NO309192B1

NO309192B1 - Krystallinsk form av dihydro-2,3-benzodiazepinderivat

Info

Publication number: NO309192B1
Application number: NO953394A
Authority: NO
Inventors: Benjamin Alan Anderson; Marvin Martin Hansen; Jeffrey Thomas Vicenzi; David Lee Varie; Jr Milton Joseph Zmijewski; Edward Grant Groleau
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1994-08-31
Filing date: 1995-08-30
Publication date: 2000-12-27
Also published as: EP0699678A1; TR199501070A2; NO953394L; CA2157248C; EP0699678B1; PL181086B1; JPH0881469A; BR9503843A; HU223843B1; CN1073996C; FI112489B; ES2214491T3; AU3035795A; ATE262531T1; CZ288679B6; CZ222195A3; HUT72675A; HU9502549D0; AU695424B2; CN1128264A

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en ny fysisk form av et dihydro-2,3-benzodiazepinderivat som er nyttig som et farmasøytisk middel ved behandling av sykdomstilstander i sentralnervesystemet.

Europeisk patentsøknad med publikasjonsnr. EP-A1-0492485 beskriver forbindelsen l-(4-aminofenyl)-3-acetyl-4-metyl-7,8-metylendioksy-3,4-dihydro-5H-2,3-benzodiazepin. Forbindelsen er en potent og selektiv antagonist av den eksltatoriske aminosyre AMPA-reseptoren og antas å ha evnen til å kunne anvendes for behandling av en rekke neurologiske sykdomstilstander. (R)-enantiomeren av denne forbindelsen, heretter betegnet som (R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl)-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin, er den mest potente enantiomeren.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fysisk form av (R)-7-acetyl-5-(4-aminof enyl)-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin som har et røntgenpulver-diffraksjonsmønster med d-avstander ved 12,78, 9,48, 8,99, 8,64, 8,23, 6,39, 6,27, 5,73, 4,01 og 3,96 Å. Det tilveiebringes også en fremgangsmåte for fremstilling av denne formen, farmasøytiske preparater inneholdende denne og fremgangsmåter for anvendelse av forbindelsen.

Det er funnet at (R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl)-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin er polymorf.

Den første fysiske formen av (R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl)-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin som ble funnet hadde et smeltepunkt på ca. 168-172°C og et røntgenpulverdiffraksJonsmønster med karakteristiske d-avstander ved 6,57 og 5,24 Å. Denne fysiske formen refereres heretter til som form I. Den er fremstilt ved å redusere (R)-7-acetyl-8,9-dihydro-8-metyl-5-(4-nitrofenyl )-7H-l ,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin i etanol ved anvendelse av hydrogen og palladium-på-karbon som katalysator, deretter fjernelse av katalysatoren ved filtrering, avdampning av etanolen, oppvarming av resten i 5,7 volumdeler av 1:1 vann/etanol under tilbakeløp og deretter å la den resulterende oppløsningen avkjøles.

Overraskende ga modifikasjon av fremgangsmåten anvendt for å fremstille form I ved å anvende ammoniumformat og palladium-på-karbon istedenfor hydrogen og palladium-på-karbon en ny fysisk form av (R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl)-8,9-dihydro-8-metyl-7B-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin, heretter betegnet som form II. Følgelig ble form II fremstilt ved å redusere (R )-7-acetyl-8,9-dihydro-8-metyl-5-(4-nitrofenyl)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin i etanol ved anvendelse av ammoniumformat og palladium-på-karbon som katalysator, deretter fjerne katalysatoren ved filtrering, avdampning av etanolen, oppvarming av resten i 6 volumdeler av 1:1 vann/etanol under tilbakeløp, og å la den resulterende oppløsning avkjøles. Form II er funnet å ha et røntgen-pulverdiffraksjonsmønster med karakteristiske d-avstander ved 13,12 og 5,01 Å.

Ved å modifisere fremgangsmåten anvendt for å fremstille form II ved å anvende kaliumformat og palladium-på-karbon istedenfor ammoniumformat og palladium-på-karbon ga overraskende en ytterligere fysisk form, i det følgende betegnet som form III. Følgelig ble form III fremstilt ved å redusere (R)-7-acetyl-8 ,9-dihydro-8-metyl-5-(4-ni trofenyl)-7H-l ,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin i etanol ved anvendelse av kaliumformat og palladium-på-karbon som katalysator, deretter fjernelse av katalysatoren ved filtrering, avdampning av etanolen, oppvarming av resten i 6 volumdeler 1:1 vann/etanol under tilbakeløp og ved å la den resulterende oppløsningen avkjøles. Form III er funnet å ha et røntgenpulver-diffraksjonsmønster med karakteristiske d-avstander ved 10,61, 8,83, 6,78, 5,83, 4,13 og 3,74 Å. Denne fysiske formen er gjenstand for en samtidig patentsøknad (ref. X9386C). Overraskende er ytterligere en annen fysisk form, i det følgende betegnet som form IV også oppdaget. Denne formen ble innledningsvis observert å være dannet etter at form II var oppvarmet. Det ble senere funnet at form IV kan fremstilles direkte ved å modifisere prosessen anvendt for å fremstille form III, spesielt ved å øke volumforholdet for vann/etanol anvendt i krystallisasjonstrinnet. Følgelig er form IV fremstilt ved å redusere (R)-7-acetyl-8,9-dihydro-8-metyl-5-(4-nitrofenyl)-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin i etanol ved anvendelse av kaliumformat og palladium-på-karbon som katalysator, deretter fjerne katalysatoren ved filtrering, avdampning av etanolen, oppvarming av resten i 8 volumdeler av 5:3 vann/etanol eller 7 volumdeler av 4:3 vann/etanol under tilbakeløp, eventuelt ved poding med form IV-krystaller ved 70-80° C og ved å la den resulterende blandingen avkjøles. Form IV er funnet å ha et røntgenpulver-diffraksjonsmønster med karakteristiske d-avstander ved 12,78, 9,48, 8,99, 8,64, 8,23, 6,39, 6,27, 5,73, 4,01 og 3,96 Å. Denne fysiske formen tilveiebringes som et trekk ved oppfinnelsen.

Form I er funnet å ha flere uheldige egenskaper. Spesielt er den funnet å krystallisere ut som en tykk oppslemming som er vanskelig å omrøre og overføre. Filtreringstiden er funnet å være uakseptabelt lang for storskala-fremstilling, og tørketiden for den filtrerte våtkaken er også lang. Videre er form I funnet å være termisk ustabil, og er funnet å omdannes til form IV eller, I noen tilfeller, nok en annen fysisk form som heretter betegnes som form V. Form V er funnet å ha et røntgenpulverdiffraksjonsmønster med karakteristiske d-avstander ved 6,12, 5,94 og 5,48 Å. Form V viser flere faseoverganger når det utsettes for differensiell sveip-kalometri.

Form II er funnet å krystallisere ut som en rørbar suspensjon som lett kan filtreres. Imidlertid er den funnet å tørke langsomt og å holde fast på krystallisasjonsoppløsnings-midlet. Som form I er den funnet å være termisk ustabil med hensyn til omvandling til form IV.

Form III er funnet å krystallisere ut som en omrørbar suspensjon som lett kan filtreres og tørkes. Den er også funnet å være termisk stabil.

Form IV er også funnet å krystallisere ut som en rørbar suspensjon som lett kan filtreres og tørkes. Som form III er den også funnet å være termisk stabil.

Hver av former I, II, III, IV og V er karakterisert ved røntgendiffraksjon ved <13>C faststoff NMR-spektroskopi og ved differensiell sveip-kalorimetri. De anvendte teknikkene, og de fysiske egenskapene bestemt for prøvene av hver form er angitt nedenfor, sammen med (bare for formene III og IV) generelle områder oppnådd ved differensiell sveip-kalorimetri ved anvendelse av et antall forskjellige prøver.

Røntgendiffraksjons-(XRD ) mønsteret ble oppnådd på et Siemens D5000 røntgendiffraktometer, utstyrt med en Cu Ka (X=l,54056Å)-kilde som opererer ved en rørbelastning på 50 KV og 40 mA. Data ble samlet med Kevex faststoff-detektor. Hver prøve ble skannet mellom 4 og 35° 20 med en trinnstørrelse på 0,03° og en maksimal sveiphastighet på 2 sek./trinn.

Differensiell sveip-kalorimetri (DSC) målinger ble utført på en Seiko differensielt sveip-kalorimeter. Prøver (2-5 mg) forseglet i aluminiumbeholdere ble oppvarmet fra romtemperatur (25°C) til minst 200°C ved en hastighet på 10°C/min.

<13>C-krysspolarisasjon/"magic angle spinning" (CP/MAS )-NMR-spektra ble oppnådd ved å anvende et Varian Unity 400 MHz-spektrometer som opererer ved en karbonfrekvens på 100,577 MHz og utstyrt med et fullstendig faststoffutstyr og Varian 5 eller 7 mm VT CP/MAS-probe. Typiske målebetingelser var som følger: 90(deg) proton r.f. puls 5,0 ms, kontakttid 1-2 ms,

pulsrepetisjonstid 5s, MAS-frekvens 7 kHz, spektral vidde 50 kHz, og akvisisjonstid 50 ms. De kjemiske forskyvningene ble referert til CH3~gruppen av heksametylbenzen (S - 17,3 ppm) ved prøve-erstatning.

Form I

DSC: Hovedendoterm ved 171,5'C, mindre endoterm ved 207,4°C

XRD:

Form II

DSC: Endoterm ved 85,2°C, eksoterm ved 91,4°C, endoterm ved 192,3°C

XRD:

Form III

DSC: Endoterm ved 194,7°C, for denne prøven. Andre prøver var funnet å vise en endoterm ved en temperatur i området på fra 192 til 195°C.

XRD:

Form IV

DSC: Endoterm ved 203,2^, for denne prøven. Andre prøver var funnet å vise en endoterm ved en temperatur i området på fra 201 til 207°C.

XRD:

Form V

DSC: Endoterm ved 170,6°C, eksoterm ved 177,3°C, endoterm ved 206,2°C

XRD:

Ifølge et annet trekk tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for fremstilling av form IV, som innbefatter

a) omsetning av en forbindelse av formelen:

hvori Ms er metansulfonyl, R er metyl, X er acetyl og Aryl er p-nitrofenyl med kaustisk soda for å gi en forbindelse av formel I:

hvori R er metyl, X er acetyl og Aryl er p-nitrofenyl;

b) reduksjon av p-nitrofenylgruppen i forbindelsen med formel I til en anilingruppe ved anvendelse av kaliumformat i

nærvær av palladium-på-trekull som katalysator for å gi en forbindelse av formel I hvori Aryl er p-aminofenyl; og

c) krystallisering av forbindelsen med formel I hvori Aryl er p-aminofenyl fra en blanding av vann og etanol hvori

antallet volumdeler vann pr. volumdeler etanol er minst 1.1/1,0.

Trinn (a) av fremgangsmåten utføres hensiktsmessig ved en temperatur i området på fra 0 til 100°C. Egnede oppløsnings-midler innbefatter alkanoler såsom metanol eller etanol, og etere såsom tetrahydrofuran.

I trinn (c) er antallet volumdeler vann pr. volumdeler etanol fortrinnsvis i området fra 1,15 til 2,0, mer foretrukket fra 1,2 til 1,8 volumdeler.

Forbindelsen av generell formel VII kan fremstilles ved flertrinnsprosess, med utgangspunkt fra et metylendioksy-fenylketonderivat. Denne fremgangsmåten omfatter: a) tilveiebringelse av en mengde av en forbindelse som har formelen: hvori R er metyl; b) asymmetrisk reduksjon av forbindelsen av formel II for å gi en forbindelse som har formelen: c) omsetning av forbindelf benzaldehydforbindelsen isokromanforbindelse s d) omsetning av forbindelsen av formel IV med et oksyderende middel for å gi en forbindelse av formelen: e) omsetning av forbindelsen av formel V med eddiksyrehydrazid for å gi en forbindelse av formelen:

f) omsetning av forbindelsen av formel VI med metansulfonylklorid og et tertiær amin, for å danne en forbindelse av

formel VII.

Den foretrukne fremgangsmåten omfatter tidlig chiral reduksjon av et keton til en alkohol. Substituentene tilsettes i en flertrinnsprosess for å lukke den benzo-kondenserte pyranringen før en hydrazinreagens innføres for å åpne ringen og tilsette de nødvendige nitrogenkomponentene. Endelig lukkes den sekundære ringen ved tilsetning av en sterk base og forbindelsen reduseres for å danne den ønskede forbindelsen.

Mest foretrukket er det chirale reduksjonstrinnet det Innledende trinnet i syntesen av forbindelsene av formel (I) fra ketoner. Den chirale reduksjonen kan bevirkes ved å anvende spesifikke kjemikalier eller, fortrinnsvis, ved å anvende biologiske midler omtalt nedenfor. Fastsettelse av stereokjemien tidlig i prosessen er fordelaktig og gjør det mulig at de senere trinnene kan utføres på relativt enantiomerisk rent materiale. Dette øker både utbyttet og enantiomerisk renhet.

Det første trinnet av prosessen innbefatter en chiral reduksjon av 3,4-metylendioksyfenylaceton for å fremstille et i det vesentlige enantiomerisk rent alkoholderivat av 1,2-metylendioksybenzen. Fortrinnsvis er den dannede enantiomeren S- eller (+ )-stereoisomeren av alkoholen.

Alternativt kan det innledende trinnet innbefatter kombi-nasjonen av et halogenderivat av 1,2-metylendioksybenzen med et enantiomerisk anriket epoksyd. Dette resulterer også i fremstillingen av et meget enantiomerisk anriket alkoholderivat av 1,2-metylendioksybenzen.

Materialet anvendt for å bevirke det innledende chirale reduksjonstrinnet kan enten være kjemisk eller fortrinnsvis biologisk. I tilfelle med biologiske midler er de foretrukne midlene reduserende enzymer, mest foretrukket gjærtyper fra Zygosaccharomyces-gruppen. Andre biologiske midler som kan anvendes Innbefatter: Pichia fermentans, Endomycopsis fibuligera, Nematospora coryli, Saccharomyces sp., Candida famata, Saccharomyces pastorianus, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces uvarum, Candida utilis, Saccharomyces globosus, Kluyveromyces dobzhansk, Kluyveromyces lactis, Candida albicans, bakegjær, Zygosaccharomyces rouxii, Lactobacillus acidophilus, Aureobasidium pullulans, Mortierella isabellina, Rhizopus oryzae, Kloeckeva javanica, Hanseniaspora valbyensis, Octosporomyces octospori, Candida guilliermondi, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Torulopsis taboadae, Torulopsis ethanolltolerans, Torulopsis ptarmiganii, Torulopsis sonorensis, Trigonopsis variabilis, Torulopsis enokii, Torulopsis methanothermo, SAF instant gjær, ashland-gjær lnact., Candida boidinil, Candida blankii og Red Star-gjær.

De ønskede mellomformene i det innledende trinnet er en alkoholsubstituert artsfelle av 1,2-metylendioksybenzen, den mest foretrukne artsfellen består av (S)-a-metyl-l,3-benzodioksol-5-etanol.

Den ønskede mellomforbindelsen dannet i det innledende trinnet underkastes deretter en Pictet-Spengler-reaksjon som tilveiebringer konvergent sammensmeltning av benzodiazepin-karbonbestanddelene. Den foretrukne reagensen som velges er p—nitrobenzaldehyd, selv om andre reagenser som er kjente for fagfolk såsom acetaler kan anvendes. De foretrukne mellom-produktene er dihydrobenzopyraner, mens den mest foretrukne forbindelsen er 7,8-dihydro-7-metyl-5-(4-nitrofenyl)-5H-l,3-dloksolo-benzo[b]pyran.

Dihydrobenzopyran-artsfellen oksyderes deretter ved C5-posisjonen for å gi et hemiketalderivat av den generelle formelen:

De foretrukne oksyderende midlene omfatter kaliumpermanganat, DDO (2,3-diklor-5,6-dicyano-l,4-benzokinon) eller andre, det mest foretrukne midlet er en natriumhydroksyd og luftkombi-nasjon.

C5-hemiketalet omsettes deretter med eddiksyrehydrazid i nærvær av syre for å danne hydrazon-mellomproduktet. I dette trinnet åpnes benzopyranringen slik at hydrazonkomponenten knyttes til C5-karbonet. Reaksjonen utføres hensiktsmessig i et tllbakeløpende aromatisk eller protisk oppløsningsmiddel, det foretrukne hydrazonet har generell formel:

hvor R er CH3, X er acetyl og Aryl er p-nitrofenyl.

Fremgangsmåten kan sammenfattes ved hjelp av følgende skjemaer.

I skjema (I) omfatter det innledende trinnet av fremgangsmåten tilsetningen av biologiske midler, mest foretrukket Zygosaccharomyces rouxii, for å redusere ketonet til den ønskede alkoholen. En egnet mengde av en adsorpsjonsmiddel-harpiks såsom AD-7, XAD-7, HP2MGL (tverrbundede polymetakry-later fra Rohm & Haas), HP20 (polystyrenisk) eller SP207 (bromert polystyren fra Mitsubishi) kan tilsettes til reaksjonsblandingen for å forhindre død av organismen og for å adsorbere alkoholen ettersom den dannes. Andre tilsvarende harpikser kan også anvendes.

I skjema II omfatter det innledende trinnet av prosessen omsetning av et arylhalogenidderivat, såsom 4-brom-l,2-(metylendioksy)-benzen, med et alkalimetallhydrokarbon (sek-butyllitium er foretrukket) og et enantiomerisk rent epoksyd. Alternativt kan et arylhalogenid først omdannes i en Grignard-reagens ved omsetning med magnesium, deretter omsettes med et enantiomerisk rent epoksyd i nærvær av kobber(I) jodid som katalysator. Foretrukket er (S)- - (-)-propylenoksyd. I både skjema I og skjema II er formålet å fastsette stereokjemien av C8-atomet av benzodiazepinringen så tidlig som mulig. Begge skjemaer er observert å oppnå dette formålet og har dannet enantiomerisk anrikede (ee)-alkoholer i 98% renhetsområdet.

(R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl)-8,9-dihydro-8-mety1-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin er kjent å være en selektiv antagonist for AMPA-reseptoren. Følgelig ifølge et annet trekk omfatter foreliggende oppfinnelse derfor anvendelsen av form IV for fremstillingen av et medikament for blokkering av AMPA-reseptorer i et pattedyr som krever slik behandling.

En rekke fysiologiske funksjoner er vist å være underkastet innvirkningen av for stor eller uegnet stimulering av eksitatorisk aminosyre-neurotransmisjon. (R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl )-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]-benzodiazepin antas å ha evnen til å behandle en rekke neurologiske sykdomstilstander i pattedyr forbundet med denne tilstanden som omfatter akutte neurologiske sykdomstilstander såsom cerebrale mangler som følge av hjerte-bypass-kirurgi og poding, slag, cerebral ischemi, ryggradstrauma, hodetrauma, perinatal hypoksi, hjertestans og hypoglycemisk neuronal skade. Forbindelsen antas å ha evnen til å behandle en rekke kroniske neurologiske sykdomstilstander såsom Alzheimers sykdom, Huntingtons chorea, amyotrofisk lateral sklerose, AIDS-indusert demens, okular skade og retinopati, og idiopatisk og legemiddel-indusert Parkinsons sykdom. Foreliggende oppfinnelse omfatter videre anvendelsen av form IV for fremstilling av et medikament for behandling av disse sykdomstilstandene.

Forbindelsen antas også å ha evnen til å behandle en rekke andre neurologiske sykdomstilstander i pattedyr som er forbundet med glutamatdisfunksjon innbefattende muskel-kramper, konvulsjoner, migrene-hodepine, urin inkontinens, psykose, legemiddeltoleranse og abstinens, angst, kvalme, hjerneødem, kronisk smerte og tardiv dyskinesi. Forbindelsen er også nyttig som et analgesisk middel. Derfor omfatter foreliggende oppfinnelse også anvendelsen av form IV for fremstillingen av et medikament for behandling av disse sykdomstilstandene.

Betegnelsen "effektiv mengde" anvendes her for å representere en mengde av form IV som er i stand til å blokkere den AMPA eksitatoriske aminosyrereseptoren. Den spesielle dosen av forbindelsen som administreres ifølge foreliggende oppfinnelse vil naturligvis være bestemt av de spesielle forholdene som omgir tilfellet, innbefattende forbindelsen som administreres, administreringsmåten, den spesielle tilstanden som behandles og tilsvarende forhold. Formen kan administreres ved en rekke fremgangsmåter innbefattende oralt, rektalt, transdermalt, subkutant, intravenøst, intramuskulært eller intranasalt. Alternativt kan formen administreres ved kontinuerlig infusjon. En typisk daglig dose vil inneholde fra ca. 0,01 mg/kg til ca. 30 mg/kg av den aktive forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse. Foretrukne daglige doser vil være ca. 0,05 mg/kg til ca. 24 mg/kg, mer foretrukket ca. 0,1 til ca. 20 mg/kg.

Form IV vil generelt bli administrert i et farmasøytisk preparat. Ifølge et annet trekk tilveiebringer foreliggende oppfinnelse et farmasøytisk preparat som omfatter form IV og et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller en bærer.

Ved fremstilling av preparatene ifølge oppfinnelsen vil den aktive bestanddelen vanligvis bli blandet med en bærer, eller fortynnet ved hjelp av en bærer, eller innesluttet i en bærer som kan foreligge i form av en kapsel, pose, papir eller annen beholder. Når bæreren tjener som et fortynningsmiddel, kan den være et fast, halvfast eller flytende materiale som virker som en bærer, et hjelpestoff, eller medium for den aktive bestanddelen. Preparatene kan være i form av f.eks. tabletter, piller, pulvere, pastiller, poser, pulverkapsler, suspensjoner, aerosoler, myke og hårde gelatinkapsler og sterilt, forpakkede pulvere.

Noen eksempler på bærere, hjelpestoffer og fortynningsmidler omfatter laktose, dekstrose, sukrose, sorbitol, mannitol, stivelser, akasiegummi, kalsiumfosfat, alginater, tragant, gelatin, kalsiumsilikat, mikrokrystallinsk cellulose, polyvinylpyrrolidon, cellulose, metylcellulose, metyl- og propylhydroksybenzoater, talk, magnesiumstearat og mineral-olje. Preparatene kan i tillegg innbefatte smøremidler, fuktemidler, emulgerings- og suspensjonsmidler, konser-veringsmidler, søtningsmidler eller smaksgivende midler. Preparatene ifølge oppfinnelsen kan sammensettes slik at de tilveiebringer rask, vedvarende eller forsinket frigivelse av den aktive bestanddelen etter administrering til pasienten ved å anvende fremgangsmåter som er velkjente innen teknikken.

Preparatene sammensettes fortrinnsvis i enhetsdoseform, hvor hver dose inneholder fra ca. 5 til ca. 5000 mg, mer foretrukket ca. 25 til ca. 3000 mg av den aktive bestanddelen. Den mest foretrukne enhetsdoseformen inneholder ca. 100 til ca. 2000 mg av den aktive bestanddelen. Betegnelsen "enhetsdoseform" refererer til en fysikalsk atskilt enhet som er egnet som enhetsdoser for humane objekter og andre pattedyr, hvor hver enhet inneholder en på forhånd bestemt mengde av det aktive materialet beregnet slik at den skal frembringe den ønskede terapeutiske effekten, sammen med en egnet farmasøytisk bærer.

De følgende eksemplene illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1

Syntese av ( S)- a- metyl- 1. 3- benzodioksol- 5- etanol

1 ekv. av 3,4-metylendioksyfenylaceton, 0,45 ekv. dinatrium-fosfat, 0,03 ekv. fosforsyre, 12,5 volumdeler AD-7-harpiks og 5,8 volumdeler vann ble blandet sammen og omrørt i 15-60 minutter ved 20-25" C. 2,27 ekv. glukose ble tilsatt og Z. rouxii ATCC 14462 tilsettes i en mengde på 1,5 g våtcelle-pasta pr. g keton (dette er 0,375 g/g på en tørrbasis). Denne blandingen ble fortynnet med vann til 25 volumdeler og deretter forsiktig omrørt ved 33-35°C i 8-16 timer. Blandingen ble filtrert på en 100 mesh (~150 mikrometer) sikt av rustfritt stål, og harpiksen som forble ved siktingen ble vasket med 25 volumdeler vann oppdelt i 4 separate porsjoner. Produktet, som var adsorbert på harpiksen, ble deretter desorbert fra harpiksen med 25 volumdeler aceton. Aceton/produkt-oppløsningen ble deretter spaltet til tørrhet under vakuum for å gi mellomproduktet i tittelen som en gul olje av middels viskositet. In-situ-utbyttet var 97-100$, mens det isolerte utbyttet var 85-90$. Potensen var 80-95$ og EE er 100$.

Eksempel 2

Syntese av ( 5R. 7S)- 7. 8- dihydro- 7- metyl- 5-( 4- nitrofenvl)- 5H-1. 3- diokso- r4. 5- glf2~ l- benzopyran

Det ovenfor nevnte mellomproduktet ble oppløst i 4,64 volumdeler toluen, filtrert over Hyflo og vasket med 1,55 volumdeler toluen. 1,05 ekv. p-nitro-benzaldehyd og 1,05 ekv. av konsentrert saltsyre ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet til 55-65°C og omrørt i 1 time. En oppløsnings-middelutveksling ble deretter gjennomført ved 250 mm kvikksølv, idet toluen ble erstattet med 12,4 volumdeler av 93$ isopropanol/7$ vann. Volumet under denne oppløsnings-middelvekslingen varierte fra 11-14 volumdeler og det endelige volumet var 11 volumdeler. Blandingen ble avkjølt til 0-10°C og ble omrørt i 1 time. De nålelignende produkt-krystallene ble filtrert og vasket to ganger med 1,85 volumdeler isopropanol og tørket under vakuum ved 50-60°C. In-situ-utbyttet av forbindelsen i overskriften var 95+$, mens det isolerte utbyttet var 87-93$. Potensen var 99+$ og EE er 100$.

Eksempel 3

Alternativ syntese av ( S )- a- metyl- l. 3- benzodioksol- 5- etanol

3,47 g av 4-brom-l,2-(metylendioksy)-benzen ble oppløst i 100 ml tetrahydrofuran ved -78°C, 13,9 ml 1,3M sek-butyllitium i cykloheksan ble deretter tilsatt for å forbruke arylhaloge-nidet på mindre enn 30 minutter. 1,00 g av (S)-(- )-propylen-oksyd i 2 ml THF ble tilsatt ved hjelp av nål og oppløsningen ble omrørt i 45 minutter. Oppløsningen ble deretter oppvarmet til 23° C i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble helt i 3M ammoniumkloridoppløsning og produktet ble isolert ved ekstraksjon med etylacetat. De kombinerte ekstraktene ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert gjennom florisil og konsentrert ved rotasjonsfordampning. Den gjenværende oljen ble renset ved silikagelkromatografi og eluert med en 50:50-blanding av heksan og dietyleter for å gi 1,40 g (45$) av mellomproduktet i undertittelen.

Pkjem: [a]365 = +117,2° (c = 1,0, CHC13);

TLC Rf = 0,26 (50:50 heksan:eter);

IR (CHCI3) 3598, 3012, 2973, 2887, 1490, 1249, 1041 cm"<1>; <13>C-NMR (CDCI3) S 147,75, 146,19, 132,26, 122,27, 109,68,

108,30;

Massespektrum, m/z (FD, M<+>) 180;

Anal. Beregnet for <C>10<H>12°3: c 66,65; H 6,71

Funnet: C 66,42; H 6,66

Fkaempel 4

Alternativ svntese av ( 5RS. 7S)- 7. 8- dlhvdro- 7- metvl- 5-( 4-nitrofenvl)- 5H- l. 3- dlokso- r4. 5- glf2~ l- benzopvran 244 g p-nitrobenzaldehyd ble tilsatt til en oppløsning av 300 g av mellomproduktet dannet i det biokatalyserte reduksjonstrinnet av eksempel 1 i 4,45 1 toluen. 166,5 ml konsentrert saltsyre ble dråpevis i løpet av 15-20 minutter, og den resulterende blandingen ble oppvarmet til 60°C i 2,5 timer. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert ved rotasjonsfordampning. 3 1 etanol ble tilsatt og blandingen ble konsentrert til et faststoff. En andre porsjon på 3 1 etanol ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 1 time. Oppslemmingen ble avkjølt over natten og det krystallinske produktet ble isolert ved vakuumfiltrering. Filterkaken ble vasket med etanol og deretter tørket i en vakuumovn ved 40-60"C for å gi 450 g (86$) av en beigehvitt faststoff som ble bestemt å være en isomerisk blanding av det optisk aktive mellomproduktet i undertittelen.

Pkjem: [a]365 - +55° (c - 0,4, CHC13)

Eksempel 5

Svntese av ( 5RS. 7S)- 7. 8- dlhvdro- 7- metvl- 5-( 4- nitrofenvl)- 5H-1. 3- dloksolor4. 5- glr2lbenzopvran- 5- ol

350 g av det isomeriske mellomproduktet fra eksempel 4 ble tilsatt til en oppløsning av 731 ml dimetylsulfoksyd og 2923

ml dimetylformamid. Blandingen ble avkjølt til 8-12°C og i komprimert luft ble ført gjennom blandingen. 117,5 ml 50$

vandig natriumhydroksyd ble tilsatt i en porsjon og den resulterende blandingen ble omrørt i 4,5 timer. Reaksjonsblandingen ble tilsatt ved hjelp av kanyle i løpet av 30-60

minutter til 8,25 1 av en omrørt IN saltsyreoppløsning ved 10-15-C. Den resulterende utfellingen ble filtrert og vasket med 3 1 vann, deretter lufttørket til en konstant vekt (384 g). Den våte kaken ble ført inn i eksempel 6 uten ytterligere tørking.

Pkjem: Data registrert fra en 3:1 isomerisk blanding.

TLC Rf = 0,19 (75:25 heksan:etylacetat);

IR (CHC13) 3605, 3590, 3015, 3000, 2960, 2910, 1608, 1522,

1484, 1352, 1240, 1042 cm-<1>;

1-H-NMR (CDCI3, 300 MHz) d (hovedisomer): 8,16 (d, 2H, J=6,9

Hz), 7,73 (d, 2H, J=6,9 Hz), 6,55 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,83 (s, 1H), 4,38 (m, 1H), 2,70 (m, 2H), 1,39 (d, 3H, J=6,3Hz);

d (mindre isomer): 8,27 (d, 2H, J=8,9 Hz), 7,90 (d, 2H, J=8,6 Hz), 6,87 (s, 1H) , 6,73 (s, 1H) , 6,03 (s, 1H), 6,02 (s, 1H), 3,95 (m, 1H), 2,7 (uklar,

m, 2H), 1,24 (d, 3H, J=6,l Hz);

Massespektrum, m/z (FD, M<+>) 329;

Anal. Beregnet for C17<H>15N06: C 62,01; H 4,59; N 4,25

Funnet: C 62,22; H 4,79; N 4,29

Eksempel 6

Svntese av ( S )- eddiksyre- l" T6-( 2- hydroksypropyl")-! , 3- benzodioksol- 5- yll ( 4- nitrof enyl ) metylen~ lhydrazid

Til 350 g av våtkaken fra eksempel 5 i 2300 ml etanol ble det tilsatt 94,5 g eddiksyrehydrazid og 1 ml konsentrert saltsyre. Den resulterende oppløsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i 2,5 timer. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert til et gult skum ved rotasjonsfordampning. Konsentratet ble oppløst i 4,9 1 etylacetat og vasket med 1,5 1 mettet natriumbikarbonat, deretter 1,5 1 saltvannsoppløsning. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulf at, filtrert og konsentrert for å gi 373 g av et gult skum (91$). Materialet ble identifisert som en 1:1 inseparabel blanding av isomerer av forbindelsen i undertittelen (97$ ren ifølge HPLC).

Pkjem: Data registrert fra en 1:1 isomerisk blanding.

Smp. 167,8-169,7'C;

TLC Rf = 0,55 (etylacetat);

IR (CHCI3) 3590, 3485, 3310, 1694, 1673, 1520, 1485, 1346

cm-1; <1>H-NMR (CDCI3, 300 MHz) d 8,64, 8,50 (s, 1H, NH) , 8,18 (d, 2H, Ar-H), 7,74, 7,71 (d, 2H, J=8, Ar-H), 6,99, 6,95 (s, 1H, Ar-H), 6,52, 6,50 (s, 1H, Ar-H), 6,06, 6,05 (d, 2H, J=5, 02CH2), 2,44 (s, 3H, CH3), 3,87 (m, 1H, CH), 2,4-2,2 (m, 2H, CH2), 1,12, 1,10 (d, 3H, CH3); <13>C-NMR (CDCI3, 75 MHz) d 209,94 (C), 173,38, 173,43 (C), 149,38, 149,62 (C), 148,31, 148,58 (C), 147,90, 148,18 (C), 147,54 (C), 142,5, 143,04 (C), 132,64 (C), 127,53, 127,61 (CH), 123,75, 123,77 (CH) , 122,86, 123,27 (C), 112,13 (CH) , 110,55 (CH) , 108,03,

108,10 (CH), 108,03, 108,10 (CH), 101,83 (CH2), 67,51, 68,08 (CH), 42,37, 42,97 (CH2), 23,48, 23,83

(CH3), 23,48, 23,83 (CH3 ) , 20,47, 20,55 (CH3);

Massespektrum, m/z (FD, M<+>) 385;

Anal. Beregnet for C-^oHigNsOfc: C 59,22; H 4,97; N 10,90

Funnet: C 58,99; H 5,04; N 10,68

Eksempel 7

Svntese av ( S)- eddiksyre- ff6-[ 2 - f( metylsulfonyl) oksvlpropyll-1. 3- benzodioksol- 5- yll ( 4- ni tr of enyl ) metylenlhydrazid 340 g av mellomproduktet fra eksempel 6 ble oppløst i 2380 ml metylenklorid. Oppløsningen ble avkjølt til 0° til —10°C og 187 ml trietylamin ble tilsatt. 78,2 ml metansulfonylklorid ble deretter tilsatt og den resulterende blandingen ble omrørt i 15-30 minutter. 510 ml vann ble tilsatt. Den isolerte, organiske fasen ble vasket med 460 ml av en IN saltsyreoppløsning og deretter 500 ml saltvannsoppløsning. Metylenkloridoppløsningen ble oppvarmet til 35-45°C og 4760 ml heksan ble tilsatt i løpet av 90 minutter. Blandingen ble langsomt avkjølt til romtemperatur og deretter ytterligere avkjølt til 0-5°C. Produktet ble isolert ved vakuumfiltrering og tørket i en vakuumovn ved 40-50°C for å gi 356,2 g (87$) av en isomerisk blanding av forbindelsen i undertittelen som et gult faststoff.

Pkjem: Data registrert fra en 3:1 isomerisk blanding.

Smp. 150,5-152,5°C;

TLC Rf = 0,80 og 0,73 (etylacetat);

IR (CHC13) 1696, 1520, 1486, 1346, 1175, 1041, 923 cm-<1>; 1-H-NMR (CDCI3, 300 MHz) d 8,44 (s, 1H, NH) , 8,20 (d, 2H,

J=8,8 Hz, Ar-H), 7,73 (d, 2H, J=8,6 Hz), 6,94 (d, 1H, J=2,7 Hz, Ar-H), 6,57 (d, 1H, 2,6 Hz, Ar-H), 6,08 (d, 2H, J=5,4 Hz), 4,77 (m, 1H, CH), 2,90 (s, 3H, SCH3, hoved), 2,83 (s, 3H, SCH3, mindre), 2,66-2,57 (m, 2H, CH2), 1,30 (d, 3H, CH3, mindre), 1,26

(d, 3H, CH3, hoved);

Massespektrum, m/z (FD, M<+>) 385;

Anal. Beregnet for 020^21^3038:

C 51,83; H 4,57; N 9,07; S 6,92 Funnet: C 52,05; H 4,53; N 8,84; S 6,96

Eksempel 8

Syntese av ( R )- 7- acetvl- 8. 9- dihydro- 8- metyl- 5-( 4- nitrofenyl)-7H- 1. 3- dioksolor4 . 5- hl f 2 13~] benzodiazepin

325 g av mellomproduktet fra eksempel 7 ble oppløst i 3174 ml metanol. Til den omrørte oppløsningen ble det tilsatt 38,1 .ml 50$ kaustisk sodaoppløsning. Den resulterende blandingen ble omrørt i 4 timer. 6348 ml vann ble tilsatt til blandingen og innholdet ble omrørt i 3 timer hvoretter den resulterende utfellingen ble isolert ved vakuumfiltrering. Materialet ble tørket i en vakuumovn ved 45-55° C for å gi 255 g (97$) av forbindelsen i undertittelen som var 97,6$ ren ved HPLC-arealet $. 221 g av det tørkede materialet ble videre renset ved gjenoppslemming i 1105 ml etanol som var oppvarmet til tilbakeløp. Den resulterende blandingen ble avkjølt til romtemperatur og utfellingen ble isolert ved vakuumfiltrering. Isolatet ble tørket i en vakuumovn ved 45-55°C for å gi 199 g (90$) av forbindelsen i undertittelen som var 100$ ren ved HPLC-potensanalyse.

Eksempel 9

Svntese av form IV av ( R)- 7- acetyl- 5-( 4- aminofenyl)- 8, 9-dihydro- 8- metyl- 7H- l. 3- dioksolor4, 5- hlf 2, 3lbenzodiazepin Til 5 g av mellomproduktet fra eksempel 8 i 50 ml etanol ble det tilsatt 0,5 g av 10$ Pd/C fuktet med vann. Den omrørte oppslemmingen ble behandlet med en oppløsning av 4 g kaliumformat i 4 ml vann. Den resulterende blandingen ble omrørt i 2,5 timer og deretter filtrert over Hyflo. Filtratet ble konsentrert til 10-20 ml ved destillasjon og 22 ml vann ble langsomt tilsatt til den varme (78°C) oppløsningen. Den resulterende blandingen ble oppvarmet til 90° C og deretter langsomt avkjølt til romtemperatur. Produktet ble isolert ved vakuumfiltrering og vasket med 10-20 ml vann. Det isolerte, faste stoffet ble tørket under vakuum ved 50°C for å gi 4,17 g (93$) av sluttforbindelsen i undertittelen som var 100$ ren, bedømt ved HPLC-potensanalyse.

[<a>]365 =-303,7° (c = 1, metanol).

Produktet som var krystallinsk, ble senere funnet å være form

IV.

Eksempel 10

Svntese av ( 5RS. 7S1- 7. 8- dihydro- 7- metvl- 5-( 4- nitrofenyl)- 5H-1. 3- dioksolor4. 5- glr2lbenzopyran- 5- ol 15 g av mellomproduktet fra eksempel 4 (avledet fra Z. rouxii-formidlet ketonreduksjon) ble oppløst i en oppløsning av 75 ml dimetylsulfoksyd og 75 ml dimetylformamid. Oppløs-ningen ble avkjølt til 7-9°C og deretter luftet med 40$ oksygen i nitrogen. 7,62 g 50$ natriumhydroksyd i vann ble tilsatt og den resulterende blandingen ble omrørt i 3-4 timer. Reaksjonen ble terminert og mens temperaturen ble holdt ved <12°C, ble 120 ml toluen tilsatt etterfulgt av en blanding av 45 ml vann og 10 ml saltsyre. Fasene ble separert og det organiske laget ble vasket med 75 ml av en 10$ vandig natriumtiosulfatoppløsning. Det organiske laget inneholdende mellomproduktet i undertittelen ble ført inn i det neste trinnet.

Eksempel 11

Syntese av ( S)- eddiksyre- rr6-( 2- h, ydroksypropyl )- l , 3- benzo-dloksol- 5- yll( 4- nitrofenyl) metylen" lhydrazid

Til toluenoppløsningen av mellomproduktet fra eksempel 10 ble det tilsatt 4,26 g eddiksyrehydrazid og (0,01 volumdeler) saltsyre. Den resulterende blandingen ble oppvarmet til tilbake i 3,5 timer ved fjernelse av vann ved hjelp av en Dean-Stark-felle. Reaksjonsblandingen ble konsentrert ved vakuumdestillasjon til 1 volumdel. Konsentratet ble fortynnet med 105 ml metylenklorid og vasket med 50-55 ml av hver av mettet natriumbikarbonatoppløsning og saltvannsoppløsning. Den organiske oppløsningen ble tørket over magnesiumsulfat (0,25 vekt-$) og filtrert over en Hyflo-kake. Filteret ble renset med 1 volumdel metylenklorid. Den kombinerte, organiske fasen inneholdende mellomproduktet i undertittelen ble ført inn i det neste trinnet.

Eksempel 12

Svntese av ( S)- eddiksyre l lb - 12 - l ( metylsulfonyl) oksylpropyll - 1 . 3- benzodioksol- 5- yll ( 4- nitrofenyl ) metylen~ lhydrazid Metylenkloridoppløsningen inneholdende mellomproduktet fra eksempel 11 ble avkjølt til 0 til —5°C og 10 ml trietylamin ble tilsatt. 4,1 ml metansulfonylklorid ble langsomt tilsatt for å opprettholde en reaksjonstemperatur <0°C. 1,5 volumdeler vann ble tilsatt til den resulterende oppløsningen. Den organiske fasen ble separert og vasket med 2,5 volumdeler av IN saltsyreoppløsning. Den organiske fasen ble isolert og konsentrert til halvparten av det opprinnelige volumet ved atmosfærisk destillasjon. Produktet ble utfelt ved dråpevis tilsats av heptan (2:1 volumdel heptan til organisk konsen-trat) til oppløsningen ved 45°C. Den omrørte blandingen ble avkjølt til 20-25°C i 1 time, deretter avkjølt til 0 til -5°C i 1-2 timer. Utfellingen ble isolert ved vakuumfiltrering og vasket med 3 volumdeler av 4:1 heptan:metylenklorid, deretter tørket i en vakuumovn ved 45-50°C. 17,43 g av mellomproduktet i undertittelen (78$) ble oppnådd som en optisk aktiv blanding av hydrazonisomerer som var 97,7$ rene, bedømt ved HPLC-potensanalyse.

Eksempel 13

Svntese av ( R)- 7- acetyl- 8. 9- dihydro- 8- metyl- 5-( 4- nitrofenyl)-7H- 1. 3- dioksolof4. 5- hl f2. 3lbenzodiazepin

17,5 g av mellomproduktet fra eksempel 12 ble suspendert i 175 ml etylalkohol. Til den omrørte blandingen ble det tilsatt 1,7 g av pulverisert natriumhydroksyd. Den resulterende blandingen ble omrørt i 1 timer. 88 ml vann ble tilsatt til blandingen og innholdet ble omrørt i 1 time hvoretter den resulterende utfellingen ble isolert ved vakuumfiltrering og vasket med 175 ml vann. Materialet ble tørket i en vakuumovn ved 70° C for å 12,2 g (86$) av forbindelsen i undertittelen som var 99,9$ ren, bedømt ved HPLC-potensanalyse.

Eksempel 14

Syntese av ( R )- 7- acetyl- 5-( 4- aminofenyl)- 8, 9- dihydro- 8- metyl-7H- 1. 3- dioksolor4. 5- hl f2. 3lbenzodiazepin

Ved å anvende produktet fra eksempel 13 ble forbindelsen i overskriften fremstilt ved en forsøksprosedyre som var lik den er beskrevet i eksempel 9.

Eksempel 15

( R)- 7- acetyl- 8. 9- dihvdro- 8- mety1- 5-( 4- nitrofenyl)- 7H- l . 3-dioksolof4. 5- hl f2. 31benzodiazepin

1,05 g (S)-eddiksyre-[[6-[2-(hydroksy)propyl]-l,3-benzodioksol-5-yl](4-nitrofenyl )metylen]hydrazid og 0,78 g trifenylfosfin i 70 ml tetrahydrofuran ble avkjølt til 0°C. 0,57 g dietylazodikarboksylat i 5 ml tetrahydrofuran ble dråpevis tilsatt i løpet av 15 minutter. Den resulterende blandingen ble omrørt i 2 timer, deretter oppvarmet til romtemperatur i 2 timer. Blandingen ble overført til en skilletrakt og oppløsningen ble vasket med IN HC1, vann og saltvannsoppløsning. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert ved rotasjons-

fordampning. Resten ble eluert gjennom en silikagelkolonne (1:1 etylacetat:heksan). Fraksjoner inneholdende den ønskede forbindelsen ble konsentrert til en gul olje som størknet ved henstand. Det gule, krystallinske materialet ble oppslemmet i 30 ml CH2C12 og heksan (3:7) ved 0°C. Utfellingen ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert til et gult skum. Resten ble suspendert i 10 ml etanol som ble oppvarmet til tilbakeløp, deretter langsomt avkjølt til romtemperatur. Utfellingen ble samlet ved filtrering og tørket i en vakuumovn ved 60° C for å gi 0,51 g (50$) av produktet i undertittelen (100$ ee) som var 98,3$ rent, bedømt ved HPLC-potensanalyse .

Eksempler 16- 18

0,5 ml av frossen gjærsuspensjon inneholdende mikroorganismen i tabell 1 ble tilsatt til 50 ml av et gjær-malt-medium i en 150 ml kolbe. Etter 48 timers risting ble 1,0 ml kultur tilsatt til ytterligere 50 ml medium og ristet i ytterligere 48 timer. 3,4-metylendioksyfenylaceton ble tilsatt inntil den endelige konsentrasjonen var 10 g/l sammen med 1 ml 10$ glukose. Kulturene ble inkubert og ristet i 24 timer, deretter analysert ved hjelp av HPLC vedrørende nærværet av det chirale alkoholmellomproduktet fra eksempel 1.

Eksempel 19

Svntese av form I av ( R)- 7- acetyl- 5-( 4- aminofenyl)- 8, 9-dlhydro- 8- metyl- 7H- l. 3- dioksolor4. 5- hlf 2. 3lbenzodiazepin

(R)-7-acety1-8,9-dlhydro-8-metyl-5-(4-nitrofenyl )-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin (38,93 g) ble hydrogenert i 730 ml (19 volumdeler) av 2B-3-etanol ved å anvende 7,79 g av 10$ palladium-på-karbon og 1 atmosfære hydrogen. Når HPLC-analyse indikerte at utgangsmaterialet var forbrukt, ble katalysatoren fjernet ved filtrering og filtratet ble inndampet for å gi 38,7 g råprodukt. Råproduktet ble oppløst i 220 ml (5,7 volumdeler) av 1:1 vann/etanol ved oppvarming til tilbakeløp. Blandingen fikk avkjøles og produktet ble utfelt nær romtemperatur. Den resulterende tykke, dårlige rørbare oppslemmingen ble omrørt ved romtemperatur og deretter avkjølt i et is/vannbad. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering og tørket i en vakuumovn ved 55°C over natten for å gi 31,6 g av det rensede produktet. En andre rekrystallisasjon ved å anvende de samme betingelsene ga 28,7 g (80$) av produkt etter tørking under vakuum i 3 dager ved 65°C og 3 dager ved romtemperatur. Produktet tørket meget langsomt og 1,6$ etanol var fremdeles på prøven ved dette punktet. Analyse ved røntgendiffraksjon (XRD), faststoff-NMR (SSNMR) og differensiell sveip-kalorimetri (DSC) indikerte at form I-polymorfen var dannet.

Eksempel 20

Svntese av form II av ( R)- 7- acetyl- 5-( 4- aminofenyl)- 8. 9-dihydro- 8- metyl- 7H- l. 3- dioksolor4. 5- hlf 2. 3lbenzodiazepin

(R)-7-acetyl-8,9-dihydro-8-mety1-5-(4-nitrofeny1 )-7H-l ,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin (8,63 g) ble hydrogenert i 170 ml (19 volumdeler) av 2B-3-etanol ved anvendelse av 0,86 g 10$ palladium-på-karbon og 4,5 9 g ammoniumkarbonat i 5 ml vann som hydrogen-overføringskilde. Når HPLC-analyse indikerte at utgangsmaterialet var forbrukt, ble katalysatoren fjernet ved filtrering og filtratet ble inndampet for å gi 8,19 g råprodukt. Råproduktet ble oppløst i 50 ml (6,0 volumdeler) av 1:1 vann/etanol ved oppvarming til tilbakeløp.

Blandingen fikk avkjøles til romtemperatur og ble deretter avkjølt i et is/vannbad. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering og tørket i en vakuumovn ved 60"C over natten for å gi 7,41 g (93$) renset produkt. De største krystallene inneholdt 5,0$ etanol (GC) og 4,2$ vann (KF). Analyse ved XRD, SSNMR og DSC indikerte at form II-polymorfen var dannet.

Eksempel 21

Svntese av form III av ( R)- 7- acetyl- 5-( 4- aminofenyl1- 8. 9-dlhydro- 8- metyI- 7H- l. 3- dioksolof4, 5- hlf2. 31benzodiazepin

(R )-7-acetyl-8,9-dihydro-8-metyl-5-(4-nitrofenyl)-7H-l ,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin (2,04 g) ble hydrogenert i 20 ml (10 volumdeler) av 2B-3-etanol ved anvendelse av 0,20 g 10$ palladium-på-karbon og 1,47 g kaliumformat i 4 ml vann som hydrogen-overføringskilde. Når HPLC-analyse indikerte at utgangsmaterialet var forbrukt, ble katalysatoren fjernet ved filtrering og filtratet ble avdampet for å gi 2,09 g råprodukt. Råproduktet ble oppløst i 12 ml (6,0 volumdeler) av 1:1 vann/etanol ved oppvarming til tilbakeløp. Blandingen fikk avkjøles og ble podet med form II-krystaller ved ca. 40°C. Etter at romtemperatur var nådd, ble blandingen avkjølt i et is/vannbad. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering og tørket i en vakuumovn ved 50° C i 24 timer for å gi 1,45 (77$) av renset produkt. Analyse viste 0,05$ etanol (GC) og 0,75 vann (KF). På tross av at det ble anvendt form II-polymorf kimkrystaller, indikerte ved XRD, SSNMR og DSC at form III-polymorfen var dannet.

Eksempel 22

Syntese av form IV av ( R)- 7- acetyl- 5-( 4- aminofenyl)- 8. 9-dihydro- 8- metyl- 7H- l. 3- dioksoloT4, 5- hlf 2. 31benzodiazepin

(R)-7-acetyl-8,9-dihydro-8-metyl-5-(4-nitrofenyl )-7H-l ,3-dioksolo [4 ,5-h] [2 ,3]benzodiazepin (25,2 g) ble hydrogenert i 250 ml (10 volumdeler) av 2B-3-etanol ved anvendelse av 2,0 g 10$ palladium-på-karbon og 18,0 g kaliumformat i 20 ml vann som hydrogen-overføringskilde. Når HPLC-analyse indikerte at utgangsmaterialet var forbrukt, ble katalysatoren fjernet ved

filtrering. Filtratet ble konsentrert ved destillasjon inntil ca. 70 ml (3 volumdeler) etanol forelå. Vann (93 ml, 4 volumdeler) ble tilsatt til oppløsningen ved tilbakeløp. Blandingen fikk avkjøles og ble podet med det krystallinske produktet fra eksempel 9 ved 80"C. Den resulterende oppslemmingen ble tillatt å avkjøles til romtemperatur og ble omrørt over natten. Det faste stoffet ble isolert ved filtrering og tørket i en vakuumovn ved 50° C i 24 timer for å gi 19,8 g (85$) av renset produkt. Analyse viste et ikke-detekterbart nivå av etanol (GC) og 1,0$ vann (KF).

Analyse ved XRD, SSNMR og DSC indikerte at form IV-polymorfen var dannet.

Eksempel 23

Alternativ svntese av ( S )- ot- metyl- l. 3- benzodioksol- 5- etanol Til en suspensjon av magnesium-dreiespon (17 g) i 50 ml tetrahydrofuran ble det dråpevis tilsatt en oppløsning av 5-brom-1,3-benzodioksol (93,6 g). Etter fullstendig tilsats ble blandingen fortynnet med 250 ml tetrahydrofuran og den resulterende blandingen ble omrørt over natten. 13 ml av oppløsningen (0,78M) ble overført til en rundbunnet kolbe inneholdende kobber(I)jodid (0,12 g). Den resulterende blandingen ble avkjølt til —50°C og en oppløsning av (S)-(-)-propylenoksyd i 3 ml tetrahydrofuran ble langsomt tilsatt og deretter omrørt i 10 minutter. Blandingen ble fortynnet med eter. Den isolerte, organiske fasen ble vasket med vann og saltvannsoppløsning. Den vandige vaskeoppløsningen ble ekstrahert med eter (2 ganger) og de kombinerte, organiske oppløsningene ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Resten ble renset ved silikagelkromatografi (50$ eter i pentan) for å gi 1,66 g av det ønskede produktet (91$). Chiral HPLC-analyse indikerte at den optiske renheten av 98,3$.

Eksempel 24 Farmasøytisk preparat

Claims

1. Fysisk form av (R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl)-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]benzodiazepin, karakterisert ved at den har et røntgenpulver-diffraksjonsmønster med d-avstander ved 12,78, 9,48, 8,99, 8,64, 8,23, 6,39, 6,27, 5,73, 4,01 og 3,96 Å.

2. Fremgangsmåte for fremstilling en fysisk form av (R)-7-acetyl - 5-(4-aminofenyl)-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo-[4,5-h][2,3]benzodiazepin ifølge krav 1, karakterisert ved at den innbefatter: a) omsetning av en forbindelse av formelen: hvor Ms er metansulfonyl, R er metyl, X er acetyl og Aryl er p-nitrofenyl med kaustisk soda for å gi en forbindelse av formel (I): hvori R er metyl, X er acetyl og Aryl er p-nitrofenyl; b) reduksjon av p-nitrofenylgruppen i forbindelsen med formel (I) til en anilingruppe ved anvendelse av kaliumformat i nærvær av palladium-på-trekull som katalysator for å gi en forbindelse av formel (I) hvori Aryl er p-aminofenyl; og c) krystallisering av forbindelsen med formel (I) hvori Aryl er p-aminof enyl fra en blanding av vann og etanol hvori antallet volumdeler vann pr. volumdel etanol er minst 1,1 til 1,0.

3. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det innbefatter en fysisk form av (R )-7-acetyl-5-(4-aminofenyl )-8,9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]-benzodiazepin som har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster i d-avstander ved 12,78, 9,48, 8,99, 8,64, 8,23, 6,39, 6,27, 5,73, 4,01 og 3,96 Å og et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller en bærer.

4. Anvendelse av en fysisk form av (R)-7-acetyl-5-(4-aminofenyl )-8 , 9-dihydro-8-metyl-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]-benzodiazepin som har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster med d-avstander ved 12,78, 9,48, 8,99, 8,64, 8,23, 6,39, 6,27, 5,73, 4,01 og 3,96 Å for fremstilling av et medikament for anvendelse som en AMPA-reseptorantagonist.