NO329821B1 - Anvendelse av IL-18 inhibitorer, ekspresjonsvektorer som koder for IL-18 inhibitorer og celler genetisk modifisert til a fremstille inhibitorer av IL-18 for fremstilling av medikamenter til behandling og/eller forebygging av aterosklerose, samt anvendelse av IL-18 som diagnostisk markor for progresjon av aterosklerose - Google Patents
Anvendelse av IL-18 inhibitorer, ekspresjonsvektorer som koder for IL-18 inhibitorer og celler genetisk modifisert til a fremstille inhibitorer av IL-18 for fremstilling av medikamenter til behandling og/eller forebygging av aterosklerose, samt anvendelse av IL-18 som diagnostisk markor for progresjon av aterosklerose Download PDFInfo
- Publication number
- NO329821B1 NO329821B1 NO20025307A NO20025307A NO329821B1 NO 329821 B1 NO329821 B1 NO 329821B1 NO 20025307 A NO20025307 A NO 20025307A NO 20025307 A NO20025307 A NO 20025307A NO 329821 B1 NO329821 B1 NO 329821B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- use according
- inhibitor
- atherosclerosis
- drug
- treatment
- Prior art date
Links
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 title claims description 195
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 title claims description 195
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims description 85
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 title claims description 62
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 36
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims description 11
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims description 3
- 108010070145 interleukin-18 binding protein Proteins 0.000 claims description 154
- 102000044166 interleukin-18 binding protein Human genes 0.000 claims description 153
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 claims description 53
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 46
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 40
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 27
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 25
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 23
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 23
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 23
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- 102000004557 Interleukin-18 Receptors Human genes 0.000 claims description 16
- 108010017537 Interleukin-18 Receptors Proteins 0.000 claims description 16
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 16
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims description 15
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 12
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 claims description 12
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 11
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 10
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 10
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 8
- -1 wherein the mutein Proteins 0.000 claims description 8
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 7
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 7
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 229940124638 COX inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003524 antilipemic agent Substances 0.000 claims description 4
- RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N thromboxane Chemical compound CCCCCCCC[C@H]1OCCC[C@@H]1CCCCCCC RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N 0.000 claims description 4
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical group CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 101500028163 Homo sapiens Tumor necrosis factor-binding protein 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims description 2
- 102400000091 Tumor necrosis factor-binding protein 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims 3
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical group O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 claims 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 claims 2
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 claims 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 29
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 22
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 22
- 238000011161 development Methods 0.000 description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 15
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 15
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 15
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 14
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 14
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 14
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 14
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 13
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 11
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 10
- 210000003291 sinus of valsalva Anatomy 0.000 description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 9
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 7
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 7
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 7
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 230000031037 interleukin-18 production Effects 0.000 description 7
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 210000002376 aorta thoracic Anatomy 0.000 description 6
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 6
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 6
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 5
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 5
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 5
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 5
- 238000013171 endarterectomy Methods 0.000 description 5
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 5
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 4
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 101100216294 Danio rerio apoeb gene Proteins 0.000 description 4
- 101000960954 Homo sapiens Interleukin-18 Proteins 0.000 description 4
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 4
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 4
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 4
- 230000036523 atherogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 102000043959 human IL18 Human genes 0.000 description 4
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 4
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 4
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101500028161 Homo sapiens Tumor necrosis factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 102400000089 Tumor necrosis factor-binding protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 3
- 102000006943 Uracil-DNA Glycosidase Human genes 0.000 description 3
- 108010072685 Uracil-DNA Glycosidase Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 230000009172 bursting Effects 0.000 description 3
- 208000006170 carotid stenosis Diseases 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- PFBLRDXPNUJYJM-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-methylpropaneperoxoate Chemical compound CC(C)C(=O)OOC(C)(C)C PFBLRDXPNUJYJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N thromboxane A2 Chemical compound OC(=O)CCC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)O[C@@H]2O[C@H]1C2 DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002329 Aneurysm Diseases 0.000 description 2
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001268 Cholestyramine Polymers 0.000 description 2
- 229920002911 Colestipol Polymers 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEMJJKBWTPKOJG-UHFFFAOYSA-N Gemfibrozil Chemical compound CC1=CC=C(C)C(OCCCC(C)(C)C(O)=O)=C1 HEMJJKBWTPKOJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 2
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 description 2
- MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethyl ketone Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N[C@H](C(=O)CCl)CC1=CC=CC=C1 MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 description 2
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 208000032109 Transient ischaemic attack Diseases 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 description 2
- 101710187743 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- GMRWGQCZJGVHKL-UHFFFAOYSA-N colestipol Chemical compound ClCC1CO1.NCCNCCNCCNCCN GMRWGQCZJGVHKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002604 colestipol Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 229960003627 gemfibrozil Drugs 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 102000008625 interleukin-18 receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040002014 interleukin-18 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000001349 mammary artery Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- FYPMFJGVHOHGLL-UHFFFAOYSA-N probucol Chemical compound C=1C(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=CC=1SC(C)(C)SC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 FYPMFJGVHOHGLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003912 probucol Drugs 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 210000002254 renal artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 201000010875 transient cerebral ischemia Diseases 0.000 description 2
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 2-(4-octylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(OCCO)C=C1 BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 101100394073 Caenorhabditis elegans hil-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000014882 Carotid artery disease Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010008479 Chest Pain Diseases 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 201000000057 Coronary Stenosis Diseases 0.000 description 1
- 101000828805 Cowpox virus (strain Brighton Red) Serine proteinase inhibitor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100033215 DNA nucleotidylexotransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- MXIULRKNFSCJHT-STQMWFEESA-N Gly-Phe-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 MXIULRKNFSCJHT-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004286 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000895 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Proteins 0.000 description 1
- 206010058558 Hypoperfusion Diseases 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000960949 Mus musculus Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 230000005679 Peltier effect Effects 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N SJ000286063 Natural products C12C(OC(=O)C(C)(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000008049 TAE buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 description 1
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 1
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 1
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 description 1
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 208000007474 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- UUEDINPOVKWVAZ-UHFFFAOYSA-N bis(2-ethylhexyl) 3,4,5,6-tetrabromobenzene-1,2-dicarboxylate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)C1=C(Br)C(Br)=C(Br)C(Br)=C1C(=O)OCC(CC)CCCC UUEDINPOVKWVAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000037876 carotid Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000013172 carotid endarterectomy Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003073 embolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000004528 endothelial cell apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 230000002615 fibrolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N glycerol 1-phosphate Chemical compound OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001046 green dye Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005986 heart dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 102000043827 human Smooth muscle Human genes 0.000 description 1
- 108700038605 human Smooth muscle Proteins 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010027775 interleukin-1beta-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229960004844 lovastatin Drugs 0.000 description 1
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000013227 macrophage apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- YFCUZWYIPBUQBD-ZOWNYOTGSA-N n-[(3s)-7-amino-1-chloro-2-oxoheptan-3-yl]-4-methylbenzenesulfonamide;hydron;chloride Chemical compound Cl.CC1=CC=C(S(=O)(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)CCl)C=C1 YFCUZWYIPBUQBD-ZOWNYOTGSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008180 pharmaceutical surfactant Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 229940096701 plain lipid modifying drug hmg coa reductase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000000574 retroperitoneal space Anatomy 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003752 saphenous vein Anatomy 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960002855 simvastatin Drugs 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N simvastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)C(C)(C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N 0.000 description 1
- 238000013424 sirius red staining Methods 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003270 subclavian artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000779 thoracic wall Anatomy 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046728 tumor necrosis factor alpha inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002451 tumor necrosis factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000000216 zygoma Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Obesity (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår vaskulære sykdommer. Mer spesifikt angår oppfinnelsen anvendelsen av IL-18-inhibitorer for fremstilling av medikamenter til behandling og/eller forebygging av aterosklerose.
Aterosklerose er den vanligste og mest viktige vaskulære sykdommen, men det er også kjent andre vaskulære lidelser og sykdommer. Aterosklerose påvirker de store og middels store arteriene, og dens sår innbefatter fettstreker, fibrolytiske plaketter og kompliserte sår. Aterosklerose er en kronisk inflammatorisk sykdom i arterieveggen,karakterisert vedprogressiv akkumulering av lipider som for eksempel kolesterol, celler, for eksempel makrofager, T-lymfocytter og glatte muskelceller, foruten en ekstracellulær matrise (1). Større akkumulasjoner kalles ateromer eller plakk, og inneholder ofte kalsium. Fettvevet kan erodere arterieveggen, noe som svekker arterienes elastisitet, og dette påvirker igjen blodstrømmen. Eventuelt kan det dannes klumper eller propper omkring plakkavsetningene, og dette påvirker igjen blodstrømmen og kan endelig føre til en total tiltetning av blodkaret. Vanligvis er aterosklerose assosiert med forhøyede nivåer av LDL-kolesterol, Lp(a)-fibrinogen og faktor VII, så vel som reduserte nivåer av HDL-kolesterol. Risikofaktorer innbefatter økende alder, hannkjønn, røyking, diabetes, overvekt, høyt blodinnhold av kolesterol, en diett med høyt fettinnhold og en personlig eller familiehistorie med hjertesykdommer. Aterosklerose er hovedårsaken til organiskemi, for eksempel myokardialt infarkt.
Aterom er den vanligste sårtypen i arteriene, og kan være ytterligere komplisert ved tromboembolisme. Ateromatøst plakk gjør ofte hulrommet i arteriene trangere, noe som kan forårsake iskemi og enkelte ganger atrofi av vevet i det hypoperfuserte området. Alvorlige konsekvenser innbefatte symptomer på angina, noe som skyldes myokardial iskemi, hjertesvikt som skyldes iskemi eller andre ikke-iskemiske reaksjoner, foruten hypertensjon som skyldes tiltetning av nyrenes arterier foruten hypoperfusjon av nyrene, som responderer fysiologisk ved økende sekresjon av renin.
Enkelte ganger blir aterosklerose og arteriosklerose angitt som separate patologiske tilstander, og i slike tilfeller vil aterosklerose være definert ved en hardning (sklerose) eller tap av elastisitet i arteriene som spesifikt skyldes aterom, mens arteriosklerose er en hardning eller et tap av elastisiteten i arteriene av andre årsaker.
Komplikasjoner eller konsekvenser av aterosklerose innbefatter koronar arteriesykdom (aterosklerose i hjertearteriene), manglende blodtilførsel som skyldes obstruksjon (iskemi/angina), akutt MI (hjerteinfarkt, hjerteattakk), forbigående iskemisk attakk (TIA) eller slag, og skade på blodkar, muskler eller kroppsorganer.
Aneurisme som er en permanent og unormal utvidelse av blodkarene er en vanlig konsekvens av aterosklerose. Hos eldre pasienter er det ofte vanlig å se en utvikling av aterosklerotisk abdominal aneurisme i aorta. Disse kan ofte bryte inn i det retroperitoneale rommet. I aterosklerotisk aneurisme er det vanlig å observere et betydelig tap av elastisk vev og fibrose i media (det mellomste laget av blodkarveggen), som i alt vesentlig skyldes iskemi i musklene i aorta media, noe som forårsaker en frigjøring av makrofagenzymer som igjen frembringer en fragmentering av elastiske fibrer.
Medikamentregimer som er anbefalt for behandling og/eller for å hindre aterosklerose innbefatter en reduksjon av blodfett/kolesterol. Spesielt er det vanlig å anvende en terapi for å senke nivået av LDL-kolesterol. For tiden er det mest vanlig å bruke statiner som er spesifikke inhibitorer av HMG CoA-reduktase. Andre fettsenkende midler innbefatter medikamenter som kolestyramin, kolestipol, nikotinsyre, gemfibrozil, probucol, lovastin og andre.
En annen fremgangsmåte er å minimalisere risikoen for trombedannelse på etablerte ateromatøse sår. Aspirin som synes å være en spesifikk inhibitor av tromboksan A2-kontrollert plateaggregering, eller antikoaguleringsmidler, kan brukes for å redusere risikoen for blodproppdannelse.
Perkutan "ballongangioplasti" bruker et kateter med en ballong i enden for å flate ut plakk eller for å øke blodstrømmen forbi en fortetning. Denne teknikken er lik den som brukes for å åpne hjertearteriene, men kan også anvendes på mange andre arterier i kroppen. Koronare arteriestenoser kan omgås (bypassed) med segmenter av safenøs vene som sys inn i den proksimale aorta, eller ved å dissekere den indre brystarterien fra brystveggen og så anastomosere dens distale ende til en arterie på den fremre overflaten av hjertet.
Kirurgisk fjerning av avsetninger (endarterektomi) kan anbefales i visse tilfeller (for eksempel karotid endarterektomi).
Hovedanbefalingen er imidlertid å behandle eller å kontrollere risikofaktorene, det vil si en diett som er lav på fett, kolesterol og salt, og dessuten følge helsepersonellets anbefalinger med hensyn til behandling og kontroll av hypertensjon, diabetes og andre sykdommer, reduksjon av kroppsvekten, stoppe røyking så vel som regelmessig mosjon for å bedre hjertets tilstand og sirkulasjon.
Den inflammatoriske prosessen som er nevnt ovenfor inngår i alle de forskjellige trinnene av aterosklerose (1). Endotelisk aktivering som skyldes forskjellige faktorer som blant annet lav skjærspenning, modifiserte lipoproteiner og proinflammatoriske cytokiner anses å være det første trinnet ved utviklingen av aterosklerose og er under inflammatorisk kontroll (1). Mange nylige undersøkelser har vist at interaksjonene mellom de vaskulære og inflammatoriske cellene er avgjørende med hensyn til aterogenesen (1). Spesielt har det vist seg at en hemming av definerte proinflammatoriske reaksjonsveier reduserte utviklingen av aterosklerose (1).
Inflammasjon spiller også en viktig rolle ved oppbryting av aterosklerotiske plakk og trombose (2-5), og påvirker følgelig forekomsten av akutte iskemiske syndromer og deres relaterte mortalitet (6). Flere alvorlige kliniske manifestasjoner av aterosklerose så som infarkter i hjertet, i hjernen og eventuelle andre organer som er påvirket av aterosklerose, skyldes i alt vesentlig at karhulrommet er tiltettet av en trombe som er dannet ved kontakt med et oppbrutt eller sprengt aterosklerotisk plakk (3,4). Patologiske undersøkelser har vist at utsatte eller ustabile plakk, det vil si plakk som er utsatt for sprengning eller brudd eller som allerede er brutt, skiller seg i vesentlig grad med hensyn til celle- og matrisesammensetning sammenlignet med stabile plakk, som ikke er utsatt for brudd (7). De utsatte plakk er rike på inflammatoriske celler (makrofager og T-lymfocytter), inneholder en trombogen lipidkjerne og erkarakterisert veden tynn fibrøs kappe med et vesentlig tap av ekstracellulær matrise (7).
Nedsatt kollagensyntese som er kontrollert av det proinflammatoriske cytokinet IFN a og økt aktivitet av makrofagavledet matrisenedbrytende metalloproteinaser, er ansvarlige for at den fibrøse kappen blir tynnere og sprøere (7). Brudd eller sprengning av den sprø fibrøse kappen eksponerer den sterkt trombogene lipidkjernen for det sirkulerende blodet, og dette resulterer i en tiltettende trombedannelse (1, 7). Tettheten av inflammatoriske celler i et gitt aterosklerotisk sår er derfor ansett å være en god indikator på dens ustabilitet.
Den kliniske prognosen for en pasient med aterosklerose er bare delvis avhengig av størrelsen på sårene (19; 20). Det er nå velkjent at kvaliteten (plakksammensetningen), snarere enn størrelsen på såret, vil være en enda bedre prediktor på forekomsten av iskemiske reaksjoner eller anfall. Flere alvorlige kliniske manifestasjoner på aterosklerose (infarkt i hjertet eller hjernen) skyldes i virkeligheten at karets hulrom er tiltettet på grunn av en trombe som er dannet ved kontakten med det brutte eller sprengte aterosklerotiske plakk (19). Patologiske undersøkelser har vist at utsatte eller ustabile plakk som er utsatt for brudd eller som allerede er brutt eller sprengt, er rike på inflammatoriske celler og viser et vesentlig tap med hensyn til glatte muskelceller og kollageninnhold (20, 21). Slike plakk viser videre en signifikant økning med hensyn til apoptotisk celledød som fører til dannelsen av en sterkt trombogen lipidkjerne (13, 22).
Proinflammatoriske cytokiner inngår i inflammasjonen. Cytokininterleukinet 18 (IL-18) ble opprinnelig beskrevet som en interferon-y (IFN-y) induserende faktor (8). Den er et tidlig signal på utviklingen av T-lymfocytthjelpeceller type 1 (Thl) reaksjoner. IL-18 virker sammen med IL-12, IL-2, antigener, mitogener og eventuelt andre faktorer for å indusere produksjonen av IFN-y. IL-18 bedrer eller øker også produksjonen av GM-CSF og IL-2, forsterker anti-CD3-indusert T-celleoppformering og øker Fas-kontrollert dreping av naturlige dreperceller. Modent IL-18 blir fremstilt fra sin forløper ved hjelp av et IL-1 (3-omdannende enzym (ICE, kaspase-1). IL-18-reseptoren består av minst to komponenter som virker sammen ved ligandbindingen. Høy- og lavaffinitetsbindingsseter for IL-18 ble påvist i muse IL-12-stimulerte T-celler (9), noe som antyder et multippelkjedereseptorkompleks. Det er hittil identifisert to reseptorsubenheter, og begge hører til IL-1-reseptorgruppen (10). Signaltransduksjonen av IL-18 innbefatter aktivering av NF-k B(ll).
Nylig er det blitt isolert et løselig protein med høy affinitet for IL-18 fra human urin, og de humane og muse cDNA-molekylene så vel som det humane genet ble klonet (12; WO 99/09063). Proteinet ble gitt betegnelsen IL-18-bindende protein (IL18BP).
IL18BP er ikke det ekstracellulære domenet for noen av de kjente IL-18-reseptorene, men er et utskilt og naturlig sirkulerende protein. Det hører til en ny
gruppe av utskilte proteiner, og som også innbefatter flere Poxviruskodede proteiner (12). IL18BP blir konstitutivt uttrykt i milten (12). Urinært så vel som rekombinant IL18BP binder seg spesifikt til IL-18 med høy affinitet og modulerer den biologiske aktiviteten for IL-18.
IL18BP-genet er blitt lokalisert til det humane kromosomet 1 lql3, og det ble ikke funnet noe ekson som koder for et transmembrandomene i en 8,3 kb genomisk sekvens. Fire spleisevarianter eller isoformer av ILI 8BP ble funnet i mennesker, og betegnet IL18BP a, b, c og d, og de har alle den samme N-terminus og skiller seg med hensyn til C-terminus (12).
Fire humane og to museisoformer av IL-18BP, som er et resultat av mRNA-spleising og som er funnet i forskjellige cDNA-bibliotek, er blitt uttrykt, renset og undersøkt for binding og nøytralisering av IL-18 biologiske aktiviteter (23). Den humane IL-18BP-isoformen a (IL-18BPa) viser den største affiniteten for IL-18 med en rask tilfestningshastighet og en langsom avspaltningshastighet, og en dissosiasjonskonstant (K(d)) på 399 pM. IL-18BPc har det samme Ig-domenet som IL-18BPa, bortsett fra de 29 C-terminale aminosyrene; og K(d) for IL-18BPc er 10 ganger lavere (2,94 nM). Ikke desto mindre så nøytraliserer IL-18BPa og IL-18BPc IL-18 med mer enn 95 % ved et molart overskudd av de to nevnte proteinene. IL-18BPb- og IL-18BPd-isoformene mangler et fullstendig Ig-domene og mangler evnen til å binde eller nøytralisere IL-18. Muse IL-18BPc og iL-18BPd-isoformene har identiske Ig-domener, og nøytraliserer også over 95 % muse IL-18 ved et molart overskudd av de to nevnte isoformene. Muse IL-18BPd som har et felles vanlig C-terminalt motiv med humant IL-18BPa, nøytraliserer imidlertid også humant IL-18. Molekylær modellering identifiserte et større blandet elektrostatisk og hydrofobt bindingssete i Ig-domenet hos IL-18BP, og dette kan være årsaken til dens høye affinitetsbinding til liganden (23). Teknikkens stand beskrives også i (30, 31, 32).
Foreliggende oppfinnelse er basert på oppdagelsen av at en inhibitor av IL-18 har en sterk fordelaktig effekt på plakkutvikling, plakkprogresjon og plakkstabilitet i en musemodell på aterosklerose. Inhibitoren av IL-18 ikke bare hindrer sårdannelse i toraks aorta, men induserte også en overgang mot en stabil plakkfenotype i allerede etablerte aterosklerotiske plakk.
Oppfinnelsen angår således anvendelse av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for å hindre og/eller behandle aterosklerose.
KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE
Figur 1 er et histogram som viser overlevelsesprosenten for humane umbilikale veneendotelceller etter innkubering med oksiderte lipoproteiner alene, eller inkubering med en kombinasjon av oksiderte lipoproteiner og henholdsvis et IL-18-antistoff eller IL18BP. Figur 2 er et Western Blot som ble utført på proteinekstrakter fra aterosklerotiske arterier i sammenligning med kontrollarterier. I dette Western Blot ble det brukt antistoffer som var rettet inn mot IL-18BP (hILl 8BP), IL-18-reseptor a-underenhet (hIL18Ra), IL-18 (hIL18) og kaspase-1 (kaspase-1 plO). Figur 3 viser en etidiumbromidfarget agarosegel som viser resultatet av en RT-PCR-analyse for IL-18 og 1L-18BP mRNA i celler fra aterosklerotisk plakk. Figur 4 er representative RT-PCR-resultater for IL-18BP og IL-18 i aterosklerotisk plakk sammenlignet med ha-aktin (kontroll) ekspresjon i symptomatiske og asymptomatiske plakk. Figur 5 viser kartet for den ekspresjonsvektoren som ble brukt for intramuskulær elektrooverføring i mus. Figur 6 er et histogram som viser lipidfargingsområdet i aterosklerotiske arterier. Kvantitativ dataassistert billedanalyse av lipidavsetning. Dataene representerer middelverdier med s.e.m. (n = 19 for tomme plasmider, n = 14 for IL-18BP-plasmid). Fire stjerner indikerer P < 0,0001. Figur 7 er et histogram som viser aortasinussårområdet etter en IL-18BP-behandling sammenlignet med en kontroll (tomt plasmid). Kvantitativ dataassistert billedanalyse av sårområdet. De angitte data representerer middelverdier med s.e.m. (n = 19 for tomt plasmid, n = 14 for IL-18BP-plasmid). Doble stjerner indikerer P < 0,01. Figur 8 viser effekten av IL-18BP-behandling på sårinflammatorisk celleinnhold. Det ble anvendt kvantitativt dataassistert billedanalyse for å bestemme prosenten av makrofagpositive områder (svarte søyler) og antallet av infiltrerende T-lymfocytter pr mm (grå søyler) i aortasinusspor hos kontroll (n = 12 for makrofagfarging, n = 15 for T-lymfocyttfarging), eller IL-18BP-behandlede mus (n = 13 for makrofager, n = 12 for T-lymfocytter). De angitte data representerer middelverdier med s.e.m. Tre stjerner indikerer P < 0,005; og fire stjerner indikerer P < 0,0001. Figur 9 viser effekten av IL-18BP-behandling på sårinnhold av glatte muskelceller og kollagen. Det ble brukt kvantitativt dataassistert billedanalyse for å bestemme prosenten av glatte muskelcellepositive områder (svarte søyler) og kollagenakkumulering (grå søyler) i aortasinusspor hos kontroll (n = 6 for glatte muskelceller, n = 13 for kollagen) og IL-18BP-behandlede mus (n = 6 for glatte muskelceller, n = 13 for kollagen). De angitte data representerer middelverdier med s.e.m. Enkelt stjerne indikerer P < 0,05; og doble stjerner indikerer P < 0,01.
Oppfinnelsen er basert på oppdagelsen av økende nivåer av sirkulerende IL-18 i pasienter med akutte koronare syndromer, og en økt IL-18-produksjon i ustabile karotidaterosklerotiske plakk som forårsaker slag. I tillegg er det blitt vist at in vivo elektrooverføring av et ekspresjonsplasmid DNA som koder for IL-18BP vil kunne hindre fettutvikling i toraks aorta og svekke progresjonen av utviklet aterosklerotiske plakk i aortasinus i en veletablert musemodell på aterosklerose. Viktigere er det at en transfeksjon med IL-18BP-plasmidet induserer omfattende forandringer i plakksammensetning (nedsatt antall makrofager og T-celler, senket celledød og lipidinnhold og en økning med hensyn til glatte muskelceller og kollagen) noe som fører til en stabil plakkfenotype. Disse resultatene viser for første gang at IL-18-inhibitorer spiller en viktig rolle for reduksjon av plakkutvikling/progresjon og for å fremme plakkstabilitet.
Oppfinnelsen angår derfor anvendelsen av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for behandling og/eller for å hindre aterosklerose.
Med begrepet "hindre" forstås i foreliggende oppfinnelse ikke bare en fullstendig hindring av en viss effekt, men også enhver delvis eller vesentlig hindring, svekkelse, reduksjon, nedsettelse eller eliminering av effekten før eller på et tidlig tidspunkt av sykdommen.
Med begrepet "behandling" forstås i foreliggende oppfinnelse enhver fordelaktig effekt på sykdomsutviklingen, heri inngår en svekkelse, reduksjon, nedsettelse mildning av den patologiske utviklingen etter at sykdommen har utviklet seg.
Med begrepet "inhibitor av IL-18" forstås i foreliggende oppfinnelse ethvert molekyl som modulerer IL-18-produksjon og/eller virkning på en slik måte at IL- 18-produksjonen eller dens virkning blir svekket, redusert eller delvis, i alt vesentlig eller fullstendig hindret eller blokkert.
En produksjonsinhibitor kan være ethvert molekyl som negativt påvirker syntesen, bearbeidingen eller modningen av IL-18. Inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse kan for eksempel være undertykkere av genekspresjonen av interleukin IL-18, antisens mRNA som reduserer eller hindrer transkripsjonen av IL-18 mRNA, eller som fører til en nedbrytning eller degradering av mRNA, proteiner som svekker korrekt folding, eller som delvis eller i alt vesentlig hindrer modning eller sekresjon av IL-18, proteaser som bryter ned IL-18 så snart det er blitt syntetisert og lignende. En produksjonsinhibitor kan være en kaspase-1-inhibitor, eller en ICE-inhibitor, for eksempel en som hindrer modningen av IL-18.
En inhibitor av IL-18-virkning kan for eksempel være en IL-18-antagonist. Antagonister kan enten binde seg til eller isolere IL-18-molekylet som sådan med tilstrekkelig affinitet og spesifisitet til delvis eller i alt vesentlig å nøytralisere IL-18 eller IL-18-bindende seter, som er ansvarlige for IL-18-binding til dens ligander (for eksempel dens reseptorer). En antagonist kan også hemme IL-18-signalreaksjonsveien, eller kan bli aktivert inne i cellene ved IL-18/reseptorbinding.
Inhibitorer av IL-18-virkning kan også være løselige i IL-18-reseptorer eller molekyler som etterligner reseptorene, eller midler som blokkerer IL-18-reseptorene, IL-18-antistoffer, for eksempel monoklonale antistoffer, eller ethvert annet middel eller molekyl som hindrer bindingen av IL-18 til dens mål, for derved å svekke eller å hindre en utløsning av de intra- eller ekstracellulære reaksjonene som kontrolleres av IL-18.
Aterosklerose blir også betegnet arteriosklerose eller herding av arteriene. I foreliggende oppfinnelse betyr begrepet aterosklerose alle sykdommer eller sykdomstilstander i arteriene som vanligvis beskrives som aterosklerose, og hvor fettmaterialet blir avsatt på karveggen, og hvor dette eventuelt resulterer i en fortetning eller svekkelse av blodstrømmen så vel som brudd og/eller erosjon med trombedannelse.
I overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse er det underforstått at aterosklerose innbefatter både sklerose eller tap av arterieelastisitet som skyldes aterom (aterosklerose) eller som skyldes andre årsaker (arteriosklerose). De patologiske tilstandene med hensyn til aterosklerose, så vel som de komplikasjoner eller konsekvenser som oppstår på grunn av aterosklerose, inngår i foreliggende oppfinnelse i begrepet "aterosklerose", sli det detaljert er beskrevet tidligere i avsnittet "bakgrunn for oppfinnelsen".
Progresjon av aterosklerose innbefatter dannelsen av aterosklerotisk plakk og deres utvikling til mer og mer ustabile former. Oppfinnelsen angår derfor bruken av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for å kunne redusere eller å hindre progresjonen av aterosklerose.
Kartiltetning på grunn av en trombe som er dannet på et aterosklerotisk plakk er et kritisk punkt under infarkt i hjernen eller hjertet, og er blant de mest skadelige konsekvensene av aterosklerose. Oppfinnelsen angår følgelig bruken av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for å behandle og/eller å hindre trombose på et aterosklerotisk plakk.
Plakkstabiliteten påvirker utviklingen av et aterosklerotisk plakk til et skadelig og utsatt plakk som lett vil kunne starte trombose. Oppfinnelsen angår derfor videre anvendelsen av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for å kunne hindre og/eller behandle aterosklerotisk plakkustabilitet.
Et ustabilt plakk er utsatt for opprivning eller sprengning, og en slik opprivning eller sprengning av et plakk kan føre til en trombose. Oppfinnelsen angår derfor anvendelsen av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for å hindre aterosklerotisk plakkerosjon eller sprengning.
Plakkustabiliteten og trombosen kan eventuelt føre til apoptotisk celledød, noe som gir en høy prokoagulerende aktivitet og dette igjen kan spille en vesentlig rolle ved utviklingen av trombose av de eroderte eller sprengte aterosklerotiske plakk så vel som emboliske reaksjoner (13, 14). Det er blitt vist at oksiderte lipoproteiner (oxLDL) induserer makrofag og endotelisk celleapoptose i kultur (15). Som vist i de etterfølgende eksemplene er det nå blitt påvist at en inhibitor av IL-18 er i stand til i høy grad å redusere celledøden som er indusert av oxLDL.
I overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse er det overraskende blitt funnet at IL-18-nivåene i blodet var signifikant forhøyet hos hjertesviktpasienter som led av gjentatte anfall, for eksempel død, gjentatt iskemi, revaskularisering, progresjon av aterosklerose og fornyet sykehusinnleggelse på grunn av hjertesvikt, sammenlignet med pasienter som ikke kom tilbake til sykehuset. Denne økningen av IL-18-nivåene var spesielt påfallende i de pasientene som senere døde sammenlignet med dem som overlevde. Forhøyede IL-18-nivåer i blodsirkulasjonen ble observert både hos iskemipasienter så vel som hos ikke-iskemiske pasienter.
I en foretrukket utførelse av oppfinnelsen er IL-18-inhibitoren valgt fra gruppen bestående av antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorunderenhetene, inhibitorer av IL-18-reseptorsignalreaksjonsveien, antagonister av IL-18 som konkurrerer med IL-18 og blokkerer IL-18-reseptoren, og IL-18-bindende proteiner, isoformer, muteiner, fusjonerte proteiner, funksjonelle derivater, aktive deler eller sirkulerende permuterte derivater av disse som har den samme aktiviteten.
Med begrepet "muteiner" forstås her analoger av et IL-18BP, eller analoger av et viralt IL-18BP, hvor en eller flere av de naturlig forekommende aminosyreresiduaene i IL-18BP eller viralt IL-18BP, er blitt erstattet med forskjellige aminosyreresidua, eller er blitt fjernet, eller hvor en eller flere aminosyreresidua er lagt til den naturlige sekvensen i et IL-18BP eller et viralt IL-18BP, uten dermed i særlig grad å forandre aktiviteten på de resulterende produktene sammenlignet med villtypen av IL-18BP eller viralt IL-18BP. Disse muteinene kan fremstilles ved hjelp av kjente synteseteknikker og/eller ved seterettet mutageneseteknikker, eller enhver annen kjent teknikk som er egnet for dette formålet.
Ethvert slikt mutein har fortrinnsvis en sekvens av aminosyrer som er tilstrekkelig lik den som forefinnes i et IL-18BP, eller er tilstrekkelig likt et viralt IL-18BP, slik at det i alt vesentlig har samme aktivitet som IL-18BP. En aktivitet for IL-18BP er dens evne til å binde IL-18. Så lenge nevnte mutein i alt vesentlig har en bindingsaktivitet til IL-18, kan det brukes ved rensingen av IL-18, for eksempel ved hjelp av affinitetskromatografi, og kan således anses å ha en i alt vesentlig lik aktivitet som IL-18BP. Det er således mulig å bestemme hvorvidt et gitt mutein i alt vesentlig har samme aktivitet som IL-18BP, ved hjelp av rutineeksperimenter som innbefatter å underkaste et slikt mutein, for eksempel en enkelt blandet konkurranseprøve for å bestemme hvorvidt den binder seg eller ikke binder seg til et passende merket IL-18, for eksempel en radioimmunoprøve eller en ELISA-prøve.
Muteiner av IL-18BP-polypeptider eller muteiner av virale IL-18BP-polypeptider som kan brukes i overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse, eller nukleinsyrer som koder for disse, innbefatter et bestemt sett av i alt vesentlig tilsvarende sekvenser som substitusjonspeptider eller polynukleotider som ved en fagperson rutinemessig kan fremstilles uten for omfattende eksperimentering, basert på de beskrivelser og veiledninger som er angitt her.
Foretrukne forandringer for muteiner i overensstemmelse med foreliggende oppfinnelse, er det som er betegnet som "konservative" substitusjoner. Konservative aminosyresubstitusjoner i IL-18BP-polypeptider eller proteiner eller virale IL-18BP-polypeptider, kan innbefatte synonyme aminosyrer innenfor en gruppe som har tilstrekkelig like fysiokjemiske egenskaper, slik at en substitusjon mellom syrene i gruppen vil bevare molekylets biologiske funksjon (16). Det er underforstått at innsettinger og delesjoner av aminosyrer også kan utføres i de ovenfor definerte sekvensene uten at dette endrer deres funksjon, spesielt hvis innsettingene eller delesjonene bare innbefatter et par aminosyrer, det vil si under tretti og fortrinnsvis under ti, og ikke fjerner eller forskyver aminosyrer som er kritiske for en funksjonell konformasjon, for eksempel cysteinresidua. Proteiner og muteiner fremstilt ved slike delesjoner og/eller innsettinger ligger innenfor den foreliggende oppfinnelsen.
De synonyme aminosyregruppene er fortrinnsvis de som er definert i tabell I. Mer foretrukket er de synonyme aminosyregruppene de som er definert i tabell II; og mest foretrukket er de synonyme aminosyregruppene de som er definert i tabell III. Eksempler på produksjon av aminosyresubstitusjoner i proteiner som kan brukes for å fremstille muteiner av IL-18BP-polypeptider eller proteiner, eller muteiner av virale IL-18BP-proteiner, og som kan brukes i foreliggende oppfinnelse, innbefatter ethvert kjent syntesetrinn, slik det for eksempel er beskrevet i US patentene 4,959,314, 4,558,585 og 4,737,462 til Mark et al; 5,116,943 til Koths et al., 4,965,195 til Nåmen et al; 4,789,111 til Chong et al; og 5,017,691 til Lee et al; og de lysinsubstituerte proteinene som er angitt i US patent nr. 4,904,584 (Shaw et al).
Begrepet "fusjonert protein" refererer seg til et polypeptid som innbefatter et IL-18BP eller et viralt IL-18BP eller et mutein av disse som er fusjonert eller kondensert med et annet protein som for eksempel har en forlenget oppholdstid i kroppsvæsker. Et 1L-18BP eller et viralt IL-18BP kan således være fusjonert til et annet protein, polypeptid eller lignende, for eksempel et immunoglobulin eller et fragment av dette.
"Funksjonelle derivater" slik det brukes her, innbefatter derivater av IL-18BP-polypeptider eller proteiner eller et viralt IL-18BP og deres muteiner og fusjonerte
proteiner, som kan fremstilles via funksjonelle grupper som opptrer som sidekjeder fra residua, eller fra N- eller C-terminale grupper ved hjelp av fremgangsmåter som i seg selv er kjente, og inngår som sådan i oppfinnelsen så lenge de er farmasøytisk akseptable, det vil si at de ikke ødelegger proteinets aktivitet, som i alt vesentlig er lik aktiviteten til IL-18BP eller viralt IL-18BP, og som ikke tilveiebringer toksiske egenskaper i de sammensetninger eller preparater hvor de forefinnes. Disse derivatene kan for eksempel innbefatte polyetylenglykolsidekjeder som kan maskere antigene seter og kan forlenge oppholdstiden for IL-18BP eller et viralt IL-18BP i kroppsvæsker. Andre derivater innbefatter alifatiske estere av karboksylgruppene, amider av karboksylgruppene, ved en reaksjon med ammoniakk eller med primære eller sekundære aminer, N-acylderivater av frie aminogrupper i aminosyreresidua, dannet med acylgrupper (for eksempel alkanoyl eller karbosykliske aroylgrupper), eller O-acylderivater av frie hydroksylgrupper (for eksempel av den typen som forefinnes i seryl eller treonylresidua) dannet med acylgrupper.
Som "aktive fraksjoner" av et IL-18BP eller et viralt IL-18BP, eller muteiner og fusjonerte proteiner, innbefatter foreliggende oppfinnelse ethvert fragment eller forløpere for polypeptidkjeden i proteinmolekylet alene, eller sammen med assosierte molekyler eller residua som er bundet til disse, for eksempel sukker- eller fosfatgrupper eller aggregater av proteinmolekylet, eller sukkergruppene som sådan, forutsatt at nevnte fraksjon i alt vesentlig har samme aktivitet som IL-18BP.
I en ytterligere foretrukket utførelse av oppfinnelsen, er inhibitoren av IL-18 et IL-18-antistoff. Anti-IL-18-antistoffene kan være polyklonale eller monoklonale, kimeriske, humaniserte eller endog helt ut humane. Rekombinante antistoffer og fragmenter av disse erkarakterisert vedhøy affinitetsbinding til IL-18 in vivo og har lav toksisitet. Antistoffene som kan brukes ifølge foreliggende oppfinnelse erkarakterisert vedsin evne til å behandle pasienter i et tilstrekkelig langt tidsrom til å ha god til utmerke regresjon eller lindring av den patogene tilstanden eller ethvert symptom eller en gruppe av symptomer som er relatert til en patogen tilstand, og som samtidig har lav toksisitet.
Nøytraliserende antistoffer kan lett utvikles i dyr så som kaniner, geiter eller mus, ved immunisering med IL-18. Immuniserte mus er spesielt fordelaktige for å tilveiebringe kilder for B-celler for fremstillingen av hybridomer som så igjen kan dyrkes for å få fremstilt store mengder av anti-IL-18-monoklonale antistoffer.
Kimeriske antistoffer er immunoglobulinmolekyler som erkarakterisert vedat to eller flere segmenter eller deler av disse er avledet fra andre dyrearter. Generelt vil det variable området i et kimerisk antistoff være avledet fra et ikke-humant pattedyrantistoff, så som et monoklonalt museantistoff, mens immunoglobulinets konstante områder er avledet av et humant immunoglobulinmolekyl. Fortrinnsvis bør begge områdene og kombinasjonen ha lav immunogenisitet slik dette kan bestemmes ved hjelp av rutineeksperimenter (24). Humaniserte antistoffer er immunoglobulinmolekyler som er utviklet eller fremstilt ved hjelp av molekylære teknikker, og hvor de musekonstante områdene er erstattet med humane motparter, samtidig som molekylene har beholdt sine museantigenbindende områder. Det resulterende muse-humane kimeriske antistoffet har fortrinnsvis redusert immunogenisitet og bedret farmakokinetikk i mennesker (25).
I et ytterligere foretrukket utførelse er således IL-18-antistoffet et humanisert IL-18-antistoff. Foretrukne eksempler på humaniserte anti-IL-18-antistoffer er for eksempel beskrevet i europeisk patentsøknad EP 0 974 600.
I en enda mer foretrukket utførelse av oppfinnelsen, er IL-18-antistoffet helt ut humant. Teknologien for fremstilling av humane antistoffer er for eksempel detaljert beskrevet i WO00/76310, WO99/53049, US 6,162,963 eller AU 5336100. Helhumane antistoffer er fortrinnsvis rekombinante antistoffer fremstilt i transgene dyr, for eksempel xenomus, og som innbefatter alt eller deler av de funksjonelle humane lg loci.
I en sterkt foretrukket utførelse av foreliggende oppfinnelse, er inhibitoren av IL-18 et IL-18BP, eller en isoform, et mutein, fusjonert protein, funksjonelt derivat, aktiv del eller sirkulært permutert derivat av dette. Slike isoformer, muteiner, fusjonerte proteiner eller funksjonelle derivater har beholdt den biologiske aktiviteten for IL-18BP, spesielt bindingen til IL-18, og har fortrinnsvis i alt vesentlig minst én aktivitet som er den samme som for IL-18BP. Ideelt bør slike proteiner ha en biologisk aktivitet som er enda bedre sammenlignet med umodifisert IL-18BP. Foretrukne aktive fraksjoner har en aktivitet som er bedre enn aktiviteten for IL-18BP, eller som har ytterligere fordeler, for eksempel bedre stabilitet eller en lavere toksisitet eller immunogenisitet, eller som er lettere å produsere i større mengder, eller er lettere å rense.
Sekvensene for IL-18BP og dens spleisevarianter/isoformer kan tas fra WO99/09063 eller fra (12) så vel som fra (23).
Funksjonelle derivater av IL-18BP kan være konjugerte til polymerer for å bedre proteinets egenskaper, så som stabilitet, halvliv, biofilgjengelighet, toleranse i menneskekroppen eller immunogenisitet. For å oppnå dette kan IL-18BP bindes for eksempel til polyetylenglykol (PEG). PEGylering kan utføres ved hjelp av kjente fremgangsmåter, for eksempel slik det er beskrevet i WO 92/13095.
I en foretrukket utførelse ifølge foreliggende oppfinnelse, er derfor IL-18BP PEGylert.
I en ytterligere foretrukket utførelse av oppfinnelsen, er inhibitoren av IL-18 et kondensert eller fusjonert protein som innbefatter alt eller en del av et IL-18-bindende protein som er fusjonert til hele eller en del av et immunoglobulin. Det er underforstått for fagfolk innenfor bioteknologien at det resulterende fusjonerte proteinet har beholdt den biologiske aktiviteten til IL-18BP, da spesielt bindingen til IL-18. Fusjonen kan være direkte eller ved hjelp av et kort sammenbindende peptid som kan være så kort som fra 1 til 3 aminosyreresidua i lengde eller lenger, for eksempel med en lengde på 13 aminosyreresidua. Nevnte sammenbindende protein kan være et tripeptid, for eksempel med sekvensen E-F-M (Gly-Phe-Met), eller en 13 aminosyrers sammenbindende sekvens som innbefatter Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met som innføres mellom IL-18BP-sekvensen og immunoglobulinsekvensen. Det resulterende fusjonerte proteinet har bedrede egenskaper, så som forlenget oppholdstid i kroppsvæsker (halvliv), økt spesifikk aktivitet, økt ekspresjonsnivå eller at det letter rensingen av fusjonsproteinet.
I en foretrukket utførelse er IL-18BP fusjonert til det konstante området i et Ig-molekyl. Fortrinnsvis er det fusjonert til tunge kjedeområder, for eksempel CH2- og CH3-domenene i det humane IgGl. Utviklingen av spesifikke fusjonsproteiner som innbefatter IL-18BP og en del av et immunoglobulin er for eksempel beskrevet i eksempel 11 i WP99/09063. Andre isoformer av Ig-molekyler er også egnet for fremstilling eller utvikling av fusjonsproteiner ifølge foreliggende oppfinnelse, så som isoformene IgG2eller IgG-t, eller andre Ig-klasser, for eksempel IgM eller IgA. Fusjonsproteinene kan være monomeriske eller multimeriske, hetero- eller homomultimeriske.
Interferoner er først og fremst kjent for hemmende effekter på viral replikasjon eller cellulær oppformering. Interferon-y spiller for eksempel en viktig rolle for å fremme immune og inflammatoriske reaksjoner eller responser. Interferon (3 (IFN-p\en interferon type I), er angitt å spille en antiinflammatorisk rolle.
Oppfinnelsen angår også bruken av en kombinasjon av en inhibitor av IL-18 og et interferon for fremstillingen av et medikament for behandlingen av aterosklerose.
Interferoner kan også konjugeres til polymerer for å bedre proteinenes stabilitet. Et konjugat mellom interferon P og polyolen polyetylenglykol (PEG) er for eksempel beskrevet i W099/55377.
I en annen foretrukket utførelse av oppfinnelsen, er interferonet interferon-(3 (IFN-(J ) og mer foretrukket IFN-0 la.
Inhibitoren av IL-18-produksjon og/eller virkning brukes fortrinnsvis samtidig, i rekkefølge eller separat sammen med interferonet.
I enda en utførelse av oppfinnelsen, brukes en inhibitor av IL-18 sammen med en TNF-antagonist. TNF-antagonister utøver sin aktivitet på flere forskjellige måter. For det første kan antagonistene binde seg til eller isolere selve TNF-molekylet som sådan med tilstrekkelig affinitet og spesifisitet til helt eller delvis å nøytralisere TNF-epitopen eller epitoper som er ansvarlige for TNF-reseptorbinding (heretter betegnet "isolerende antagonister"). En isolerende antagonist kan for eksempel være et antistoff som er rettet inn mot TNF.
Alternativt kan TNF-antagonistene hemme TNF-signalreaksjonsveien som er aktivert av celleoverflatereseptoren etter TNF-binding (heretter betegnet "signalantagonister"). Begge grupper av antagonister kan brukes, enten alene eller sammen, i kombinasjon med en IL-18-inhibitor ved terapeutisk behandling av aterosklerose.
TNF-antagonister kan lett identifiseres og bedømmes ved rutinemessig screening av kandidater for deres effekt på aktiviteten av naturlig TNF i utvalgte cellelinjer in vitro, for eksempel humane B-celler, hvor TNF er årsak til oppformering og immunoglobulinsekresjon. Prøven anvender TNF-preparater i forskjellige fortynninger av kandidatantagonistene, for eksempel fra 0,1 til 100 ganger den molare mengden av TNF som brukes i prøven, og kontroller uten TNF eller bare med antagonist (26).
Isolerende antagonister er de foretrukne TNF-antagonistene som brukes ifølge foreliggende oppfinnelse. Blant isolerende antagonister er det foretrukket å bruke de polypeptider som binder TNF med høy affinitet og har lav immunogenisitet. Det er også foretrukket å bruke løselige TNF-reseptormolekyler og nøytraliserende antistoffer til TNF. For eksempel kan løselig TNF-RI og TNF-RII brukes i foreliggende oppfinnelse. Spesielt foretrukne antagonister ifølge foreliggende oppfinnelse, er trunkerte former av disse reseptorene som innbefatter de ekstracellulære domenene av reseptorene eller funksjonelle deler av disse. Trunkerte løselige TNF type-I og type-II-reseptorer er for eksempel beskrevet i EP914431.
Trunkerte former av TNF-reseptorene er løselige og er blitt påvist i urin og serum som 30 kDa og 40 kDa TNF-hemmende proteiner, og er betegnet TBPI og TBPH henholdsvis (27). Samtidig, sekvensmessig eller separat anvendelse av IL-18-inhibitoren sammen med TNF-antagonisten og/eller et interferon, er foretrukket ifølge foreliggende oppfinnelse.
Ifølge oppfinnelsen er TBPI og TBPII foretrukne TNF-antagonister som kan brukes i kombinasjon med en IL-18-inhibitor. Derivater, fragmenter, områder og biologisk aktive deler av reseptormolekylene som funksjonelt ligner reseptormolekylene kan også brukes i foreliggende oppfinnelse. Med en slik biologisk aktiv ekvivalent eller derivat av reseptormolekylet, forstås den delen av polypeptidet eller den sekvensen som koder reseptormolekylet og som har tilstrekkelig størrelse og som er i stand til å binde TNF med en slik affinitet at interaksjonen med den membrandbundede TNF-reseptoren blir hemmet eller blokkert.
Ifølge en ytterligere foretrukket utførelse av oppfinnelsen, kan humant løselig TNF-RI (TBPI) brukes som TNF-antagonisten. Naturlige og rekombinante løselige TNF-reseptormolekyler og fremgangsmåter for deres fremstilling er blant annet beskrevet i de europeiske patentene EP 308 378, EP 398 327 og EP 433 900. IL-18-inhibitoren kan brukes samtidig, i rekkefølge med eller separat med TNF-inhibitoren. Med fordel er det mulig å bruke en kombinasjon av et IL-18-antistoff eller antiserum, og en løselig reseptor av TNF med TNF-hemmende aktivitet.
I en ytterligere foretrukket utførelse av oppfinnelsen, innbefatter medikamentet videre en COX-inhibitor, fortrinnsvis en COX-2-inhibitor. Slike COX-inhibitorer er velkjente innenfor molekylærbiologien. Spesifikke COX-2-inhibitorer er for eksempel beskrevet i WO 01/00229.
Inhibitorer av tromboksan, da spesielt tromboksan A2, er for tiden mye brukt ved behandlingen av aterosklerose. Ifølge en ytterligere foretrukket utførelse av oppfinnelsen, innbefatter derfor medikamentet en tromboksaninhibitor, og da spesielt en inhibitor av tromboksan A2 for samtidig, sekvensmessig eller separat bruk. Aspirin er spesielt foretrukket å bruke i kombinasjon med IL-18-inhibitoren ifølge oppfinnelsen.
En av årsakene til aterosklerose synes å være en høy konsentrasjon av lipider i blodet. Ifølge en ytterligere foretrukket utførelse av oppfinnelsen, innbefatter således medikamentet et lipidsenkende middel for samtidig, sekvensmessig eller separat bruk. Ethvert lipidsenkende kjent middel innenfor farmasien kan brukes ifølge foreliggende oppfinnelse, for eksempel en rekke kjente fettsenkende midler så som kolestyramin, kolestipol, nikotinsyre, gemfibrozil, probucol og andre. Spesielt foretrukket er HMG CoA-reduktaseinhibitorer, og da spesielt de såkalte statinene. Det er kjent mange statiner innen den farmasøytiske industrien, for eksempel simvastatin eller lovastatin.
For å hindre og/eller å behandle aterosklerose enda bedre, så angår en foretrukket utførelse av oppfinnelsen bruken av en IL-18-inhibitor sammen med en diett som har lavt innhold av fett og/eller kolesterol og/eller salt.
I en foretrukket utførelse av foreliggende oppfinnelse, brukes inhibitoren av IL-18 i en mengde på fra 0,0001 til 10 mg/kg kroppsvekt, eller ca 0,01 til 5 mg/kg kroppsvekt eller ca 0,1 til 3 mg/kg kroppsvekt, eller fra ca 1 til 2 mg/kg kroppsvekt. I en ytterligere foretrukket utførelse, brukes inhibitoren av IL-18 i en mengde på fra 0,1 til 100 u.g/kg kroppsvekt eller fra 1 til 100 f.ig/kg kroppsvekt eller fra ca 10 til 50 u.g/kg kroppsvekt.
Oppfinnelsen angår videre bruken av en ekspresjonsvektor som innbefatter den kodende sekvensen for en inhibitor av IL-18 ved fremstillingen av et medikament for å hindre og/eller å behandle aterosklerose. En genterapeutisk metode blir således anvendt for å behandle og/eller hindre sykdommen. Fordelaktig skjer ekspresjonen av IL-18-inhibitoren in situ, noe som effektivt vil blokkere IL-18 direkte i det vevet eller de celler som er utsatt eller påvirket av sykdommen.
Som detaljert forklart i de etterfølgende eksemplene, er det blitt vist at en effektiv ekspresjon av IL-18BP kan skje i en musemodell på sykdommen etter en elektrooverføring av en ekspresjonsvektor som innbefatter den IL-18BP-kodende sekvensen.
I en foretrukket utførelse vil derfor ekspresjonsvektoren bli administrert ved elektrooverføring, fortrinnsvis intramuskulært.
Bruken av en vektor for å indusere og/eller bedre den endogene produksjonen av en inhibitor av IL-18 i en celle som normalt ikke uttrykker en IL-18-inhibitor, eller som uttrykker mengder av inhibitoren som ikke er tilstrekkelige, inngår også i foreliggende oppfinnelse. Vektoren kan innbefatte de regulerende sekvensene som fungerer i celler hvor det er ønskelig å uttrykke inhibitoren eller IL-18. Slike regulerende sekvenser kan for eksempel være promotorer eller andre stimulerende forbindelser (enhancere). De regulerende sekvensene kan innføres på det rette locus i genomet ved homologe rekombinasjoner, og således operativt bundet til den regulerende sekvensen med det gen hvis ekspresjon det er ønskelig å indusere eller bedre. Denne teknologien blir vanligvis betegnet som "endogen genaktivering"
(EGA), og er blant annet beskrevet i WO 91/09955.
Det er også underforstått at det er mulig å stanse IL-18-ekspresjonen ved å bruke den samme teknikken, det vil si å innføre et negativt regulerende element, for eksempel et dempende element i genlocuset for IL-18, noe som fører til en nedregulering eller en total hindring av IL-18-ekspresjon. Det er underforstått for en fagperson at en slik nedregulering eller demping av IL-18-ekspresjonen har den samme effekten som å bruke en IL-18-inhibitor for å hindre og/eller behandle sykdommen.
Oppfinnelsen angår videre bruken av en celle som er blitt genetisk modifisert for å fremstille en inhibitor av IL-18 ved fremstillingen av et medikament for å behandle og/eller å hindre aterosklerose.
Med begrepet "farmasøytisk akseptabel" forstås enhver bærer som ikke påvirker den positive biologiske aktiviteten til den aktive bestanddelen, og som ikke er giftig for verten.
De aktive bestanddelene i farmasøytiske sammensetninger kan administreres et individ på en rekke forskjellige måter. Administrasjonsveiene innbefatter intradermalt, transdermalt (for eksempel i preparater med langsom frigjøring), intramuskulært, intraperitonealt, intravenøst, subkutant, oralt, epiduralt, topikalt og intranasalt. Det er også mulig å bruke andre terapeutisk effektive administrasjons vei er, for eksempel absorpsjon gjennom epitelisk eller endotelisk vev eller ved hjelp av genterapi, hvor et DNA-molekyl som koder den aktive bestanddelen blir administrert pasienten (for eksempel via en vektor), noe som gjør at det aktive middelet blir uttrykt eller utskilt in vivo. I tillegg til dette kan proteinene administreres sammen med andre komponenter av biologisk aktive midler, for eksempel farmasøytisk akseptable overflateaktive midler, fortynningsmidler, bærere og forskjellige typer væsker.
For parenteral (for eksempel intravenøs, subkutan og intramuskulær) administrering, kan det eller de aktive proteinene opparbeides som en løsning, suspensjon, emulsjon eller et frysetørket pulver sammen med en farmasøytisk akseptabel parenteral væske (for eksempel vann, saltløsning eller dekstroseløsning), og additiver som opprettholder isotonisitet (for eksempel mannitol) eller kjemisk stabilitet (det vil si konserveringsmidler og buffere). Preparatet vil deretter bli sterilisert på vanlig kjent måte.
Biotilgjengeligheten av det eller de aktive proteinene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også bedres ved konjugeringsmetoder som øker molekylets halvliv i menneskekroppen, for eksempel ved å forbinde molekylet til polyetylenglykol, for eksempel slik det er beskrevet i PCT patentsøknad WO 92/13095.
De terapeutisk effektive mengdene av det eller de aktive proteinene vil være en funksjon av mange variabler, heri inngår type av antagonist, antagonistens affinitet for IL-18, eventuell gjenværende cytotoksisk aktivitet som utøves av antagonistene, administrasjonsveien, pasientens kliniske tilstand (her inngår ønskeligheten av å opprettholde et ikke-toksisk nivå av endogen IL-18-aktivitet).
En "terapeutisk effektiv mengde" er slik at når den administreres, så vil IL-18-inhibitoren resultere i en inhibitor av den biologiske aktiviteten til IL-18. Den dosen som administreres, enten som enkeltdose eller som multiple doser til et individ, vil være avhengig av en rekke forskjellige faktorer, så som de farmakokinetiske egenskapene til IL-18-inhibitoren, administrasjonsveien, pasientens tilstand og egenskaper for øvrig (kjønn, alder, kroppsvekt, helse og størrelse), graden av symptomer, samtidige behandlinger, behandlingsfrekvens og den effekt som er ønskelig. Justering og manipulering av etablerte doseringsområder vil lett kunne bestemmes av den behandlende legen, for eksempel ved hjelp av kjente in vitro og in vivo metoder for å bestemme inhiberingen av IL-18 hos en pasient.
Ifølge foreliggende oppfinnelse blir inhibitoren av IL-18 brukt i en mengde fra ca 0,0001 til 10 mg/kg eller ca 0,01 til 5 mg/kg kroppsvekt, eller ca 0,01 til 5 mg/kg kroppsvekt eller ca 0,1 til 3 mg/kg kroppsvekt, eller ca 1 til 2 mg/kg kroppsvekt. Foretrukne mengder av IL-18-inhibitorene er videre mengder fra 0,1 til 1000 u.g/kg kroppsvekt eller ca 1 til 100 u,g/kg kroppsvekt eller ca 10 til 50 u.g/kg kroppsvekt.
Den administrasjonsveien som er foretrukket ifølge foreliggende oppfinnelse, er administrering subkutant. Intramuskulær administrering er ytterligere foretrukket ifølge oppfinnelsen.
I en ytterligere foretrukket utførelse, blir inhibitoren av IL-18 administrert daglig eller hver andre dag.
De daglige dosene blir vanligvis gitt i oppdelte doser eller i en vedvarende frigjøringsform som er effektiv for å oppnå de forønskede resultatene. Den neste og etterfølgende administreringen kan utføres i en dose som er en samme, mindre eller større enn den første eller de tidligere dosene som er administrert pasienten. En andre og etterfølgende administrering kan utføres under eller før sykdommen begynner å utvikle seg. IL-18-inhibitoren kan administreres profylaktisk eller terapeutisk til et individ før, samtidig eller etter at andre terapeutiske regimer eller midler er anvendt (for eksempel multiple medikamentregimer), i en terapeutisk effektiv mengde. Aktive midler som administreres samtidig med andre terapeutiske midler kan administreres i den samme eller i andre sammensetninger.
Oppsummert vedrører foreliggende oppfinnelse således anvendelse av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for å behandle og/eller forebygge aterosklerose, der IL-18-inhibitoren er valgt fra gruppen som består av antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorsubenhetene og IL-18-bindende protein (IL-18BP), et mutein av IL-18BP som omfatter konservative aminosyresubstitusjoner, et fusjonert protein av IL-18BP og immunoglobulintungkjederegioner, eller et funksjonelt derivat som omfatter PEGylert IL-18BP, der muteinet, det fusjonerte proteinet eller det funksjonelle derivatet opprettholder den biologiske aktiviteten i å binde til IL-18.
I tillegg gjelder oppfinnelsen anvendelse av en ekspresjonsvektor som omfatter den kodende sekvensen for en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament til behandlingen og/eller forebyggingen av aterosklerose, der IL-18-inhibitoren er valgt fra gruppen som består av antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorsubenhetene og en IL-18BP, et mutein av IL-18BP som omfatter konservative aminosyresubstitusjoner, et fusjonert protein av IL-18BP og immunoglobulintungkjederegioner, eller et funksjonelt derivat som omfatter PEGylert IL-18BP, der muteinet, det fusjonerte proteinet eller det funksjonelle derivatet opprettholder den biologiske aktiviteten i å binde til IL-18.
Oppfinnelsen gjelder også anvendelse av en celle som har blitt genetisk modifisert for å fremstille en inhibitor av IL-18 i fremstillingen av et medikament til behandlingen og/eller forebyggingen av aterosklerose, der IL-18 inhibitoren er valgt fra gruppen som består av antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorsubenhetene, og IL-18BP, et mutein av IL-18BP som omfatter konservative aminosyresubstitusjoner, et fusjonert protein av IL-18BP og immunoglobulintungkjederegioner, eller et funksjonelt derivat som omfatter PEGylert IL-18BP, der muteinet, det fusjonerte proteinet eller det funksjonelle derivatet opprettholder den biologiske aktiviteten i å binde til IL-18.
Oppfinnelsen angår videre anvendelsen av IL-18 som en diagnostisk markør for progresjon av aterosklerose.
Etter den foregående beskrivelsen av oppfinnelsen, vil det nå bli refererer til de følgende eksemplene som alle er tilveiebrakt som illustrasjoner av oppfinnelsen, og det bør være underforstått at de ikke er begrensende for oppfinnelsen som sådan.
EKSEMPLER
Materialer oe metoder
Prøver
41 aterosklerotiske plakk ble fjernet fra 36 pasienter som var underkastet karotidendarterektomi. For kontroller ble det oppnådd 2 karotid og 3 indre brystarterier som var fri for aterosklerose (2 med minimal fibromuskulær fortykning) ved obduksjon eller under kirurgisk inngrep i forbindelse med hjertebypass. Disse ble raskt nedsenket i flytende nitrogen og lagret ved -80°C.
Plakk som ble brukt for protein- og RNA-ekstraksjon ble raskt vasket og nedsenket
i flytende nitrogen før de ble lagret ved -80°C. For immunohistokjemiske undersøkelser ble nevnte plakk plassert i 2 timer i frisk 4 % paraformaldehyd og så overført til en 30 % sukrose-PBS-løsning før de ble hurtigfrosset ved optimal skjæretemperatur i et vevsbearbeidende medium (O.C.T. Compound, Miles Inc, Diagnostics Division) med flytende nitrogen og lagret ved -80°C for kryostatsnitting. Flere 8 til 10 um tykke snitt ble tatt fra hver enkelt prøve for histologisk analyse og immunohistokjemiske undersøkelser.
Pasientklassifikasjon
For å undersøke et mulig forhold mellom IL-18/IL-18BP-ekspresjon og tegn på plakkustabilitet, ble det ved hjelp av blindprøver innsamlet kliniske data fra 23 fortløpende pasienter (ut av 36) som var underkastet endarterektomi mellom mai og august 2000. Nærværet eller fraværet av et intraplakksår ved makroskopisk undersøkelse ble systematisk angitt av den legen som utførte endarterektomiinngrepet. Dette gjorde det mulig å klassifisere de innsamlede plakk som enten ulcerøse eller ikke-ulcerøse. I tillegg ble pasientene klassifisert etter sine kliniske symptomer i to separate grupper. Pasienter som hadde kliniske symptomer på cerebralt iskemisk anfall i forhold til karotidstenose, ble klassifisert som symptomatiske. Endarterektomi ble utført fra 2. til 66. dag (17,6 + 5,3 dager) etter at pasienten hadde utviklet nevnte kliniske symptomer. Pasienter som aldri hadde vist symptomer på cerebral iskemi i karotidarterieområdet, ble klassifisert som asymptomatiske. Asymptomatisk karotidstenose ble påvist på basis av systematisk klinisk undersøkelse av pasienter med koronare eller perifere sykdommer, og dens grad ble bestemt ved å bruke gjentatt Doppler ekkografi ved hjelp av en erfaren og kvalifisert ekkografist. Selv om de asymptomatiske pasientene aldri hadde hatt et iskemisk anfall i karotidstenoseområdet, har det vist seg at karotidendarterektomi har vært fordelaktig for disse pasientene, slik det er vist av forskere i Asymptomatic Carotid Atherosclerosis Study (ACAS) (28).
Western Blot- analyse
Proteiner ble ekstrahert fra 12 aterosklerotiske plakk og 5 kontroll normale arterier. Frosne prøver ble pulverisert under flytende nitrogen. Pulverne ble så igjen suspendert i iskald oppløsningsbuffer [20 mmol/1 Tris-HCl, pH 7,5, 5 mmol/1 EGTA, 10 mmol/1 NaCl, 20 mmol/1 glyserofosfat, 10 mmol/1 NaF, 1 mmol/1 natriumortovanadat, 1 % Triton X-100, 0,1 % Tween 20, 1 u.g/ml aprotinin, 1 mmol/1 PMSF, 0,5 mmol/1 N-tosyl-L-fenylalaninklormetylketon (TPCK), 0,5 mmol/1 N(a)-p-tosyl-L-lysinklormetylketon (TLCK)] i en mengde på 0,3 ml/10 mg våtvekt. Ekstraktene ble inkubert på is i 15 minutter og så sentrifugert (12000 g, 15 minutter 4°C). Rensemiddelløselige supernatantfraksjoner ble beholdt, mens proteinkonsentrasjonene i prøvene ble bestemt ved å bruke en Bio-Rad proteinprøve.
For å utføre Western Blot-prøver for IL-18 og IL-18R, ble proteinekstraktene kokt i 5 minutter og påsatt en 7,5 % eller 15 % SDS-polyakrylamidgel. For IL-18BP, ble rhIL-18 renset fra E. Coli (Serono Pharmaceutical Research Institute, Genéve) koblet til Affligel 15 (Biorad) i en mengde på 1 mg/ml harpiks ifølge fabrikantens protokoll. 60 ug proteinekstrakt ble innkubert over natten ved 4°C på en valse med 20 ul harpiks justert til 500 ul PBS 0,05 % Tween. For å fjerne eventuell ikke-spesifikk binding, ble harpiksen sentrifugert og vasket med 10 mM Tris, pH 8, 140 mM NaCl, 0,5 % Triton-X-100 (Fluka), 0,5 % deoksycholat og så med 50 mM Tris, pH 8, 200 mM NaCl, 0,05 % TX100, 0,05 % nonidet P40 (Fluka), 2 mM CHAPS (Boehringer, Mannheim) fulgt av en siste vasking med 50 mM Tris, pH 8. Harpiksen ble så sentrifugert, igjen suspendert i prøvebufferen under reduserte betingelser, kokt i 5 minutter og så til slutt påsatt en 10 % SDS-polyakrylamid NuPAGE-gel (Invitrogen).
Prøvene ble elektroforetisk overført fra polyakrylamidgelene til nitrocellulose. Nitrocellulosemembranene ble mettet i 2 timer ved romtemperatur i TBST [50 mmol/1 Tris-HCl (pH 7,5), 250 mmol/1 NaCl og 0,1 % Tween saltløsning] som inneholdt 5 % fettfri tørrmelk. Membranene ble så innkubert med geit anti-humant IL-18 og IL-18R (oc-kjede) polyklonale antistoffer (1 u.g/ml) (R & D Systems), muse anti-humant IL-18BP monoklonalt antistoff (Mab 657.27 med 5 u.g/ml)
(Corbaz et al., 2000 innsendt manuskript), kanin anti-humant kaspase-1 polyklonalt antistoff (1 u.g/ml) (A-I9, Santa Cruz). Spesifisiteten for Mab 657.27 ble analysert på den rensede membranen ved konkurranse med et 200 gangers molart overskudd av rhIL-18BP-6his (renset fra kinesiske hamstereggstokkceller, Serono Pharmaceutical Research Institute) og innkubert sammen med Mab 657-27 i en mengde på 5 \ xg/ ml i 1 time. Etter innkubering med HRP-konjugerte tilsvarende antistoffer, ble kjemiluminescenssubstrater (ECL, Western blotting; Amersham Corp) brukt for å påvise positive bånd etter fabrikantens instruksjoner, og båndene ble så visualisert etter eksponering for Hyperfilm ECL (Amersham Corp).
Immunohistokjemi
Frosne snitt av 6 aterosklerotiske plakk ble innkubert med 1:10 normalt hesteserum eller 1:10 normalt geiteserum i 30 minutter ved romtemperatur, vasket en gang i PBS og så innkubert, enten med et primært monoklonalt museantistoff mot CD68 for makrofagidentifikasjon (DAKO-CD68, KP1), eller et primært monoklonalt museantistoff mot humant glatt muskel a-aktin (1A4, DAKO) for å identifisere glatte muskelceller. For å identifisere IL-18 og IL-18-reseptorer i nevnte aterosklerotiske plakk, ble spesifikke geite polyklonale antistoffer (R & D Systems) brukt ved en fortynning på 5 u.g/ml. IL-18BP ble påvist ved å bruke et spesifikt monoklonalt antistoff som var rettet inn mot rekombinant humant IL-18BP-isoform a (H20) (Corbaz et al., 2000 innsendt manuskript). Etter vasking i PBS ble snittene innkubert med følgende sekundært biotinylerte antistoffer: Et biotinylert heste anti-mus IgG (Vector Laboratories, Inc) i en fortynning på 1:200 for å påvise farging med antistoffer mot CD68, glatt muskel cc-aktin og IL-18BP, og et biotinylert heste anti-geit IgG (Vector) i en fortynning på 1:200 for påvisning av anti-IL-18 og anti-IL-18-reseptorantistoffer. Immunofarging ble visualisert ved hjelp av et avidin-biotin HRP visualiseringssystem (Vectastain ABC-sett PK-6100 Vector). For negative kontroller ble tilstøtende snitt farget med isotypetilpassede irrelevante antistoffer i stedet for med de primære antistoffene.
RNA - fremstilling
Totalt RNA ble ekstrahert fra 29 aterosklerotiske plakk i en sur guanidiumtiocyanatløsning og ekstrahert med fenol og kloroform ved hjelp av fremgangsmåten til Chomczynski og Sacchi (29). Det rensede RNA ble løst i vann, og konsentrasjonen ble målt ved absorpsjon ved 260 nm. RNAs integritet ble undersøkt ved elektroforese på 1 % agarosegeler. cDNA ble syntetisert fra 1 u.g totalt RNA ved å bruke Promegas reverse transkripsjonssystem ved å følge fabrikantens protokoll.
Semikvantitative og virkelig tids PCR av humant IL- 18 og IL- 18BP i humane aterosklerotiske plakk
Semikvantitative PCR-reaksjoner ble utført i et totalt volum på 50 ul i nærværet av 1 U AmpliTaq DNA polymerase (Perkin Eimer, Roche, U.S.A), 2,5 mM dNTP (Amersham, U.S.A) og 50 pmol av forover og reverse PCR-primere. Reaksjonsblandingene ble innkubert i et PCT-200 Peltier Effect Thermal Cycler-apparat (MJ Research, U.S.A) under de følgende betingelser: Denaturering i 1 minutt ved 94°C, sammenligning i 1 minutt ved 55°C og forlengelse i 1 minutt ved 72°C. For å sikre en sammenligning ble mengden av PCR-produkter under den lineære fasen av PCR-reaksjonen, det vil si IL-18BP, IL-18 og P-aktin, analysert etter 25, 28 og 31 sykluser. Det optimale antallet sykluser for IL-18BP, IL-18 og aktin før båndmetning ble bestemt (31, 28 og 25 henholdsvis). PCR-primerne ble utformet basert på publiserte sekvenser (AF-110799, D49950, X00351) som følger: IL-18, revers 5'-GCGTCACTACACTCAGCTAA-3forover 5'-GCCTAGAGGTATGGCTGTAA-3'; IL-18BP, forover 5'-ACCTGTCTACCTGGAGTGAA-3'; revers 5'-GCACGAAGATAGGAAGTCTG-3'; p-aktin, revers 5'-GGAGGAGCAATGATCTTGATCTTC-3'; og forover 5'-GCTCACCATGGATGATGATATCGC-3<*>. For å utelukke en oppformering av mulig genomisk DNA som kunne forurense prøvene, ble PCR-reaksjonene utført i et fravær av cDNA-templaten. PCR-produktene (10 ul) ble analysert på 1 % agarosegeler med elektroforese i lx TAE-buffer. Størrelsen på PCR-produktene ble verifisert ved en sammenligning med en 1 kb stige (ladder) (Gibco) etter farging av gelene. Relativ kvantifisering av etidiumbromidfargede bånd ble utført under UV-lys ved å bruke Kodak Digital Sciences analytisk programvare, og ble angitt som forholdet mellom målgenet (hIL-18BP, hIL-18) til husholdningsgenet (hp-aktin). ;SYBR Green Real Time PCR-primere for IL-18, IL-18BP og GAPDH (husholdningskontroll) ble utformet ved å bruke Primer Express programvare fra PE Biosystems ved hjelp av de publiserte sekvensene (AF110799, D49950, NM002046) som følger: IL-18, revers 5'-CAGACCGCTTTAGCAGCCA-3'; forover 5'-CAAGGAATTGTCTCCCAGTGC-3'; IL-18BP, revers 5'-AACCAGGCTTGAGCGTTCC-3'; forover 5'-TCCCATGTCTCTGCTCATTTAGTC-3'; GAPDH, revers 5'-GATGGGATTTCCATTGATGACA-3'; forover 5'-CCACCCATGGCAAATTCC-3'; intron-GAPDH, revers 5'-CCTAGTCCCAGGGCTTTGATT-3'; forover 5'-CTGTGCTCCCACTCCTGATTTC-3<*>. Spesifisiteten og den optimale primerkonsentrasjonen ble undersøkt. Mulig genomisk DNA-forurensning ble utelukket ved å utføre PCR-reaksjonene med spesifikke intron-GAPDH-primere. Fraværet av ikke-spesifikk oppformering ble bekreftet ved å analysere PCR-produktene ved hjelp av elektroforese på en 3,5 % agarosegel. SYBR Green Real-Time PCR ble utført med 5 ul/brønn av RT-produkter (0,5 ng totalt RNA), 25 u. l/brønn av SYBR Green PCR masterblanding (PE Biosystems, CA, USA) med AmpErase Uracil N-glykosylase (UNG) (0,5 enheter/brønn) og 20 ul av primerne (300 nM). PCR ble utført ved 50°C i 2 minutter (ved AmpErase UNG-innkubering for å fjerne eventuelt uracil som var inkorporert i cDNA), 95°C i 10 minutter (for AmpliTaq gullaktivering), og så kjørt i 40 sykluser ved 95°C i 15 sekunder, 60°C i 1 minutt og så gjennom ABI PRISM 7700 påvisningssystemet. De revers transkriberte cDNA-prøvene ble således oppformert, og deres Ct (syklusterskel) verdier ble så bestemt. Alle Ct-verdiene ble normalisert i forhold til husholdningsgenet GAPDH. Det ble observert et enkelt spesifikt DNA-bånd for IL-18, IL-18BP og GAPDH ved å bruke gelelektroforeseanalyse.
Prinsippet ved en såkalt real-time-påvisning ved å bruke "SYBR Green PCR masterblanding" er basert på en direkte påvisning av PCR-produkt ved å måle den økning av fluorescensen som er forårsaket av bindingen av SYBR Green-fargestoffet til dobbelttrådet DNA.
Statistisk analyse
Dataene ble uttrykt som ± SEM. Nivåene av IL-18 ble sammenlignet mellom grupper ved hjelp av Mann-Whitney-testen. En verdi på p 0,05 ble ansett å være statistisk signifikant.
Eksempel 1: Beskyttelse av IL-18-inhibitorer mot endotelisk celledød indusert ved å oksidere lipoproteiner (oxLDL)
Dyrkede humane navleveneendoteliske celler (HUVEC-celler) ble eksponert i 16 timer for oxLDL i nærværet eller fraværet av IL-18-bindende protein eller anti-IL-18-antistoff. Som vist på figur 1, så døde 83 % av nevnte HUVEC-celler etter eksponeringen for oxLDL. En samtidig innkubering med IL-18BP eller anti-IL-18-antistoff gjorde at nesten ingen celler døde. Det ble ikke observert noen døde celler ved å bruke IL-18BP. 89 % av cellene overlevde ved å bruke anti-IL-18-antistoff.
Dette eksperimentet viser klart den beskyttende effekten av to forskjellige IL-18-inhibitorer mot celledød som skyldes apoptose inne i aterosklerotisk plakk.
Eksempel 2: Ekspresjon av IL-18-protein og dens endogene inhibitor IL-18BP i aterosklerotiske plakk
Western blot-analyser ble utført på proteinekstrakter fra 12 karotide aterosklerotiske arterier og 5 normale kontroller. IL-18-protein, og heri inngår den aktive formen, ble i høy grad uttrykt i alle de undersøkte aterosklerotiske plakkene, mens det bare lot seg påvise lite eller ingen ekspresjon i normale arterier (figur 2). Stripene 1 til 4 inneholder prøver fra aterosklerotisk plakk, mens stripene 5 til 7 er fra normale arterier. Påvisning av den aktive formen av IL-18 synes interessant nok å være korrelert med ekspresjonen av den aktive formen av kaspase-1 som inngår i IL-18-bearbeidingen (figur 2, fjerde rad). Signifikant ekspresjon av IL-18-reseptorprotein (a-kjeden) ble også påvist i alle de undersøkte aterosklerotiske plakkene sammenlignet med et meget lavt ekspresjonsnivå i normale arterier (figur 2, andre rad). I tillegg ble det påvist at mesteparten av de aterosklerotiske plakkene uttrykte IL-18BP, skjønt ekspresjonsnivået var heterogent (figur 1, første rad).
Eksempel 3: Cellulær lokalisering av IL-18-protein og dens endogene inhibitor IL-18BP i aterosklerotisk plakk
For å bestemme den cellulære lokaliseringen av IL-18 og IL-18BP, ble det utført immunohistokjemiske undersøkelser på 6 karotide aterosklerotiske plakk. Som vist på figur 2, ble IL-18 i alt vesentlig uttrykt i makrofager, og sannsynligvis er disse cellene hovedkilden for IL-18 i plakk (ikke vist). Disse områdene var også rike på CD3-positive lymfocytter. T-lymfocytter synes imidlertid ikke direkte å inngå i IL-18-produksjon. IL-18 ble også uttrykt i noen av de innerste glatte muskelcellene og nå og da også i endoteliske celler. I motsetning ble det påvist signifikant ekspresjon av IL-18BP i endoteliske celler fra plakk mikrokar og den luminale overflaten, skjønt ekspresjonen ble ikke funnet i alle karene. Relativt lav og mer heterogen IL-18BP-ekspresjon ble også påvist, i alt vesentlig ekstracellulært, i enkelte makrofagrike områder.
Eksempel 4: Ekspresjon av IL-18 og IL-18BP mRNA-transkripter i aterosklerotiske plakk og deres forhold til plakkustabilitet
For å bestemme hvorvidt humant IL-18 og IL-18BP mRNA ble uttrykt i humane karotide aterosklerotiske plakk, ble det utført semikvantitativ RT-PCR på seks aterosklerotiske plakk (figur 3). IL-18 og IL-18BP mRNA ble påvist i alle de aterosklerotiske plakk, skjønt mengden av mRNA for IL-18 og IL-18BP var heterogen. For derved mer nøyaktig å kvantifisere nivåene av IL-18 og IL-18BP mRNA-ekspresjon, ble ytterligere 23 aterosklerotiske plakk analysert ved hjelp av SYBR Green Real-Time PCR-metoden (figur 4). De anvendte plakkene blekarakterisert vedklinisk og patologisk undersøkelse som symptomatiske (ustabile) eller asymptomatiske (stabile) plakk på basis av hvorvidt de inneholdt makroskopiske sår eller ikke. De kliniske karakteristika for pasientene er angitt i tabell 4. Prosent med karotiddiameterreduksjon (60-95%) og risikofaktorer så som alder, diabetes, hyperkolesterolemi, hypertensjon og sigarettrøyking, var ikke forskjellige mellom de to gruppene.
'Disse pasientene hadde forbigående eller vedvarende iskemisk cerebralt anfall 2-66 dager før endarterektomi.
De pasientene som hadde klinisk hypertensjon ble behandlet med antihypertensive midler.
De pasientene som hadde klinisk hyperkolesterolemi ble behandlet med lipidsenkende medikamenter.
Mengden av IL-18 ble funnet å være oppregulert i de symptomatiske sammenlignet med de asymptomatiske aterosklerotiske plakkene (2,03 + 0,5 vs 0,67 ±0,17 henholdsvis) (figur 4A). Statistisk analyse viste at denne økningen av IL-18-produksjonen som ble observert i de symptomatiske plakkene var sterkt signifikant (p < 0,0074), mens den økte mengden av IL-18BP som ble observert i de symptomatiske versus de asymptomatiske plakkene ikke var signifikante (4,64 0,98 vs 2,5 ± 0,92 henholdsvis) (figur 4B). Med andre ord, både de symptomatiske og asymptomatiske gruppene viste positiv korrelering mellom IL-18 og IL-18BP mRNA, men helningsgradene var signifikant forskjellige mellom de to gruppene (symptomatisk gruppe: helning 1,16 [0,19-2,14], r<2>= 0,36 vs asymptomatisk gruppe: helning 4,79 [2,39-7,20], r2 = 0,76; p < 0,05). Det synes derfor som om den relative økningen med hensyn til IL-18-ekspresjon i den symptomatiske gruppen ikke er tilstrekkelig til å kompensere for økningen i IL-18-ekspresjon. Ettersom nærværet av sår er ansett å være en egenskap ved ustabile plakk, ble det videre utført en statistisk analyse på plakk med eller uten intra-plakksår, og dette viste en signifikant oppregulering av IL-18 i de plakkene hvor sår var tilstede (p < 0,018)
(figur 4C).
Disse dataene viser at økningen i IL-18-ekspresjon som kan observeres i aterosklerotisk plakk, er korrelert med at disse er ustabile.
Eksempel 5: IL-18BP modulerer aterosklerotisk sårutvikling og stabilitet i en in vivo modell på sykdommen
Metoder
Pasientkarakteristika
Det ble oppnådd plasmaprøver fra pasienter med akutte iskemiske koronare syndromer (ustabil angina og hjerteinfarkt) mindre enn 7 dager etter at symptomene var begynt å utvikle seg. Ustabil angina ble definert som assosiasjonen mellom typiske brystsmerter og enten iskemiske forandringer i elektrokardiogrammet, eller nærværet av koronær arteriesykdom. Hjerteinfarkt ble diagnostisert på basis av typiske iskemiske forandringer i elektrokardiogrammet assosiert med signifikant økning av de myokardiale enzymene (kreatinfosfokinase og troponin I) i det sirkulerende blodet. Ikke-iskemiske pasienter ble samlet fra den samme kardiologiavdelingen og var fullstendig fri for iskemiske signaler. Plasmanivåer med hensyn til humant IL-18 ble bestemt v ed å bruke et kommersielt tilgjengelig sett (MBL, Japan).
In vivo intramuskulær elektrooverføring av muse IL- 18BP ekspresjonsplasmid
14 hannlige C57BL/6 ApoE KO-mus, 14 uker gamle, fikk med 3 ukers mellom tre injeksjoner med iL-18BP-ekspresjonsplasmidet pcDNA3-IL18BP. Kontrollmus (n = 19) ble injisert med tomt plasmid. Muse IL-18BP-isoform d cDNA isolert som beskrevet tidligere (tilvekstnummer # Q9ZOM9) (23) ble så subklonet over i EcoRl/Noti-setene av pattedyrcelleekspresjonsvektoren pcDNA3 under kontroll av cytomegaloviruspromotoren (Invitrogen). Konstruksjonen som kalles 334.yh, er vist på figur 5. Kontrollplasmidene var tilsvarende konstruert, men var uten innhold av terapeutisk cDNA. IL-18BP eller kontrollekspresjonsplasmidet (60 (j.g) ble injisert i både kinnben og kraniemusklene hos bedøvede mus slik det tidligere er beskrevet (13). Kort beskrevet ble transkutane elektriske pulser (8 kvadratiske bølgeelektriske pulser på 200 V/cm, varighet 20 millisekunder ved 2 Hz) tilført ved hjelp av en PS-15 elektropulsator (Genetronics, Frankrike), ved å bruke to plateelektroder av rustfritt stål plassert 4,2 og 5,3 mm fra hverandre på hver side av benet.
ELISA mIL- 18BP
Platene ble over natten dekket med r-mIL-18BPd-affinitetsrenset kanin polyklonalt antistoff (5 u.g/brønn). Løselig mIL-18BP ble påvist ved å bruke biotinylert kanin polyklonalt antistoff (0,3 u.g/ml) som var utviklet mot E. coli r-mIL-18BP (Peprotec) fulgt av ekstravidinperoksidase (1/1000) (Sigma). Det innfangende kanin polyklonale antistoffet ble testet ved Western Blot for å bekrefte mIL-18BP-spesifitet. Rekombinant mIL-18BPd fremstilt av HEK 293-celler ble brukt som standard. Følsomheten på ELISA-prøven var 5 ng/ml.
Analyse av mus
Kryostatsnitt (8 u.m) ble fremstilt fra aortasinus og ble brukt for påvisning av lipidavsetning ved å bruke fargestoffet Oil rød, mens kollagen ble påvist ved å bruke fargestoffet Sirius rød, mens den immunohistokjemiske analysen ble utført som beskrevet tidligere (13). Snittene ble farget med spesifikke primære antistoffer: Anti-mus makrofag, klon MOMA2 (BioSource), fosfatase alkalisk-konjugert anti-a-aktin for glatte muskelceller og anti-CD3 for T-lymfocytter (Dako) som beskrevet tidligere (13). Påvisning av celledød ble utført ved å bruke TUNEL-teknikken (13). CD3-positive celler ble mikroskopisk telt ved hjelp av blindprøver. Aterosklerotiske plakk i aortasinus og områder som farget positive for makrofager, glatte muskelceller, kollagen eller TUNEL, ble målt ved å bruke datamaskinassistert billedkvantifisering (NS15000, Microvision) som beskrevet tidligere (13). Farging med ikke-immun isotypetilpassede immunoglobuliner ble brukt for å bedømme spesifisiteten på immunofargingen. Spesifisiteten for TUNEL ble bedømt ved å utelate enzymet terminal deoksynukleotidyltransferase. Hjerteaortablodårene som går fra venstre subklaviske arterie til nyrearteriene, ble fiksert med 10 % bufret formalin og farget for lipidavsetning med fargestoffet Oil rød. De ble så åpnet på langs, og prosenten av lipidavsetning ble beregnet ved å bruke datamaskinassistert billedkvantifisering (NS 15000, Microvision).
Resultater
Den foreliggende undersøkelsen testet hypotesen at IL-18/IL-18BP-reguleringen spiller en viktig rolle både ved aterogenesen og plakkstabiliteten. Plasmanivåene for IL-18 hos pasienter med akutte koronære syndromer (30 menn og 18 kvinner, midlere alder 66,2 +1,8 år, hvorav 14 hadde ustabil angina og 34 hadde hjerteinfarkt), og i ikke-iskemiske kontrollpasienter som var samlet fra samme kardiologiavdeling (10 menn og 3 kvinner, midlere alder 60,0 ± 5,2 år) ble målt. Plasmanivåene av IL-18 var signifikant forhøyet hos akutte koronære pasienter sammenlignet med kontrollene (146,9 ± 17,1 vs 73,0 ± 12,2 pg/ml henholdsvis, p < 0,05), i motsetning til sirkulerende nivåer av IL-18BP som var svakt forhøyede (20,1 ± 2,7 vs 7,5 ± 2,5 ng/ml henholdsvis, p = 0,06). I tillegg var IL-18-nivåene korrelert med graden av sykdommen, slik at de høyeste nivåene ble observert hos pasienter med alvorlig iskemisk hjertedysfunksjon og kliniske signaler på lungeødem (224,03 + 39,1 pg/ml, p < 0,001 sammenlignet med kontrollene). Disse resultatene som ble oppnådd fra pasienter med akutt koronær sykdom sammen med tidligere observasjoner at IL-18 er forhøyet i aterosklerotisk plakk fra pasienter med slag [Mallar, 2001], antyder at IL-18/IL-18BP-regulering spiller en meget viktig rolle i den aterosklerotiske prosessen.
Vi testet derfor denne hypotesen ved å bruke apoE knockout (KO) mus som
spontant utviklet menneskelignende aterosklerotiske sår. Et antall på fjorten 14 uker gamle hannmus mottok IL-18BP via en in vivo intramuskulær elektrooverføring av et ekspresjonsplasmid DNA som koder for muse IL-18BPd, mens 19 mus av samme alder som kontroller fikk det tomme plasmidet. Plasmidelektrooverføringen ble gjentatt hver tredje uke, og musene ble avlivet da de var 23 uker gamle etter 9 ukers behandling. Plasmanivåene for mus IL-18BP var lavere enn påvisningsgrensen (5 ng/ml) i apoE KO-mus injisert med det tomme plasmidet. En enkelt injeksjon av IL-18BP-plasmidet resulterte imidlertid i høye nivåer av IL-18BP i blodet med et maksimum 2 dager etter injeksjonen (323,5 ± 100,9 ng/ml) og 127,4 ± 35,4 ng/ml målt etter 2 uker. Etter 9 ukers behandling med enten IL-18BP eller det tomme plasmidet, så var nivåene av totalt kolesterol (489,4 ± 34,6 vs 480,8 ± 36,3 mg/dl henholdsvis) og høytetthets lipoproteinserumnivåer (52,3 ± 9,4 vs 48,8 + 5,1 mg/dl henholdsvis) ikke forskjellig mellom de to gruppene. En moderat, men signifikant økning av dyrenes vekt ble observert i den gruppen som var behandlet med IL-18BP sammenlignet med kontrollgruppen (31,8 ± 0,9 vs 28,6 + 0,8 g henholdsvis, p < 0,05).
Effekten av tilførselen av IL-18BP på aterosklerosen ble undersøkt på to forskjellige steder: Den nedadgående toraksaortaen og på aortasinus. Toraksaorta ble valgt for å bestemme hvorvidt IL-18BP spiller en rolle ved utviklingen av fettstreker (aterogenese) ettersom toraksaterosklerotiske sår var nesten fraværende ved en alder på 14 uker (data ikke vist), da IL-18BP-transfeksjonen startet. Aortasinus, hvor aterosklerotiske sår allerede var tilstede ved en alder på 14 uker (data ikke vist), ble undersøkt for fremskreden plakkprogresjon og sammensetning, en viktig determinant for plakkstabilitet. IL-18BP-behandlingen av apoE KO-mus påvirket signifikant utviklingen av aterosklerotiske sår og sykdommens generelle progresjon. En undersøkelse av toraksaorta viste en markant reduksjon av lipidavsetningen hos de mus som var behandlet med IL-18BP-plasmidet sammenlignet med det tomme plasmidet (figur 6). Kvantitativ datamaskinassistert
billedanalyse viste 69 % reduksjon med hensyn til graden av aterosklerotiske sår (p
< 0,0001) (figur 6), noe som viser at IL-18 spiller en kritisk rolle ved utviklingen av aterogenese. En behandling med IL-18BP-plasmidet i bare 9 uker viste dessuten en signifikant begrensning med hensyn til progresjonen av fremskredet aterosklerotiske plakk i aortasinus (24 % reduksjon av plakkstørrelsen, p = 0,01), sammenlignet med behandlingen med det tomme plasmidet (figur 7).
Viktigere var det at sammensetningen av de fremskredne sårene, en viktig determinant for plakkustabilitet, ble betydelig påvirket av IL-18BP-behandlingen. Aterosklerotiske sår hos mus behandlet med IL-18BP-plasmidet viste en meget signifikant 50 % reduksjon med hensyn til makrofaginfiltrering (p < 0,0001) (figur 8), inneholdt 67 % færre T-lymfocytter (p < 0,005) (figur 8), og viste en dobling med hensyn til glatt muskelcelleakkumulering (p < 0,05) (figur 9). Disse viktige forandringene med hensyn til den sårcellulære sammensetningen var dessuten assosiert med en signifikant 85 % økning av kollageninnholdet (p < 0,0005) slik dette kunne bestemmes ved farging med Sirius rødt og en senkning av det totale lipidinnholdet. IL-18BP-behandlingen senker eller demper således den inflammatoriske prosessen signifikant inne i de aterosklerotiske sårene, og induserer en helingsprosess som er karakteristisk for stabile aterosklerotiske plakk. Den markerte reduksjonen av den inflammatoriske komponenten i sårene hos IL-18BP-behandlede mus, var videre assosiert med en vesentlig reduksjon med hensyn til opptreden av celledød inne i plakkene (2,9 ± 0,9 % i IL-18BP-behandlede mus vs 10,5 ± 3,6 % i kontrollmusene, p < 0,05), noe som derfor begrenser ekspansjonen og trombogenisiteten for den acellulære lipidkjernen [Mallat, 1999].
Konklusjoner:
Ved å bruke en velkjent og godt underbygget musemodell på humanlignende aterosklerose, så viser de ovennevnte resultatene at IL-18 og IL-18BP-regulering spiller en uventet og meget viktig rolle ved aterosklerotisk plakkutvikling, progresjon og stabilitet. Mens inhibering av IL-18-aktivitet ved IL-18BP-tilførsel både hindrer tidlig sårdannelse i toraksaorta, så har aktiviteten også en sterk effekt på sårsammensetningen i aortasinus, noe som vender utviklingen mot en mer stabil plakkfenotype.
Den kliniske prognosen for en pasient med aterosklerose er ikke bare avhengig av størrelsen på sårene. Det er nå velkjent at kvaliteten (plakksammensetning), snarere enn størrelsen på såret, vil ha bedre predikasjons verdi med hensyn til fremtidig forekomst av iskemiske anfall. De fleste alvorlige kliniske manifestasjonene på aterosklerose (infarkt i hjertet eller hjernen) skyldes i virkeligheten vanligvis at karhulrommet er tiltettet ved en trombedannelse som er dannet ved kontakt med et sprukket aterosklerotisk plakk (19). Patologiske undersøkelser har vist at utsatte eller ustabile plakk som har en tendens til brudd elleTsom har sprukket, er rike på inflammatoriske celler og viser et vesentlig tap av glatte muskelceller og nedsatt kollageninnhold (20, 21). Videre viser slike plakk en signifikant forøkning med hensyn til apoptotisk celledød, noe som fører til dannelsen av en sterkt trombogen lipidkjerne (13, 22). Det er verd å merke seg at alle disse tegnene på økende plakkustabilitet ble markert dempet eller svekket i IL-18BP-behandlede mus, noe som indikerer at IL-18-signalisering er en viktig faktor ved dannelsen av plakkustabilitet.
De resultatene som ble oppnådd i apoE KO-mus i forhold til sykdommen hos mennesker, får styrket relevans ved de her angitte observasjonene av økende nivåer av sirkulerende IL-18 hos pasienter med akutte koronære syndromer, og økt IL-18-produksjon i ustabile karotidaterosklerotiske plakk som er ansvarlige for slag. Samlet identifiserer disse oppdagelsene at inhibitorer av IL-18-aktivitet kan brukes som nye, viktige terapeutiske redskaper for å hindre og behandle aterosklerotisk plakkutvikling og derved begrense plakkomplikasjoner.
Eksempel 6: Forhøyede nivåer av IL-18 er korrelert med tilbakevendende anfall hos hj ertesviktpasienter
Nivåene av IL-18 ble målt i blodsera hos pasienter ved hjelp av ELISA og med et IL-18-spesifikt antistoff.
Til sammen ble det undersøkt 56 iskemiske og ikke-iskemiske pasienter, med eller uten hjertesvikt.
Hos pasienter som senere døde, var nivåene av IL-18 216,0 + 41,5 pg/ml versus 112,2 ± 12,2 pg/ml hos pasienter uten dødsfall (p = 0,0018).
Hos pasienter som på en eller annen måte fikk et tilbakevendende anfall, så som død, tilbakevendende iskemi, revaskularisering, progresjon av aterosklerose eller fornyet innleggelse på sykehus på grunn av hjertesvikt, ble følgende IL-18-nivåer målt: 165,8 ± 23,8 versus 107,7 ± 14,6 hos pasienter uten noen form for tilbakevendende anfall (p = 0,03).
Disse resultatene viser at IL-18-nivåene er signifikant forhøyede hos pasienter med dårlig klinisk prognose, for eksempel tilbakevendende anfall eller endog dødsfall.
Blodprøver hos 16 ikke-iskemiske pasienter, med eller uten hjertesvikt, ble målt for innhold av IL-18. Hos de pasientene som senere døde, var nivåene 199,0 ± 34,8 pg/ml versus 95,3 ± 20,4 pg/ml hos de pasientene som overlevde (p = 0,09).
Pasienter med en eller annen form for tilbakevendende anfall: 146,6 34,4 pg/ml IL-18 versus 95,4 ± 23,9 pg/ml hos pasienter som ikke hadde noen form for tilbakevendende anfall (p = 0,03). Skjønt forskjellen med hensyn til IL-18-nivåene ikke nådde statistisk signifikans, noe som skyldes det lave antallet pasienter, så var det mulig å observere en klar tendens mot forhøyede nivåer av IL-18.
Hos iskemiske pasienter var IL-18-nivåene 214,2 ± 45,9 pg/ml hos pasientene som døde versus 118,4 ± 12,8 pg/ml hos de som overlevde (p = 0,007).
162,8 ± 24,7 pg/ml av IL-18 ble målt hos pasienter som hadde en eller annen form for tilbakevendende anfall versus 116,2 ± 16,0 hos de pasientene som ikke hadde noen form for tilbakevendende anfall.
REFERANSER
1. Ross R. Atherosclerosis-an inflammatory disease. N Engl J Med 1999; 340: 115-1126. 2. van der Wal AC, Becker AE, van der Loos CM, Das PK. Site of intimal rupture or erosion of thrombosed coronary atherosclerotic plaques ischaracterized byan inflammatory process irrespective of the dominant plaque morphology. Circulation 1994; 89: 36-44. 3. Fuster V, Badimon L, Badimon JJ, Chesebro JH. The pathogenesis of coronary artery disease and the acute coronary syndromes (1). N Engl J Med 1992; 326: 242-250. 4. Fuster V, Badimon L, Badimon JJ, Chesebro JH. The pathogenesis of coronary artery disease and the acute coronary syndromes (2). N Engl J Med 1992; 326: 310-318. 5. Lee RT, Libby P. The unstable atheroma. Arterioscler Thromb Vase Biol 1997; 17: 1859-1867. 6. Ridker PM, Cushman M, Stampfer MJ, Tracy RP, Hennekens CH. Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men. N Engl J Med 1997; 336: 973-979. 7. Libby P. Molecular bases of the acute coronary syndromes. Circulation 1995; 91: 2844-2850. 8. Nakamura, K, Okamura, H, Nagata, K and Tamura, T. (1989). Infect Immun. 57, 590-595. 9. Yoshimoto T, Takeda K, K, Tanaka, T, Ohkusu, K, Kashiwamura, S, Okamura, H, Akira, S and Nakanishi, K (1998). J. Immunol 161, 3400-3407. 10. Parnet, P, Garka, K E, Bonnert, T P, Dower, S K, and Sims, J E. (1996). J. Biol. Chem. 271, 3967-3970. 11. DiDonato, J A, Hayakawa, M, Rothwarf, D M, Zandi, E and Karin, M. (1997). Naturel, 16514-16517. 12. Novick, D, Kim, S-H, Fantuzzi, G, Reznikov, L, Dinarello, C, and Rubinstein, M (1999). Immunity 10, 127-136. 13. Mallat Z, Hugel B, Ohan J, Leséche G, Freyssinet JM, Tedgui A. Shed membrane microparticles with procoagulant potential in human atherosclerotic plaques. A role for apoptosis in plaque thrombogenicity. Circulation 1999; 99: 348-353. 14. Tricot O, Mallat Z, Heymes C, Belmin J, Leséche G, Tedgui A. Relation Between Endothelial Cell Apoptosis and Blood Flow Direction in Human Atherosclerotic Plaque Circulation 2000; in press. 15. Dimmeler S, Haendeler J, Galle J, Zeiher AM. Oxidized low-density lipoprotein induces apoptosis of human endothelial cells by activation of CPP32-like proteases. A mechanistic clue to 'response to injury' hypothesis. Circulation 1997; 95: 1760-3.
16. Grantham, Science, Vol. 185, pp. 862-864 (1974).
17. Dimmeler S, Haendeler J, Galle J, Zeiher AM. Oxidized low-density lipoprotein induces apoptosis of human endothelial cells by activation of CPP32-like proteases. A mechanistic clue to the 'response to injury' hypothesis. Circulation 1997; 95: 1760-3. 18. Mir LM, Bureau MF, Gehl J, Rangara R, Rouy D, Caillaud JM, Dellere P, Branellec D, Schwartz B, Scherman D. High efficiency gene transfer into skeletal muscle mediated by electric pulses. Proe Nati Acad Sei USA 1999; 96: 4262-7. 19. Lee, R.T. & Libby, P. The unstable atheroma. Arterioscler Thromb Vase Biol 17, 1859-1867 (1997). 20. Davies, M.J. The composition of coronary-artery plaques [editorial;
comment]. N EnglJ Med 336, 1312-1314 (1997). 21. Virmani, R., Kolodgie, F.D., Burke, A.P., Farb, A. & Schwartz, S.M. Lessons from sudden coronary death: a comprehensive morphological classification scheme for atherosclerotic lesions. Arterioscler Thromb Vase Biol 20, 1262-1275. (2000). 22. Kolodgie, F.D. et al. Localization of apoptotic macrophages at the site of plaque rupture in sudden coronary death [In Process Citation]. Am JPathol 157, 1259-1268 (2000). 23. Kim, S.H. el al. Structural requirements of six naturally occurring isoforms of the IL-18 binding protein to inhibit IL-18. Proe Nati Acad Sei USA97,\ 190-1195 (2000). 24. Elliott, M.J., Maini, R.N., Feldmann, M., Long-Fox, A., Charles, P., Bijl, H., Moore MA, Vilcek J, Daddona P, et al. Construction and initial characterization of a mouse-human chimeric anti-TNF antibody. Mol Immunol 1993 Nov 30: 16 1443-53. 26. Tucci, A., James, H., Chicheportiche, R., Bonnefoy, J.Y., Dayer, J.M., and Zubler, R.H., 1992, J. Immunol. 148, 2778-2784. 27. Engelmann, FL, D. Novick, and D. Wallach. 1990. Two tumor necrosis factor-binding proteins purified from human urine. Evidence for immunological cross-reactivity with cell surface tumor necrosis factor receptors. J. Biol. Chem. 265: 1531-1536. 28. Moore WS, Barnett HJ, Beebe HG, et al. Guidelines for carotid endarterectomy. A multidisciplinary consensus statement from the Ad Hoc Committee, American Heart Association. Circulation 1995; 91: 566-79. 29. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem 1987; 162: 156-9. 30. US 5877197, (Karanewsky, D.S.), 1999.03.02. 31. Young, J.L., et al., "The Serpin protease inhibitor 9 is an endogenous inhibitor of interleukin-1-beta-converting enzyme (Caspase-1) activity in human vascular smooth muscle cells.", 2000.05.01, Jour. Of Exp. Med., Vol. 191, No.9, pp. 1535-44. 32. Seta, Y. et al., "Interleukin 18 in acute myocardial infarction", Heart, BMJ, 2000.12.06, Vol.84, No.6, p.668.
Claims (35)
1. Anvendelse av en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament for å behandle og/eller forebygge aterosklerose, der IL-18-inhibitoren er valgt fra gruppen som består av antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorsubenhetene og IL-18-bindende protein (IL-18BP), et mutein av IL-18BP som omfatter konservative aminosyresubstitusjoner, et fusjonert protein av IL-18BP og immunoglobulintungkjederegioner, eller et funksjonelt derivat som omfatter PEGylert IL-18BP, der muteinet, det fusjonerte proteinet eller det funksjonelle derivatet opprettholder den biologiske aktiviteten i å binde til IL-18.
2. Anvendelse ifølge krav 1, der medikamentet er til behandlingen og/eller forebyggingen av trombose i en aterosklerotisk plakk.
3. Anvendelse ifølge krav 1 eller 2, der medikamentet er til behandlingen og/eller forebyggingen av aterosklerotiske plakksår.
4. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet er til behandlingen og/eller forebyggingen av aterosklerotisk plakkdestabilisering.
5. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet er til behandlingen og/eller forebyggingen av iskemiske syndromer som skyldes plakkdestabilisering.
6. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet er til behandlingen og/eller forebyggingen av aterosklerotisk plakkoppsprekking.
7. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der IL-18-inhibitoren er et antistoff rettet mot IL-18.
8. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der antistoffet er et humanisert antistoff.
9. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der antistoffet er et humant antistoff.
10. Anvendelse ifølge ethvert av kravene 1-6, der IL-18-inhibitoren er IL-18BP, et mutein av IL-18BP som omfatter konservative aminosyresubstitusjoner, et fusjonert protein av IL-18BP og immunoglobulintungkjederegioner, eller et funksjonelt derivat som omfatter PEGylert IL-18BP, der muteinet, det fusjonerte proteinet eller det funksjonelle derivatet opprettholder den biologiske aktiviteten i å binde til IL-18.
11. Anvendelse ifølge krav 10, der immunoglobulinet i det fusjonerte proteinet er av isotypen IgGl eller IgG2.
12. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet ytterligere omfatter et interferon for simultan, sekvensiell eller separat anvendelse.
13. Anvendelse ifølge krav 12, der interferonet er interferon-p\
14. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet ytterligere omfatter en tumornekrosefaktor (TNF)-antagonist for simultan, sekvensiell, eller separat anvendelse.
15. Anvendelse ifølge krav 14, der TNF-antagonisten er TBI og/eller TBPII.
16. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet ytterligere omfatter en COX-inhibitor for simultan, sekvensiell eller separat anvendelse.
17. Anvendelse ifølge krav 16, der COX-inhibitoren er en COX-2-inhibitor.
18. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet ytterligere omfatter en tromboksaninhibitor, for simultan, sekvensiell eller separat anvendelse.
19. Anvendelse ifølge krav 18, der tromboksaninhibitoren er aspirin.
20. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet ytterligere omfatter et lipidsenkende middel, for simultan, sekvensiell eller separat anvendelse.
21. Anvendelse ifølge krav 20, der det lipidsenkende midlet er en HMG-CoA-inhibitor.
22. Anvendelse ifølge krav 21, der HMG-CoA-inhibitoren er et statin.
23. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der medikamentet blir benyttet i kombinasjon med en diett med lavt fettinnhold og/eller lavt kolesterolinnhold og/eller lavt saltinnhold.
24. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der inhibitoren av IL-18 skal bli benyttet i en mengde på omtrent 0,0001 til 10 mg/kg kroppsvekt, eller omtrent 0,01 til 5 mg/kg kroppsvekt, eller omtrent 0,1 til 3 mg/kg kroppsvakt, eller omtrent 1 til 2 mg/kg kroppsvekt.
25. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der inhibitoren av IL-18 skal bli benyttet i en mengde på omtrent 0,1 til 1000 ug/kg kroppsvekt, eller omtrent 1 til 100 jxg/kg kroppsvekt, eller omtrent 10 til 50 ug/kg kroppsvekt.
26. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der IL-18-inhibitoren skal bli administrert subkutant.
27. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der IL-18-inhibitoren skal bli administrert intramuskulært.
28. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der IL-18-inhibitoren skal bli administrert daglig.
29. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der IL-18-inhibitoren skal bli administrert hver annen dag.
30. Anvendelse av en ekspresjonsvektor som omfatter den kodende sekvensen for en IL-18-inhibitor for fremstillingen av et medikament til behandlingen og/eller forebyggingen av aterosklerose, der IL-18-inhibitoren er valgt fra gruppen som består av antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorsubenhetene og en IL-18BP, et mutein av IL-18BP som omfatter konservative aminosyresubstitusjoner, et fusjonert protein av IL-18BP og immunoglobulintungkjederegioner, eller et funksjonelt derivat som omfatter PEGylert IL-18BP, der muteinet, det fusjonerte proteinet eller det funksjonelle derivatet opprettholder den biologiske aktiviteten i å binde til IL-18.
31. Anvendelse ifølge krav 30, der ekspresjonsvektoren blir administrert ved elektrooverføring.
32. Anvendelse ifølge krav 30 eller 31, ekspresjonsvektoren blir administrert systemisk.
33. Anvendelse ifølge ethvert av de foregående krav, der ekspresjonsvektoren blir administrert intramuskulært.
34. Anvendelse av en celle som har blitt genetisk modifisert for å fremstille en inhibitor av IL-18 i fremstillingen av et medikament til behandlingen og/eller forebyggingen av aterosklerose, der IL-18 inhibitoren er valgt fra gruppen som består av antistoffer mot IL-18, antistoffer mot enhver av IL-18-reseptorsubenhetene, og IL-18BP, et mutein av IL-18BP som omfatter konservative aminosyresubstitusjoner, et fusjonert protein av IL-18BP og immunoglobulintungkjederegioner, eller et funksjonelt derivat som omfatter PEGylert IL-18BP, der muteinet, det fusjonerte proteinet eller det funksjonelle derivatet opprettholder den biologiske aktiviteten i å binde til IL-18.
35. Anvendelse av IL-18 som en diagnostisk markør for progresjon av aterosklerose.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP00109606 | 2000-05-05 | ||
PCT/EP2001/004843 WO2001085201A2 (en) | 2000-05-05 | 2001-04-30 | Use of il-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of atherosclerosis |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20025307D0 NO20025307D0 (no) | 2002-11-05 |
NO20025307L NO20025307L (no) | 2002-12-18 |
NO329821B1 true NO329821B1 (no) | 2010-12-27 |
Family
ID=8168631
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20025307A NO329821B1 (no) | 2000-05-05 | 2002-11-05 | Anvendelse av IL-18 inhibitorer, ekspresjonsvektorer som koder for IL-18 inhibitorer og celler genetisk modifisert til a fremstille inhibitorer av IL-18 for fremstilling av medikamenter til behandling og/eller forebygging av aterosklerose, samt anvendelse av IL-18 som diagnostisk markor for progresjon av aterosklerose |
Country Status (33)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20040076628A1 (no) |
EP (1) | EP1278540B1 (no) |
JP (1) | JP5122053B2 (no) |
KR (2) | KR100798545B1 (no) |
CN (2) | CN1250286C (no) |
AR (1) | AR035640A1 (no) |
AT (1) | ATE395075T1 (no) |
AU (2) | AU6739001A (no) |
BG (1) | BG65881B1 (no) |
BR (1) | BRPI0110506B8 (no) |
CA (1) | CA2407895C (no) |
CY (1) | CY1110385T1 (no) |
CZ (1) | CZ300792B6 (no) |
DE (1) | DE60134009D1 (no) |
DK (1) | DK1278540T3 (no) |
EA (2) | EA007014B1 (no) |
EE (1) | EE05056B1 (no) |
ES (1) | ES2305082T3 (no) |
HK (2) | HK1055681A1 (no) |
HR (1) | HRP20020828A2 (no) |
HU (1) | HU229375B1 (no) |
IL (2) | IL152567A0 (no) |
ME (1) | ME00554B (no) |
MX (1) | MXPA02010895A (no) |
NO (1) | NO329821B1 (no) |
PL (1) | PL209371B1 (no) |
PT (1) | PT1278540E (no) |
RS (1) | RS50926B (no) |
SI (1) | SI1278540T1 (no) |
SK (1) | SK287761B6 (no) |
UA (2) | UA87658C2 (no) |
WO (1) | WO2001085201A2 (no) |
ZA (1) | ZA200208228B (no) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2399148A1 (en) * | 2000-02-10 | 2001-08-16 | Abbott Laboratories | Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using |
CA2435466C (en) * | 2001-01-29 | 2012-04-03 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Use of il-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of heart disease |
CA2445664C (en) * | 2001-05-25 | 2012-03-06 | Ares Trading S.A. | Use of il-18 inhibitors for treating or preventing cns injuries |
US6797727B2 (en) | 2001-07-16 | 2004-09-28 | Transition Therapeutics Inc. | Use of rhein or diacerhein compounds for the treatment or prevention of vascular diseases |
GB0210212D0 (en) * | 2002-05-03 | 2002-06-12 | Univ Southampton | Effects of dietary N-3 and N-6 pufa intake on atheromatous plaque stability |
US8729124B2 (en) | 2002-03-05 | 2014-05-20 | Pronova Biopharma Norge As | Use of EPA and DHA in secondary prevention |
PT1487541E (pt) * | 2002-03-22 | 2008-12-10 | Inst Nat Sante Rech Med | Utilização de inibidores de il-8 para o tratamento e/ou prevenção de doenças vasculares periféricas |
ATE399872T1 (de) * | 2003-03-11 | 2008-07-15 | Serono Lab | Expressionvektoren, die den promotor des ie2-gens des maus cytomegalovirus enthalten |
EP1622939B1 (en) | 2003-05-13 | 2012-03-14 | Merck Serono SA | Active variants of the il-18 binding protein and medical uses thereof |
US7968684B2 (en) * | 2003-11-12 | 2011-06-28 | Abbott Laboratories | IL-18 binding proteins |
US20080044404A1 (en) * | 2004-04-15 | 2008-02-21 | Anna Cederholm | Annexin V for Preventing Atherothrombosis and Plaque Rupture |
CN101219208B (zh) * | 2005-01-04 | 2010-08-11 | 健能隆医药技术(上海)有限公司 | 白介素-22的医药用途 |
PT1885753E (pt) | 2005-06-03 | 2011-10-06 | Ares Trading Sa | Produção de proteína recombinante de ligação a il-18 |
WO2006131550A1 (en) | 2005-06-10 | 2006-12-14 | Ares Trading S.A. | Process for the purification of il-18 binding protein |
AR082518A1 (es) | 2010-08-25 | 2012-12-12 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra il-18r1 y usos de los mismos |
JOP20200308A1 (ar) | 2012-09-07 | 2017-06-16 | Novartis Ag | جزيئات إرتباط il-18 |
MD707Z (ro) * | 2013-01-18 | 2014-07-31 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Metodă de identificare a secvenţelor polimorfe 4a/4b ale genei sintetazei endoteliale a oxidului nitric |
SG11201601717VA (en) | 2013-09-05 | 2016-04-28 | Ab2 Bio Sa | Il-18 binding protein (il-18bp) in inflammatory diseases |
CN107660150B (zh) | 2015-03-05 | 2023-10-24 | Ab2生物股份有限公司 | Il-18结合蛋白(il-18bp)和抗体在炎性疾病中 |
CN110273591B (zh) | 2019-08-13 | 2023-12-12 | 上海杉脉电子科技发展有限公司 | 一种单动力微型智能锁 |
TW202233675A (zh) | 2020-10-29 | 2022-09-01 | 瑞士商諾華公司 | Il-18拮抗劑用於治療和/或預防異位性皮炎或相關病症之用途 |
CN112972655A (zh) * | 2021-04-16 | 2021-06-18 | 武汉大学 | 白细胞介素12在制备预防、缓解和/或治疗主动脉瘤药物中的应用 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5985863A (en) * | 1996-09-12 | 1999-11-16 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for decreasing IGIF and IFN-γ production by administering an ICE inhibitor |
US5877197A (en) * | 1996-12-16 | 1999-03-02 | Karanewsky; Donald S. | C-terminal modified (N-substituted)-2-indolyl dipeptides as inhibitors of the ICE/ced-3 family of cysteine proteases |
IL121860A0 (en) * | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
CA2276216A1 (en) * | 1998-06-24 | 1999-12-24 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | An artificial peptide capable of neutralizing the biological activity of interleukin-18 |
EP0987552A3 (en) * | 1998-08-31 | 2000-06-07 | Pfizer Products Inc. | Diarylsulfonylurea binding proteins |
WO2000012555A1 (fr) * | 1998-09-01 | 2000-03-09 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Proteine de liaison de l'interleukine 18 |
-
2001
- 2001-04-30 UA UAA200507913A patent/UA87658C2/uk unknown
- 2001-04-30 EA EA200401183A patent/EA007014B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-04-30 DE DE60134009T patent/DE60134009D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-30 PL PL365697A patent/PL209371B1/pl unknown
- 2001-04-30 AU AU6739001A patent/AU6739001A/xx active Pending
- 2001-04-30 DK DK01945064T patent/DK1278540T3/da active
- 2001-04-30 MX MXPA02010895A patent/MXPA02010895A/es active IP Right Grant
- 2001-04-30 CN CNB018090540A patent/CN1250286C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-30 HU HU0301991A patent/HU229375B1/hu unknown
- 2001-04-30 EE EEP200200620A patent/EE05056B1/xx unknown
- 2001-04-30 ES ES01945064T patent/ES2305082T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-30 AU AU2001267390A patent/AU2001267390B2/en not_active Expired
- 2001-04-30 JP JP2001581854A patent/JP5122053B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-30 KR KR1020077014038A patent/KR100798545B1/ko active IP Right Grant
- 2001-04-30 US US10/275,341 patent/US20040076628A1/en not_active Abandoned
- 2001-04-30 SK SK1556-2002A patent/SK287761B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-04-30 IL IL15256701A patent/IL152567A0/xx unknown
- 2001-04-30 CN CN2006100092901A patent/CN1841066B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-30 PT PT01945064T patent/PT1278540E/pt unknown
- 2001-04-30 CZ CZ20023644A patent/CZ300792B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-04-30 WO PCT/EP2001/004843 patent/WO2001085201A2/en active IP Right Grant
- 2001-04-30 AT AT01945064T patent/ATE395075T1/de active
- 2001-04-30 SI SI200130832T patent/SI1278540T1/sl unknown
- 2001-04-30 KR KR1020027014755A patent/KR20030016254A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-04-30 BR BRPI0110506A patent/BRPI0110506B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-04-30 ME MEP-2008-640A patent/ME00554B/me unknown
- 2001-04-30 RS YUP-826/02A patent/RS50926B/sr unknown
- 2001-04-30 CA CA2407895A patent/CA2407895C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-30 EP EP01945064A patent/EP1278540B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-30 UA UA2002129704A patent/UA78492C2/uk unknown
- 2001-04-30 EA EA200201175A patent/EA005410B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-05-04 AR ARP010102129A patent/AR035640A1/es unknown
-
2002
- 2002-10-11 ZA ZA2002/08228A patent/ZA200208228B/en unknown
- 2002-10-16 HR HRP20020828 patent/HRP20020828A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2002-10-24 BG BG107218A patent/BG65881B1/bg unknown
- 2002-10-31 IL IL152567A patent/IL152567A/en active IP Right Grant
- 2002-11-05 NO NO20025307A patent/NO329821B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-11-05 HK HK03107981A patent/HK1055681A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-02 HK HK07102380.7A patent/HK1094909A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-06-30 CY CY20081100684T patent/CY1110385T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO329821B1 (no) | Anvendelse av IL-18 inhibitorer, ekspresjonsvektorer som koder for IL-18 inhibitorer og celler genetisk modifisert til a fremstille inhibitorer av IL-18 for fremstilling av medikamenter til behandling og/eller forebygging av aterosklerose, samt anvendelse av IL-18 som diagnostisk markor for progresjon av aterosklerose | |
US7786274B2 (en) | Anti-IL-20 antibody and its use in treating IL-20 associated inflammatory diseases | |
AU2001267390A1 (en) | Use of IL-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of atherosclerosis | |
JP4885424B2 (ja) | 末梢脈管疾患の治療および/または予防のためのil−18阻害剤の使用 | |
BG108128A (bg) | Използване на инхибитори на интерлевкин -18 за лечение и/или профилактика на сърдечни заболявания | |
NO331882B1 (no) | Anvendelse av IL-18 inhibitorer til a behandle eller forhindre CNS-skader | |
AU2005211606B2 (en) | Use of IL-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of atherosclerosis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
CREP | Change of representative |
Representative=s name: ONSAGERS AS, POSTBOKS 6963 ST OLAVS PLASS, 0130 OS |
|
MK1K | Patent expired |