CN107574150A

CN107574150A - 一种无血清免疫细胞培养基及其制备方法

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Publication number: CN107574150A
Application number: CN201710797665.3A
Authority: CN
Inventors: 高晨
Original assignee: Wanxiang Oriental Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Wanxiang Oriental Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2017-09-06
Filing date: 2017-09-06
Publication date: 2018-01-12

Abstract

本发明公开了一种无血清免疫细胞培养基，制成所述培养基主要包括氨基酸、维生素、矿物质、D‑葡萄糖、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、胰岛素、酚红、丙酮酸钠、转铁蛋白；本发明公开了另一种无血清免疫细胞培养基，还包括辅助因子红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇；本发明公开了另一种无血清免疫细胞培养基，还包括激活剂乙酰辅酶A、辅酶Q10、6‑磷酸葡萄糖和环磷酸腺苷。本发明的一部分实施例可以提高细胞表型阳性比例。

Description

一种无血清免疫细胞培养基及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种免疫细胞培养基，具体涉及一种无血清免疫细胞培养基，本发明还涉及其制备方法。

背景技术

树突细胞(Dendritic Cells，DC)，因其外形如神经细胞树突而得名，约占血液中白细胞总数的0.2％，但目前被认为是免疫系统中最具抗原呈递能力的细胞。2011 年美国人布鲁斯·博伊特勒、法国人朱尔斯·霍夫曼和加拿大人拉尔夫·斯坦曼因为“发现免疫系统激活的关键原理，革命性地改变我们大家对免疫系统的理解”而赢得诺贝尔生理学或医学奖。其中，斯坦曼所作贡献是发现免疫系统中“树突细胞”及其在适应性免疫反应，即以自身调控方式适应并清除体内微生物过程中的作用。 DC疫苗为代表的“细胞免疫疗法”，已经逐渐成为继手术、放疗、化疗后的第三种癌症治疗策略。

DC疫苗的临床应用需要DC数量达到一定的数量级，同时对DC中表型阳性细胞所占的比例也有要求，但是目前相关的研究缺乏，没有合适的培养基。

发明内容

针对上述问题，本发明提出了一种无血清免疫细胞培养基，具体如下：

一种无血清免疫细胞培养基，制成1L所述培养基主要包括如下重量份原料：

L-丙氨酸5-30份、L-精氨酸盐酸盐30-200份、L-天冬氨酸10-40份、 L-天冬氨酸水合物20-70份、L-胱氨酸盐酸盐20-100份、L-谷氨酸10-60份、 L-谷氨酰胺50-600份、L-组氨酸盐酸盐15-60份、L-异亮氨酸20-150份、L- 亮氨酸20-150份、L-赖氨酸盐酸盐10-200份、L-蛋氨酸5-50份、L-苯丙氨酸 5-100份、L-脯氨酸5-100份、L-丝氨酸5-60份、L-苏氨酸10-80份、L- 色氨酸1-20份、L-酪氨酸10-80份、L-缬氨酸1-100份、L-甘氨酸1-50份；矿物质：氯化钙50-200份、氯化钾250-500份、七水合硫酸镁50-300份、亚硒酸钠0.001-0.010份、氯化钠4000-8000份、磷酸二氢钠50-300份、碳酸氢钠 1000-5000份；

生物素0.05-0.5份、氯化胆碱0.1-20份、D-泛酸钙0.005-10份、叶酸 0.05-10份、肌醇1-50份、烟酰胺0.1-10份、核黄素0.1-0.5份、盐酸硫胺 0.05-5份、维他命B12 0.1-3.0份、盐酸吡哆醛0.1-5份；

D-葡萄糖1500-5000份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2000-3500份、胰岛素1-20份、酚红5-30份、丙酮酸钠50-200份、转铁蛋白1-20份。

优选的，每升所述培养基主要包括：

L-丙氨酸8-20份、L-精氨酸盐酸盐50-175份、L-天冬氨酸13-30份、L-天冬氨酸水合物30-56.8份、L-胱氨酸盐酸盐36-70份、L-谷氨酸14.7-45份、L- 谷氨酰胺100-484份、L-组氨酸盐酸盐21.88-45.8份、L-异亮氨酸30-105份、 L-亮氨酸30-105份、L-赖氨酸盐酸盐29-146份、L-蛋氨酸10-30份、L-苯丙氨酸15-66份、L-脯氨酸11.5-69份、L-丝氨酸10.5-42份、L-苏氨酸16-55 份、L-色氨酸3-12份、L-酪氨酸18-65份、L-缬氨酸5-55份、L-甘氨酸7-30 份；

氯化钙60-180份、氯化钾285-400份、七水合硫酸镁100-260份、亚硒酸钠0.003-0.007份、氯化钠5200-7400份、磷酸二氢钠85-210份、碳酸氢钠 1800-3300份；

生物素0.11-0.3份、氯化胆碱0.5-10份、D-泛酸钙0.01-4份、叶酸0.1-6份、肌醇5-25份、烟酰胺0.5-4份、核黄素0.15-0.4份、盐酸硫胺0.1-3份、维他命B12 0.5-1.4份、盐酸吡哆醛0.5-3份；

D-葡萄糖2000-4500份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2556-3158份、胰岛素6-15份、酚红7.2-20份、丙酮酸钠80-150份、转铁蛋白5-10份。

进一步优选的，每升所述培养基主要包括：

L-丙氨酸15份、L-精氨酸盐酸盐150份、L-天冬氨酸20份、L-天冬氨酸合物45份、L-胱氨酸盐酸盐50份、L-谷氨酸30份、L-谷氨酰胺250份、L-组氨酸盐酸盐30份、L-异亮氨酸65份、L-亮氨酸65份、L-赖氨酸盐酸盐90份、 L-蛋氨酸20份、L-苯丙氨酸40份、L-脯氨酸40份、L-丝氨酸25份、L-苏氨酸35份、L-色氨酸8份、L-酪氨酸40份、L-缬氨酸30份、L-甘氨酸20份；

氯化钙120份、氯化钾350份、七水合硫酸镁180份、亚硒酸钠0.005 份、氯化钠6300份、磷酸二氢钠150份、碳酸氢钠2500份；

生物素0.2份、氯化胆碱5份、D-泛酸钙1份、叶酸2份、肌醇15 份、烟酰胺2份、核黄素0.25份、盐酸硫胺1份、维他命B12 1.0份、盐酸吡哆醛1.5份；

D-葡萄糖3000份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2900份、胰岛素10份、酚红 15份、丙酮酸钠100份、转铁蛋白7份。

优选的，制成1L所述培养基还包括1-100mg的辅助因子，所述辅助因子包括 1-10重量份的红景天甙、1-10重量份的木犀草苷和0.1-1重量份的白藜芦醇。

进一步优选的，制成1L所述培养基包括10mg的辅助因子，所述辅助因子包括5重量份的红景天甙、5重量份的木犀草苷和0.5重量份的白藜芦醇。

优选的，制成1L所述培养基还包括0.1-10mg的激活剂，所述激活剂包括1-10 重量份的乙酰辅酶A、1-10重量份的辅酶Q10、1-10重量份的6-磷酸葡萄糖和0.1-1 重量份的环磷酸腺苷。

进一步优选的，制成1L所述培养基包括1mg的激活剂，所述激活剂包括5 重量份的乙酰辅酶A、5重量份的辅酶Q10、5重量份的6-磷酸葡萄糖和0.2重量份的环磷酸腺苷。

本发明还公开了一种无血清免疫细胞培养基的制备方法，主要包括以下步骤：

a取二分之一目标体积的去离子水，加入所述各维生素组分，搅拌均匀；

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

c依次加入所述各氨基酸组分、胰岛素和转铁蛋白，搅拌均匀；

d依次加入4-羟乙基哌嗪乙磺酸、酚红和丙酮酸钠，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用去离子水定容至目标体积。

本发明还公开了另一种无血清免疫细胞培养基的制备方法，主要包括以下步骤：

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

c1依次加入红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用去离子水定容至目标体积。

本发明还公开了又一种无血清免疫细胞培养基的制备方法，主要包括以下步骤：

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

c1依次加入红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇，搅拌均匀；

e1依次加入乙酰辅酶A、辅酶Q10、6-磷酸葡萄糖和环磷酸腺苷，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用去离子水定容至目标体积。

本发明的无血清免疫细胞培养基，各组分均为市售的产品，本发明的培养基可以根据需要用1mol/L的盐酸或氢氧化钠调节pH值。

本发明的无血清免疫细胞培养基的pH 7.2±0.2，渗透压在290±15mOsm/Kg，内毒素<0.30EU/ml，无细菌和真菌生长，支原体检测呈阴性。

本发明的一部分实施例可以提高细胞表型阳性比例。

具体实施方式

为详细说明本发明之技术内容、构造特征、所达成目的及功效，以下兹例举实施例详予说明。

实施例1

一种无血清免疫细胞培养基，制成1L所述培养基主要包括如下重量原料：

L-丙氨酸5mg、L-精氨酸盐酸盐30mg、L-天冬氨酸10mg、L-天冬氨酸水合物20mg、L-胱氨酸盐酸盐20mg、L-谷氨酸10mg、L-谷氨酰胺50mg、L- 组氨酸盐酸盐15mg、L-异亮氨酸20mg、L-亮氨酸20mg、L-赖氨酸盐酸盐10 mg、L-蛋氨酸5mg、L-苯丙氨酸5mg、L-脯氨酸5mg、L-丝氨酸5mg、 L-苏氨酸10mg、L-色氨酸1mg、L-酪氨酸10mg、L-缬氨酸1mg、L-甘氨酸 1mg；

氯化钙50mg、氯化钾250mg、七水合硫酸镁50mg、亚硒酸钠0.001 mg、氯化钠4000mg、磷酸二氢钠50mg、碳酸氢钠1000mg；

生物素0.05mg、氯化胆碱0.1mg、D-泛酸钙0.005mg、叶酸0.05mg、肌醇1mg、烟酰胺0.1mg、核黄素0.1mg、盐酸硫胺0.05mg、维他命B12 0.1 mg、盐酸吡哆醛0.1mg；

D-葡萄糖1500mg、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2000mg、胰岛素1mg、酚红5mg、丙酮酸钠50mg、转铁蛋白1mg；

余量为去离子水。

实施例2

L-丙氨酸30mg、L-精氨酸盐酸盐200mg、L-天冬氨酸40mg、L-天冬氨酸水合物70mg、L-胱氨酸盐酸盐100mg、L-谷氨酸60mg、L-谷氨酰胺600mg、 L-组氨酸盐酸盐60mg、L-异亮氨酸150mg、L-亮氨酸150mg、L-赖氨酸盐酸盐200mg、L-蛋氨酸50mg、L-苯丙氨酸100mg、L-脯氨酸100mg、L-丝氨酸 60mg、L-苏氨酸80mg、L-色氨酸20mg、L-酪氨酸80mg、L-缬氨酸100mg、L-甘氨酸50mg；

氯化钙200mg、氯化钾500mg、七水合硫酸镁300mg、亚硒酸钠0.010 mg、氯化钠8000mg、磷酸二氢钠300mg、碳酸氢钠5000mg；

生物素0.5mg、氯化胆碱20mg、D-泛酸钙10mg、叶酸10mg、肌醇50 mg、烟酰胺10mg、核黄素0.5mg、盐酸硫胺5mg、维他命B12 3.0mg、盐酸吡哆醛5mg；

D-葡萄糖5000mg、羟乙基哌嗪乙磺酸3500mg、胰岛素20mg、酚红30 mg、丙酮酸钠200mg、转铁蛋白20mg；

余量为去离子水。

实施例3

L-丙氨酸8mg、L-精氨酸盐酸盐50mg、L-天冬氨酸13mg、L-天冬氨酸水合物30mg、L-胱氨酸盐酸盐36mg、L-谷氨酸14.7mg、L-谷氨酰胺100mg、L- 组氨酸盐酸盐21.88mg、L-异亮氨酸30mg、L-亮氨酸30mg、L-赖氨酸盐酸盐 29mg、L-蛋氨酸10mg、L-苯丙氨酸15mg、L-脯氨酸11.5mg、L-丝氨酸10.5 mg、L-苏氨酸16mg、L-色氨酸3mg、L-酪氨酸18mg、L-缬氨酸5mg、L-甘氨酸7mg；

氯化钙60mg、氯化钾285mg、七水合硫酸镁100mg、亚硒酸钠0.003mg、氯化钠5200mg、磷酸二氢钠85mg、碳酸氢钠1800mg；

生物素0.11mg、氯化胆碱0.5mg、D-泛酸钙0.01mg、叶酸0.1mg、肌醇5 mg、烟酰胺0.5mg、核黄素0.15mg、盐酸硫胺0.1mg、维他命B12 0.5mg、盐酸吡哆醛0.5mg；

D-葡萄糖2000mg、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2556mg、胰岛素6mg、酚红7.2 mg、丙酮酸钠80mg、转铁蛋白5mg；

余量为去离子水。

实施例4

L-丙氨酸20mg、L-精氨酸盐酸盐175mg、L-天冬氨酸30mg、L-天冬氨酸合物56.8mg、L-胱氨酸盐酸盐70mg、L-谷氨酸45mg、L-谷氨酰胺484mg、L- 组氨酸盐酸盐45.8mg、L-异亮氨酸105mg、L-亮氨酸105mg、L-赖氨酸盐酸盐146mg、L-蛋氨酸30mg、L-苯丙氨酸66mg、L-脯氨酸69mg、L-丝氨酸 42mg、L-苏氨酸55mg、L-色氨酸12mg、L-酪氨酸65mg、L-缬氨酸55mg、L-甘氨酸30mg；

氯化钙180mg、氯化钾400mg、七水合硫酸镁260mg、亚硒酸钠0.007 mg、氯化钠7400mg、磷酸二氢钠210mg、碳酸氢钠3300mg；

生物素0.3mg、氯化胆碱10mg、D-泛酸钙4mg、叶酸6mg、肌醇25 mg、烟酰胺4mg、核黄素0.4mg、盐酸硫胺3mg、维他命B12 1.4mg、盐酸吡哆醛3mg；

D-葡萄糖4500mg、羟乙基哌嗪乙磺酸3158mg、胰岛素15mg、酚红20mg、丙酮酸钠150mg、转铁蛋白10mg；

余量为去离子水。

实施例5

L-丙氨酸15mg、L-精氨酸盐酸盐150mg、L-天冬氨酸20mg、L-天冬氨酸水合物45mg、L-胱氨酸盐酸盐50mg、L-谷氨酸30mg、L-谷氨酰胺250mg、L- 组氨酸盐酸盐30mg、L-异亮氨酸65mg、L-亮氨酸65mg、L-赖氨酸盐酸盐90mg、 L-蛋氨酸20mg、L-苯丙氨酸40mg、L-脯氨酸40mg、L-丝氨酸25mg、L-苏氨酸35mg、L-色氨酸8mg、L-酪氨酸40mg、L-缬氨酸30mg、L-甘氨酸20mg；

氯化钙120mg、氯化钾350mg、七水合硫酸镁180mg、亚硒酸钠0.005 mg、氯化钠6300mg、磷酸二氢钠150mg、碳酸氢钠2500mg；

生物素0.2mg、氯化胆碱5mg、D-泛酸钙1mg、叶酸2mg、肌醇15mg、烟酰胺2mg、核黄素0.25mg、盐酸硫胺1mg、维他命B12 1.0mg、盐酸吡哆醛1.5mg；

D-葡萄糖3000mg、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2900mg、胰岛素10mg、酚红15mg、丙酮酸钠100mg、转铁蛋白7mg；

余量为去离子水。

实施例6

实施例1-5无血清免疫细胞培养基的制备方法，主要包括以下步骤：

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用去离子水定容至目标体积。

实施例7

与实施例5的不同之处在于，制成1L所述培养基还包括1mg的辅助因子，所述辅助因子包括1/11.1mg红景天甙、10/11.1mg木犀草苷和0.1/11.1mg白藜芦醇。

实施例8

与实施例5的不同之处在于，制成1L所述培养基还包括100mg的辅助因子，所述辅助因子包括1000/12mg红景天甙、100/12mg木犀草苷和100/12mg白藜芦醇。

实施例9

与实施例5的不同之处在于，制成1L所述培养基还包括10mg的辅助因子，所述辅助因子包括50/10.5mg红景天甙、50/10.5mg木犀草苷和5/10.5mg白藜芦醇。

实施例10

实施例7-9无血清免疫细胞培养基的制备方法，主要包括以下步骤：

b加入所述个无机盐组分，搅拌均匀；

c1依次加入红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用去离子水定容至目标体积。

实施例11

与实施例9的不同之处在于，制成1L所述培养基还包括0.1mg的激活剂，所述激活剂包括1/22mg乙酰辅酶A、0.1/22mg辅酶Q10、0.1/22mg 6-磷酸葡萄糖和1/22mg重量份的环磷酸腺苷。

实施例12

与实施例9的不同之处在于，制成1L所述培养基还包括10mg的激活剂，所述激活剂包括10/21.1mg乙酰辅酶A、100/21.1mg辅酶Q10、100/21.1mg 6-磷酸葡萄糖和1/21.1mg环磷酸腺苷。

实施例13

与实施例9的不同之处在于，制成1L所述培养基还包括1mg的激活剂，所述激活剂包括5/15.2mg乙酰辅酶A、5/15.2mg辅酶Q10、5/15.2mg 6-磷酸葡萄糖和 0.2/15.2mg环磷酸腺苷。

实施例14

实施例11-13无血清免疫细胞培养基的制备方法，主要包括以下步骤：

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

c1依次加入红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用去离子水定容至目标体积。

对照例1

DMEM培养基。

用DMEM(H)粉末加碳酸氢钠配制而成。

对照例2

与实施例7的不同之处在于，制成1L所述培养基包括1mg的辅助因子，所述辅助因子包括1/11mg红景天甙和10/11mg木犀草苷。

对照例3

与实施例7的不同之处在于，制成1L所述培养基包括1mg的辅助因子，所述辅助因子包括1/1.1mg红景天甙和0.1/11mg白藜芦醇。

对照例4

与实施例11的不同之处在于，制成1L所述培养基包括0.1mg的激活剂，所述激活剂包括1/11mg乙酰辅酶A和0.1/11mg辅酶Q10。

对照例5

与实施例11的不同之处在于，制成1L所述培养基包括0.1mg的激活剂，所述激活剂包括0.1/2mg 6-磷酸葡萄糖和0.1/2mg环磷酸腺苷。

试验例1培养基对DC细胞表型阳性比例的影响

小鼠骨髓来源的DC，调整浓度为1×10⁶/mL，按10ng/mL加入实施例或对照例的培养基，在37℃、饱和湿度、5％CO₂培养箱培养，每3d半量换液。

培养7d后，加入荧光标记大鼠抗小鼠CD40和CD86，室温避光孵育30min，PBS洗涤细胞后，用流式细胞仪进行细胞计数。

细胞表型阳性比例为表型阳性细胞所占的百分比。

表1培养基对DC细胞表型阳性比例的影响

*、#符号数目相同表示没有显著性差异，数目不同表示有显著性差异(P<0.05)

从表1可以看出，

实施例1-5的D40和CD86细胞表型阳性比例显著高于对照例1，较优的是实施例3-4，最优的是实施例5。说明本实施例1-5的培养基与对照例(常规的DMEM) 相比，具有明显效果，同时调节各组分的浓度可以进一步优化阳性比例。

实施例7-9的D40和CD86细胞表型阳性比例显著高于对照例2-3，说明辅助因子红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇能够显著提高阳性比例，其中实施例9最优。

实施例11-13的CD40和CD86细胞表型阳性比例显著高于对照例3-4，其中实施例13最优。说明激活剂乙酰辅酶A、辅酶Q10、、6-磷酸葡萄糖和环磷酸腺苷能够提高DC的CD40和CD86细胞表型阳性比例。

综上所述，仅为本发明之较佳实施例，不以此限定本发明的保护范围，凡依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆为本发明专利涵盖的范围之内。

Claims

1.一种无血清免疫细胞培养基，其特征在于，制成1L所述培养基主要包括如下重量份原料：

L-丙氨酸5-30份、L-精氨酸盐酸盐30-200份、L-天冬氨酸10-40份、L-天冬氨酸水合物20-70份、L-胱氨酸盐酸盐20-100份、L-谷氨酸10-60份、L-谷氨酰胺50-600份、L-组氨酸盐酸盐15-60份、L-异亮氨酸20-150份、L-亮氨酸20-150份、L-赖氨酸盐酸盐10-200份、L-蛋氨酸5-50份、L-苯丙氨酸5-100份、L-脯氨酸5-100份、L-丝氨酸5-60份、L-苏氨酸10-80份、L-色氨酸1-20份、L-酪氨酸10-80份、L-缬氨酸1-100份、L-甘氨酸1-50份；

氯化钙50-200份、氯化钾250-500份、七水合硫酸镁50-300份、亚硒酸钠0.001-0.010份、氯化钠4000-8000份、磷酸二氢钠50-300份、碳酸氢钠1000-5000份；

生物素0.05-0.5份、氯化胆碱0.1-20份、D-泛酸钙0.005-10份、叶酸0.05-10份、肌醇1-50份、烟酰胺0.1-10份、核黄素0.1-0.5份、盐酸硫胺0.05-5份、维他命B12 0.1-3.0份、盐酸吡哆醛0.1-5份；

2.如权利要求1所述的无血清免疫细胞培养基，其特征在于，制成1L所述培养基主要包括如下重量份原料：

L-丙氨酸8-20份、L-精氨酸盐酸盐50-175份、L-天冬氨酸13-30份、L-天冬氨酸水合物30-56.8份、L-胱氨酸盐酸盐36-70份、L-谷氨酸14.7-45份、L-谷氨酰胺100-484份、L-组氨酸盐酸盐21.88-45.8份、L-异亮氨酸30-105份、L-亮氨酸30-105份、L-赖氨酸盐酸盐29-146份、L-蛋氨酸10-30份、L-苯丙氨酸15-66份、L-脯氨酸11.5-69份、L-丝氨酸10.5-42份、L-苏氨酸16-55份、L-色氨酸3-12份、L-酪氨酸18-65份、L-缬氨酸5-55份、L-甘氨酸7-30份；

氯化钙60-180份、氯化钾285-400份、七水合硫酸镁100-260份、亚硒酸钠0.003-0.007份、氯化钠5200-7400份、磷酸二氢钠85-210份、碳酸氢钠1800-3300份；

3.如权利要求1所述的无血清免疫细胞培养基，其特征在于，制成1L所述培养基主要包括如下重量份原料：

L-丙氨酸15份、L-精氨酸盐酸盐150份、L-天冬氨酸20份、L-天冬氨酸水合物45份、L-胱氨酸盐酸盐50份、L-谷氨酸30份、L-谷氨酰胺250份、L-组氨酸盐酸盐30份、L-异亮氨酸65份、L-亮氨酸65份、L-赖氨酸盐酸盐90份、L-蛋氨酸20份、L-苯丙氨酸40份、L-脯氨酸40份、L-丝氨酸25份、L-苏氨酸35份、L-色氨酸8份、L-酪氨酸40份、L-缬氨酸30份、L-甘氨酸20份；

氯化钙120份、氯化钾350份、七水合硫酸镁180份、亚硒酸钠0.005份、氯化钠6300份、磷酸二氢钠150份、碳酸氢钠2500份；

生物素0.2份、氯化胆碱5份、D-泛酸钙1份、叶酸2份、肌醇15份、烟酰胺2份、核黄素0.25份、盐酸硫胺1份、维他命B12 1.0份、盐酸吡哆醛1.5份；

D-葡萄糖3000份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2900份、胰岛素10份、酚红15份、丙酮酸钠100份、转铁蛋白7份。

4.如权利要求3所述的无血清免疫细胞培养基，其特征在于，制成1L所述培养基还包括1-100mg的辅助因子，所述辅助因子包括1-10重量份的红景天甙、1-10重量份的木犀草苷和0.1-1重量份的白藜芦醇。

5.如权利要求4所述的无血清免疫细胞培养基，其特征在于，制成1L所述培养基包括10mg的辅助因子，所述辅助因子包括5重量份的红景天甙、5重量份的木犀草苷和0.5重量份的白藜芦醇。

6.如权利要求5所述的无血清免疫细胞培养基，其特征在于，制成1L所述培养基还包括0.1-10mg的激活剂，所述激活剂包括1-10重量份的乙酰辅酶A、1-10重量份的辅酶Q10、1-10重量份的6-磷酸葡萄糖和0.1-1重量份的环磷酸腺苷。

7.如权利要求6所述的无血清免疫细胞培养基，其特征在于，制成1L所述培养基包括1mg的激活剂，所述激活剂包括5重量份的乙酰辅酶A、5重量份的辅酶Q10、5重量份的6-磷酸葡萄糖和0.2重量份的环磷酸腺苷。

8.如权利要求1所述的无血清免疫细胞培养基的制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用水定容至目标体积。

9.如权利要求4所述的无血清免疫细胞培养基的制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

c1依次加入红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用水定容至目标体积。

10.如权利要求6所述的无血清免疫细胞培养基的制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

b加入所述各无机盐组分，搅拌均匀；

c1依次加入红景天甙、木犀草苷和白藜芦醇，搅拌均匀；

e加入葡萄糖，搅拌均匀后，用水定容至目标体积。