dannes under virkningen av adenylcyclase og spaltes av fosfodiesterase. Voorhees lyktes i å påvirke psoriasis med midler som stimulerte virkningen av adenylcyclase (slik som nor-epinefrin) eller inhiberte funksjonen av fosfodiesterase (f.eks. papaverin).

Ved planlegning av modellforsøkstesten staret man ut fra den antagelse at angivelsen av Voorhees er relevant og også at det gjelder det motsatte tilfelle. Hvis det således kan vises at en viss forbindelse inhiberer funksjonen av fosfodiesterase gjør dette det sannsynlig på en indirekte måte at angitte forbindelse er egnet for behandling av hudsykdommer

forbundet med den patologiske celledeling.

Denne antagelse viste seg å. være korrekt: Forbindelser som utviste fosfodiesteraseinhiberende aktivitet i in vitro-tester viste seg å være aktive, ved behandling av psoriasis i kliniske forsøk.

Foreliggende modelltester ble utført ved hjelp av fosfodiesterase isolert fra dyrekroppsvev (rottehjerne, oksehjerne, oksehjerte). Enzymet ble isolert etter metoden ifølge J. Schroder og H. V. Richenberg (Biochem. Biophys. Acta 302, 50 (1973)), det isolerte fosfodiesterase ble renset ved metoden beskrevet ved J. G. Hardman og E. W. Sutherland (J. Biol. Chem. 240, 3704 (1965)) og til slutt ble aktiviteten av det rensede enzym målt ved radioisotopmetoden ifølge G. Poch in nærvær av et overskudd av tritiert c-AMP (10,1 millimol c-AMP substrat fra hvilket 3H-c-AMP er 2,59 K Bq) i et inkuberingssystem først uten inhibitor og deretter i nærvær av apovincaminol-3 *,4',5'-trimethoxy-benzoat-derivat som inhibitor etter en inkuberingsperiode på. 2 0 minutter (N. S. Arch. Pharmacol. 268, 272 (1979)). Fra testforbindelsen ble det fremstilt en 1 millimolar løsning og til det inkuberte enzympreparat ble varierende mengder tilsatt, ved hjelp av angitte løsning slik at konsentrasjonen av. testforbindelsen

-7

i den inkuberte prøve skulle tilsvare henholdsvis 5x10 ,

1 x 10~<6>, 5 x 10~<6>, 1 x 10<-5>, 5 x 10~<5>og 10~<4>mol/liter.

Den vandige løsning av forbindelsen anvendt ved sammenlig-ningen (papaverin) ble tilsatt til enzymet fremstilt på lignende måte.

Aktiviteten av kontrollen (enzymløsningen ikke inneholdende noen inhibitorer) ble satt til 100 %, mens aktiviteten av løsningene inneholdende forbindelsen av generell formel I og papaverin ble uttrykt som prosenten av kontrollen. Resultatene målt på enzymet isolert fra rottehjerne er oppført i etterfølgende tabell.

Resultatene på enzym isolert fra oksehjerne og oksehjerte ble målt på lignende måte. Under anvendelse av de erholdte :> resultater ble enzymaktiviteten nedtegnet mot"logaritmen av-enzyminitibitorkonsentrasjonen (uttrykt' i ymol). Konsentrasjonen av enzyminhibitoren som nedsetter enzymaktiviteten med 50 % (I5Q) ble avlest fra kurven. De erholdte resultater er oppført i etterfølgende tabell.

Det fremgår ifra den ovenfor angitte tabell at over enzymet isolert fra oksehjerte og rottehjerne var de nye forbindelser 33-50 og 4,5 - 9 ganger mer aktive enn papaverin anvendt som referanseforbindelse.

De første kliniske tester ble utført med topiske preparater inneholdende den aktive bestanddel (salve, krem, løsning, tinctur, pasta, aerosol). Kremer inneholdende 2 %, 1 %, 0,5 %, 0,25 % og 0,1 % av (-)-9-nitro- eller (-H11-nitro-apovincaminol-3',4',5',-trimethoxy-benzoat ble anvendt.

Pasienter som lider av psoriasis ble behandlet.

Et fundamentalt trekk ved utvelgelsen var at pasientene ikke mottok samtidig en systemisk behandling for deres hovedsykdom (f.eks. en immuno-undertrykkende, cytostatisk-eller glucocorti-coidal behandling).

Grupper bestående- av fem pasienter.ble hver under-søkt ved den såkalte plaque-metoden. En side av symmetriske hudlesjoner ble behandlet med kremen inneholdende den aktive bestanddel mens den andre side ble behandlet med placebo. De andre påvirkede hudoverflater på pasienten ble behandlet med andre topiske metoder - blant annet med en salve som generelt anvendes for .behandling av psoriasis, inneholdende fl umetha-son pivalat og salicylsyre, hvilken salve ble anvendt som re-feransesubstans.

Testen ble startet med. kremer med det høyeste innhold av aktiv bestanddel og ytterligere pasienter ble behandlet med en krem med det laveste innhold av.aktiv bestanddel, men som fremdeles var aktiv. Behandlingen ble utført i to uker,

to ganger pr. dag, i åpen bandasje.

Effekten ble vurdert ved observering av tre for-skjellige symptomer - inflammasjon, infiltrasjon og avskalling. Intensiteten av symptomene ble uttrykt ved følgende skala mellom 0 og 3

Symptomenene ble vurdert før behandling (I), etter en behandling i syv dager (II) og etter en behandling i fjorten dager (III). I den etterfølgende tabell er det gjennomsnittlige antall punkter (totalt antall punkter divi-dert med antall pasienter) angitt. En krem inneholdende 2 % . aktiv bestanddel ble anvendt.

Testforbindelse

Ifølge en annen side ved oppfinnelsen er det tilveiebragt en fremgangsmåte for fremstilling av de nye forbindelser av generell formel I hvori enten bå0 de R 1 og R 2 betegner hydrogen eller hvor en av symbolene R<1>og R 2er hydrogen og den andre er nitro, og farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav., hvilken fremgangsmåte er kjennetegnet ved at apovincaminol eller et syreaddisjonssalt derav omsettes med 3,4,5-trimethoxy-benzosyre eller et reaktivt derivat derav som er istand til å foreta acylering, hvorpå forbindelsen av formel Ia isoleres eller at.denne omdannes til et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt, eller om ønsket., at forbindelsen av formel. Ia nitreres og at blandingen av forbindelsen av formel Ib og Ic separeres.i de.to komponenter, og om ønsket, at en forbindelse av generell formel Ib eller Ic omdannes til et farmasøytisk akseptabelt, syreaddisjonssalt..

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen utføres fortrinnsvis i nærvær av et organisk.løsningsmiddel, i særdeleshet et klorert hydrocarbon eller et alifatisk keton eller pyridin, i særdeleshet i methylenklorid, kloroform eller aceton. Hvis et 3,4,5-trimethoxy^benzoylhalogenid anvendes som acyleringsmiddel utføres reaksjonen i nærvær av en ekvimolar mengde eller et lite overskudd av et. syrebindende middel. For dette formål kan f.eks. et alkalicarbonat, al-kalihydrogencarbonat eller organisk amin anvendes. Hvis 3,4,5-trimethoxy-benzosyre anvendes som acyleringsmiddel, ut-føres reaksjonen i nærvær av en katalytisk mengde av en syre.

(fortrinnsvis saltsyre eller svovelsyre) eller en aktivator av carboxylgruppen og/eller et dehydratiseringsmiddel. Carboxylgruppen kan aktiveres av en halogenert.fenol, fortrinnsvis pentaklorfenol. Som dehydratiseringsmiddel kan eksempelvis N,N'-dicyclohexylcarbodiimid anvendes. Acyleringen kan utføres ved en temperatur .på mellom -20°C og koke-punktet på reaksjonsblandingen, fortrinnsvis 20-60°C.

Forbindelsen av formel Ia kan isoleres fra reak-s jonsblandingen. ved ekstraksjon og/eller fordampning.

Det således erholdte produkt kan omdannes til et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt., Saltdannelsen kan utføres under anvendelse av uorganisk eller organisk, syre (f.eks. saltsyre, svovelsyre eller fosforsyre eller vinsyre, ravsyre, sitronsyre eller ascorbinsyre). Saltdannelsen utføres etter kjente metoder innen faget. Man kan gå frem ved å tilsette en løsning av syren i ethylether eller aceton til løsningen av basen. Saltdannelsen utføres ved en pH-verdi på 3-6.

_D_en^^aål^d£^-eriiold±Æ fjarbJjxdeXs-e^^av -Xa kan -nitreres om ønsket. Nitreringen kan fortrinnsvis utføres ved hjelp av konsentrert salpetersyre. Reaksjonen utføres fortrinnsvis i

iseddik som medium.' Nitreringen utføres fortrinnsvis under avkjøling, ved en temperatur på rundt 0°C. Når reaksjonen er avsluttet, nøytraliseres overskuddet av syren og blandingen av forbindelsen av formel Ib og Ic isoleres fra reaksjonsblandingen ved ekstraksjon og/eller fordampning.

Den således erholdte isomerblanding kan separeres

i de to komponenter. Separasjonen av isomerene kan fortrinnsvis utføres ved kromatografiske metoder.

Forbindelsene av formel Ib og Ic kan omdannes til deres farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter om ønsket ved de metoder som er beskrevet i forbindelse med fremstilling av syreaddisjonssaltene av forbindelsen av.formel Ia.

Ifølge et annet -trekk.-ved- oppfinnelsen er det tilveiebragt farmasøytiske preparater med fosfodiesteraseinhiberende effekt' og'som er anvendbar ved behandling av hudsykdommer forbundet med patologisk celledeling og.profylakse av nye angrep av slike sykdommer, hvilke preparater omfatter som aktiv bestanddel en forbindelse av generell formel I eller et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt derav og eventuelt ytterligere terapeutisk aktive forbindelser i blanding med -vanlige farmasøytiske bærere og/eller fortynningsmidler. Inneholdet av aktiv bestanddel i de.farmasøytiske preparater er fortrinnsvis 0,1 8,0 %, i særdeleshet.0,2 - 2,0 %. Preparatene kan eventuelt inneholde ytterligere farma-søytisk aktive forbindelser, slik som antibiotika, cytostatiske midler, prostaglandinger, ditranol, salicylsyre, tjære, anti-inflammatoriske midler, immunoundertrykkende midler, glucocorticoid og - når det gjelder preparater egnet for parenteral administrering - lokalbedøvende midler.. Som glucocorticoid kan fortrinnsvis teia^^olon~acetonid anvendes. Den aktive bestanddel kan fortrinnsvis bearbeides, i form av preparater for topisk bruk, slik som kremer, salver, løsninger, geleer, aerosoler, aerosolskum, klebende plastere, etc.

Den aktive bestanddel kan fortrinnsvis anvendes i form av basen, mens syreaddisjonssalter også anvendes.

Det foretrekkes å innarbeide den aktive bestanddel

i en krem som kan vaskes av.

Kremene kan fremstilles ved oppløsing av den aktive bestanddel i et. løsningsmiddel .av. alkoholtype,. fortrinnsvis i prepylenglycol eller ethylenglycol eller en blanding derav dannet med litt vann, hvorpå den således erholdte løsning blandes med en lett spredbar fettfase som er.hudforenlig.

Angitte fettfase kan omfatte cetylalkohol, stearylalkohol,,cetostearylalkohol, paraffinolje, glyserolmonostearat eller lignende.

Kremen kan også inneholde et emulgeringsmiddel - fortrinnsvis polyoxyethylensorbitan monooleat eller monostea-rat - og et konserveringsmiddel slik som benzosyrederivater, fortrinnsvis methyl-p-hydroxybenzoat.

Kremene kan fortrinnsvis inneholde. 0,25 - 2,0 % aktiv bestanddel, 45 - 50 % glycol, 23 - 27 % paraffinolje, 11 - 15 % stearylalkohol og eventuelt opp til 100 % av andre hjelpestoffer.

Den aktive bestanddel kan også formuleres i form

av en salve som ikke kan vaskes av med vann, ved innarbeidelse av den aktive bestanddel direkte i fettfasen.

Den aktive bestanddel kan også formuleres i form av en løsning eller tinctur som kan inneholde f.eks. 20 - 40 % propylenglycol eller dipropylenglycol, 4 0 - 55 % .96 %-ig ethanol og opp til 100 % destillert vann.

Aerosolformuleringene kan fremstilles ved tilsetning til løsningen aktive bestanddel i propylenglycol en fett-substans - f.eks. isopropylmyristat - og et drivmiddel (f.eks. freon).

Injekserbare løsninger for parenteral administrering, fortrinnsvis for subcutan eller intracutan administrering,

kan fremstilles ved oppløsning av et salt av den aktive bestanddel i en 0,72 %-ig vandig natriumkloridløsning, hvorpå

pH på løsningen justeres til 5.

De farmasøytiske preparater kan fremstilles etter kjente metoder innen den farmasøytiske industri. Man kan gå " f"rem ved""a "blande den aXtTve-Ee~sCahddéI"""og eventuelt' ytterligere terapeutisk aktive forbindelser med egnede inerte, ikke-toksiske, kjente farmasøytiske bærere og/eller additiver og bearbeide den således erholdte blanding til en form egnet for medisinsk bruk.

Dé etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1

Fremstilling av • (-,) -apovincaminol-3 ' , 4 '5' - trimethoxy- benzoat 3,10 g (10,1 millimol) (-)-apovincaminol ble løst

i 6 0 ml vannfri diklormethan, hvorpå 3,10 g. vannf ri natrium-carbonat og 2,50 g (10,9 millimol) 3,4,5-trimethoxy-benzoylklorid ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved rom-temperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble. fortynnet med 100 ml. vann, den organiske fase ble fraskilt og det vandige lag ekstrahert to ganger med 20 ml diklormethan hver gang.

De forente diklormethanfaser ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert hvorpå filtratet ble fordampet i vakuum. Det ble således erholdt 4,50 g av tittelforbindelsen, utbytte 89,1'%.

Brutto formel C3o<H>34<N>2°5<*>Molekylvekt 502,61.

-1 -1

IR spekter (film): u maks 1725 cm ( -C = 0) ; 1620 cm ( =C=C=)

NMR spekter (deuterkloroform): 6: 1,01 (t, 3H, CH3CH2~);

6: 3,72 (s, 6H, 2 x -OCH3); 6: 3,85 (s, 3H, -OCH-j) ; 6: 4,25

(s, 1H, utglødning) ; 6: 5,29 (s, 1H, -CH = ) ; 6: 5,4 (m, 2H,-OCH2)

6: 7,0 - 7,8 (m, 6H, aromatisk).

MS (m/e): 502(53), 432(100), 290(17), 261(41), 220(19),

216 (23) , 212 (18), 195(35).

(a)^<5>= -22,0°C(c = 0,7;, diklormethan).

Eksempel 2

Fremstilling av (-)- apovincaminol- 3', 4', 5'- trimethoxy- benzoat hydrogentartårat

Forbindelsen fremstilt ifølge eksempel 1 ble løst

i diethylether. Til løsningen ble tilsatt en mettet løsning av D-vinsyre i diethylether inntil utfellingen av hydrogen-tartaratsaltet og er fullstendig. Saltet ble filtrert fra og tørket. Smp.: 120-121°C. IR spekter: (KBr): u maks 1730 cm (-C=0); 1640-1665 cm"<1>(=C=C=).

(ct)p<5>-8,5° (c = 1; pyridin) . Molekylvekt: 652,7.

Eksempel 3

Fremstilling av ' (-)- 9- nitrd- apoviricaminol- 3', 4', 5'- trimethoxy-benzoat og (-)- 1T- nitro- apovincaminol- 3' , 4', 5'- trimethoxy-benzoat 5 g (-)-apovincaminol-3',4',5<1->trimethoxy-benzoat ble løst i 50 ml iseddik. Til den erholdte løsning ble det tilsatt en blanding av 20 ml iseddik og 10 ml konsentrert salpetersyre (d = 1,52) ved 0°C og under omrøring. Reaksjonsblandingen ble helt over i 350 mg iskaldt vann og pH ble justert til 9 med tilsetning av en 25 %-ig vandig ammonium-hydroxydløsning. Den alkaliske løsning ble ekstrahert først med 250 ml og deretter to ganger med 200 ml diklormethan hver gang. Den forenede organiske løsning ble tørket over vann-fritt natriumsulfat, ble filtrert og hvorpå filtratet ble fordampet til tørrhet i vakuum.

Den således erholdte isomerblanding ble separert i de to komponenter ved kromatografiske metoder under anvendelse av kiselgel 60 som adsorberingsmiddel.og en. 10:2 blanding av. benzen og aceton som fremkallende middel. Under disse be-tingelser er R^-verdien av 9-nitroforbindelsen større enn for 11-nitro-derivatet. Således ble det erholdt 1,7 g av 9-nitroforbindelsen og 1,8 g av 11-nitro-derivatet.

De fysikalske konstanter for (-)-9-nitro-apovincaminol-3',4',5'-trimethoxy-benzoat er som følger:

Smp.: 77-78°C. (a)D= -78,5° (c = 1; kloroform).

<1>H-NMR (CDC13): 6: 3,8 (s, 6H, 2 x CH30-); 6: 3,91 (s, 3H, 1 x CH30-) ; 6: 7,3 (d, 1H, H12); 6: 7,96 (d, 1H, H^) 6: 8,1 (d, 1H, H1Q).

De fysikalske konstanter for (-)-11-nitro-apovincaminol-3',4 *,5'-trimethoxybenzoat er som følger:

Smp.: 72-73°C. (a)D= -134,3° (c = 1; kloroform).

<1>H-NMR (CDC13): 6: 3,8 (s, 6H, 2 x CH30-); <5 : 3,9 (s, 3H,

1 x CH30-) ; 6: 7,56 (d, 1H, Hg) ; 6: 8,1 (d, 1H, H^); 6: 8,9

(d, 1H, H12).

Eksempel 4

Frem<s>tillin<g>av. 9- nitro- a<p>Ovincamindl-3',4'5'- trimethoxy-benzoat- hydrokloriddg 1 T- nitrorrapovincaminol- 3 ''-, 4 ' , 5' - tri methoxybenzoat- hydrdklorid

9-nitro- eller 11-nitro-apovincaminol-3',4',5'-trimethoxybenzoat fremstilt ifølge eksempel 3 ble løst i methanol og pH på løsningen ble justert ved tilsetning av en løsning av hydrogenklorid og methanol. Det dannede hydro-kloridsalt ble utfelt ved tilsetning av diethylether. Saltet ble filtrert fra, vasket og tørket. Hydrokloridet av 9-nitroderivatet smelter ved 144-150°C, mens. smeltepunktet på hydrokloridet av 11-nitro-derivatet er 141-144°C.

Eksempel 5

En krem med følgende sammensetning ble fremstilt:

Den aktive bestanddel ble oppløst i propylenglycol på et vannbad (bad-temperatur som ikke overskred 50°C). De andre komponenter ble oppvarmet inntil de smeltet og ble deretter avkjølt til 40-45°C under konstant omrøring.. Til smeiten ble løsningen av den aktive bestanddel tilsatt under omrøring og den således erholdte krem ble avkjølt under om-røring.

På analog måte ble kremer inneholdende 0,25 %,

0,5 %, 1,0 % og 1,5 % aktiv bestanddel fremstilt.

Den aktive bestanddel 9-nitro- eller 11-nitro-apovincaminol-3',4',5'-trimethoxybenzoat kan også anvendes.

Eksempel 6

En.krem med følgende sammensetning ble fremstilt:

Man gikk frem på analog måte som beskrevet i eksempel 5 med det unntak at de to aktive bestanddeler ble oppløst i propylenglycol. Som aktiv bestanddel kan det også anvendes 11-nitro-derivatet av apovincaminol-3',4<1>,5<1->tri-methoxybenzoat .

Eksempel 7

En tincturløsning med følgende sammensetning ble fremstilt:

Den ovenfor angitte formulering kan også fremstilles under anvendelse av det 11-nitro-derivatet som aktiv bestanddel.

Eksempel 8

En tincturløsning med følgende sammensetning ble fremstilt:

Eksempel 9

En aerosol med følgende sammensetning ble fremstilt:

Som aktiv bestanddel kan .9-nitro- eller 11-nitro-derivatet også anvendes.

Eksempel 10

Et aerosolskum med følgende.sammensetning ble fremstilt:

Claims (5)

1. Fremgangsmåte for«fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av generell formel I

i 2 hvori enten R og R begge betegner hydrogen eller en av 1 2 symbolene R og R er hydrogen og den andre er nitro, og far-masøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav, karakterisert ved at apovincaminol eller et syreaddisjonssalt derav omsettes med 3,4,5-trimethoxy-benzosyre eller et reaktivt derivat derav, hvorpå forbindelsen av formel Ia,

isoleres, eller at denne omdannes til et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt derav, eller om ønsket, at en er holdt forbindelse, av formel Ia nitreres, og at den erholdte blanding av forbindelsene av formlene Ib og Ic

...■. _.. _ _ v separeres i de to komponenter, og om ønsket, at en forbindelse av generell formel Ib eller Ic omdannes til et farma-søytisk akseptabelt syreaddisjonssalt.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det som acyleringsmiddel anvendes 3,4,5-trimethoxy-benzoylklorid.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at acyleringen utføres i nærvær av et organisk løsningsmiddel.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at nitreringen utføres i nærvær av iseddik.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 4, karakterisert ved ., at nitreringen utføres ved en temperatur rundt 0°C.