JP4745750B2 - 動物幹細胞培養用無血清培地 - Google Patents
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Description
本発明で使用する動物細胞培養用基礎培地としては、動物細胞培養用に使用されている適宜の基礎培地を使用することができるが、DMEM(Dulbeco改変Eagle培地)が有利に使用することができる。
使用した細胞:ヒト腸骨由来骨髄間葉系幹細胞(CAMBREX社より購入)(以下「MSC」という)。
培養条件:通法に従って培養したMSCを24穴培養皿に5000細胞/穴になるような密度で10%ウシ胎児血清(FBS)と抗生物質を含むDMEM(Sigma社)培地にて播種、培養した。翌日にFBSを含まないDMEM(抗生物質は含む)に培地交換し、被検因子を添加し、3日後に増殖した細胞を培養穴からトリプシンを用いて剥離し、コールターカウンター(ベックマン社)によって実細胞数を計測した。対照には、被検因子を希釈するのに用いた0.3%BSA/PBSのみを添加した。N=3で、平均と標準偏差をグラフ化した。
結果を図に示す。縦軸は各条件での培養穴中の細胞数を、横軸には添加物を示す。横軸の添加物にさらに8194抗菌ペプチド、若しくは、ITS+8194抗菌ペプチドを添加したグラフを付している。10%FBSとはウシ胎児血清を最終濃度10%となるようにDMEMに混和した条件である。10%FBS添加群は対照(0.3%BSA in PBS)と比べて細胞増殖を引き起こした。8194抗菌ペプチド+PDGF+bFGF+ITSの4因子を混和したものは、10%FBSに匹敵する増殖性を示した。各因子の欠けたものはそれぞれ増殖性が強く示されなかった。
Claims (5)
- 血清を含有しない動物細胞培養用基礎培地に、(1)配列表の配列番号1に示される抗菌ペプチド、(2)bFGF及びPDGFからなる細胞発育因子、及び、(3)インスリン、トランスフェリン、セレン酸及びリノール酸からなる添加成分を添加してなる動物幹細胞培養用無血清培地。
- 血清を含有しない動物細胞培養用基礎培地が、Dulbeco改変Eagle培地であるDEMEであることを特徴とする請求項1記載の動物幹細胞培養用無血清培地。
- 動物幹細胞が、間葉系幹細胞であることを特徴とする請求項1又は2記載の動物幹細胞培養用無血清培地。
- 請求項1又は2記載の動物幹細胞培養用無血清培地を用いて、動物幹細胞を培養することを特徴とする無血清培地を用いた動物幹細胞の培養増殖方法。
- 動物幹細胞を、血清を含む動物細胞用培地で培養した後、培地を請求項1又は2記載の動物幹細胞培養用無血清培地に交換して、動物幹細胞を培養増殖することを特徴とする動物幹細胞の培養増殖方法。
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