JPH0678759A - 無血清細胞培養培地 - Google Patents
無血清細胞培養培地Info
- Publication number
- JPH0678759A JPH0678759A JP14022793A JP14022793A JPH0678759A JP H0678759 A JPH0678759 A JP H0678759A JP 14022793 A JP14022793 A JP 14022793A JP 14022793 A JP14022793 A JP 14022793A JP H0678759 A JPH0678759 A JP H0678759A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- hcl
- liter
- nutrient medium
- nutrient
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0037—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0056—Xeno-free medium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/20—Transition metals
- C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
- C12N2500/25—Insulin-transferrin; Insulin-transferrin-selenium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 アミノ酸、ビタミン、補助因子および無機塩
を含むが動物タンパク質を含まない細胞増殖用栄養培地
に関する。 【構成】 ヒトトランスフェリン、ヒトインスリン、エ
タノールアミンおよび亜セレン酸ナトリウムを更に含有
することを特徴とするアミノ酸、ビタミン、補助因子お
よび通常の無機塩を含有する細胞培養用栄養培地。
を含むが動物タンパク質を含まない細胞増殖用栄養培地
に関する。 【構成】 ヒトトランスフェリン、ヒトインスリン、エ
タノールアミンおよび亜セレン酸ナトリウムを更に含有
することを特徴とするアミノ酸、ビタミン、補助因子お
よび通常の無機塩を含有する細胞培養用栄養培地。
Description
【０００１】本発明は、アミノ酸、ビタミン、補助因子
および無機塩を含むが動物タンパク質を含まない細胞増
殖用栄養培地に関する。
および無機塩を含むが動物タンパク質を含まない細胞増
殖用栄養培地に関する。
【０００２】バイオテクノロジーに基づく現代医薬の生
産は多くの場合に複雑な真核細胞培養生産システムに依
存している。何故ならば単純な原核生物では多くの糖タ
ンパク質を機能的に活性な形で生産し得ないからであ
る。これらの複雑な真核細胞培養系は、規定された塩、
ビタミン、補助因子およびアミノ酸（基礎培地）のほか
に高分子量タンパク質または脂質の混合物、特にコスト
高の牛胎児血清（ＦＢＳ）を含む栄養培地を要求する。
栄養培地中多数かつ高濃度に要求されるがあまり明確に
なっておらず、そして例えば牛胎児血清に起原するこれ
ら高分子量成分は、発酵槽生産段階の後、手のこんだ精
製方法により、生産されるべき薬品から分離されねばな
らない。さらに、使用ＦＢＳが病原物質を含まないこと
を保証することが必要である。
産は多くの場合に複雑な真核細胞培養生産システムに依
存している。何故ならば単純な原核生物では多くの糖タ
ンパク質を機能的に活性な形で生産し得ないからであ
る。これらの複雑な真核細胞培養系は、規定された塩、
ビタミン、補助因子およびアミノ酸（基礎培地）のほか
に高分子量タンパク質または脂質の混合物、特にコスト
高の牛胎児血清（ＦＢＳ）を含む栄養培地を要求する。
栄養培地中多数かつ高濃度に要求されるがあまり明確に
なっておらず、そして例えば牛胎児血清に起原するこれ
ら高分子量成分は、発酵槽生産段階の後、手のこんだ精
製方法により、生産されるべき薬品から分離されねばな
らない。さらに、使用ＦＢＳが病原物質を含まないこと
を保証することが必要である。
【０００３】コスト高のＦＢＳ含有栄養培地と丁度同じ
位に広範囲にわたる真核細胞系統の増殖を可能とし、か
つ動物異タンパク質を含有しない低コスト栄養培地があ
れば望ましいであろう。
位に広範囲にわたる真核細胞系統の増殖を可能とし、か
つ動物異タンパク質を含有しない低コスト栄養培地があ
れば望ましいであろう。
【０００４】驚くべきことに、多数の真核細胞系統の永
続的増殖を、ＦＢＳ含有栄養培地と同程度に可能にする
規定された妥当な価格の栄養培地を生産できることを見
出した。それは動物タンパク質を含まないが、アミノ
酸、ビタミン、補助因子および通常の無機塩のほかに、
ヒトトランスフェリン、ヒトインスリン、エタノールア
ミンおよび亜セレン酸ナトリウムを含有する。
続的増殖を、ＦＢＳ含有栄養培地と同程度に可能にする
規定された妥当な価格の栄養培地を生産できることを見
出した。それは動物タンパク質を含まないが、アミノ
酸、ビタミン、補助因子および通常の無機塩のほかに、
ヒトトランスフェリン、ヒトインスリン、エタノールア
ミンおよび亜セレン酸ナトリウムを含有する。
【０００５】本発明はヒトトランスフェリン、ヒトイン
スリン、エタノールアミンおよび亜セレン酸ナトリウム
を含有することを特徴とするアミノ酸、ビタミン、補助
因子および通常の無機塩を含有する細胞培養用栄養培地
に関する。
スリン、エタノールアミンおよび亜セレン酸ナトリウム
を含有することを特徴とするアミノ酸、ビタミン、補助
因子および通常の無機塩を含有する細胞培養用栄養培地
に関する。
【０００６】臨床的に認可されているトランスフェリン
およびインスリンを用いるのが好ましい。
およびインスリンを用いるのが好ましい。
【０００７】アミノ酸、ビタミン、補助因子および無機
塩を含む培地（基礎培地）として従来技術において知ら
れた培地を用いることができる。
塩を含む培地（基礎培地）として従来技術において知ら
れた培地を用いることができる。
【０００８】このタイプの基礎培地は例えばＭＥＭアル
ファ培地、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）培地、ＤＭＥＭ
（ダルベッコ変性イーグル培地）、ウイリアム（Willia
m）培地Ｅ、ハム（Ham）Ｆ１２培地などである。
ファ培地、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）培地、ＤＭＥＭ
（ダルベッコ変性イーグル培地）、ウイリアム（Willia
m）培地Ｅ、ハム（Ham）Ｆ１２培地などである。
【０００９】ピルビン酸ナトリウムを２５〜５００、好
ましくは１１０mg／リットルの濃度で添加すれば他の基
礎培地を用いることができる。これらの基礎培地の例は
次のとおりである：ＲＰＭＩ １６４０培地、ＣＭＲＬ
１０６６培地、ＢＭＥ基礎培地、ウエイマウス（Waymou
th）培地、ＮＣＴＣ １３５培地、ＭＥＭ（最小必須培
地）。
ましくは１１０mg／リットルの濃度で添加すれば他の基
礎培地を用いることができる。これらの基礎培地の例は
次のとおりである：ＲＰＭＩ １６４０培地、ＣＭＲＬ
１０６６培地、ＢＭＥ基礎培地、ウエイマウス（Waymou
th）培地、ＮＣＴＣ １３５培地、ＭＥＭ（最小必須培
地）。
【００１０】インスリンおよびトランスフェリンはこれ
ら基礎培地のいずれかに、その培地中濃度がインスリン
については６〜２０、好ましくは８〜１２mg／リットル
そしてトランスフェリンについては２０〜５０、好まし
くは３０〜４０mg／リットルに達するように添加され
る。
ら基礎培地のいずれかに、その培地中濃度がインスリン
については６〜２０、好ましくは８〜１２mg／リットル
そしてトランスフェリンについては２０〜５０、好まし
くは３０〜４０mg／リットルに達するように添加され
る。
【００１１】エタノールアミンおよび亜セレン酸ナトリ
ウムは基礎培地に、その培地中濃度がエタノールアミン
については１.３〜２０、好ましくは８〜１４mg／リッ
トルそして亜セレン酸ナトリウムについては２〜２０、
好ましくは６〜１０μｇ／リットルに達するように添加
される。
ウムは基礎培地に、その培地中濃度がエタノールアミン
については１.３〜２０、好ましくは８〜１４mg／リッ
トルそして亜セレン酸ナトリウムについては２〜２０、
好ましくは６〜１０μｇ／リットルに達するように添加
される。
【００１２】Ｌ−グルタミンはこのアミノ酸の濃度が１
４０〜１２００mg／リットル、好ましくは６００mg／リ
ットルとなるように使用前に培地に添加される。
４０〜１２００mg／リットル、好ましくは６００mg／リ
ットルとなるように使用前に培地に添加される。
【００１３】
【実施例】以下の組成を有する培地を調製した。示され
た量（グラム単位）は培地２００リットルに関するもの
である。
た量（グラム単位）は培地２００リットルに関するもの
である。
【００１４】基礎培地成分 ＮａＣｌ １２８０.００ ＫＣｌ ８０.００ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ４０.００ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ ２５.００ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ５２.８０ Ｆｅ(ＮＯ3)3・９Ｈ2Ｏ ０.０２ フェノールレッド ３.７０ グルコース・Ｈ2Ｏ ９９０.００ ピルビン酸ナトリウム ２２.１０ Ｌ−アラニン ７.１４ Ｌ−アルギニンＨＣｌ １６.８０ Ｌ−アスパラギン・Ｈ2Ｏ １３.６６ Ｌ−アスパラギン酸 １０.６３ Ｌ−システイン ９.６０ Ｌ−グルタミン酸 １１.８３ グリシン ６.０２ Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ・Ｈ2Ｏ ８.４０ Ｌ−イソロイシン ２１.００ Ｌ−ロイシン ２１.００ Ｌ−リジンＨＣｌ ２９.２０ Ｌ−メチオニン ６.００ Ｌ−フェニルアラニン １３.２０ Ｌ−プロリン ９.２２ Ｌ−セリン ８.４２ Ｌ−トレオニン １９.００ Ｌ−トリプトファン ３.２０ Ｌ−チロシン １４.４０ Ｌ−バリン １８.８０ パントテン酸カルシウム ０.８０ 塩化コリン ０.８０ 葉酸 ０.８０ Ｉ−イノシトール １.４４ ニコチンアミド ０.８０ ピリドキサールＨＣｌ ０.８０ リボフラビン ０.０８ チアミンＨＣｌ ０.８０ ＮａＨＣＯ3 ７５０.００付加的成分 ヒトインスリン（Hoechst：PHFM) ２.００ ヒトトランスフェリン（Behringwerke AG, 製品特定記号：φTRE) ７.００ エタノールアミン １.６８ml 亜セレン酸ナトリウム（１mM） ９.４ml 蒸留水 ad ２００リットル
【００１５】６００mg／リットル グルタミンを添加
後、ハイブリドーマおよびトランスフェクトーマをこの
培地およびそれと比較するために、ＦＢＳ含有基礎培地
（ダルベッコ培地＋ＦＢＳ）で増殖させた。結果を表１
に示す。細胞は標準的細胞培養条件下、３７℃および５
％ＣＯ2で蒸気飽和雰囲気中表１に示された期間培養さ
れ、そして生細胞数および生成物濃度をアリコートにつ
いて測定した。
後、ハイブリドーマおよびトランスフェクトーマをこの
培地およびそれと比較するために、ＦＢＳ含有基礎培地
（ダルベッコ培地＋ＦＢＳ）で増殖させた。結果を表１
に示す。細胞は標準的細胞培養条件下、３７℃および５
％ＣＯ2で蒸気飽和雰囲気中表１に示された期間培養さ
れ、そして生細胞数および生成物濃度をアリコートにつ
いて測定した。
【００１６】それらデータはＤＫＨＩ培地が細胞増殖お
よび生産効率に関し、Ｄ−ＦＢＳ完全培地と等価である
ことを実証している。増殖速度は両培地とも同一であ
る。
よび生産効率に関し、Ｄ−ＦＢＳ完全培地と等価である
ことを実証している。増殖速度は両培地とも同一であ
る。
【００１７】さらに、その培地でヒトおよびラット腫瘍
細胞系統を培養することもできた（表２）。比較用培地
はＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳおよびMurakami等（Proc. na
tl.Acad. Sci. USA 79, 1158-1162, 1982)により公表さ
れたＩＴＥＳ培地とした。
細胞系統を培養することもできた（表２）。比較用培地
はＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳおよびMurakami等（Proc. na
tl.Acad. Sci. USA 79, 1158-1162, 1982)により公表さ
れたＩＴＥＳ培地とした。
【００１８】ＤＫＨＩ培地は、１０mg／リットル イン
スリン、２００μmol／リットル エタノールアミン、１
mmol／リットル ピルビン酸および３.７５ｇ／リットル
炭酸水素ナトリウムを含有しＨＥＰＥＳ緩衝液を含有し
ない点でＩＴＥＳ培地と異なる（比較には表３を参
照）。これらの相違が表２に示されるとおり細胞増殖向
上をもたらす。
スリン、２００μmol／リットル エタノールアミン、１
mmol／リットル ピルビン酸および３.７５ｇ／リットル
炭酸水素ナトリウムを含有しＨＥＰＥＳ緩衝液を含有し
ない点でＩＴＥＳ培地と異なる（比較には表３を参
照）。これらの相違が表２に示されるとおり細胞増殖向
上をもたらす。
【００１９】
【表１】
【００２０】
【表２】
【００２１】
【表３】
【００２２】以上、本発明を詳細に説明したが、本発明
はさらに次の実施態様によってこれを要約して示すこと
ができる。 １） ヒトトランスフェリン、ヒトインスリン、エタノ
ールアミンおよび亜セレン酸ナトリウムを更に含有する
ことを特徴とするアミノ酸、ビタミン、補助因子および
通常の無機塩を含有する細胞培養用栄養培地。 ２） 臨床的に認可されたトランスフェリンおよびイン
スリンを含有する前項１記載の栄養培地。 ３） 使用基礎培地がＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）培
地、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変性イーグル培地）、ウイリ
アム培地Ｅ、またはハムＦ１２培地である前項１記載の
栄養培地。 ４） 使用基礎培地がＲＰＭＩ １６４０培地、ＣＭＲ
Ｌ １０６６培地、ＢＭＥ基礎培地、ウエイマウス培
地、ＮＣＴＣ １３５培地またはＭＥＭ（最小必須培
地）であり、そしてピルビン酸ナトリウムが培地中のピ
ルビン酸ナトリウム濃度が２５〜５００、好ましくは１
１０mg／リットルとなるような量で添加される前項１記
載の栄養培地。
はさらに次の実施態様によってこれを要約して示すこと
ができる。 １） ヒトトランスフェリン、ヒトインスリン、エタノ
ールアミンおよび亜セレン酸ナトリウムを更に含有する
ことを特徴とするアミノ酸、ビタミン、補助因子および
通常の無機塩を含有する細胞培養用栄養培地。 ２） 臨床的に認可されたトランスフェリンおよびイン
スリンを含有する前項１記載の栄養培地。 ３） 使用基礎培地がＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）培
地、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変性イーグル培地）、ウイリ
アム培地Ｅ、またはハムＦ１２培地である前項１記載の
栄養培地。 ４） 使用基礎培地がＲＰＭＩ １６４０培地、ＣＭＲ
Ｌ １０６６培地、ＢＭＥ基礎培地、ウエイマウス培
地、ＮＣＴＣ １３５培地またはＭＥＭ（最小必須培
地）であり、そしてピルビン酸ナトリウムが培地中のピ
ルビン酸ナトリウム濃度が２５〜５００、好ましくは１
１０mg／リットルとなるような量で添加される前項１記
載の栄養培地。
【００２３】５） インスリンが培地中のインスリン濃
度が６〜２０、好ましくは８〜１２mg／リットルとなる
ような量で添加される前項１記載の栄養培地。 ６） トランスフェリンが培地中のトランスフェリン濃
度が２０〜５０、好ましくは３０〜４０mg／リットルと
なるような量で添加される前項１記載の栄養培地。 ７） エタノールアミンが培地中のエタノールアミン濃
度が１.３〜２０、好ましくは１０〜１４mg／リットル
となるような量で添加される前項１記載の栄養培地。 ８） 亜セレン酸ナトリウムが培地中の亜セレン酸ナト
リウム濃度が２〜２０、好ましくは６〜１０μｇ／リッ
トルとなるような量で添加される前項１記載の栄養培
地。 ９） Ｌ−グルタミンが培地中のＬ−グルタミン濃度が
１４０〜１２００、好ましくは６００mg／リットルとな
るような量で添加される前項１記載の栄養培地。
度が６〜２０、好ましくは８〜１２mg／リットルとなる
ような量で添加される前項１記載の栄養培地。 ６） トランスフェリンが培地中のトランスフェリン濃
度が２０〜５０、好ましくは３０〜４０mg／リットルと
なるような量で添加される前項１記載の栄養培地。 ７） エタノールアミンが培地中のエタノールアミン濃
度が１.３〜２０、好ましくは１０〜１４mg／リットル
となるような量で添加される前項１記載の栄養培地。 ８） 亜セレン酸ナトリウムが培地中の亜セレン酸ナト
リウム濃度が２〜２０、好ましくは６〜１０μｇ／リッ
トルとなるような量で添加される前項１記載の栄養培
地。 ９） Ｌ−グルタミンが培地中のＬ−グルタミン濃度が
１４０〜１２００、好ましくは６００mg／リットルとな
るような量で添加される前項１記載の栄養培地。
【００２４】１０） 液体２００リットル中に以下の成
分（グラム単位）：基礎培地成分 ＮａＣｌ １２８０.００ ＫＣｌ ８０.００ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ４０.００ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ ２５.００ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ５２.８０ Ｆｅ(ＮＯ3)3・９Ｈ2Ｏ ０.０２ フェノールレッド ３.７０ グルコース・Ｈ2Ｏ ９９０.００ ピルビン酸ナトリウム ２２.１０ Ｌ−アラニン ７.１４ Ｌ−アルギニンＨＣｌ １６.８０ Ｌ−アスパラギン・Ｈ2Ｏ １３.６６ Ｌ−アスパラギン酸 １０.６３ Ｌ−システイン ９.６０ Ｌ−グルタミン酸 １１.８３ グリシン ６.０２ Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ・Ｈ2Ｏ ８.４０ Ｌ−イソロイシン ２１.００ Ｌ−ロイシン ２１.００ Ｌ−リジンＨＣｌ ２９.２０ Ｌ−メチオニン ６.００ Ｌ−フェニルアラニン １３.２０ Ｌ−プロリン ９.２２ Ｌ−セリン ８.４２ Ｌ−トレオニン １９.００ Ｌ−トリプトファン ３.２０ Ｌ−チロシン １４.４０ Ｌ−バリン １８.８０ パントテン酸カルシウム ０.８０ 塩化コリン ０.８０ 葉酸 ０.８０ Ｉ−イノシトール １.４４ ニコチンアミド ０.８０ ピリドキサールＨＣｌ ０.８０ リボフラビン ０.０８ チアミンＨＣｌ ０.８０ ＮａＨＣＯ3 ７５０.００付加的成分 ヒトインスリン（Hoechst：PHFM) ２.００ ヒトトランスフェリン（Behringwerke AG, 製品特定記号：φTRE) ７.００ エタノールアミン １.６８ml 亜セリン酸ナトリウム（１mM） ９.４ml 蒸留水 ad ２００リットル を含有し、そして使用前にＬ−グルタミンが１４０〜１
２００mg／リットル、好ましくは６００mg／リットルの
濃度となるような量で添加される前項１記載の栄養培
地。 １１） ハイブリドーマ、トランスフェクトーマまたは
腫瘍細胞系統増殖のための前項１記載の栄養培地の使用
方法。
分（グラム単位）：基礎培地成分 ＮａＣｌ １２８０.００ ＫＣｌ ８０.００ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ４０.００ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ ２５.００ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ５２.８０ Ｆｅ(ＮＯ3)3・９Ｈ2Ｏ ０.０２ フェノールレッド ３.７０ グルコース・Ｈ2Ｏ ９９０.００ ピルビン酸ナトリウム ２２.１０ Ｌ−アラニン ７.１４ Ｌ−アルギニンＨＣｌ １６.８０ Ｌ−アスパラギン・Ｈ2Ｏ １３.６６ Ｌ−アスパラギン酸 １０.６３ Ｌ−システイン ９.６０ Ｌ−グルタミン酸 １１.８３ グリシン ６.０２ Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ・Ｈ2Ｏ ８.４０ Ｌ−イソロイシン ２１.００ Ｌ−ロイシン ２１.００ Ｌ−リジンＨＣｌ ２９.２０ Ｌ−メチオニン ６.００ Ｌ−フェニルアラニン １３.２０ Ｌ−プロリン ９.２２ Ｌ−セリン ８.４２ Ｌ−トレオニン １９.００ Ｌ−トリプトファン ３.２０ Ｌ−チロシン １４.４０ Ｌ−バリン １８.８０ パントテン酸カルシウム ０.８０ 塩化コリン ０.８０ 葉酸 ０.８０ Ｉ−イノシトール １.４４ ニコチンアミド ０.８０ ピリドキサールＨＣｌ ０.８０ リボフラビン ０.０８ チアミンＨＣｌ ０.８０ ＮａＨＣＯ3 ７５０.００付加的成分 ヒトインスリン（Hoechst：PHFM) ２.００ ヒトトランスフェリン（Behringwerke AG, 製品特定記号：φTRE) ７.００ エタノールアミン １.６８ml 亜セリン酸ナトリウム（１mM） ９.４ml 蒸留水 ad ２００リットル を含有し、そして使用前にＬ−グルタミンが１４０〜１
２００mg／リットル、好ましくは６００mg／リットルの
濃度となるような量で添加される前項１記載の栄養培
地。 １１） ハイブリドーマ、トランスフェクトーマまたは
腫瘍細胞系統増殖のための前項１記載の栄養培地の使用
方法。
Claims (5)
- 【請求項１】 ヒトトランスフェリン、ヒトインスリ
ン、エタノールアミンおよび亜セレン酸ナトリウムを更
に含有することを特徴とするアミノ酸、ビタミン、補助
因子および通常の無機塩を含有する細胞培養用栄養培
地。 - 【請求項２】 使用基礎培地がＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：
１）培地、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変性イーグル培地）、
ウイリアム培地Ｅ、またはハムＦ１２培地である請求項
１記載の栄養培地。 - 【請求項３】 使用基礎培地がＲＰＭＩ １６４０培
地、ＣＭＲＬ １０６６培地、ＢＭＥ基礎培地、ウエイ
マウス培地、ＮＣＴＣ １３５培地またはＭＥＭ（最少
必須培地）であり、そしてピルビン酸ナトリウムが培地
中のピルビン酸ナトリウム濃度が２５〜５００、好まし
くは１１０mg／リットルとなるような量で添加される請
求項１記載の栄養培地。 - 【請求項４】 液体２００リットル中に以下の成分（グ
ラム単位）：基礎培地成分 ＮａＣｌ １２８０.００ ＫＣｌ ８０.００ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ４０.００ ＮａＨ2ＰＯ4・Ｈ2Ｏ ２５.００ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ５２.８０ Ｆｅ(ＮＯ3)3・９Ｈ2Ｏ ０.０２ フェノールレッド ３.７０ グルコース・Ｈ2Ｏ ９９０.００ ピルビン酸ナトリウム ２２.１０ Ｌ−アラニン ７.１４ Ｌ−アルギニンＨＣｌ １６.８０ Ｌ−アスパラギン・Ｈ2Ｏ １３.６６ Ｌ−アスパラギン酸 １０.６３ Ｌ−システイン ９.６０ Ｌ−グルタミン酸 １１.８３ グリシン ６.０２ Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ・Ｈ2Ｏ ８.４０ Ｌ−イソロイシン ２１.００ Ｌ−ロイシン ２１.００ Ｌ−リジンＨＣｌ ２９.２０ Ｌ−メチオニン ６.００ Ｌ−フェニルアラニン １３.２０ Ｌ−プロリン ９.２２ Ｌ−セリン ８.４２ Ｌ−トレオニン １９.００ Ｌ−トリプトファン ３.２０ Ｌ−チロシン １４.４０ Ｌ−バリン １８.８０ パントテン酸カルシウム ０.８０ 塩化コリン ０.８０ 葉酸 ０.８０ Ｉ−イノシトール １.４４ ニコチンアミド ０.８０ ピリドキサールＨＣｌ ０.８０ リボフラビン ０.０８ チアミンＨＣｌ ０.８０ ＮａＨＣＯ3 ７５０.００付加的成分 ヒトインスリン（Hoechst：PHFM) ２.００ ヒトトランスフェリン（Behringwerke AG, 製品特定記号：φTRE) ７.００ エタノールアミン １.６８ml 亜セレン酸ナトリウム（１mM） ９.４ml 蒸留水 ad ２００リットル を含有し、そして使用前にＬ−グルタミンが１４０〜１
２００mg／リットル、好ましくは６００mg／リットルの
濃度となるような量で添加される請求項１記載の栄養培
地。 - 【請求項５】 ハイブリドーマ、トランスフェクトーマ
または腫瘍細胞系統増殖のための請求項１記載の栄養培
地の使用方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4219250:1 | 1992-06-12 | ||
| DE4219250A DE4219250A1 (de) | 1992-06-12 | 1992-06-12 | Serum-freies Zellkulturmedium |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0678759A true JPH0678759A (ja) | 1994-03-22 |
Family
ID=6460869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14022793A Pending JPH0678759A (ja) | 1992-06-12 | 1993-06-11 | 無血清細胞培養培地 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0573812A2 (ja) |
| JP (1) | JPH0678759A (ja) |
| AU (1) | AU4018393A (ja) |
| CA (1) | CA2098255A1 (ja) |
| DE (1) | DE4219250A1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007037426A (ja) * | 2005-08-01 | 2007-02-15 | Two Cells Co Ltd | 動物幹細胞培養用無血清培地 |
| US7678570B2 (en) | 2004-03-01 | 2010-03-16 | Kitakyushu Foundation For The Advancement Of Industry, Science And Technology | Human cell strains for protein production, provided by selecting strains with high intracellular protein and mutating with carcinogens |
| JP2011177140A (ja) * | 2010-03-03 | 2011-09-15 | Nippon Dental Univ | 幹細胞培養用の無血清培地 |
| JP2022511607A (ja) * | 2018-06-13 | 2022-02-01 | 北京基石生命科技有限公司 | 結腸直腸癌固形腫瘍初代細胞及び結腸直腸腺癌腹水初代腫瘍細胞の培養方法およびキット |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5292655A (en) * | 1990-01-29 | 1994-03-08 | Wille Jr John J | Method for the formation of a histologically-complete skin substitute |
| US5512477A (en) * | 1994-04-21 | 1996-04-30 | Genzyme Corporation | Serum-free medium supplement |
| ES2530370T5 (es) * | 2007-04-18 | 2018-05-28 | Hadasit Medical Research Services & Development Limited | Células del epitelio pigmentario de la retina derivadas de células madre |
-
1992
- 1992-06-12 DE DE4219250A patent/DE4219250A1/de not_active Withdrawn
-
1993
- 1993-05-15 EP EP19930107948 patent/EP0573812A2/de not_active Withdrawn
- 1993-06-11 CA CA 2098255 patent/CA2098255A1/en not_active Abandoned
- 1993-06-11 JP JP14022793A patent/JPH0678759A/ja active Pending
- 1993-06-11 AU AU40183/93A patent/AU4018393A/en not_active Abandoned
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7678570B2 (en) | 2004-03-01 | 2010-03-16 | Kitakyushu Foundation For The Advancement Of Industry, Science And Technology | Human cell strains for protein production, provided by selecting strains with high intracellular protein and mutating with carcinogens |
| JP2007037426A (ja) * | 2005-08-01 | 2007-02-15 | Two Cells Co Ltd | 動物幹細胞培養用無血清培地 |
| JP4745750B2 (ja) * | 2005-08-01 | 2011-08-10 | 株式会社ツーセル | 動物幹細胞培養用無血清培地 |
| JP2011177140A (ja) * | 2010-03-03 | 2011-09-15 | Nippon Dental Univ | 幹細胞培養用の無血清培地 |
| JP2022511607A (ja) * | 2018-06-13 | 2022-02-01 | 北京基石生命科技有限公司 | 結腸直腸癌固形腫瘍初代細胞及び結腸直腸腺癌腹水初代腫瘍細胞の培養方法およびキット |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2098255A1 (en) | 1993-12-13 |
| DE4219250A1 (de) | 1993-12-16 |
| EP0573812A2 (de) | 1993-12-15 |
| AU4018393A (en) | 1993-12-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101264940B1 (ko) | 배아 줄기 세포용 배지 및 이의 배양물 | |
| USRE30985E (en) | Serum-free cell culture media | |
| EP0501435B1 (en) | A serum-free medium for culturing animal cells | |
| JP2625302B2 (ja) | 培 地 | |
| CN100482783C (zh) | 一种用于Vero细胞的培养基及其培养方法 | |
| CN101760442A (zh) | 适于mdck细胞大规模贴壁培养和单细胞悬浮培养的无血清培养基 | |
| KR20070058584A (ko) | 인간 배아 줄기 세포의 배양 | |
| WO2000003000A2 (en) | Serum-free medium for culturing animal cells | |
| IE84174B1 (en) | Culture medium for CHO cells and adapted CHO cells | |
| JPS63267269A (ja) | 細胞培養のための基礎栄養培地 | |
| JP7185635B2 (ja) | オリゴペプチドを含む培地 | |
| CN110894487B (zh) | 一种无血清无蛋白cho细胞培养基及其制备方法、应用 | |
| CN107435037B (zh) | 一种用于bhk细胞的无血清培养基 | |
| Higuchi et al. | Studies on the cultivation of mammalian cell lines in a serum-free, chemically defined medium | |
| JPH0678759A (ja) | 無血清細胞培養培地 | |
| IE921020A1 (en) | Serum-free medium for culturing mammalian cells | |
| CN106754634A (zh) | 一种无血清培养基及其制备方法 | |
| JPH0728728B2 (ja) | 細胞をインビトロで生長させるための細胞生長培地補足剤およびそのための方法 | |
| AU8734891A (en) | Medium for culture of mammalian cells | |
| JPH0249579A (ja) | 培地 | |
| AU2003252890B2 (en) | A composition for the culture of cells, in particular animal cells or tissues, comprising polyethylene glycol | |
| KR20200086351A (ko) | 액체 배지를 제조하는 능률화된 방법 | |
| Dandekar et al. | Development of two-cell mouse embryos in protein-free and protein-supplemented media | |
| JP2850430B2 (ja) | 細胞培養用無血清培地 | |
| Cuprak et al. | Improved basal medium for Y-1 mouse adrenal cortex tumor cells in culture: I. Dependence of growth and steroid response on calcium ion concentration |