NO335825B1 - Fremgangsmåte for dyrking av celler som produserer IL-18BP og anvendelse derav - Google Patents

Fremgangsmåte for dyrking av celler som produserer IL-18BP og anvendelse derav Download PDF

Info

Publication number
NO335825B1
NO335825B1 NO20064379A NO20064379A NO335825B1 NO 335825 B1 NO335825 B1 NO 335825B1 NO 20064379 A NO20064379 A NO 20064379A NO 20064379 A NO20064379 A NO 20064379A NO 335825 B1 NO335825 B1 NO 335825B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
concentration ranging
medium
cells
insulin
cell culture
Prior art date
Application number
NO20064379A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20064379L (no
Inventor
Thierry Ziegler
Yehoshua Aloni
Orit Aharonovitz
Original Assignee
Ares Trading Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ares Trading Sa filed Critical Ares Trading Sa
Publication of NO20064379L publication Critical patent/NO20064379L/no
Publication of NO335825B1 publication Critical patent/NO335825B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0043—Medium free of human- or animal-derived components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/76—Undefined extracts from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/33—Insulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Abstract

Oppfinnelsen vedrører en prosess for kultivering av IL-18BP uttrykkene mammalske celler under serumfrie betingelser.

Description

Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse ligger innenfor feltet å dyrke mammalske celler under serumfrie kulturbetingelser. Spesielt vedrører den vekst av mammalske celler, slik som kinesiske hamster ovarie (CHO) celler. Cellene produserer et rekombinant protein kalt interleukin-18 bindende protein (IL-18BP).
Oppfinnelsens bakgrunn
Foreliggende oppfinnelse vedrører en prosess som anvender et serumfritt medium for vekst og vedlikehold av mammalske celler i kultur.
Cellekulturer er i dag meget brukt for produksjon av ulike biologiske aktive produkter, slik som virale vaksiner, monoklonale antistoffer, ikke-antistoff immunregulatorer, polypeptid vekstfaktorer, hormoner, enzymer, tumorspesifikke antigener etc. Disse produkter er fremstilt fra normale eller transformerte og genetisk modifiserte celler.
Ved dyrking av celler ble det tidligere brukt kulturmedium som var tilsatt serum, som fungerer som en universal næringskilde for vekst og vedlikehold av alle mammalske cellelinjer som produserer biologisk aktive produkter. Serum inneholder hormoner, vekstfaktorer, bærerproteiner, feste- og spredningsfaktorer, næringsstoffer, sporelementer etc. Kulturmedium inneholdt normalt opp til omtrent 10% animalsk serum, slik som føtalt bovinserum (FBS), også kalt føtalt kalveserum. (FCS).
Selv om serum er meget anvendt har det en rekke begrensninger. Det inneholder høye nivåer av en rekke proteiner med den begrensede mengden av det ønskede proteinet fremstilt av cellene. Disse proteinene som er avledet fra serumet må bli separert fra produktet i løpet av nedstrømsprosesser, slik som rensing av proteinene av interesse, noe som gjør prosessen vanskeligere og øker kostnadene.
Framkomsten av BSE (Bovine Spongiform Encephalopathy), en overførbar neuro-generativ sykdom fra kveg med lang latens eller inkuberingsperiode har vakt regulator-iske bekymringer vedrørende det å anvende dyreavledet serum i produksjon av biologisk aktive produkter.
Det er derfor et stort ønske å utvikle alternative medium som er frie for animalske kilder som stimulerer cellevekst og vedlikehold av celler ved produksjon av biologisk aktive produkter.
Generelt omfatter kulturmedium en rekke komponenter av ulike kategorier, slik som aminosyrer, vitaminer, salter, fettsyrer og andre forbindelser: - Aminosyrer: for eksempel US 6.048.728 (Inlow et al.) avslører at de følgende aminosyrer kan bli anvendt i cellekulturmedium: alanin, arginin, aspartat, cystein, glutamat, glutamin, glysin, histidin, isoleucin, leucin, lysin, metionin, fenyalanin, prolin, serin, tryptofan, tyrosin, treonin og valin. - Vitaminer: US 2003/0096414 (Ciccarone et al.) eller US 5.811.299 (Renner et al.) for eksempel beskriver at de følgende vitaminer kan bli anvendt i cellekulturmedium: biotin, pantotensyre, kolinklorid, folinsyre, myo-inositol, nikotinsyreamid, pyridoksin, riboflavin, vitamin Bl2, tiamin, putreskin. Salter: for eksempel US 6.399.381 (Blum et al.) avslører et medium omfattende CaCb, KC1, MgCh, NaCl, natriumfosfat enbasisk, natriumfosfat dibasisk, natrium selenitt, CuSCm, ZnCh-Et annet eksempel for et dokument som avslører uorganiske salter som kan bli anvendt i et kulturmedium er US 2003/0153042 (Arnold et al.), som beskriver et medium omfattende CaCb, KC1, MgCb, NaCl, natriumfosfat enbasisk, natriumfosfat dibasisk, CUCI2.2H2O, ZnCb. - Fettsyrer: fettsyrer som er kjent for å bli anvendt i medium er arakidonsyre, linolsyre, oljesyre, laurittsyre, myristinsyre, så vel som metyl-beta-cyklodekstrin, se f.eks. US 5.045.468 (Darfler). Det bør legges merke til at cyklodekstrin i seg selv ikke er et lipid, men at det har evnen til å danne et kompleks med lipider og er derfor anvendt for å løse lipider i cellekulturmediet.
Andre komponenter, spesielt anvendt i rammen av serumfri cellekulturmedium,
er forbindelser slik som glukose, glutamin, natriumpyruvat, insulin eller etanolamin (f.eks. EP 274 445), eller en beskyttende forbindelse, slik som Pluronic F68. Pluronic<®>F68 (også kjent som Poloxamer 188) er en blokk kopolymer av etylenoksid (EO) og propylenoksid (PO).
Standard basismedium er også kjent for fagmannen. Disse mediene inneholder allerede flere av mediumkomponentene som er nevnt ovenfor. Eksempler på slike medier som er meget anvendt er Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) eller Hams's medium.
For utvikling og levering av biologisk aktive produkter, slik som terapeutiske proteiner eller vaksiner, må store mengder produseres. Egnede celler som er meget anvendt ved produksjon av polypeptider viste seg å være kinesiske hamster ovarie (CHO) celler.
CHO celler ble først dyrket av Puck (J.Exp.Med. 108, 945,1958) fra en biopsi av en ovarie fra en kinesisk hunnhamster. Fra disse originale cellene ble en rekke sub-linjer klargjort med ulike karakteristika. En av disse CHO cellelinjene, CHO-K1, er prolin-påkrevende og er diploide med hensyn til dihydrofolat reduktase (DHFR) genet. En annen linje avledet fra denne cellelinjen er en DHFR manglende CHO cellelinje (CHO DUK Bl 1) (PNAS 77,1980,4216-4220), som erkarakterisert vedtap av DHFR funksjon som en konsekvens av en mutasjon i et DHFR gen og påfølgende tap av det andre genet.
Andre celler som ofte er anvendt for produksjon av proteiner som er ment for administrasjon til mennesker er humane cellelinjer, slik som den humane fibrosarkom cellelinje HT 1080 eller den humane embryonale nyrecellelinje 293.
Et terapeutisk protein av interesse er Interleukin-18 bindende protein (IL-18BP). IL-18BP er et løselig protein som har høy affinitet for IL-18. Det ble først isolert fra human urin, og den humane- og muse-cDNA, så vel som det humane genet ble klonet (Novick et al, 1999; WO 99/09063). Proteinet er blitt kalt IL-18 bindende protein (IL-18BP). Det internasjonale ikke-beskyttede navnet til IL-18BP er tadekinig alfa. IL-18BP er ikke det ekstracellulære domenet av en av de kjente IL-18 reseptorer, men et sekretert, naturlig sirkulerende protein. Det tilhører en ny familie av sekreterte proteiner, som videre inkluderer en rekke poksviruskodede proteiner (Novick et al, 1999). Urin-avledet, så vel som rekombinant IL-18BP binder spesifikt til IL-18 med høy affinitet og modulerer den biologiske affiniteten til IL-18. IL-18BP genet ble lokalisert til det humane kromosom 1 lql3, og intet ekson kodende for et transmembrandomene ble funnet i et 8,3kb genomisk sekvens. Fire spleisevari-aneter eller isoformer av IL-18BP frembrakt ved alternativ mRNA-spleising er blitt funnet i mennesker så langt. De ble kalt IL-18BP a, b, c og d, og deler den samme N-terminal, men med ulikheter i C-terminalen (Novick et al., 1999). Disse isoformer varierer i deres evne til å binde IL-18. Av de fire er IL-18BP isoformene a og c kjent for å ha nøytraliserende evne for IL-18. Human IL-18BP isoformer binder til murin IL-18. IL-18BP er blitt foreslått som et terapeutisk protein i en rekke sykdommer og lidelser, slik som psoriasis, Crohn's sykdom, reumatoid artritt, psoriatisk artritt, leverskade, sepsis, aterosklerose, iskemisk hjertesykdom, allergier etc, f.eks. beskrevet i WO 99/09063, WO 01/07480, WO 01/62285, WO 01/85201, WO 02/060479, WO 02/096456, WO) 03/080104, WO 02/092008, WO 02/101049, WO 03/013577.
Det er derfor et behov for en effektiv fremstillingsmetode for produksjon av IL-18BP i cellekultur, og fortrinnsvis en fremgangsmåte som er utført under serumfrie betingelser.
Oppsummering av oppfinnelsen
Den foreliggende oppfinnelse er basert på utviklingen av en fremgangsmåte for dyrking av celler i et kulturmedium som er fritt for animalske serumavledede komponenter og samtidig svært effektiv for cellevekst og vedlikehold av mammalsk cellekultur. Dyrking av cellene er utført for produksjon av proteiner i cellene.
I samsvar med foreliggende oppfinnelse produserer cellene IL-18BP eller de er blitt modifisert til å produsere IL-18BP. Proteinet kan bli isolert og renset fra cellekulturmediet (supernatant) og formulert i en farmasøytisk sammensetning ment for administrasjon til mennesker eller dyr. Følgelig vedrører et første aspekt av oppfinnelsen en fremgangsmåte for kultivering av celler som produserer IL-18BP som omfatter trinnet å dyrke cellene i et kulturmedium fritt for komponenter avledet fra animalsk serum hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l; Natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og
insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l.
Et andre aspekt av oppfinnelsen vedrører en prosess for produksjon av IL-18BP omfattende trinnet å dyrke cellene som uttrykker IL-18BP i et cellekulturmedium fritt for komponenter avledet fra animalsk serum hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l; natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og
insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l.
Et tredje aspekt av oppfinnelsen vedrører anvendelsen av et medium i henhold til oppfinnelsen for produksjon av et protein av interesse.
Et fjerde aspekt av oppfinnelsen vedrører anvendelsen av mediet ifølge oppfinnelsen for vekst av celler i kultur.
Et femte aspekt av oppfinnelsen vedrører anvendelsen av et medium i henhold til oppfinnelsen for vedlikehold av celler i kultur i produksjonsfasen av et polypeptid av interesse.
Kort beskrivelse av tegningene
Figur 1, IL-18BP uttrykkende CHO celler ble dyrket i suspensjon i serumfritt medium i samsvar med oppfinnelsen, med repeterte fortynninger med ferskt medium for en periode på 60 dager (n=10). Figur 1 viser den levedyktige celletettheten; Figur 2 viser kumulert levedyktige celler;
Figur 3 viser doblingstiden; og
Figur 4 viser glukose- og laktatkonsentrasjon i supernatanten.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Foreliggende oppfinnelse er basert på utvikling av en fremgangsmåte for vekst og vedlikehold av IL-18BP uttrykkende celler, og for produksjon av IL-18BP i et cellekulturmedium som er fritt for serumavledede komponenter.
Foreliggende oppfinnelse omfatter fremgangsmåte for dyrking av celler som produserer IL-18BP, kjennetegnet ved at den omfatter trinnet med å dyrke cellene i et kulturmedium som er fritt for komponenter avledet fra animalsk serum, hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L;
natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L;
selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L;
hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og
insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
Videre omfatter foreliggende oppfinnelse fremgangsmåte for produksjon av IL-18BP, kjennetegnet ved at den omfatter trinnet med å dyrke en celle som utrykker IL-18BP i et celle kulturmedium som er fritt for komponenter avledet fra animalsk serum, hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L;
natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L;
selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L;
hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og
insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
Omfattet av foreliggende oppfinnelse er også anvendelse av et cellekulturmedium for vekst av celler som utrykker IL-18BP i kultur, der mediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L;
natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L;
selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L;
hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og
insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
Videre omfatter oppfinnelsen anvendelse av et cellekulturmedium for produksjon av IL-18BP i celler som utrykker IL-18BP, der mediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L;
natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L;
selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L;
hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og
insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
Omfattet av oppfinnelsen er også anvendelse av et cellekulturmedium for vedlikehold av celler som utrykker IL-18BP i kultur, der mediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L;
natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L;
selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L;
hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og
insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg.
Følgelig vedrører foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for produksjon av IL-18BP omfattende trinnet med å kultivere en celle som uttrykker IL-18BP i et cellekulturmedium som er fritt for komponenter avledet fra animalsk serum, hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 700 til omtrent 1.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l;
natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000, foretrukket fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,003 til omtrent 0,02 mg/l, foretrukket fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og
insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, foretrukket fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l.
Oppfinnelsen vedrører videre en fremgangsmåte for kultivering av IL-18BP uttrykkende celler omfattende trinnet med å dyrke cellene i et cellekulturmedium fritt for komponenter avledet fra animalsk serum, hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 700 til omtrent 1.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l;
natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000, foretrukket fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,003 til omtrent 0,02 mg/l, foretrukket fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, foretrukket fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l.
Foretrukket omfatter fremgangsmåten videre trinnet med innsamling av medium omfattende proteinet av interesse.
I en videre foretrukket utførelsesform omfatter fremgangsmåten isolering av proteinet av interesse.
I en videre foretrukket utførelsesform omfatter prosessen videre å formulere det isolerte proteinet med en farmasøytisk akseptabel bærer for oppnåelse av en farmasøytisk sammensetning.
Et tredje aspekt av oppfinnelsen vedrører anvendelsen av et cellekulturmedium omfattende
asparagin i et konsentrasjonsonsområde fra omtrent 700 til omtrent 1.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l;
natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000, foretrukket fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,03 til omtrent 0,02 mg/l, foretrukket fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og
insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, foretrukket fra
omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l
for produksjon av polypeptidet av interesse.
Et fjerde aspekt av oppfinnelsen vedrører anvendelsen av et cellekulturmedium omfattende
asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 700 til omtrent 1.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l;
natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000, foretrukket fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,003 til omtrent 0,02 mg/l, foretrukket fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, foretrukket fra
omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l
for vekst av celler som uttrykker IL-18BP i kultur.
Et femte aspekt av oppfinnelsen vedrører anvendelsen av et cellekulturmedium omfattende
asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 700 til omtrent 1.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l;
natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000, foretrukket fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,003 til omtrent 0,02 mg/l, foretrukket fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, foretrukket fra
omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l
for vedlikehold av celler som uttrykker IL-18BP i kultur, f.eks. i produksjonsfasen av et polypeptid av interesse.
I samsvar med fremgangsmåtene og anvendelsene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter cellekulturmediet: asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 700 til omtrent 1.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l;
natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000, foretrukket fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,003 til omtrent 0,02 mg/l, foretrukket fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, foretrukket fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l.
I rammen av foreliggende oppfinnelse kan asparagin anvendes i et hvilket som helst konsentrasjonsområde fra omtrent 700 til 1.000 mg/l, f.eks. ved 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890, 895, 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 675, 980, 985, 990, 995, mg/l.
I rammen av foreliggende oppfinnelse kan natriumklorid bli anvendt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000 mg/l, f.eks. ved 2.100, 2.200, 2.300, 2.400,2.500,2.600, 2.700, 2.800, 2.900, 3.000, 3.100, 3.200, 3.300, 3.400, 3.500, 3.600, 3.700, 3.800, 3.900, 4.000, 4.100, 4.200, 4.300, 4.400,4.500,4.600, 4.700,4.800,4.900 mg/l.
I rammen av foreliggende oppfinnelse kan selenitt bli anvendt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,003 til omtrent 0,002 mg/l, f.eks. ved 0,0035, 0,004, 0, 0045, 0,005, 0,0055, 0,006, 0,0065, 0,007, 0,0075, 0,008, 0,0085, 0,009, 0,0095, 0,01,0,011, 0,012, 0,013, 0,014, 0,015, 0,016, 0,017, 0,018, 0,019, 0,02 mg/l.
I rammen av foreliggende oppfinnelse kan hvetehydrolysat bli anvendt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, f.eks. ved 3.500,4.000,4.500, 5.00, 5.500, 6.000, 6.500, 7.000, 7.500, 8.000, 8.500, 9.000, 9.500, 9.600, 9.700, 9.800, 9.900, 10.000, 10.100, 10.200, 10.300, 10.400, 10.500,10.600,10.700, 10.800, 10.800, 11.000,11.500,12.000,12.500, 13.000,13.500,14.000,14.500,15.000, 15.500, 16.000,16.500,17.000,18.000, 18.500,19.000,19.500, mg/l.
I rammen av foreliggende oppfinnelse kan insulin bli anvendt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, f.eks. ved 1,25,1,5, 1,75,2,2,25,2,5,2,75, 3, 3,25, 3,5, 3,75,4,4,25,4,5,4,75,5, 5,25, 5,5, 5,75, 6, 6,25, 6,5, 6,75, 7, 7,25, 7,5, 7,75, 8, 8,25, 8,5, 8,75 mg/l.
Som vist i eksemplene nedenfor viste fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen som anvender et medium omfattende disse komponenter innen de indikerte områder utmerket cellevekst og vedlikehold over en forlenget tidsperiode.
Dyrkingstrinnet i fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan bli utført i hvilket som helst egnet miljø, slik som Petri-skåler, T-flasker eller rulleflasker, men foretrukket i beholdere som har større volum slik som f.eks. en bioreaktor. T-flasker og rulleflasker er spesielt egnet for vekst av celler, og for proteinproduksjon er cellene foretrukket vedlikeholdt i en bioreaktor.
Cellene som anvendes innen rammen av de ulike aspekter av foreliggende oppfinnelse er fortrinnsvis mammalske celler. De kan være av human eller animalsk opprinnelse. Eksempler på mammalske celler som kan bli dyrket i fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer, for eksempel 3T3 celler, COS celler, human osteosarkomceller, MRC-5 celler, BHK celler, VERO celler, CHO celler, rCHO-tPA celler, RCHO - Hep B overflateantigenceller, HEK 293 celler, rHEK 293 celler, rC127 - Hep B overflateantigenceller, normal humane fibroplastceller, stromaceller, hepatocyttceller, PER. C6 celler og humane permanent amniocytiske celler. Eksempler på hybdridom som kan bli dyrket i fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer, f.eks. DA4.4 celler, 123A celler, 127A celler, GAMMA celler og 67-9-B celler.
Det er meget foretrukket å dyrke en kinesisk hamster ovarieceller (CHO celle) i samsvar med foreliggende oppfinnelse.
Cellene dyrket i samsvar med foreliggende oppfinnelse kan vokse i suspensjon eller, for forankringsavhengige celler, bli festet til et fast støttemiddel. Mikrobærere og Fibra-Cel<®>plater kan bli anvendt i mammalske cellekulturer ved vekst av forankringsavhengige celler og er blant de etablerte teknologiske plattformene for industriell produksjon av proteiner (se f.eks. Bohak et al. 1987; Petti et al. 1994).
I rammen av fremgangsmåtene og anvendelsene av foreliggende oppfinnelse er asparagin fordelaktig omfattet som asparagin.H20 (TLC 99%, hvor TLC betyr tynnsjiktkromatografi).
Selenitt kan f.eks. være omfattet i mediet som natriumselenitt.
Hvetehydrolysat er en planteavledet komponent som er en del av mediet ifølge oppfinnelsen som er basert på det faktum at celler også kan anvende aminosyrer som er i peptidform. Peptidene kan variere i størrelse fra to aminosyrer til mange aminosyrer. Peptider som er avledet ved hydrolyse av proteiner er en supplerende kilde av aminosyrer i en form som støtter overlegen vekst av en rekke cellelinjer/typer.
Insulin som blir anvendt i rammen av mediet ifølge oppfinnelsen kan være avledet fra hvilken som helst kilde og art såfremt det støtter vekst og vedlikehold av den spesielle cellelinje eller celletype som er dyrket i nevnte medium. Foretrukket er insulin rekombinant. Det er videre foretrukket at insulinet er avledet fra den arten som tilsvarer den arten hvor cellelinjen eller celletypen er avledet fra, eller at det er humant insulin.
Foretrukket konsentrasjonsområde er forbindelsene i mediet som blir anvendt i fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er som følger: Asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 810 til omtrent 850 mg/l, mest
foretrukket omtrent 830.
- Natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.400 til omtrent 3.600 mg/l, mest foretrukket omtrent 3.500 mg/l.
Selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,01 til omtrent 0,012 mg/l, mest
foretrukket omtrent 0,0110 mg/l.
Hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 8.000 til omtrent 12.000
mg/l, mest foretrukket omtrent 10.000 mg/l.
Insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3 til omtrent 5 mg/l, mest foretrukket omtrent 4 mg/l.
I en foretrukket utførelsesform omfatter mediet videre glukose i et konsentrasjonsområde fra omtrent 500 til omtrent 5.500 mg/l, foretrukket omtrent 1.000 mg/l eller omtrent 4.500 eller omtrent 5.000 mg/l.
I en videre foretrukket utførelsesform omfatter mediet en eller flere aminosyrer. Aminosyrene er valgt fra alanin, arginin, aspartat, cystein, glutamat, glysin, histidin, isoleucin, leucin, lysin, metionin, fenyalanin, prolin, serin, tryptofan, tyrosin, treonin og valin, men ikke glutamin.
I en alternativ utførelsesform er glutamin tilsatt til mediet. Glutamin kan fortrinnsvis bli tilsatt til mediet i løpet av cellekultiveringen (f.eks. vekst, vedlikehold, produksjons-modus).
Fortrinnsvis omfatter mediet i henhold til oppfinnelsen videre vitaminer. Vitaminer som er foretrukket i mediet ifølge oppfinnelsen er valgt fra biotin, pantotensyre, kolinklorid, folinsyre, myo-inositol, nikotinsyreamid, pyridoksin, riboflavin, vitamin Bl2, tiamin og putreskin.
Mediet ifølge oppfinnelsen omfatter fordelaktig videre uorganiske salter og sporelementer. Ionene er foretrukket Ca<2+>, K<+>,MG<2+>,Na<+>, Cl", fosfat, Cu<2+>, Zn<2+>. Saltene og sporelementene er foretrukket valgt fra vannfritt CaCb, KC1, vannfritt MgCb, NaCl, natriumfosfat monobasisk, natriumfosfat dibasisk, CuCl2.2H2= og ZnCb.
Fortrinnsvis omfatter mediet ifølge oppfinnelsen videre en buffer. En rekke buffere kan bli anvendt innen rammen av mediet av oppfinnelsen, slik som natrium bikarbonat buffer, tris, BES (N,N-bis(2-hydroksyetyl)-2-aminoetansulfonsyre), glysin buffer eller liknende. En zwitterionisk buffer er spesielt anvendelig i mediet ifølge oppfinnelsen. En foretrukket zwitterionisk buffer som kan anvendes er HEPES (N-(2-hydroksyetyl)piperazin-N'-2-etansulfonsyre) i syreform.
I enda en videre foretrukket utførelsesform omfatter mediet videre fettsyrer. Slike fettsyrer er foretrukket valgt fra arakidonsyre, linolsyre, oljesyre, lauriksyre, myristinsyre og cyklodekstrin, som i seg selv ikke er et lipid, men gjør det mulig å løse lipider i mediet. Cyklodekstrin er foretrukket metyl-beta-cyklodekstrin.
Videre hydrolysater kan bli anvendt innen rammen av foreliggende oppfinnelse såfremt de ikke er avledet fra animalske kilder. Foretrukket kan mediet ifølge oppfinnelsen videre omfatte et soyahydrolysat.
Det er også foretrukket at mediet ifølge oppfinnelsen videre omfatter steroider, slik som f.eks. kortison eller hydrokortison, og/eller ytterligere energikilder, slik som f.eks. pyruvat, f.eks. natrium-pyruvat, og/eller et beskyttende reagens, slik som Pluronic F68.
I rammen av fremgangsmåtene og anvendelsene ifølge oppfinnelsen kan ethvert grunnleggende serumfritt medium bli anvendt såfremt de følgende forbindelser er tilstede: asparagin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 700 til omtrent 1.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/l;
natriumklorid i et konsentrasjonsområde fra omtrent 2.000 til omtrent 5.000, foretrukket fra omtrent 3.000 til omtrent 4.500 mg/l;
selenitt i et konsentrasjonsområde fra omtrent 0,003 til omtrent 0,02 mg/l, foretrukket fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/l;
hvetehydrolysat i et konsentrasjonsområde fra omtrent 3.000 til omtrent 20.000 mg/l, foretrukket fra omtrent 5.000 til omtrent 15.000 mg/l; og insulin i et konsentrasjonsområde fra omtrent 1 til omtrent 8 mg/l, foretrukket fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/l
Eksempler på kjente grunnleggende serumfrie medier er listet opp nedenfor:
Fremgangsmåtene og anvendelsene ifølge oppfinnelsen gjør det foretrukket mulig å produsere et polypeptid av interesse.
Polypeptidet av interesse kan være f.eks. et naturlig sekretert protein, et vanlig cytoplasmisk protein, et vanlig transmembranprotein eller et humant eller et humanisert antistoff. Når proteinet av interesse er et normalt cytoplasmisk eller et normalt transmembranprotein er proteinet foretrukket blitt modifisert slik at det er løselig.
Polypeptidet av interesse kan være av enhver opprinnelse. Foretrukket er polypeptidene av interesse av human opprinnelse, og enda mer foretrukket er proteinene terapeutiske proteiner.
Proteinet av interesse kan være et hormon, et cytokinbindende protein, et interferon, en løselig reseptor eller et antistoff.
Terapeutiske proteiner som kan bli fremstilt ifølge en metode i henhold til foreliggende oppfinnelse inkluderer, f.eks. korionisk gonadotropin, folikkelstimulerende hormon, lutropin-koriogonadotropisk hormon, tyroidstimulerende hormon, humant veksthormon, interferoner (f.eks. interferon beta-la, interferon beta-lb), interferon reseptorer (f.eks. interferon gamma reseptor), TNF reseptorer p55 og p75, TACI-Fc fusjonsproteiner, interleukiner (f.eks. interleukin-2, interleukin-11), interleukinbindende proteiner (f.eks. interleukin-18 bindende protein), anti-CDlla antistoff, erytropoietin, granulocytt kolonistimulerende faktor, granulocytt-makrofag kolonistimulerende faktor, hypofyse-peptidhormoner, menopausal gonadotropin, insulinliknende vekstfaktorer (f.eks. somatomedin-C), keratinocytt vekstfaktor, glial cellelinje-avledet neurotrofisk faktor, trombomodulin, basisk fibroblast vekstfaktor, insulin, Faktor VIII, somatropin, benmorfogenetisk protein-2, plateavledet vekstfaktor, hirudin, epoietin, rekombinant LFA-3/lgGl fusjonsprotein, glukocerebrosidase og muteiner, fragmenter, løselige former, funksjonelle derivater, fusjonsproteiner derav.
Polypeptidet kan fortrinnsvis bli valgt fra gruppen bestående av korionisk gonadotropin (CG), folikkelstimulerende hormon (FSH), lutropin-koriogonadotropisk hormon (LH), tyroidstimulerende hormon (TSH), humant veksthormon (hGH), interferoner (f.eks. interferon beta-la, interferon beta-lb), interferon reseptorer (f.eks. interferon gamma reseptor), TNF reseptorer p55 og p75, interleukiner (f.eks. interleukin-2, interleukin-11), interleukinbindende proteiner (f.eks. interleukin-18 bindende protein), anti-CDl la antistoff, og muteiner, fragmenter, løselige former, funksjonelle derivater, fusjonsproteiner derav.
Videre polypeptider av interesse inkluderer f.eks. erytropoietin, granulocytt kolonistimulerende faktor, granulocytt-makrofag kolonistimulerende faktor, hypose peptid-hormoner, menopausal gonadotropin, insulinliknende vekstfaktor (f.eks. somatomedin- C), keratinocytt vekstfaktor, glial cellelinje-avledet neurotrofisk faktor, trombomodulin, basisk fibroblast vekstfaktor, insulin, Faktor VIII, somatropin, benmorfogenetisk protein-2, plateavledet vekstfaktor, hirudin, epoietin, rekombinant LFA-3/lgGl fusjonsprotein, glukocerebrosidase og muteiner, fragmenter, løselige former, funksjonelle derivater, fusjonsproteiner derav.
Skulle proteinet av interesse bli formulert med en farmasøytisk akseptabel bærer er resultatet av fremgangsmåten en farmasøytisk sammensetning.
Definisjonen av farmasøytisk akseptable bærere er ment å omfatte enhver bærer, som ikke interfererer med effektiviteten til den biologiske aktiviteten av den aktive ingrediens, og at den ikke er toksisk overfor verten hvor den skal administreres. For eksempel ved parenteral administrasjon kan den aktive komponenten bli formulert i en enhetsdoseform for injeksjon i bærere, slik som saltløsning, dekstroseløsning, serumalbumin og Ringer' s løsning.
Den farmasøytiske sammensetningen formulert ifølge oppfinnelsen kan så bli administrert til et individ på en rekke ulike måter. Administreringsmåtene inkluderer intra-dermal, transdermal (f.eks. i forsinket avgivelsesformuleringer), intramuskulær, intra-peritoneal, intravenøs, subkutan, oral, intrakranial, epidural, topisk, rektal og intranasal vei. Enhver annen terapeutisk effektiv administrasjonsvei kan bli anvendt, for eksempel absorpsjon gjennom epitel- eller endotelvev eller genterapi hvor et DNA-molekyl som koder for den aktive reagens er administrert til pasienten (f.eks. via en vektor), som fører til at den aktive reagens blir uttrykt og sekretert in vivo. I tillegg kan proteinene ifølge oppfinnelsen bli administrert sammen med andre komponenter av biologisk aktive forbindelser slik som farmasøytisk akseptable overflateaktive forbindelser, bindemidler, bærere, fortynnere og vehikkel.
Ved parenteral (f.eks. intravenøs, subkutan, intramuskulær) administrering kan det aktive protein bli formulert som en løsning, suspensjon, emulsjon eller lyofilisert pulver i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel parenteral vehikkel (f.eks. vann, salt-løsning, dekstroseløsing) og tilsetningsstoffer som opprettholder isotonisitet (f.eks. mannitol) eller kjemisk stabilitet (f.eks. bevaringsreagens og buffere). Formuleringen er sterilisert med allment kjente teknikker.
Fremgangsmåtene og anvendelsene av foreliggende oppfinnelse tilsikter produksjon av interleukin-18 bindende protein (IL-18BP). IL-18BP kan være nativ, dvs. naturlig forekommende IL-18BP. Foretrukket er det fremstilte IL-18BP av human opprinnelse. Siden IL-18BP er et løselig, sekretert protein, er det avgitt i cellekultur supernatanten, enten ved dets naturlige signalpeptid eller ved et heterologt signalpeptid, dvs. et signalpeptid avledet fra et annet sekretert protein som kan være mer effektivt i det spesielle ekspresjonssystemet som blir anvendt.
Termen "IL-18 bindende protein" er anvendt heri synonymt med "IL-18BP". Denne termen vedrører IL-18 bindende proteiner, slik som de definert i WO 99/09063 eller i Novick et al., 1999. Termen IL-18BP inkluderer spleisevarianter og/eller isoformer av IL-18 bindende proteiner, slik som den definert i Kim et al., 2000, spesielt i humane isoformer a og c av IL-18BP. Termen "IL-18BP", som anvendt heri, inkluderer videre muteiner, funksjonelle derivater, aktive fraksjoner, fuserte proteiner, sirkulærpermuterte proteiner og slats av IL-18BP som definert i WO 99/09063. IL-18BP, som er fremstilt ved anvendelse av mediet ifølge foreliggende oppfinnelse, er foretrukket glukosylert.
Som anvendt heri refererer termen muteiner til analoger av IL-18BP eller analoger av et viralt IL-18BP hvor en eller flere av aminosyreresiduene til naturlig IL-18BP eller viral IL-18BP er byttet ut med forskjellige aminosyreresiduer, eller er deletert, eller en eller flere aminosyreresiduer er tilført til den naturlige sekvensen av et IL-18BP, eller et viralt IL-18BP, uten vesentlig å endre aktiviteten til det resulterende produkt sammenliknet med villtype IL-18BP eller viral IL-18BP. Disse muteiner er fremstilt ved kjente synteser og/eller ved sete-dirigert mutagenese-teknikker, eller enhver annen kjent teknikk egnet derav.
Muteiner i samsvar med foreliggende oppfinnelse inkluderer proteiner kodet for av en nukleinsyre, slik som DNA eller RNA som hybridiserer til DNA eller RNA, som koder for IL-18BP eller koder for viralt IL-18BP (WO 99/09063) under stringente betingelser. Termen "stringente betingelser" refererer til hybridisering og etterfølgende vaskings-betingelser, som de som er kjent innen teknikken vanligvis refererer til som "stringent". Se Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, supra, Interscience, N.Y., §§6.3 og 6,4 (1987,1992). Uten begrensning inkluderer eksemplet på stringente betingelser, vaskebetingelser som ligger 12-20°C under det kalkulerte Tm til hybridet som studeres, f.eks. 2 x SSC og 0,5% SDS i 5 minutter, 2 x SSC og 0,1% SDS i 15 minutter; 0,1 x SSC og 0,5% SDS ved 37°C i 30-60 minutter og deretter, 0,1 x SSC og 0,5% SDS ved 68°C i 30-60 minutter. De som er kjent innen teknikken vil også forstå at stringente betingelser også er avhengig av lengden til DNA-sekvensen, oligonukleotidprobene (slik som 10-40 baser) eller de blandede oligonukleotidprobene. Hvis blandede prober er anvendt er det foretrukket å anvende tetrametyl ammoniumklorid (TMAC) istedenfor SSC. Se Ausubel, supra.
Identitet gjenspeiler forhold mellom to eller flere polypeptidsekvenser eller to eller flere polynukleotidsekvenser, bestemt ved å sammenlikne sekvensene. Generelt refererer identitet til en eksakt nukleotid til nukleotid eller aminosyre til aminosyresammenheng mellom henholdsvis de to polynukleotider eller to polypeptidsevkensene over lengden av sekvensene som blir sammenliknet.
For sekvenser hvor det ikke er et eksakt samsvar kan en %-identitet bli bestemt. Generelt blir de to sekvensene som skal bli sammenliknet stilt på linje for å gi en maksimal korrelasjon mellom sekvensene. Dette kan inkludere å sette inn «gaps» i en eller begge sekvenser for å øke graden av likhet. En %-identitet kan bli bestemt over hele lengden av hver av de sekvensene som blir sammenliknet (såkalt global sammenlikning), som er spesielt fordelaktig for sekvenser med samme eller veldig nær lengde, eller over korte definerte lengder (såkalte lokale sammenlikninger), som er mer egnet for sekvenser med ulik lengde.
Metoder for å sammenlikne identitet og homologi av to eller flere sekvenser er vel kjent innen teknikken. For eksempel, programmer tilgjengelig i Wisconsin sekvensanalyse-pakken, versjon 9.1 (Devereux J et al., 1984), for eksempel programmene BESTFIT og GAP, kan bli anvendt for å bestemme %-identitet mellom to polynukleotider og %-identitet og %-homologi mellom to polypeptidsekvenser. BESTFIT anvender "lokal homologi"-algoritmen til Smith og Waterman (1981) og finner den beste regionen med likhet mellom to sekvenser. Andre programmer for bestemmelse av identitet og/eller likheten mellom sekvenser er også kjent innen teknikken, for eksempel BLAST-familien av programmer (Altschul S F et al, 1990, Altschul S F et al, 1997, tilgjengelig gjennom hjemmesiden til NCBI med adressen www. ncbinlm. nih. gov) og FASTA (Pearson W R, 1990).
Ethvert slikt mutein har foretrukket en sekvens av aminosyrer som er tilstrekkelig lik den til IL-18BP, eller tilstrekkelig den til viral IL-18BP, slik at de har hovedsakelig lik aktivitet som IL-18BP. En av aktivitetene til IL-18BP er dets evne til å binde IL-18. Såfremt muteinet har vesentlig bindingsaktivitet til IL-18 kan den bli ansett å ha vesentlig lik aktivitet som IL-18BP. Slik kan det bli bestemt om et gitt mutein har vesentlig samme aktivitet som IL-18BP ved utføring av rutineeksperimentering omfattende anvendelsen av et slikt mutein, f.eks. i et enkelt sandwich-konkurrerende assay for bestemmelse om det binder til en passende merket IL-18, slik som radio-immunoassay eller ELISA assay.
I en foretrukket utførelsesform har ethvert slikt mutein minst 40% identitet eller homologi med sekvensen til enten et IL-18BP eller et viralt kodet IL-18BP homolog, som definert i WO 99/09063. Mer foretrukket har det minst 50%, minst 60%, minst 70%, minst 80%, eller enda mer foretrukket minst 90% eller 95% identitet eller homologi dertil.
Foretrukne endringer av muteinene i samsvar med foreliggende oppfinnelse er det som er kjent som konservative substitusjoner. Konservative aminosubstitusjoner av IL-18BP polypeptider eller proteiner eller viral IL-18BP-er kan inkludere tilsvarende aminosyrer innen en gruppe som har tilstrekkelig like fysiokjemiske egenskaper, slik at substitusjoner mellom gruppemedlemmer vil bibeholde den biologiske funksjonen av molekylet (Grantham, 1974). Det er også klart at innskudd og deleteringer av aminosyrer kan bli utført i de ovenfor nevnte sekvenser uten å endre deres funksjon, spesielt hvis innskud-dene eller deleteringene kun involverer noen få aminosyrer, f.eks. under tretti, og foretrukket under ti, og ikke fjerne eller forflytte aminosyrer som er kritiske til en funksjo-nell konformasjon, f.eks. cysteinresiduer. Proteiner og muteiner fremstilt ved slike deleteringer og/eller innskudd ligger innenfor området av foreliggende oppfinnelse.
Termen "fusert protein" viser til et polypeptid som omfatter IL-18BP, eller et viralt IL-18BP, eller et mutein eller fragment derav, fusert med et annet protein, som f.eks. har en forlenget oppholdstid i kroppsvæsker. Et IL-18BP eller et viralt IL-18BP kan derfor bli fusert til andre proteiner, polypeptider eller liknende, f.eks. et immunoglobulin eller et fragment derav.
Som "aktive fraksjoner" av et IL-18BP, eller et viralt IL-18BP, muteiner og fuserte
proteiner, dekker foreliggende oppfinnelse ethvert fragment eller forløpere av polypep-tidkjedene til proteinmolekylet alene eller sammen med assosierte molekyler eller rester koplet dertil, f.eks. sukker eller fosfatreseter, eller aggregater av proteinmolekyler eller sukkerrester i seg selv, forutsatt at nevnte fraksjon har vesentlig lik aktivitet som IL-18BP. Sekvensene til IL-18BP og dets spleisevarianter/isoformer kan bli hentet fra WO 99/09063 eller fra Novick et al, 1999, så vel som fra Kim et al., 2000.
Skulle IL-18BP ifølge oppfinnelsen bli anvendt som en farmasøytisk sammensetning kan en slik farmasøytisk sammensetning bli anvendt ved behandling og/eller forebygging av en rekke sykdommer eller lidelser. Slike sykdommer eller lidelser er foretrukket IL-18 medierte lidelser. Spesielt kan renset IL-18BP bli anvendt ved behandling og/eller forebygging av psoriasis, psoriatisk artritt, Crohn's sykdom, reumatoid artritt, leverskade så som alkoholisk lever cirrhose, sepsis, aterosklerose, iskemiske hjertesyk-dommer, allergier, i spesiell forsinket type hypersensitivitet og lukket hodeskade, som beskrevet i WO 99/09063, WO 01/07480, WO 01/62285, WO 01/85201, WO 02/060479, WO 02/096456, WO) 03/080104, WO 02/092008, WO 02/101049, WO 03/013577.
Selv om oppfinnelsen er blitt beskrevet i form av spesifikke utførelsesformer derav vil det være forstått at ytterligere modifikasjoner kan utføres.
Referanse til kjente metodetrinn, konvensjonelle metodetrinn, kjente metoder eller konvensjonelle metoder er ikke på noen måte en innrømmelse av at aspekter, beskrivelse eller utførelsesform av foreliggende oppfinnelse er oppdaget, tenkt på eller foreslått i relevant teknikk.
Eksempel 1: Vekst av IL-18BP uttrykkende CHO-celler i serum fritt medium
1. 1. Fremstilling av serumfritt medium ( SFM) gitt navnet " SM- 005"
Cellekulturmediet som ble brukt i eksperimentene beskrevet under punkt 1.2. var et medium tilpasset til å inneholde følgende komponenter med følgende konsentrasjoner: - Asparagin i en konsentrasjon på 830 mg/l;
Natriumklorid i en konsentrasjon på 3.500 mg/l;
Selenitt i en konsentrasjon på 0,0110 mg/l;
Hvetehydrolysat i en konsentrasjon på 10.000 mg/l; og
- Insulin i en konsentrasjon på 4 mg/l.
Dette mediet inneholdt også 4,5 g/l med glukose. Hvis mediet er anvendt i produksjons-metode kan glukosekonsentrasjonen bli redusert til lg/l. Mediet inneholdt videre alle aminosyrer med unntak av glutamin. Vitaminer, salter, fettsyrer, HEPES som en buffer, Pluronic F68, hydrokortison, natriumpyruvat og soyahydrolysat var også til stede i dette mediet. Mediet er identifisert nedenfor som SM-005.
1. 2. Vekst av celler i suspensjon
T-flasker eller rulleflasker ble inokulert med celler fra en IL-18BP uttrykkende og sekreterende CHO-klon som tidligere er blitt etablert. Disse celler vokser i suspensjon og ble først forøket. I løpet av celleforøkningsprosessen ble cellene dyrket i suspensjon og systematisk fortynnet med definert volum av ferskt SM-005 medium på bestemte dager. For overvåkning ble celletetthet, glukose- og laktatkonsentrasjon målt ved hvert fortynningstrinn (se figurer).
På dag 0 ble en ampulle fra tidligere etablert Master Cell Bank tint. Cellene som stam-mer fra denne ampullen ble så inokulert i en 75 cm<2>vevskulturflaske (TCF 75 cm<2>) i et totalt volum på 30 ml med ferskt SM-005 medium. Den resulterende cellekonsentra-sjonen i TCF var omtrent 0,2 millioner celler/ml. Til slutt ble TCF innkubert under rystelse ved temperatur på 37°C.
På dag 4 ble kulturen overført til en TCF 175 cm<2>og fortynnet til 120 ml ved å tilsette ferskt og forhåndsoppvarmet medium SM-005.
På dag 8 ble kulturen overført til en RB850 cm2 og fortynnet til 400 ml ved å tilsette ferskt og forvarmet medium SM-005.
På dag 12 ble kulturen fortynnet til 1.200 ml (fortynningsratio på 1/3) ved å tilsette ferskt og forvarmet medium SM-005 og deretter splittet i 3 rulleflasker RB850 cm<2>, hver inneholdende 400 ml.
På dag 16 ble kulturen fortynnet til 4.800 ml (fortynningsratio på 1/4) ved tilsetning av ferskt og forvarmet medium og deretter splittet i 6 RB 1750 cm<2>, hver inneholdende 800 ml.
Fra dag 20 (D20, D23, D26, ... opp til D62) ble RB 1750 cm<2>fortynnet på en repeter-ende måte hver 3. dag, med hensyn til en fortynningsratio på 1/4. På hver fortynningsdag ble det nødvendige antall av RB 1750 cm<2>frembrakt (minst 4 RB 1750 cm<2>). Følgelig ble hver RB 1750 cm<2>fortynnet fra 800 ml til 3.200 ml ved tilsetning av ferskt og forvarmet medium og deretter splittet til 4 RB 1750 cm<2>, hver inneholdende 800 ml. For inokulering i bioreaktor ble det nødvendige antall av rulleflasker høstet på en fortynningsdag (mellom D20 og D60), samlet i en steril glassflaske og overført til bioreaktorer.
Figur 1 til 4 viser data målt i løpet av inokulum fremstillingsprosessen (n=10). Figur 1 viser levedyktig celletetthet, figur 2 kumulerte levedyktige celler, figur 3 doblingstiden og figur 4 glukose- og laktatkonsentrasjonen i supernatanten.
Etter en dag 20 tilpasningsfase er vekst av cellene jevn og reproduserbar i det serumfrie medium. De stabile vekstbetingelsene gjør det mulig lett å subdyrke celler ved repeterbar fortynning med en ratio 1:4 over en forlenget tidsperiode (testet opp til dag 62, som vist i figur 1, 2, 3, 4).
Referanser
1. Altschul S F et al, J Mol Biol, 215,403-410, 1990.
2. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, supra, Interscience,
N.Y., §§6.3 og 6.4 (1987, 1992).
3. Altschul S F et al., Nucleic Acids Res., 25:389-3402,1997.
4. Bohak et al. 1987 Bohak Z, Kadouri A et al. (1987) "Novel anchorage matrices for suspension culture of mammalian cells "Biopolymers. 26 Suppl:S205-213.
5. Devereux J et al, Nucleic Acids Res, 12, 387-395, 1984.
6. Grantham et al, Science, Vol. 185, pp. 862-864 (1974).
7. Kim SH, Eisenstein M, Reznikov L, Fantuzzi G, Novick D, Rubinstein M, Dinarello CA, Structural requirements of six naturally occurring isoforms of the IL-18 binding protein to inhibit IL-18. Proe Nati Acad Sei U S A 2000;97:1190-1195. 8. Novick, D, Kim, S-H, Fantuzzi, G, Reznikov, L, Dinarello, C, and Rubinstein,
M (1999). Immunity 10, 127-136.
9. Pearson, Methods Enzymol. 1990; 183-63-98.
10. Petti SA, Lages AC et al. (1994) "Three-dimensional mammalian cell growth on nonwoven polyester fabric disks" Biotechnol Prog. 10(5):548-550.
11. Puck et al., J.Exp.Med. 108, 945,1958

Claims (21)

1. Fremgangsmåte for dyrking av celler som produserer IL-18BP,karakterisert vedat den omfatter trinnet med å dyrke cellene i et kulturmedium som er fritt for komponenter avledet fra animalsk serum, hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L; natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L; selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L; hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
2. Fremgangsmåte for produksjon av IL-18BP,karakterisertv e d at den omfatter trinnet med å dyrke en celle som utrykker IL-18BP i et celle kulturmedium som er fritt for komponenter avledet fra animalsk serum, hvori cellekulturmediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L; natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L; selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L; hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
3. Fremgangsmåten ifølge krav 1 eller 2,karakterisertv e d at den videre omfatter trinnet med å samle inn mediet som omfatter proteinet av interesse.
4. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat den videre omfatter isolering av proteinet av interesse.
5. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat den videre omfatter formulering av det isolerte protein med en farmasøytisk akseptabel bærer for oppnåelse av en farmasøytisk sammensetning.
6. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat cellene er kinesiske hamster ovarie (CHO) celler.
7. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter glukose i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 500 til omtrent 5500 mg/L.
8. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter aminosyrer valgt fra alanin, arginin, aspartat, cystein, glutamat, glysin, histidin, isoleucin, leucin, lysin, metionin, fenylalanin, prolin, ferin, tryptofan, tyrosin, treonin og valin, men ikke glutamin.
9. Fremgangsmåten ifølge krav 8,karakterisert vedat mediet videre omfatter glutamin.
10. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter vitaminer valgt fra biotin, kolinklorid, folinsyre, myo-inositol, nikotinsyreamid, pyridoxin, riboflavin, vitamin Bl2, tiamin ogputrescin.
11. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter salter valgt fra CaCb, KC1, MgCb, Natrium fosfat, CuCb og ZnCb.
12. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter en buffer.
13. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter fettsyrer valgt fra arakidonsyre, linolsyre, oljesyre, leuronsyre og murinsyre.
14. Fremgangsmåten ifølge ethvert av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter cyclodextrin.
15. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter soya hydrolysat.
16. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter hydrokortison.
17. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter et beskyttende reagens, spesielt Pluronic F68.
18. Fremgangsmåten ifølge ethvert av de foregående krav,karakterisert vedat mediet videre omfatter pyrovat.
19. Anvendelse av et cellekulturmedium for vekst av celler som utrykker IL-18BP i kultur, der mediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L; natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L; selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L; hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
20. Anvendelse av et cellekulturmedium for produksjon av IL-18BP i celler som utrykker IL-18BP, der mediet omfatter: asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L; natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L; selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L; hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
21. Anvendelse av et cellekulturmedium for vedlikehold av celler som utrykker IL-18BP i kultur, der mediet omfatter: Asparagin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 800 til omtrent 900 mg/L; natriumklorid i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 3000 til omtrent 4500 mg/L; selenitt i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 0,005 til omtrent 0,015 mg/L; hvete hydrolysat i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 5000 til omtrent 15000 mg/L; og insulin i en konsentrasjon som strekker seg fra omtrent 2,5 til omtrent 6 mg/L.
NO20064379A 2004-03-01 2006-09-27 Fremgangsmåte for dyrking av celler som produserer IL-18BP og anvendelse derav NO335825B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP04100800 2004-03-01
US55117104P 2004-03-08 2004-03-08
PCT/EP2005/050855 WO2005083058A1 (en) 2004-03-01 2005-02-28 Use of a serum-free cell culture medium for the production of il-18bp in mammalian cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20064379L NO20064379L (no) 2006-10-19
NO335825B1 true NO335825B1 (no) 2015-02-23

Family

ID=34928882

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20064379A NO335825B1 (no) 2004-03-01 2006-09-27 Fremgangsmåte for dyrking av celler som produserer IL-18BP og anvendelse derav

Country Status (19)

Country Link
US (1) US7553665B2 (no)
EP (1) EP1720979B1 (no)
JP (1) JP4713567B2 (no)
AT (1) ATE375385T1 (no)
AU (1) AU2005217154B2 (no)
CA (1) CA2554238C (no)
CY (1) CY1107014T1 (no)
DE (1) DE602005002829T2 (no)
DK (1) DK1720979T3 (no)
ES (1) ES2292127T3 (no)
HR (1) HRP20070474T3 (no)
IL (1) IL177493A (no)
ME (1) ME01218B (no)
NO (1) NO335825B1 (no)
PL (1) PL1720979T3 (no)
PT (1) PT1720979E (no)
RS (1) RS50531B (no)
SI (1) SI1720979T1 (no)
WO (1) WO2005083058A1 (no)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101111103B1 (ko) * 2000-02-10 2012-02-13 아보트 러보러터리즈 사람 인터류킨-18에 결합하는 항체 및 이를 제조하고 사용하는 방법
SI1601776T1 (sl) 2003-03-11 2008-10-31 Serono Lab Ekspresijski vektorji, ki vsebujejo mcmv ie2 promotor
CA2524403C (en) * 2003-05-13 2013-07-09 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Active variants of the il-18 binding protein and medical uses thereof
ES2354160T3 (es) * 2003-10-21 2011-03-10 Merck Serono Sa Secuencia de adn mínima que actúa como un aislante de cromatina, y su uso en la expresión de proteínas.
ATE360647T1 (de) * 2003-11-05 2007-05-15 Ares Trading Sa Verfahren zur aufreinigung von il-18-bindendem protein
US7968684B2 (en) 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
ATE408616T1 (de) * 2004-06-29 2008-10-15 Ares Trading Sa Verfahren zur aufreinigung von il-18-bindendem protein
AU2005322353B2 (en) * 2004-12-23 2011-09-01 Medimmune, Llc Non-tumorigenic MDCK cell line for propagating viruses
US7691611B2 (en) * 2005-06-03 2010-04-06 Ares Trading S.A. Production of recombinant IL-18 binding protein
JP5091127B2 (ja) * 2005-06-10 2012-12-05 アレス トレーディング ソシエテ アノニム Ｉｌ−１８結合タンパク質の精製のための方法
RU2487935C2 (ru) 2006-09-15 2013-07-20 Медиммун, Ллк. Линии клеток почки собаки майдин-дэрби (mdck), поддерживающие рост вирусов до высоких титров, и способ применения этих клеток в биореакторе
HUE037633T2 (hu) 2007-07-09 2018-09-28 Genentech Inc Diszulfidkötés redukciójának megelõzése polipeptidek rekombináns elõállítása során
EP2344634A4 (en) * 2008-09-24 2012-08-29 Medimmune Llc METHODS OF CELL CULTURE, AND PROPAGATION AND PURIFICATION OF VIRUSES
DE102008051574A1 (de) * 2008-10-14 2010-04-15 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Verfahren zur Herstellung von Interferon-beta und deren Varianten
SG10201901417UA (en) * 2009-08-11 2019-03-28 Genentech Inc Production of proteins in glutamine-free cell culture media
SG11201700023WA (en) * 2014-07-16 2017-02-27 Heartseed Inc New undifferentiated stem cell removal and myocardial purification and refinement culture medium
CN106676053B (zh) * 2016-12-31 2020-08-25 山东甲骨文生物科技有限公司 一种具有广泛适应性的低血清细胞培养基及其制备方法
CN107574150A (zh) * 2017-09-06 2018-01-12 万向东方生物科技有限公司 一种无血清免疫细胞培养基及其制备方法
CN108102982B (zh) * 2018-02-07 2021-06-01 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 麦氏弧菌的真空冷冻干燥保护剂及其保藏方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0249579A (ja) * 1988-02-29 1990-02-19 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 培地
JP3649249B2 (ja) 1995-02-23 2005-05-18 クエスト・インターナショナル・サービシーズ・ビー・ブイ 組織および細胞培養用ペプチド
DE69738806D1 (de) * 1996-10-10 2008-08-14 Invitrogen Corp Tierzellkulturmedium mit pflanzlichen nährstoffen
IL121860A0 (en) * 1997-08-14 1998-02-22 Yeda Res & Dev Interleukin-18 binding proteins their preparation and use
US6406909B1 (en) * 1998-07-10 2002-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Serum-free medium for culturing animal cells
AT409379B (de) * 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
UA74557C2 (en) 1999-09-03 2006-01-16 Applied Research Systems A method for producing a heterologous secreted protein from chinese hamster ovaries cells grown on microcarriers
US20030096414A1 (en) * 2001-03-27 2003-05-22 Invitrogen Corporation Culture medium for cell growth and transfection
EP1520008B1 (en) * 2002-07-09 2012-09-05 Baxter International Inc. Animal protein free media for cultivation of cells
SI1601776T1 (sl) * 2003-03-11 2008-10-31 Serono Lab Ekspresijski vektorji, ki vsebujejo mcmv ie2 promotor
CA2524403C (en) 2003-05-13 2013-07-09 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Active variants of the il-18 binding protein and medical uses thereof
ES2354160T3 (es) * 2003-10-21 2011-03-10 Merck Serono Sa Secuencia de adn mínima que actúa como un aislante de cromatina, y su uso en la expresión de proteínas.
ATE360647T1 (de) 2003-11-05 2007-05-15 Ares Trading Sa Verfahren zur aufreinigung von il-18-bindendem protein
ATE408616T1 (de) * 2004-06-29 2008-10-15 Ares Trading Sa Verfahren zur aufreinigung von il-18-bindendem protein
US7691611B2 (en) 2005-06-03 2010-04-06 Ares Trading S.A. Production of recombinant IL-18 binding protein
JP5091127B2 (ja) 2005-06-10 2012-12-05 アレス トレーディング ソシエテ アノニム Ｉｌ−１８結合タンパク質の精製のための方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2005083058A1 (en) 2005-09-09
AU2005217154A1 (en) 2005-09-09
ES2292127T3 (es) 2008-03-01
HRP20070474T3 (en) 2007-11-30
CA2554238C (en) 2013-02-12
US20070196895A1 (en) 2007-08-23
US7553665B2 (en) 2009-06-30
ME01218B (me) 2013-06-20
ATE375385T1 (de) 2007-10-15
EP1720979A1 (en) 2006-11-15
JP2007525228A (ja) 2007-09-06
DK1720979T3 (da) 2007-12-10
RS50531B (sr) 2010-05-07
IL177493A (en) 2010-12-30
JP4713567B2 (ja) 2011-06-29
EP1720979B1 (en) 2007-10-10
IL177493A0 (en) 2006-12-10
SI1720979T1 (sl) 2007-12-31
DE602005002829D1 (de) 2007-11-22
PT1720979E (pt) 2007-10-25
CY1107014T1 (el) 2012-09-26
DE602005002829T2 (de) 2008-07-10
PL1720979T3 (pl) 2008-03-31
NO20064379L (no) 2006-10-19
AU2005217154B2 (en) 2010-02-18
CA2554238A1 (en) 2005-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO335825B1 (no) Fremgangsmåte for dyrking av celler som produserer IL-18BP og anvendelse derav
JP7034991B2 (ja) 改良型細胞培養培地
KR101540124B1 (ko) 항노화 화합물을 사용하는 단백질의 생산 방법
EP2152856B1 (en) Improved feed media
KR101733834B1 (ko) 소형 펩티드를 포함하는 세포 배양 배지
CN102827905B (zh) 多肽的生产
US6924124B1 (en) Feeding strategies for cell culture
US7067279B1 (en) Cell culture performance with betaine
JP6113653B2 (ja) 改良型細胞培養培地
NO344785B1 (no) Metode for å produsere TNFR-Ig i en storskala-produksjon cellekultur.
NO341236B1 (no) Fremgangsmåte for produksjon av veksthormon og anvendelse derav
KR20110060911A (ko) 고 역가 항체 생산
EA023193B1 (ru) Среда для культивирования клеток для экспрессии белков adamts
MX2010011356A (es) Metodos para la produccion mejorada de proteinas morfogeneticas de hueso.
CA3154940A1 (en) Concentrated perfusion medium
WO2008013809A1 (en) Cell culture methods
AU2017261523A1 (en) Cell culture medium for adamts protein expression
US20220333054A1 (en) Methods of perfusion culturing a mammalian cell
Siemensma et al. Towards an understanding of how protein hydrolysate supplements stimulate more efficient biosynthesis in cultured cells