NO20101682L - Gruppe B streptococcus antigener - Google Patents
Gruppe B streptococcus antigenerInfo
- Publication number
- NO20101682L NO20101682L NO20101682A NO20101682A NO20101682L NO 20101682 L NO20101682 L NO 20101682L NO 20101682 A NO20101682 A NO 20101682A NO 20101682 A NO20101682 A NO 20101682A NO 20101682 L NO20101682 L NO 20101682L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- seq
- polynucleotide
- stated
- polypeptide
- animal
- Prior art date
Links
- 241000193990 Streptococcus sp. 'group B' Species 0.000 title claims abstract description 138
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title abstract description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title abstract description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 17
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 54
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 54
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 24
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 206010061372 Streptococcal infection Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 13
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims abstract 11
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims abstract 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 83
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 83
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 82
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 48
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 14
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 4
- 241001505901 Streptococcus sp. 'group A' Species 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 16
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 57
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 39
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 42
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 38
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 35
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 21
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 21
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 18
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 17
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 16
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 16
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 3
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 3
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 3
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 2
- 101150023497 mcrA gene Proteins 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DLZKEQQWXODGGZ-KCJUWKMLSA-N 2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 DLZKEQQWXODGGZ-KCJUWKMLSA-N 0.000 description 1
- KLYNHVIJEHPQTQ-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl ethanedithioate Chemical compound CC(C)CSC(C)=S KLYNHVIJEHPQTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229910017081 AlNH4(SO4)2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101710150468 C protein alpha-antigen Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 208000004145 Endometritis Diseases 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010058780 Meningitis neonatal Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 208000006816 Neonatal Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000702208 Shigella phage SfX Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical class [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 229910001679 gibbsite Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 101150109249 lacI gene Proteins 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- -1 nitroaryl halides Chemical class 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150022503 phoR gene Proteins 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011555 rabbit model Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000037384 skin absorption Effects 0.000 description 1
- 231100000274 skin absorption Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- ZZIZZTHXZRDOFM-XFULWGLBSA-N tamsulosin hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CCOC1=CC=CC=C1OCCN[C@H](C)CC1=CC=C(OC)C(S(N)(=O)=O)=C1 ZZIZZTHXZRDOFM-XFULWGLBSA-N 0.000 description 1
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 101150057627 trxB gene Proteins 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Gruppe B Streptococcus (GBS) proteiner og polynukleotider som koder for dem er beskrevet. Nevnte proteiner er antigene, og derfor nyttige vaksinekomponenter for profylaksen eller terapi av streptokokkusinfeksjon i dyr. Også beskrevet er rekombinante fremgangsmåter for å fremstille proteinantigenene, så vel som diagnostiseringsassay for å detektere streptokokkbakterieinfeksjon.
Description
Foreliggende oppfinnelse omhandler antigener, mer spesielt proteinantigener av gruppe B Streptokoccus (GBS) bakteriepalogen, som er nyttige som vaksinekomponenter for terapi og/eller profylakse.
Streptokoccus er gram (+) bakterier som er differensiert ved gruppespesifikke karbohydratantigener A via O som finnes på deres celleoverflate. Streptokoccusgrupper blir videre skilt ved typespesifikk kapselpolysakkarid antigener. Flere serumtyper har blitt identifisert for gruppen B Streptokoccus (GBS): Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII og VIII. GBS inneholder også antigenproteiner kjent som «C-proteiner» (alfa, beta, gamma og delta) der noen av disse har blitt klonet.
Til tross for at GBS er en vanlig komponent i den normale human vaginale og kolonfloraen, har dette patogenet lenge vært kjent som en viktig årsak til neonatal sepsis og meningitt, sent-startet meningitt i nyfødte, post partum endometritt, så vel som mastitt i meieribuskap. Vordende mødre som blir eksponert for GBS har risiko for post partum infeksjon, og kan overføre infeksjonen til sitt barn når barnet passerer gjennom fødselskanalen. Selv om organismen er sensitiv for antibiotika, resulterer den høye angrepshastigheten og raske starten på sepsis i nyfødte, og meningitt i barn, i høy sykelighet og dødelighet.
For å finne en vaksine som kan beskytte individer fra GBS infeksjon, har forskere vendt seg mot de typespesifikke antigenene. Uheldigvis har disse polysakkaridene vist seg å være lite immunogene i mennesker, og er begrenset til den spesielle serumtypen som polysakkaridene opprinner fra. Videre utløser kapselpolysakkarid en T celle uavhengig respons, det vil si ingen IgG produksjon. Følgelig er kapselpolysakkaridantigener ikke passende som en vaksinekomponent for beskyttelse mot GBS infeksjon.
Andre har fokusert på C-protein betaantigenet som viser immunogene egenskaper i mus og kaninmodeller. Dette proteinet ble funnet å være upassende som en menneskelig vaksine som følge av sin uønskede egenskap ved å interagere med høy affinitet og på en ikke-immunogen måte med Fc regionen til human IgA. Det C-protein alfaantigenet er sjeldent i type III serumtyper i GBS, som er den serumtypen som er ansvarlig for de fleste GBS medierte tilstander, og er derfor til liten nytte som en vaksinekomponent.
Derfor gjenstår det et umøtt behov for GBS antigener som kan bli benyttet som vaksinekomponenter for profylaksen og/eller terapien ved GBS infeksjon.
I henhold til et aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse et isolert polynukleotid som koder for et polypeptid som har minst 70 % identitet til et annet polypeptid, som omfatter en sekvens valgt fra gruppen som består av : SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV. ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 17, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 21, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40, SEKV. ID NR.: 41 og SEKV. ID NR.: 44 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
I andre aspekter tilveiebringes vektorer som omfatter polynukleotider i henhold til oppfinnelsen som er operabelt koblet til en ekspresjonskontrollregion, så vel som vertsceller transfektert med nevnte vektorer, og fremgangsmåter for å fremstille polypeptider som omfatter å dyrke nevnte vertsceller under forhold som er passende for ekspresjon.
I enda et annet aspekt, tilveiebringes nye polypeptider kodet av polynukleotider som angitt i foreliggende oppfinnelse.
KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE.
Figur la er DNA sekvensen til klon 1 (SEKV. ID NR.: 1) med korresponderende aminosyresekvenser for åpne leserammer;
figur lb er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 2;
figur lc er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 3;
figur ld er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 4;
figur le er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 5;
figur lf er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 6;
Figur 2a er DNA sekvensen til klon 2 (SEKV. ID NR.: 7) med korresponderende aminosyresekvenser for åpne leserammer;
figur 2b er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 8;
figur 2c er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 9;
figur 2d er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 10;
figur 2e er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 11;
figur 2f er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 12;
Figur 3a er DNA sekvensen til klon 3 (SEKV. ID NR.: 13) med korresponderende aminosyresekvenser for åpne leserammer;
figur 3b er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 14;
figur 3c er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 15;
figur 3d er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 16;
figur 3e er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 17;
figur 3f er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 18;
figur 3g er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 19;
figur 3h er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 20;
figur 3i er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 21;
Figur 4a er DNA sekvensen til klon 4 (SEKV. ID NR.: 22) med korresponderende aminosyresekvenser for åpne leserammer;
figur 4b er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 23;
figur 4c er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 24;
figur 4d er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 25;
figur 4e er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 26;
Figur 5a er DNA sekvensen til klon 5 (SEKV. ID NR.: 27) med korresponderende aminosyresekvenser for åpne leserammer;
figur 5b er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 28;
figur 5c er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 29;
figur 5d er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 30;
figur 5e er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 31;
Figur 6a er DNA sekvensen til klon 6 (SEKV. ID NR.: 32);
figur 6b er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 33;
figur 6c er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 34;
figur 6d er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 35;
figur 6e er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 36;
Figur 7a er DNA sekvensen til klon 7 (SEKV. ID NR.: 37);
figur 7b er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 38;
figur 7c er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 39;
figur 7d er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 40;
figur 7e er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 41; Figur 8 er DNA sekvensen til en del av klon 7 inkludert en signalsekvens (SEKV. ID NR.: 42); Figur 9 er DNA sekvensen til en del av klon 7 uten en signalsekvens (SEKV. ID. NR.: 43);
figur 9A er aminosyresekvensen SEKV. ID NR.: 44;
Figur 10 representerer distribusjonen av anti-GBS ELISA titer i serum fra CD-1 mus immunisert med rekombinant GBS protein som korresponderer til SEKV. ID NR.: 39.
Foreliggende oppfinnelse omhandler nye antigene polypeptider av gruppe B streptokokkus (GBS)karakterisert vedaminosyresekvensen valgt fra gruppen som består av: SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV. ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 17, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 21, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40, SEKV. ID NR.: 41 og SEKV. ID NR.: 44 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
En foretrukket utforming av oppfinnelsen inkluderer SEKV. ID NR.: 39 og SEKV. ID NR.: 44.
En videre foretrukket utforming av oppfinnelsen er SEKV. ID NR.: 39.
En videre foretrukket utforming av oppfinnelsen er SEKV. ID NR.: 44.
Som benyttet heri inkluderer «fragmenter», «derivater» eller «analoger» av polypeptidene i henhold til oppfinnelsen, de polypeptidene der en eller flere av aminosyrerestene er substituert med en konservert eller ikke-konservert aminosyrerest (fortrinnsvis konservert), og som kan være naturlig eller ikke-naturlig.
Begrepet «fragmenter», «derivater» eller «analoger» av polypeptider i henhold til den foreliggende oppfinnelsen inkluderer også polypeptider som er modifisert ved addisjon, delesjon, substitusjon av aminosyrer, gitt at polypeptidene beholder kapasiteten til å indusere en immunrespons.
Med begrepet «konservert aminosyre» menes en substitusjon av en eller flere aminosyrer for en annen, der den antigene determinanten (inkludert dens sekundære struktur og hydropatiske natur) til et gitt antigen er fullstendig eller delvis konservert til tross for substitusjonen.
For eksempel kan en eller flere aminosyrerester inni sekvensen være substituert av en annen aminosyre med en lignende polaritet, som virker som en funksjonell ekvivalent, og resulterer i en stille endring. Substituenter for en aminosyre inni sekvensen kan bli valgt fra andre medlemmer av klassen som aminosyren tilhører. For eksempel inkluderer de ikke-polare (hydrofobe) aminosyrene alanin, leucin, isoleucin, valin, prolin, fenylalanin, tryptofan og metionin. De polare nøytrale aminosyrene inkluderer glycin, serin, treonin, cystein, tyrosin, åspargin og glutamin. De positivt ladede (basiske) aminosyrene inkluderer argenin, lysin og histidin. De negativt ladede (sure) aminosyrene inkluderer aspartatsyre og glutamatsyre.
Fortrinnsvis vil derivater og analoger av polypeptider i henhold til foreliggende oppfinnelse ha omkring 70 % identitet med de sekvensene som er illustrert i figurene, eller fragmentene derav. Det vil si at 70 % av restene er de like. Mer fortrinnsvis har polypeptidene mer enn 95 % homologi. I en annen foretrukket utforming vil derivatene og analogene til polypeptidene i henhold til foreliggende oppfinnelse ha mindre enn omkring 20 aminosyrerestsubstitusjoner, modifikasjoner eller delesjoner, og mer fortrinnsvis mindre enn 10. Foretrukne substitusjoner er de som er kjent i faget som konserverte, det vil si de substituerte restene deler fysiske eller kjemiske egenskaper så som hydrofobisitet, størrelse, ladning eller funksjonelle grupper.
Videre kan det i de situasjonene der aminosyreregioner blir funnet å være polymorfe, være ønskelig å variere en eller flere spesielle aminosyrer for mer effektivt å etterligne de ulike epitopene til de forskjellige GBS stammene.
Også inkludert er polypeptider som har fusjonert derpå andre forbindelser som endrer polypeptidenes biologiske eller farmakologiske egenskaper, det vil si polyetylenglykol (PEG) for å øke halveringstiden; ledende (leader) eller sekretoriske aminosyresekvenser for å forenkle rensingen; prepro- og pro-sekvenser; og (poly) sakkarider.
Videre kan polypeptidene i den foreliggende oppfinnelsen bli modifisert ved terminal -NH2acylering (for eksempel ved acetylering eller
tioglykolsyreamidering, terminal karboksyamidering, for eksempel med ammoniakk eller metylamin) for å tilveiebringe stabilitet, økt hydrofobisitet for kobling eller binding til et støtte- eller annet molekyl.
Betraktet er også hetero- og homopolypeptidmultimerer og polypeptidfragmentene, analoger og derivater. Disse polymere formene inkluderer for eksempel et eller flere polypeptider som har blitt krysskoblet med krysskoblere så som avidin/biotin, gluteraldehyd eller dimetylsuperimidat. Slike polymere former inkluderer også polypeptider som inneholder to eller flere tandem eller inverterte tilstøtende sekvenser, dannet fra multicistroniske mRNA'er generert ved rekombinant DNA teknologi. Fortrinnsvis vil et fragment, analog eller derivat av et polypetid i henhold til den foreliggende oppfinnelsen inneholde minst en antigen region, det vil si minst en epitope.
For å oppnå dannelsen av antigene polymerer (det vil si syntetiske multimerer) må det benyttes polypeptider som har bishalogensubstituerte acetylgrupper, nitroarylhalider eller lignende, der reagensene er spesifikke for tiogrupper. Derfor kan koblingen mellom to merkaptogrupper på de forskjellige peptidene være en enkelbinding, eller kan bestå av en koblingsgruppe på minst to, vanligvis minst fire, og ikke mer enn 16, men vanligvis ikke mer enn 14, karbonatomer.
I en spesiell utforming inneholder polypeptidfragmenter, analoger og derivater i henhold til den foreliggende oppfinnelsen, ikke en metionin (Met) startaminosyre. Fortrinnsvis vil polypeptider ikke inkorporere en leder eller sekretorisk sekvens (signalsekvens). Signaldelen av et polypeptid i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan bli bestemt i henhold til etablerte molekylærbiologiske teknikker. Generelt kan polypeptidet av interesse bli isolert fra en GBS kultur og deretter sekvensert for å bestemme den innledende aminosyren til det modne proteinet, og derfor sekvensen til det modne polypeptidet.
I henhold til et annet aspekt tilveiebringes vaksinesammensetninger som omfatter et eller flere GBS polypeptider i henhold til oppfinnelsen, i en tilblanding med et farmasøytisk akseptabelt bærerfortynningsmiddel eller adjuvans.
Passende adjuvanser inkluderer oljer, det vil si Freund's komplette eller ukomplette adjuvans; salter, det vil si A1K(S04)2, AlNa(S04)2, A1NH4(S04)2, Al(OH)3, A1P04, silica, kaolin; saponinderivat; karbon polynukleotider, det vil si poly IC og poly AU, og også detoksifisert koleratoksin (CTB) og E. coli varmelabilt toksin for induksjon av slimhinneimmunitet. Foretrukne adjuvanser inkluderer QuilA™, Alhydrogel™ og Adjuphos™. Vaksiner i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan bli administrert parenteralt ved injeksjon, rask infusjon, nasofaryngeal absorpsjon, hudabsorpsjon eller munnhule eller oral.
Vaksinesammensetninger i henhold til den foreliggende oppfinnelsen blir benyttet for behandlingen eller profylakse av streptokokkinfeksjon og/eller sykdommer og symptomer mediert av streptokokkusinfeksjon, spesielt gruppe A Streptokoccus (pyogener), gruppe B Streptokoccus (GBS eller agalasitiae), dysgalasitiae, uberis, nokardia, så vel som Stafylokoccus aureus. Generell informasjon om Streptokoccus er tilgjengelig i Manual of Clinical Microbiology av P. R. Murray et al. (1995, 6. utgave, ASM Press, Washington, D.C). Mer spesielt gruppe B Streptokoccus, agalasitiae. I en spesiell utforming blir vaksiner administrert til personer med risiko for GBS infeksjon, så som gravide kvinner og nyfødte for sepsis, meningitt og lungebetennelse, så vel som immunkompromitterte personer så som de med diabetes, leversykdommer eller kreft. Vaksiner kan også ha veterinær anvendelse så som for behandlingen av mastitt i kveg, som er mediert av de ovennevnte bakteriene, så vel som E. coli.
Vaksinen i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan også bli benyttet i produksjonen av et medikament som benyttes til behandlingen eller profylaksen av streptokokkinfeksjon og/eller sykdommer og symptomer mediert av streptokokkinfeksjon, spesielt gruppe A Streptokoccus (pyogener), gruppe B Streptokoccus (GBS eller agalsitiae), dysgalasitiae, uberis, nokardia så vel som Stafylokoccus aureus. Mer spesielt gruppe B Streptokoccus, agalasitiae.
Vaksinesammensetninger er fortrinnsvis i enhetsdose form på omkring 0, 001 til 100 u,g/kg (antigen/kroppsvekt), og mer fortrinnsvis 0, 01 til 10 u-g/kg og mest fortrinnsvis 0, 1 til 1 u.g/kg, 1 til 3 ganger med et intervall på omkring 1 til 12 uker intervaller mellom immuniseringer, og mer fortrinnsvis 1 til 6 uker.
I henhold til et annet aspekt, tilveiebringes polynukleotider som koder for polypeptider fra gruppe B Streptokoccus (GBS)karakterisert vedaminosyresekvensen valgt fra gruppen som består av: SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV. ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 17, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 21, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40, SEKV. ID NR.: 41 og SEKV. ID NR.: 44 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
Foretrukne polynukleotider er de illustrert i figurer la (SEKV. ID NR.: 1), 2a (SEKV. ID NR.: 7), 3a (SEKV. ID NR.: 13), 4a (SEKV. ID NR.: 22), 5a (SEKV. ID NR.: 27), 6a (SEKV. ID NR.: 32), 7a (SEKV. ID NR.: 37), 8 (SEKV. ID NR.: 42) og 9 (SEKV. ID NR.: 43) som korresponderer til de åpne leserammene, som koder for polypeptider i henhold til oppfinnelsen.
Foretrukne polynukleotider er de illustrert i figurer la (SEKV. ID NR.: 1), 2a (SEKV. ID NR.: 7), 3a (SEKV. ID NR.: 13), 4a (SEKV. ID NR.: 22), 5a (SEKV. ID NR.: 27), 6a (SEKV. ID NR.: 32), 7a (SEKV. ID NR.: 37), 8 (SEKV. ID NR.: 42) og 9 (SEKV. ID NR.: 43) og fragmenter, analoger og derivater derav.
Mer foretrukne polynukleotider i henhold til oppfinnelsen er de illustrert i figurer 7 (SEKV. ID NR.: 37), 8 (SEKV. ID NR.: 42) og 9 (SEKV. ID NR.: 43).
Mest foretrukne polynukleotider i henhold til oppfinnelsen er de illustrert i figurer 8 (SEKV. ID NR.: 42) og 9 (SEKV. ID NR.: 43).
Det skal forstås at polynukleotidsekvensene illustrert i figurene kan bli endret med degenererte kodon, og fremdeles kode for polypeptidene i henhold til oppfinnelsen.
Som en følge av degenereringen av nukleotidkodende sekvenser kan andre polynukleotidsekvenser som koder for i det vesentlige de samme polypeptidene som i den foreliggende oppfinnelsen, bli benyttet i praktiseringen av den foreliggende oppfinnelsen. Disse inkluderer, men er ikke begrenset til, nukleotidsekvenser som er endret ved substitusjonen i forskjellige kodon som koder for de samme aminosyrerestene inni sekvensen, og som derved gir en stille forandring (silent change).
I henhold til dette tilveiebringer foreliggende oppfinnelse videre polynukleotider som hybrididserer til polynukleotidsekvensene heri over beskrevet (eller komplementsekvensene derav) som har 50 %, og fortrinnsvis minst 70 %, identitet mellom sekvenser. Mer fortrinnsvis er polynukleotider hybridiserbare under stringente forhold, det vil si har minst 95 % identitet og mest fortrinnsvis mer enn 97 % identitet.
Med i stand til å hybridisere under stringente forhold, menes sammenføying av et nukleotidsyremolekyl til minst en region på en annen nukleotidsyresekvens (enten som cDNA, mRNA eller genomisk DNA), eller til dens komplementære tråd under standard forhold, for eksempel høy temperatur og/eller lavt saltinnhold, som tenderer til å disfavorisere hybridisering av ikke-komplementære nukleotidsekvenser. En passende protokoll er beskrevet i Maniatis T. et al., Molecular cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, 1982, som herved er inkorporert ved referanse.
I et videre aspekt kan polynukleotider som koder for polypeptider i henhold til foreliggende oppfinnelse, eller fragmenter, analoger eller derivater derav, bli benyttet i en DNA immuniseringsmetode. Det vil si de kan bli inkorporert inn i en vektor som er replikerbar og uttrykkbar ved injeksjon, og derved produserer det antigene polypeptidet in vivo. For eksempel kan polynukleotider bli inkorporert i en plasmidvektor under kontrollen av CMV promotoren som er funksjonell i eukarote celler. Fortrinnsvis blir vektoren injisert intramuskulært.
I henhold til et annet aspekt tilveiebringes en fremgangsmåte for å fremstille polypeptider i henhold til oppfinnelsen ved rekombinante teknikker, ved å uttrykke et polynukleotid som koder for nevnte polypeptid i en vertscelle, og å gjenvinne det uttrykte polypeptidproduktet. Alternativt kan polypeptidene produseres i henhold til etablerte syntetiske kjemiske teknikker, det vil si løsningsfase eller fastfasesyntese av oligopeptider som er ligert for å produsere fullengde polypeptidet (blokkligering).
For rekombinant fremstilling blir vertsceller transfektert med vektorer som koder for polypeptidet, og deretter dyrket i et næringsmedium modifisert på en passende måte for å aktivere promotorer, selektere for transformanter eller oppformere genene. Passende vektorer er de som er levedyktige og replikerbare i den valgte verten, og inkluderer kromosomale-, ikke-kromosomale- og syntetiske DNA sekvenser, for eksempel bakterieplasmider, fag DNA, baculovirus, gjærplasmider, vektorer avledet fra kombinasjoner av plasmider og fag DNA. Polypeptidsekvensen kan bli inkorporert i vektoren på det passende stedet ved å benytte restriksjonsenzymer slik at den blir operabelt koblet til en ekspresjonskontroll region som inneholder en promoter, ribosombindende sete (konsensusregion eller Shine-Dalgarno sekvens), og eventuelt en operator (kontrollelement). Man kan velge individuelle komponenter av ekspresjonskontroll regionen som er passende for en gitt vert, og vektor i henhold til etablerte molekylærbiologiske prinsipper (Sambrook et al. Molecular cloning: A Laboratory Manual, 2. utgave, Cold Spring Harbor, N.Y. 1989 inkorporert heri ved referanse). Passende promoterer inkluderer, men er ikke begrenset til, LTR eller SV40 promoter, E. coli lac, tac eller trp promotorer og fag lambda Pl promoteren. Vektorer vil fortrinnsvis inkorporere et startpunkt for replikasjon så vel som seleksjonsmarkører, det vil si ampicillin resistent gen. Passende bakterievektorer inkluderer pET, pQE70, pQE60, pQE-9, pbs, pDIO fagskript, psiX174, pblueskript SK, pbsks, pNH8A, pNH16a, pNH18A, pNH46A, ptrc99a, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, pRIT5 og eukaryote vektorer pBlueBacIII, pWLNEO, pSV2CAT, pOG44, pXTl, pSG, pSVK3, pBPV, pMSG og pSVL. Vertsceller kan være bakterier, det vil si E. coli, Bacillus subtilis, Streptomyces; sopp, det vil si Aspergillus niger, Aspergillus nidulins; gjær, det vil si Saccharomyces eller eukaryot, det vil si CHO, COS.
Ved ekspresjon av polypeptidet i kultur blir cellene vanligvis høstet ved sentrifugering, deretter ødelagt ved fysiske eller kjemiske metoder (dersom det uttrykte polypeptidet ikke skilles ut i mediumet), og det resulterende råekstraktet oppbevart for å isolere polypeptidet av interesse. Rensing av polypeptidet fra dyrkningsmediumet eller lysatet kan oppnås ved etablerte teknikker avhengig av egenskapene til polypeptidet, det vil si ved å benytte ammoniumsulfat eller etanolutfelling, syreekstraksjon, anion eller kation utbyttekromatografi, fosfocellulosekromatografi, hydrofob interaksjonkromatografi, hydroksylapatitkromatografi og lektinkromatografi. Endelig rensing kan bli oppnådd ved å benytte HPLC.
Polypeptidet kan bli uttrykt med eller uten en leder - (leader) eller sekresjonssekvens. I det første tilfellet kan lederen bli fjernet ved å benytte post-translasjonell prosessering (se US 4,431,739; 4,425,437; og 4,338,397 inkorporert heri ved referanse), eller bli kjemisk fjernet etter rensing av det uttrykte polypeptidet.
I henhold til et videre aspekt kan GBS polypeptidene i henhold til den foreliggende oppfinnelsen bli benyttet i en diagnostisk test for streptokokkusinfeksjon, spesielt GBS infeksjon. Flere diagnostiske metoder er mulige, for eksempel å detektere streptokokkorganisme i en biologisk prøve, den følgende prosedyren kan være som følger: a) oppnå en biologisk prøve fra en pasient; b) å inkubere et antistoff eller fragment derav, reaktivt med et GBS polypeptid
i henhold til oppfinnelsen, med den biologiske prøven for å danne en
blanding; og
c) å detektere spesifikt bundet antistoff eller bundet fragment i blandingen som indikerer nærværet av streptokokker.
Alternativt kan en metode for deteksjonen av antistoff spesifikt mot et streptokokkantigen i en biologisk prøve som inneholder, eller antas å inneholde, nevnte antistoff bli utført som følger: a) å isolere en biologisk prøve fra en pasient; b) å inkubere et eller flere GBS polypeptider i henhold til oppfinnelsen, eller fragmenter derav, med den biologiske prøven for å danne en blanding; og c) å detektere spesifikt bundet antigen eller bundet fragment i blandingen som indikerer nærværet av antistoff spesifikt mot streptokokker.
En med kunnskaper i faget vil gjenkjenne at denne diagnostiske testen kan utføres på flere måter, inkludert en immunologisk test så som et enzymkoblet immunosorbent assay (ELISA), et radioimmunoassay eller et lateks agglutineringsassay, i det vesentlige for å bestemme hvorvidt antistoffer spesifikke for proteinet er til stede i en organisme.
DNA sekvensene som koder for polypeptider i henhold til oppfinnelsen kan også bli benyttet for å konstruere DNA prober for anvendelse til å detektere nærværet av streptokokker i en biologisk prøve som antas å inneholde slike bakterier. Deteksjonsmetoden for denne oppfinnelsen omfatter: a) å isolere den biologiske prøven fra en pasient; b) å inkubere en eller flere DNA prober som har en DNA sekvens som koder for et polypeptid i henhold til oppfinnelsen, eller fragmenter derav, med den
biologiske prøven for å danne en blanding; og
c) å detektere spesifikt bundet DNA probe i blandingen som indikerer nærværet av streptokokkbakterier.
DNA probene i den foreliggende oppfinnelsen kan også bli benyttet for å detektere sirkulerende streptokokker, det vil si GBS nukleinsyrer i en prøve, for eksempel ved å benytte en polymerase kjedereaksjon som en metode for å diagnostisere streptokokkinfeksjon. Proben kan være syntetisert ved å benytte tradisjonelle teknikker og kan bli immobilisert på en fast fase, eller kan bli merket med et detekterbart merke. En foretrukket DNA probe for denne applikasjonen er en oligomer som har en sekvens komplementær til minst omkring 6 tilstøtende nukleotider til GBS polypeptidene i henhold til oppfinnelsen.
En annen diagnostisk metode for deteksjonen av streptokokker i en pasient omfatter: a) å merke et antistoff som er reaktivt med et polypeptid i henhold til oppfinnelsen eller fragment derav med et detekterbart merke; b) å administrere det merkede antistoffet eller merkede fragmentet til pasienten; og c) å detektere spesifikt bundet merket antistoff eller merket fragment i pasienten, som indikerer nærværet av streptokokker.
Et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen er anvendelsen av GBS polypeptidene i henhold til oppfinnelsen som immunogener for produksjonen av spesifikke antistoffer for diagnostiseringen og spesielt behandlingen av streptokokkusinfeksjon. Passende antistoffer kan bli bestemt ved å benytte passende screeningsmetoder, for eksempel ved å måle evnen til et spesielt antistoff til passivt å beskytte mot streptokokkinfeksjon i en testmodell. Et eksempel på en dyremodell er musemodellen beskrevet i eksemplene heri. Antistoffet kan være et helt antistoff eller et antigenbindende fragment derav, og kan generelt tilhøre enhver immunoglobulinklasse. Antistoffet eller fragmentet kan bli av dyreopprinnelse, spesifikt av pattedyropprinnelse og mer spesifikt av muse-, rotte-eller human opprinnelse. Det kan være et naturlig antistoff eller fragment derav, eller dersom ønsket, et rekombinant antistoff eller antistoff fragment. Begrepet rekombinant antistoff eller antistoff fragment betyr antistoff eller antistoff fragment som er produsert ved å benytte molekylærbiologiske teknikker. Antistoffet eller antistoff fragmentene kan være polyklonale, eller fortrinnsvis monoklonale. Det kan være spesifikt for et antall epitoper assosiert med GBS polypeptidene, men er fortrinnsvis spesifikt for ett.
EKSEMPEL 1 Musemodell for dødelig gruppe B streptokokk (GBS)
infeksjon
Musemodellen for GBS infeksjon er beskrevet i detalj i Lancefield et al (J Exp Med 142: 165-179, 1975). GBS stamme C388/90 (klinisk isolat oppnådd i 1990 fra cefalorasidinvæsken til en pasient som led av meningitt, Children's Hospital of Eastern Ontario, Ottawa, Canada) og NCS246 (National Center for Streptococcus, Provincial Laboratory of Public Health for Northern Alberta, Edmonton, Canada) ble serumtypet som henholdsvis type Ia/c og type II/R.
For å øke virulensen ble GBS stammene C388/90 (serumtype Ia/c) og NCS 246 (serumtype II/R) serielt passert gjennom mus som tidligere beskrevet (Lancefield et al, J Exp Med 142: 165-179, 1975). I korthet ble økningen av virulens monitorert ved å benytte intraperitoneal inokulasjon av seriefortynninger av en subkultur i Todd-Hewitt næringsmedium oppnådd fra enten blodet eller milten til infiserte mus. Etter den siste passasjen ble infiserte blodprøver benyttet for å inokulere Todd-Hewitt næringsmedium. Etter inkubering på 2 timer ved 37°C med 7 % CO2, ble glyserol tilsatt til kulturen til en sluttkonsentrasjon på 10 % (volum/volum). Kulturen ble deretter porsjonert og lagret ved -80°C for anvendelsen i GBS utfordringeksperimenter. Antallet cfu av GBS tilstede i disse frosne prøvene ble bestemt. Bakteriekonsentrasjonen som var nødvendig for å drepe 100 % (LD 100) av de 18 uker gamle musene ble bestemt å være 3, 5 X 10<5>og 1, 1 X 10<5>for henholdsvis GBS stamme C388/90 og NCS246, som korresponderte til en signifikant økning i virulens for begge stammene. LD100 opptegnet før passasjene for disse to stammene var høyere enn IO<9>cfu.
I en bakterieutfordring ble en nylig tint porsjon av en virulent GBS stamme tilpasset til den passende bakterekonsentrasjonen ved å benytte Todd-Hewitt næringsmedium, og 1 ml ble injisert intraperitonealt til hver hunn CD-1 mus. Musene benyttet for de passive beskyttelseseksperimentene var 6 til 8 uker gamle, mens de som ble benyttet for de aktive beskyttelseseksperimentene var omkring 18 uker gamle på utfordringstidspunktet. Alle inokulater ble verifisert ved kolonitellinger. Dyr ble observert for et hvert tegn på infeksjon fire ganger daglig i de første 48 timene etter utfordringen, og deretter daglig i de neste 12 dagene. Ved slutten av perioden ble blodprøver oppnådd fra de overlevende og frosset ved -20° C. Milten oppnådd fra hver mus som overlevde utfordringen ble dyrket for å identifisere mulig gjenværende GBS.
EKSEMPEL 2 Immunisering og beskyttelse i mus med formaldehyd-drepte
hele GBS celler
Formaldehyd-drepte GBS hele celler ble fremstilt i henhold til prosedyrene beskrevet i Lancefield et al. (J Exp Med 142: 165-179, 1975). I korthet ble en overnatt kultur på saueblod agarplater (Quelab Laboratories, Montreal, Canada) av en GBS stamme vasket to ganger i PBS buffer (fosfatbufret saltløsning, pH 7, 2), justert til omkring 3 X 10<9>cfu/ml og inkubert over natt i PBS som inneholdt 0, 3 %
(volum/volum) formaldehyd. Den drepte GBS suspensjonen ble vasket med PBS og holdt frosset ved -80°C.
Hunn CD-1 mus, 6 til 8 uker gamle (Charles River, St-Constant, Québec, Canada) ble injisert subkutant tre ganger med to ukers intervaller med 0, 1 ml av formaldehyd-drepte celler av GBS stamme C388/90 (~6 X IO<7>GBS), eller 0, 1 ml med PBS for kontrollgruppen. Dagen før immuniseringen ble Alhydrogel™
(Superfos Biosector, Fredrikssund, Danmark) i en sluttkonsentrasjon på 0. 14 mg eller 0, 21 mg av Al, tilsatt til disse prepareringene og inkubert over natt ved 4°C med røring. Serumprøver ble oppnådd fra hver mus før starten av immuniseringsprotokollen, og to uker etter den siste injeksjonen. Serum ble frosset ved -20°C.
Åtte mus i hver kontrollgruppe injisert med PBS og gruppen immunisert med formaldehyd-drepte hele celler GBS stamme C388/90 (Ia/c) ble utfordret med 1, 5 X IO<4>cfu av GBS stamme C388/90 (Ia/c) en uke etter den tredje injeksjonen. Alle musene som var immunisert med de formaldehyd-drepte GBS hele cellene overlevde den homologe utfordringen mens, innen 5 dager etter utfordringen, overlevde bare 4 av de 8 musene injisert med PBS infeksjonen. For å øke dødelighetshastigheten i kontrollgruppene, måtte bakteriesuspensjonen bli justert i henhold til alderen på musene på tidspunktet for bakterieutfordring. I påfølgende utfordringseksperimenter, når musene var eldre enn 15 uker, ble bakterieinokulatet øket til konsentrasjoner mellom 3, 0 X 105 og 2, 5 X IO<6>cfu.
I et annet eksperiment ble en gruppe på 12 mus som korresponderte til en kontrollgruppe injisert med PBS, mens en annen gruppe på 12 mus ble injisert med formaldehyd-drepte hele celler av GBS stamme C388/90 (Ia/c). Seks mus fra hver av disse to gruppene ble utfordret med 2, 1 X IO<6>cfu av GBS stammen C388/90 (Ia/c) (tabell 1). Som det første utfordringseksperimentet overlevde alle musene immunisert med GBS stammen C388/90 (Ia/c) den homologe utfordringen. Bare 2 av de 6 musene injisert med PBS overlevde infeksjonen.
De gjenværende 6 musene i begge gruppene ble deretter benyttet en uke senere for å verifisere hvorvidt denne antigene prepareringen kunne overføre kryssbeskyttelse mot stamme NCS246 (II/R) som gir en serologisk distinkt kapsel. Ingen av musene infisert med denne andre GBS stammen overlevde infeksjonen. Det siste resultatet tydet på at det meste av den beskyttende immune responsen indusert av formaldehyd-drepte stamme C388/90 er dirigert mot kapselpolysakkaridet, og at det kunne bli begrenset til stammer av den spesielle serumtypen. Disse resultatene indikerer tydelig at denne spesiell modellen for interaksjon kan bli effektivt benyttet for å studere beskyttelsen som overdras ved vaksinering.
EKSEMPEL 3 Immunisering av kanin med formaldehyd-drepte hele GBS
celler, og passiv beskyttelse i mus
En New Zealand kanin (2, 5 kg, Charles River, St-Constant, Québec, Canada) ble immunisert med formaldehyd-drepte celler av GBS stamme C388/90 (Ia/c) for å oppnå hyperimmunt serum. Denne kaninen ble injisert subkutant tre ganger med tre ukers intervaller med omkring 1,5 IO<9>cfu av formaldehyd-drepte hele celler av GBS stamme C388/90 (Ia/c). Freund's komplette adjuvans (Gibco BRL Life Technologies, Grand Island, New York) ble benyttet som adjuvans for den første immuniseringen, mens Freund's ufullstendige adjuvans (Gibco BRL) ble benyttet for de følgende to injeksjoner. Serumprøver ble oppnådd før starten på immuniseringsprotokollen og to uker etter den siste injeksjonen. Serumet ble frosset ved -20°C.
Evnen til dette spesielle kaninhyperimmuniserte serumet til passivt å beskytte mus mot en dødelig infeksjon med GBS ble også evaluert. Intraperitoneal injeksjon av mus med enten 15 eller 25 ul av hyperimmunt kaninserum 18 timer før utfordringen, beskyttet 4 av 5 mus (80 %) mot infeksjonen. Til sammenligning ble overlevelsesrater på mindre enn 20 % registrert for mus i kontrollgruppen injisert med PBS eller serum oppnådd fra en kanin immunisert med meningokokk ytre membranpreparering. Dette resultatet indikerer tydelig at immuniseringen av en annen dyreart med drepte GBS celler kan indusere produksjonen av antistoffer som passivt kan beskytte mus. Dette reagenset vil også bli benyttet for å karakterisere kloner.
EKSEMPEL 4 Rekombinant produksjon av His.Tag-GBS fusjonsprotein Den kodende regionen til et GBS gen ble opp formert ved PCR (DNA Thermal Cycler GeneAmp PCR system 2400 Perkin Eimer, San Jose, CA) fra det genomiske DNA'et til GBS stamme C388/90 (Ia/c), ved å benytte oligoer som inneholdt baseekstensjoner for addisjonen av restriksjonssetene til henholdsvis Bglll (AGATCT) og Hindlll (AAGCTT). PCR produktet ble renset fra agarosegel ved å benytte et Qiaex II gel ekstraksjonssett fra Qiagen (Chatsworth, CA), fordøyd med restriksjonsenzymer Bglll og Hindlll (Pharmacia Canada Inc. Baie d'Urfe, Canada) og ekstrahert med fenoLkloroform før etanolutfelling. pET-32b (+) vektoren (Novagen, Madison, WI) som inneholdt tioredoksin-His.Tag sekvensen ble fordøyd med restriksjonsenzymene Bglll og Hindlll, ekstrahert med fenol:kloroform, og deretter etanolutfelt. Det Bglll-Hindlll genomisk DNA fragmentet ble ligert til Bglll-Hindlll pET-32b (+) vektoren for å danne den kodende sekvensen for tioredoksin-His.Tag-GBS fusjonsproteinet, hvis gen var under kontroll av T7 promoteren. De ligerte produktene ble transformert inn i E. coli stamme XLI Blue MRF' (A(mcrA)183A(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endAl supE44thi-l recAl gyrA96 relAl lac [F'proAB lacI<q>ZAM15TnlO (Tet<r>)]<c>) (Stratagene, La Jolla, CA) i henhold til metoden til Simanis (Hanahan, D. DNA Cloning, 1985, D.M. Glover (red.), PP-109-135). Det rekombinante pET plasmidet ble renset ved å benytte et Qiagen sett (Qiagen, Chatsworth, CA), og nuklotidsekvensen til DNA innskuddet ble verifisert ved DNA sekvensering (Taq Dye Deoxy Terminator Cycle Sequencing kit, ABI, Foster City, CA). Det rekombinante pET plasmidet ble transformert ved elektroporering (Gene Pulser II apparat, BIO-RAD Labs, Mississauga, Canada) inn i E. coli stamme AD494 (DE3) (Aara leu7697 AlacX74 AphoA PvuII phoR AmalF3 F' [lac<+>(lacl<q>) pro] trxB: :Kan (DE3)) (Novagen, Madison, WI). I denne stammen med E. Coli er T7 promoteren, som kontrollerer ekspresjon av fusjonsproteinet, spesifikt gjenkjent av T7 RNA polymerasen (tilstede på X,DE3 profagen), hvis gen er under kontrollen av lac promoteren som er induserbar av isopropyl-P-D-tio-galaktopyranosid (IPTG).
Transformanten AD494 (DE3)/rpET ble dyrket ved 37°C med bevegelse ved 250 rpm i LB næringsmedium (pepton lOg/1, gjærekstrakt 5g/l NaCl 1 Og/l) som inneholdt 100 u.g med ampicillin (Sigma-Aldrich Canada Ltd., Oakville, Canada) pr. ml. inntil A6oonådde en verdi på 0, 6. For å indusere produksjonen av tioredoksin-His.Tag-GBS fusjonsproteinet ble cellene inkubert i ytterligere 2 timer i nærværet av IPTG ved en sluttkonsentrasjon på 1 mM. Bakteriecellene ble høstet ved sentrifugering.
Det rekombinante fusjonsproteinet produsert av AD494 (DE3)/rpET32 ved IPTG induksjon i 2 timer, ble delvis oppnådd som uløselige inklusjonslegemer som ble renset fra endogene E. coli proteiner ved isoleringen av uløselige aggregater (Gerlach, G.F. et al 1992, Infect. Immun. 60:892). Induserte celler fra en 500 ml kultur ble resuspendert i 20 ml med 25 % sukkrose-50 mM Tris-HCl buffer (pH 8, 0) og frosset ved -70°C. Lysering av celler i tint suspensjon ble oppnådd ved tilsetningen av 5 ml av en løsning av lysozym (10mg/ml) i 250 mM Tris-HCl buffer (pH 8, 0), etterfulgt av en inkubering på 10 til 15 minutter på is, og tilsetningen av 150 ml med detergentblanding (5 deler med 20 ml Tris-HCl buffer [pH 7, 4] -300 mM NaCl-2 % deoksykolinsyre-2 % Nonidet P-40 og 4 deler med 100 mM Tris-HCl buffer [pH 8] -50 mM EDTA-2 % Triton X-100), etterfulgt av 5 minutters inkubering på is. Ved sonikering ble proteinaggregater høstet ved sentrifugering i 30 min. ved 35 000 X g, og en prøve av den løselige cellulære fraksjonen ble beholdt. De aggregerte proteinene ble løst opp i 6M guanidin hydroklorid. Nærværet av fusjonsproteinet i både de løselige og uløselige fraksjonene ble vist ved Western Blot analyse ved å benytte serumet fra en mus injisert med formaldehyd-drepte celler av GBS stamme C388/90 (Ia/c) som overlevde en bakterieutfordring med den korresponderende GBS stammen. Rensingen av fusjonsproteinet fra den løselige fraksjonen med IPTG-indusert AD494 (DE3)/rpET ble gjort ved affinitetskromatografi basert på egenskapene til His.Tag sekvensen (6 påfølgende histidinrester) til å binde til divalente kationer (Ni ) immobiliert på His.Bind metall gelationharpiks (Novagen, Madison, WI). Rensingsmetoden benyttet er de beskrevet i pET systemmanualen, 6. utgave (Novagen, Madison, WI). I korthet ble cellene som var i en pellet oppnådd fra en 100 ml kultur som var indusert med IPTG, resuspendert i 4 ml med bindingsbuffer (5 mM imidazol-500 mM NaCl-20 mM Tris-HCl pH 7, 9), sonikert og spunnet ved 39 000 X g i 20 minutter for å fjerne rester. Supernatanten ble filtrert (0, 45 um porestørrelsemembran) og avsatt på en kolonne med His.Bind harpiks ekvilibrert i bindingsbuffer. Kolonnen ble deretter vasket med 10 kolonnevolumer av bindingsbuffer etterfulgt av 6 kolonnevolumer med vaskebuffer (20 mM imidazol-500 mM NaCl-20 mM Tris-HCl pH 7, 9). Tioredoksin-His.Tag-GBS fusjonsproteinet ble eluert med elveringsbuffer (IM imidazol-500 mM NaCl-20 mM Tris-HCl pH 7, 9). Fjerningen av saltet og imidazol fra prøven ble gjort ved dialyse mot 3 X 1 liter PBS ved 4°C.
Mengdene av fusjonsprotein oppnådd fra enten de løselige eller uløselige cytoplasmiske fraksjonene av E. coli ble estimert ved Coomassi farging av en natrium dodesylsulfat (SDS)-polyakrylamidgel med seriefortynninger av disse proteinene, og en bovin serumalbumin standard (Pierce Chemical Co. Rockford, 111.).
EKSEMPEL 5 Rekombinant produksjon av GBS protein under kontroll av
lambda Pl promoter
Den DNA kodende regionen til et GBS protein ble innskutt nedstrøms for promoteren X.Plinn i translasjonsvektoren pURV22. Dette plasmidet var avledet fra p629 (George et al, 1987, Bio/Technology 5 : 600) hvorfra den kodende regionen for en del av herpes simpleks virus type I (HSV-1) glykoproteinet (gD-1) ble fjernet, og det ampicillinresistente genet erstattet av en kanamycin kassett oppnådd fra plasmidvektoren pUC4K (Pharmacia Biotech Canada Inc., Baie D'Urfe, Canada). Vektoren inneholdt en kassett med det bakteriofag X cI857 temperatursensitive repressorgenet som den funksjonelle Pr promoteren hadde blitt fjernet fra. Inaktiveringen av cI857 repressoren ved temperaturøkning fra områdene mellom 30-37°C til 37-42°C resulterte i induksjonen av genet under kontrollen av X Pl. Translasjonen av genet ble kontrollert av ribosombindingssetet cro etterfulgt nedstrøms av et Bglll restriksjonssete (AGATCT) og ATG:
ACTAAGGAGGTTAGATCTATG.
Restriksjonsenzymer og T4 DNA ligase ble benyttet i henhold til produsentene (Pharmacia Biotech Canada Inc., Baie D'Urfe, Canada; og New England Biolabs
Ltd., Mississauga, Canada). Agarosegelelektroforese av DNA fragmenter ble utført som beskrevet av Sambrook et al. (Molecular cloning: A laboratory Manual, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y.). Kromosomalt DNA til GBS bakterien ble fremstilt i henhold til prosedyrer beskrevet i Jayarao et al (J. Clin. Microbiol., 1991, 29:2774). DNA oppformeringsreaksjoner ved polymerase kjedereaksjon (PCR) ble gjort ved å benytte DNA Thermal Cycler GeneAmp PCR system 2400 (Perkin Eimer, San Jose, CA). Plasmider benyttet for DNA sekvensering blir renset ved å benytte plasmidsett fra Qiagen (Chatsworth, CA). DNA fragmenter ble renset fra agarosegeler ved å benytte Qiaex II gelekstraksjonssett fra Qiagen (Chatsworth, CA). Plasmidtransformasjoner ble utført ved metoden beskrevet av Hanahan (DNA Cloning, Glover (red.) pp, 109-135, 1985). Sekvenseringen av genomiske DNA inskudd i plasmider ble gjort ved å benytte syntetiske oligonukleotider som var syntetisert ved
oligonukleotidsyntesemodell 394 (Perkin-Elmer Corp., Applied Biosystems Div.
(ABI), Foster City, CA). Sekvenseringsreaksjonene ble utført ved PCR ved å benytte Taq Dye Deoxy Terminator Cycle Sequencing settet (ABI, Foster City, CA), og DNA elektroforese ble utført på automatisert DNA sekvenserer 373A (ABI, Foster City, CA). Samlingen av DNA sekvensene ble gjort ved å benytte programmet Sequencer 3, 0 (Gene Godes Corporation, Ann Arbor, MI). Analyse av DNA sekvensene og deres foreslåtte polypeptider ble utført med programmet Gene Works versjon 2, 45 (Intelligenetics, Inc., Mountain View CA).
Den kodende regionen til GBS genet ble oppformert ved PCR fra GBS stamme C388/90 (Ia/c) genomisk DNA ved å benytte oligenukleotider som inneholdt baseekstensjoner for tilsetningen av restriksjonsseter, henholdsvis Bglll (AGATCT) og Xbal (TCTAGA). PCR produktet ble renset fra agarosegel ved å benytte et Qiaex II gelekstraksjonssett fra Qiagen (Chatsworth, CA), fordøyd med restriksjonsenzymene Bglll og Xbal og ekstrahert med fenol:kloroform før etanolpresipitering. pURV22 vektoren ble fordøyd med restriksjonsenzymene Bglll og Xbal, ekstrahert med fenoLkloroform, og etanolpresipitert. Det Bglll-Xbal genomiske DNA fragmentet ble ligert til Bglll-Xbal pURV22 vektoren, der GBS genet var under kontrollen av A.PL promoteren. De ligerte produktene ble transformert inn i E. coli stamme XLI Blue MRF' (A (mcrA)183A(mcrCB-hdsSMR-mrr)173 endAl supE44 thi-1 recAl gyrA96 relAl lac[F'proAB lacl<q>ZA Ml5 Tnl0(Tet<r>)]°) (Stratagene, La Jolla CA) i henhold til metodene beskrevet i Hanahan, supra. Transformanter som inneholdt plasmider med innskuddet ble identifisert ved analyse av lyserte celler som ble utsatt for elektroforese på agarosegel (Sambrook et al, supra). Det rekombinante pURV22 plasmidet ble renset ved å benytte et Qiagen sett (Qiagen, Chatsworth, CA), og nukletidsekvensen til DNA innskuddet ble verifisert ved DNA sekvensering. Transformanten XLI Blå MRF7rpURV22 ble dyrket ved 34°C med bevegelse ved 250 rpm i LB næringsmedium som inneholdt 50 u.g med kanamycin pr. ml., inntil A600nådde en verdi på 0, 6. For å indusere produksjonen av fusjonsproteinet ble cellene inkubert i ytterligere 4 timer ved 39°C. Bakteriecellene ble høstet ved sentrifugering, resuspendert i prøvebuffer, kokt i 10 minutter og oppbevart ved -20°C.
EKSEMPEL 6 Å subklone GBS proteingenen i CMV plasmid pCMV-GH
Den DNA kodende regionen til et GBS protein ble innskutt i fase nedstrøms for det humane veksthormon (hGH) genet som var under den transkripsjonen kontrollen av cytomegalovirus (CMV) promoteren i plasmidvektoren pCMV-GH (Tang et al, Nature, 1992, 356:152). CMV promoteren er ikke-funksjonell i E. coli celler, men aktiv ved adminstrering av plasmidet i eukaryote celler. Vektoren inkorporerte også det ampicillinresistente genet.
Den kodende regionen til genet ble oppformert ved PCR fra genomisk DNA til GBS stamme C388/90 (Ia/c) ved å benytte oligoene som inneholdt baseekstensjoner for addisjonen av restriksjonssetene Bglll (AGATCT) og Hindlll (AAGCTT). PCR produktet ble renset fra agarosegel ved å benytte et Qiaex II gelekstraksjonssett fra Qiagen (Chatsworth, CA), fordøyd med restriksjonsenzymene Bglll og Hind III, og ekstrahert med fenoLkloroform før etanolpresipitering. pCMV-GH vektoren (laboratoriet til Dr. Stephen A. Johnston, Avdeling for Biokjemi, Universitetet i Texas, Dallas, Texas) som inneholdt det humane veksthormonet for å danne fusjonsproteiner, ble fordøyd med restriksjonsenzymene BamHI og Hindlll, ekstrahert med fenol:kloroform, og etanolpresipitert. Det 1, 3-kb Bglll-Hindlll genomiske DNA fragmentet ble ligert til BamHI-Hindlll pCMV-GH vektoren for å danne hGH-GBS fusjonsproteinet under kontrollen av CMV promoteren. De ligerte produktene ble transformert inn i E. coli stamme DH5cc[<D80 lacZ AMI5 endAl recAl hsdR17 (<r>K"<m>K<+>) supE44 thi-1 X gyrA96 rel Al A(lacZYA-argF)U169] (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) i henhold til metodene beskrevet av Hanahan, supra. Transformanter som inneholdt plasmider med innskuddet ble identifisert ved analyse av lyserte celler utsatt for elektroforese på agarosegel (Sambrook, J. et al. supra). Det rekombinante pCMV plasmidet ble renset ved å benytte et Qiagen sett (Qiagen, Chatsworth, CA), og nukleotidsekvensen til DNA innskuddet ble verifisert ved DNA sekvensering.
EKSEMPEL 7 Immunologisk aktivitet til GBS protein for GBS utfordring Fire grupper med 12 hunn CD-1 mus (Charles River, St-Constant, Québec, Canada) på 6 til 8 uker ble injisert subkutant tre ganger med tre ukers intervaller med 0, 1 ml av de følgende antigene prepareringene: formaldehyd-drepte celler av GBS stamme C388/90 (~6 X IO<7>cfu), 20 ug med tioredoksin-His.Tag-GBS fusjonsprotein oppnådd fra det uløselige (inklusjonslegemer), eller 20 ug av fusjonsproteinet, affinitetsrenset (nikkelkolonne), fra den løselige cytoplasmiske fraksjonen i E. coli, eller 20 ug med affinitetsrenset (nikkelkolonne) tioredoksin-His.Tag kontrollpolypeptid. 20 ug med QuilA™ (Cedarlane Laboratories Ltd., Hornby, Canada) ble tilsatt til hver antigene preparering som adjuvanser. Serumprøver ble oppnådd fra hver mus før immunisering (PB) og på dagene 20 (TB1), 41 (TB2) og 54 (TB3) under immuniseringsprotokollene. Serum ble frosset ved -20°C.
En økning av ELISA titer ble registrert etter hver injeksjon av fusjonsproteinet, og indikerer en god primærrespons og en økning (boost) av den spesifikke humorale immunresponsen etter hver av den andre og tredje administreringen. Ved slutten av immuniseringsperioden var målene for resiproke ELISA titer 456145 for gruppen immunisert med 20 ug med fusjonsprotein oppnådd fra inklusjonslegemer, sammenlignet med 290133 for gruppen med mus immunisert med proteinet fra løselig fraksjon i E. coli. Det siste resultatet tyder på at proteinet oppnådd fra inklusjonslegemer kan være mer immunogent enn det løselige proteinet. Analyse av museserum i ELISA ved å benytte affinitetsrenset tioredoksin-His.Tag for å belegge plater, viste at ubetydelige antistoff-titer dannes mot tioredoksin-His.Tag delen av fusjonsproteinet. Reaktiviteten til serumet fra mus injisert med det rekombinante fusjonsproteinet ble også testet med ELISA mot formaldehyd-drepte hele celler av GBS stamme C388/90. Antistoffene indusert ved immunisering med rekombinant fusjonsprotein gjenkjente også deres spesifikke epitoper på GBS celler, og indikerer at deres konformasjon er nær nok til det native streptokokkproteinet for å indusere kryssreaktive antistoffer.
For å verifisere hvorvidt immunresponsen indusert ved immunisering kunne beskytte mot GBS infeksjon, ble mus utfordret med 3, 5 X IO<5>cfu av GBS stamme C388/90 (Ia/c), og 1, 2 X IO5 cfu av stamme NSC246 (II/R), resultatene som er illustrert i henholdsvis tabell 3 og 4. Mus immunisert med kontroll tioredoksin-His.Tag peptid ble ikke beskyttet mot utfordring med noen GBS stamme, mens de immunisert med formaldehyd-drepte C388/90 hele celler bare tilveiebragte beskyttelse mot homolog utfordring. Tioredoksin-His.Tag-GBS fusjonsproteinet i henhold til oppfinnelsen beskyttet mus fra utfordring med begge GBS stammene. Blod og miltkultur fra disse musene viste ikke nærværet av noe GBS.
EKSEMPEL 8 Immunisering med rekombinant GBS protein overdrar
beskyttelse mot eksperimentell GBS infeksjon
Dette eksempelet illustrerer beskyttelsen av mus mot dødelig GBS infeksjon ved immunisering med det rekombinante proteinet som korresponderer til SEKV. ID NR.: 39.
Grupper på 10 hunn CD-1 mus (Charles River) ble immunisert subkutant tre ganger med tre ukers intervaller med 20 ug av rekombinant protein renset fra E. coli stamme BLR (Novagen), som hadde i seg den rekombinante pURV22 plasmidvektoren som inneholdt GBS genet som korresponderer til SEKV. ID NR.: 42, i nærvær av 20 ug av QuilA™ adjuvans (Cedarlane Laboratories Ltd, Hornby, Canada) eller, som kontroll, med QuilA™ adjuvans alene, i PBS. Blodprøver ble samlet fra den orbitale sinus på dag 1, 22 og 43 før hver immunisering, og 14 dager (dag 57) etter den tredje injeksjonen. En uke senere ble musene utfordret med omkring IO<4>til IO6 cfu av ulike virulente GBS stammer. Prøver av GBS utfordringsinokulatet ble platet på TSA/5 % saueblod agarplater for å bestemme cfu, og for å verifisere utfordringsdosen. Dødsfall ble registrert i en periode på 14 dager, og på dag 14 etter utfordringen, de overlevende musene ble ofret og blod og milt ble testet for nærværet av GBS organismer. Overlevelsesdataene er vist i tabell 5.
Preutfordringsserum ble analysert for nærværet av antistoffer reaktive med GBS ved standard immunoassay. ELISA og immunoblotanalyser indikerte at immunisering med rekombinant GBS protein produsert i E. coli utløste antistoffer reaktive med både rekombinant og nativt GBS protein. Antistoffrespons mot GBS er beskrevet i eksempel 9.
Alle hemokulturer fra overlevende mus var negative ved dag 14 etter utfordring. Miltkulturer fra overlevende mus var negative, bortsett fra noen få mus fra eksperiment MB-11
EKSEMPEL 9 Vaksinering med det rekombinante GBS proteinet utløser en
immunrespons mot GBS
Grupper på 10 hunn CD-1 mus ble immunisert subkutant med rekombinant GBS protein som korresponderer til SEKV. ID NR.: 39, som beskrevet i eksempel 8. For å vurdere antistoffresponsen til nativt GBS protein ble serum fra blodprøver, som var samlet før immunisering og 14 dager etter den tredje immuniseringen, testet for antistoff reaktivitet med GBS celler ved ELISA, ved å benytte plater belagt med formaldehyd-drepte GBS celler fra type III stamme NCS 954, type Ib stamme ATCC12401, type V stamme NCS 535 eller type VI stamme NCS 9842. Spesifisiteten til de produserte antistoffene for GBS protein ble bekreftet ved Western blot analyser av GBS celleektstrakter og rensede rekombinante antigener. Resultatene vist i figur 10 demonstrerer tydelig at dyr responderte kraftig mot rekombinant GBS protein benyttet som immunogener, med midlere resiproke antistofftiter varierende mellom 12000 og 128000 for serum samlet etter den tredje immuniseringen, avhengig av beleggingsantigenet. Alle preimmune serum var negative når de ble testet ved en fortynning på 1:100. GBS-reaktive antistoffer var detekterbare i serumet til hvert dyr etter en enkelt injeksjon med rekombinant GBS protein.
EKSEMPEL 10 Antigenkonservering av GBS proteinet i henhold til
foreliggende oppfinnelse
Monoklonale antistoffer (MAb'er) spesifikke for GBS proteinet i henhold til den foreliggende oppfinnelsen, ble benyttet for å demonstrere at dette overflateantigenet blir produsert av alle GBS, og at det også er antigenisk godt konservert.
En samling av 68 GBS isolater ble benyttet for å evaluere aktiviteten til de GBS-spesifikke MAb'ene. Disse stammene ble oppnådd fra National Center for Streptokoccus, Provincial Laboratory of Public Health i Nord Alberta, Canada; Centre Hospitalier Universitaire de Quebec, Pavillon CHUL, Quebec, Canada; American Type Culture Collection, USA; Laboratorie de Sante Publique du Quebec, Canada; og Avdeling for infeksjonssykdommer, Children's Hospital and Medical Center, Seattle, USA. Alle 8 MAb'er ble testet mot det følgende panel av stammer: 6 isolater av serumtype Ia eller Ia/c, 3 isolater av serumtype Ib, 4 isolater av serumtype II, 14 isolater av serumtype III, 2 isolater av serumtype IV, 2 isolater av serumtype V, 2 isolater av serumtype VI, 2 isolater av serumtype VII, 1 isolat av serumtype VIII, 10 isolater som ikke var serumtypet, og 3 bovine S. agalactiae
stammer. MAb 3A2 ble også reagert med ytterligere GBS: 9 isolater av serumtype Ia/c og 10 isolater av serumtype V. Stammene ble dyrket overnatt på blod
agarplater ved 37°C i en atmosfære på 5 % CO2. Kulturene ble lagret ved -70°C i hjerteinfusjonsnæringsmedium med 20 % (volum/volum) glyserol.
For å oppnå de GBS proteinspesifikke MAb'ene, ble mus immunisert tre ganger med tre ukers intervaller med 20 ug av renset rekombinant GBS protein ( SEKV. ID NR.: 44) i nærværet av 20 % QuilA™ adjuvans. Hybridomcellelinjer ble generert ved fusjon av miltceller gjenvunnet fra immuniserte mus med den ikke-utskillende SP2/0 myelomcellelinjen som beskrevet tidligere (Hamel, J. et al. 1987. J. Med. Microbiol. 23:163-170). Hybridklon supernatanter ble testet for spesifikk antistoffproduksjon ved ELISA, ved å benytte formaldehyd-inaktivert GBS og renset rekombinant GBS protein (SEKV. ID NR.: 39 eller 44) som beleggende antigen, som tidligere beskrevet (Hamel, J. et al. 1987. J. Med. Microbiol. 23:163-170). Spesifikke hybrider ble klonet ved begrensende fortynninger, ekspandert og frosset i flytende nitrogen. Produksjon av rekombinant GBS protein ble presentert i eksemplene 4 og 5. Renset rekombinant GBS protein eller formaldehyd-inaktivert GBS ble løst opp ved elektroforese ved å benytte det diskontinuerlige buffersystemet til Laemmli som rekommandert av produsenten, og deretter overført til nitrocellulosemembran for Western immunblotting som beskrevet tidligere (Martin et al. 1992. Infect. Immun. 60:2718-2725).
Western immunblottingseksperimenter indikerte tydelig at alle 8 MAb'ene gjenkjente et proteinbånd som korresponderte til det rensede rekombinante GBS proteinet (SEKV. ID NR.: 39). Disse MAb'ene reagerte også med et proteinbånd tilstede i et hvert GBS isolat testet til nå. Reaktiviteten til disse GBS-spesifikke MAb'ene er presentert i tabell 6. Hver MAb reagerte godt med alle 46 GBS. I tillegg gjenkjente disse MAb'ene også den 3 S. agalactiae stammen av bovin opprinnelse som var testet. MAb 3A2 gjenkjente også 19 GBS; 9 isolater av serumtype Ia/c og 10 av serumtype V. De andre MAb'ene ble ikke testet mot disse ytterligere stammene.
Disse resultatene demonstrerte at GBS proteinet (SEKV. ID NR.: 39) ble produsert av alle de 65 GBS, og de 3 S. agalactiae stammene av bovin opprinnelse som er testet til nå. Mer viktig demonstrerer disse resultatene tydelig at epitopene som gjenkjennes av disse 8 GBS-spesifikke MAb'ene var distribuert i utstrakt grad, og konservert blant GBS. Disse resultatene indikerer også at disse epitopene ikke var begrenset til serologisk relaterte isolater, siden representativer for alle kjente GBS serumtyper, inkludert den viktigste sykdomsfremkallende gruppen, ble testet.
I konklusjon demonstrerer dataene presentert i dette eksempelet tydelig at GBS proteinet i henhold til den foreliggende oppfinnelsen blir dannet av alle GBS, og at det antigenmessig sett er godt konservert.
Claims (48)
1. Isolert polyrmkleotid,
karakterisert ved at det koder for et polypeptid som har minst 70 % identitet til et annet polypeptid, som har en sekvens valgt fra gruppen som består av:
SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV.
ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40, SEKV. ID NR.: 41 og SEKV. ID NR.: 44 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
2. Polynukleotid som angitt i krav 1,
karakterisert ved at nevnte polynukleotid koder for et polypeptid som har minst 95 % identitet til det andre polypeptidet.
3. Isolert polynukleotid,
karakterisert ved at det at det koder for et polypeptid som er istand til å generere antistoffer som har bindingsspesifisitet til et polypeptid som har en sekvens valgt fra gruppen som består av:
SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV.
ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40, SEKV. ID NR.: 41 og SEKV. ID NR.: 44 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
4. Isolert polynukleotid,
karakterisert ved at det er komplementært til polynukleotidet som angitt i krav 1.
5. Isolert polynukleotid,
karakterisert ved at det er komplementært til polynukleotidet som angitt i krav 3.
6. Polynukleotid som angitt i krav 1,
karakterisert ved at nevnte polynukleotid er DNA.
7. Polynukleotid som angitt i krav 3,
karakterisert ved at nevnte polynukleotid er DNA.
8. Polynukleotid som angitt i krav 1,
karakterisert ved at nevnte polynukleotid er RNA.
9. Polynukleotid som angitt i krav 3,
karakterisert ved at nevnte polynukleotid er DNA.
10. Polynukleotid,
karakterisert ved at det hybridiserer under stringente forhold til et annet polynukleotid som har en sekvens valgt fra gruppen som består av:
SEKV. ID NR.: 1, SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 7, SEKV. ID NR.: 13, SEKN ID NR.: 22, SEKV. ID NR.: 27, SEKV. ID NR.: 32, SEKV. ID NR.: 37, SEKV. II NR.: 42 og SEKV. ID NR.: 43 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
11. Polynukleotid,
karakterisert ved at det hybridiserer under stringente forhold til et annet polynukleotid som har en sekvens valgt fra gruppen som består av: SEKV. ID NR.: 37, SEKV. ID NR.: 42 og SEKV. ID NR.: 43.
12. Polynukleotid som angitt i krav 11,
karakterisert ved at det hybridiserer under stringente forhold til et annet polynukleotid som har sekvensen SEKV. ID NR.: 37.
13. Polynukleotid som angitt i krav 11,
karakterisert ved at det hybridiserer under stringente forhold til et annet polynukleotid som har sekvensen SEKV. ID NR.: 42.
14. Polynukleotid som angitt i krav 11,
karakterisert ved at det hybridiserer under stringente forhold til et annet polynukleotid som har sekvensen SEKV. ID NR.: 43.
15. Polynukleotid som angitt i krav 10,
karakterisert ved at nevnte polynukleotid har minst 95 % komplementaritet til det andre polynukleotidet.
16. Polynukleotid som angitt i krav 11,
karakterisert ved at nevnte polynukleotid har minst 95 % komplementaritet til det andre polynukleotidet.
17. Vektor som inneholder polynukleotidet som angitt i krav 1, karakterisert ved at nevnte polynukleotid er operabelt koblet til en ekspresjonskontrollregion.
18. Vektor som inneholder polynukleotidet som angitt i krav 3, karakterisert ved at nevnte polynukleotid er operabelt koblet til en ekspresjonskontrollregion.
19. Vertscelle,
karakterisert ved at den er transfektert med vektoren som angitt i krav 17.
20. Vertscelle,
karakterisert ved at den er transfektert med vektoren som angitt i krav 18.
21. Fremgangsmåte for å fremstille et polypetid,
karakterisert ved at den omfatter å dyrke en vertscelle som angitt i krav 19 under forhold som er passende for ekspresjon av nevnte polypeptid.
22. Fremgangsmåte for å fremstille et polypetid,
karakterisert ved at den omfatter å dyrke en vertscelle som angitt i krav 20 under forhold som er passende for ekspresjon av nevnte polypeptid.
23. Isolert polypeptid,
karakterisert ved at det har minst 70 % identitet til et annet polypeptid som har en sekvens valgt fra gruppen som består av:
SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV.
ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40, SEKV. ID NR.: 41 og SEKV. ID NR.: 44 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
24. Isolert polypeptid som angitt i krav 23,
karakterisert ved at det har en sekvens i samsvar med SEKV. ID NR.: 39.
25. Isolert polypeptid som angitt i krav 23,
karakterisert ved at det har en sekvens i samsvar med SEKV. ID NR.: 44.
26. Isolert, polypeptid,
karakterisert ved at det er istand til å generere antistoffer som har bindingsspesifisitet for et annet polypeptid som har en sekvens valgt fra gruppen som består av:
SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV.
ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40, SEKV. ID NR.: 41 og SEKV. ID NR.: 44 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
27. Isolert polypetid som angitt i krav 26,
karakterisert ved at det har en sekvens i samsvar med SEKV. ID NR.: 39.
28. Isolert polypeptid som angitt i krav 25,
karakterisert ved at det har en sekvens i samsvar med SEKV. ID NR.: 44.
29. Isolert polypeptid,
karakterisert ved at det har en aminosyresekvens valgt fra gruppen som består av:
SEKV. ID NR.: 2, SEKV. ID NR.: 3, SEKV. ID NR.: 4, SEKV. ID NR.: 5, SEKV.
ID NR.: 6, SEKV. ID NR.: 8, SEKV. ID NR.: 9, SEKV. ID NR.: 10, SEKV. ID NR.: 11, SEKV. ID NR.: 12, SEKV. ID NR.: 14, SEKV. ID NR.: 15, SEKV. ID NR.: 16, SEKV. ID NR.: 18, SEKV. ID NR.: 19, SEKV. ID NR.: 20, SEKV. ID NR.: 23, SEKV. ID NR.: 24, SEKV. ID NR.: 25, SEKV. ID NR.: 26, SEKV. ID NR.: 28, SEKV. ID NR.: 29, SEKV. ID NR.: 30, SEKV. ID NR.: 31, SEKV. ID NR.: 33, SEKV. ID NR.: 34, SEKV. ID NR.: 35, SEKV. ID NR.: 36, SEKV. ID NR.: 38, SEKV. ID NR.: 39, SEKV. ID NR.: 40 og SEKV. ID NR.: 41 eller fragmenter, analoger eller derivater derav.
30. Isolert polypeptid som angitt i krav 29,
karakterisert ved at det har en aminosyresekvens i samsvar med SEKV. ID NR.: 39.
31. Isolert polypeptid,
karakterisert ved at det har en aminosyresekvens i samsvar med SEKV. ID NR.: 44.
32. Isolert polypeptid som angitt i et hvilket som helst av kravene 29 til 31, karakterisert ved at den N-terminale Met resten er fjernet.
33. Isolert polypeptid som angitt i et hvilket som helst av kravene 29 til 30, karakterisert ved at den sekretoriske aminosyresekvensen er fjernet.
34. Vaksinesammensetning,
karakterisert ved at den omfatter et polypeptid som angitt i et hvilket som helst av kravene 23 til 31, og en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynningsmiddel eller adjuvans.
35. Vaksinesammensetning,
karakterisert ved at den omfatter et polypeptid som angitt i krav 32 og en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynningsmiddel eller adjuvans.
36. Vaksinesammensetning,
karakterisert ved at den omfatter et polypeptid som angitt i krav 33 og en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynningsmiddel eller adjuvans.
37. Fremgangsmåte for terapeutisk eller profylaktisk behandling av streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for streptokokkinfeksjon, karakterisert ved at den omfatter å administrere til nevnte dyr en terapeutisk eller profylaktisk mengde av en sammensetning som angitt i krav 34.
38. Fremgangsmåte for terapeutisk eller profylaktisk behandling av streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for streptokokkinfeksjon, karakterisert ved at den omfatter å administrere til nevnte dyr en terapeutisk eller profylaktisk mengde av en sammensetning som angitt i krav 35.
39. Fremgangsmåte for terapeutisk eller profylaktisk behandling av streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for streptokokkinfeksjon, karakterisert ved at den omfatter å administrere til nevnte dyr en terapeutisk eller profylaktisk mengde av en sammensetning som angitt i krav 36.
40. Fremgangsmåte som angitt i et hvilket som helst av kravene 37 til 39, karakterisert ved at nevnte dyr er et kveg.
41. Fremgangsmåte som angitt i et hvilket som helst av kravene 37 til 39, karakterisert ved at nevnte dyr er et menneske.
42. Fremgangsmåte som angitt i et hvilket som helst av kravene 37 til 39, karakterisert ved at nevnte baktereinfeksjon er valgt fra gruppen som består av gruppe A Streptokoccus og gruppe B Streptokoccus.
43. Fremgangsmåte som angitt i krav 42,
karakterisert ved at nevnte bakterieinfeksjon er gruppe B Streptokoccus.
44. Anvendelse av en vaksinesammensetning som angitt i krav 34 for den terapeutiske eller profylaktiske behandlingen av streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for eller infisert med streptokokkinfeksjon, som omfatter å administrere til nevnte dyr en terpeutisk eller profylaktisk mengde av sammensetningen.
45. Anvendelse av en vaksinesammensetning som angitt i et hvilket som helst av kravene 35 til 36, for den terapeutiske eller profylaktiske behandlingen av streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for eller infisert med streptokokkinfeksjon, som omfatter å administrere til nevnte dyr en terpeutisk eller profylaktisk mengde av sammensetningen.
46. Anvendelse av en vaksinesammensetning som angitt i et hvilket som helst av kravene 23 til 31 for produksjonen av en vaksine for den terapeutiske eller profylaktiske behandlingen av en streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for streptokokkinfeksjon, som omfatter å administrere til nevnte dyr en terpeutisk eller profylaktisk mengde av sammensetningen.
47. Anvendelse av en vaksinesammensetning som angitt i krav 32 for produksjonen av en vaksine for den terapeutiske eller profylaktiske behandlingen av streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for streptokokkinfeksjon, som omfatter å administrere til nevnte dyr en terpeutisk eller profylaktisk mengde av sammensetningen.
48. Anvendelse av en vaksinesammensetning som angitt i krav 33 for produksjonen av en vaksine for den terapeutiske eller profylaktiske behandlingen av streptokokkbakterieinfeksjon i et dyr som er følsomt for streptokokkinfeksjon, som omfatter å administrere til nevnte dyr en terpeutisk eller profylaktisk mengde av sammensetningen.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US7542598P | 1998-02-20 | 1998-02-20 | |
| PCT/CA1999/000114 WO1999042588A2 (en) | 1998-02-20 | 1999-02-17 | Group b streptococcus antigens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20101682L true NO20101682L (no) | 2000-10-19 |
Family
ID=22125658
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20004161A NO330491B1 (no) | 1998-02-20 | 2000-08-18 | Rekombinant polynukleotid som koder for et polypeptid, eller antigent fragment derav, som indusere en immunrespons som er spesifikk for gruppe B streptococcus, vektor omfattende polynukleotidet, vertscelle transfektert med vektoren, fremgangsmate for fremstilling av polypeptidet, isolert polypeptid, vaksinesammensetning som omfatter polypeptidet,anvendelse av polypeptid ifolge oppfinnelsen for fremstilling av en vaksinesammensetning, isolert antistoff, eller antigenbindende fragment derav, som spesifikt binder til polypeptidet, fremgangsmate for pavisning av gruppe B Streptococcus i en biologisk prove, fremgangsmate for pavisning av et antistoff som spesifikt binder til polypeptidet. |
| NO20101682A NO20101682L (no) | 1998-02-20 | 2010-11-30 | Gruppe B streptococcus antigener |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20004161A NO330491B1 (no) | 1998-02-20 | 2000-08-18 | Rekombinant polynukleotid som koder for et polypeptid, eller antigent fragment derav, som indusere en immunrespons som er spesifikk for gruppe B streptococcus, vektor omfattende polynukleotidet, vertscelle transfektert med vektoren, fremgangsmate for fremstilling av polypeptidet, isolert polypeptid, vaksinesammensetning som omfatter polypeptidet,anvendelse av polypeptid ifolge oppfinnelsen for fremstilling av en vaksinesammensetning, isolert antistoff, eller antigenbindende fragment derav, som spesifikt binder til polypeptidet, fremgangsmate for pavisning av gruppe B Streptococcus i en biologisk prove, fremgangsmate for pavisning av et antistoff som spesifikt binder til polypeptidet. |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20030031682A1 (no) |
| EP (3) | EP1757697A3 (no) |
| JP (2) | JP4637350B2 (no) |
| KR (1) | KR100771148B1 (no) |
| CN (2) | CN1268745C (no) |
| AP (1) | AP2000001886A0 (no) |
| AT (1) | ATE347600T1 (no) |
| AU (1) | AU2505999A (no) |
| CA (1) | CA2321106C (no) |
| CZ (1) | CZ301056B6 (no) |
| DE (1) | DE69934299T2 (no) |
| EA (1) | EA200000860A1 (no) |
| ES (2) | ES2540281T3 (no) |
| HU (1) | HU228497B1 (no) |
| ID (1) | ID27482A (no) |
| IL (3) | IL137921A0 (no) |
| NO (2) | NO330491B1 (no) |
| NZ (1) | NZ529854A (no) |
| OA (1) | OA11686A (no) |
| TR (1) | TR200002437T2 (no) |
| WO (1) | WO1999042588A2 (no) |
| ZA (1) | ZA991325B (no) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100771148B1 (ko) | 1998-02-20 | 2007-10-29 | 아이디 바이오메디칼 코포레이션 | 그룹 ｂ 스트렙토코커스 항원 |
| CA2337102A1 (en) * | 1998-07-27 | 2000-02-10 | Richard William Falla Le Page | Nucleic acids and proteins from group b streptococcus |
| US7098182B2 (en) | 1998-07-27 | 2006-08-29 | Microbial Technics Limited | Nucleic acids and proteins from group B streptococcus |
| US6890539B2 (en) | 1998-12-22 | 2005-05-10 | Microscience, Ltd. | Genes and proteins, and their use |
| GB0105922D0 (en) * | 2001-03-09 | 2001-04-25 | Microscience Ltd | Genes and proteins, and their use |
| WO2000037646A2 (en) | 1998-12-22 | 2000-06-29 | Microscience Limited | Group b streptococcus proteins, and their use |
| US7128918B1 (en) | 1998-12-23 | 2006-10-31 | Id Biomedical Corporation | Streptococcus antigens |
| WO2001014421A1 (en) * | 1999-08-25 | 2001-03-01 | Medimmune, Inc. | Homologs of a pneumococcal protein and fragments for vaccines |
| US6833356B1 (en) | 1999-08-25 | 2004-12-21 | Medimmune, Inc. | Pneumococcal protein homologs and fragments for vaccines |
| ES2273861T3 (es) * | 2000-06-12 | 2007-05-16 | University Of Saskatchewan | Inmunizacion de ganado vacuno lechero con proteina gapc frente a infecciones por streptococcus. |
| US6833134B2 (en) | 2000-06-12 | 2004-12-21 | University Of Saskacthewan | Immunization of dairy cattle with GapC protein against Streptococcus infection |
| EP1734050A3 (en) * | 2000-06-12 | 2012-12-05 | University Of Saskatchewan | Immunization of dairy cattle with GapC protein against streptococcus infection |
| US6866855B2 (en) | 2000-06-12 | 2005-03-15 | University Of Saskatchewan | Immunization of dairy cattle with GapC protein against Streptococcus infection |
| DK1294771T3 (da) | 2000-06-12 | 2008-12-15 | Univ Saskatchewan | Kimært GapC-protein fra Streptococcus og anvendelse deraf til vaccinering og diagnosticering |
| JP4102186B2 (ja) * | 2000-10-13 | 2008-06-18 | アイディー バイオメディカル コーポレイション | グループｂストレプトコッカスのｂｖｈ−ａ２及びｂｖｈ−ａ３抗原 |
| EP2189473A3 (en) | 2000-10-27 | 2010-08-11 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Nucleic and proteins from streptococcus groups A & B |
| AU2002216863B8 (en) * | 2000-12-21 | 2008-03-20 | Id Biomedical Corporation | Streptococcus pyogenes antigens and corresponding DNA fragments |
| FR2824074A1 (fr) * | 2001-04-26 | 2002-10-31 | Pasteur Institut | Sequence du genome streptococcus agalactiae, application au developpement de vaccins, d'outils de diagnostic, et a l'identification de cibles therapeutiques |
| ATE543906T1 (de) * | 2002-02-11 | 2012-02-15 | Id Biomedical Corp | Antigen von streptococcus aus der b-gruppe |
| GB0210128D0 (en) * | 2002-05-02 | 2002-06-12 | Chiron Spa | Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B |
| US7709009B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-05-04 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Srl | Immunogenic compositions for streptococcus pyogenes |
| US8945589B2 (en) | 2003-09-15 | 2015-02-03 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Srl | Immunogenic compositions for Streptococcus agalactiae |
| JP2008508320A (ja) | 2004-07-29 | 2008-03-21 | カイロン コーポレイション | Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｇａｌａｃｔｉａｅのようなグラム陽性細菌に対する免疫原性組成物 |
| WO2006042027A2 (en) | 2004-10-08 | 2006-04-20 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Immunogenic and therapeutic compositions for streptococcus pyogenes |
| WO2006086330A2 (en) * | 2005-02-08 | 2006-08-17 | Id Biomedical Corporation Of Quebec C.O.B. As Glaxosmithkline Biologicals North America | Pharmaceutical compositions |
| GB0605247D0 (en) * | 2006-03-15 | 2006-04-26 | Chiron Srl | Compositions and methods for immunisation |
| JP5653215B2 (ja) | 2007-09-12 | 2015-01-14 | ノバルティス アーゲー | Ｇａｓ５７変異体抗原およびｇａｓ５７抗体 |
| KR20160114196A (ko) | 2007-12-21 | 2016-10-04 | 노파르티스 아게 | 스트렙토라이신 ｏ의 돌연변이 형태 |
| CN102304185A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-01-04 | 黑龙江八一农垦大学 | 预防奶牛乳房炎的融合蛋白sip-trap及制备方法和应用 |
| EP2949340A1 (en) * | 2014-05-30 | 2015-12-02 | IDT Biologika GmbH | Vaccine composition against Streptococcus suis infection |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4425437A (en) | 1979-11-05 | 1984-01-10 | Genentech, Inc. | Microbial polypeptide expression vehicle |
| US4431739A (en) | 1979-11-05 | 1984-02-14 | Genentech, Inc. | Transformant bacterial culture capable of expressing heterologous protein |
| US5302386A (en) | 1986-04-16 | 1994-04-12 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Bacterial antigens, antibodies, vaccines and methods of manufacture |
| US5472696A (en) | 1988-02-26 | 1995-12-05 | Univ. Of Florida Research Foundation, Inc. | Antigen of group B streptococci |
| US5648241A (en) | 1989-09-15 | 1997-07-15 | The General Hospital Corporation | Conjugate vaccine against group B streptococcus |
| US5679768A (en) | 1991-02-15 | 1997-10-21 | Uab Research Foundation | Epitopic regions of pneumococcal surface protein A |
| US5225331A (en) | 1991-04-25 | 1993-07-06 | National Research Council Of Canada | Immunoassay for detecting group b streptococcus |
| SI0656014T1 (en) | 1993-03-19 | 2003-12-31 | Gunnar Lindahl | Protein rib, a cell surface protein that confers immunity to many strains of the group b streptococcus; process for purification of the protein, reagent kit and pharmaceutical composition |
| US5595740A (en) | 1994-05-16 | 1997-01-21 | University Of Florida | Cloning of non-IgA FC binding forms of the group B streptococcal beta antigens |
| CA2180261C (en) * | 1994-11-01 | 2003-03-18 | Aruto Yoshida | Peptide sequence that forms mucin sugar chain and technique for modifying protein to be linked with mucin sugar chain |
| DE69739981D1 (de) * | 1996-10-31 | 2010-10-14 | Human Genome Sciences Inc | Streptococcus pneumoniae-Antigene und Impfstoffe |
| KR100771148B1 (ko) * | 1998-02-20 | 2007-10-29 | 아이디 바이오메디칼 코포레이션 | 그룹 ｂ 스트렙토코커스 항원 |
| US6248329B1 (en) * | 1998-06-01 | 2001-06-19 | Ramaswamy Chandrashekar | Parasitic helminth cuticlin nucleic acid molecules and uses thereof |
| CA2337102A1 (en) | 1998-07-27 | 2000-02-10 | Richard William Falla Le Page | Nucleic acids and proteins from group b streptococcus |
| US6582706B1 (en) | 1998-12-21 | 2003-06-24 | Medimmune, Inc. | Vaccine compositions comprising Streptococcus pneumoniae polypeptides having selected structural MOTIFS |
| CA2356836C (en) | 1998-12-23 | 2011-09-13 | Shire Biochem Inc. | Novel streptococcus antigens |
| US7128918B1 (en) * | 1998-12-23 | 2006-10-31 | Id Biomedical Corporation | Streptococcus antigens |
| GB9921125D0 (en) | 1999-09-07 | 1999-11-10 | Microbial Technics Limited | Proteins |
| ATE543906T1 (de) | 2002-02-11 | 2012-02-15 | Id Biomedical Corp | Antigen von streptococcus aus der b-gruppe |
-
1999
- 1999-02-17 KR KR1020007009237A patent/KR100771148B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-17 CA CA2321106A patent/CA2321106C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-17 OA OA1200000228A patent/OA11686A/en unknown
- 1999-02-17 AU AU25059/99A patent/AU2505999A/en not_active Abandoned
- 1999-02-17 IL IL13792199A patent/IL137921A0/xx active IP Right Grant
- 1999-02-17 EP EP20060022306 patent/EP1757697A3/en not_active Withdrawn
- 1999-02-17 AP APAP/P/2000/001886A patent/AP2000001886A0/en unknown
- 1999-02-17 AT AT99904646T patent/ATE347600T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-17 CN CNB998052485A patent/CN1268745C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-17 EA EA200000860A patent/EA200000860A1/ru unknown
- 1999-02-17 EP EP99904646A patent/EP1054971B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-17 EP EP10180962.2A patent/EP2280072B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-17 TR TR2000/02437T patent/TR200002437T2/xx unknown
- 1999-02-17 WO PCT/CA1999/000114 patent/WO1999042588A2/en active Application Filing
- 1999-02-17 CZ CZ20003054A patent/CZ301056B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-02-17 HU HU0102304A patent/HU228497B1/hu unknown
- 1999-02-17 JP JP2000532528A patent/JP4637350B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-17 ES ES10180962.2T patent/ES2540281T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-17 ID IDW20001856A patent/ID27482A/id unknown
- 1999-02-17 ES ES99904646T patent/ES2278436T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-17 CN CNA2006100913640A patent/CN1944652A/zh active Pending
- 1999-02-17 DE DE69934299T patent/DE69934299T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-18 ZA ZA9901325A patent/ZA991325B/xx unknown
- 1999-02-18 US US09/252,088 patent/US20030031682A1/en active Pending
-
2000
- 2000-08-17 IL IL137921A patent/IL137921A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-08-18 NO NO20004161A patent/NO330491B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-01-13 US US10/340,792 patent/US7914794B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-28 NZ NZ529854A patent/NZ529854A/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-03-09 IL IL190018A patent/IL190018A/en not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-06-02 JP JP2009132976A patent/JP2009242403A/ja active Pending
-
2010
- 2010-11-30 NO NO20101682A patent/NO20101682L/no not_active Application Discontinuation
- 2010-12-28 US US12/980,172 patent/US8226953B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-07-16 US US13/550,363 patent/US8580262B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO20101682L (no) | Gruppe B streptococcus antigener | |
| EP2261358B1 (en) | Novel streptococcus antigen | |
| EP2281891A2 (en) | Streptococcus antigens | |
| AU2001270381A1 (en) | Streptococcus antigens | |
| US7074415B2 (en) | Streptococcus antigens | |
| AU2007200130B2 (en) | Group B Streptococcus Antigens | |
| AU2007202175B2 (en) | Group B Streptococcus Antigens | |
| EP1950302B1 (en) | Streptococcus antigens | |
| CA2424433A1 (en) | Bvh-a2 and bvh-a3 antigens of group b streptococcus | |
| MXPA00008111A (en) | Group b streptococcus antigens | |
| AU2007207883A1 (en) | Streptococcus antigens |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FC2A | Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application |