NO305276B1 - Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid som diagnostisk middel samt fremgangsmÕte for konstatering av protrombisk tilstand - Google Patents
Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid som diagnostisk middel samt fremgangsmÕte for konstatering av protrombisk tilstand Download PDFInfo
- Publication number
- NO305276B1 NO305276B1 NO922528A NO922528A NO305276B1 NO 305276 B1 NO305276 B1 NO 305276B1 NO 922528 A NO922528 A NO 922528A NO 922528 A NO922528 A NO 922528A NO 305276 B1 NO305276 B1 NO 305276B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- vac
- polypeptide
- anticoagulant
- use according
- detectable marker
- Prior art date
Links
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 29
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 title description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 title description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 22
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 claims abstract description 20
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 32
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 20
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 230000003331 prothrombotic effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 13
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 10
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 9
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052716 thallium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- BKVIYDNLLOSFOA-UHFFFAOYSA-N thallium Chemical compound [Tl] BKVIYDNLLOSFOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical group O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 7
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 abstract description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 abstract description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 abstract description 3
- 239000002506 anticoagulant protein Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 abstract 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 36
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 22
- WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 0.000 description 20
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 6
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 6
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 6
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 5
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 5
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 5
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- DSNRWDQKZIEDDB-GCMPNPAFSA-N [(2r)-3-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC DSNRWDQKZIEDDB-GCMPNPAFSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylimidazo[4,5-d]imidazole-2,5-dione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C2(C=3C=CC=CC=3)N(Cl)C(=O)N(Cl)C12C1=CC=CC=C1 FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 3
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 3
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- LYRFLYHAGKPMFH-UHFFFAOYSA-N octadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(N)=O LYRFLYHAGKPMFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 3
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UOZDOLIXBYLRAC-UHFFFAOYSA-L [2-hydroxy-3-(trimethylazaniumyl)propyl]-trimethylazanium;diiodide Chemical compound [I-].[I-].C[N+](C)(C)CC(O)C[N+](C)(C)C UOZDOLIXBYLRAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MHUWZNTUIIFHAS-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 2
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000572 ellipsometry Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 2
- 102000004145 Annexin A1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000663 Annexin A1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004149 Annexin A2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004120 Annexin A3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000670 Annexin A3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000669 Annexin A4 Proteins 0.000 description 1
- 102100034612 Annexin A4 Human genes 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- VPIDXLJVGVBFOW-UHFFFAOYSA-N C=1C=[C-]PC=1 Chemical compound C=1C=[C-]PC=1 VPIDXLJVGVBFOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 DOPC phospholipid Chemical class 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000024659 Hemostatic disease Diseases 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 201000000552 Scott syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- GRWVQDDAKZFPFI-UHFFFAOYSA-H chromium(III) sulfate Chemical compound [Cr+3].[Cr+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRWVQDDAKZFPFI-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 208000002528 coronary thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 description 1
- 150000002505 iron Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000005355 lead glass Substances 0.000 description 1
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
- A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/087—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins the peptide being an annexin, e.g. annexin V
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4721—Lipocortins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4718—Lipocortins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/04—Phospholipids, i.e. phosphoglycerides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Separation Of Suspended Particles By Flocculating Agents (AREA)
- Dental Preparations (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av et antikoagulerende polypeptid, spesielt et annexin, som er merket med en påvisbar substans, til diagnose, og en fremgangsmåte for konstatering av den protrombiske tilstand.
Blod består av spesielle ubundne celler som er dispergert i et plasma-medium. Celleinnholdet er skilt fra det omgivende plasma gjennom såkalte plasma-membraner. Disse membranene er bygget opp av fosfolipider i form av et dobbelt skikt og av assosierte proteiner som delvis trenger gjennom dobbeltskiktet eller stikker ut fra dette.
De forskjellige fosfolipidene er ikke fordelt vilkårlig over den utvendige og innvendige omhylling av dobbeltskiktet, men holdes i en asymmetrisk konfigurasjon av cellen (7, 8). Mens fosfatidylkolin (PC) og sfingomyelin (SPH) utgjør de dominerende arter av den ytre omhylling, er fosfatidylserin (PS), fosfatidyletanolamin (PE) og fosfatidylinositol (PI) vesentlig lokalisert i den indre omhylling som vender mot cytosolet. Denne energiforbrukende asymmetri-tilstand er av eksepsjonell fysiologisk betydning. PC og SPH er de mest inerte representanter av fosfolipidfamilien og viser i sterk motsetning til de andre representanter, ytterst nøytrale forhold overfor plasmakomponentene. Denne reaksjonstreghet ved den ytre omhylling i forhold til plasmaproteinene er en absolutt forutsetning for å sikre blodets flytende tilstand. Spesielle plasmaproteiner som hører med til blodkoagulasjons-kaskaden, de såkalte koagulasjonsfaktorene, kan nemlig over-føre den flytende blodtilstand til en fast tilstand når de aktiveres (9). Disse koagulasjonsfaktorene kan aktiveres gjennom fosfolipider som fosfatidylserin.
I mange tilfeller, f.eks. etter beskadigelse av et blod-kar, er det nødvendig, ja faktisk livsviktig, at koagulasjonsfaktorene aktiveres. I en slik situasjon kan en spesiell blodcelle, blodplaten, oppgi sin membran-asymmetri gjennom aktiveringsmekanismer som transporterer fosfatidylserin til den ytre omhylling, hvor den understøtter aktiveringen av koagulasjonsfaktorene (10).
Denne systematiske forandring av fosfolipidsammen setningen i den ytterste omhylling av blodplateplasma-membranen har stor fysiologisk betydning for hemostasen, som antydet for eksempel gjennom Scott-syndromet (11).
Til fysiologien hører imidlertid også patologien. Blodets homeostase kan således enkelte ganger også gli over i en patologisk tilstand som ved arterielle, koronare og venøse tromboser.
Disse hemostatiske forstyrrelsene er for det meste idiopatiske og gjør det umulig for legen å forutsi deres forekomst og utvikle profylaktiske terapier.
Formålet med foreliggende oppfinnelse har vært å tilveie-bringe en fremgangsmåte som kunne bidra til tidlig å fastslå hemostatiske forstyrrelser.
I motsetning til symptomutviklingen, forløper utviklingen av forstyrrelsene oftest langsomt. Under denne fase med symptomløs progresjon, den såkalte protrombotiske tilstand, forløper det lokalt en kontinuerlig aktivering av koagulasjonssystemet. Denne lokale aktivering er perifert forbundet med forekomst av blodplater som befinner seg i en tidlig tilstand av aktiveringen. Disse blodplatene har allerede begynt å forandre fosfolipidsammensetningen av deres ytre plasmamembran-omhylling. Fosfatidylserin forekommer i den ytre omhylling. Hjelpemidler som diagnostiserer denne såkalte protrombotiske tilstand, ville være av største kliniske betydning.
Ved siden av forekomsten av svakt aktiverte blodplater i periferien, vil det klebe seg fullstendig aktiverte blodplater der hvor karveggen befinner seg i patologisk tilstand. Disse stedene er å anse som utløsere av aktiveringen av det hemostatiske system. Lokaliseringen av disse patologiske stedene og den trombe som her dannes, ville være av største terapeutiske interesse.
I henhold til oppfinnelsen anvendes et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien som er forsynt med en påvisbar markør, som middel for å skjelne mellom fosfatidylkolin og fosfatidylserin. Videre angår oppfinnelsen anvendelse av et slikt polypeptid som middel for diagnose av protrombiske tilstander, utgangspunktet for forstyrrelsen eller aktiveringen av det hemostatiske system og/eller tromben.
Oppfinnelsen angår også anvendelse av et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien, som er forsynt med en påvisbar markør, for fremstilling av et preparat til å fastslå utgangspunktet for aktiveringen av det hemostatiske system.
Videre angår oppfinnelsen en fremgangsmåte for konstatering av den protrombiske tilstand, og denne fremgangsmåte karakteriseres ved at a) blodet som skal undersøkes, blandes ekstrakorporealt med et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien, som bærer en påvisbar markør og b) markeringen assosiert med spesifikke celletyper, analyseres .
Blodkoaguleringsmekanismen utgjør en kaskade av enzymatiske reaksjoner, hvor dannelsen av trombin som tilslutt omdanner fibrinogen til fibrin, befinner seg på slutten av denne. Forskjellige prokoagulante reaksjoner, som for eksempel aktiveringen av protrombin ved hjelp av faktorene Xa og Va, katalyseres av fosfolid-overflater som koagulasjonsfaktorene binder seg til.
Blant de proteiner som binder seg til fosfolipder og som interfererer med prosesser som er avhengige av fosfolipid-overflater, finnes en familie som for sin binding til fosfolipider, er avhengig av Ca<2+>.
Til denne familie, som også kalles annexiner, hører foruten lipocortin I, calpactin I, protein II, lipocortin III, p67-calelectrin, også det vaskulære antikoagulantprotein (VAC) og IBC, PAP, PAPI, PP4, endonexin II og lipocortin V.
De strukturelle felles karakteristika for annexiner, er sannsynligvis grunnlaget for deres lignende Ca<2+>og fosfolipid-bindingsegenskaper. Selv om denne generelle egenskap gjelder for alle annexiner, består det en klar individualitet med hensyn til deres affinitet til Ca<2+>og til de forskjellige fosfolipid-arter.
De fysiologiske funksjoner til annexinene angår membran-assosierte prosesser. Den grunnleggende mekanisme for den koagulasjonshemmende virkning av VAC er erkjent som en hemming av fosfolipidenes katalytiske kapasitet til å binde VAC til deres overflate, hvorved dannelsen av det koagulasjons-befordrende kompleks på deres overflate forhindres.
Bindingsstudier har vist at VAC kalsiumavhengig reversibelt assosierer seg med prokoagulatoriske fosfolipider.
Også andre bivalente kationer fra rekken Cd<2+>, Zn<2+>, Mn<2+>og Co<2+>påvirker assosiasjonen positivt, riktignok ikke i samme utstrekning som Ca<2+>.
Ut over dette er det nå overraskende oppdaget at VAC-adsorpsjonen til fosfolipider påvirkes meget positivt i nærvær
„2+ „ 2+ .
av Ca - og Zn -ioner.
Overraskende er det også fastslått at VAC ved plasma-konsentrasjoner binder seg til fosfatidylserin men ikke til fosfatidylkolin og sfingomyelin. VAC erkjenner og binder således spesifikt perifere blodplater med PS i deres ytre membran-omhylling. Dessuten erkjenner VAC også spesifikt slike steder i det vaskulære systemer som PS utsetter blodet for.
Denne differensiering ved fosfolipidene gjør VAC så vel som de andre annexinene, til et ideelt reagens for tidlig å fastslå den såkalte protrombotiske tilstand som gir seg de ovenfor angitte utslag.
Gjennom foreliggende oppfinnelse er det for første gang mulig å erkjenne den protrombotiske tilstand i det vaskulære system. Denne diagnose muliggjøres gjennom spesifisiteten av substanser, av midler som er i stand til å erkjenne den, i forhold til normaltilstanden, endrede protrombotiske tilstand til blodplatene. Da denne tilstand adskiller seg fra blod-platenes normaltilstand ved at den ytre omhylling bare oppviser fosfatidylserin i den protrombotiske blodplate, er i prinsippet ethvert middel som kan skjelne fosfatidylserin spesifikt fra fosfatidylkolin, egnet til å utnytte dette oppfinnelsesmessige prinsipp. Midler som kan benyttes kjenne-tegnes ved sin spesifisitet overfor fosfatidylserin, hvilket kan fastslås gjennom de bindingsforsøk som er angitt i foreliggende beskrivelse.
Utnyttelsen av denne spesifisitet gjør det dessuten mulig å lokalisere utgangspunktet for aktiveringen av det hemo-
statiske system og/eller tromben.
Gjennom foreliggende oppfinnelse er det således for første gang mulig å gripe til egnede terapeutiske forholdsregler ved en tidlig diagnose av en truende tilstand som muligens er under utvikling.
De midler som anvendes i henhold til oppfinnelsen, er antikoagulerende polypeptider i den utstrekning de oppviser den nødvendige spesifisitet for fosfolipidet fosfatidylserin.
Særlig foretrukket er annexin-familien, spesielt VAC.
For å kunne gjøre bruk av midlene som anvendes i henhold til oppfinnelsen, særlig VAC eller de andre annexinene, som diagnostikum, merkes de på i og for seg kjent måte. Som egnet markør kan for eksempel benyttes markering med fluorescerende grupper, eller radioaktiv markering. Som fordelaktig anvendelig fluorescens-markør kan nevnes fluoresceinisotiocyanat, som fordelaktig anvendelig radioaktiv markør, radio-131 isotopene av halogenene, spesielt av jod, eksempelvis I eller 12 5I eller også bly, kvikksølv, tallium, technetium eller indium (<2>03Pb, 198Hg, 201T1,<99m>Tc, 111In) .
Fluoresceinisotiocyanat (Serva) kan på kjent måte (13) benyttes til merking av VAC.
Merking med et paramagnetisk kontrast-agens som er påvisbart i et MRI-system (magnetic resonance imaging) er også mulig. Det kan benyttes gadolinium, kobolt, nikkel, mangan eller jernkomplekser som det kan fremstilles konjugater med, som diagnostiske agens som er påvisbare i et MRI-system. I slike systemer benyttes et sterkt magnetfelt for i organismen å rette ut atomenes nukleære spinnvektorer. Deretter oppheves feltet, hvorved kjernene vender tilbake til sin utgangs-tilstand. Denne prosess observeres og registreres. Det antikoagulerende polypeptid som således er forsynt med en påvisbar markør, administreres herunder intraarterielt eller intravenøst. Den tilførte mengde avmåles slik at den etter tilstrekkelig inkubasjonstid, holder til den etterfølgende måling.
Til påvisningen av en protrombotisk tilstand tilsettes testblodet ekstrakorporealt polypeptidet som anvendes i hen hold til oppfinnelsen, eventuelt i nærvær av et ytterligere antikoagulant som ikke nedsetter plasma-kalsiumkonsentrasjonen, eksempelvis heparin, hvoretter den markør som er assosiert med den spesifikke celletype analyseres.
Det merkede polypeptid kan anvendes så vel i blod-isotonisk vandig oppløsning, som med hjelpestoffer, for å oppnå formålet i henhold til oppfinnelsen. Hjelpestoffer kan eksempelvis være TWEEN 80, arginin, fosfatbuffer og fysiologisk akseptable konserveringsmidler. Ytterligere stoffer er velkjent for fagmannen og kan likeledes benyttes.
For den radioaktive merking benyttes f.eks. den kjente jodogenmetodé (12) eller den vanlige kloramin-T-metode. På grunn av dens halveringstid på 8 dager, er<131>lå anbefale for in vivo-diagnosen. Det radioaktivt merkede middel tas opp i blod-isoton vandig oppløsning og injiseres etter steril-filtrering. Helkropps-scintigrafier utføres med et gamma-kamera, f.eks. for<131>II, 2, 4 og 7 dager etter injeksjonen.
Ved siden av de genuine annexinformer, kan også endrede former benyttes ved anvendelsen i henhold til oppfinnelsen.
Det skal særlig henvises til mutanter beskrevet i
EPA 0 293 567. I tillegg er også de fragmenter eller kjemisk modifiserte derivater av annexiner som oppviser spesifisiteten overfor fosfolipidene, fosfatidylserin/fosfatidylkolin og som dermed kan erkjenne den protrombotiske tilstand av de med-virkende blodplater, anvendelige.
Foreliggende oppfinnelse angår spesifikt:
Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid fra annexin-
familien, fortrinnsvis VAC, som er forsynt med en påvisbar markør.
Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid som, som påvisbar markør har fluorescensmerking, fortrinnsvis fluoresceinisotiocyanat, en radioisotop av et halogen, av technetium, bly, kvikksølv, tallium eller indium, særlig
131 I eller<125>I eller et paramagnetisk kontrastmiddel. Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid som ovenfor beskrevet for å skjelne mellom fosfatidylserin og fosfatidylkolin.
Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid som ovenfor
beskrevet for anvendelse som diagnostikum.
Fremgangsmåte for konstatering av den protrombotiske tilstand, hvorunder a) blodprøven ekstrakorporealt blandes med et antikoagulerende polypeptid eller middel innen annexin-familien, fortrinnsvis VAC, som bærer en påvisbar markør, og b) markeringen som er assosiert med spesifikke celletyper, analyseres.
Et middel som ved siden av et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien, fortrinnsvis VAC, som er forsynt med en påvisbar markør, dessuten inneholder et hjelpestoff som for eksempel fysiologisk natriumklorid oppløsning, TWEEN 80, arginin og/eller fosfatbuffer, hvorunder eventuelt et antikoagulant som ikke reduserer plasma-kalsiumkonsentrasjonen, fortrinnsvis heparin, kan benyttes.
Et analysesett til diagnostisk påvisning av den protrombotiske tilstand eller utgangspunktet for aktiveringen av det hemostatiske system og/eller en trombe, kan inneholde et antikoagulerende polypeptid som beskrevet ovenfor, som er i stand til å skjelne mellom fosfatidylserin og fosfatidylkolin.
I henhold til oppfinnelsen anvendes et antikoagulerende polypeptid som beskrevet ovenfor for å skjelne mellom fosfatidylserin og fosfatidylkolin.
Et antikoagulerende polypeptid som beskrevet ovenfor kan anvendes i henhold til oppfinnelsen, til diagnose av den protrombotiske tilstand eller av utgangspunktet for forstyrrelse av det hemostatiske system eller for tromben.
Materialer og metoder
VAC ble fremstillet analogt med EPA 0 181 465 eller
EPA 0 293 567. De etterfølgende eksperimenter ble utført med VACa, men resultatene er overførbare til de andre annexinene, spesielt også til VACS.
Lipider
Dioleoyl-fosfatidylkolin (DOPC, Nr. P-1013) Dioleoyl-fosfatidyletanolamin (DOPE, Nr. P-0510) Cardiolipin (CL, Nr. C-5646)
Dioleoyl-fosfatidylglycerol (DOPG, Nr. P-9664) Fosfatidylinositol (PI, Nr. P-0639)
Dioleoyl-fosfatidsyre (DOPA, Nr. P-2767)
Sterarylamin (SA, S-6755) og
eggeplomme-sfingomyelin (S-0756) ble anskaffet fra firma Sigma Chemical Co.
Renheten av DOPC og DOPE ble kontrollert ved tynnskikt-kromatografi. Dioleoyl-fosfatidylserin (DOPS) ble fremstillet ved omdannelse av DOPC ifølge (1).<14>C merket DOPS (spesifikk aktivitet 100.000 dpm//xg) ble anskaffet fra Amersham.
Fremstilling av fosfolipid- dobbeltskiktene på silisiumplater
Fosfolipid-dobbeltskikt ble påført med en "Langmuir-film balance" (Lauda type FW-1) som beskrevet av Corsel et al., (2). Hydrofile silisiumplater ble behandlet i 30% kromsvovel-syre og vann i 24 timer og oppbevart i 50% etanol/vann. Før anvendelse ble de grundig renset med et detergent og vann. "Film-balance"-anordningen ble fylt med demineralisert vann og 50/iM CaCl2. På denne nedre fase ble det påsatt 20 fil av en oppløsning som inneholdt 2 g/l fosfolipid i kloroform. DOPS-fraksjonene i dobbeltskiktet ble kontrollert med<14>C merket DOPS i blanding med DOPC. De dannede dobbeltskiktene ble fjernet fra silisiumplatene med scintillasjons-detergentet (Du Pont Formel-989) og den totale radioaktivitet målt i en seintiliasjonsteller.
Måling av bindingen ved ellipsometri
Adsorpsjonen av VAC til fosfolipid-dobbeltskiktene ble målt ved hjelp av et automatisk ellipsometer (2,3)
Bindingsforsøkene ble utført i en hydrofil kyvette som inneholdt 5 ml av en omrørt buffer (0,05M Tris/HCl; 0,1M NaCl; pH=7,5; T=20°C) . De divalente kationene ble tilsatt trinnvis som klorider.
Ved VAC-konsentrasjoner <0,1/xg/ml ble bufferen som inneholdt den spesifikke VAC-konsentrasjon, tilsatt kontinuerlig for å skaffe en tilstrekkelig bufferkapasitet for
VAC.
Ut fra de kombinerte polariserings- og analyseringsdata ble brytningsindeksen og tykkelsen av den adsorberte film bestemt (4). Mengden å av det adsorberte proteinskikt ble bestemt ut fra brytningsindeksen og tykkelsen ved hjelp av en modifisert Lorentz-Lorenz-ligning [1] (3, 5):
[1] å = 3d(n2-nb2)/[(n2+2) (r(nb2+2)-v(nb2-l) ) ] ;
nb er bufferens brytningsindeks. Verdiene r=0,254 og v=0,71 ble innsatt for den spesifikke molare refraktivitet og det partielle spesifikke volum (3).
Resultater
Effekten av divalente kationer på bindingen av VAC til fosfolipider
VAC bindes til fosfolipid-membraner som består av 20% DOPS/80%DOPC, i avhengighet av kalsiumkonsentrasjonen. Påfølgende tilsetning av EDTA førte til omgående og fullstendig desorpsjon (Fig. 1). Ved forandringen av de frie Ca +-konsentrasjonene kunne adsorpsjonen utløses igjen flere ganger uten at den adsorberte mengde eller adsorpsjonsgraden endret seg merkbart. Irreversible forandringer av VAC-molekylet eller av fosfolipid-dobbeltskiktene ved adsorpsjonen eller desorpsjonen er derfor ikke sannsynlig. Bindingen var likeledes fullstendig reversibel når kyvetten ble spylt med Ca<2+->fri buffer.
Ca<2+->avhengigheten av VAC-bindingen til fosfolipider er fremstillet i Fig. 2. Ca<2+->dose/virkningskurven viser helt entydig en Ca<2+->konsentrasjon hvor halvdelen av den maksimale VAC-adsorpsjon er nådd: [Ca<2+>]1^2. [Ca<2+>]-verdien avhenger av sammensetningen av fosfolipid-overflaten. Ved fosfolipid-overflater som inneholder 100%, 20%, 5% og 1% DOPS, ble [Ca +] 1y2-verdier på henholdsvis 36 itM, 220/iM, 1,5 mM og 8,6 mM målt (Tab. 1). Disse resultatene stemmer ganske godt overens med [Ca2 + ] 1/,2-verdien på 53fiM som ble målt for endonexin II (=VAC)-binding til ekvimolare blandinger av PS/PC vesikler (6). Den maksimale mengde av det adsorberte protein ^maks^ var uavnen<?i9 av membranens DOPS-fraksjon og utgjorde ca. 0,217 xig/cm2. Ingen adsorps jon kunne fastslås ved rene DOPC-dobbeltskikt inntil en Ca<2+->konsentrasjon på 3 mM.
Adsorpsjonen av VAC til fosfolipid-dobbeltskikt av for-skjellig sammensetning, er vist i Fig. 5. Også her er det tydelig at praktisk talt ingen adsorpsjon av VAC kan iakttas ved rene DOPC-dobbeltskikt. Adsorpsjonen av VAC til stearylamid (SA) er likeledes svak.
Ved forsøk med andre kationer enn Ca<2+>ble det fastslått at bindingen av VAC til fosfolipidene i stor grad er Ca<2+->spesifikk (Fig. 3). Cd<2+>, Zn<2+>, Mn<2+>og Co<2+>viste svak befordring av bindingen; Ba 2 + og Mg 2 + hadde ingen innflytelse. Denne egenskap ved kationene kan i en viss utstrekning korreleres med deres ioneradier.
Sink- synergisme
Høye konsentrasjoner av sinkioner (1 mM) fremmer VAC-adsorpsjon (Fig. 3) bare i liten grad; 50 xxM har overhodet ingen innflytelse på adsorpsjonen. Merkelig nok påvirker denne konsentrasjon bindingen i nærvær av Ca<2+>;det kan således iakttas en synergisme. [Ca<2+>]1^2~verdien falt fra 8,6 til 2,7 mM for dobbeltskikt med kun 1% DOPS ( [Zn2 + ] =50/xM) (Fig. 4) . 50 xtM [Zn2 + ] ligger i det normale området for sink-konsentrasjoner i plasma.
Diagnostiske metoder
1. In vitro- diagnose
a) VAC merkes etter i og for seg kjente fremgangsmåter
(13) med fluoresceingruppen, eksempelvis ved hjelp
av fluoresceinisotiocyanat; det oppnås på denne måte
VAC-FITZ.
b) Blod fra en pasient oppsamles i et lite plastikkrør som inneholder et antikoagulant (f.eks. heparin) som
ikke reduserer plasma-kalsiumkonsentrasjonen, og
VAC-FITC.
c) Etter blanding analyseres blodcellene under bruk av en FACS (fluorescence activated cell sorter). Ved
denne analyse bestemmes den fluorescensintensitet som er assosiert med spesifikke celletyper.
d) Analyse-profilene viser mengden av blodplater med bundet VAC-FITC, dvs. plater med eksponert PS og
dermed forekomst av en protrombotisk tilstand. Denne helsetruende tilstand kan på denne måte erkjennes tidlig og følgelig behandles tidlig.
2. In vivo- diagnose
a) VAC merkes med en kortlivet isotop, eksempelvis<131>I, etter i og for seg kjente fremgangsmåter; det
oppnås<131>I-VAC.
b)<131>I-VAC tilføres pasienten intravenøst.
c) Etter en viss inkubasjonstid underkastes pasienten en hel- eller del-kropps scintigrafi. Fordelingen av radioaktiviteten kan iakttas med et large-field-off - view gamma-kamera. d) Intravaskulære steder med<131>I-VAC-akkumulasjon kjennetegner de steder hvor trombosen utvikler seg.
Egnede trombose-hindrende eller trombose-helbredende forholdsregler kan tidlig innsettes.
Radioaktiv markering
1.1 Forberedelser
1.1.1 Fremstilling av en 500 mmol/ 1 natriumfosfatbuffer 24,5 g natrium-di-hydrogenfosfat-monohydrat ble oppløst i 1 liter bidestillert vann og tilsatt til en oppløsning av
35,3 g di-natrium-hydrogenfosfat i 1 liter bidestillert vann til pH 7,5.
1.1.2. Fremstilling av en 20 mmol/ 1 natriumfosfatbuffer +
150 mmol NaCl ( elueringsbuffer)
2,76 g natrium-di-hydrogenfosfat-monohydrat ble oppløst i 1 liter bidestillert vann og tilsatt til en oppløsning av
2,84 g dinatriumhydrogenfosfat i 1 liter bidestillert vann til pH 7,2. Ved tilsetning av 8,77 g NaCl (150 mmol)
til 1 liter av bufferen, ble elueringsbufferen fremstillet.
1.1.3. Likevektsinnstilling av rensesøylen En PD-10-søyle (Sephadex G25, Firma Pharmacia) ble like-vektsinnstillet med ca. 3 0 ml av elueringsbufferen. 1.1.4. Preparering av reaksionsbeholderen 2 mg IODO-gen (molmasse: 432,09 g/mol); Fig. 6) ble
oppløst i 50 ml diklormetan av høy renhet. 200/il av denne oppløsningen ble pipettert over i et 1,5 ml Eppendorf-glass og oppløsningsmidlet deretter avdampet ved 37°C (termostat-blokk). I reaksjonsglasset var dermed 8 tig (1,85 x 10 mmol) IODO-Gen finfordelt på veggen.
1.1.5. VAC- a benyttet for merkingen
Det ble gått ut fra en oppløsning av 50 mg VAC-a i 4 ml 20 mmol/1 natriumfosfatbuffer pluss 150 mmol/1 NaCl, pH
7,2, fortynnet med 1 ml bidestillert vann. Molmasse VAC-a: 34000 g/mol.
1.1.6. 1- 125 benyttet til merking
1251 Na fra Fa. Dupont, NEN Products, med en total radioaktivitet på kalibreringsdagen på 67,3 MBq (=1,82 mCi). Den spesifikke aktivitet var 15,9 Ci/mg
jod = 1,98 kCi/mmol 1/2 J , hvilket tilsvarte 0,115 tig
-7
jod (9,2 x 10 mmol 1/2 J2). Det aktive Nal var oppløst 1 5,5/il 0,1 mol/l NaOH.
1.2. Jodering
Alt arbeid ble foretatt i isotop-avtrekk bak blyglass-avskj erming.
2 0/il (= 200/xg) av oppløsningen av VAC-Q! beskrevet under
2.1.5., ble overført til den IODO-Gen forbehandlede reaksjonsbeholderen. Den ble lukket og ristet i 20 minutter ved romtemperatur. Deretter ble reaksjonsopp-løsningen påsatt med en pipette på den forberedte PD-10-søyle (s. 2.1.3.). Reaksjonsbeholderen ble etterspylt med 500/xl av elueringsbuf feren (s. 2.1.2.) og denne opp-løsningen likeledes anbragt på PD-10-søylen. Eluatet som derved rant gjennom ble kassert.
1.3. Rensing
Ved påsetting av 0,5 ml porsjoner elueringsbuffer (s. 2.1.2. ) med 2 minutters mellomrom, ble det VAC-a [ 125I] adskilt fra det fremdeles frie<125>I/Na<125>I. Etter 12 fraksjoner var dette rensetrinn ferdig. Fraksjonenes relative aktivitetsinnhold ble målt med en laboratorie monitor (GMZ) (Fig. 7).
Fraksjonene 6 og 7 ble slått sammen, fylt opp til nøyaktig 2, 0 ml med elueringsbuf f er og oppdelt i 100/xl porsjoner og nedfrosset ved -20°C. Substansen ble holdt i beredskap i disse porsjoner for analyse- og
utviklingsarbeid.
2. Analytisk del
2.1 Innholdsbestemmelse
Ved den kromogene substrat-assay ble et VAC- a-innhold på
71,8 fig/ 2, 0 ml oppløsning målt.
2.2 Radioaktivitetsbestemmelse
2.2.1. Total radioaktivitet
Etter opptining av en 100/xl porsjon ble 50/xl av denne [ 12 5I] VAC-a-oppløsning tilsatt med en pipette til 950/xl av den inaktive VAC-a-oppløsning (s. 2.1.5), grundig blandet og 50/xl av denne bragt til måling i LSC-Counter (Beckman). 24,5 MBq (=0,663mCi)/2,0 ml totaloppløsning.
2.2.2 Spesifikk aktivitet
Ut fra gehaltsbestemmelsen og total-radioaktiviteten ble det beregnet en spesifikk aktivitet på
341,5 MBg/mg = 11,61 TBq/mmol
(9,23 mCi/mg = 313,8 Ci(mmol)
2.2.3. Bestemmelse av proteinbundet radioaktivitet ved
TCA- felling
100/xl av VAC-ot-oppløsningen ble tilsatt 50/xl 3% BSA-oppløsning og 150/xl 40% vandig trikloreddiksyre, ristet godt og plassert i kjøleskap i 60 minutter. Det dannede bunnfall ble frasentrifugert.Alikvoter av supernatanten ble overført for måling i LSC-Counter.
Resultat: 99,3% av radioaktiviteten var utfellbar.
2.2.4. Radioaktivitetsutbytte
Av de tilsatte 67,3 MBq ble 24,5 MBq funnet igjen i VAC-a. Aktivitetsutbyttet utgjorde dermed 36,4%.
2.3. Modifikasjonsgrad
Av den spesifikke aktivitet og den anvendte mengde inaktiv VAC-a ble det beregnet at statistisk hvert 6. VAC-a-molekyl ble merket med<125>I-atom.
3.4. Identitet og renhet
Under anvendelse av SDS-PAGE (gradient-gel 7 - 17%, ikke reduserende betingelser) og den påfølgende vurdering av gelen ved sølvfarving (Oakley-metoden), autoradiografi og påvisning under en Linearanalyzer (Fa. Berthold LB 282, Sonde LB 2 820) (Fig. 3) ble substansen undersøkt under sammenligning med det benyttede VAC-a. Substansene var identiske. Andelen av dimert produkt lå tydelig under grensen på 8% som tolereres for inaktive charger.
Tekst til figurene
Fig, l: Alternerende adsorpsjon og desorpsjon av VAC på en fosfolipid-overflate, indusert ved økning hhv. senkning av Ca2 +-konsentrasjonen. Adsorpsjonen av VAC (1/xg/ml) på et 20% DOPS/80% DOPC fosfolipid-dobbeltskikt. Tilsetning av Ca<2+>(3, 4, 6 mM) er angitt med t hhv. E. Fig. 2: Innflytelse av fosfolipid-sammensetningen og Ca<2+->konsentrasjonen på adsorpsjonen av VAC på en fosfolipid-overf late .
o 100% DOPS; o 20% DOPS; D 5% DOPS; □ 1 % DOPS; 100% DOPC; samtlige blandinger ble supplert med DOPC. [VAC] = 1/ig/ml. Fig. 3: Effekt av bivalente ioner på adsorpsjonen av VAC. VAC-adsorpsjon på dobbeltskikt av 20% DOPS og 80% DOPC i nærvær av de angitte ioner (1 eller 3 mM) . [VAC] = 1/ig/ml. Fig. 4: Synergistisk effekt av Zn2+ på den Ca<2>"""-avhengige adsorpsjon av VAC på fosfolipid-overflaten.
Effekten av Ca<2+>på VAC-adsorpsjonen på 1% DOPS og 99% DOPC i nærvær av 50/tM Zn<2+>ble målt. [VAC] = 1/xg/ml.
Fig. 5: Adsorpsjon av VAC på fosfolipid-dobbeltskikt av for-skjellig sammensetning.
VAC-adsorpsjonen på dioleoylfosfatidylserin (DOPS), cardiolipin CL) og dioleoylfosfatidyletanolamin (DOPE), enten ren eller blandet med 80% dioleoylfosfatidylkolin (DOPC), på dioleoylfosfatidylglycerol (DOPG), fosfatidylinsositol (PI) og stearylamin blandet med 80% DOPC eller på ren DOPC.
[VAC] = 1/xg/ml; [Ca2 + ] = 3 mM.
Fig. 6:
1,3,4,6-tetraklor-3a-6a-difenyl-glykoluril
(IODO-GEN)
Fig. 7: Radioaktivitetsfordeling i fraksjonene 1-12.
Fig. 8: Radioaktivitetsfordeling under "Linearanalyzer".
Den beregnede blanding ble anbragt på "film balance"-anordningen. Mengden av dobbeltskikt ble målt ved ellipsometri og aktiviteten av<14>C-merket DOPS ble målt med en Beckman 6S 3801 scintillasjonsteller (s.d. <2%) og korrigert for bak-grunnsstrålingen (60 DPM). DOPS-fraksjonen i dobbeltskiktet ble beregnet ved bruk av ligning 2:
Den spesifikke aktivitet av DOPS utgjorde 100.000 -1 2 DPM.iig , overflaten besatt med fosfolipider 0,62 cm .
Den maksimale VAC-adsorpsjon (Tmaks) på de oppførte fosfolipid-overflater sammen med den kalsiumkonsentrasjon som fører til halvparten av den maksimale VAC-binding [Ca 2+^ 1/ 2' er angitt som middelverdi av minst tre forskjellige forsøk med angivelse av de tilsvarende standardavvik,
n.d. = not determined = ikke bestemt
Litteraturfortegnelse
1.. Confurius, P & Zwaal, R. F. A. (1977) Biochim. Biophys. Acta 488, -42. 2. Corsel, J. W., Willems, G. M., Kop, J. M. M. , Cuypers, P. A. & Hermens, W. Th. (1986) J. Colloid Interface Sei. 111, 544-554. 3. Cuypers, P. A., Corsel, J. W., Janssen, M. P., Kop, J. M. M., Hermens, W. TH. & Hemker, H. C. (1983) J. Biol. Chem. 258, 2426-2431. 4. McCrackin, F. L., Passaglia, E., Stromberg, R. R. & Steinberg, H. L. (1963) J.Res.Nat.Bur.Stand.Sect.A 67, 3-377. 5. Kop, J. M. M., Cuypers, P. A., Lindhout, Th., Hemker, H. C. & Hermens, W. Th. (1984) J. Biol. Chem. 259, 13993-13998. 6. Schlaepfer, D. D., Mehlman, T., Burgess, W. H. & Haigler. H. T. (1987) Proe. Nati. Acad. Sei. USA 84, 6078-6082. 7. Op den Kamp, J.A. F. Ann-. Rev. Biochem. 1979, 48: 47-71. 8. Zwaal, R.F.A. Biochim. Biophys. Acta 1978, 515: 163-205. 9. Jackson, CM. und Nemerson, Y. Ann. Rev. Biochem. 1980, 49: 765-811.
Claims (18)
1. Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien som er forsynt med en påvisbar markør, som middel for å skjelne mellom fosfatidylkolin og fosfatidylserin.
2. Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien som er forsynt med en påvisbar markør, som middel for diagnose av protrombotiske tilstander, utgangspunktet for forstyrrelsen eller aktiveringen av det hemostatiske system og/eller tromben.
3. Anvendelse ifølge krav 1 eller 2 av et polypeptid i form av VAC.
4. Anvendelse ifølge et av kravene 1-3 av et polypeptid i form av VAC-a eller VAC-S.
5. Anvendelse ifølge et av kravene 1-4 av en fluorescerende markør fortrinnsvis fluoresceinisotiocyanat, eller til radio
aktiv merking, en radioisotop av et halogen, av technetium, bly, kvikksølv, tallium eller av indium, fortrinnsvis<1>31I eller<125>I, eller et paramagnetisk kontrastmiddel.
6. Anvendelse ifølge krav 1 til 5 av et hjelpestoff.
7. Anvendelse ifølge krav 6 av et hjelpestoff i form av fysiologisk natriumkloridoppløsning, arginin- og/eller fosfatbuffer.
8. Anvendelse ifølge krav 1-7 av en antikoagulant, fortrinnsvis heparin, som ikke reduserer plasma-kalsiumkonsentrasjonen.
9. Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien, som er forsynt med en påvisbar markør, for fremstilling av et preparat til å fastslå utgangspunktet for aktiveringen av det hemostatiske system.
10. Anvendelse ifølge krav 9 av polypeptidet VAC.
11. Anvendelse ifølge krav 9 eller 10 av polypeptidet VAC-a eller VAC-S.
12. Anvendelse ifølge et av kravene 9-11 av en påvisbar markør i form av en radioisotop, fortrinnsvis en av radioisotopene<125>I,<1>23I,131I, ^In,<99m>Tc, 203Pb, 198Hg eller<201>Tl eller et paramagnetisk kontrastelement.
13. Fremgangsmåte for konstatering av den protrombotiske tilstand,
karakterisert vedat a) blodet som skal undersøkes, blandes ekstrakorporealt med et antikoagulerende polypeptid innen annexin-familien, som bærer en påvisbar markør og b) markeringen assosiert med spesifikke celletyper, analyseres.
14. Fremgangsmåte ifølge 13,
karakterisert vedat polypeptidet er VAC.
15. Fremgangsmåte ifølge krav 13 eller 14,karakterisert vedat det som påvisbar markør benyttes fluoresceingruppen eller en radioisotop, fortrinnsvis en av radioisotopene 125 I, 123 I, 131 I,1<11>In,<99m>Tc,<203>Pb,<198>Hg eller<201>T1.
16. Fremgangsmåte ifølge krav 13 til 15,karakterisert vedat det dessuten tilsettes et hjelpestoff.
17. Fremgangsmåte ifølge krav 16,karakterisert vedat det som hjelpestoff benyttes fysiologisk natriumkloridoppløsning, arginin-og/eller fosfatbuffer.
18. Fremgangsmåte ifølge krav 16 eller 17,karakterisert vedat det dessuten benyttes et antikoagulant, fortrinnsvis héparin som ikke reduserer plasma-kalsiumkonsentrasjonen.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3942988 | 1989-12-27 | ||
PCT/EP1990/002257 WO1991009628A1 (de) | 1989-12-27 | 1990-12-19 | Verwendung eines antikoagulant als diagnostikum |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO922528D0 NO922528D0 (no) | 1992-06-26 |
NO922528L NO922528L (no) | 1992-08-26 |
NO305276B1 true NO305276B1 (no) | 1999-05-03 |
Family
ID=6396455
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO922528A NO305276B1 (no) | 1989-12-27 | 1992-06-26 | Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid som diagnostisk middel samt fremgangsmÕte for konstatering av protrombisk tilstand |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP0806670B1 (no) |
JP (1) | JP3135261B2 (no) |
KR (1) | KR0181520B1 (no) |
AT (2) | ATE164083T1 (no) |
AU (1) | AU642202B2 (no) |
CA (1) | CA2070647C (no) |
DE (3) | DE4040817A1 (no) |
ES (1) | ES2113372T3 (no) |
FI (1) | FI107586B (no) |
HU (2) | HUT61491A (no) |
NO (1) | NO305276B1 (no) |
NZ (1) | NZ236620A (no) |
PT (1) | PT96385B (no) |
WO (1) | WO1991009628A1 (no) |
ZA (1) | ZA9010319B (no) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5627036A (en) * | 1989-12-27 | 1997-05-06 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Use of an anticoagulant as a diagnostic agent |
EP1138334A3 (en) * | 1992-06-09 | 2002-04-03 | Neorx Corporation | Pretargeting methods and compounds |
WO1995014788A1 (en) * | 1993-11-24 | 1995-06-01 | University Of Washington | Blood coagulation retardants and devices |
US5968477A (en) * | 1994-01-24 | 1999-10-19 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator |
CA2180555C (en) * | 1994-01-24 | 2004-12-14 | Sudhakar Kasina | Radiolabeled annexins |
US20030220233A1 (en) | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
DE69518319T2 (de) * | 1994-03-16 | 2000-12-14 | Mallinckrodt, Inc. | Verwendung von oberflächenaktiven substanzen zur stabilisierung von peptiden und proteinen zur radiopharmazeutischen verwendung |
CA2185535C (en) * | 1994-04-11 | 2000-10-24 | Christiaan Peter Maria Reutelingsperger | A method for detecting and/or optionally quantifying and/or separating apoptotic cells in or from a sample |
EP0765166B1 (en) * | 1994-06-16 | 2003-05-21 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin-galactose conjugates |
EP1364964A1 (en) * | 1994-06-16 | 2003-11-26 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexingalactose conjugates |
US5886143A (en) * | 1994-12-07 | 1999-03-23 | Neorx Corporation | Hepatic-directed compounds and reagents for preparation thereof |
EP0799050B1 (en) * | 1994-12-07 | 2004-08-11 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin-galactose cluster conjugates |
EP1486509A3 (en) * | 1994-12-07 | 2005-03-23 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin-galactose cluster conjugates |
US5955605A (en) * | 1995-02-21 | 1999-09-21 | Neorx Corporation | Biotinidase resistant biotin-DOTA conjugates |
FR2736197B1 (fr) * | 1995-06-29 | 1997-09-12 | Univ Paris Curie | Nanoparticules magnetiques couplees a de l'annexine et leur utilisation |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4427646A (en) * | 1981-04-02 | 1984-01-24 | Research Corporation | Use of radiolabeled peptide derived from crosslinked fibrin to locate thrombi in vivo |
US4455290A (en) * | 1981-04-02 | 1984-06-19 | Research Corporation | Inhibition of fibrin polymerization by a peptide isolated from fibrin Fragment D1 |
US4820505A (en) * | 1985-04-04 | 1989-04-11 | Scripps Clinic And Research Foundation | Detection of activated platelets with antibodies to thrombospondin |
PT87083B (pt) * | 1987-03-28 | 1992-07-31 | Boehringer Ingelheim Int | Processo para a preparacao de uma proteina anticoagulante vascular, de adn que codifica para esta proteina e de composicoes farmaceuticas que a contem |
DE3810331A1 (de) * | 1988-03-26 | 1989-10-05 | Boehringer Ingelheim Int | Monoklonale vac-antikoerper |
-
1990
- 1990-12-19 HU HU9202149A patent/HUT61491A/hu unknown
- 1990-12-19 ES ES91902118T patent/ES2113372T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 JP JP03502409A patent/JP3135261B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 EP EP97113801A patent/EP0806670B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 WO PCT/EP1990/002257 patent/WO1991009628A1/de active IP Right Grant
- 1990-12-19 AU AU70711/91A patent/AU642202B2/en not_active Expired
- 1990-12-19 KR KR1019920701497A patent/KR0181520B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-12-19 DE DE4040817A patent/DE4040817A1/de not_active Withdrawn
- 1990-12-19 AT AT91902118T patent/ATE164083T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-19 AT AT97113801T patent/ATE429644T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-19 DE DE59010946T patent/DE59010946D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 DE DE59010815T patent/DE59010815D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 HU HU9202149A patent/HU209650B/hu unknown
- 1990-12-19 EP EP91902118A patent/EP0509026B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 CA CA002070647A patent/CA2070647C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-21 ZA ZA9010319A patent/ZA9010319B/xx unknown
- 1990-12-21 NZ NZ236620A patent/NZ236620A/en unknown
- 1990-12-27 PT PT96385A patent/PT96385B/pt not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-06-12 FI FI922719A patent/FI107586B/fi active
- 1992-06-26 NO NO922528A patent/NO305276B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE429644T1 (de) | 2009-05-15 |
AU642202B2 (en) | 1993-10-14 |
NO922528D0 (no) | 1992-06-26 |
PT96385A (pt) | 1991-10-31 |
DE59010946D1 (de) | 2009-06-04 |
DE59010815D1 (de) | 1998-04-23 |
JPH05502877A (ja) | 1993-05-20 |
NZ236620A (en) | 1997-03-24 |
WO1991009628A1 (de) | 1991-07-11 |
EP0509026A1 (de) | 1992-10-21 |
NO922528L (no) | 1992-08-26 |
EP0806670A3 (de) | 1997-12-10 |
CA2070647C (en) | 2001-04-10 |
JP3135261B2 (ja) | 2001-02-13 |
PT96385B (pt) | 1998-06-30 |
EP0806670B1 (de) | 2009-04-22 |
EP0806670A2 (de) | 1997-11-12 |
CA2070647A1 (en) | 1991-06-28 |
FI107586B (fi) | 2001-09-14 |
HU9202149D0 (en) | 1992-10-28 |
AU7071191A (en) | 1991-07-24 |
KR0181520B1 (ko) | 1999-05-01 |
HUT61491A (en) | 1993-01-28 |
KR920703121A (ko) | 1992-12-17 |
EP0509026B1 (de) | 1998-03-18 |
HU209650B (en) | 1994-09-28 |
DE4040817A1 (de) | 1991-07-04 |
ES2113372T3 (es) | 1998-05-01 |
ZA9010319B (en) | 1992-08-26 |
FI922719A0 (fi) | 1992-06-12 |
ATE164083T1 (de) | 1998-04-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5955437A (en) | Use of an anticoagulant as a diagnostic agent | |
NO305276B1 (no) | Anvendelse av et antikoagulerende polypeptid som diagnostisk middel samt fremgangsmÕte for konstatering av protrombisk tilstand | |
Bolton et al. | A radioimmunoassay for platelet factor 4 | |
Nossel et al. | Radioimmunoassay of human fibrinopeptide A | |
Dawes et al. | The release, distribution, and clearance of human β-thromboglobulin and platelet factor 4 | |
Stratton et al. | Selective uptake of radiolabeled annexin V on acute porcine left atrial thrombi | |
Griffin et al. | Reevaluation of total, free, and bound protein S and C4b-binding protein levels in plasma anticoagulated with citrate or hirudin | |
Miletich et al. | Human plasma protein Z antigen: range in normal subjects and effect of warfarin therapy | |
Nossel et al. | Measurement of fibrinopeptide A in human blood | |
Day et al. | Localization in vivo of radioiodinated anti-rat-fibrin antibodies and radioiodinated rat fibrinogen in the Murphy rat lymphosarcoma and in other transplantable rat tumors | |
Holguin et al. | Relationship between the membrane inhibitor of reactive lysis and the erythrocyte phenotypes of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. | |
BREEN JR et al. | Ethanol gelation: A rapid screening test for intravascular coagulation | |
EP0714405A1 (en) | Therapeutic and diagnostic agents for amyloidosis | |
NO174326B (no) | Anveldelse av maalsoekende merket polypeptid | |
PT85730B (pt) | Processo para a preparacao de factor de estimulacao de megacariocitos | |
Thompson et al. | Removal of heparin and protamine from plasma | |
Kierulf et al. | Fibrinemia in medical patients screened by the ethanol test | |
Chapitis et al. | Multiple sedimenting species of properdin in human serum and interaction of purified properdin with the third component of complement. | |
Dekker et al. | MBP–annexin V radiolabeled directly with iodine-124 can be used to image apoptosis in vivo using PET | |
US20020168722A1 (en) | Novel cleaved fragments of fibrinogen | |
Nossel et al. | Potential use of fibrinopeptide A measurements in the diagnosis and management of thrombosis | |
Ziegler et al. | Metabolism of properdin in normal subjects and patients with renal disease. | |
Wallace et al. | Biological activity and conformational stability of the domains of plasma fibronectin | |
Murakami et al. | Studies on the xanthurenic acid-insulin complex: III. distribution of xanthurenic acid and formation of xanthurenic acid-insulin complex in serum | |
Chandeysson et al. | Delayed hemolytic transfusion reaction caused by anti‐P1 antibody |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |