CN110592000A - 一种支持bhk细胞高密度悬浮培养的无血清培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，涉及生物培养领域，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和添加物，本发明所提供的培养基化学成分明确，安全性高，污染风险小，能适用于多种不同BHK细胞株生长，细胞培养效果好，有利于下游分离和纯化，培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有的成分均为已知的化学结构，能够支持细胞生长和稳定传代的无血清培养基，可适用于工业规模生产。

Description

一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基
技术领域
本发明属于生物培养领域，具体涉及一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基。
背景技术
细胞培养技术是通过模拟细胞体内生长环境实现细胞体外培养。培养基为细胞体外培养提供营养并促进细胞生长和增殖。根据来源及成分的明确程度，细胞培养基分为天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段。
中国幼仓鼠肾细胞(Baby Hamster Kidney Cell)，是目前生产口蹄疫疫苗的最主要工程细胞，在细胞培养过程中，培养基主要采用添加一定浓度的血清的常规培养基。血清的主要作用在于向细胞提供激素(生化因子)、转移蛋白和其它营养物质等，能提高细胞活力以及重组蛋白质的产量，但在过去近20年中，逐渐发现含有血清的培养基所获得的基因重组蛋白质，会存在外源因子污染的风险。血清是未表征的物质的混合物，其可能随批次而变化。且来自动物或人来源的血清或其他补充物还有外源因子污染的风险，例如支原体、朊病毒和病毒污染。
因此急需提供一种化学成分明确，污染风险小，细胞培养效果好，适用于工业规模生产的支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基。
发明内容
本发明的目的是针对现有支持BHK细胞的无血清培养基的不足，提供一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基。
本发明提供了如下的技术方案：
一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和添加物；
a.氨基酸包括：
甘氨酸50-90mg/L、
M-丙氨酸5-30mg/L、
L-精氨酸盐盐酸200-300mg/L、
L-天冬酰胺100-150mg/L、
L-天冬氨酸300-400mg/L、
L-半胱氨酸盐酸盐10-50mg/L、
L-谷氨酸50-150mg/L、
L-组氨酸盐酸盐50-150mg/L、
L-异亮氨酸125-225mg/L、
L-亮氨酸50-450mg/L、
L-赖氨酸盐酸盐55-280mg/L、
L-蛋氨酸45-375mg/L、
L-苯丙氨酸30-160mg/L、
L-脯氨酸50-90mg/L、
L-丝氨酸220-330mg/L、
L-苏氨酸120-350mg/L、
L-色氨酸110-230mg/L、
L-酪氨酸二钠250-450mg/L、
L-缬氨酸250-460mg/L、
L-胱氨酸100-300mg/L、
L-羟脯氨酸2.4-3.5mg/L；
b.维生素包括:
氯化胆碱130-250mg/L、
D-泛酸钙6-9mg/L、
叶酸1.7-3.5mg/L、
烟酰胺3.8-4.0mg/L、
盐酸吡哆醇6.5-9.5mg/L、
核黄酸0.5-2.3mg/L、
硫胺素盐酸盐3.8-5.6mg/L、
维生素B12 1-10mg/L、
肌醇10-100mg/L、
硫酸锌5-10mg/L、
生物素0.003-0.03mg/L、
视黄醇0.005-0.5mg/L、
对氨基苯甲酸0.008-0.15mg/L；
c.无机盐包括：
二水氯化钙100-200mg/L、
碳酸氢钠1000-4000mg/L、
七水硫酸镁50-150mg/L、
氯化钾500-950mg/L、
氯化钠2500-5000mg/L、
七水合磷酸氢二钠100-300mg/L；
d.蛋白水解物包括:
酵母超滤物500-4000mg/L、
棉籽水解物500-4000mg/L、
大米水解物500-2000mg/L、
大豆蛋白水解物500-4000mg/L
麦麸水解物500-4000mg/L；
e.脂类包括：
亚油酸0.1-0.3mg/L、
大豆卵磷脂15-20mg/L、
胆固醇6-15mg/L、
腐胺0.4-0.8mg/L、
乙醇胺5-30mg/L；
f.添加物包括：
柠檬酸铁0.02-1mg/L、
维生素E 6-15mg/L、
还原型谷胱甘肽0.01-0.9mg/L、
亚硒酸钠0.1-8mg/L、
硫酸锌0.05-0.6mg/L、
重组人胰岛素3-15mg/L、
次黄嘌呤钠盐0.1-5mg/L、
普朗尼克68500-1000mg/L、
胸腺嘧啶0.1-0.9mg/L。
优选的，将原料物质根据权利要求1中的量和其各自溶解特性分类，加入水溶解后进行混合，调节pH值至7.0-7.4，渗透压至300-350mOsm/kg。
优选的，使用工业滤芯对权利要求2中的混合液体进行过滤，在氮气保护的条件下进行分装。
本发明的有益效果是：
本发明所提供的培养基化学成分明确，安全性高，污染风险小，能适用于多种不同BHK细胞株生长，细胞培养效果好，有利于下游分离和纯化。培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有的成分均为已知的化学结构。是在商业化出售的培养基DMEM/F12基础上进行开发，能够支持细胞生长和稳定传代的无血清培养基，可适用于工业规模生产。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是BHK细胞从市售的培养基中转入实施例3制成的培养基中连续传代培养的细胞密度；
图2是在显微镜下观察的BHK细胞在实施例3制成的培养基中的生长图；
图3是BHK细胞在实施例3制成的培养基中批次培养的生长曲线及对应细胞活率；
图4是BHK细胞在实施例3制成的培养基中批次培养收集抗体表达量。
具体实施方式
实施例1
一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和添加物；
各原料的浓度为：
氨基酸
甘氨酸50mg/L
L-丙氨酸5mg/L
L-精氨酸盐盐酸200mg/L
L-天冬酰胺100mg/L
L-天冬氨酸300mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐10mg/L
L-谷氨酸50mg/L
L-组氨酸盐酸盐50mg/L
L-异亮氨酸125mg/L
L-亮氨酸50mg/L
L-赖氨酸盐酸盐55mg/L
L-蛋氨酸45mg/L
L-苯丙氨酸30mg/L
L-脯氨酸50mg/L
L-丝氨酸220mg/L
L-苏氨酸120mg/L
L-色氨酸110mg/L
L-酪氨酸二钠250mg/L
L-缬氨酸250mg/L
L-胱氨酸100mg/L
L-羟脯氨酸2.4mg/L
维生素
氯化胆碱130mg/L
D-泛酸钙6mg/L
叶酸1.7mg/L
烟酰胺3.8mg/L
盐酸吡哆醇6.5mg/L
核黄酸0.5mg/L
硫胺素盐酸盐3.8mg/L
维生素B12 1mg/L
肌醇10mg/L
硫酸锌5mg/L
生物素0.003mg/L
视黄醇0.005mg/L
对氨基苯甲酸0.0085mg/L
无机盐
二水氯化钙100mg/L
碳酸氢钠1000mg/L
七水硫酸镁100mg/L
氯化钾500mg/L
氯化钠2500mg/L
七水合磷酸氢二钠100mg/L
蛋白水解物
酵母超滤物500mg/L
棉籽水解物500mg/L
大米水解物500mg/L
大豆蛋白水解物500mg/L
麦麸水解物500mg/L
脂类
亚油酸0.1mg/L
大豆卵磷脂15mg/L
胆固醇6mg/L
腐胺0.4mg/L
乙醇胺5mg/L
添加物
柠檬酸铁0.2mg/L
维生素E 6mg/L
还原型谷胱甘肽0.01mg/L
亚硒酸钠0.1mg/L
硫酸锌0.05mg/L
重组人胰岛素3mg/L
次黄嘌呤钠盐0.1mg/L
普朗尼克68500mg/L
胸腺嘧啶0.1mg/L
将原料物质根据权利要求1中的量和其各自溶解特性分类，加入水溶解后进行混合，调节pH值至7.0，渗透压至300mOsm/kg。使用工业滤芯对混合溶液进行过滤，在氮气保护的条件下进行分装。
实施例2
一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和添加物；
各原料的浓度为：
氨基酸
甘氨酸70mg/L
L-丙氨酸17.5mg/L
L-精氨酸盐盐酸250mg/L
L-天冬酰胺125mg/L
L-天冬氨酸350mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐30mg/L
L-谷氨酸100mg/L
L-组氨酸盐酸盐100mg/L
L-异亮氨酸175mg/L
L-亮氨酸250mg/L
L-赖氨酸盐酸盐167.5mg/L
L-蛋氨酸210mg/L
L-苯丙氨酸95mg/L
L-脯氨酸70mg/L
L-丝氨酸275mg/L
L-苏氨酸235mg/L
L-色氨酸170mg/L
L-酪氨酸二钠350mg/L
L-缬氨酸355mg/L
L-胱氨酸200mg/L
L-羟脯氨酸2.95mg/L
维生素
氯化胆碱190mg/L
D-泛酸钙7.5mg/L
叶酸2.6mg/L
烟酰胺3.9mg/L
盐酸吡哆醇8mg/L
核黄酸1.4mg/L
硫胺素盐酸盐4.7mg/L
维生素B12 5.5mg/L
肌醇55mg/L
硫酸锌7.5mg/L
生物素0.0165mg/L
视黄醇0.0275mg/L
对氨基苯甲酸0.079mg/L
无机盐
二水氯化钙150mg/L
碳酸氢钠2500mg/L
七水硫酸镁200mg/L
氯化钾725mg/L
氯化钠3750mg/L
七水合磷酸氢二钠200mg/L
蛋白水解物
酵母超滤物2250mg/L
棉籽水解物450mg/L
大米水解物1250mg/L
大豆蛋白水解物2250mg/L
麦麸水解物2250mg/L
脂类
亚油酸0.2mg/L
大豆卵磷脂17.5mg/L
胆固醇10.5mg/L
腐胺0.6mg/L
乙醇胺17.5mg/L
添加物
柠檬酸铁0.6mg/L
维生素E 10.5mg/L
还原型谷胱甘肽0.455mg/L
亚硒酸钠4.05mg/L
硫酸锌0.325mg/L
重组人胰岛素9mg/L
次黄嘌呤钠盐2.55mg/L
普朗尼克68750mg/L
胸腺嘧啶0.5mg/L
将原料物质根据权利要求1中的量和其各自溶解特性分类，加入水溶解后进行混合，调节pH值至7.2，渗透压至330mOsm/kg。使用工业滤芯对混合溶液进行过滤，在氮气保护的条件下进行分装。
实施例3
一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和添加物；
各原料的浓度为：
氨基酸
甘氨酸90mg/L
L-丙氨酸30mg/L
L-精氨酸盐盐酸300mg/L
L-天冬酰胺150mg/L
L-天冬氨酸400mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐50mg/L
L-谷氨酸150mg/L
L-组氨酸盐酸盐150mg/L
L-异亮氨酸225mg/L
L-亮氨酸450mg/L
L-赖氨酸盐酸盐280mg/L
L-蛋氨酸375mg/L
L-苯丙氨酸160mg/L
L-脯氨酸90mg/L
L-丝氨酸330mg/L
L-苏氨酸350mg/L
L-色氨酸230mg/L
L-酪氨酸二钠450mg/L
L-缬氨酸460mg/L
L-胱氨酸300mg/L
L-羟脯氨酸3.5mg/L
维生素
氯化胆碱250mg/L
D-泛酸钙9mg/L
叶酸3.5mg/L
烟酰胺4.0mg/L
盐酸吡哆醇9.5mg/L
核黄酸2.3mg/L
硫胺素盐酸盐5.6mg/L
维生素B12 10mg/L
肌醇100mg/L
硫酸锌10mg/L
生物素0.03mg/L
视黄醇0.05mg/L
对氨基苯甲酸0.15mg/L
无机盐
二水氯化钙200mg/L
碳酸氢钠4000mg/L
七水硫酸镁300mg/L
氯化钾950mg/L
氯化钠5000mg/L
七水合磷酸氢二钠300mg/L
蛋白水解物
酵母超滤物4000mg/L
棉籽水解物400mg/L
大米水解物2000mg/L
大豆蛋白水解物4000mg/L
麦麸水解物4000mg/L
脂类
亚油酸0.3mg/L
大豆卵磷脂20mg/L
胆固醇15mg/L
腐胺0.8mg/L
乙醇胺30mg/L
添加物
柠檬酸铁1mg/L
维生素E 15mg/L
还原型谷胱甘肽0.9mg/L
亚硒酸钠8mg/L
硫酸锌0.6mg/L
重组人胰岛素15mg/L
次黄嘌呤钠盐5mg/L
普朗尼克681000mg/L
胸腺嘧啶0.9mg/L
将原料物质根据权利要求1中的量和其各自溶解特性分类，加入水溶解后进行混合，调节pH值至7.5，渗透压至350mOsm/kg。使用工业滤芯对混合溶液进行过滤，在氮气保护的条件下进行分装。
实验例
具体方法为将在市售培养基中稳定培养的BHK细胞以0.5e6cells/ml的密度接种至实施例3制成的成品培养基中。在125mL摇瓶中进行培养，接种体积为30mL。培养条件为5％CO2，温度为37℃，摇床转速110r/min。接种后每天连续取样进行细胞计数，同时采取台盼蓝染色法计算细胞的活率。
如图1至图4所示，悬浮BHK细胞在该无血清培养基中生长状态较好，细胞单个分散悬浮，无明显细胞结团。细胞活力高，批次培养，在平台期之前活率都能维持在95％以上，且连续培养表现稳定。
因此，在此培养基中，细胞表达外源蛋白能力也明显增强。批次培养，每升培养物中可收获蛋白产物达500mg/L。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和添加物；
a.氨基酸包括：
甘氨酸50-90mg/L、
L-丙氨酸5-30mg/L、
L-精氨酸盐盐酸200-300mg/L、
L-天冬酰胺100-150mg/L、
L-天冬氨酸300-400mg/L、
L-半胱氨酸盐酸盐10-50mg/L、
L-谷氨酸50-150mg/L、
L-组氨酸盐酸盐50-150mg/L、
L-异亮氨酸125-225mg/L、
L-亮氨酸50-450mg/L、
L-赖氨酸盐酸盐55-280mg/L、
L-蛋氨酸45-375mg/L、
L-苯丙氨酸30-160mg/L、
L-脯氨酸50-90mg/L、
L-丝氨酸220-330mg/L、
L-苏氨酸120-350mg/L、
L-色氨酸110-230mg/L、
L-酪氨酸二钠250-450mg/L、
L-缬氨酸250-460mg/L、
L-胱氨酸100-300mg/L、
L-羟脯氨酸2.4-3.5mg/L；
b.维生素包括:
氯化胆碱130-250mg/L、
D-泛酸钙6-9mg/L、
叶酸1.7-3.5mg/L、
烟酰胺3.8-4.0mg/L、
盐酸吡哆醇6.5-9.5mg/L、
核黄酸0.5-2.3mg/L、
硫胺素盐酸盐3.8-5.6mg/L、
维生素B121-10mg/L、
肌醇10-100mg/L、
硫酸锌5-10mg/L、
生物素0.003-0.03mg/L、
视黄醇0.005-0.5mg/L、
对氨基苯甲酸0.008-0.15mg/L；
c.无机盐包括：
二水氯化钙100-200mg/L、
碳酸氢钠1000-4000mg/L、
七水硫酸镁50-150mg/L、
氯化钾500-950mg/L、
氯化钠2500-5000mg/L、
七水合磷酸氢二钠100-300mg/L；
d.蛋白水解物包括:
酵母超滤物500-4000mg/L、
棉籽水解物500-4000mg/L、
大米水解物500-2000mg/L、
大豆蛋白水解物500-4000mg/L、
麦麸水解物500-4000mg/L；
e.脂类包括：
亚油酸0.1-0.3mg/L、
大豆卵磷脂15-20mg/L、
胆固醇6-15mg/L、
腐胺0.4-0.8mg/L、
乙醇胺5-30mg/L；
f.添加物包括：
柠檬酸铁0.02-1mg/L、
维生素E6-15mg/L、
还原型谷胱甘肽0.01-0.9mg/L、
亚硒酸钠0.1-8mg/L、
硫酸锌0.05-0.6mg/L、
重组人胰岛素3-15mg/L、
次黄嘌呤钠盐0.1-5mg/L、
普朗尼克68500-1000mg/L、
胸腺嘧啶0.1-0.9mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，将原料物质根据权利要求1中的量和其各自溶解特性分类，加入水溶解后进行混合，调节pH值至7.0-7.4，渗透压至300-350mOsm/kg。
3.根据权利要求2所述的一种支持BHK细胞高密度悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，使用工业滤芯对权利要求2中的混合液体进行过滤，在氮气保护的条件下进行分装。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113755427A (zh) * 2021-10-13 2021-12-07 无锡多宁生物科技有限公司 一种优化后的bhk21细胞无血清悬浮培养基
CN113817666A (zh) * 2021-10-13 2021-12-21 无锡多宁生物科技有限公司 一种全悬浮培养bhk-21细胞的cd培养基及其摇瓶培养工艺
CN113943694A (zh) * 2021-10-13 2022-01-18 无锡多宁生物科技有限公司 一种支持多种疫苗细胞贴壁或悬浮培养的通用型无血清培养基及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101974481A (zh) * 2010-10-29 2011-02-16 国家兽用生物制品工程技术研究中心 一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基
CN105018416A (zh) * 2014-07-15 2015-11-04 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种悬浮培养bhk-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法
CN107881143A (zh) * 2017-12-12 2018-04-06 成都源泉生物科技有限公司 一种cho细胞无血清培养基
CN108624550A (zh) * 2018-02-14 2018-10-09 世贸天阶制药（江苏）有限责任公司 一种cho细胞无血清培养基的添加物及制得的培养基
CN109337861A (zh) * 2018-11-12 2019-02-15 王晓柯 一种支持产物高表达的cho细胞无血清培养基
CN109609444A (zh) * 2019-01-30 2019-04-12 苏州工业园区旭太生物工程有限公司 一种bhk21细胞无血清培养基

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101974481A (zh) * 2010-10-29 2011-02-16 国家兽用生物制品工程技术研究中心 一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基
CN105018416A (zh) * 2014-07-15 2015-11-04 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种悬浮培养bhk-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法
CN107881143A (zh) * 2017-12-12 2018-04-06 成都源泉生物科技有限公司 一种cho细胞无血清培养基
CN108624550A (zh) * 2018-02-14 2018-10-09 世贸天阶制药（江苏）有限责任公司 一种cho细胞无血清培养基的添加物及制得的培养基
CN109337861A (zh) * 2018-11-12 2019-02-15 王晓柯 一种支持产物高表达的cho细胞无血清培养基
CN109609444A (zh) * 2019-01-30 2019-04-12 苏州工业园区旭太生物工程有限公司 一种bhk21细胞无血清培养基

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113755427A (zh) * 2021-10-13 2021-12-07 无锡多宁生物科技有限公司 一种优化后的bhk21细胞无血清悬浮培养基
CN113817666A (zh) * 2021-10-13 2021-12-21 无锡多宁生物科技有限公司 一种全悬浮培养bhk-21细胞的cd培养基及其摇瓶培养工艺
CN113943694A (zh) * 2021-10-13 2022-01-18 无锡多宁生物科技有限公司 一种支持多种疫苗细胞贴壁或悬浮培养的通用型无血清培养基及其制备方法

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