HU228497B1 - Group b steptococcus antigens - Google Patents

Description

A találmány tárgyát antigének, közelebbről B csoportba tartozó kórokozó streptococcusok protein-antigénjei, képezik, amelyek vakcinaösszetevőként gyógykezelési és/vagy iáé g e 1 ő zés 1 cé 1 r a a lkai ma z ha t ő k.

A. találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti. antigéneket kódoló és az azokkal hibrid.! zálő izolált poliniifcieotidok, a találmány szerinti polínukieotidókat tartalmazó vektorok és gazdasejtek, a találmány szerinti antigéneket tartalmazó vakcinák, eljárások a találmány szerinti antigének előállítására, valamint a találmány szerinti antigének alkalmazása sztreptocoocusos fertőzések megelőzésére és kezelésére.

A strepto-coeeusok. Gram-pozitiv baktériumok, amelyeket a sejtfelszinükön található, csoportspecifikus' szénhidrátantigének alapján A-tói O-ig terjedő csoportokba sorolnak. Ezek a csoportok, a baktériumok tipusspecifikus poliszáébarid burakantigénjel alapján tovább osztályozhatók, A S csoportba tartozó s-treptococcasok között a következő szerotípusok különíthetők el; la, Ib, II, III, IV, V, VI, VII és Vili. A S csoportba tartozó streptococcusok tartalma z n a k ” C - pr o t e í n * - ne k n eve z e 11, a n t i g énh a t-á s ú p ro t e i n e ke t (alfa, béta, gamma és delta) is, amelyek közöl néhányat már klónoztak.

Ak fa s z ámnnk í 92 38 4 -1.04 S / PA

1! áss’

z.

Bár a δ csoportba tartozó s-treptococcusok a természetes humán hüvely- és vastagbélflóra tagjai, régóta ismert, hogy új szülöttekben septikaemiát és agyburo-kgyulladást, csecsemőkben késői kialakulású agyburokgyulladást, szülés után mennyéikabáttya-gyulladást és tejelő szarvasmarhaállományokban tőgy-gyulladást okozhatnak. A B csoportba tartozó streptoeoccusoknak' kitett várandós anyákban szülés utáni fertőzések alakulhatnak ki és átadhatják a fertőzést, az újszülötteiknek is, ahogy azok áthaladnak a szúlőúfon. Bár a kórokozó érzékeny antibiotikumokkal szemben, az újszülöttekben kialakuló masszív fertőzés és a gyors lefolyású sept.ikaem.la valamint az agyburokgyulladás csecsemőkben jelentős arányú morbiditást és mortalitást okoz.

A. B csoportba tartozó streptococcusok ellen védőhatásű vakcina kifejlesztése érdekében kutatásokat folytattak a baktérium típusspecifikus antigénjeivel kapcsolatban. Sajnos kiderült azonban, hogy emberben ezek a poliszacharidok gyenge ímmunogenitás-úak és csak szerotipus-specifikus védőhatást biztosítanak. A burokét ed.e tű poliszacharid emellett T-ssjttől független, vagyis TgG- termel őssel nem járó immunválaszt okoz. Mindezek alapján a burokeredetű poliszacharid antigének nem alkalmasak a B csoportba tartozó streptococcusok elleni védelmet biztosító vakcina készítésére.

Más- kutatók hasonló célból a béta C-protein antigént kutatták, amely egér- és nyúlm.odel.le'kben. immunegén hatásúnak bizonyult. Ez a protein sem alkalmas azonban húsán vakcina készítésére, mivel nem-.immunogén módon, nagy affinitással reagál a humán IgA Fc-régiőjával. Az alfa C-protein antigén szintén ne® alkalmas vakcina készítésére, ugyanis ritkán fordul elő a B csoportba tartozó streptocoecusok okozta legtöbb megbetegedésért felelős Ili. szerotlpusban.

Mindezek alapján továbbra is fennáll az igény a S csoportba tartozó -streptocoecusok olyan antigénjeinek azonosítására, amelyek felhasználhatók az ilyen baktériumok okozta fertőzések megelőzésére vagy gyógykezelésére alkalmas vakcina előállítása során.

A találmány tárgyát egy, az alábbi szekvenciák bármelyikének vagy azok fragmenseinek, analógjainak vagy származékainak megfelelő második polipeptiddel legalább 70%-ban azonos polipeptidet kódoló izolált polinukleotid képezi: a 2. azonosítószámú szekvencia, a 3. azonosítószámú szekvencia, a 4. azonosítószámú szekvencia, az 5. azonosítószámú szekvencia, a 6. azonosítószámú szekvencia, a 8. azonosítószámú szekvencia, a 9. azonosítószámú szekvencia, a 10. azonos!tőszámú szekvencia, a 11. azonosítószámú szekvencia, a 12. azonosítószámú szekvencia,· a 14. azonosítószámú szekvencia, a 15. azonosítószámú szekvencia, a 16. azonosítószámú szekvencia, a 17. azonosítószámú szekvencia, a 13. azonosítószámú szekvencia, a 19. azonosítószámú szekvencia, a. 20. azonosítószámú szekvencia, a 21. azonosítószámú szekvencia, a 23. azonosítószámú szekvencia, a· 24. azonosítószámú szekvencia, a 25, azonosítószámú szekvencia, a 26, azonosítószámú szekvencia, a 28. azonosítószámú szekvencia, a 29. azonosítószámú szekvencia, a 30. azonosítószámú szekvencia, a 31. azonosító-számú szekvencia, a 33. azonosítószámú szekvencia, a 34. azonosítószámú szekvencia, a 35.

azonosítószámú szekvencia, a 36, azonosítószámú szekvencia, a 88. azonosítószámú szekvencia, a 39. azonosítószámú szekvencia, a 40. azonosítószámú szekvencia, a 41. azonosítószámú szekvencia és a 44. azonosítószámú szekvencia.

A találmány további megvalósítási módját képezik a találmány szerinti polínakleotídokat működőképes kapcsolatban express ziószabáivá zó régióhoz kötve tartalmazó vektorok', a vektorokkal transzfektált gazdasejtek, továbbá polipeptidek termelése a gazdasejtek expressziót lehetővé tevő körülmények között történő tenyésztésével.

A találmány egy további megvalósítási módja a találmány szerinti polinukleotidok által kódolt új polipeptídeket tartalmaz.

Az alábbiakban az ábrák rövid leírását közöljük.

Az la ábra az 1. klón DNS-szekvenciája (1. azonosítószámú szekvencia) a nyitott leolvasási kereteknek megfelelő ami no s a v-s zekvéneiákka i;

az	1b	ábra	a		a z okosi tós zámú	aminosav-	szekvencia;
az	1c	ábra	3	2.	a ionos ítész ámú.	aminosav-	szekvencia;
az	ld	ábra	3	4 .	a zo nosítész ámú	aminosav-	szekvencia;
az	le	ábra	a	c	. azonosítószámú	amrnosav	-szekvenci a;
az	If	3£λΤ·&	3	6 A	azonosí fős zámú	ΠΟ S 3 V “	szekvencia.

A 2a ábra a 2. klón DNS-saekvencíá ja s7. azonos!töszamú szekvencia) a nyitott leolvasási kereteknek megfelelő-

ami no	sav-:	szekvenciákkal;
a 2b	ábra	a	8. azonosítószámú	aminosav-szekvencia;
a 2c	ábra	a	9, azonosítószámú	aminosav-szekvencia;
a 2d	ábra	a	10. a z o.n o s í t ó s z ám	ü aminosav-szekvencia;

a 2e ábra a 11. azonosítószáraú arainosav-szekvencia;

a 2f ábra a 12. azonosítószámú arainosav-szekvencia.

A 3a ábra a 3. klón DNS-szekvenciája (13. azonosítószámú szekvencia) a nyitott leolvasási kereteknek megfelelő amínosav-szekveneiákkal;

3 b	ábra	a	14.	azono s1tő sz áraú	arainos av-s z ekvenc	.X Ü /
3 c	ábra	a	15.	a z ono s i. 16 s z áraú	arainos av-s z ekvéne	ia;
3d	abr a	a	161	azonos itős z áraú	arai nos av-s z e k ve nc	i a /
3e	ábra	a	1 7.	a z ono s í tó s z áraú	ara i no s a v - s z e k v en c	·{ cs * X. 4.X Z
3f	ábra	a	18.	a zonosítős z áraú	aminosav-s ze kvenc	‘i. a z
3g	ábra	a	19.	azonosítószámú	arainosav-s zekvenc	Ϊ- ’Cx z
3h	ábra	<X	20.	a zokosítós záraú	araino s av - s zekven c	J. <x z
31	ábra	a	21.	a z onos í tó s záraú	araino sav-szekvenc	ia.
	A 4a	a	bra	a 4. klón DNS-	•szekvenciája (22.	azonosító·

számú szekvencia) a nyitott .leolvasási kereteknek megfelelő arainosav-s zekvéneiákka1;

a	4b	ábra	a 23.	azonosít ő s záraú	arainosav-	székvénei a
a	4 c	ábra	a 24.	azono sí t ős záraú	aminosav-	szekvencia
a	4d	ábra	a 25.	a z o no s 11 ő s z árait	araino sav-	•szekvencia
a	4 a	ábra	a 2 6.	azonosítászáraú	srainosav-	szekvencia
		Az 5 a	ab r a	az 5. klón DNS-	- s zekvenc.i	ája (27. a

számú szekvencia) a nyitott leolvasási kereteknek megfelelő

aminosav-s:	ze)	'.ven	crakraa1/
		ábra	a	28.	azonosítö s z áraú	arainosav-	-szekvencia;
3.S	5e	ábra	<x	29.	azono sító s záraú	arainosav-·	-szekvencia;
3 £		ábra	a	30.	azonosítószámú	arainosav-	-szekvencia;
·Τ	5*3	ábra	<x	31.	a zonos í tő s s áraú	arainosav-	- s z e kv en c r a .

A 6 a ábra a 6. klón DKS-szekvenciája (32. azonosító-

t sze	Kven-cra};
ábra	a	33.	azonos!	tőszámú	amino sav- s z e kvencia;
ábra	a	34.	azonos!	tő-számú	amino s av- s z e kven o i a;
ábra	a	35.	azonos!	tőszámú	ami no s av-s z ekvenci a;
ábra	a	36.	azonos i	tőszámú	aminosav-szekvencia.
A 7a	£ V-s Η n	a 7. klón DNS:-.	szekvenciája (37. azonos!
i szekvencia);
ábra		38.	azonos1	tószámú	ami no s a v - s z e k ve nei. a;
ábra	&	39.	azonos!	tószámű	aminosav-szekvencia;
ábra	Cl	40.	azonos!	tószámú	amino sav~sz ek-vencia;
ábra	&	41.	azonos!	tószámú	aminosav-szekvenci a..
A 8	-	ábra	a 7. x	:lőn egy	részének szí gná 1 s z e kvenc.
ar f	og	la lő	DNS-szr	íkvenciá:	|a (42. azonosítószámú sz·
a) ?
A 9	A	ábra	a 7, k	:lőn egy	részének szignálézekvenc

se® tartalmazó DKS-szekvencíája (43. azonosítószámú szekvencia) ;

A 10 ábra a 32. azonosítószámú -szekvenciának megfelelő, rekombináns, B csoportba tartozó Streptococcbsproteinnei immunizált CD-I egerek szérumának B csoportba tartozói Streptococcos elleni ELISA-titereinek megoszlását mutatja be.

Az alábbiakban részletesen ismertetjük a. találmány szerinti megoldást.

A találmány tárgyát 3 csoportba tartozó strept-ococcusok új antigénhatású polípeptídjei képezik, amelyek megfelelnek az alábbi aminosav-szekvencíák bármelyikének vagy «♦ * azok £ragmenseinek, analógjainak vagy származékainak: a 2. azonos!, tó számú szekvencia, a 3,, azonosítószámú szekvencia, a 4. azonosítószámú szekvencia, az 5. azonosítószámú szekvencia# a 6. azonosítószámú szekvencia, a 8. azonosítószámú szekvencia# a 3. azonosítószámú szekvencia, a 10, azonosítószámú szekvencia, a XI. azonos! tó számú, szekvencia# a 12.

azonosítószámú szekvencia, a 14. azonosítószámú szekvencia, a IS. azonosítószámú szekvencia, a 16. azonosítószámú szekvencia# a 17. azonosítószámú, szekvencia, a 18. azonosítószámú szekvencia, a 19. azonosítószámú szekvencia# a 20. azonosítószámú szekvencia# a 21. azonosítószámú szekvencia, a 23. azonosítószámú szekvencia, a 24. azonosítószámú szekvencia, a 25. azonosítószámú szekvencia, a 26. azonosítószámú szekvencia, a 28. azonosítószámú szekvencia, a 29.

azonosítószámú szekvencia, a 30. azonosítószámú szekvencia, a 31, azonosítószámú szekvencia, a 33. azonosítószámú szekvencia# a 34. azonosítószámú szekvencia# a 35. azonosítószámú szekvencia, a 36. azonosítószámú szekvencia, a 38. azonosító-számú szekvencia, a 39. azonosítószámú szekvencia, a 40. azonosítószámú szekvencia, a 41. azonosítószámú szekvencia és a 44. azonos!tószámú szekvencia.

A találmány egy előnyös megvalósítási módja a 39. és a

44. azonosítószámú szekvenciákat tartalmazza.»

A találmány egy további előnyös megvalósítási módja a 39. azonosítószámú szekvencia.

A találmány egy további előnyös megvalósítási, módja a

44. azonosítószámú szekvencia

A találmány szerinti polípeptidek fragmensei, “származékai** és “analógjai” alatt a leírásban olyan természetes vagy mesterséges polipeptideket értőnk, amelyekben az amínosavak közül egyet vagy többet konzervált vagy nem-konzervált (előnyösen konzervált) amínosavval sz-ubsztituáltunk.

A találmány szerinti, pűiipeptídek ”.fragmensei”, származékai és “analógjai'** kifejezések alatt azokat a polipeptideket is értjük, amelyek aminosavaít addtolóval, delécíőval vagy szubsztitúcióval megváltoztattuk, abban az esetben, ha ezek a polipeptidek megtartották immunválasztkiváltó képességúkét.

“Konzervált aminosav* kifejezés alatt egy vagy több aminosav más amínosavval történt olyan szubsztitúció -ját értjük, amely ellenére egy adott antigén antigénhatást meghatározó szerkezete (ideértve: annak másodlagos szerkezetét és hidropátiás természetét) teljes mértékben vagy részben változatlan (konzervált.) marad.

A szekvenciában például egy vagy több aminosav azonos polaritásé, így funkcionálisan egyenértékű., néma változást előidéző más amínosavval szubsztítuálható. Egy adott aminosav szekvencíabeli szubsztituensel az aminosavát magát is tartalmazó· aminosav-csoportfoól választhatók ki. Például, a nem-poláris (hidrofób) aminosavak közé tartozik az alanin, a leucín, az izoleucin, a ralin, a prolin, a feni!alanin, a triptofán és a metionin. Poláris, neutrális aminosavak a giicin, a .szerín, a treonin, a císztin, a tirozin, az aszparagin és a glutamin. Pozitív töltésű (bázikus) aminosavak ¹ φφ

Φα ν az arginin, a lizin és a hisztiéin, Negatív töltésű (savas) aminosavak az aszparaginsav és a glutaminsav.

A találmány szerinti polipeptidek származékai és analógjai előnyösen, kb. 70%-foan megegyeznek az ábrákon bemutatott szekvenciákkal, vagy azok fragmenseivel♦ Ez azt jelenti, hogy bennük az aminosavak 70%-a megegyezik. Előnyösebben, a polipeptidek 95% feletti homológiát mutatnak.. A. találmány egy további előnyös megvalósítási módjában a találmány szerinti polipeptidek származékai és analógjai kevesebb, mint 20 aminosav-szubsztltúciót., -módosítást vagy deléciö-t tartalmaznak, még előnyösebben ezek száma 10 alatti. Előnyösek a szakember számára konzerváltként ismert szubsztitúciók, vagyis azok, amelyekben a szufosztituált aminosavak fizikai, kémiai tulajdonságaikban, így hi.droföbitásukbsn, méretükben, töltésükben vagy funkciós csoportjaikban megegyeznek.

Mindemellett polimorf aminosavrégiók esetében a B csoportba tartozó különböző át.reptocoocos-törzsek különféle epitöpjainak jobb utáuozhatósága érdekében előnyös lehet egy vagy több meghatározott aminosav megváltoztatása.

A találmány tárgyát képezik a biológiai vagy gyógyászati tulajdonságaik megváltoztatása érdekében egyéb vegyületekkel fuzionált polipeptidek is. Ilyen vegyületek lehetnek a felezési idő meghosszabbítása érdekében alkalmazott poiíetiién-giikol (PEGi, a tisztítás megkönnyítése érdekében igénybevett vezető vagy szekréciós- aminosav-szekvenciák, a prepro- és pro- szekvenciák és a (poii) sza.ch.aridok.

.10

A találmány szerinti polipeptidek mindezeken tál a hordozó vagy egyéb- molekulához történő kötődésükhöz vagy kapcsolódásukhoz szükséges stabilitás vagy megnövelt hídrofóbltás érdekében terminális -NH? acilezés-se.1 is- módosíthatók (így többek között acetálalással, tioglikolsavas amzoáxas sa r, és ρζ . ammóniával vagy matiiaminnal végzett t e.r miná 11.s karbox.i - ami dá 1 ás sa 1} .

A találmány tárgyát képezik a polípeptíd fragmensek, -analógok és -származékok polípeptíd hetero- és homo multimerei is . A polimer formák többek között egy vagy több, keresztkötő anyagokkal, pl. avídinnal/biotinnal, glutáraldehíddel vagy dlmetil-szuperimidáttal keresztkötött polipeptídet is magukba foglalnak. A polimerek magukban foglalnak két vagy több, múlticisztronos mRNS-ből rekombináns DNStechnológiával előállított tandem vagy inverz szomszédos szekvenciát. Előnyösen, a találmány szerinti po-lipeptid fragmen.se, analógja vagy származéka legalább egy antigénhatású régiót, vagyis legalább egy epitőpot tartalmaz.

Az antigénhatású polimerek (szintetikus xnultimerek) előállátása érdekében biszhaicacetil-csoportot tartalmazó polipeptidek, nitro-arilhaiidök és hasonló vegyuletek alkalmazhatók, ahol a reagensek tíocsoport-specifiknsak. Ennélfogva a különböző peptidek két merkaptocsoportj-a közötti kapcsolat lehat egyszeres kötés vagy állhat legalább két, tipikusan legalább négy, azonban nem több mint 16, és általában nem több mint 14 szénatomot tartalmazó kötocsoportbél.

vau v cvors

A találmány egy bizonyos jsegvalősltási módjában a találmány szerinti polipeptid fragmensek, -analógok és származékok nem tartalmaznak kezdő metionint (Met) , Előnyösen, a polipeptidek nem tartalmaznak vezető vagy szekréciós szekvenciát fssignáiazekvenciát) . A találmány szerinti polipeptid szignálszekvenciája ismert molekuláris biológiai eljárások alkalmazásával határozható- meg. Általánosságban, a kérdéses polipeptid B csoportba tartozó Streptococcus tenyészetéből izolálható, majd az érett protein kezdő aminosavának és ezáltal az érett polipeptid szekvenciájának meghatározása érdekében szekvenálható.

Más szempontból a találmány tárgyát vakcinakészítményék képezik, amelyek a találmány szerinti, B csoportba tartozó Streptococcus: polipeptídek közül egyet vagy többet gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggai vagy adjuvánssai együtt tartalmaznak.

Megfelelő adjuvánsok az olajok, pl. a Freund-féle komplett vagy ínkomplett adjuváns; a sók, mint pl. az A1K csoda, az AlOaCSOJ^, az AlNHUSCkb, 32 Al (OH) ₃, az AIFÖ4, a szilícium, a kaolin; a szaponin-száríaazékok; a szén-polinukleotidok pl. a poii IC és a poii Ad, valamint a detoxifikált koleratoxin CCTB) és az £. coli hőérzékeny toxin a nyálkahártya-immunitás induk.áiása érdekében. Az előnyösen alkalmazható adjuvánsok közé tartozik a QuilA™, az ”AIhydrogel^íH és az ”Adjuphos^fMK. A találmány tárgyát képező vakcinák beadhatók patentéraHsán injekciós úton infúzióban, és abszorbeáiódhatnak az. orrΉ* ** ΦΧ φφ * garatüreg- és a száj nyálkahártyáján át vagy a bőrön keresztül .

A találmány tárgyát képező vakcinakészítmények strepto-coccusok - különösen az A csoportba tartósa sfcreptococcusok (5. pyccenes), a B csoportba tartozó streptococcusok (S, agalactíae) , a 5. dysgalactiae, a 5. uheris, a Nocardia spp. és a Stapnylocoocac aureas okozta fertőzések és/vagy a Streptococcus-fertőzések által kiváltott megbetegedések és tünetek kezelésére vagy megelőzésére alkalmazhatok, A streptö-coccusokkal kapcsolatban általános információ szerezhető a következő forrásból: P. R, Murray és latsai. : Manual of Clinical Microbiology, 6. kiadás, kiad·.; ASM Press, Washington, Ώ, C. (11195) . A találmány szerinti megoldás különösen alkalmas a 8 csoportba tartozó ütreptoooo'oüs agalactiae által kiváltott betegségek kezelésére és megelőzésére, A. találmány egy további megvalósítási módjában a vakcinákat a B csoportba tartozó streptococcusok kiváltotta fertőzés veszélyének kitett személyeknél alkalmazzuk, igy terhes anyáknál és csecsemőknél a septikaemia, az agyburokgyulladás és a tüdőgyulladás megelőzésére, valamint a díabetes, májbetegség vagy daganatos megbetegedés miatt csökkent védekezőképességű személyeknél. A vakcinák állatorvosi alkalmazást is nyerhetnek', pl. szarvasmarhában a fentebb említett baktériumok és az K, coli által kiváltott togygyuliadás terápiája során.

A találmány szerinti vakcina .streptococcusok - küiönősen az A csoportba tartozó streptococcusok (S. pyogenesj, a B csoportba tartozó streptococcusok (5. agaiactíae), a 5,

-5 -3:

φ φ

ΦΑ· V φ ;ns, a Aocardia spp.

SS <Á iaysgai ocdásStaphy2ooo-ce.tfs aureas - okozta fertőzések és/vagy a otreptococcüs-fertőzések által kiváltott megbetegedések és tünetek késelésére vagy megelőzésére alkalmas gyógyszer előállítására is ígénybevehető. A fentiek kiváltképp érvényesek a B cs-oportba tartozó Streptococcns agaiactáae-ra.

A vakcínakészltmények előnyösen kb. 0,00.1-100 Dg/kg, előnyösebben 0,01-10 Dg/kg és legelőnyösebben 0,1-1 Dg/'kg (antigén./ testtömeg) egységet tartalmasnak, beadásukra 1-3 alkalommal kerül sor, az egyes immunizálások között 1-12 bét, előnyösebben 1-6 hét időközzel.

Más szempontból, a találmány tárgyát B csoportba tartozó strepfcococcusok polipeptidjeit kódoló polinukieotidok képezik, amely polípeptidek amlnosav-szekvenciája megfelel az alábbi csoportba tartozó szekvenciák bármelyikének, vagy azok fragmenseinek, analógjainak vagy származékainak: a 2. azonositószámú szekvencia, a 3. azonosítószámú szekvencia, a 4. azonosítószámú szekvencia, az 5. azonosítószámú szekvencia, a 6. azonosítószámú szekvencia, a 8, azonosítószámú szekvencia, a 9. azonosítószámú szekvencia .0.

ositó-számú szekvencia, a 11. azonosítószámú szekvencia, a 12.

azonosítószámú szekvencia, a 14. azonosítószámú szekvencia, a 15. azonosítószámú szekvencia, a 16. azonosítószámú szekvencia, a 17. azonosítószámú szekvencia, a 18. azonosítószámú szekvencia, a 19. azonosítószámú szekvencia, a ,20.

azonosítószámú szekvencia, a 21. azonosítószámú szekvencia, a 23. azonos!tószámú szekvencia, a 24. azonosítószámú szekvencia, a 25. azonosítószámú szekvencia, a 26.. azonosító14 számú szekvencia, a 28. azonosítószámú szekvencia, a 23. azonos!tőszá.m.u szekvencia, a 30. azonosítószámú szekvencia, a 31« azonosítószámú szekvencia, a 33. azonosítószámú szekvencia, a 34. azonos!tószámú szekvencia-, a 35. azonosítószámú szekvencia, a 36. azonosítószámú szekvencia, a 38.

azonosítószámú, .szekvencia,- a 39» azonosítószámú szekvencia, a 40. azonosítószámú szekvencia, a 41. azonosítószámú szekvencia és a 44. azonosítószámú szekvencia.

Előnyösek as la ábrán (1. azonosítószámú szekvencia), a 2a ábrán (7. azonosítószámú szekvencia), a 3'a ábrán (13. azonosítószámú szekvencia), a 4a ábrán (22. azonosítószámú szekvencia), az 5a ábrán (27. azonosítószámú szekvencia), a 6a ábrán (32 . azonosítószámú szekvencia) , a 7a ábrán (37, azonosítószámú szekvencia), a 8. ábrán -(42. azonosítószámú szekvencia) és a 9, ábrán (43. azonosítószámú szekvencia) bemutatott polinukleotidok,· amelyek a. találmány tárgyát képező poTipeptídeket kódoló nyitott leolvasási kereteknek felelnek meg.

Előnyösek az la ábrán (1. azonosítószámú szekvencia), a 2a ábrán (7. azonos 1 tó-számú szekvencia), a 3a ábrán (13. azonosítószámú szekvencia), a 4a ábrán (22. azonosítószámú szekvencia), az 5a ábrán (27. azonosítószámú szekvencia), a 6a ábrán (32. azonosítószámú szekvencia), a 7a ábrán (37. azonosító-számú szekvencia), a 8. ábrán (42. azonosítószámú szekvencia) és a 9. ábrán (431 azonosítószámú szekvencia) bemutatott polinukleotidok, valamint azok fragmensei, analógjai és származékai..

*Φ *

A találmány szerinti polinukleotido.k közül előnyösebbek a ?a ábrán (37, azonosítószámú szekvencia), a 8. ábrán (42. azonosítószámú szekvencia) és a 9. ábrán (43, azonosítószámú szekvencia) bemutatottak,

A találmány szerinti polínukleotidok közül legelőnyösebbek a 8. ábrán (42. azonosítószámú szekvencia) és a 9, ábrán (43. azonosítószámú szekvencia) bemutatottak.

Az ábrákon bemutatott polinukleotid-szekvenciák de generált kodon© fcfcal történd megváltoztatásukat követően változatlanul a találmány szerinti poiipeptideket kódolják.

A nukleotid kódszekvenciák degeneráltságának köszönnetőén a találmány szerintiekkel alapvetően azonos polipeptidekát kódoló egyéb polinukleotid-szekvenciák is felhasználhatók a találmány gyakorlatba vétele során. Ilyenek többek, között, de nem kizárólag a szekvencián beiül ugyanazon, aminosavat kódoló különböző kodonok szubsztitúciójával megváltoztatott (néma változáson átesett) nukleotidszekvenciák.

Mindezeknek megfelelően a találmány tárgyát képezik továbbá a fentiekben leírt polínukleotídokkal híbridizálö polínukleotidok (vagyis azok komplementer szekvenciái), amelyek 50, de előnyösen legalább 70%-os szekvencia-azonossággal rendelkeznek. Még előnyösebben, a poiinukieo tudok sztringens körülmények között, vagyis legalább üSé-os azonosság esetén, legelőnyösebben pedig 97%-os azonosság felett hibridizáinak.

A sztringens körülmények között történő hibridisálás azt jelenti, hogy egy nukieinsav-molekula egy második nukleinsav-moiekula (legyen as cDNS., mRS vagy genom 1 DNS) leο** <

16' ♦ * # «

Í * **« * *. * i « blokk ligalássa!) galább egy szakaszához vagy komplementer szálához olyan standard körülmények között képes kapcsolódni (magas hőmérsékleten és/vagy alacsony sőkoncentráció mellett), amelyek általában megakadályozzák a nem komplementer nukleotidszekvenciák hibrid!zálódását. Az ennek megfelelő protokoll megtalálható Mániát Is, T. és másai.: Moiecular Cioning: A Laboratory Kannal’*, kiad. : Cold Spríng Hartoor Laboratory (1982) c. munkájában, amelynek tartalma a kitanítás részét képezi.

.Egy további szempontból, a találmány szerinti polipeptídeket kódoló polinukleotidok, vagy azok fragmensei, analógjai vagy származékai DNS-immun!zárási eljárásban alkalmazhatók. Ez azt jelenti, hogy injekciós úton beadva replikádéra és expresszióra, Így az antigénhatású polipeptid in vivő termelésére képes vektorba foglalhatók. Például, a pollnukleotid eukaryota sejtekben működőképes CKV promofcer ellenőrzése alatt plazmád vektorba foglalható. A vektor beadása előnyösen intramuscularis injektálással történhet.

Egy további szempontból a találmány tárgyát képezi a találmány tárgyát képező po-lipeptidek rekombináns technikával történő előállítása, amelynek során a polipeptidet kódoló polinukleotidot gaz-d.ase.j fcben exprasszáljuk majd kinyerjük az expresszió eredményeként képződött polipeptid terméket. Alternatív módon, a polipeptidek ismert szintetikus kémiai technikákkal, pl. folyadék- vagy szilárd fázisú oligopeptid-szintézissel, majd a teljes hosszúságú polipeptid nyerése érdekében az olígopeptidek ligálásáva.l (ún. is előállithatók.

* Λ

X «

A p-olípeptidek rekombináns úton történő termelése során gazdasejtekel a polipeptidet kódoló vektorokkal transzferálunk, majd azokat a promoterek aktiválása, a frászformánsok. szelekciója vagy a génamplifikáciő érdekében megfelelően módosított tápközegben tenyésztjük, Erre az eljárásra azok a vektorok feleinek meg, amelyek a kiválasztott gazdában túlélésre és repiíRációra képesek és kromoszómáira, nem-kromoszómáiis és szintetikus DNS-szekvenciákat tartalmaznak, mint pl. a bakteriális piazmidok, a rág-DNS, a bakulovírus, az. élesztőplazmidok és a piazmidok és fág-DNS kombinációiból kialakított vektorok. A polipeptid-szekvencia restrikciós enzimek segítségévei inkorporáiható a vektor megfelelő helyére, úgy, hogy működőképes kapcsolatban legyen egy promoterf, riboszóma-kötőbelyet {.konszenzus régiót vagy ”Shi.ne~Dalgarno’^f szekvenciát) és igény szerint operátort {szabályozóelemet) tartalmazó expressziészabályozó régióval. Az ismert molekuláris biológiai alapelvek figyelembevételéveX kiválaszthatók az expres-sziószabályoző régió adott gazda és vektor esetében -megfelelő egyedi összetevői [-Sambro-ok és mtsai.: Molecular Clo-ning: A Laboratory Manuai”, 2, kiadás, -Co.ld Spring Harbor, N, Y. (1989), a kitanítás részét képezi]. Megfelelő promoterek többek között az 1TR vagy SV4G promoter, az coli lac, tac vagy trp promoterei és a lambda-fág P.·, promotere. A vektorok előnyösen replikácíó-s kezdőhely- és szelekciós markereket (pl. ampiciilinrezisztencía-gént) tartalmaznak. Megfelelő bakteriális vektorok például a pET, a pQ.E70, a pQE60, a pQE-9, a pbs, a pDIO *phagescripta p.siX174, a ~ 18 ^M'pb.luescripfc .SK”, a phsks, a pNH8&, a pNKlSa, a pNHISA, a pNH46A, a ptrc99a, a pKK223~3, a pKK233-3, a pDRS4ö, a pRITS, megfelelő aukaryota vektorok a pSlueBacIII, a pWLNEO, a pSVzCAT, a pOG44_f a pXTl, a pSG, a pSVK3, a pBFV, a pMSG és a pSVL. A ga.2da.sejt lehet baktérium, pl. £1 coli, Beciilus subf.ílis, Streptomyces; gomba, pl. AapergilJus ni per, Aspergillus nldulins; élesztőgomba, pl. Saccharomyces, vagy eukaryota sejt, pl. CHO vagy COS.

A polipeptid tenyészetben történő expressziőját követően a sejteket általában centrifugálá.ssál begyújtjuk, majd fizikai vagy kémiai eljárással roncsoljuk (ha a.z expr-eszszált polipeptid nem választódik ki a tápközegbe}, majd a kapott nyers· kivonatból történik a kérdéses polipeptid Izolálása. A polipeptid tápközegből vagy ii.zá tűmből. történő kitisztítása a polipeptid tulajdonságainak függvényében, ismert eljárásokkal történhet, így ammóniám-szulfát- vagy étából pr-ecipítációval, savas kivonással, anion- vagy k.ationcserélδ kromatográfiával, foszfoceliulóz-kromatográfiával, hiörofőb kölcsönhatáson, alapuló kromatográ fiával, hidroxilapatit-kromat gráfiával vagy lektin-kromatogréf iával. A polipeptid végső tisztítása HPLC-vel végezhető el.

A polipeptid vezető- vagy szekréciós szekvenciával vagy anélkül egyaránt expresszáiható. Az előbbi esetben a vezetőszekvencía poszt-transzlációs feldolgozással távolítható el (id. a kitanítás részét képező 443173.9, 4425437 és 4338397 számú Amerikai Egyesült államokbeli szabadalmi iratokat) .

- 1.9

Egy további szempontból a találmány szerinti 8 csoportba tartozó Streptococcus polípeptidek Streptococcnsf-ertőzés# közelebbről S csoportba tartozó streptococcusok okozta fertőzés kimutatására alkalmas diagnosztikai teszt előállítására is igénybevebetők. Erre számos diagnosztikai eljárás alkalmazható# pl. streptococcusok biológiai mintából történő kimutatása a következő lépéseken keresztül, történhet i &} egy pácienstől biológiai mintát nyerünk# b? a találmány szerinti, 8 csoportba tartozó Sfcrepfcococcus polípeptiödel reagáló ellenanyaggal vagy annak fragmensével összekeverve Inkubáljuk a biológiai mintát#

c) a keverékben kimutatjuk az ellenanyag vagy fragmens specifikus kötődését, ami Streptococcns jelenlétére utal.

Alternatív módon# egy Streptococcus antigénre specifikus ellenanyagot, 'tartalmazó# vagy gyaníthatóan tartalmazó biológiai mintából az ellenanyag kimutatása a következőkénpen tórténh et:

a) egy pácienstől biológiai mintát nyerünk, hí egy vagy több, találmány -szerinti# B csoportba tartozó Streptococcns polipeptiddel vagy fragmensükkel összekeverve inkubáljuk a biológiai mintát#

c) a keverékben kimutatjuk a specifikusan kötődött ellenanyagot vagy fragmenst, ami Streptococcus elleni ellenanyag jelenlétére utal.

Szakember számára nyilvánvaló, hogy az említett diagnosztikai tesztnek számos változata képzelhető el, így lehet immunológiai teszt, mint pl. az enzimkapcsolt immunészorbens vizsgálati eljárás 5 ”'enzyme-linked immunosorbent assay, EL1SA”), a rádióimmun vizsgálati eljárás , vagy a lafcex agglutinációs vizsgálati eljárás, amelyek alapvetően annak eldöntésére szolgálnak, hogy az adott proteinre specifikus ellenanyagok jelen vannak-e egy szervezetben.

A találmány szerinti polipeptideket kódoló DNSszekvenciák streptococcusok (azokat gyaníthatóan tartalmazó biológiai mintában való) jelenlétének kimutatására alkalmas próbák készítésére is igénybevehetők< A találmány szerinti kimutatási eljárás a kővetkező· lépésekből áll:

a) egy pácienstől biológiai mintát nyerünk,

b) egy vagy több, találmány szerinti polipeptidet vagy fragmensét kódoló DNS-szekvenciát tartalmazó· DNSpróbával összekeverve inkubáljuk a. biológiai mintát,

c) a keverékben kimutatjuk a specifikusan kötődött

DNS-prőbát, ami Streptovzoccus baktériumok jelenlétére utal <

A találmány szerinti DNS-próbák például polimerázláncreakcióban, alkalmazva, a vérkeringésben levő streptococcusoknak, vagyis a B csoportba tartozó otreptococousok nukleinsavarnak egy mintából történő kimutatására, azaz S1 r ep t ococ c u s- £ e r t ő zések, dl a gnos z t i z ál á s á r a i s a 1 ka 1 ma s a k. A próba ismert eljárásokkal állítható elő, szilárd hordozófelülethez rögzíthető vagy kimutatást lehetővé tevő módon jelölhető. Az ebben, az eljárásban előnyösen alkalmazható <

« * « próba olyan oligomer, amelynek szekvenciája a találmány .szerinti B csoportba tartozó S terep tcooccíu; polípeptideket kódoló .nukleinsav legalább hat egymást követő nukleotiájával komplementer szekvenciával rendelkezik.

Egy további, Stx'eptococcus egy betegből történő kimutatására alkalmas diagnosztikai eljárás a következőképpen valósitható meg:

a) egy, a találmány szerinti p-olipeptiddel reagáló ellenanyagot vagy annak fragmensét kimutatható jelölőanyaggal látjuk -el,

b) a betegnek beadjuk a jelölt ellenanyagot vagy fragmenst,

c) a betegben kimutatjuk a jelzett ellenanyag vagy jelzett fragmens specifikus kötődését, ami Streptococcus jelenlétére utal.

A találmány egy további megvalósítási, módját jelenti a találmány szerinti, B csoportba tartozó Streptoccccus polipeptidek Strepto-coccus-.fertőzések diagnosztizálására és különösen azok gyógykezelésére alkalmas specifikus ellenanyagok termelése céljából immunogénként történő felhasználása. Az alkalmazható ellenanyagok azonosítására megfelelő szkríneiési eljárások vehetők igénybe, ilyen pl. egy adott ellenanyag által Streptococcas-fertőzéssel szemben biztosított passzív védelem mértékének teszt modellben történő megállapítása. Az ilyen állati modellre példa az egérmodéi 1, amelynek leírását a példák tartalmazzák. Az ellenanyag teljes ellenanyag vagy annak antigénkötő fragmense egyaránt lehet, és általában bármely iwunglob'úlín-osztály22 hoz tartozhat. Az ellenanyag vagy fragmens állati, közelebbről emlős, még közelebbről patkány, egér vagy humán eredetű lehet. Lehet természetes ellenanyag vagy annak fragmense, de igény szerint rekombináns ellenanyag vagy ellenanyag-fragmens is. A rekombináns ellenanyag vagy ellenanyag- fragmens” kifejezés alatt molekuláris biológiai eljárásokkal előállított ellenanyagot vagy ellenanyag-fragmenst értünk. Az ellenanyag vagy eXlenanyag-fragmens poliklonális, vagy előnyösen monoklonálís. Specifikus lehet a B csoportba tartozó Strsptococccs polipeptidek epitopjai közül többre, vagy előnyösen, azok közül csupán egyre.

1, példa

B csoportba tartozó Sfcrepfcococcus okolta letálía fertőzés

A B csoportba tartozó Stroptococcus okozta fertőzés egérmödellget részletéiben Lancefleld és mtsai. (Lancefleld tawa, Kanada)

tték.	A B
íos h	>eteg
:tett	ki Ι-
:ario,	ΟΙ·.-
ifcer
ealth	fór

Northern Alberta, Bdmonton, Kanada) Streptococcos baktériumtörzsek a szerotipizálás során az la/c valamint a Il/R szerotípusba tartozónak bizonyultak. Virulencíájuk növelése érdekében a B csoportba tartozó C388/90~es (la/c szerotípusó) és NCS24.6-OS (II/R szerotipusü) Streptococcus-törzseket egérben sorozat-pa-sszálfuk [Lancefi.eld és mtsai.: J. Exp. Med. 142, 165 (1975) ] . Röviden, a törzsek virulenciaj áriak fokozódását a fertőzött egerek véréből vagy Ι-épéből kinyert baktériumok Todd-Hewitt leves tenyészetének sorozathígífásaival végzett intraperítoneal.is injektálással ellenőriztük. Az utolsó passzálás után a fertőzött vérmintákkal ToddHewitt levest inokuláitnnk. 7%-os C-0₂ közegben 3?°C-on 2 órán át tartó inkubálást követően 10 térfogatszázalék végső koncentrációban glicerint adtunk a tenyészethez.. A tenyészetet ezután egyenlő részletekben lefagyasztottuk és B cs opo r t b a tartó zó 61 rep- t ococ c v s- f er tő z é s i k í s é r 1 e t e kben történő felhasználás céljára -80*Οση tároltuk. Megállapítottuk a fagyasztott mintákban jelenlévő, B csoportba tartozó streptocöccusok telepképző egységeinek (colony forming unit’*, cfu) számát. A 18 hetes egerek 100%-ának elpusztításához szükséges baktériumkoncentráció (LD100) a C3S8/9ö-es törzs esetében 8,5x10% a NCS246-os törzs esetében Ι,ΙχΙΟ³ volt, ami mindkét törzsnél a virulencia jelentős mértékű fokozódására utalt. Az ezeknél a törzseknél a passzáíásuk előtt megállapított LDISO-érték ugyanis 10 cfu feletti volt.

A. baktériumfertőzéses kísérletek során egy B csoportba tartozó virulens Sfreptococcus törzs frissen kiolvasztott mintáját Todd-Bewitt levessel megfelelő haktériumkoneenfcráeiőjúra állítottuk be és a tenyészet 1.-1 ml-ét intraperitonealisan nőivarú CD-I egerekbe fecskendeztük. A passzív védettséggel kapcsolatos kísérletekben alkalmazott egerek a fertőzés időpont j-ában 6-8 hetesek, míg az aktív védettséget vizsgáló- kísérletekben használtak ekkor körülbelül 18 hetesek voltak. A beadott anyagok, baktériumszámát telepszámlálássa! igazoltak. Az állatokat a fertőzés bármely megnyilvánulási formájának észlelése érdekében a fertőzésüket követő első 4 8 órában naponta négyszer, majd a következő 12 napon, napi egyszer figyeltük meg. Ezután a túlélő egerekből vérmintákat vettünk, amelyeket ~20°C~on fagyasztva tároltunk. A .megfigyelési periódust túlélő egerekből eltávolított lépe.kfoől a B csoportba tartozó streptococcusok kimutatása érdekében bakteriológiai vizsgálatot végeztünk.

2, példa

Egerek, iKgaunízálása és védetté tétele formaldehid-oldattal elölt, teljes, B csoportba tartozó Etraptooocous sejtekkel

A formaldehid-oldattal elölt, teljes, B csoportba tartozó Btreptococcus sejteket Lancefíeld. és mts-a-i. eljárása szerint állítottuk elő [L-anóefield -és mts-ai.: J. Exp. Med. 142, 165 (1975}]. Röviden, B csoportba tartozó

Streptococcu-s juhvért tartalmazó agar lemezeken (Qu-eláb Laboratories, Montreal, Kanada) egy éjszakán át tenyésztett törzsét foszfát-pufferőit sóoldatban (“phosphate hufféred saline, BBS, pH ~ 7,2} kétszer mostuk, kb. 3x1 (P cfu/ml koncentrációjóra állítottuk be, majd 0,3 térfogatszázalék formaldehidet tartalmazó BSS-ben egy éjszakán át inkuhálfcuk. Az elölt, B csoportba tartozó streptococcuso-kat tartalmazó .szuszpenziót. ezután PBS-ben mostuk, majd további félhasználásig -80°C-on tároltuk.

őFöivarú	CD-I eger	eket (Cheri e;
Qu ébec, Kanada	1 formaldehiddel elölt
ml-ével (-6x10	' baktérium	ti} , a kontrol
dig BB-S 0,1	ml-ével.	két hetes
szubkután olto	ttunk. Az	immunizálást
0,14 mg vagy 0,21	ísg végső
'’Alhydrogel™'’ -	t (Superfos Biosector,

adtunk a fenti készítményekhez, majd rázás közben 4°C~on egy éjszakán át ínkubáituk azokat. Az immunizálás megkezdése előtt és annak vége után két héttel minden egyes egértől szérummintát nyertünk, majd azt -20^&C-on tároltuk.

A harmadik injekció után egy héttel a PBS-sel. oltott kontroll csoportokból és a S csoportba tartozó C388/90-es {la/c szerotipusü) Streptococcus törzs formaldehid-oldattal elölt sejtjeivel immunizált csoportból egyaránt 8-8 állatot B csoportba tartozó C388/9ó-es (la/c szerotípusú) Streptococcus törzs l,5x!0·⁴ cfu mennyiségével fertőztünk. A homológ fertőzést a formaldehid-oldattal elölt baktériumsejtekkel immunizált egerek mindegyike túlélte, iáig 5 nappal a fertőzést követően a BBS-t kapott egerek közül csupán 4 maradt életben. A kontroll csoportban tapasztalható mortalitás fokozása érdekében a foaktériumszuszpenzió koncentrációját az egerek fertőzéskori életkorának megfelelően módosítani kellett. Az azt követő fertőzésen kísérletekben, amikor az egerek IS hétnél idősebbek voltak, a baktéríumoltómag koncentrációját S,0xlö'^: és 2,5x15’ közöttire állítottuk be.

1. táblázat: CD-I egerek immunizálása S csoportba tartozó Streptococ-cus formaldehid-oldattal elolt, teljes sejtjeivel majd azok homológ (C38'S'/90~es (Xa/c szerotipnsú)) és hetsrológ [NCS2'46~os (1I/R szérótipusú) 1 törzsekkel végzett fertőzése

Az immunizálásra | h aszna X t | .a n 11 g é n k é s z i t mé n y¹

A baktéríumfertőzés után 14 nappal életben maradt egerek (%-os túlélés) homológ fertőzés: iheterológ fertőzés: I C388/30~es ÍXa/c MCS246~os (II/R | szerotlpusű) törzs ( szerottpusű) törzs

X'.WAV.WASS'.'AWV e1ső fértő zés jB csoportba tartozó, C38S/9O~es (la/c Jszérótipusú) l-Sfcxeptococcws törzs . formaldehid-oldattal § .>

(elölt sejtjei⁴

8/8 (100)³ iKontroll, PBS

IB csoportba tartozó, j

Í€38S/90~es íla/c^ szeretipusú) {őtreptococeus törzs formaXdehid-oIdat ta1 elölt sejtjei

Kontroll, PB.S

6/6 (100)

0/6 (0)

2/6 (33)

* * « ♦ X >

³ 0,14 mg vagy 0,21 mg végső Al-koncentrációjú AXhydroge 1™*’-t alkalmaztunk;

² megközelítőleg 6x10 cfu;

³ B csoportba tartozó C338/90-es (I-a/c szerotípusú) Streptococcus törzset X,Sxlö⁴ cfu koncént rác lóban, tartalmazó, 1 mh Todd-Hewltt tápköseggel intraperitonealisan végzett fertőzés;

B csoportba tartozó C383/90-es (Ia/c szerotípusú) Streptococcus törzset 2,1x10’ cfu koncentrációban tartalmazó, 1 mL Todd-hewitt tápközeggel intraperitonealisan végző 11 f értő z é s;

⁵ nem végeztük el ^R B csoportba tartozó NCS246-OS {IT./R szerotípusú) Streptococcus törzset 1,2x1ο³ cfu koncentrációban tartalmazó, 1 jaL Todd-Hewítt tápközeggel intraperitonealisan végzett f ertő zés;

Egy további kísérletben 12, kontroll csoportba tartozó egeret PBS-sel injektáltunk, míg egy másik, azonos nagyságú egércsgportot 8 csoportba tartozó, C388/9Ö~es (Ia/c szerotípusnj dfcreptococ'crs törzs formaldehid-oldattal elolt teljes sejtjeivel immunizáltunk, Mindkét csoportból hat egeret B csoportba tartozó C388/90~es (Ia/c szerotípusú) Streptococcus ötörzs 2,1x10“ cfu mennyiségével fertőztünk (1. táblázat). Az első fertőzésen kísérlethez hasonlóan, az összes, 8 csoportba tartozó C388/3Q~es Streptococcus törzzsel ísmmizáit. egér túlélte a homológ fertőzést, míg a FBS-sel oltott hat egér közül, csak 2.

»#Φφ χ««« φφ φ«

Φ * Φ X φ ·Χ ♦ φ φ X X Φ « « « «

Φ * Φ 4r torták eldöntésére, hogy a bemutatott antigénkéssifcmény képes-e az NCS24S~os (II/R szerotípusű?, szerológíailag elkülöníthető burkot termelő törzzsel szemben keresztimmunitást kiváltani, a mindkét csoportban megmaradt hat egeret használtuk fel, egy héttel később. Az ezzel a második, B csoportba tartozó Streptococcus törzzsel fertőzött egerek egyike sem élte túl a fertőzést. Ez az eredmény arra utalt, hogy a formaldehid-oldattal elölt C388/90-es törzs által kiváltott védő immunválasz nagyrészt a baktérium burok poliszaeharidja ellen irányul és feltehetően szerotipus-specifikus. Eredményeink alapján a bemutatott fertőzési modell alkalmas a vakcinázás által kiváltott védő immunitás tanulmányozására.

Nyeli immunizálása B csoportba tartozó gtreptococcusformaidehid-oldattal elölt teljes sejtjeivel és egérben kiváltott passzív védelem

Hí perimmun-szérum nyerése céljából egy új-zélandi fajtájú nyalat <2,5 kg, Charles RÍver, St-Constant, Québec, Kanada) 8 csoportba tartozó C388/90-es (la/c szerotípusú) ütreptococcus törzs formaldehid-oldattal elölt sejtjeivel immunizáltunk. A nyalat B csoportba tartozó C338/90-es (la/c szerotípusú) Streptococcas törzs formaldehid-oldattal elölt sejtjeinek megközelítőleg 1,5x10* cfu mennyiségével hárem hetes időközökkel háromszor oltottuk bőr alá. Az első immunizáláshoz adjnvánsként Freund-féle komplett adjuvánst (Gifoco BRL Life Technologies, Grand Island, New York), a további két injekció esetében pedig Freund-féle inkomplett adjuvánst (Gibco BRL) alkalmaztunk. Az immunizálás megkezdése előtt, valamint az utolsó injekció beadását követően két héttel az állattői szérnmmlmtákat nyertünk, melyeket azután -SöH-on fagyasztva tároltunk.

Megvizsgáltuk, hogy ez a nyálban termelt hiperimmun szérum nyűjt-e passzív védelmet egérben a B csoportba tartozó Strepfcococcussal végzett letáiis fertőzéssel szemben. Az egerek 15 μΐ vagy 25 pl hiperimmun nyálszérummal 18 órával a fertőzés előtt végzett intraperitonealis injektálása 5 állatból négyet megvédett a fertőzéstől (80%J , Ezzel szemben 20% alatti túlélési arányt tapasztaltunk a FBS-sel vagy meningococcus külső membrsnproteinnel immunizált nyúl szérumával kezelt kontroll egércsoportban. Ezek az eredmények világosan megmutatták/ hogy más állatfaj B csoportba tartozó Streptooocous -elölt sejtjeivel történő immunizálása egérnek passzív védelmet nyújtó ellenanyagok képződését idézi elő. Az így előállított reagenst a későbbiekben kiónok azonosítására is igénybevettük «·** Φφ** «Μ « χ » X φ » * < X Φ Φ “· * Μ φ Φ' 9 Φ Α> Φ φφφ XX ^ΑΦ X·

2. táblázat:· CD-I egerek, passzív védelme nyálnak B csoportba tartozó C388/90~es (la/c szerotípuaú) Streptococcus törzs formaldehid-oldattal elölt, teljes sejtjeiből készült antigénkészítménnyel végzett immunizálásával nyert szérummal fCsoportok

.......... F

Λ B csoportba tartozó

C388/90-&S (la/c szerotipusá) Streptoooccus törzzsel j %~os túl } végzett fertőzés után 14 1 élés nappal életben maradt ege- j rek száma

hiper imán	m nyúlszé-i	4/5		30

rum20 ül

i hiper.immun nyúlszé- ] rum^{* 1 *} - 15 μϊ kontroll nyúlszérum]

- 25 μ.)

DBS kontroll ¹ Az első immunizálásra Freund-féle komplett adjuvánst, a következő két immun!sáláéra Freund-féle inkomplett adjuvánst alkalmaztunk;

^;í B csoportba tartozó C388/9ö™es (Xa/c s z erő típusú 1 dtreptococcus törzset 2x10⁴ cfu koncentrációban tartalmazó, mh Todd-Hewitt tápközeggel intraperitonealisan végzett fertőzés,

His.Tag-Β *mm4444W»wwí^amaMmamam«m *-V ·· ' ^W·** *>

* > V * *·* X * * *'»·> >:

* Κ * * < -X » * ·* « » χ -* ν * tartozó Sfcreptoooccus fúziós protein

....... ^1..· ... I .................... ift— --._t.₍ ,J|J-_Jr - --- rekombi náns előá!Irtása

A B csoportba tartozó 388/90-es sla/e szerotipusú} Streptoccccus-törzs genoml DNS-éből, a SglII (AGATCT) és HindiII (AAGCTT) restrikciós helyek hozzáadásához bázis™ hosszabbításokat tartalmazó -oligonukleotidok segítségével egy B csoportba tartozó Strep>fooocous~gén kódoló régióját PCR-rel . ampli.fikáltűk. (IMA Thermal Cycler GeneAmp PCR System 2400”, Perkin Elitet, San Jose, CA) . A PCR-terméket az agarózgélből Qiaex II” gélextrakciős reagenskészist (Qiagen, Chatswoth, CA> segítségévei kitisztítottuk, SglII és HindiII restrikciós enzimekkel {Pharmacia Canads Inc., Saie d’ürfe, Kanada) emésztettük, majd az etanol precipitá™ ciőt megelőzően fenol;kloroform eleggyel extraháltak. A tioredoxin-His.Tag szekvenciát tartalmazó pET~32b(+; vektort (Novagen, Madisoh, WI) Bg.U.1 és HindiII restrikciós enzimekkel emésztettük, fenol:kloroform eleggyel extraháltak, majd etanollal precipltáltnk. A T7 promoter által szabályozott tíoredoxin-BIis .Tag-B csoportba tartozó Streptococcus fúziós protein kódoló szekvenciájának kialakítása érdekében a Hgl.II -Hindi II genoml DNS-fragmenst a HglII'-HlndlII pET-32b{+) vektorhoz ligáitűk. A ligáit termékkel. ^WXLI Blue HR'F* ” H. coli törzset <AmcrA)I83Á(mcrCB~ hsdSMR-is.rr) 17.3 endA.1 sup£44 thi-I recAi gyrA96 relAl .lac (F’prcAB IsciHÁMlSTnlö (Tet^r) j^:'i (Stratagene, La Jolla, CA) Simanis eljárása szerint, transz tornál tünk [Banahan, D>: DMA Cloning** 109, szerk.: D. M. Giover (1985)]. A rekombínáns pET plasmidot ”Qíagen” reagenskészlet (Qiagen, Chatsworth, CA) segítségével tisztítottuk, majd a DNSins zer t nukl eo t idszekvénei ág át. DNS -s zekvenál á s segít s égé ve 1 igazoltuk {Tag Dye Deoxy Termi na tor Gyeié Sequencíng kit, AB1, Főszer City, CA) . A rekombínáns pET pia ami dót eiektroporáciőval (Gene Bulser II apparátus”, 8I0-RAD Labs, Missis-sauga, Kanada) AD494 (DE3) £„ coli törzsbe {Áaraleu7ó97 álacX'74 ApéoA Pvall pfcoR AmaiF3 F’ [lsei '(lacl^q) pro] trxB;;Kan (DE3)) (Novagen, Madison, WI) transzformáltuk. Ebben az E, coli törzsben a fúziós protein expressz lóját, szabályozó T7 promotert specifikusan felismeri a (ÉDES profágon megtalálható) T7 RNS-polimeraz, amelynek génjét az Izopropil-p-D-tio-gaiaktopiranozid (IPTG) által indukálható lac promoter szabályozza.

A transzformáns AD494 (DE3) /rpET-et milliliterenként 100 Dg aiapicillint (Sigma-AIdrich Canada Ltd., Qakvilie, Kanada) tartalmazó LS~levésben (10 g/L pepton, 5 g/L élesztő ki vonat, 10 g/L N&CIj 250 rpm-es rázással 37^öC-on. tenyésztettük, amíg Α_00δ értéke el nem érte a 0,6-ot. A. tioredoxín-Bís.Tag-B csoportba tartozó Strepto-coccns- fúziós protein termelésének indukálása érdekében a sejteket további két órán át 1 mM végső koncentrációjú IPTG jelenlétében inkubáituk. A baktériumsejteket ezután centrifugálással nyertük ki.

A két órás XPTG-indukció hatására az

AD494(DE3)ZrpSTŐz által termeit rekombínáns fúziós proteint részben oldhatatlan zárványok formájában nyertük ki, amelyeket az oldhatatlan aggregátumok izolálásával, endogén A.

♦ X « Φ « »* ♦

«♦» « coli proteinekből tisztítottunk ki (Gerlach, G. F. és mtsai.·: Infect. Immun. 60, 89.2 (1992}]. As 500 mL tenyésztő köz égből származó indukált sejteket 2.0 mL 25% szacharózt.

8,0i íoH és 50 mM T.ris-HC'l~t tartalmazó pufferben reszuszpendáltuk és -?ö*C-ra fagyasztottuk. A felolvasztott szuszpenzíó-ban található sejtek iizisét 2.50 mM Tris-HCl pufferben (pH « 3,0} lévő 5 jeL lizozim-oldat (10 mg/mL) hozzáadásával, majd 10-15 perces, jégen történőinkúbálássál, és azt követően 150 ml- detergenskeverék {5 rész 200 Tris-HCl puffer [pH ·= 7,4], 300 mM NaCl, 2% dez-oxikőlsav, 2% Nonide-t P-40 és i*égy rész 100 mM Tris-HCl puffer (pH ^:::: 8], 50 mM ADTA, 2% Triton Χ-10Ό} hozzáadásával, majd 5 perces, jégen történt ínkubálá-ssal értük el. Szonikáiás után a proteinaggregátumokat 30 perces 35 000 gn történt centrifugálássai gyűjtöttük be, az oldható sejtes frakció egy részét megtartottuk. Az aggregálódot.t proteineket ŐH guanidin-hídroklórádban szolubilizáltuk. Az oldható és oldhatatlan frakciókban, a protein jelenlétét B csoportba tartozó C388/90-es {Xa/c szerotipusá) ótreptococcos törzs formaldehid-oldattal elölt sejtjeivel immunizált, azonos törzzsel történt fertőzést túlélt egér szérumával végzett western-hlot” vizsgálati eljárással mutattuk ki.

Az IFTG-indukált AD434 (FE3}/rp£T oldható frakciójából a fúziós proteint a (6 egymást követő hisztidint tartalmazó} His,Tag szekvencia azon tulajdonságán alapuló affinitás kromatográfiával tisztítottuk ki, hogy kötődni képes a His.Sínd” fémkelát-gyantán (Novagen, Nádisón, WI) rögzített dívalens (Ni²*) kationokhoz. A tisztítást a okT * « ♦·»

System Nanual €. kiadásában (Novagen,· Madi-son, WI} leírtak szerint végeztük. Röviden, IPTG-vei indukált 100 mL-es tenyészetből származó pelletált sejteket 4 ml kötőpufferben <5 ímidazol, 500 mM NaCl, 200 mM Tris-H'Cl, pH ~ 7,9). reszuszpendáltuk, szoníkáltuk, majd a sejttörmeiék eltávolítása céljából 20 percig 39 000 g~n centrifugáltuk. A fe~ lülúszőt {0,45 jj^-es pőmsnagyságú membránon) szűrtük, majd kötőpuf ferrel e'kviliferált His. Bind gyantát tartalmazóoszlopra vittük. Az oszlopot ezután lö oszloptérfogatú kötőpuf íerrel, majd 6 osz-l-opt ér fogatú mosópuf ferrel (20 mól imióazoi, 500 mM NaCI, 20 Tris-HCl, ph - 7,9) mostuk. A tioredoxin-His.Tag-B csoportba tartozó Streptococcus fúziós proteint eluálőpufferrel (1 mM Imidazol, 500 mK NaCl, 20 mH Tris-HCl, pH - 7,9) eluáltuk. A sőt és az imid-az-olt 3 x 1 liter PBS-sel szemben, 4°C~on végzett dialízissel távolítottak el a mintából.

Az £. coli oldható vágy oldhatatlan citoplazmafrakcióiból kinyert fúziós protein mennyiségét a protein sor o z a thí g i t ás-a i t és s z ar v-a smar ha ~ s zéruma 1b umi n s t andardo t (Pierce Chemical Co., Rockford, Ili.) tartalmazó nátriumdodecil-szulfát (SDS)-poli(akrílsmid)-gél Goomassiefestésével határoztuk meg.

A Xante fi, prooter által szabályozott.. B csoportba tartózó Sfcreptococcus protein rekombináns előállítása ji~ · i r c c c ÓT—--.-.—.η.-.ι - r -i-*?r ??-·:*: ö : 11 ö -ί~-—r r r n · -“rrnno l~.· .i . .n.r.n.n.i.- - .-i-rrririji.-iri-pixicrjij .·.—rr—,.(171:0:11,,:-.-.-.-Egy B csoportba tartozó Streptococcus protein DNS kódoló régióját, a λ-Α, p-romot értől rányban pURV22~es ditóvektorba in-szertáltuk. Ez a. piazmid a n62'S-bői származik (George és- mtsa amelyből a 2

SÖO (1987)j, ífísv-n

Bio/Technology 5,

I. típusú herpes simplex vírus glikoproteinjenek (gD-1) egy részét kódoló régió el lett távolítva és amelyben az am.piciili.n~rezis2t-encia génjét a pU€4K plazmidvektorfcól (Pharmacia Biotech. Canada Inc., Balé D’ürfe, Kanada) nyert kanamicin-kazettával pótolták. A vektor a λ CI857 bakteriofág működőképes P_R promoter nélküli hőmérsékletérzékeny reptesszor génjéből álló kazettát tartal»2ott. A cI857 represszor 30-37°C~tól 37-42^öC-ig terjedő hómér-sékletemelés hatására bekövetkező inaktíváiódása a λ P_t által szabályozott gén indukciójához vezetett. A géntranszlációját a cro ríboszómakötőhely és az attól 3’ irányban található Bg.IIl restrikciós -hely (AGATCT) valamint az ATG: A.CTAAGGAGGTTAGA.TCTATG szabályozta.

A restrikciós enzimeket és a T4 DNS-lígást a gyártók (Pharmacia Biotech Canada Inc. _f Baie D*Ur£-e, Kanada; New England Biolabs Ltd„, Missíss-auga, Kanada) előírásai szerint alkalmaztuk. A DNS-fra.gmensek agar-őz-gél-el.ektrof-oré-zí^ -s-ét a Sambrook és mtsai. (Sambrook és mtsai. : ^wMolecular Cloning: A Laborato.ry Manual'**, Kiad.: Cold Spring Harbor baboratory Press, H. Y. (15)89)) által leírtak szerint végeztük. A S csoportba tartozó Sfreptococcns baktériumok kromoszómái is DNS-ének kinyerését Jayarao és mtsai.. (Jayarao és mtsai.: J. Cián. Hierobiol.. 39, 2774 (1.991)) szerint végeztük. A polimeráz láncreakcióval (PCB) végzett DKS-amplifíkációhoz DMA Thermal Cycler GeneAmp PCR systera 2400” (Perkin Elmer, San J-ose, CA) berendezést alkalmas»: X tünk, A DNS-szekvenáláshoz alkalmazott piazmídokat ”Qiagen” (Chatsworth, CA) plazmád. reageaskészlete.k felhasználásával tisztítottuk ki. A DNS~fra.gmep.sek agarózgéiből történő kitisztításához “Qiaex II^W gélextrakciós reagenskészleteket, alkalmaztunk (Qiagen, Chatswoth, CA) . A pl a zmidtransz -formációkat a Eanahan által leírt eljárás szerint végeztük P'DNA cloning, 10.9, szerk.: Glover (1.985)3, A plazmidbeii genomá DhS-ínszertek S2ekvenálása 3.94-es típusú oligonukleo-tid szintetizátorral (the Pe-rkin-Elmer Corp., Applied Biosystems Div. [ABI], Fö-ste-r City, CM szintetizált szintetikus oligonukleotidokkal történt. A s-zekvenálási reakciókat PCR-rai, “Taq Dye Deoxy tsminator Cycle Sequencing kit” (AB1, Foster City, CA) segítségével végeztük, a DNSelektroforézist 373A típusú, automatikus DNS-szekvenszeren <ABI, Foster City, CA) hajtottuk végre. A DNS-szekvencia összeállítására “Seguencer 3.0 programot (Gene Codes Corporation, Ann Arfoor, Ml) használtunk. A DNS-szekvenciák és a belőlük származtatható' polipeptidek elemzését “Gene Works 2.45” programmal (Intelligénétics Inc., Mountain View, CA) végeztük.

A B csoportba tartozó 388/98-es (la/c szeretipusű) Streptocoecus-törzs genomi DNS-éből, a Agill (AGAICT) és Xha'I (TCTAGA) restrikciós helyek hozzáadásához bázish o s s z ább 11 á so ka t tarta lm a zó o 11 goau k. 1 e o t i do k s e g 11 s ég éve I egy B csoportba tartozó Strept-ococons gén kódoló régióját PCR~re.l amplif ikáituk. A. PCE-terméket az agarózgéiből Qiaex II” gélextra.kciős reagenskészlet (Qíagen, Chatswoth, CA) segítségével kitisztítottuk, BglII és Xfeal restrikciós enzimek segítségével emésztettük, majd az etanol precipitáciőt megelőzően fenol: kloroform e léggyel extraháltuk. A. püRV22~es vektort SglII és Xbal restrikciós enzimekkel emésztettük, fenol: kloroform el eggyel ext rahá.ltuk, majd etanoilal precipitáltuk. A Rglll-Xbal genomi DNS-fragmenst a aPL promoter által szabályozott 8 csoportba tartozó Streptococcus gént tartalmazó BslII-Xal püRV22 vektorba ligáitűk. A ligáit termékkel Hanahan eljárása szerint (Id. fentebb'· ^!íXLX Blue MRF^tM S. coll törzset (á CmcrA) -183Á (mcrC8-h.scföMR-mr.r) 173 end&l supE44 thi~l recAI gyzASó reiAl lac[F*proAB JacHEÁMlS TblO {Tet^E) ] Ί (Stratagene, La Jolla, CA) transzformáltunk.. Az inszertet tartalmazó plazmidokat hordozó transzfozmánsokat a lizált sejtek agarőzgé.l-elektrof orézisével azonosítottuk (Samhrook és mtsai., id. fentebb).. A rekombináns p^:JRV22 plazmidot Qiagon.” reagenskészlet (Slagén, Chatsworth, CA) segítségével tisztítottuk, majd a DMS-ínszerfc nukleotidszekvenciáját öNS~s.zekvená.'iás segítségével igazoltuk.

XL1 Blue	MB.F’'7rplXRV2	2-t mii	lilite-
.cint (Si	.gma-Aldríc'h	Canada	Ltd.,
ima zó LB-	levesben 250	rpm~es	rázás-
:ük, amíg	Aso értéke	el nem	érte a

0,€-ot. A fúziós protein termelésének índukálása érdekében a sejteket további négy órán át 3'9°C-on inkubáltuk. A baktériumsejteket ezután centrifugálással nyertük ki, .mintapnfferben ressuszpendáltuk, 10 percig forraltuk, majd -20 *C-on tároltuk.

IX φ * * φ φ* φ

Β csoportba tartozó gbrcpfcoccccus protein génjének CHVereöetú. pCMV-GB plazmádba történő ssubklónozása

Egy B csoportba tartozó HLreptococcus pro-teín DNS kódoló régióját a pCW-GH plazmidvektorban a citomegalovírus (CMV)· prowter transzkripciós szabályozása alatt álló humán növekedési hormon (humán growth hormoné, hGtí) génjétől 3’ irányban fázisban inszertáltuk (Tang és mtsaí.: Natúré 356, 152 (1992)]. A CMV promoter H. coli sejtekben nem működőképes, de a plazmáidat eukaryota sejtekbe juttatva aktiválódik. A vektor az ampicillin-rezisztencia génjét is tartalmazta .

A gén kódoló .régióját a B csoportba tartozó 388/SÖ-es (IaZc sze.rotípusú) Streptococcas törzs genomi DNS-éből, a HglII (AGATCT) és HindiII (AAGCTT) restrikciós helyek hozzáadásához bázishosszabbításokat tartalmazó olígonukleobídók segítségével, PCR-rai sápi ifikéi tűk, A PCR-terméket az agarózgélből Qiaex IX gélextrakciós reagenskészlet (Qiagen, Chatswoth, CA) segítségével, kitisztítottuk, BglII és ffindl.il restrikciós enzimekkel emésztettük, majd az etanol precipitációt megelőzően fenol:.kloroform eleggyel extraháltak. A humán növekedési hormont tartalmazó pCNV-GH vektort, (dr. Stephen A. Johnston laboratóriuma, 'Department of Bíöchemistry, The üníversíty of Texas, Dallas, Texas; fúziós proteinek előállítása céljából RglIX és HindiII restrikciós enzimekkel emésztettük, fenolkloroform eleggyel extraháltak, majd -etanoilal precipitáltuk. Az 1300 bázispáros HglII-HindlIí genomi DNS-fragmenst a CMV pro39 φ * φ φ φφφ.φ ** * ^ν * * * ♦*· *. φ φ φ * ♦ ν«« ΦΦ ** ** >»* φ motor szabályozása alá eső hGH-δ csoportba tartozó Streptccoccus fúziós protein előállítása érdekében a BarnáiHindii! pCW-GH vektorhoz ligáitok. A ligáit termékkel Hanahan eljárása szerint (Id. fentebb) DH5a £< coli törzset (480 lac2 AMIS endAl recAl hstR.17 CK^K*}- sup£-44 thí-ΐλ gyrA96 reiAl Á(lac2YA-argF)UÍ691 (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) transzformáltunk. Az inszertet tartalmazó plazmidokat hordozó transzformáns-okat a Ιί-zált sejtek agarózgélelektroforézisével azonosítottuk (Sambrock és xatsal., Id. fentebb). A rekomblnáns pCMY plazmídot Qiagen” reagenskészlet {Qiagen, Chatsworth, CA) segítségével tisztítottuk, majd a DHS-inszert nukleotidszekvenciáját DNS-szekvenálás s-egi t ségével igazol tűk.

7. példa csoportba tartozó Gfcrepfcocoecus protein 8 csoportba tartozó Sfcrepfeoeoccus fertőzésben kiváltott immunológiai aktivitása

Négy, -egyenként 12, hat-nyolc hetes korú nőivarú CD-i -egérből (Charles River, S-t-Constant, Quebec, Kanada) álló csoportot a kővetkező antigénpreparátumok 0,1 mL-ével három hetes időközökkel háromszor szobkután oltottunk: 3 csoportba tartozó C38'8/90~es Str-eptococcus törzs formaldehidoldattal elölt sejtjei (-6x10’' -cin); H, coli oldhatatlan (zárványtestes) eitoplazma-frakciőjából származó 20 Og tioredoxín-Hís.Tag~8 csoportba tartozó Streptococcus fúziós protein vagy H. coli oldható cltoplazma-frakciójából (nlkkelos-zlopon) affinitás-tisztított 20 Og tíoredoxin-His.Tag40 . . ♦ * * *

... .« «» *

Β csoportba tartozó Streptococcus fúziós protein; vagy {nikkeloszlopon) affinitás-tisztított 20 Dg tioredoxinhis.Tag kontroll polipeptid. Adjutánsként minden egyes .antigénpreparátumhoz 20 Qg 0uilA^w-t adtunk (Cedarlans Laboratories Ltd, Ho.rn.by, Kanadai. Mindegyik egértől az immunizálás előtt (PB), valamint az immunizálás során a 20. (TB1), a 41, (TB2) és az 54. (T33) napon szérummintát nyertünk. A szérummintákat -20°C~on fagyasztva tároltuk.

A fúziós protein minden egyes injektálása után az

BUSA-literek emelkedése volt megfigyelhető, ami jó elsődleges immunválaszra és a második és harmadik injektálás után a specifikus humorális immunválasz fokozódására utal. Az immunizálás végeztével a zárványokból kinyert fúziós protein 20 Dg-jával immunizált csoportokban mért ELJSAtlterek recíprokának átlaga 456 145 volt, míg az E. coll oldható frakciójából kinyert proteinnel immunizált egerekben esetében ez az érték. 290 133 volt. Ez utóbbi eredmény arra utal, hogy a zárványokból izolált protein az oldható frakcióból kivontnái erősebb imunogenítású lehet. Az egerek szérumának affinitást ísz ti tott tioredox.in-His. Tag-al bevont tálcákkal végzett ELISA-vizsgálatával kimutattuk, hogy a fúziós protein tioredoxín-His,Tag része ellen csak elhanyagolható mennyiségben képződnek ellenanyagok. A rekombináns fúziós proteinnel injektált egerek szérumának, reaktivitását B csoportba, tartozó 388/90-es őtreptococcus törzs formaldehid-oldattal elölt teljes sejtjei alkalmazásával is SLISA-val vizsgáltuk. A rekombináns fúziós proteinnel végzett immunizálás eredményeként termelődött ellen™ * > ·> * anyagok is felismerték a B csoportba tartozó Streptococcus sejtek felszínén lévő specifikus epitópjaíkat, arai arra utal,, hogy a rekombináns proteinek konformációja annyira közeli a természetes streptococcus proteinéhez, hogy az keresztreagáló ellenanyagok képződését feszi lehetővé.

Annak igazolására, hogy az immunizálással kiváltott immunválasz védőhatást biztosít-e a B csoportba tartozó Streptococcus fertőzéssel szemben, egereket. B csoportba tartozó c338/90~es <Ia/c szerotípusű) Streptococcus törzs 3,5x10'· cin mennyiségével, valamint az NCS246-~as (II/R szerot.ípnsű) törzs 1,2x10* cfu mennyiségével fertőztük. £ kísérletek eredményeit a 3. valamint a 4. táblázat tartalmazza. A kontroll tíoredoxin-His»Tag peptíddel vakcinásott kontroll egerek egyik B csoportba tartozó Streptococcns törzzsel szemben sem voltak védettek, míg a C388/9Q~es törzs formaldehid-oldattal elölt teljes sejtjeivel immunizált egerek csak a homológ fertőzéssel szemben voltak védettek. A találmány szerinti tioredoxin-His.Tag-B csoportba tartozó Streptococcus fúziós protein mindkét B csoportba tartozó Streptococcus törzzsel szemben védelmet biztosított. Ezen egerek lápénak és vérmintáinak bakteriológiai vizsgálatává! nem voltak kimutathatók B csoportba tartozó strentococcusok.

«Λ * X

3. táblázat: 8 csoportba, tartozó 388/90-es Streptococcus törzzsel végzett fertőzés eredménye^1.

Immunizáló anyag	A fertőzés után é 1 e tb e n ma r a d t egerek száma	%-os túlélés
tíoredoxin-His.Tag1 * 3	1/6	17
C 3 8 8 / 9 0 - e s t ö r z s £ o rma 1. deh i d - oldattal elölt sejtjei3	6/6	100
tioredoxin-íiis .Tag-B csoportba tartozó Strepto-coccus fúziós protein (zárvány eredetű)4	6/6	100
t ioredoxin-His.Ta g-B csoportba tartozó Streptoooccus fúziós pro te ín (c 11op 1 a zma frakció)'5	6/6	100

¹ 3,5xlö'^: cfu baktérimkoncentrációjé Todő-Hewitt táp közeg 1 ml.-évei intraperitonaalisan végzett fertőzés;

* 20 Dg-os adagban; a túlélő egerekben, a hátulső végtagok, bénulása jelentkezett? a vérből és a lépből B csoportba, tartozó sfrept-ococcusokat mutattunk ki;

’ 6x10·^f cfu adag?

⁴ 20 Dg-os adag.

4. táblázat: Β csoportba tartozó NC5246-OS Sfcreptccoecus törzzsel végzett fertőzés eredménye^·

Immunizáló anvao tior-edoxin-His. Tag²

A fertőzés után ( életben maradt f egerek száma

C388/9ö-es törzs formaldehid oldattal elölt sejtjei''¹ tioredoxin-His.Tag-B csoportba tartozó Streptococevs fúziós protein (zárvány eredetű}^{2 * 4} tioredoxin-Hi-s„Tag~B csoportba tartozó Sfreptoccccus fúziós protein (citoplazma frakció}^{2 1} B csoportba tartozó NCS246~os (ΙΣ/R szerotipusú) Bízreptococcus törzset I,2.xlO^s cfu koncentrációban tartalmazó, 1 mL Todd-Héwitt tápközeggél intraperitonealisan végzett fertőzés;

² 20 ög-os adag;

öX ló Λ- vt HiXclvI/ ⁴ Egy egér elpusztult az immunizálás során.

«»

φ·Χ *

δ. példa

A rekombináns Β csoportba tartozó Btrepfcococcus proteinnel ,,,^^χ^^^^\-,,,,,^^^^-_νυ-^χ-|χΐρ,ΐχ.Ίηί^|^ΐρχ,ρΡΐχΐ|ΊρρΡ(χ,ηΧΐΓΐΓΐΡΡΠΓΤ·ΊΓΤ·ΊΓ·ΊΓ·ΎΊΤΤΤπΠΓΓΓ·~·~·~·~·~·~·~·~Γ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * ‘ f ‘ r I** * * * * * * ?***** * * 1ΐΐη ΊΟΟΓΐΓΤΤΠΓίΤ—' JT?'. . ?~?·?·?·?·?·?···?··^,··~ΚΠ)·|ΓιΓΓιΓ^ΤίΓΓΓ^.·.Γ.ΊΓ Π* ΊΊΓυ*ιΓι^,· ιί·^.ιι ·ϋ|·|·.·Χ·).Χ·ι;·ι.ιι.Ιυι.1·»~*““ΛΓιι*Γ,·|ΓιΓιΑΓιΓ történő immunizálás védelmet biztosit a B csoportba tartozó végzett kísérletez fertőzés ellen

Ez a példa a 39, .azonosítószámú szekvenciának megfelelő rekombínáns protein egerek B csoportba tartozó strepto-coccusokkal történő Xetáiis fertőzésével szembeni védőhatását mutatja be.

Nőivarú CD-I egerek (Charles Elver) tizes csoportjait a 42:. azonosítószámú szekvenciának megfelelő S csoportba tartozó Strepfococcus gént tartalmazó rekombínáns pURV22 plazmídot magában foglaló BAL át coll törzsből (N-ovagen) kitisztított rekombínáns protein 20 u:g~jával 20 ög “Quila™* adjuváns (Cedarlane Laboratories Ltd# Hornby, Kanada) jelenlétében# vagy kontroliként csak “Quila™” adjuvánst tartalmazó PBS-sel három hetes időközökkel .háromszor szubkután oltással immunizáltuk. A szem vénás öbléből vérmintát vettünk minden, egyes· immunizálás előtt# vagyis az első# a 22. és a 43. napon# valamint a harmadik immunizálás után két héttel (az 57. napon) . Egy héttel később az egereket különféle virulens#- B csoportba tartozó Streptococcus törzsekkel fertőztük. A fertőzésre használt B csoportba tartozó Streptococcus törzseket a cfu-egység megállapítása és a fertőző dózis mennyiségi igazolása céljából 5% juhvért tartalmazó agarlemezekre oltottuk. Az ezt követő 14 nap alatt lejegyeztük az elhullásokat# maj.d a fertőzés utáni 14. napon a túlélő egereket kiirtottuk és vér- valamint lépmíntáikbői megkíséreltük a B csoportba tartozó strep-

♦κ tococcusok kimutatását. Az egerek túlélési adatait az 5.

táblázat tartalmazza.

Az egerek fertőzés előtti szé.rummintáifc standard im~ Htunvizsgálati eljárásokban B csoportba tartozó streptococcusokkal reagáló ellenanyagok jelenlétére vizsgáltuk.. Az EL ISA és az ímmunoblot-ei járások kimutatták, hogy az El coliban termelt rekombináns 3 csoportba tartozó őtreptococcus proteinnel végzett immunizálás a refcomfoináns és természetes B csoportba tartozó otxeptococces proteinnel szemben egyaránt reagáló ellenanyagok képződéséhez vezetett. A. B csoportba tartozó streptococcusokkal szembeni ellenanyag-választ a .9. példa részletezi.

* «* » *♦ ♦ » « * X » ♦ * » ♦ » » « λ * ♦ * *»* * » Ο » « X * * » * ♦ * * >* «« ««« *Α ** ** X

5. táblázat: Ά 3.9, sorszámú szekvenciának megfelelő re kom'bináris B csoportba tartozó Streptococcüs protein nyolc különböző, B csoportba tartozó Streptococons törzzsel végzett fertőzéssel szembeni véáőhatása

Immuno-gén	Jelölés	Tipus	Élő:	holt egér'
rekombináns B csoportba tartozó Streptoco-ccus protein nincs	08 8/90	la/c	8:2	(p<0, 000.1) 0:10
rekombináns B csoportba tartozó Streptococcuc protein nincs	NCS 246	11/9	10:0	(p-0,0012} 3:1
rekombináns B csoportba tartozó Strepfcocoecus protein nincs	ATCC 12401	Ifc	10:0	(p-0,001) 3: 7
rekomblnáns δ csoportba tartozó Strepto-cocous protein nincs	NCS 535	V	10 :<	5 (p-0,01) 5:5
rekombináns S csoportba tartozó St-zeptacoc-cus protein nincs	NCS 9842	VI	10:0	(p<0,000I; 0:10
rekombináns B csoportba tartozó Streptococcos protein NCS 915-F3 nincs	NCS 915	III	? : 3	íp—ü,0007)2 1:9 4 : 6
re kombi.n-áns B csoportba tar-			7:3	(p-Q,0O2)
toző Streptococeus protein	NCS 954	111/9		4:6
NCS 954-F				1:9

imncÉ jrekombináns B csoportba tar-j |tozó Streptococcns protein | jCGHl-i )nincs

COKI

S 4:6 (p—0,0004

III i

0:10 ¹ Csoportonként 10 egeret használtunk, a táblázatban a fertőzést túlélt és a benne elhullott egerek számát tüntettük fel. A rekombináns B csoportba tartozó Streptococcus proteinnel és a placebóvsl immunizált állatok elhullás! görbéit nem parametrikus ”lóg-rangsor” teszttel hasonlítottuk össze.

* Az NCS9I5-F-immunizálással végzett összehasonlítás.

³ Az állatokat B csoportba tartozó Séreptococcus formaldehid-oldattal elölt sejtjeivel, ében immunizáltuk.

’Ouila³^ adjuváns jelenlétA fertőzést túlélt egerek véréből végzett baktéri.umtenyésztés a fertőzést követé 14. napon mindegyik esetben negatív eredményű volt. A túlélő egerek lépének hasonló vizsgálata az MB-ll-es kísérletben szereplő néhány állatot kivéve szintén negatív eredményű volt.

v példa

A rekombináns B csoportba tartozó Streptoooccus proteinnel végzett vakcinázás a B csoportba tartozó streptococcnsokkal szembeni immunválaszt eredményez

Nőivarú CD-I egerek tízes csoportjait a 39. azonosí;ószámű szekvenciának megfelelő rekoiufoin&ns B ^snnnr· tartozó Streptococcus proteinnel szabk.után. immunizáltunk, a 8, példában leírtak szerint. A természetes B csoportba tartozó Streptococcus protein elleni ellenanyagválasz értékelése érdekében az immunizálások előtt és a harmadik immunizálást követően 14 nappal vett vérmintákból kinyert szérumot B csoportba tartozó Streptococcus sejtekkel reagáló ellenanyagok jelenlétére B csoportba tartozó, NCS 954-es {TIT szerotípusú), ATCC124Űl-es Ub szerotípusú), NCSS35-ös (V szerotípusú) és NCS 9842—es (VI szerotípusú) Strept occsccustörzsek formaldehid-oldattal elölt sejtjeivel bevont tálcákon, SLl'SA-val vizsgáltuk. A termeit ellenanyagok B csoportba tartozó Streptococcus proteinnel szembeni specifikusságát B csoportba tartozó Streptococcus sejtkivonatok és tisztított rekombináns antigének western-blot analízisével igazoltuk. A 10. ábrán bemutatott eredmények világosan igazolják, hogy az állatok az immunogenként alkalmazott rekombináns B csoportba tartozó Streptococcus proteinnel szeriben a tálcák bevonásra használt antigéntől függően kifejezett reakciót mutattak, ami a harmadik immunizálás után vett szérumban 120ÖÖ és 1280Ö0 közötti médián recíprok eilenanyagtiterek megjelenésével járt. 1:100-as literben vizsgálva az immunizálás előtt vett szérummínfcák mindegyike negatívnak bizonyult. A rekombináns B csoportba tartozó Streptococcus proteint tartalmazó egyetlen injekció beadása után mindegyik állatban B csoportba tartozó streptococcusokkal reagáló ellenanyagok magjaiénését lehetett megfigyelni.

20. példa

A találmány tárgyát képező B csoportba tartozó

Strepfcoenccus protein antigén-konzerválfcsága.

A találmány szerinti B csoportba tartozó Strsptoeoccus proteinre specifikus monoklónális ellenanyagokat alkalmaztunk annak igazolására, hogy ez a felületi antigén mindegyik B csoportba tartozó őtreptococcssban megtalálható, valamint azt, hogy nagysiértékben konzervált antigénnek számit.

A S csoportba tartozó Slreptococcus-specifikus monokiónális ellenanyagok reaktivitásának elbírálására 68 B csoportba tartozó ütreptococeus izolátumot alkalmaztunk. A törzseket a következő forrásokból szereztük bér National Center fór Streptococcus, Provincia! Laboratory of Public Health fór Northern Alberta, Kanada; Centre Kospitallér Uni.versita.ire de Quebec, Pavxllon CB.UL, Quebec, Kanada; American Type Cu.ltu.re Coliectxon, USA; táborától re de Sante Fublique du Quebec, Kanada; Department of Xnfectious Bisease, Children’s fiospital and Medlcal Center, Seatfcle, USA.. Mind a nyolc monokionálís ellenanyagot a következő törzsekkel szemben vizsgáltuk: három le vagy la/c szerotipusú izoiátum, 3 Ib szerotipusú izoiátum, 4 II.

szerotipusú izolálom, 14 l'Il. szerotipusú izoiátum, 2 IV. szerotipusú izoiátum, 2 V. szerotipusú izoiátum,· 2 CT.

szerotipusú izoiátum., 2 Vili. szerotipusú izoiátum, 1 Vili, szerotipusú izoiátum, 10 nem. szerotipizált izoiátum és 3 szarvasmarha-eredetű S. agaiactiae törzs. A 3A2~es monokionálls ellenanyagot további B csoportba tartozó Strootccoc50 φ * cu-s törzsekkel is reagáltattuk? 9 Xa/c szerotípusú izolátwanai és 10 V. szerotípusú izolátummal. A törzseket 5% CO₂-t tartalmazó légkörben,

37°C~on egy éjszakán át tenyésztettük. A tenyészeteket 20 térfogatszázalék, glicerint tartalmazó· szívlevesben ~7öC-cn tároltuk.

A B csoportba tartozó otreptococcvs protein-specifikus mono-klonáiis ellenanyagok előállítása érdekében egereket három hetes időközökkel három alkalommal 20 Dg tisztított rekombínáns B csoportba tartozó Streptococcus proteinnel (44. azonosítószámú szekvencia·} 201 Quíl^A7M” adjváns jelenlétében immunizáltunk. Az immunizált egerekből származó 1épsejtek és a ne® szekretáló SP2/O myeloma sejtvonal sejtjeinek fúziójával hybridoma sejtvonalakat állítottunk elő, a korábbi leírásoknak megfelelően (Hamel, J. és mtsai.: -J. Med.. Microbíol. 23, 163 (198?)], Specifikus ellenanyagtermelés kimutatása céljából a hibrid klőnok tápfolyadékának felíílúszóít a korábban leírt módon, Eh IS A-val, bevonó antigénként formaldehid-oldattal inaktívált B csoportba tartozó Strepfcoccceust és tisztított rekombínáns B csoportba tartozó Streptococcus proteint (39. vagy 40. azonosítószámú szekvencia} alkalmazva vizsgáltuk íHamel, J. és mtsai.: J. Med, M.icrobio-1 23, 163 (1987)}. A specifikushibrideket korlátozó hígításokkal klónoztuk, szaporítottuk, majd folyékony nitrogénben lefagyasztottuk. A rekombiná.ns B csoportba tartozó Streptococcüs protein előállítását a 4. és 5. példában mutattuk be. Tisztított, rekombínáns 8 csoportba tartozó Streptococcus proteint vagy a formaldehidoldattal inaktivált B csoportba tartozó Streptococcust a

c. η

Laemmli-féle megszakított pnftárrendszerrel, a gyártó ajánlásainak megfelelően elektrofcretizáltuk, majd a korábban leírt módon történő western-ímmunobiot vizsgálat céljából nitrocellulóz membránra vittük [Martin és mtsai.: Infect.

Immun. 60, 2713 (19921).

A western-imnonoblct kísérletek eredményeiből egyértelműen kitűnt, hogy mind a nyolc monoklonális ellenanyag felismerte a tisztított rekombináns B csoportba tartozó Streptococcus proteinnek (a 39. azonosítószámú szekvenciának) megfelelő proteincsikot. Ezek a monoklonális ellenanyagok az ezidáig izolált mindén egyes B csoportba tartozó Strepfococcns vizsgálatakor jelenlévő proteíncslkkai is reagáltak. Az ismertetett, B csoportba, tartozó átreptococcusspecifikus monoklonális ellenanyagok reakcióit a 6,. táblázat tartalmazza. Mindegyik monoklonális elenanyag mind a 46, S csoportba tartozó -Séreptococcussal reagált. Emellett felismerték a vizsgálatba bevont 3 szarvasmarha eredetű S. agalactiae törzset is. A 3A2 jelzésű monoklonális ellenanyag 19, B csoportba tartozó Sfcreptococcast ismert fel, 9 Ia/c szerotípusű ízolátumot és 10 V. szeretípusú izolátumot. A többi monoklonális ellenanyagot ezekkel a további törzsekkel szemben nem vizsgáltuk.

Ereckáényeínk arra utalnak, hogy mind a 65 eddig vizsgált, B csoportba tartozó őtreptococcus és a 3 szarvasmarha eredetű 5. uga.Lscfiae törzs termelte a (39. azonosítószámú szekvenciának megfelelő) B csoportba tartozó Streptococeus proteint. Még lényegesebb, hogy az ezáltal a 8, 8 csoportba tartozó Sfreptococcus-specífikés monoklonális ellenanyag ν·* Φ által felismert epitópok széles körben elterjedtek és konzerváltak a B csoportba, tartozó streptococcusokban, Azt is kimutattuk, hogy ezek az epitópok nem korlátozódnak csupán a szerolögiailag rokon izolátumokra, hiszen a vizsgálat kiterjedt az összes eddig ismert B csoportba tartozó Streptocoocüs szerotípns reprezentatív törzseire, ideértve a legfontosabb kórokozó- csoportokat is.

Összefoglalva, az ebben a példában ismertetett -eredményeink. egyértelműen igazolták, hogy a találmány szerinti B csoportba tartozó dtreptococcus proteint mindegyik B csoportba tartozó Streptococcus termeli, továbbá, hogy antigénhatás szempontjából az nagyfokban konzervált.

6, táblázati 8, Β csoportba tartózd· Síreptococcss-specíiiküs fconoklonális ellenanyag western·

Ifönoklonális ellenanyagok

A a

jookior

**' ™ -----------1 5 1 ális ellenanyagok által feiisaert §, agalactiae törzsek sráa 1

! í 1 5 í

......: ! la vagy la/c j Í6i |

! 1 τ' ZD t í Ρ'ΐ \s!

! II ííl \ * t :.

ΠΙ j Hí

i IV i Í2) !

{ V Ui j

y.y* í Vi i 'Λί

j vn Í2Í

vnd íl!

ΗΤίΙδή ! i 1

összes

Szar- í Ί vásárt: i a ars- f detá i < í ' '

I 3A2i

s

z

4

2

2 ........ ......

Λ, ó

2

A.

18

46

1 !

? 5A12 í..................................................

6

4

4

Ϊ

Λ z

Λ : Z

2

1

18

46

2 ....

rp·', 1 vbii

Λ $

3

4

t *

l*S z

2

2

ώ

1..

13

46

! * ( ..........2

I S8S

i 6

Λ ' z

ί Λ. «

2

Λ

2

2

ί ί

10

>í

| 3 1

8E11

í: V·

........................

! Λ ! <i

4

Λ z

12

: Z

! Λ z

! Λ

1 18

i 46

, i

I I 2 J A· λν w·1 A·

I 8

3

4

! 2 : z;

2

$ A*

Ϊ 2

2

1

j 10

46

•5 ! <

ϊ Λ V* vM A t X Η í i Α» A A. X

ο ...........11....... í ,

ί Λ 1 <

4

! 4

1 2

2

2

V V 1 i

ί ί ί i

1Ö

46

: í ί 3

2ÖG2

í 6

ί 3 .....

;.............. ! á

,1 « í

2

:.............. ! j 1 r

Ί ! Λ ! Z

i **> i z

ί 1 ί *

i 10

í 4S

3

szerotlpusú törzset is fsiisasrt, ' Ezeket a törzseket, w szerotipízáltuk.

« « » > ’♦ » $

X » ♦ ♦ » » ♦ í » t »<

<«( « < ⁴ « ««» ♦*» * * * * x « <♦ » x ΐ *** * ♦ Μ ♦-»*

SZEKVENCIALISTA <210> 1 <211> 4514 <212> DNS <213> Streptococcus < 2 2 u >

<221> CDS <222> (3).,.(464) <221> CDS <222> (534)...(837) <22 3>

<22I> CCS <222> (1024).,.(1765) <221> CDS <222> (1841)...(4288) <400> 1

ta

tct

ggc

δ-δδ

gag cca

gCt

aat:

ogt

ttt

agt

tgg get aaa

üí a <-

Ser

Gly

Lys

Glu Pro

Aia

Asn

Arg

Phe

Ser

Trp Als Lys

Ajsh

Lys

a te.

aat

gga. fetc

att

gr a.

act

cfca

gcs.

gr a act ato

•tt®

ttt

i Leu Ile

i Giy The Ili

s Aa«

Thr

: Le'

<t M.:·. >:

i A'sa Thr 11

Phe

ttt

gca

gtt

C«3

fcfcc ata

ett

δ«3

gat

tac cet gga

&s a

acc

Phe Aia Val Cin Phe

Ile Sly Leu Lys Pro Asp Tyr Pro Gly Lys Thr

*0 «0 0 fcac· ttfc att atc cta ttg· aca gca tgg act ttg atg gca tta gfca act

Tyr Phe Ile Ile Leu Leu Thr Alá Trp Thr Leu Met Alá Leu Val Thr.

get. tta gfcg gga tgg gat aat agg tat ggt tcc fcfcc ttg tcg fcfca tta

Alá Leu Val Gly Trp Asp· ASn Arg Tyr Gly Ser Phe Leu Ser Leu Leu ata tta tta ttc cag ett ggt tea. agc gca gga act tac cca ata gaa

Ile· Leu Leu Phe Gla Leu Gly Ser Ser Alá Gly Thr Tyr Pro 'He· Glu ttg ag-t cet a.ag ttc ttt caa aca att -caa cca ttt fcsa ccg atg act

Leu Ser Pro Lys Phe The Gla Thr He Gin Pro Phe Leu Pro Met Thr tac tet gtt tea gg-a tta aga gag aca- atc teg ttg -acg gga gac gtt

Tyr Ser Val. Ser Gly Leu Arg Glu Thr He 'Ser Leu Thr Gly Asp Val sac -cat caa tgg aga atg cta gta atc tfct tta gta tea teg atg ata ftsn Hls Gin Trp Arg Pfet Leu Val Ile Phe Leu Var Ser Ser -Met Ile ett get att ott att tat cgt aaa caa gaa gat taatagaaag tatctagtga

Leu Alá Leu Leu He Tyr Arg Lys Gin Glu Asp cagáctaaca gt-atgatatg gtatgteaaa gtattfcagga ggagaagat atg tat act

Met Ser Thr tta aca ata att att gca aca tta act g-ct ttg gaa cafc

Leu Thr Ile He He Alá Thr Leu Thr Alá Leu -Glu His atg tat ttg gag seg tta geo acc cag tea aat atg act

Met Tyr Leu Glu Thr Leu Alá Thr Gin Ser Asn Met Thr ttt tat att

Phe Tyr He ggg aag att

Gly Lys Ile ttt agt atg tet aaa gaa -gag ttg tea tat tta ccc gtt att aaa ct-t

Phe Ser Met	Ser Lys	Glti	Glrí	Leu Ser Tyr Leu Pro Val He Lys	Leu
.tt aag aat <	caa ggt	gta	tac	aac gge ttg att gge cta ttc cta	ett
Phe Lys Asn	Gin oly	Val	Tyr	Asn Gly Leu He Gly Leu Phe Leu	Leu
:at ggg tta	tat att	tea	cag	aat caa ga.a att gta get gtt ttt
Tyr Gly Leu	Tyr 11%	Ser	Gin	Asn Gin Glu He Val Alá Val Phe	Len
atc aat gr.a	ttg cta	gtt	get	att tat ggt got ttg aca gtt gat	&&&
Ile Asn Vei	Leu .Leu	Val	Ar a	Ile Tyr Gly Alá Leu Thr Val Asp

**# Λ « * *«« * ♦ A « 4' * >

« * *♦ νΚ aaa atc tta tta aaa cag ggt ggt tta cet ata tta get ett. tta aca

Lys Ile Len. Len Lys Gin Gly Gly L«u Pro ile Len Alá Leu Leu Thr ttc tta ttt taatactact tagccgttcg a-tttagttga a-eggetttta

Phe Lee Phe gtaatcatt-t ttttctcata atacaggta-g tfctaa-gtaat ttgtcfctfeaa. aaatagtata atataactac gaattcaaag agaggtgact tfegatt atg a-ct gag aac tgg tta

Met Thr Gin Asn Trp Leu cet act aaa gat ggt tea gat att tat tat cgt gfcc gtt. ggt caa ggfc

His Thr .Lys Asp Gly Ser Asp Ile Tyr Tyr Arg Val Val Gly Gin Gly caa cég- att gtt ttt tta cat ggc aat age tta agt agt ege tat ttt

Gin Pro ile Val Phe Leu His Gly Asn Ser Leu Ser; Ser Arg Tyr; Phe gat aag caa ata gca tat ttt tet aag tat tac caa gtt att gtt atg·

Asp Lys Gin Ile Alá Tyr Phe Ser Lys Tyr Tyr Gin Val 11« Val Met gat agt aga ggg cat -ggc aaa agt. cat gca aag cta aat acc att agt .Asp Ser Arg Gly His Gly Lys Sex His Alá Lys Len Asn Thr Ile Ser ttc agg caa ata gca gtt gac tta aag gat atc tta gtt cat tta gag

Phe Arg Gin Ile Alá Val. Asp Let Lys· Asp Ile Len Val His Leu Gin att. gafe aaa gtt ata ttg gta ggc cat ag.c gat ggfc gcc aat tta get

Ile Asp Lys Val Ile Leu Val Gly His Ser .Asp Gly Al.a Asn Leu Alá tta gtt ttt caa acg afcg ttt cca ggt. atg gtt aga ggg ett ttg ett

Len Val. Phe Gin Thr Met Phe Prc Gly fist Val Arg Gly Len Len Leu aat tea ggg aac ctg act att cat ggfc cag cga tgg tgg gat att -cfefc

Asn ser Gly Asn. Leu Thr Ile His· Gly Gin Arg Trp Trp Asp Ile .Leu tta gta agg att gcc cat aaa ttc ett cac fcafc fcta ggg aaa ctc ttt

Len Val Arg Ile Ale Tyr Lys Phe Len His Tyr Len Gly Lys Len Phe ccg tafc arg agg caa aaa gcfc caa gtt att heg cfcfc atg ttg gag gat

Pro Tyr Met- Arg Gin Lys Alá Gin Val Ile Ser Lee Met Leu Gin Asp ttg a-ag att agt cca get gat tta -cag cat gtg tea act cet gta atg

Leu Lys lle Ser Pro Alá Asp Leu Gin His Val Ser Thr Pro Val Mefc gtt ttg gtt gga aet aag gac ata att aag -tta aat cat tct aag aaa

Val .Lan Val Gly Asn Lys Asp lle lle Lys Leu Asn His Ser Lys Lys ett get tct tar. ttt cca agg ggg gag ttt tat tct tta gtt ggc ttt

Len Alá Ser Tyr Phe Pro Arg Gly Glu Phe Tyr -Ser Leu Val Gly -Phe ggg cat cac att att aag caa gat tcc cat. gtt ttt aat att att gca

Gly His His lle lle .Lys Gin Asp Ser His Val 'Phe Asn lle lle Alá aaa aag ttt a te aac gat a cg· ttg aaa gga gaa att gtt gaa aaa get

Lys Lys Phe lle Asn Asp Thr Len Lys Gly Glu lle Val Glu Lys Alá aat t gaaaaagtca aatcactgac ttctgtgatt aaaafcfcgfcat tttfctatatc

Asn tgttttagt.g ettattattg fctgaa at gat tea ttt gaa a-cg aac tat ttc

Tyr Asp Ser Phe Glu Thr Asn 'Tyr Phe

tgt tga	gca act		gag	tgt ttt tgg gca	att ate	tcc aat	gaa tct
Cys *	Alá Thr	liVs	Glu Cys Phe Trp Alá	lie lle	Sár Asn	Glu Ser
ttt ett	aat tat	cet	tgt	ggg ggfe tat. ege	tgt ett	&CC <$&c	aae egg
Phe Lee	: Asn Tyr	Pro	- Cys	, Gly Gly Tyr· Arg	Cys Leu	Thr Asp	Asn Arg
ata tga	ett tgt	acfc	Qcid	tgg act ttt acg	tac aga	taa aag	caa aag
lle *	Leu Cys	Thr	Glu Trp Thr Phe Thr	Tyr Arg	* Lys	Gin Lys
gfca t a fc	ttt aca	gac	tag	ttg gtg tat caa	cac ttt	taa taa	ett gtc
Val Tyr	Phe Thr	Asp		Leu Val Tyr Gin	His Pha	-* +.	Lm Val
agg att	egg tgg	ett	aat	cga tat tgg gtt	geg cat	ggc ttt	tta tgg

Arg lle .Arg Trp Leu Asn Arg Tyr Trp Val Alá His Gly Phe Leu Trp ta.a aaa agg tea -aga gaa gag tga cet aag aga agt gac tc-g ttt ttt * Lys Arg Ser Arg Glu Glu * Pro Lys Arg Ser Asp Ser Phe Phe

acc eta tct tat ttc tgg tct gtc att tat tag tgt gat. tgc ett aat
Thr Len Ser Tyr Pr	na Trp Ser Val lle Tyr * Cys Asp Cys Leu. As
Ci£<í CCa iú&tl CCt	• tea t.gc caa agc tag tgt tga tta eta tta ttt

<

* * $ * V ♦ <·» ” . * # Φ Φ

Kis Glu fre Tyr Phe Ser Cys Gin Ser * Cys * Len Len Leu Phe ggt afct aat tgg tgc tag tat gta ttt tcc tgt tat tta ttg gat ttc

Gly He Asn Trp Cys * Tyr.· Val Phe Ser Cys Tyr Leu Leu .Asp Phe tgg tea taa agg aag cca tfea ttt egg aga. tat gc-o atc tag tac teg

Trp Ser * Arg Lys Pro Len Phe Arg Arg Tyr Aia Ile * Tyr Ser tat aaa att agg fcgt t.gfc ttc fcfct ttt. tga atg ggg a tg tgc ggc ege

Tyr Lys Ile Arg Cys Cys Phe Phe Phe *' Két Gly Két Cys Gly Arg agc att tat aat tat egg tta ttt aafc ggg cat tea. fc-ct acc agt. tta

Ser Ile Tyr Asn Tyr Arg Leu Phe Asn Gly His Ser Ser Thr: Ser Leu taa aat fcfct acc act att ttg tat tgg ttg fcgc cgt egg· gat töt atc * Asn Phe Thr Thr Ile Leu Tyr Trp Leu Cys Arg Arg Asp Cys He cet tat toc egg tgg att agg aag ttt tea att agt tet att tac agg

Pro Tyr Ser Arg Trp He Arg Lys Phe * He Ser Ser Ile Tyr Arg gtt fcgc tgc cga ggg act acc taa aga aac tgt. ggt tgc atg gtt att.

Val Cys Cys Arg Gly Thr Thr * Arg Ásn Cys Gly Cys Két Val Tle act tta fc-cg ttt agc cta cfca tat tat tcc att ett tgc agg tat cta

Thr Leu Ser Phe Ser Leu Leu Tyr Tyr Ser Ile Leu Cys Arg Tyr Lea ttt ett tat cca tta ttt agg tag tea aat aaa tea a cg tta. tga aaa

Phe Leu Tyr Pro Leu Phe Arg * Ser Asn Lys Ser Thr Leu * Lys tgt ccc gaa .aga gtt agt a te aac tgt tét aca aac cafc ggt gag cca

Cvs Pro Glu Arg Val Ser Ile Asn Cys Ser Thr Asn Kis Gly Glu Pro ttt gat gcg tat ttt agg tgc att ett aat att ttc aac agc att ttt

Phe Asp Alá Tyr Phe Arg Cys He Leu Asn He Phe Asn Ser Tle Phe tga aaa tat tac tta tat tat gtg gtt gea eaa get agg cet. gga ccc * Lys Tyr Tyr Leu Tvr Tyr- Vaj. Val Alá Glu Alá Arg Leu. Gly Pro att aca aga aca aat gtt atg gca gtt tcc agg ttt att get ggg ggt

Ile Thr Arg Thr Asn Val Mefc Alá Val Ser Arg Phe He Alá Gly Gly ttg ttt tat tét ett agc tag aac tat tga tea aaa agt gaa aaa tgc

Leu Phe Tyr Ser Leu Ser * Asn Tyr * Ser Lys Ser G'lu Lys· Cys ttt fccc aat tgc tat tat ctg gat tac ttt gac att gtt tta tct taa

P'he Ser Asn Cys Tyr Tyr Leu Asp· Tyr Phe Asp Ile Val Le-u Ser * ttt agg tea tat tag ttg gcg act ate ttt ctg gtt tat ttt act att

Phe Arg Ser Tyr * Leu Alá Thr Ile Phe Leu Val Tyr- Phe Thr Ile gtt agg ett att agt cat taa gcc aac tct cfea taa aaa aca att tat

Val .Arg Len Ile Ser His * Alá Asn Ser Leu * Lys Thr Ile Tyr tta tag ctg gga aga gcg tat taa gga fegg aat cat tat egfc tag ttt.

Leu * Leu Gly Arg Alá Tyr ★ Gly Trp Asn Kis Tyr Arg * 'Phe aat ggg agt. tct att tta tat tgc agg act act att sec tat vág ggc

Asn Gly Ser Ser Ile Leu Tyr Cys Arg Thr Thr Ile Pro Tyr Gin Gly tea tat tac agg tgg tag tat tga acg cet gca tta tat cat aga atg

Ser Tyr Tyr Arg Trp * Tyr * Thr Pro Alá Leu Tyr Kis Ser Hét gga gcc gat agc att ggc tac gtt gat tct tac tct cgt tta ttt atg

Gly Alá Asp Ser Ile Gly Tyr Val Asp Ser Tyr Ser Arg Leu Phe Met ttt ggt taa gat ttt aca agg aaa atc ttg tea gat tgg' tga tgt gtt

Phe Gly * Asp Phe Thr Arg Lys. ile Leu Ser Asp Trp * Cys Val caá tgt gga teg tta taa aaa act act tea agc tta egg tgg fctc tfcc

Gin Cys Gly Ser Leu * Lys Thr Thr Ser Ser Leu Arg Trp -Phe Phe gga tag egg ttt agc ett ttt aaa tga taa aag get cta ctg gta cca

Gly * Arg Phe Ser Leu Phe Lys * * Lys Alá Leu Leu Val Pro aaa aaa tgg aga aga ttg cgt tgc gtt cca att tgt aat tgt caa taa

Lys Lys Trp Arg Arg Leu Arg Cys Val Pro lls Cys Asn Cys Gin ♦

taa atc tct	tat	tat ggg gga aec	agc	egg tga tga
*	Met Ser Tví	ϊ Tyr Gly Gly Thr	Ser	Arg *	x·
tga	agc tat	tga	atc gtt tat tga	tga	tac tga
*	Ser Tvr	•íf	Ile Val Tyr *	X	Cys *	*
cet	tgt ttt	tta	cag tat tgg aca	gaa	gt t gac	act.

cac tta tat teg

Kis Leu Tyr Ser get aga cta tga

Alá Arc Leu * act ttt aca tga

--.- - .. „ _w * V x < <

* * * » # X ♦ X# ♦ ο »* * < «* *.. *

Pro Cys The Leu Gin Tyr Trp Thr Glu Vai Asp Thx^- Thr Phe Thr *

gta -fcgg. ttfc fcga -cfcfc	tat gaa agt fcgg tga gga fcgc fcfct a-gfc taa ttfc
Vai Trp The * Lei	i Tyr Glu Ser Trp * Gly Cys Phe Ser * Phe
aga aac gfct tac tet	taa agg g-aa tea gta c&a acc ttt cag aaa fegc

Arg Asn Va.l Tvr Ser * Arg Glu * Val Gin Thr phe Gin Lys Cys

cet aaa tag agt fcga	aaa gga tgg fctfc cta ttt ega agt tgfc aca afcc
Pro Lys * Ser *	Lys Gly Trp Phe Leu The Arg Ser Cys Thr He
geo aca tag tea aga	get acfc aaa fcag ttfc gga aga gat fctc tsa tac
Alá Thr * Ser Ar>:	j Alá Thr Lys * Phe Gly Arg Asp Phe * Tyr
ttg gtt aga agg acg	tcc fcga aaa agg ttfc ttc act agg ata ttt taa
Leu Val Arg Arg Thj	; Ser * Lys Arg Phe Leu Thr Arg Iie The *
taa aga tta ttfc cca	aca agc ccc aat agc ttfc ggfc aaa aaa fcgc fcga

* Arg Leu The Pro Thr Ser Pro Asn Ser The Giy Lys Lys Cys * aca cga agt fcgfc fcgc ttfc fcgc 6aa tat tat góc aaa óta fcga aaa gag

Thr .Arg Ser Cys Cys The Cys * Tyr Tyr Alá Lys Leu * Lys Glu

tat. tat ctc tafc tga	fctfc aat gcg tea cga fcaa aca gaa aat tcc gaa
Tyr Tyr Leú Tyr *	Phe Asn Alá Ser Arg * Thr Glu Asn Ser- Glu
tgg cgt tat gga ttt	cet ctfc. fcfct ate afcfc afcfc ctc tta fc.fc.a tea aga

Trp Arg Tyr Gly Phe Pro Leu Phe Xie Ila He Leu Leu Leu Ser Arg •gaa ggg -ata coa cta fctfc tga fcfefc ggg gat ggc a« ttfc ate agg agfc

Glu Gly I'le Pro Leu Phe * Phe Giy Asp Gly Thr The Iie Arg Ser tgg fceg -cgt fcga aac a.ag ttfc fcgc tea aga gag aat ggc gta fccfc tgfc

Trp Ser Arg * Asn Lys· The Cys * Arg Glu .Asn Gly Val Ser Cys

cta tea fcfct agg tag	tea ttt cfca ctc afct taa fcgg fctfc aca caa gta
Leu Ser Phe Arg *	Ser Phe Leu Leu Iie * Trp Phe Thr Gin Va.l

ta.a gaa gaa gtfc tac acc afcfc gfcg gfcc gga aog tta tat fcfcc fcfcg fctc * Glu Gin Val Tyr Thr Iie Val Val Gly Thr Len Tyr Phe Leu PL· fceg ttc gfcc ctg gfct aat ttc fcgc tat fcfcg fcgc cet afcfc aat gga aga ***♦ ♦ *** ♦.·» « * ♦ « » « * *♦ · « #«« * * »♦ ♦ <

* * * * ♦ X» Λ

Sex Phe 'Val Leu Val Asn Leu Cys Tyr Leu Cys Pro Ile Asn Gly Arg tag taa aat taa gat t-gt taa a taágotttafc tfcggcaatta aaaagageat * *' Asn * Asp Cys * gtcatgegac atgct-ctttt t.aaafecafcfcfe aataccattg attgcttgaa totactttat aatatgatgt gcttttaaat attgtttagc tacfcgtagct gct-gatttat gctttacagc tacttggtag fctcatttctt gcafettcfctt ttcagtgata fcgaccagcaa gfcttafctgag agcttfcfettt acttga

<210>	·->
<211>	154
<212>	PRT
<213>	Str
<480>	2

Ser Gly Lys Glu Pro Alá Asn Arg Phe Ser Trp AI.a Lys Asn Lys Leu

I 5 .10 15

Leu Ile Asn Gly Phe Ile Alá Thr Leu Alá Aia Thr Ile Leu Phe Phe

Aia Val Gin Phe He Gly Leu Lys Pro Asp Tyr Pro Gly Lys Thr Tyr

Phe Ile

He Leu Leu Thx Alá Trp Thr Leu Mer Alá Leu Val Thr Alá

60

Leu Val Gly Trp Asp Asn Arg Tyr Gly S'er Phe Len Ser Leu Leu He sn

Leu Léu Phe Gin Leu Gly Ser Ser Alá Gly Thr Tyr Pro He Glu Leu

5 50 §5

Ser Pro Lvs The Phe Gin Thr Ile Sin Pro Phe Leu Pro Mst. Thr Tyr * *

100

185

110

Sár Val Ssr Gly Leu Arg Glu Thr He Ser L.eu Thr Gly Asp Val Asn

115 ,20

12!

His Gin Trp Arg Met Lsu Val Ile Phe Leu Val Ser -Ser Met He leu

130

135

Aia Leu Leu He Tyr Áru Lys Gin Glu Asp

145

150 <210> 3 <211> 118 <212> P RT <213> Strspfcococcus <400> 3

Met Ser Thr Leu Thr He He He Alá Thr Leu Thr Alá Leu Glu His

18 15

Phe Tyr He Met Tyr Leu Glu Thr Leu Alá Thr Gin Ser Asn Met Thr

2G 25 30

Gly Lys He Phe Ser Met Ser Lys Glu Glu Leu Ser Tyr Leu Pro Val

He Lys Leu Phe Lys Asn Gin Gly Val Tyr Asn Gly Leu He Gly Leu

Phe Leu Leu Tyr Gly Leu Tyr He Ser Gin Asn Gin Glu He Val Alá

Val Phe Leu The Asn Val Leu Leu Val Alá He Tyr Gly Alá Leu Thr

30 §5

Val .Asp Lys Lys He Leu Leu Lys Gin Giy Gly Leu Pro He Leu Alá « ♦

100

Leu Leu Thr Phe .Leu Phe

115 <21Ö> 4 <211> 247 <212> PRT < 213 > S t r ép toc o c-cus <400> 4

105 .10

Mfefc Thr Gin Asn Trp Leu His Thr Lys Asp Gly Sex Asp lle Tyr Tyr

Arg Val Val Oly Gin Gly Sin Pro He Val Phe lau Kis Gly Asn Ser

25 30

Leu Ser Ser Arg Tyr Phe Asp Lys Gin He Alá Tyr Phe Ser Lys Tyr

Tyr Gin Val He Val Met Asp Ser Axg Giy His Gly Lys Ser His Alá 'Leu Asn Thr lle

Ok!

rys

He

Ser Phe Arg Gin rie Alá Val

75 l>eu Lys Asp

Leu- Val Kis Len Glu Xle Asp Lys Val Ue Leu Val Gly His 5«

00 85

Asp Giy Al.a Asn Len Alá Len Val Phe Gin Thr Hét Phe Pro- Gly Hét

100 105 110

Val Arg Gly Len Leu Len Asn Ser Giy Asn Len Thr. lle Kis Gly Gin

Sly

115 ’rp

120 125

Axq Trp Trp Asp He tea Len Val Arg lle Alá Tyr Lvs Phe Len

His

130

135

1.40 ► Μ·

Tyr Leu Gly Lys Leu Phe Pro Tyr Met Arg Gin Lys Aia. Gin Val lie

ISO

155

160

Ser Leu Met Leu Glu Asp. Leu Lys Ile Ser Pro Aia Asp Leu Gl.n His

165

170

175

Val Ser Thr Pro Val Két. Val Leu Val -Gly Asn Lys Asp Ile .lie Lys

180

185

190

Leu Asn Kis Ser Lys Lys Leu Alá Ser Tyr Phe Pro Arg Gly Glu Phe

195 :00

Tyr Ser Leu Val Gly Phe Gly His His- Ile lie Lys Gin Asp Ser His ·? ·: Λ > » r. -n j λ

4, 1 V ώ Λ ν' .& Ζ- V

Val Phe Asn Ile Ile Alá Lys Lys Phe Ile Asn. Asp Thr Leu Lys Gly

225 230

Glu Ile Val Giu Lys Aia Asn

245 <210> 5 <2I1> 738 <212 > FRT <213 > Streptococcus

235

0

Tyr Asp Ser Phe

Trp Alá Ile Ile

Tyr Arg Cys Leu

Glu Thr Asn Tyr

c.

Ser Asn Glu. Ser

Thr Asp Asn Arg

Phe Cys Alá Thr

Phe Leu Asn Tyr

Ile Leu Cys Thr

Lys Glu Cys Phe

Pro Cys Gly Gly

Giu Trp Thr Phe

Thr Tyr Arg Lys Sin Lys Val Tyr The Thr Asp Leu Val Tyr Sin His

Phe Leu Val Arg He Arg Trp Le a Asn Arg Tyr Trp Val Ara His Gly

Phe Leu Trp Lys Arg Ser Arg Glu Slu Pro Lys Arg Ser Asp Ser Phe

Phe Thr Leu Ser Tyr Phe Trp Ser Val Ile Tyr Cys Asp Cys Leu Asn

100

105

110

His Slu. Pro Tyr Phe Ser Cys Sin. Ser Cys Leu Leu Leu Phe Gly Ile

128

125

Asn Trp Cys Tyr Val Phe Ser Cys Tyr Leu Leu Asp Phe Trp Ser Ara

130

135

Lys Pro Leu Phe Arg Arg Tyr Alá He Tyr Ser Tyr Lys He Arg Cys

ISO

155

160

Cys Phe Phe Phe Met Gly Met Cys Gly Arg Ser He Tyr Asn Tyr Arg

165

170

175

Leu Phe Asn Glv His Ser Ser Thr Ser Leu Asn Phe Thr Thr Ile Leu

ISO

185

ISO

Tyr Trp Leu Cys Arg Arg Asp Cys Ile Pro Tyr Ser Arg Trp He Arg

195

200

205

Lys Phe ile Ser Ser Ile Tyr Arg Val Cys Cys Arg Giy Thr Thr Arg

2.10 215 220

Asn Cys Gly Cys Méfc Val Ile Thr Leu Ser Phe Ser Leu Leu Tyr Tyr

225

230

235

240

Ser Ile Leu Cys Arg Tyr Leu Phe Leu Tyr Pro Leu Phe Arg Sár Asn ?á a

250 sah

Lvs Ser Thr Leu Lys Cys Pro Glu Arg Val Ser Ile Asn Cvs Ser Th

OC ** φ φ

50

270 φ φ * «φ * * * Φ φ -» ► ** *φ φ* φ.

Asn Kis Gly Gin Pro Phe Asp Al-a Tyr Phe Arg Cys lle Len Asn Ils

280

28.5

Phe Asn Ser He Phe Lys Tyr Tyr Leu Tyr Tyr Vai Val Alá Giu Aia >90

SS

300

Arg Leu Gly Pro He Thr Arg Thr Asn Vai Met Alá Val Ser Arg Phe

305

310:

315

320 lle Alá Gly Gly Leu Phe Tyr Ser Leu Ser Asn Tyr Sex Lys Ser Giu .325

330

Lys

Ser

Val

Cys Phe Ser .Asn Cys Tyr Tyr Leu Asp Tyr Pha

340 345

Phe Arg Ser Tyr Leu Aia Thr lle Phe Leu Vai

355 360

Arg Leu lle Ser .Hl·» Aia Asn Ser Leu Lys Thr

335

Asp lle Val Leu

350

Tyr Phe Thr He

365

He Tyr Lau Leu

370

380

Gly Arg Aia Tyr Gly Trp Asn Kis Tyr Arg Phe Asn Gly Ser Ser He

400

5

390

395 neu

Tyr Cys Arg Thr Thr He Pro Tyr Sin Gly Ser Tyr Tyr Arg Trp

405

41.0

Tyr Thr Pro Alá Leu Tyr Kis Ser Met Gly Alá Asp Ser He Gly Tyr

420

425

Val Asp Ser Tyr Ser Arg .Leu Phe Met .Phe Gly Asp Phe Thr Arg Lys

435

440

44.5

He Leu Ser Asp Trp Cys Val Gin Cys Gly Ser Leu Lys Thr Thr Ser

450

455

460

Leu Phe Ly;

Ser Leu Arg Trp Phe Phe Gly Arg Phe í

465 470 475

Len Vai Pro Lys Lys Trp Arg Arg Leu .Arg Cys Val Pro He Cys Asn

Lys Alá Leu

480 ’* X « ♦ ·*« *»-> ♦ ΦΧ -X • « ♦ « * *** ♦ * « * * * * « « *** ·»*' X*

485 4S0 495

Cys

Gin

Met

Ser 500

Tyr

Tvr

Giy

eLy

Thr 505

Ser

.Arc

His

Leu

Τγκ' 510

Ser

Tyr

Tle

Val

Tyr

Cys

Alá

Arg

Leu

Jv'X o

Cys

Phe

Leu

Gin

Tyr

Trp

Thr

515

S2Q

525

Giu

Val

Asp

Thr

Thr

Phe

Thr

Val

Trp

Phe

Leu

Tyr

Glu

Ser

Trp

Giy

53 0

53 5

540

Cys

Phe

Ser

Phe

Arg

Asn

Var

Tyr

Ser

Arg

Giu

Val

Gin.

Thr

Phe

«cin

545

550

£ a

560

Lys

Cys

Pro

Lys

Ser

öly

Trp

Phe

Leu

Phe

Arg

Ser

Cys

Thr

lie

565

570

575

Alá

Thr

Ser

Arg

Alá

Thr

Lys

Phe

Giy

Arg

Asp

Phe

Tyr

Leu

Val

Arg

580

505

590

Arg

Thr

Ser

Lys

Arg

Phe

Leu

Thr

Arg

lie

Phe

Arg

Leu

Phe

Pro

T6»

595

600

605

Ser

Pro

Asn

Ser

Phe

Giy

Lys

Lys

Cys

Thr

Arg

Ser

Cvs

Cys

Phe

Cys

610

815

820

Tyr

Tyr

Alá

Lys

Leu

Lys

Glu

Tyr

Tyr

Leu

Tyr

Phe

Asn

Alá

X.

Arg

625

630

635

640

Thr

Glu

As X:

Ser

Glu

Trp

Arg

Tyr

Giy

Phe

Pro

Leu

Phe

Tle

r le

Ile

645

550

655

Leu

Leu

Ser

Arg

Gr u

Giy

lie

Pro

Leu

Phe

Phe

Giy

Asp

Giy

Thr

680

685

670

Phe

Tle

Arg

Ser

Trp

Ser

Arg

Asn

Lys

Phe

Cys

Arg

Í?A Ü

Asn

Λ*1 o o^y

Val

575

680

88$

Ser

Cys

Leu

Ser

Phe

Arg

Ser

Phe

Leu

Leu

Ile

Trp

Phe

Thr

Glu

Val

6 5 0

595

700

Glu

öle

ve.1

Tyr

Thr

11«

Val

Val

öly

Thr

Leu

7‘vL

Phe

Len

Phe

Ser

705

710

720

Phe Val Lea Val Asn Leu Cys Tyr Leu Cys Pro He Asn Gly .Arg Asn

73'

735

Asp Cys <21ö> 6 <211 > 1 <212> PRT <2.13> Sfreptoeoocns <400> 6

Xaa <210> 7 <211> 154 <212> PRT <213> Sfcreptococeus <400> 7

Ser Gly Lys Glu Pro Alá Asn Arg Phe Ser Trp Alá Lys Asn Lys Leu

Ί: «Γ.

X

Leu He Asíj Gly Phe Ile Alá Thr Leu Ma. Alá Thr lie Leu Phe Phe

25 30

Alá Vai Gin Phe He Gly Leu Lys Pro Asp Tyr Pro Gly Lys Thr Tyr * ** * *»♦a

Phe Ile Ile Leu Leu Thr Alá Trp Thr Leu Met Alá Leu Val Thr Alá

Leu Val Gly Trp Asp Asn Arg Tyr Gly Ser Phe Leu Ser Leu Leu Ile

Leu Leu Phe Gl» Leu Gly Ser Ser Alá Gly Thr Tyr Pro Ile Glu Leu

9S

Ser Pro Lys Phe Phe Gin Thr Ile Gin Pro Phe Leu Pro Két Thr Tyr

100

105

110

Ser Val Ser Gly Leu Arg Glu Thr Ile Ser Leu Thr Gly Asp Val Asn

115

120

12£

His Gl» Trp .Ara Met Leu Val He Phe Leu Val Ser Ser Met Ile Leu

130

135

L40

Ara Leu Leu He Tyr Arg Lys Gl» Glu Asr

145 150 <210> 8 <211> 118 <212> PRT <213> Streptococcus <4G0> 8

Met. Ser Thr Leu Thr Ile Ile Ile Alá Thr Leu Thr Alá Leu Glu His lö

Phe Tyr Ile Met Tyr Leu i Thr Leu Alá Thr Gl» Sex As-rs Met Thr

30

Gly Lys Ile Phe Ser Met Ser Lys Glu Glu Hí Ser Tyr Leu Pro Val x*** 4««4C «,, « * ν * ♦ * β * * . * * * * ’ · «V* 4 4 φΑ(

Ile Lys Len Pha Lys Asn Gin Gly Val Tyr Asn Gly Leu Ile Gly Leu

55 60

Phe Leu Leu Tyr Gly Leu Tyr Ile Ser Gin Asn Gin Gin Ile Val Alá

Val Phe Leu Ile Asn Val Leu Leu Val Alá Ile Tyr Gly Alá Leu Thr

9Ö 55

Val Asp Lys Lys Ile Leu Leu Lys Gin Gly Gly Leu Pro Ile Len Alá

ISO

Leu Leu Thr Phe Leu Phe

115 <210> 9 <211> 24?

<212> PRT <213 > S t reptococcus <40Ö> 9

105

110

Met Thr Glu Asn Trp Leu his Thr Lys Asp Gly Ser Asp Ile Tyr Tyr .15

Arg Val Val Gly Gin Gly Gin Pro Ile Val Phe Leu His Gly Asn Ser

25 30

Leu Ser Ser Arg Tyr Phe Asp Lys Gin Ile Alá Tyr Phe Ser Lys Tyr

Tyr Gin Vaj. Ile Val Met Asp Ser Arg Gly Kis Gly Lys Ser His Alá

55 50

Lys Len Asn Thr Ile Ser Phe Arg Gin Ile Alá Vsi Asp Leu Lys Asp

.... , * « 5 ί * * Λ *

He Leu Val Kis Leu Glu lle Asp Lys Val lle Leu Val Gly His se

Asp Gly Alá Asn Leu Alá Leu Val Phe Gin Thr Hét Phe Pro Gly Met

0

105

110

Val Arg Gly Leu Leu Leu Asn Ser Gly Asn Leu Thr lle His Gly Glu

115

1.2.0

Arg Trp Trp Asp 11« Leu Leu Val Arg lle Alá Tyr Lys Phe Leu His

130

Leu Gly Lys Leu Phe Pro Tyr Hét Arg Gin Lys Alá Gin Val He

140

Tyr

145 150 155 160

Ser Leu Két Leu Glu Asp Leu Lys He Ser Pro Alá Asp Leu Gin Kis

165

Vai Mer. Val i.-eu Var

170

Gly Asn Lvs Asp lle

Gin

5

He

Val Ser Thr Pro

180 185 190

Ser Lys Lys Leu Alá Ser Tyr Phe Pro Arg Gly Glu Phe

Lys

Leu Asn His

195

Tyr Ser Leu

210

Phe ;0ö

20i

Val Phe Asn ile He

225	230
Glu II	e Vai Glu Lys Alá
	245
	η λ
Z X v	Λ \z
<211>	316
<212>	PR?
<213>	Streptococcus

Phe Sly His His lle He Lys Gin Asp

215 220

Alá Lys Lys Phe He Asb Asp Thr Leu

23G

Ser His

Gly

0 * ««ni yr <400> 10

Met

Ile

Kis

Lau

Lys

Arg

Thr

Ile

Ser

Val

Gin

Leu

Lys

Ser

Vai

I

5

10

5 ü X s>

Phe

Gly

Gin

Leu

Ser

Pro

Met

Asn

Leu

Phe

Lsu

Ile

He

Leu

Va I

Gly

20

25

30

Val

Ile

A.i.u

Val

Len

Pro

Thr

Thr

Gly

Tyr

Asp

Phe

Val

Leu

Asn

Oly

35

40

45

Leu

Arg

Thr

Asp

Lys

Ser

Lys

Arg

Tyr

Ile

v!·

Gin

Thr

Ser

T.ro

50

55

60

Cys

Ile

Asn

Thr

Phe

Asn

Asn

Leu

Ser

Gly

Phe

Gly

Gly

Leu

He

Asp

65

70

75

SO

Ile

fCÍ v '‘-jy

Leu

Arg

Met

Alá

Phe

Tyr

Gly

Lys

Lys

Gly

Gin

Glu

Lys

Ser

SS

90

95

Asp

Leu

Arg

Glu

Val

Thr

Arg

Phe

Lee

Pro

Leu

He

Ser

Gly

Leu

100

105

110

Ser

Phe

Ile

Ser

Val

He

Alá

Leu

Ile

Met

Ser

His

He

Phe

His

Alá

115

120

125

Lys

Alá

Ser

Val

Asp

Tyr

Tyr

Tyr

Leu

Val

Leu

Ile

Gly

Aj. a

Ser

Met

130

135

140

Tyr

Phe

Pro

Val

Ile

Tyr

Trp

Ile

Ser

Gly

His

Lys

Gly

Ser

His

Tyr

145

150

155

160

Phe

Gly

Asp

Met

Pro

Ser

Ser

Thr

Arg

He

Lys

Leu

Gly

Vai

Vai

Ser

165

170

175

Phe

Gl u

Trp

Gly

Cys

Alá

Alá

Alá

Alá

Phe

He

Ile

Ile

Gly

Tyr

ISO

18 5

1.90

Lee

Me i:

Gly

Ile

Kis

Lett

Pro

Vai

Tyr

Lys

He

T ( ; V

Pro

Leu

PaAŐ

Cys

He Gly Cys Alá Val Gly lle Val .Ser Len lle Pro Gly Gly Leu

210 215

Ser Phe Glu Len Val Leu Phe Thr Gly Phe A

220

Alá Glu Gly Leu

225

230

Lys Glu 'Thr Val Val Alá Trp Leu Leu Leu Tyr Arg Leu Alá Tyr

245 250 2SS lle lle Pro Phe Phe Alá Gly lle Tyr Phe Phe lle Kis Tyr Leu

240

Tyr

Gly

260

265 ^?0

Ser Gin lle Asn Gin Arg Tyr Glu Asn Val Pro Lys Glu Len Val Ser

275

280

285

Thr Vsi Leu Gin Thr Met Val Ser Kis Leu Met Arg lle Leu Gly Alá >yu

295

300

Phe Len 11« Phe Ser Thr Alá Phe Phe Glu Asn lle Thr Tyr lle 'Met

305 310 32.5 320 i’rp Leu Gin Lys Leu Gly Len Asp Pro Leu Gin Glu Gin Met Leu Trp

325

330

333

Gin 'Phe Pro Gly Leu Leu Len Gly Val Cys Phe He Leu: Leu Alá Arg

340

345

350

Thr Ils

Asp

355

Gin Lys Val Lys Asn Alá Phe Pro lle Alá lle lle Trp

365 lle Thr Len Thr Leu Phe Tyr Leu Asn Len Gly Kis He Ser Trp Arg

SfcU

375

380

Leu Sex Phe Trp Phe lle Leu Leu Leu Leu Gly Len Leu Val He Lys

39Ö

00

Pro Thr Leu Tyr Lys Lys Gin Phe lle- Tyr Ser Trp Gin Gin Arg lle

405

410

4i:

Lys Asp Gly He 11« He Val Ser Leu Met Gly Val Leu Phe Tyr He

420

4.25

430 *♦

Alá Giy Leu Leu Phe Pro He Arg Alá. .His I.le Thr Giy Giy Ser Ile

4s3

440

445

Giu Arg Leu His Tyr He ile Alá Trp· Gitt Pro Ile Alá Leu Alá Thr

5ö 455 4 60

Leu lie Leu Thr Leu Val Tyr Leu Cys Leu Val Lys He Leu Gin Giy

465 470 475 450

Lys Ser Cys Gin lie Giy Asp Val Phe Asn Vai Asp Arg Tyr Lys Lys

435

90

495 jeu Leu Gin Aia Tyr Giy Giy Ser Ser Asp Ser Giy Leu Aia Phe Leu

505 ilO

Asn Asp Lys Arg Leu Tyr Trp Tyr Gin Lys Asn Giy Giu Asp- Cys Val

515 520 525

Aia Phe Gin Phe Val He Val Asn Asn Lys Cys Leu ile 'Met Giy Slu

5.30 5-35 540

Pro Aia Giy Asn Asn Thr Tvr lie Aro Sitt Alá lie Giu Ser Phe He

345

550

555

5oo

Asp Asp .Aia Asp Lys Leu Asp Tyr Asp Leu Vai Phe Tyr Ser He- Giy

565

570

575

Gin Lys Len Thr Leu Len Leu His Sitt Tyr Giy Phe Asp Phe Met Lys

580

58Í

Ϊ90

Vai Giy Giu Asp Aia Len Vai Asn Leu Gin Thr Phe Thr Leu Lys Giy

5Sí

600

605

Asn Lys Tyr Lys Pro Phe Arg Asn Alá Leu Asn Arg Vai Gin Lys Asp

610

620

Giy Phe Tyr Phe Giu. Vsi Vai Gin Ser Pro His Ser Gin Giu Leu Leu

62Í

630

635

0

Asn Ser Leu Giu Gitt rle Ser Asn Thr Trp Leu Giu Giy Arg Pro Giu

645

655

Lys

G I y i?he

Ser 660

Leu

Gly

Tyr

Phe: Asn 665

Lvs

Asp

Tyr

Phe

Gin 670

Gin

Aia

Pro

Ile Aia

Lea

Val

Lys

Asn

Alá

G.lu

His

Glu

Va i

Vsl

Alá

Phe

Alá

675

680

685

Asn

He Mer

Pro

Asn

Tyr

Gin

Lys

Ser

lie

Ile

Ser

1 le

Asp

Lea

Kefe

65 ö

695

7 00

Arg

His Asp

Lys

Gla

Lys

He

Pro

Asn

Gly

Val

Met

Asp

Phe

Leu

Phe

705

710

715

720

Lea

Ser Len

Phe

Ser

Tyr

Tyr

Glu

GXu

Lys

Gly

Tyr

His

Tyr

Phe

Asp

725

730

735

Leu

Gly Mst

Alá

Pro

I/&ri

Ser

Gly

Val

Gly

Arg

Val

Glu

Thr

Ser

Phe

740

T 4 5

750

Aia

Lys Gla

Arg

Két

Alá

Tyr

Lea

Tyr

His

Phe

Gly

Ser

His

Phe

755

760

? 65

Tyr

Ser Phe

Asn

Gly

Leu

His

Lys

Tv r ·*- j *·

Lys

Lys

Lys

Phe

Thr

Pro

Leu

770

775

780

Trp

Ser Gm

Arg

Tyr

Ír e

Ser

Cys

Ser

Arg

Ser

Ser

Trp

Len

He

Cvs

78$

790

795

800

He Cys

Aia

Leu

Leu

Met

Glu

Asp

Ser

Lys

He

Lys

Ile

Val

Lys

805

810

815

<210

> 11

<211

> SIS

<212

> PRT

<213

> Streptoc

occus

<400

> 11

ít Arg lle Leu Gly Alá Phe Leu Xle Phe Ser Thr Alá Fh-e Ph® Glt

Asn lle Thr Tyr lle Hét. Trp Lea Gin Lys Leu Gly Leu Asp Pro Lea

Gin Giu Gin .Met Lea Trp Gin Phe Pro Gly Leu. Lea Leu Glv Val Gys

Phe Xle Leu Len Alá Arg Thr He Asp Gin Lys Val Lys Asn .Al.a Phe

Pro XI® Alá Xle He Trp lle Thr Leu Thr Leu Phe Tyr Le.u Asn Len

70 75 80

GIv His Xle Ser Trp Arg Leu Ser Phe Trn Phe lle Lea Le a Len Leu

Gly Lea Leu Val lle Lys Pro Thr Leu Tyr Lys Lys Gin Phe. Xle Tyr

100

105

110

Ser Trp Gin Giu Arg Xle Lys Asp Gly He lle Xle Val Ser Leu Met

115 ISO 125

Gly Val Lea Phe Tyr He Alá Gly Lea Lea Phe· Pro lle Arg Alá His

130

140 lle Thr Gly Giy Ser lle Gla Arg Leu His Tyr Xle. Xle .Alá Trp Giu

145

150

155 .160

Pro xle Alá Leu. Alá Thr Leu lle Leu Thr Len Val Tyr Leu Cys Leu l65

170

175

Val Lys lle Lea Gin Giy Lys Ser Cys Gin Xle Gly Asp Val Phe Asn

180

185

100

Val Asp Arg Tyr Lys Lys Leu Leu Gin Alá Tyr Gly Giy Ser Ser Asp

153

200

205

Ser Gly Leu Alá Phe Leu Asn Asp Lys Arg Lea Tyr Trp Tyr Gin Ly;

215 « X *♦ «X

Cys Val Alá Phe Gin Phe Val He Val Asn Asn Lys

230 235 240

Cys Leu He Met Gly Glu Pro- Alá Gly Asp Asp Thr Tyr Ile Arg Glu.

245 250 255

Leu Asp Tyr Asp Leu

270

Asn Gly Glu Asp.

225

Alá Ile Glu Ser

260

Val Phe 'Tyr Ser

275

Gly Phe Asp Phe

2S0

Phe Ile Asp Asp .Alá Asp Lys

275

Ile Gly Glu Lys Leu Thr Leu

280

Mefc Lys Val Gly Glu Asp Alá

295

Thr Phe Thr Leu Lys Gly Asn Lys Tyr Lys Pro

305

Asn Arg Val Glu

His Ser Gin Glu

340

Len Glu Gly Arg

355

Asp Tyr rha Gm

370

Glu Val Vei Aia

385

He Ser He Asp

310

315

Leu Leu His Glu Tyr

285

Len Val Asn Leu Glu

300

Phe Arg Asn Alá Len

320

Val Val Gin Ser Pro

Ile Ser As-n. Thr Trp

350

Gly Tyr Phe Asn Lys

365

Lvs Asn Aia Gin uis

Lys Asp Gly Phe Tyr Phe Glu

325 330

Leu Leu Asn. Ser Leu Glu Glu

345

Pro Glu Lys Gly Phe. Ser Leu

360

Gin Alá Pro He Alá Leu Val

375 380

Phe Alá Asn He Met Pro Asn Tyr Glu Lys Ser Ile

330 335 400

Leu Mefc Arg Kis Asp Lys Gin Lys He Pro Asn Gly

415

405

410

Val Mefc Asp Phe Leu Phe Leu Ser Leu. Phe Ser Tyr Tyr Gin Glu Lys

420

Gly Tyr Hís Tyr

435

425

430

Phe Asp Len Gly Két Ma Pro Leu Ser Gly Val

4 ^:ö 4 4 5 «0 X 0

Arg Val Glu Thr Ser Phe Alá Lys Gin Arg Mefc Alá Tyr Leu Val Tyr

455

Hl s

465

Lys

450

Phe Gly Ser His Phe Tyr Ser Phe Asn Gly Len Hls Lys Tyr

4.70

475

460

Lys Phe Thr Pro Leu Trp Ser Glu Arg Tyr He Ser Cys Sei

Lys

480

Arg

485

S9ö

Ser Ser Trp Leu He Cys Alá Hé Cys Alá Leu Leu Két Glu Asp Ser

500

Lys Ils Lys He Val Lys

515 <210> 12 <211> 229 <212> BRT < 213 > S t r ep fco co-ccu s

505

510

As» Phe Asp H.e Glu Thr Thr Thr Phe Giu Alá Mefc Lys Lys Kis Alá i 5 10 .15

Ser Leu Leu Glu Lys He Ser VaX Glu Arg Ser Phe Ile Glu Phe Asp

Lys Leu Leu Leu Alá Pro Tyr Trp Arg Lys Gly Két Leu Alá Leu ils

Asp Ser His Alá Phe Asn Tyr Leu Pso Cys Leu Lys Asn Arg Glu Leu

Gin Leu Ser' Alá Phe Leu Ser Gin Leu Asp l,ys Asp Phe Leu Phe GI>.

Thr Ser Glu Gin Alá 'Trp Alá Sér Leu He Leu Ser Mer. Glu Val Glu

His Thr 'Lys Thr phe Leu Lys. Lys Trp Lys

100 se 55

Thr Ser Thr His Phe Glu

105 110

Lys Asp Val Glu His Tle Val. Asp Val Tyr Arg Ile. Arg Glu. Gin Met

115

120

Gly Leu Alá Lys Glu His Leu Tyr Arg Tyr Gly Lys Thr Ile Tle Lys .30

135

Gin Aia Glu Gly Ile Arg. Lys Alá Arg

150

140

Leu Hét Val Asp Phe Glu

155 160

Lys Tle Glu Gin Leu Asp Ser Glu Leu Alá Ile His Asp Arg Kis Glu

165 .170 .75 rre Val Var Asn Gly Gly Thr Leu Tle Lys rys Leu Giy íré r.ys Pro

180 185 190

Gly Pro Sin Mefc Gly Asp Ile Ile Ser Gin Ile Giu Leu Alá lie Val

185

200

05

Leu Gly Gin Leu lie Asn Glu Glu Glu Alá

210 215

Gin Tyr Leu Met Asp

225

He Leu His Phe Val. Lys

0 <21G> 14 <21 .!> 622 <212> FRT <213> streptococcus * *

Met Ser Asp Phe Leu Val Asp Gly Leu Thr Lys Ser Val Gly Asp Lys

I O 10 13

Thr Val Phe Ser Asn Val Ser Phe He He Kis Ser Leu Asp Arg Ile

25

Gly Ile Ile Gly Val Asn. Giy Thr Giy lys Thr Thr Leu Leu Asp Val

He Ser Gly Glu Leu Giy Phe Asp Gly Asp Arg Ser Pro Phe Ser Ser

SÖ

Aia Asn Asp Tyr Lys δ 5

Asp Ser Gin Thr Ile

Két Aia Leu. He Lys

100

Ser Lys Glu Ser Arg

115

Asp Alá Trp Ser He

130

Gly He Thr Asp Leu

145

Arg Arg Arg Val Gin.

165

Leu Leu Leu Asp Glu

180

Trp Leu Thr: Asn Phe

SS

Thr His Asp Arg Tyr

2.10

He Aia Tyr Leu Lys

Leu Asp Thr Val Leu

SO

Glu Tyr Glu Len Leu

105

Leu Glu Lys Val Met

120

Glu Ser Glu Val Lys

5

Gin Leu Ser Val Gly .Ϊ. O Ü

Leu Aia Gin Val. Leu

170

Pru Thr Asn His Leu

5

Gin Glu Pro Asp Phe Asp

8G

Ser Ser Asp Leu Arg Glu

Leu Asn His Tyr Giu Glu

0

Aia Giu Met Asp Ser Len

125

Thr Val Leu Ser Lys Len r4o

Gin Leu Ser Giy Giy Leu

155 100

Leu Asn Asp Aia Asp Leu

175

Asp He Asp Thr He Alá

130

Leu Lys Asn Ser Lys Lys Thr Val Leu Phe II·

230

Phe Leu Asp Asn Val

215

Alá. Thr Arg He Éhe Gin

205 ♦ ♦♦ Μ « « leu Asp Lys Alá Gin lle Thr Giu Tyr Gin Gly Asn Tyr Gin Asp Tyr

225

230

235

Val Arg Leu Arg Ara Giu Gin Asp Glu Arg Asp Ara Alá Sex Leu Kis

245

250

255

Lys Lys Lys Gin Leu Tyr Lys Gin Glu Leu Alá Trp Met. Arg Thr Gin

260

270

Pro Gin Alá Arg Ara Thr Lys Gin. Gin Alá Arg lle Asn Arg Phe Gin

275 ö

Asn Leu Lys Asn Asp

29Ö

Mer.

305

Thr Ser Asp Thr Ser Asp

Leu Glu

300

Lys Val He Asn Phe Giu

315 320

Phe Asn

Leu Kis Gin

295 hr Phe Glu Thr Ser Arg He Gly Lys

310

Tyr Pro Asp Lys Ser He Leu Lys Asp

Asn Val Ser Phe Ser

325

Leu 'Leu lle Gin Asn Lys Asp Arg lle Gly

345

Leu

340

He Val Gly Asp

350

335

Asn Gly¹' vaj

Leu Leu Asn

360

Π:

Val Gin Asp Leu Gin Pro

305

Asp ly Lys Sex Thr

355 :er Gly Asn Val Ser Iie Gly Glu Thr lle Arg Val Gly Tyr Phe

Sex Gin Gin Leu His

380

385

Len

Gin Glu Vai Alá

405

Asn Met Asp Gly .Ser

390

Asp Glu Val Lys Thr Ser Val Gly Thr

Lys Ar g Vai He.

335

Val Th.r Glu Len Leu Glu Gin Phe

0 'Ϊ l U

Leu Phe Pro Arg Ser Thr

425 430

Asn Tyr

400

Thr Sár

415

Thr Gin lle Alá Lys Leu Sex Gly Gly Glu Lys Lys Arg Leu Tyr Leu

435 440 445 * φ » * «,4 1*

Leu

Lys

lle

Leu

He

Glu

Lys

Pro

Asn

Val

Leu

Len

Leu Asp

Glu

Pro

450

455

460

Thr

Asn

Asp

Leu

Asp

r re

Alá

Thr

Leu

ί »αΣ

Val

Leu

Glu Asn

The

Len

465

470

475

480

Gin

Gly

Phe

Gly

Gly

Pro

Vei

He

Thr

Val

Ser

His

Asp Arg

Tyr

Phe

485

430

435

Leu

Asp

Lys

Va.l

Alis.

Asn

Lys

He

He

Alá.

Phe

Gin

Asp Asn

Asp

He

500

506

510

Arg

GlU

Phe

Phe

Gr y

Asn

Tyr

Thr

Asp

Tyr

Leu

Asp

Gin Lys

Al a

The

SIS

52:0

525

Asn

Glu

Gin

Asn

G1 u.

Val

He

Ser

Lys

Lys

Ót n

Ser Thr

Lys

Tn r

530

535

540

Ser'

Arg

Glu

Lys

Gin

Ser

Arg

Lys

Arg

Met

Ser

Tyr

Phe Glu

Lys

Gin

545

550

d. b

560

Glu

Trp

Are.

Thr

lle

Gin

Asp

Asp

He

Met

Iie

Leu

Glu Asn

Thr

He

565

570

57 5

Thr

Arg

He

Gin

A.sxí

Asp

Met

Gin

Thr

cyií

Gly

Ser

Asp Phe

Thr

Arg

580

585

c: on

Leu

Ser

Asp

Leu

Gin

Lys

Glu

Leu

Asp

Alá

Lys

Asn

Glu Alá

Len

Len

535

600

605

Glu

Lvs

Tyr

Asp

Arg

Tyr

Glu

Tyr

Leu

Se f

Gin

Leu

Asp Thr

61 ö

615

620

<210> 15 <211> 15?

<212> PRT <213> Streptoooccus *♦'#·* ♦ 4

W-* <4 « 4 <400> 15

Mét lle lle Arg Pro lie lle Lys Asn Asp

IQ

Asp Gin Áia Val Alá Gin

IS

Leu lle Arg Gin Ser Leu Arg Alá Tyr Asp Leu Asp Lys Pro Asp Thr

Alá Tyr Sér

2S

Pro His Leu Asp His Leu ii.e Glu Lys Ser Giy Phe Phe Val lle Glu

Thr Ser Tyr Tyr Glu Lys “S

Glu Arg Asp Glu He lle

Gly Cys Gly Gly Phe Gly Pro· Leu Lys Asn Leu lle Ma Glu Két Cin

70

S0

Lys Val Tyr lle Ara Glu Arg Phe Arg Gly Lys Giy Leu Als Thr Asp

Leu Val Lys Met lie Gin Val Gl.u Ma Arg Lys lle Gly Tyr Arg Gin

100

10'

110

Leu Tyr Leu Gin Thr Alá Ser Thr Leu Ser Arg Alá Thr Alá Val Tyr

120' 125 n*

Lys His Mefc Giy Tyr Cys Ma Leu. Ser Gin Pro lle Alá Asn Asp Gin

140

130

135

Giy Kis Thr Alá Mefc Asp lle Trp Kefe. Xla .:. ti s r 5 0

Lys Asp Leu

155

<210>	1 6
<2H.>	b > θ
< 212 >	PRT
<213>

<4ö0> 16

Met Alá Tyr He Trp Sex Tyr Leu Lys Arg Tyr Pro Asn Trp Leu Trp

Leu Asp Leu Leu Gly ALa Met. Leu Phe Val Thr Val Ile Leu Gly Met

25 30

Pro Thr Alá Leu Alá Gly Met Ile Asp Asn Gly Vai Thr Lys Gly Asp

Arg Thr Gly Val. Tyr

Leu Gly He He Gly

Leu Trp Thr Phe· Ile Met Phe Ile Phe Val Va go

Axg

Ile. Thr Met Alá Tyr Alá Ser Ser Arg Leu

Thr Thr Thr Met He Arg Asp Met. Arg Asn Asp Met Tyr Alá Lys 'Leu

90 95

Gin Glu Tyr Ser His His Glu Tyr Glu Gin Ile Gly Val Sex Sex Leu .00 no

Val Thr Arg Mefc Thr Ser Asp Thr Phe Val Leu Met Gin Phe Alá Glu

1.1.5 ö

125

Met Ser Leu Arg Leu Gly Leu Val Thr Pro Met Val Met Ile Phe Ser

130 135 140

Val Val Met Ile Leu He Thr Ser Pro Ser Len Alá Trp Leu Val Alá

145 ISO 155 160

Leu Val Gly Val Vai Leu Tyr Val Alá Ile Lys

170 175

Val Alá Met Pro Leu

165

Thr Lys Pro Leu Ser Glu Αχ-g Gin Gin Thr Met Leu Asp Lys He Asn .80

185

190

Lm Tyr Var Arg Glu Asn ueu Thr Gly Leu Ara Vai val Arg Alá The

195

2:00 * ' * ♦ . .< * ,<r £

X < ♦ · ·» .♦·' ν <-

ΑΧ»

Arg 210

Gl :i

Asn

Phe

Gin

Ser 215

Gin

Lys

Phe

Gin

Vai 220

Alá

A.sxi

Sin

Arg

Tyr

Thr

Asp

Thr

Ser

Thr

Gly

Leu

Phe

Lys

Leu

Thr

Gly

Leu

Thr

Glu

225

230

235

240

Pro

Leu

Phe

Val

Gin

£.X<£

Ile

Ile

Alá

Mer

He

Val

Alá

Ile

Val

Trp

245

250

255

Phe

Al«

Leu

A.sp

Pro

Leu

Gin

Arg

Gly

Alá

He

Lys

He

Gly

Asp

Leu

260

265

270

Val

Ál 3

Phe

He

Glu

Tyr

Ser

Phe

Hús

Alá

Leu

Phe

Ser

Phe

Leu

Leu

27 5

2S0

255

Phe

Alá

A.sn

Len

Phe

Thr

Met

Tvr

Pro

Arg

Met

Val

Val

Ser:

Ser

Kis

290

205

300

Ρ-..rg

He

Arg

ti

Val

Mefc

Asp

Met

Pro

He

Ser

11«

Asn

Pro

Asn

Alá

305

310

315

32 ö

Glu

Gly

Val

Thr

Asp

Thr

Lys

L><su

Lys

Gly

His

Gin

Phe

ÁSp

Asn

325

330

335

Val

Thr

Phe

Ál a

Tyr

Pro

Gly

Glu

Thr

Gin

Ser

Pro

v x

Leu

Kis

Asp

340

345

35ö

Ile

Ser

Phe

Lys

Alá

Lys

Pro

Gly

Gin

Thr

i-le

•AJ. s

.Phe

1 le

Gly

Ser

355

360

365

Thr

Gly

Ser

siy

Lys

Ser

Ser

Len

Vai

Asn

1>ÖU

Ile

Pro

Arg

Phe.

Tyr

370

375

380

&sp

Vai

Thr

Leu

Gly

Lys

He

Leu

V3.1

Asp

G.1 y

Vei

Asp

Val

Arg

A.sp

3S5

3S0

395

400

Tyr

Asn

Leu

Lvs

Ser

len

Arg

Gin

Lys

He

Phe

Ile

Pro

Glu

Lys

405

410

415

Aj. a.

L-éU

Leu

Phe

Thr

Gly

Thr

He

Gly

T AM λί. _. Π

Lys

Tyr

Gly

r.ys·

420

425

430

Alá Asp Alá Thr He Asp Asp leu Arg din Alá- Val Asp Ile Se-r din

435 440 445

Alá Lys Glu Phe Ile Glu Ser -His- Sin Glu Alá Phe Glu Thr His Leu

450 455 460

Al-a Glu Gly Gly Sex Asn Leu Ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg Leu Ser

455 470 475 480 lie Alá Arg Alá Val Val Lys Asp Pro Asp Len Tyr Ile Phe Asp Asp

485 490 495

Ser Phe Ser Alá Leu Asp Tyr Lys 'Thr Asp Alá Thr Leu Arg Alá- Arg

500 305 510

Leu Lys Glu Val Thr Gly Asp Ser Thr Val Leu Ile Val Al.a Gin Arg

515 520 525

Val Gly Thr He Met Asp Alá Asp Gin Ile Ile Val Leu Asp Glu Gly

530 535 540

Glu Ile Val Gly Arg Gly Thr His Alá Gin Leu Il-e Glu Asn Asn Alá

545 550 555 560

Ile Tyr Arg Glu- I'le Alá Glu Ser Gin Leu Lys Asn Gin Asn Leu Ser

565 500 575

Glu Gly Glu <21ö> .17 <211> 92 <212> PRT <213> Streptocüccus <400> 1?

Met Arg Lys Lys Ser Val Phe Leu Arg Leu Trp Ser Tyr Leu Thr Arg

Tyr .Lys Alá Thr Len Phs Len Alá lle Phe 'Leu Lys Val Leu Ser Ser

Phe Met Sex Vsi Leu Glu Pro Phe Lle Leu Glv Len Alá lle Thr Glu leu Thr Alá Asn Leu Val Asp Met Alá Lys Gly Val Ser Gly Alá Sin

Leu Asn Val Pro Tvr íle Leu Ha He Tyr Phe Phe Arg

Gly Val Phe Tyr Glu· Leu Gly Ser Tyr Gly Ser Asn <210> 18 <211> 40 <2.12 > PRT <213> Strepfcocoecus <400> 18

Phe Gly Ser Alá Leu Ser Thr Val Glu Val Lys Glu He lle Ser Glu

10 15

Gin Asn lle Trp Len Tyr Arg Leu Ser Cys Cys Kis Phe 'Thr Ser Tyr

25

Ser Tyr Trp Lys Lan Pro Thr Trp

40 <210 > 20 <211>

* ♦ * * * Jf X « “ * *♦♦ * . „ ♦ * « <

<212> PRT <213> Streptococcus <400> 20

Pfefc. Gly Leu Alá Thr Lys Asp Asn Gin Lie Alá Tyr Ile Asp Asp S«r

5 1G 15

Alá Pro Lys Thr Asn Lys Thr M«t Asp Gin lie

Lys

Ser

Gly Lys Alá Lys

25 30

Alá Glu Glu Lly Tre x>«r Alá Gin Gia lie Vei Val X?ys Xle Thr

40 45

Asp

Gin Gly Tyr Val

Thr Ser His Gly Asp Kis Tyr Kis Phe Tyr Asn

S0

Gly Lys Val Pro Tyr Asp Alá lie Tle -Ser Glu Glu. Leu Le-u Met Thr

70 75 80

Asp Pro· Asn Tyr .Arg Phe Lys Gin Ser Asp Val lie Asn Glu Ile Leu «3

Asp Gly Tyr Val Ile

108

Pro Gly Ser Lys Arg r 15

Gin Val Ma Lys Gly

130

Val Alá Kis Leu Ser

145

35 ^ys Val <»ly Asn Tyr Ty.r Val Tyr reá Lys

105 Hő lys Asn ile Arg Thr Lys Gin Gin 11« Alá Glu

120

125 hr Lys Glu. Alá Lys Gin Lys Gly Leu Ma Gin

135 140

Glu Gin Val Alá Alá Val Asn Glu Alá Lys

Gin Gly Arg Tyx

181

Lys

150

Thr . no

Thr Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Ser Pro Thr

170 175

Asp lie rre Asp Asp Leu Gly Asp Alá Tyr Len Var. Pro Has Gly Asn » q ♦ *·*

Hxs Tyr

Alá Ma

210

Sár Asp

225

180

His Tyr

195

Gin Alá

He zro r-ys r>ys

200

Tyr Trp Ser Gin Lys Gin Gly Arg Gly Alá Arg Pro

Lys Lys Asp Leu Ser Pro Ser Glu Leu Alá

205

Tyr Arg Pro Thr Pro Alá Pro Gly Arg Arg Lys Alá Pro He

230 235 240

Pro Asp Val Thr Pro Asn Pro Gly Gin Gly

245 250

235

Kis

Gly Tyr hls Pro Alá Pro Pro Arg Pro· Asn Asp Alá

200 205

Pro Asp Asn Gly

2S5

Ser Gin Asn Lys ö

Hls Gin Arg Asp Gla Phe Lys Gly Lys Thr Phe Lys Glu Lea Leu Asp

275 28Ü 285

Gin Leu His Arg Leu. Asp Leu Lys Tyr Arg His Val Glu Gl.u Asp Gly

290 205 300

Lea Ile Phe Glu Pro Thr Gin. Val Ile Lys Ser Asn Alá Phe Gly Tyr

3Ö5

310

315

320

Val Val Pro Kis Giy Asp Kis Tyr Kis ile .Tie Pro Arg Ser Gin Leu

330 iáií

Ser Pro Leu Gin .Met Gla Leu Alá Asp Arg Tyr Leu Alá Giy Gin Thr

340

34.5

350

Glu Asp Asn Asp Ser Gly Ser Gla His Ser Lys Pro Ser Asp Lys Glu

360

3S5

Val Thr His Thr Phe Leu Gly Kis Arg Ile Lys Alá Tyr Gly Lys Gly

330

370

Leu Asp Gly Lys

Tyr Asp Thr Ser Asp Alá Tyr Val Phe Sér Lys

370

395

400

Ser He His Ser Val Asp Lys Ser Gly Val Thr Alá Lys His Giy ψ X „ 90 _

405 410. «5

Asp

His

Phe

His 420

Tyr

Ile

Giy

?he Gly 425

Gin

Leu

¢71 γν

Gin

Tyr 430

Gin

Leu

Asp

Glu

Val

Alá

& <·

j-0.

Val

Lys

Lys

Gly

Gin

Alá

Asp

Glu

Leu

435

440

4 45

Ma

Alá

Alá

Leu

Asp

Gin

Glu

Gin

G.l.y

Lys

Glu

Lys

Pro

Leu

Phe

Asp

450

455

460

Thr

Lys

Lys

Val

Ser

Arg

Lys

Val

Thr

Lys

Asp

ni Ui j.

Lys

Val

Gly

Tyr

465

470

475

480

Mer

Kát

Pro

Lys

Asp

Gly

Lys

Asp

Tyr·

Phe

Tyr

Alá

Arg

Asp

Gin

Leu

435

450

435

Asp

Leu

Thr

Gin

Ile

Alá

Phe

Alá

Gin

kJ· X Í*A

Gin

Leu

Met

Leu

Lys

Asp

SOö

50S

510

Lys

Lys

His

Tv.r

Arg

Tyr

Asp

He

Val

Asp

Thr

Giy

He

Glu

Pro

Arg

5Ϊ5

520

525

Leu

Alá

Val

Asp

Val

Ser

Ser

Len

Pro

Mefc

His

Ala

Gly

Asn

Alá

Thr

530

535

540

Tvr

Asp

Thr

Gly

Ser

Ser

Phe

Val

Ile

Fro

His

He

Asp

His

Ile

His

545

550

555

560

Val

Val

Pro

Tyr

Ser

Trp

Len

Thr

Arg

Asp

He

Alá

Thr

Val

Lys

565

S 7 0

575

~ 2 *·

Val

Mefc

Gin

His

Pro

Gi u

Val

Arg

Pro

Asp

val

Trp

Ser

Lys

Pro

580

v <5 «Λ

590

G 1 y

His

Giu

Glu

Ser

v*

Ser

Var

ile

Pro

Ma

Val

TIa'**

Pro

Leu

Asp

505

600

ζ Q 7>

éys

Arg

Alá

Λ*)? VA

Mefc

Pro

Asn

Trp

Gin

He

X le

His

Ser

Alá

Glu

Gin

610

SIS

620

Val

SÍ·' A ί Λ

Lys

AJt &

L'C'U

Aia

Gin

Glv

Arg

Phe

Alá

Thr Λ »0.V

Pro

Asp

Gly

Tyr

630

635

640

He Phe Asp Pro Arg Asp Val Leu Alá. Lys Gin Thr Phe Val Trp ly;

645

650

653

Asp Giy Ser Phe Ser lie Pro Arg Alá A&p Giy Ser Ser Leu Arg Thr

660

665

670

Ile Asn Lys Ser Asp Leu Ser Gin Aia Glu Trp Gin Gl». Alá Gl» Giu

675

680

685

Leu 'Leu Alá Lys Lys Asn Thr Giy Asp Alá Thr Asp Thr Asp

690: SSS 700

Lys Glu Lys Gin Gin Alá Asp Lys S-er Asn Giu Asn Gin Gin Pro

Lys Pro

705

Ί3

715

Ser

720

Leu

Sin .Alá Ser Lys Giu Glu Lys Gitt Ser Asp Asp Phe Ile Asp

725 730

Pro Asp Tyr Giy Leu Asp Arg Alá Thr Leu Glu Asp His Ile Asn Gin

Ser

735

740 ?4S

Leu Alá Gin Lys Aia Asn He Asp Pro Lys

755

760

750

Len He Phe Gin Έ9

765

Gl u Gl y

770

Sin Phe Tyr Asn Lys Asn Giy Giu Leu Val Thr Tyr Asp

He Lys Thr Leu Sin

765

Gin .He Asn Pro

730 <210> 2.1 <2H> 715 <212 > PB?

<2'13> Streptocoeciis <400> 21 * * <·

Met Thr Asp Pro Asn Tyr Arg Phe Lys· Sin Sex Asp Val He Asn Gin

AU

IS

Ile Leu Asp Gly Tyr Val 11« Lys Val Asn Gly Asn Tyr Tyr Val Tyr

Leu Lys Pro Gly Ser Lys Arg Lys Asn Ile Arg Thr Lys· Gin Gin He

Alá Glu Gin Val Aia Lys Gly Thr Lys Glu Aia Lys Glu Lys Giy Leu

Gin Val Alá Kis Leu Ser Lys Glu Glu Val Aia Aia Va.l Asn Giu

Alá Lys Arg Gin Gly Arg Tyr Thr Thr Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Ser

Pro Thr Asp l'l-e Ile Asp Asp Leu Gly Asp Alá Tyr Leu Val Pro Hi.s

100

105 .10

Gly Asn His Tyr His Tyr IX.e Pro Lys Lys Asp Leu Ser Pro Ser Giu .5

120

Leu Alá

130

Arg Pro

145

Pro He

Alá Alá Gin Alá Tyr Trp

135

Asp

Gin Lys Gin Gly Arg Giy Alá

140 rg Pro Thr Pro Aia Pro Giy Arg Arg Lys Alá

5:5

ISO o Asp Val Thr .Pro .Asn Pro Gly Gin Gly Kis Gin Pro· Asp·

16s5 170 175

Asn Gly Gly Tyr His Pro Alá Pro Pro Arg Pro Asn Asp Alá Ser Gin

130

185

Asn Lys His Gin Arg Asp Gin Phe Lys Gly Lys Thr Phe Lys Gin Leu

195 a 00

Len s. sg

210

Gin Lan His Arg Len Asp Len

215

205

Η.Χ2Ϊ sT<il <y.Líl

220

Asp

Gly

Leu

lle

Phe

ar U

Pro

*r*u *· A ΙΛλ

Gin

'/<5 .1.

lle

Lys

Ser

Asn

Aia

Phe

225

236

235

240

Gly

Tyr

Val

Val

Pro

Kis

Gly

Asp

His

Tyr

His

Xle

lle

Pro

Arg

Ser

2 4 5

250

255

Gin

Leu

Ser

Pro

Leu

Giu

Mer

Gitt

LöU

ni a

Asp

Arg

Tyr

Lett

Alá

Gly

2 δ©

265

270

Gin

Thr

Gitt

Asp

Asn

Asp

Ser

Giy

í5 X*

Gitt.

His

Ser

Lys

Pro

Ser

Asp

275

280

28 5

Lys

GÍU

Val

Thr

His

nft. v iíii

Phe

Leu

Giy

His

Arg

lle

Lys

Alá

Tyr

Giy

290

285

300

Lys

Gl y

Lek!

Asp

Giy

Lys

Pro

Tyr

Asp

Thr

Ser

Asp

Alá

Tyr

Val

Phe

305

310

315

320

Ser

X.-ys

Gitt

Ser

Xle

His

Ser

Val

Asp

Lys

S^SfX*

Gly

Vei 1

Thr

Alá

Lys

325

330

335

.His·

Giy

Asp

His

Phe

Kis

Tyr

Xle

Giy

Phe

Giy

Gitt

Lííu

Gitt

Gin

Tyr

340

345

350

Gin

Leu

Asp

Gitt

Val

Alá

Asn

Trp

Val

Lys

Alá

Lys

Giy

Gin

Al.a

Asp

355

350

3 SS

Giu

Leu

Alá

Alá

Alá

Leu

Asp

Gin

Gitt

Gin.

Gly

ny s

Gitt

Lys

Pro

Lett

370

375

380

Phe

Asp

Thr

Lys

Lys

Val

Ser

Arg

Lys

la 1

Thr

Lys

Asp

Gly

Lys

Val.

385

300

395

4 00

Giy

’T*» > ·«·· * i *·

Méh

Mer

Pro

Lys

Asp

Gly

LVS:

Asp

Tyr

Phe

Tyr

Arg

Asp

405

410

415

,“2*i „

Len

Asp

L'íSxi

Thr

Gin

lle

Alá

Phe

Al a

Giu

Gitt

^ÍK4 t'

lui’0*'-!

420

425

430

Lys

Asp

Lys

Lys

His

Tyr

Arg

Tyr

Asp

He

Val

Asp

Thr

Gly

11 e

/*? > . .

35

440

5

Ή .*· ·♦ ♦»» >

Pro Arg Len Alá Val Asp v'al Ser Ser Lea Pro Met His Alá Gly Asn

450 455 4.60

Pro Kis Ile Asn His

Alá Thr Tyr Asp Thr Gly Ser Ser Phe

465

70

Ile His Val Val Pro Tyr Ser

485

Val Lys Tyr Val Met Gin Kis

500 lys Pro- Gly Kis Glu Glu. Ser

515 i He

475

Trp Leu Thr Arg Asp

Prc

Glu

505

Ser

4.96

Val Arg Pro

80

Gin Ile Alá Thr

495

Asp Val Trp Ser

510

Zal Ile Pro Asn Val Thr Pro

Gly ö

'Pro Asn Trp Gin He

540

Glu Val Gin Lys Alá Len Alá Gin Gly Arg Phe·

Leu Asp Lys Arg Alá Gly Két

530 535

525

Ile Hís Ser Alá

Glu

545

Alá Thr Pro Asp

560

Tyr Ile Phe Asp Pro Arg Asp Val Leu Aia Lys Glu Thr Phe Val

0

55

Tro

Arg

565 j?ü

Ser Phe Ser He Pro· Arg Alá Asp Gly Ser Ser Leu

SS5

Lys Ser Asp Leu Ser Gin Alá

600

Lys Asp Gly

580

Thr He Asn

SS

Glu Len Leu δ 10

Pro Lys Glu

Glu

590

Tro Gin Gin Alá

605

Alá Lys Lys Asn Thr Gly Asp Aia Thr Asp Thr Asp

615 620

Lys Gin Gin Alá Asp Lys Ser Asn Glu Asn Gin Gin

630 635 640

Pro Ser Glu Alá Ser Lys Glu Glu Lys Glu Ser Asp Asp Phe Ile Asp ry s

625

5

650

6

Leu Pro Asp

660 ?yr Gly Leu Asp Arg Alá Thr

Leu Glu Asp Kis Ile

670

».♦ » »

Asn Gin Len Alá Gin Lys Alá. Asn lle Asp Pro Lys Tyr Leu 1.1 e Phe

5

SSÖ

685 ?£© Glu Gly Val Gin Phe Tyr Asn Lys Asn Gly Glu Leu Val Thr

690

695

700

Tyr Asp lle Lys Thr Leu Gin. Gin lle: Asn .Pro

705 710 715 <210> 22 <21í> 77 <212 > PRT <213 > S trepfcococcus <4ö0> 22

Met His Ser Phe Sex Asn Pro Gly Tyr Pro Tyr- Asp Asn Alá Val Thr

IS 10 15

Glu Alá Phe Phe Lys Tyr Leu Lys His Arg Gin lle Asn Arg Lys Kis

Tyr Gin Asn ile Lys Gin Val Gin Leu Asp Cys phe Glu Tyr He Gin.

Asn Phe Tyr Asn Asn Tyr Asn Pro His Thr Alá Asn Leu Gly Leu Thr

Pro· Asn Gin Lys Glu Glu Asn Tyr Phe Asn Alá. Ile Lys '70 75 <210> 23 <211> 86 <212> PH?

* ♦♦ <213> Strectccoccus <400 23

Met Alá Tyr Tyr Gin .Alá Cys Thr Glu Lys Asp He Ile Arg Ser Ms

Ser Arg Lys Gly Thr Pro Als Asp Asn Aia Cys He Glu Trp Phe His

Thr Val Leu Lys Thr Glu Thr Phe Tyr Phe His Asn .Arg Arg Lys Tyr

Asn Lys Asp Ser He Thr Asn Ile Val lys Asn Tyr He Thr Phe Tyr nO

Asn Giu Thr Arg He Gin Gin Arg Leu Asn Asp Gin Ser Pro Val Gin

70 75 60

Tyr Arg Lys Leu Ile Aia <210 24 <211> 126 <212 > PRT < 213> Streptococcus <400> 24

Met. Gin Asn His Phe He Tyr Gly Tyr Arg Thr II© Thr Arg Len Leu

Lys Lys He Kis Gly Leu Thr Val Asn Thr Lys ;ys Vei Tyr Arg Ile

Met Lys Asn Asn. Gly Trp Leu Cys Axg Thr Arg Thr Lys Lys Val Pro .Asn Leu Gly Lys Alá Tyr 'Tyr Leu Thr Asp Asn Lys Leu Ser Arg Asp

55 60

Phe His Alá Asp Lys Pro Lys Glu Lys Leu Val Thr Asp He Thr Tyr óo

Léd Tyr Phe Gly Asn Cys Lys Leu Tyr Leu Ser Ser He Me-t Asn Leu

Tyr Asn Arg Glu lle lle Alá Tyr Thr lle Ser Asp Cys Gin Asp Thr

100

105 no

Asp Phe Val Leu Asp Thr Leu Asn Gin Leu Lvs Leu Pro Lys

115

120

125 <21ö> 25 <211> 96 <212> PÉT <213 >

:ococcus <400> 25

Met Val Lys Lys Alá Tyr Ser Trp Giu Thr Lys Leu Alá Cys lle Asp

1.5

Met Lys Lys Alá Gly Lys Ser Asn Arg Val. He: Met. Glu Thr Leu Gly

25 lle Lys Asn Asn Ser Gin He Tyr Thr Trp Met Lys Trp

40 45

Glu Glu Leu Tyr Arg Phe His Gin Gly Val Gly Ly

Tyr Glu Asn

Gin Tyr Thr Tyi c-s ♦ £ * ·.♦'» ♦* e*

Gly Lys Gly Len Glu His Leu Ser Glu Val Glu Gin Leu Gin Leu Gin δη

7L

Val Asp Leu Leu Lys Lys Tyr Arg Giy leu lie Arg <218> 26 <211> 288 <212> BRT <213> Streptococcus <400> 26

Ser lie ile Arg Tyr Pro Lys Alá Ser Ser Gly Asp Tyr Giy Thr Lys Arg Giu fii lle He Thr Alá Asn Lys Asp Lys Tyr Ser lie Ser Lys Met Cys Arg

Trp Leu Asn Két Pro His Ser Ser Tyr Tyr Tyr Gin Alá Vei Glu Ser •a a

Val Ser Glu Thr Glu Phe Glu Glu. Thr ile Lys Arg lle Phe Leu Asp

Ser Glu Ser Arg Tyr Gly Ser Arg Lys ile Lys lie Cys Leu Asn Asn

70 75 80

Glu Gly lle Thr Leu Ser Axg Arg Arg lle Arg Arg lle Met Lys Arg

Len Asn Leu Val Ser Val Tyr Gin Lys Alá Thr Phe Lys Pro His Ser

ICO .05

110

Arg Gly Lys Asn Glu Alá Pro lie Pro Asn His Len .Asp Arg Gin Phe

120

125 ·'* »·* XX gq

Lys Gin

150

Arg Pro Leu Gin Alá Leu Val Thr Asp Leu Thr Tyr Val

135

140

Arg Val Gly Asn Arg Trp Alá Tyr Val Cys Leu íle lle Asp

145

150 .5.5

Tyr

160

Asn Arg Glu He He Gly Leu Ser Len Gly Trp Kis Lys Thr Alá Glu

165 175 175

Leu Val Lys Gin Alá lle Glrs Ser He Pro Tyr Alá Leu Thr Lys Val

ISO

185

130

Lys Met Phe Kis Ser Asp Arg Gly Lys Slu Phe Asp Asn Gin Leu He

195 lu lle Leu Glu Alá Phe Gly He Thr Arg Ser Leu Ser Gin Alá

200

205

Asp Glu

210

21”

220

Gly Tyr Pro Tyr Asp Asn Alá Val Alá Glu Ser Thr Tyr Arg Alá Ph

225

Lys He Glu Phe Val Tyr Gin Glu Thr Phe Gin. Leu Leu Glu Glu Leu

230 zr<5

240

245

250

Ma Leu Lys Thr Lys Asp Tyr Val Kis Trp Trp Asn Tyr Kis Arg Xle

260

265

Ser

275

Leu Asn Tyr Gin Thr Pro Met Thr Lys Arg Leu He Alá

280 285 <210> 27 <211 > 2.21 <212> PRT <213> Sfcreptococctts <400> 27

Asn

Leu

Lys

Alá

Glu

Leu

Ser

Vei

Glu

Asp

Gin

Gin

Tyr

Thr

Als

Thr

1

5

10

15

Val

Tyr

Gly

Lys

Ser

Alá

Kis

Gly

Ser

Thr

Pro

Gin

Gln

Gly

Val

Asn

20

25

30

Gly

Alá

Thr

Tyr

Alá

Leu

Tyr

Leu

Ser

Gin

Phe

Asp

Phe

Glu

GXy

35

40

4 5

Pro

Alá

Arg

Alá

Phe

Leu

Asp

Vai

Thr

Alá

Asn

ile

He

Kis

Glu

Asp

50

55

60

Phe

Ser

Gly

Gin

Lys

Leu

Gly

Var

Alá

Tyr

Glu

Asp

Asp

Cys

Met

Giy

63

70

7 5

80

Pro

Leu

Ser

Met

Asn

Alá

Gly

Var

Phe

Gin

Phe

Asp

Glu

Thr

Asn

Asp

85

SS

05

Asp

Asn

Thr

Ile

Alá

Leu

Asn

Phe

Arg

Tyr

Pro

Gin

Gly

Thr

Asp

Alá

100

105

110

Lys

Thr

He

Gin

Thr

Lys

Leu

Glu

Lys

Leu

Asn

Gly

Val

Gin

Lys

Val.

115

120

125

Thr

Leu

Ser

Asp

His

Glu

Kis

Thr

Pro

Hrs

Tyr

Vai

Pro

Met

Asp

Asp

130

135

140

Glu

Leu

Vai

Ser

Thr:

Leu

Leu

.41 a

Val

Tyr

Glu

Lys

Gin

Thr

Gly

Leu

145

150

155

160

Lys

Gly

Kis

Glu

Gin

Val

He

Gly

Giy

Gly

Thr

Phe

Gly

Arg

Leu

Leu

165

170

175

Glu

Arg

Giy

Val

Alá

Tyr

Giy

Alá

Met

Phe

Pro

Giy

Asp

Glu

.Asn

Thr

ISO

185

100

Met

His

Gln

Alá

Asn

Glu

Tyr

Me t

Pro

Leu

Gr n

Asn

ile

Phe

Arg

Ser

195

200

205

Alá

Alá

He

Tyr

Alá

Glu

Alá

ile

Tyr

Glu

Len

He

Lys

210

215

220 +9 .. φ

Ο 1 Π Ο £ί \ λ. ν kit?

<2Π> 5607 <212> DNS <213> strepto-coccus

aattcaaagt 60	ttgacagaag	gfc:caactt.cg	ttctgatatc	ccfcgagttcc	gfcgctggtga
tactgtacgt	gttcacgcta	aagtfegttga	aggtactcgc	gaacgfcattc	agatetttga
120
aggtgtfcgtt 180	a t c t ca c g La	aaggfccaagg	aa t ct caga a	atgLacacag	tacgtaaaat;
ttctggtggt	atcggfcgtag	agcgtacatt	cccaattcac	actcctcgfcg	ttgataaaat
240
cgaagfctgtfc	cgttafe-ggta	aagtacgfccg	tgcfcaaacfct	tactacttac	gcgcattgca
300 aggtaaagct	gcacgtatta	aagaaafc:c.cg	tcg fctaa L L L	tgatgat-cag	attttaaaaa
tgcttggfctg a'? n	Lfcfegaggata	gtaactatgt	tfcfcaaa-a-ctg	gacaaccaag	a cgt a a aa aa
Λί ív .. tctgcctgfcg 4 80	ggcagtttfcfc	ttacfcaggtc	ccctfca-gttc	aatggatata	acaactecct
cctaaggagfc	aatfcgctggt	fccgattccgg	caggggacat	attcattgca	fcgtaaatagc
540
ggtfetagagc	fcattttgccc	caaatttcfcc	tgafctaagtt	tatcgttcet	atctttfctgt

tcttgtaatt gatgtgegta aactfcctaaa gtgatattta aattcfccgfcg atctaaaact

	- 1.02 -	* <. · . ·/· <Λ|> .. * 3» X >. * * * «* Ay * * * ♦ ·» ·
6S0
'7 / ί“>	aaattagata	gcfcfcgcaaafc	gtatgcctga	gagagtgcac	tcgfcacctcg
cgaccagtta	t'fcfcttcggat	agtttfcattg·	actgcattat	ttgaaagttt	gtcgaataafc
730
ctgtcgtttt	tafct.ttttgfc	aaatteatgc	saaaaan a t a	atgtatcatt	gtcaafctggfc
340
atatttctga	tactactfcfcfc	gttttfctgtt	ggcaggtatc	fcttggtfcgaa	atgataatcc
900
caagttttat	taatfcgafcaa	afcattfcgfcta	gfcgfcaafe-caa	fcatcattaac	tgttaaacct
960
aaacattcag	cgaagcgcafc	gccagtttta	gcgafcgaggt	ataacgctgc	afcaegafctga
1020
fcgttgtgatt	tttcfefctaca	aafcttttaté	a a gcgfcaag t	afcfccattggfc	ttcaagaaafc
1080
fcfcfcafcctct.a	tttacgcecc	ttattttfcfeg	ctttaacctt	agtgaataaa	ca a aa a 1fc11
1140
tttctatata	tceefccgtga	acagccatgg	atacgcaggc	tttfcacatgfc	atgttaaaac
a 2 n 0
gcttfcactgt	atcttgcaca	tgegtttgac	tataatgatt	tafcgacttgfc	tgafcafcfctag
1260
tggaa-gfcaat	afcfcgcaaagt	aatafcatttc	ctattatatg	tttatacgat	attegatatt
1320
•c.ccacccgtt	gtcgcgttta	cggaaatacg	ccattgatafc	actccacatt	agcfcaaagaa
X V V cagggtgtfcc	a.sgget&cefc	tgatggaaaa	ggetetetta	gagatatttg	fcaaatggtat
1440
gatatctcsa	gfccgcfccfcgt	tctccaaaag	fcggataaaae	ggtafcactag	tggfcgaagac

·<„ ·Α.

L L g 3 3 3 Q' C S 1 5£<ί	ctagtagagg	atatagccgt	afcgaaacaag	g & s g g cs &g c	eaeatfcfcgaa
ga&cgtgtag Ί £·? Π	agafcfcgfctaa	cfca ca cca tt	gcccafcggga	aagactafcca	agcagctafct
gagaagttfcg 1S8Ö	gtgtttccta	ccaacaaatt	fcatfccfct-ggg	fcgcgtaagcfc	L g a gs aga a 1
ggcte&c&ag 1740	gfcttggfcfcga	ns gs cgfcgtg	aaagggtfegg	sgagtaggcc	fcga-fcfcfcaacc
gagafctgagc. I.80G	aaetttaact	caa.gafctaaa	caafctggagg	aacgtsafccg	fccfccfctagaa
atcgaggfcta 1860	gfcfctacfcaaa	aaagfcfc-agaa	gacatcaaac	•gaggsta&cag	acggtaagac
taggfcaagca 192Ö	tttagcggag	fcfcccaagtaa	fccaagaatta	ttacgatgag	gaafccfcaatg
tgcetattes 5^60	ggcctfcafcgc	caactcttga.	aggggfcctcg	ttcaggctat	fcacaagtggc
fccaatcgtca 2040	aaaaacagafc	ttfcgagacaa	&& 3 S fcs C&3. £	gctaafcggct	aaaatcaagg
aacttcgfcag 2100	acfccfcacasfc	ggtatcttag	gtfcatcgccg	tatgacaaca	fctfc.atta.afce
gtcaacttgg 2160	gacaacfefca-á	aacsagaaac	ggattcgfctg	attgatgaac	attcfcgggga
ttagfcfccagt 2220	cafctcgfccgt	gfcfcagccatg	cfctgfc-acaaa	agctggfcgac	agattttacg
aagassaCár 2280	tcttaatcgt	gaafcfctacag	ecacagcfcea	fc-aac cagaaa	tggtgcacag
atgt.caecfc.a	C cr t. c&3	ggtctgggag	c.taaagc tta	£ct-cagfcgcg	attaaagacc

IÖ* * « « Jk; « φφ ♦♦♦ Χ· # * φ*

2340 tgtataacgg ttctattafc gcttatgaga fetagt-cacaa caatgaaafcc ca-cttgttat

2400 .gaagsc'cafct aaaaaggggc tagagcfccaa fcccaggagcc acacct-atca fcccatagcga

2460 fctga-ggfcagfc •caafcafca-cfct. ccaaagaata ccgfcfcafcafcc atacaacaag etg-gtctgac

2520 cfcfcafcccafcg tcccggattg gcaaafc-gfcafc fc-gataafcgca c-caacfcgaaa- gtfctcfcfctgg

25S0 gttfcfcfccaag acfc-gagfccfcfc a-ccaccfcfcaa gaaa-fcacaac fccfcfcafcgafcg agttggtcaa

2640 fcgatgtgg-ca cgfcfcafcafccg aattetacaa cacacaacgt tatcaatcaa aattaaacaa

2700 ccfcgacfcccfc cfcagaafc'fcca ggaatcaggt fcg.cafcaacfcfc afccfcttfcatfc afcfctgactg-fc

2760 cfcacfcfcgaca gggagccgtfc cagafcfcgcfcfc aaccfcfcfccfca aattfcgcfcaa aafcagcfcaca

2020 agaaaacgag- ccafcfctastg cfc.tatfctet.fc afcacfcgfcctfc gcctcacgct ctcctcga-cc

2880 aaaaafcfcgag cgfcgaggcfcfc fcttgttfccat fcaaacgat-ga fcatfcfcccata fctcafccagfct

2340 tgfcfcfcfcccga g-agccafccaa agcttcgafca aggfccgafcaa ttccaggaat aaaggfcaafca

3000 ctaaaaataa tatataaaaa a-ac-cfcggccfc sttttfecctg cgfcaaaatfcfc afcgcgcfccca

3060 •afcgccgccca aaagaacgfct aataaáácafc aaacfcactat gtfcagcafcaa gacfcttattí

3120 fctacaacfcga attfccatata aafcggafcfcag agtaagggat aaaagaaatt * ♦ * *« *

3180

fctttgaaaafc	aaaaaaatta	atstaatstg	gaaa«sattt	tatttcafcaa	aegttteata
324 0
aaaggtatgt	aatctagtat	ttaggcaaca	cfcattttgte	•a.ctggtgt-ct	agtaacttat
3300 agafctgataa	ttttactagfc	a&acgtaafct	cfctcgcttta	agagttaaat	gtctatttafc
tgtaagctaa 3423	attgggaggt	gaacttatgt	s<i <Χ·3. v fc a	aggtactgtc	aagtacggga
tgattafcfcga	aacagcca-gfc	atgcatcata	aaatcfcgfcat	tgcitaataa	cfeattteett
3480
aaccagacat	•cagttcattg	tttatcatcg	ctaccctaag	V fjtlS í*	tcaatagagc
3540
attaggtagt	•fc-fcfcfcgsa-fcaat	kí 3-efc >S Ctlít -fc-sS ti	aaacafcgaga	attagattte	gtatfc:gcatt
3600
cttcataatg	agtfcatttga	gattttcctt	t-gaataaata	gatacgaaat	tcagfcaactfc
3660 cafcatataaa ? 7 ? {'.	cggctctatc	attgagafeag	fcfetgtcaaat	C£&&<£'<&3<3 ;Iltltl	tfeaatggaaa
tagfctttaaa 3780	aacattagtt	gtaggcgatg	taaaaatatt	aatccagtgg	atgcaatagt
tgcggagtaa	aaatagagag	gagfcaattag	gaagtgataa	aaaatgctat	agcafeatatfc
.384 3
	& S & <a H Cí	acttattata	tttgctattt	taacaattgt	tctttefctgc
3900
ttgtattcat	gtttaacaat	<3·3t-ílíc£&l/íIÍS	agtaatgaaa	tagaaaaggc	ttfcatatgaa
3960
agttctaatt	•cttcaata'fcc	as t	aaagstggta	aatafetttaa	ti ti Qti í· C& &

- 106-4020 fctfcaagaafca ttgaaaaaat aaaagaggtt gaagaaaaaa tafcttcaata

4080 gcaaaatfcga aagatcfcfcaa agfcagttagfe ggtgagcaaa· gtafcaaatag

4140 tetgacgaafc fctaaaaafcgfc tgfcfctcacfca gaagctacaa gtaafcactaa

4200 ttattfcagta gfcggagtafcfc fcagcfcfctaaa gaaggaaaaa atatagaaga

42S0 aafctcaafcfcc fctgfcfccafcga agaafcttgcfc aaacaaaaca aacfcaaaatfc.

4320 attgatcttg aattacfcaga tacggaaaaa agtggaaaaa taaaaagtca

43SO attataggaa fccfctttcfcgg taaaaaacag gaaacatafca. caggattatc

440 agcgaaaafca t-ggfcfctttgfc agafcfcatfcca actagceaag aaatattaaa

4SÖ0 aafcaatagaa. ttgcaaafcaa aafctttaafcg fcatfccfcggta gtttagaatc

4560 gcctfcaaa-ca aatt-gaaaga .ctfcfeaaaatfc gafcaagtcaa agtafc'fc-ctat

4620 aataaagcafc fc-ogaagagfcc ttfeagagtca gfcgagtggaa taaaacafcat

4680 atgacttafcfc cgafctafcgtt aggtggaa-ta gfcfcgfcfccttt cafcfcaatcfcfc

4740 fcfcaagagaaa gaafcfctafcga aatag-gtata tttttatcca fctggaacáa-c

48Ö0 afcfcataaggc aafcfcfc-atatfc fcgagfcfcaata tfccafcafccaa fcac-gaagfcafc

tgatggatfca agaagafcfcfca aagaaatcfcfc aaa-fcgataag gggtgafcgaa fcaaatttaaa afccfcgatttfc taaafccagag fcacagagcfcfc fcaagaaagafc aafcfcaaaata gattctatgg taagatacaa a ata fc í; c fc cc * « φ

- 107 -

tta.tttttag	ggaatcfcacfc	attasaagfea	attgtagaag	gatttattaa	C-C C
4320 fecaatgattt	tcggfcggaag	ttfcaataaat	aaaagcagtt	fctatgttaaa	cataacaaca
4980 cfctgcagaaa	.gttatfcfcaafc	afcta.at.aagt·	attafctgttt	fcafccagttgt	aafcggccfcct
5040 tcattaatafc	tatttaagaa	<3. CCS CS SC '&&	atattatcaa	áss fcaagtta	ggagcaaafca
5100 atggatatat	fcagaaataaa	gaatgfcaaafc	taCagttacg	caasitctaa	agasaaagfct
5160 ttgtcaggag	taaateaaaa	afctt-gaactt	ggaaagtttt	atgcgatsgfc	agggaagtca
5220 Uj Ét C C <i	áSvCCáCM C:‘	fc-ctttcctta	cttgcaggac	fctgataaagt	tcaascagga
5280 aaaafccttgt	ttaagaatga	agafeatagaa	aagaaaggat	atagtaafcca	cagaaaaaat
534 ö aatatatctt	tggtatttca	aaafcfcafeaafc	ttaatagatt.	a 111a t cgcc	gattgaaaat
5400 attagactag	fcaaat&safcc	agtagatgag	agtatcfctgt	tcgeattagg	tttagatsaa
5460 aaacaaataa	aaagasatgt	tatgaaafeta	tcfeggtggtc	agca&casag	ggtagcfcatt
5520 gctagggcac 5-580	tggtafccaga	tgccccaata	atactagctg	a t gagc cta c	cggtaaccta
gacagtgtta	cfcgcfcggaga	aafea&tt

5607

108 <21ΰ> 25 <21i> 154 <212> P.RT < 213 > S t r ep fc o c o cc u í <400> 25

Met Thr: Asp Leu Glu Lys lie Ile· Lys Alá He Lys Sex Asp Ser Gin

5 IG 15

Asn Gin Asn Tyr Thr Glu Asn Giy lie Asp Pro Leu Phe Alá Alá Pro

Lys Thr Alá Arg I.le Asn Ile Val Giy Gin Alá Pro Giy Leu Lys Thr

40 45

Gin Glu Alá Arg Leu Tyr Trp Lys Asp Lys Ser Giy Asp Arg Leu Arg sirs sin

Gin Trp Leu Giy Vai Asp Glu Glu Thr Phe Tyr His Ser Giy Lys Phe

Sö

Alá Val Leu Pro Leu Asp Phe Tyr Tyr Pro Giy Lys Giy Lys Ser Giy

SÖ

Asp Leu Pro Pro Arg Lys Giy Phe Alá Glu Lys Trp His Pro Leu 11«

100

105

115

Leu Lys Glu Met Pro Asn Val Gin Leu Thr Leu Leu Vai Giy Gin Tyr

II.

120

125

Alá Gin Lys Tyr Tyr Leu Giy Ser Ser Alá His Lys Asn Leu Thr Glu

130

135

140

Thr Val Lys Alá Tyr Lys Asp Tyr Leu Pro Asp Tyr Leu Pro Leu Vai

150

155 .60

His Pro

Sex^- Pro Arg Asn Gin He Trp Leu Lys· Lys Asn Pro Trp Phe

***

170

Giu Lys Asp Leu Ile Val Asp Leu Gin Lys Ile Vei Aia Asp 11« Leu

185

190 .Sö

Lys Asp
<210>	Ο Λ .3 V
<211>
<212>	P.RT
<213.>	S treptococcu
<4 0Q>	30

'Met Arg Asp Asn His Leu His Thr Tyr Phe Ser Tyr Asp Cys Gin Thr

5 10 15

Alá .Phe Giu Asp Tyr Ile Asn Gly Phe Thr Gly Glu Phe He Thr Thr

25 30

Glu His The Asp Leu Ser Asn Pro Tyr Thr Gly Gin Asp Asp Val te?

40 45

Asp Tyr Ser Alá Tyr Cys Gin Lys He. Asp Tyr Leu Asn Gin. Lys Tyr

55 €0

Giy Asn Arg Phe Lys Lys Gly Ile_: Glu Ile Giy Tyr Phe Lys Asp Arg

70 75 8ö

Glu Ser Asp Ile Leu Asp Tyr Leu Lys Asn Lys Glu Phe Asp Leu Lys

38 55

Leu Leu Ser He His His Asn Gly Arg Tyr Asp Tyr Leu Gin Glu Giu

100 .105 118

Als Leu Lys Val Pro· Thr Lys Gly Alá Phe Ser Arg Leu Leu

115

120

12:5

- 1X0 -

<21 ö> 31 <2'1.2> 931 <212> BRT <213> Strep'togoccus <40Q> 31

Met Lys Arg Lys Asp λ £

Arg Lys Leu Ser Vai

Phe Leu His Ser Pro

Aia Thr Thr Alá lle

Gin Ser Thr Asn Leu

Val Thr Pro Ser Asp

SS

Thr Asp Thr Sin Lys löö reu Giu Giu Asn Lys

115

Lys Val Aia Pro Ser

130

Aia ...le Gly Aia Pro

5

Arg He Glu .Asn Gly

Leu Phe Gly Asp Lys Sin Thr Gin Tyr Thr He

15

Gly Val Alá Ser Val Thr Thr Gly Vai Cys lle

Gin Val Pha Alá Glu Giu Vai Ser Val Ser Pro

Aia Glu Ser Asn lle Asn Gin Vai Asp Asn Gin

Lys Asp Asp rle Asn Ser Asn Ser Giu Thr

Va 1

Met Pro Asp Thr Lys Gin Len Val Ser Asp Glu

Gly Vai Thr Glu Pro Asp Lys Aia Thr Ser Len

105 110

Gly Pro Val Ser Asp Lys Asn Thr Leu Asp Leu

120 125

Thr Len Gin Asn Thr Pro Asp Lys Thr Ser Gin

135. 140

Ser Pro Thr Leu Lys Vai Aia Asn Gin Aia Pro

150 155 160

Tyr Phe Arg Leu His Leu Lys Glu Leu Pro Gin ·* * * '111 *

165 17Q 175

Gly

Hl s

Pro

Val

Glu

uíSi,

Thr

Gly

Leu

Trp

He

Trp

Gly

Asp

Val

Asp

180

185

ISO

Gin

Pro

Ser

Ser

AS: a

Trp

Pro

Asn

Gry

Alá

I le

P'ro

Met

Thr

Asp

Alá

195

200

205

Lys

Lys

Asp

Asp

Tyr

SXy

Tyr

Tyr

Val

Asp

The

Lys

Leu

Sár

Glu

Lys

210

215

220

Gin

Arg

Lys

Gin

He

.Ser

Phe

Leu

He

Asn

Asn

Lys

Alá

Gly

Thr

-Asn

225

230

235

24 0

Leu

Sár

ou J

Asp

Kis

His

Ile

Pro

Leu

Leu

Arg

Pro

Gr.u

Met.

-Asn

Gin

245

·> 5 G

255

Val

Trp

Ile

Asp

Glu

Lys

Tyr

Gly

He

His

Thr

Tyr

Gin.

Pro

Leu

Lys

260

265

270

Glu

Gly

Tyr

Val

Arg

Ha

Asn.

Tyr

Leu

Ser

Ser

Ser

.Ser

Asn

Tyr

Asp

275

280

285

His

Leu

Ser

Alá

Trp

Leu

Phe

Lys

Asp

Val

Als

Thr

Pro

Ser

Thr

Thr

2SÖ

295

300

Trp

Pro

Asp

Gly

Ser

Asn

Phe

Val

Asn

Gin

Gly

Leu

Tyr

Gly

Arg

Tyr

305

310

315

320

Ile

Asp

Val

Ser-

Leu

Lys

Thr

Asn

.Alá

Lys

Ile

uly

Phe

Leu

He

325

330

3.35

Leu

Asp

Gi 'U

Ser

Lys

Thr

Gly

Asp

Al a

Val

Lys

Val

Pro

-Asn

.Asp

340

34 5

350

Tyr

Val

Phe

Arg

Asp

Leu

-Aia

Asn

His

Asn

G In

He

Phe

Val

Lys

Asp

.355

560

365

Lys

Asp

T ro

Lys

Val

Asn

-Asn

P r o

Tyr

Tvr

Ile

Asp

Gin

Gin

370

37 5

300

.l.'ííki

Lys

Asp

Ara

Gin

Gin

He

Asp

Leu.

Thr

Se y ω vi

He

Alá

Ser

Phe

* * ♦ ♦ ** » *«

- ii;

$ **» L x * ♦ ♦ * *

* * ♦ * » X«f

385

390

335

400

Thr

Thr

Len

Asp

Gly

\Zsi2.

Asp

Lys

Thr

Gin

He

Leu

Lys

Gin

Leu

Lys

405

410

415

Val

Thr

Asp

Lys

Asn

Gin

Asn

Alá

He

Gin

Ile

Ser

Asp

Ile

Thr

Leu

123:

425

430

Asp

Thr

Ser

Lys

Ser

Leu

Leu

Ile

Ile

Lys

Giy

Asp

Phe

Asn

Pro

Lys

435

44 0

445

Gin

Gly

His

Phe

Asn

Ile

Ser:

Tv r

Asn

Gly

Asn

Asn

Val

Két

Thr

Arg

450

455

460

G.X ti

Ser

Trp

Glu

Phe

Lys

Asp

Gin

Len

'Tyr

AX&

Tyr

Ser

Giy

Asn

Leu

4SS

470

475

480

Gly

xA-Ls

Val

Leu

Asn

Gin

Asp

Giy

Ser

Lys

'Val

Glu

AX &

Sex:

Leu

Trp

485

490

4S5

Pro

Ser

Alst

Asn

Ser

Val

Thr

Met

Ile

Ile

Tyr

Asp

Lys

Asp

Asn

503

505

510

•G'Xrx

Asn

Arg

Val

Vei

Alá

Thr

Thr

Pro

Leu

Val

Lys

Asn

Asn

Lys

Gly

515

520

525

val

Trp

Gin

Thr

.1

Leu

Asn

Thr

Lys

Leu.

Gly

Ile.

Lys

Asn

Tyr

Thr

530

5 3 5

540

Gly

Tyr

Tyr

Tyr

Leu

Tyr

Glu

Ile

Lys

Arg

Giy

Lys

Asp

Lys

Var

545

530

555

560

Ile

Leu

Asp

Pro

Tyr

Al s

Lys

Ser

Leu.

Áj. 3.

G.1.U

Trp

Asn

Sesr

Asn

Thr

565

570

575

Val

Asn

Asp

Asp

He

Lys

Thr

Alá

Lys

Alá

Alá

Phe

Val

Asn

Pro

Ser

580

58S

590

Gin

Leu

Gly

Pro

Gin

Asn

Len

Ser

Phe

Ale

Lys

I le

μλ e

Asn

Phe

uye

395

60 Ö

6 OS

Giy

Arg

Gin

Asp

A.la

Val

lie

Tyr

GI ti

Alá

His

Val

Arg

Asp

Phe

Thr

^Λ »*♦ *4

A* »*κ»

113

Ser

625

Alá

610

Asp

61:

S2Q

Arg Ser Leu Asp Gly

Asp Gly Lys Leu Lys Asn Gm Pne Gly

630 635

Aia Phe Ser Glu Lys Leu Asp Tyr ueu Gm Lys Leu Gly

64;

6S8

Thr The

643

Val Thr

55

His lle Gin Len Leu Pro Val Leu Ser Tyr The Tyr Vei Asn Giu Heh

660

665

670

Asp Lys Ser Arg Ser Thr Als Tyr Thr Ser Ser Asp Asrt Asn Tyr Asn

630

685

Trp Gly Tyr Asp Pro Gin

690

Lys Pro Lys Asp

Gru

705

Pro

71Ö

Tyr Phe Alá Leu Ser Gly Met

700

Ser Alá Arg lle Alá Glu Len Lys

d.

Ser

695

Gin Len

0 lie His Asp lle His Lys Arg Gly Met Gly Val Lle Leu .Asp Val Val

725

K· ?V

Tyr Asn His Thr Alá Lys Thr Tyr Leu Phe Giu Asp lle Giu Pro Asn

740

5

750

Tyr Tyr His Phe .Mát Asn Glu Asp Gly Ser Pro Arg Glu Ser Phe Gly

760 /63

Ly Gly Arg Leu Giy Thr Thr His Alá Met Ser Arg Arg Val Leu Val ^r7ö

780

Asp Ser Lle Lys Tyr Leu Thr Ser Giu Phe Lys Val Asp Giy Phe Arg

78;

790

735

800

Phe Asp Mer: Met Gly Asp His Asp Alá Als Alá lie Giu Leu Alá Tyr

805

810

815

Lys Glu Alá Lys Als lle Asn Pro Asn Hat lie Met Lie Gly Glu Giy

820 325 830

Trp Arg Thr Phe Gin Giy Asp Gin Gly Gin. Pro Val Lys Pro Alá Asn

114

835 840 845

Gin Asp Trp Met Lys Ser Thr Asp Thr Val Gly Val Phe Ser Asp Asp

550 855 880

Arg Asn Ser Leu Lys Ser Gly Phe Pro Asn Glu Gly Thr Pro Alá

Ile

SS

Phe Ile Thr Gly Gly Pro Gin Ser Leu Gin Gly Ile Phe Lys Asn Ile

870

875

850

885

590

085

Lys Alá Gin Pro Gly Asn Phe Glu Alá. Asp Ser Pro Gly Asp Val Val

900

910

Gin Tyr Ile Alá Alá His Asp .Asn LeU Thr Leu His Asp Val Ile Alá

923

925 ys Ser Ile

930 \ λ. · <21i> 111 <212> KIT <2.13> Streptococcus <400> .32

Ile Gin -Ser Leu Thx· Glu Gly Gin Leu Arg Ser Asp II® Pro Glu Phe

Arg Alá Gly Asp Thr Val Arg Val Kis Alá Lys· Val Val Glu. Gly Thr

25 30

Arg· Glu Arg 11« Gin Ile Phe Glu Gly Val Val Ile Ser Arg Lys Gly

40 45

Gin Gly Ile Ser Glu Met Tyr Thr Val Arg Lys lie Ser Gly Gly Σ1» « Λ 9* > φ * ♦ ·» 9> «· *** * * *>·*>„ «*φ* *- * * ^ * » *** ** χΑ #♦»*

CCj

Gly Val Glu Arg Thr Phe Pro· lle Hls Thr Pro Arg Val Asp Lys He

SS n Val Val Arg Tyr Gly Lys Val. Arg Arg Alá Lys Leu Tyr Tyr Leu

Arg Alá Leu Gin. Gly Lys Alá Alá Arg He Lys Glu Xle Arg Arg

108 tSS

110

<21Ö>	33
<211>	4171
<212>	DNS
<213>	Strep
<400>	33

catatgaoaa fcatttttcaa .agtcfcacato aettaetcgc ctgtogtg-ga aaatctggca atacattaat cg-aceaatta gttgctgatg gtttacttca tgcagataat cactaccatt

120 ttttcaatgg gaagtctctg gccactttca atactaacca attgattcgc gaagttgtct

180 átgttgaaat atccttagat actat-gtcta gtggtgaaca tgatttagta aaagttaaca

240 ttatcagacc cacta-ocgag catactaic-c ocacgatgat gacagctagc ccctatc-atc

300 aa-ggtatcaa tgatcctgcc gcagaccaaa aaacatacca aatggagggt gcgctagcag

360

tfcaaacagcc	taaacacata	caagttgaca	116 -	Σ» * * * » *** A * * **-* * ♦ ♦ * * ·> ~ ♦ * * ♦** ·· „ 8 * gtaaa.acatc
caaaaccatt	tasagaagaa
420 cfctcaaaatt 430	ac£cssGagc	cctgcaactg	aaagcttcac	acacattgac	agttatagtc
fcaatgacta 540	ttttctttct	cgtggttttg	cta-atatata	cgfcfctcaggt	gtgggtactg
ctggct-ctac 600	gggfcfctcatg	accagtgggg	•attaccaaca	aatacaaagc	tttaaagcag
tcattgattg δ fe 0	gttaaatggt	aaggttactg	cattcacaag	tcataaacga	gataaacaag
teaaggotga 720	ttggtcaaac	ggcctfcgtag	caaccacagg	fcaaatcttat	cfccggtacca
tgtcaaetgg 780	tttagcaaca	actggcgttg	aggggcfcgaa	agtcattatc	gcfcgaagccg
caatctecac 84Θ	stggtatgat	tattatcgag	aaaatgggct	tgtgtgtagt	ccaggcggct
aceccggfega SOO	agatttagac	gttttaacag	aattaacata	cr.ca s gaaa c	ctctfcagctg
gtgatfca-:cat 960	caáaaacaa c	gafctgctafcc	•aagcattgtt	aacscgaacaa	fccaaaagcaa
ttga-cegtca 1020	aagtggggat	tacaaccaat	acfcggcafcga	ccgtaattac	ctaactcacg
tcaataafcgt 1080	caa&agtcga	gtagtttaoa	etcatgg.act	acaggattgg·	aatgttaagc
caagacstgt Ϊ '5 d 0	ctacaaagtt	ttcaatgcat	tgccteaaác	catcaaaaaa	cacctttttt
Λ ~ x V taeateaagg	fccaacatgtg	tafcatgcata.	afcfcggcagtc	gattgatttt	cgtgaaagca

1200

		-	117-		* * ♦ & A ·*· » , » »7,. * » Λ « . >· ♦ ' > ·»
fegaatgccfct	a c ta c ca a	gaactacfc&g	g esc cga ess	tcattfcccaa	ttagaagagg
1260
fceafcttggca 1320	a *!>«. £ a a 'c a c £	actgagcaaa	cttggcaagt	t'ttagafcgct	fctcggaggaa
acoatcaaga	geaaatfeggt	ttaggtgata	gtaaaaaact	tattgataac	cattafcgaca
1389
aagaagcctt	tgafc.actc.at	tgtaaagact	tcaatgtgtt	caaaaatgat	cfctttcaagg
1440
gaaataataa	aaecaatcaa	a t e a c tasa	atettcetet	aaagaaaaat	tatét c-ctga
1500
atggaeagtg 156$	caaactccat	ctacgtgtfca	s s a c c s g L y s	caaaaaggcc	atfcfctatcag
•cccaaat'Ctt:	agactatggt	cctaaaaaac	gafctcaaaga	tlciCgi CCiJ -SICC	ateaaáttér
i. \»£, ví taaa-oagcct 168 0	fcgataa .fcggh	aaaaatfcfcfcg	ccagagaagc	tttacgtgaa	cfccccgfctta
ctaa-agatca 17 4 Q	ttatcgfcgfcc	atcagfcaaag	gtgfcctfcgaa	cctfccaaaat	cgtacagact
tacttaeaat	tgaggctatc	gagccagaac	aatygtfctga	tafcegagttfc	agcefcccaac
IS 00
eaagtatata	tcaafctgagt	aaaggtgata	afcctaaggat	fcafcccfcttat	acaactgatt
λ « ti V ttgaacatac	cattcgagat	aatgcfcagtt	actctafeaac	agfcagatttg	agtcaafcctt
1920
atttaacUt 1 Π	cceaactaat	caaggaaa.fct	aaettatgaa	acttctfcact	aaagaaeggt
1 .» v V Oa t- £ c	tceacacttt	tggfcaccaga.	fccaafcttatt	acaagagagt	aacttcggag

Λ JA .2046:

_νβ

cagtttttga 7 ί Π Π	ccatga.taat	aaaaacafcfec	US - cacaggfctgt	♦ ♦♦ * « * « tgcsactatt	♦ ♦ Φ « «χ :: * * .« .. j gttgatgatt
tacaaggtte 2169	•cggaagfcfccg	aatcatttct	ggfcatttfcgg	caatacfcact	gatacttcca
tccfctatgat	tgct-cattta	aafccgaaaafc	tctatattca	ggttaattfca	aaggacttfcg
2220
actttgcact 228 0	ess fc c t aa fca	gctataaafca	attagaagag	tctcctccaa	actcaacttg
a a gccctaaa ν 7» 4 Π	cgatacccfca	gcaatattfcc	a a fca a a fcsag	gfcagaatgga	gtgaeaaagc
Λ*χ> Ti \Ζ .aaegcg&ggg 2400	agactgatta	atgfccatctt	attgga-ataa	cfcatcctgaa	cttaaaaaaa
atattgatga	aaccaatcaa	cfcaafctcaag	aaagaataca	ggfceagaaat	aaagatattg
2460
aagcggcgct	aagccaactc	acagcfcgcgg	gaggaaaaca	gcfccagacca	gcattctttt
2520
accttfcfcfcfcc	tcaacfctggt	aataaggaga	atcaagatac	tcagcaacta	aagaaaatcg
2580
ctgcttcfcfct 2640	agaaatcctt	cacgtfcgcta	catt-aatcca	tgatgatgtc	afctgatgact
eacesetaag	acgtggaaat	afcga.ccattc:	aaagcaagtfc	tggcaaagac.	afecgcagttt
2700
afcactgggga	tttacttttc	acagtcfcfctt	fczcgatctfcat	tttagaatct	atgactgafca
2760
cac-catttat	gaggattaat	gcaaaatcta	fc gcgfcass a r	fcctcat.ggga	gaaütggacc
2820
aga tg csent	tcgtfcacaafc	ca a caá ca a g	gtatccatca	cfcatfctacgt	gcgattfccag

«

1.1 gfcaaga-cag-c· cgaacfccttfc aáatfcagat-a gcaaagaagg agctfc-acfctt ggtggtgca-g

2940 agaaggaggfc fcgttcgfccta gcaggccafca tcggcfcfcfcaa -cafctggfcafc-g acattccaaa

3000 tfctfcggafcga tafccctggafc- fcat-acfcgcag ataaaaaaac atfcfcaataag cctgtcfctag

3360 aggattfcaac acaaggcgtt. tacagccttc cfccfcacttct tgccafcfcgaa gaaaatcctg

Λ ·*> Λ λζ. ! í a-tafcfcfctcaa acctatfcfcfca g.ataaaaa.aa ca.ga-fc.afcggc fcactgaagac atggaaaaaa

ISO fcfcgctfcatct cgfccgfctfccc catagaggtg fcfcgacaaagc fccgcca.fcct-a gctcgfcaaat

3240 fcfcactgagaa agcfcafctagt gacafcaaata- a.gcfcagccca ga-actcfcgca aaaaaacagt

3300 fcgcfcacaatfc aactaattac cttfcfcaaaac gcaaaafcfcta aataataaaa aaacattcca

3360 caatgcfcaga aaageagtta gggaafcgttfc fctttattafcc afefcfcatttat cgcaccfcatc

3420 aatcatcata gafcca'ccatc afccagcggct tfccagctgac ggtaacgttg ac-tacttt.ga

3400 gacaatt-cfc.fc gag-g.-aga.acc tfcccaactct aafcfcgcccafc tttcfcafcaaa fcaagatacga

3540 fccagcafcgtt caatacctfcfc taagfcgat-gfc gtaatccaaa ctaaggtct-fc accttccaat

3600 tcfctfccataa atacccfcfcag fcaaggctfcgt tcagfca.afc.ag gatcaagfccc aacagfctggc

660 tcatctaaga fcaaeaatfcgg gacafccttfcfc agtaagattc t&gccaaagc aattetatgc.

3720 ♦ -»

120 stttegccac ctgaaaacct aagtccaget fecatcaaeca ttgtatagag accatotgat

3789 aaatcagega ccatotcttt. caatccaact cgfctcaagaa cfcfctecatac atcttcttca

3540 ctagcatctt ggttfeccaat gcgaatgtta tfcfcagcaggg fctgfcafcfcaaa -aaggtagggc

3900 gctfegtfegta tcacfcccaat atagfe-fcagaa atgcaafccac caacfcafefega aacatcagca

3960 ccgcctaggg taatcttccc fcfcgaefctgcfc fetcaaghcgc cacgaagta-g- actagct-aag gtaetcttgc cagaaccact ccgccctaaa atagcaattt tttcfecctfec tfctaatatco

4080 aaatctaaat gatgcaaaac ccatttetet tgtggcfctat actggaaact taaafcfccfcfcg

4140 acgga-aaaat catatggcfct attaggcaat t

4171 <210> 34 <211> 173 <212> PRT <2137· s treptococcu-s <400>

Mát Arg Phe Aia Glu Cys Leu Gly Leu

I 5

Thr Asn Lys Tyr Leu Ser He Asn Lys

Thr Val Asn Asp He- Asp Tyr

15

Thr Trp Asp Tyr His Phe Asn

121

Gin Arg Tyr Leu Pro Thr Lys Asn Lys Ser Sex Ile Arg Asn He Pro

40 45

Ile Asp Asn Asp Thr Lea Phe Phe Leu ftia Glu Phe Thr Lys Asn Lys

Asn Asp Arg Leu Phe Asp Lys Leu Ser Asn Asn Alá Val Asn Lys Thr

He Arg Lys He Thr Gly Arg Glu Val Arg Val His Ser Leu Arg Hl

Thr Phe Alá Ser Tyr Leu He Ser Ile Ser Gin Val Leu Asp His Glu

100

105

110

Asn Leu Asn He

115

Thr Leu Glu Val Tyr Alá His Gin Leu Gin Glu Gin

120 125 jy.s Asp Arg Asn Asp Lys Leu Asn Gin Arg Asn Leu Gly Gin Asn Ser

130

135

140

Ser Lys pro Leu Phe Thr Cys Asn Glu Tyr Val Pro Cys Arg Asn Arg

145

Thr Ser .Asn Tvr

150

155 ,60

Ser Leu Gly Gly Ser Cys Tyr He Híj

165 170 <210> 35 <211> 389 <2I2> PRT <213> Streptococcus <40Q> 35

Met Lys Ser Ser Asn Glu He Glu Lys Alá Leu Tyr Glu Ser Ser Asn

122 -··

Ser Ser Ile Ser Ile Thr Lys Lys Asp Gly Lys Tyr Phe Asn Ile Asn

Sin Phe Lys Asn lie Glu Lys He Lys Glu Val Glu Glu Lys Ile Phe

Gin Tyr Asp Gly Leu Alá Lys Leu Lys Asp Leu Lys Val Val Ser Gly ílu Gin Ser Ile Asn Arg Glu Asp Leu Ser Asp Glu Phe Lys Asn Val

Val Ser Leu Glu Alá Thr Ser Asn Thr Lys Arg Asn Leu Leu Phe Sej

3©

Ser Gly Val Phe Ser Phe Lys Glu Gly Lys Asn He Glu Glu Asn Asp

100

105

110

Lys Asn Ser He Leu Val Kis Glu Glu Phe Alá Lys Gin Asn Lys Leu

L15

L20

125

Lys Leu Gly Asp Glu He Asp Leu Glu Leu Leu Asp Thr Glu Lys Ss

130

135

140

Gly Lys He Lys Ser Kis Lys Phe Lys Ile He Gly He Phe Ser Gly

150 155 160

Lys Lys Gin Glu Thr Tyr Thr Gly Leu Ser Ser Asp Phe Ser Glu Asn

1S5

170

175

Kefe Val Phe Vsi Asp Tyr Ser Thr Sex Gin Glu lie Leu Asn Lys Ser

180

185

190

Glu Asn .Asn Arg He Alá Asn Lys Ile Leu Mefc Tyr Ser Gly Ser Leu

195

200

205

Glu Ser Thr Gin Leu Alá Leu Asn Lys Leu Lys Asp Phe Lys lie Asp

210

215

223

Lys Ser Lys Tyr Ser Ile Lys Lys Asp Asn Lys Alá Phe Glu Glu Ser

225 230 235 24Ö

Len Giu Ser Val

Ser He Met Lett

260

Trp Leu. Arg Giu

275

Thr Thr lys Xle

290 lle Ser lle Pro .305

Leu Lys Val He

Phe Gly Giy Ser ö

Thr Leu Alá Giu

355

Vsi Val Met Alá

Ser Gly lle Lys

245

Gly Gly lle Val

Arg lle Tyr Giu

280

Gin lle Xle Arg

285

Ser lle Xle Ser

310

Val gXu Oly Phe

325

Lett lle Asn Lys

Ser Tyr Len lle

360

Ser Ser Leu Xle

His XX» Xle Lys

250

Val Leu Ser Leu

265

Xle Gly He Phe

Gin Phe Xle Phe

300

Ser Leu Phe Leu

315 lle Asn Ser Giu

330

Ser Ser Phe Met

345

Leu 11« Ser He

Len Phe Lys Lys

Xle Met Thr Tyr

255

He Lett lle Leu

270

Leu Ser lle Gly

205

Gitt Leu He Ph«

Gly As» Lau Leu

320

Asn Ser Met. lle .335

Leu Asn Xle Thr

350 lle Val Lett Ser

365

Pro G.Xn Giu He

37	0
Leu Se 385	r Lys Xle	Ser
<21Ö>	36
<211>	169
<2I2>	PRT
<213>	Strepto-c	:öCC
> x <·*\ ys v.	36

330

124 Met Asp IIe Leu Giu lle Lys Asn £

Lys Glu Lys Val Leu Ser Gly Val

Phe Tyr Alá lie Val Gly Lys Ser

10

Ser Leu Leu Alá Gly Leu Asp Lys

55

Lys Asn Glu Asp Ile Giu Lys Lys

70

Asn lle Ser Leu Val Phe Gin Asn

Pro lie Glu Asn lie Arg Leu Val

100

Leu Phe Giu Leu Giy Leu Asp Lys

115 120

Lys Leu Ser Giy Gly Giu Gin Gin

130 135

Val Ser Asp Alá Pro lle He leu

115 ISO

Asp Ser Val Thr Alá Gly Giu lle

165

Val Asn Tyr Ser Tyr Alá Asn Ser

IS

Asn Gin Lys Phe Giu Leu Gly Lys

30

Gly Thr Gly Lys Ser Thr Leu Leu

Val Gin Thr Gly Lys lle Leu Phe

Gly Tyr Ser Asn His Arg Lys Asn

80

Tyr Asn Leu 11« Asp Tyr Leu Ser

95

Asn Lys Ser Val Asp Giu Ser ile

135 110

Lys Gin Xle Lys Arg .Asn Val Met

125

Arg Vei Alá lie Alá Arg Alá Leu

140

Alá Asp Glu Pro Thr Gly Asn Leu

1.55 160 lle <2.10> 37 <211> €49 <212> PRT <213> Streptococcus * φ * ** φ <400> 37

Tyr

Asp

Asn

Xle

Phe

Gin

Sex:

Leu

His

His

Len

Leu

Alá

Cys

Arg

Gly

I

S

10

IS

Lys

Ser

Gly

Asn.

Thr

Leu

He

Asp

Gin

Leu

Val

Asp

Gly

Leu

Leu

? A

•>c

a n

i. V

íi. -«í

í'j

His

A.L a

Asp

Asn

Kis

Tyr:

Kis

Phe

Phe

Asn

Gly

Lys

Ser

Leu

Ara

Thr

35

40

45

Phe

Asn

Thr

Asn

Gin

Len

He

Arg

Glu

Val

Val

Tvx

Val

Gin

lle

Ser

50

55

60

Leu

Asp

Thr

Met.

Ser

Ser

Gly

Glu

His

Asp

Leu

VsL

iíVS

Val

Asn

He

65

70

75

00

1 ie

Arg

Pro

Thr

Thr

Glu

Kis

Thr:

He

Pro

Thr

Met

Met

Thr

Ara

Ser

85

50

95

Pro

Tyr

His

Gin

Gly

Xle

Asn

Asp

Pro

Alá

Alá

Asp

Gin

Lys

Thr

Tyr

.100

105

110

Gin

Met

GI u

Gly

Alá

Leu

Alá

Val

Lys

Gin

Pro

Lys

HjLs

II a

G.rn

Val

115

120

125

Asp

Thr

Lys

Pro

Phe

Lys

Glu

Gin

Val

Lys

His

Pro

Ser

Lys

Leu

Pro

130

135

14Θ

Ha

Ser

Pro

Alá

Thr

Glu

Ser

Phe

’T’ bs A (A A.

His

He

Asp

Ser

Tyr

Ser

Len

145

ISO

155

160

Asn

Asp

Tyr

Phe

Leu

Ser

Arg

Gly

Phe

Alá

Asn

lle

Tyr

Val

Ser

Gly

1.65

1 Η «·Ύ A < <Λ

i 7 S

Val

Gly

Thr

Alá

Gly

Ser

Thx‘

Gly

Phe

Heh

Thr

Ser

Gly

Asp

Tyr

Gin

180

185

100

Gin

1 la

Gin

Ser

Phe

Lys

A.Is

Val

He

Asp

Trp

Leu

Asn

Gly

Lys

Val.

200

205

126 « «

Thx Alá Phe Thr Ser His

210

Ser Asn Gly Le« Val .Alá

225

230

Lys Arg' Asp Lys -Gin Val Lys Alá Asp Trp

215 220

Thr Thr Gly Lys Ser Tyr Leu Gly Thr Met

240 .235

Ser Thr Gly Leu Ma Thr Thr Gly Val Glu Gly Leu Lys Vai 11« Ile

245

Ara Glu Ara Alá lie Ser

260

Leu Vai Cys Ser Pro Gly Gly Tyr Pro Gly Glu Asp Leu Asp Val Leu

250

155

Thr Trp Tyr Asp Tyr Tyr Arg Glu Asn Gly

265 270

280

285

Thr Glu Leu Thr Tyr Ser Arg Asn Leu Leu .Alá Gly Asp Tyr Ile Lys

290

295

300

Asn Asn Asp Cys Tvr Gin

305

310

315

320

Asp Arg Gin Ser Gly Asp Tyr Asn Gin. Tyr Trp His Asp Arg Asn Tyr

325

330

335

Leu Thr His Val Asn Asn Vai Lys Sex Arg Val Val Tyr Thr Kis Gly

340

M5

0

Leu Sin Asp Trp Asn Vai Lys Pro Arg His Vai Tyr Lys Val Phe Asn

355

360

365

Alá Leu Pro Gin Thr Ile Lys Lys His Leu Phe Leu Hís Gin

380

His Val Tyr Met His Asn Trp Gin Ser He Asp Phe Arg Glu

370

375

385

330

ISO

Gry Gin

Ser Met

00

Asn Alá Leu Leu Ser Gin Glu Leu Len Gly Ile Asp Asn Kis Phe -Gin

405 410 415

Leu Glu Glu Val Ile Trp Gin Asp Asn Thr Thr Glu Gin Thr

20

425

430

Val

Leu

Asp 435

Alá

Phe

öly

Giy

Asn 440

Hís

Gin

Glu

Gin

Ile 435

Giy

Leu

Giy

Asp

Ser

Lys

Lys

Leu

He

Asp

Asn

Bis

i yx

Asp

Lys

GX u

Alá

?*jé

Asp

450

4 55

460

Thr

Cys

Lys

Asp

Phe

Asn

Val

Phe

Lys

Asn

Asp

Leu

Phe

Lys

Giy

465

470

475

480

Asn

Asn

Lys

Thr

Asn

Gin

He

Thr

Ile

Asn

Leu

Pro

Leu

Lys

Lys

Asn

485

4 90

495

Tyr

Leu

Jjíiívl

Asn

Giy

Gin

Cys

Lys

Len

Kis

Leu

Arg

Vrai

Lys

f·

Ser

500

505

516

Asp

Lys

Lys

Alá

He

Leu

Ser

Alá

Gin

He

Leu

Asp

Tyr

Giy

F Γ0

Lys

515

526

525

kys

Arg

Phe

Lys

Asp

Thr

Pro

Thr

Ile

Lys

Phe

Leu

Asn

Ser

Leu

Asp

530

535

540

Asn

Giy

Lys

Asn

Phe

Alá

Arg

Glu

Alá

Leu

Arg

Giu

Leu

P ro

Phe

Th r

545

550

355

560

Lys

.Asp

Bls

Tyr

Arg

Val

r le

Ser

uye

Cly

Val

Leu

Asn

Leu

Gin

Asn.

565

570

575

.Arg

Thr

Asp

Leu

Leu

Thr

Ile

Glu

Α.Ϊ 3.

He

Glu

Pro

Giu

Gin

Trp

Phe

580

585

590

Asp

11©

Glu

Phe

Ser

Leu

Z'. „ VrXSi

Pro

Ser

He

Tyr

GXu

Leu

Ser

Lys

Giy

595

600

605

Asp

Asn

Ueií

Arg

He

Ile

Leu

Thr

Thr

Asp

Phe

Glu

Kis

Thr

He

610

615

620

Arg

Asp

Asn

Als

Ser

Tyr

•Sör

He

Thr

Val

Asp

Leu

Ser

Gin

Ser

rp - f ·..+ A A.·

625

630

635

640

Leu

Thr

He

Pro

Thr

Asn

CAÍ;

Giy

Asn

645

128

<210>	39
<211>	119
<212>	PRT
<213>	S t reptococcu
<400>	39

Mefc Lys Len Leu Thr

5

Tyr Gin lle Asn Leu

His Asp Asn Lys Asn

Leu Gin Gly Ser Gly

Thr Asp Thr Ser He lle Gin . Var Asn isii

Ila Asn Asn Trp Lys

100

Asp Thr Leu Alá Lle

115

Lys	Glu	Arg	Phe	Asp	Asp	Ser	Gin	His	Phe	Trp
				10					15
Len	Sin	Glu	Ser	Asn	Phe	Gly	Aia	Vai	Phe	.Asp
			25					30
lle	Pro	Gin	Vai	Vai	Alá	Thr	He	Val	Asp	Asp
		40					45
Ser-	Ser	Asn	His	Phe	Trp	Tyr	Phe	Gly	Asn.	Thr
	55					60
Len	Met	He	Ara	J, c	Leu	Asn	Acg	Lys	Phe	Tyr
70					75					8Q
Lys	Asp	kv	Asp	Phe	Alá	Leu	Asn	Leu	He	Alá
				90					95
Ser	Leu	XjtSVi	Gin	Thr	Gin	Leu	Glu	m1&	Les	Asn

105 110

Phe Gin <210>

<211>

<212 >

<2I3>

326

FRT

S t r ept o co-ccu s

129 Sr <f ♦ « <40ö> 40

Met Ser Ser Ty.r Trp Asn Asn Tyr Prc Glu leu Lys Lys Asn· He Asp iü

Glu Thr Asn. Gin .Leu Ile Gin Glu Arg He Gin Val Arg Asn Lys Asp

2.0 lie Glu Aia Alá Leu Ser Gin Len Thr Alá Alá Gly Gly Lys Gin Leu

Arg Pro Ála Phe Phe Tyr Leu Phe Ser Gin Leu Giy Asn Lys Glu Asn

Gin Asp Thr Gin Gin Leu Lys Lys Ile Aia Alá. Ser Leu Glu ile Leu

70 75 80

His Val Aia Thr Len He Kis Asp Asp Val He Asp Asp Ser Pro Leu

00 95

Arg Arg Gly Asn Met Thr He Gin Ser Lys Phe Giy Lys Asp He Alá

100 105 HQ

Val Tyr Thr Gly Asp Leu Lan Phe Thr Val Phe Phe Asp Leu He Leu

i.15

120

125

He Ser Met Thr Asp Thr Pro Phe Met Arg He Asn Alá Lys Ser Met

130

0

Arg Lys 11« Leu Met· Gly Glu Leu Asp Gin Met His Leu Arg Tyr Asn ieo

145

ISO

155

Gin Gin Gin Gly Ile Kis His Tyr Leu Arg Aia Ha Ser Giy Lys Thr .165 170 175

Alá Gin Leu Phe Lys Len Aia. Ser Lys Giu Gly Alá Tyr Phe Giy Giy

183 185 190

Lys Gin Val Val Arg Lan Aia Gly His Ha Giy Phe Asn He

Ai a Gru

«... ... .

♦ x » . .

195

200

Gly Met Thr Phe Gin Ile Leu Asp Asp Ile Leu Asp Tyr Thr Alá Asp

21Q

220

Lys Lys Thr Phe Asn Lys Pro Val Leu Glu Asp Len Thr Gin Gly Vs

225

230

235

240

Tyr Ser Len Pro Leu Leu Leu Alá Ile Glu Glu Asn Pro Asp Ile Phe

245

250

255

Lys Pro Ile Leu Asp Lys Lys Thr Asp Met Alá Thr Gin .Asp Met Glu

260

265

270

Lys Ile Alá Tyr Leu Val Val Ser His Arg Gly Val Asp Lys Alá Arg

280

28:

His Len Alá Arg Lys Phe Thr Glu Lys Alá Ile Ser Asp Ile Asn Lys

290

300 ,eu Pro Gin Asn Ser Alá Lys Lys Gin Leu Len Gin Leu Thr Asn Tyr

30í ö

315

0

Len Leu Lys Arg Lys Ile

325 <21Q> 41 <211> 247 <212> PRT <213> Streptococcus <400 41

Len Pro Asn Lys Pro Tyr Asp Phe Ser Val Lys Asn Len Ser 'Phe Gin

5 10 15

Tyr Lys Pro Gin Glu Lys Trp Val Leu His His Leu Asp Leu Asp He ♦ ♦« * * * * > X

25 30

Lys Glu Gly Giu Lys lle Alá He Leu Gly Arg Ser Gly Ser Gly Lys

Ser Thr Leu Aia Sér Leu Leu Arg Gly Asp Leu Lys Alá Ser Gin Giy

Lys Lle Thr Leu Gly Gly Alá Asp Val Ser lle Val Giy Asp Cys lie

Ser Asn Tyr lie Gly Val ile Gin Gin Aia Pro Tyr Leu. Phe Asn Thr

Thr Leu Leu Asn Asn lle Arg lle Giy Asn_: Sin Asp. Alá Ser Glu Glu

100

110

Asp Val Trp Lys Val .Leu Glu Arg Val Gly Leu Lys Glu 'Met Val Thr

115

120

125

Asp Leu Ser Asp Giy Leu Tyr Thr Met Val Asp Glu Alá Gly Leu ik .130

135

140

Phe Ser Gly Gly Glu Arg His Arg lle Alá Leu Alá Arg lle Leu Leu

150 is;

160

Lys Asp Val Pro lle Val lle Leu Asp Glu Pro Thr Val Gly Leu Asp

165

170 ·« c X ÍZí

Pro lle Thr Glu Gin Alá Leu Leu Arg Val Phe Mefc Lys Glu Leu Glu

ISO

185

1.9 0

Gly Lys Thr Leu Val Trp lie Thr His His Leu Lys Giy lle Glu His

195

200

20;

Alá Asp Arg lle Leu 'Phe lle Giu Asn. Gly Gin Leu Glu Leu Giu Giy

210

215

220

Ser Pro Gin Glu Leu .Ser Gin Ser Ser Gin Arg Tyr Arg Gin Leu Lys

235

240

Alá Alá Asp Asp Gly Asp Leu « .< $ «

132 ·* * Ζ. ’ » ♦ ' »«<· .»· ·, *•*1 (.

245 <21.1> 434 <213> Streptococcus <400> 42

Met Lys Met Asn Lys Lys Val Leu Leu Thr Ser Thr Met Alá Alá Ser

Leu .Leu Ser Val Alá Ser Vei Gin Alá Gin Glu Thr· Asp Thr Thr Trp

Thr Alá Ar-g Thr Val Ser Glu Val Lys Alá Asp Leu Val Lys Glu Asp

Asn Lys Ser -Ser Tyr Thr Val Lys Tyr Gly Asp Thr Leu Ser Val Ile só

Ser Glu Ma Mefc Ser Ile Asp Mefc Asn Val Leu Alá Lys He Asn Asn

He Alá Asp He Asn Leu He Tyr Pro Glu Thr Thr Leu Thr Val Thr

Sö

Tyr Asp Gin Lys Ser His Thr Alá Thr Ser Mefc Lys He Glu Thr Pro lOÖ .05

110 .a Thr Asn .Alá .Alá Gly Glu Thr Thr Alá Thr Val Asp Leu Lys Thr

115

120

125

Asn Gin Val Ser Val Alá .Asp Gin Lys- Val Ser Leu Asn Thr He Sas

i. 3 0

13'

148

Gin Gly Met Thr Pro Glu Alá Alá Thr Thr lie Val Ser Pro Met Lys «·:♦ lSQ

Thr Tyr Sex Sex Alá Pro Aia Leu Lys Ser

165 170

155

Lys

160

Glu Val Leu Ara Gin

175

Glu Gin Alá val i&r Gin .Aia Alá Aia Áss. Glu Gin Val Ser Thr Arí

ISO 185 190

Pro Val Lys Ser Jle Thr Ser Glu Val Pro Aia Alá

200

195

Lys Pro Thr Gin Thr Ser Val Ser Gin Ser

213 215

Ser Val Alá Alá Glu Thr Pro Alá Pro Val

225 230

Axg Thr Val Aia Al.a Pro

Thr

Alá

235

Lys Glu Glu Val.

205

Val Ser Pro Alá

Thr

220

Lys Var Alá Pro Val

Al.a

245

Arg Va.l. .Ara Sex Val Lys Val

250 vaj

240:

Thr Pro

255

Lys Val Glu Thr Gly Al.a Ser Pro Glu His Var Ser Alá Pro Aia Val

260

265

0

Pro Val Thr Thr Thr Ser Thr Al.a Thr Asp Ser Lys Leu Gin Aia Thr

280

285

Glu Val 'Lys Ser Val Pro Val Alá Gin Lys Alá Pro Thr Aia Thr Pro

300

290

295

Val. Alá Gin Pro Alá Ser Thr Thr As-n Alá Val Aia Ara His Pro Glu

305

313

315

320

Asn A.ra Gly Leu Gin Pro His V'al Alá Alá Tyr Lys Glu Lys Val A.la

325

330

Ser Thr Tyr Gly Var Asn Gin Phe Ser Thr Tyr Arg Ara Gly Asp Prc

340

5

Gly Asp His Gly Lys Gly Leu Alá Val Asp Phe ile Val Gly Lys; Asn

S

360

65

Gin Aia Leu Gly Asn Glu Val

Alá Gin Tyr Ser Thr Gin Asn Met Als

- 134

370

380

Alá Asn Asn Ile Ser Tyr Val Ile Trp Sin Gin lys Phe Tyr Ser Asn

390

395

400

Thr Asn Ser He Tyr Gly Pro Alá Asn Thr Trp Asn Alá Met Pro Asp

410

IS

Arg Gly Gly Vai Thr Alá As·» His Tyr Asp His Val His Val Ser Phe

420

430

Asn Lys

<210>	44
<211>	1305
<212>	DNS
<213>	Streptococcus

<4ÖG> 44 a'tgaaaatga ataaa-aaggt acfcattgaca. tcgacaafcgg cagcttcgct attat-cagtc60 gcaagtgttc aagcacaaga .aacagatacg acgtgga.cag cacgtaetgt ttcagaggta aaggctgatfc tggfeaaagca agacaataaa fecatcatafca ctgtgaa-ata tggtgataca

ISO cfc.aagcgtfc.a tttcagaagc aatgfccaatt gatatgaatg tcttagcaaa aattaataac

V attgcagata tcaatcttat ttatcctgag acaasactja cagtaactta cgatcagaag

300 agfccatactg ccacttcaat gaaaafcagaa acaccagcaa caaatgctgc tggtcaaaca

6 Q

áD'fi	tgg&tttgaa	- i35	X ♦ * « • » C <A O’ 3. C C o 3 &	** **** * X » » * * * ♦ * ♦ * ♦ « · *< * ** *» ♦ » agtttetete
aaccaatcaa	g'tttctgttg
s.aí-'SC'űí sL C ’C 4 80	cggaaggtat	Cí <5 ú. <3. C3 c%: 3i -ά	gcagcaacaa	•cgattgtt te	gccaatgaag
acatatt.ctt·	ctgcgccagc	ttfcgaaatca	aaagaagtat	tagcacaaga	gcaagctgtt
540 agtcaagca.g	cagcfcaatga	aca.ggtatca	acag-otcctg	tgaagtegat	tacttcagaa
\z\, V gtfcccagcag	ctaaagagga	agttaaacca	actcagacgt	cagtcagtca	gfccaacaaca
660
gfcatcaccag	cttctgttgc	cgctgaaaca	ccagctccag	fcagctaaagt	agcaccggt a
720
agaactgfcag	oagcceot&g	agrggcaa gt	gfctaaagtag	tcacfccctaa	agtagaaset
780
ggtgcatcac	cagageatgt	atcagctcca	gcagfctectg	tgactacgac	ttcaacagct
840
acagacagta	agttacaagc	gactgaagtfc	aagagc.gttc	cggtagcaca	aaaagctcca
9ÖÖ
acagcaacac	cggtagcaca	accagcttca	acaacaaatg	cagtagctgc	acatcctgaa
960
a-atgcagggc	fcccaacctca	tgttgcagct	tataaagaaa	aagtagegte	aacttafcgga
1020
gttaatgaat 1080 gtegacfcfcta	tcagtacata	ccgtgcaggt	gatccaggtg	atcatggtaa	aggtttagca
ttgtaggtaa	aaaccaagca	cttggtaatg	aagttgcaca	gtactczaca
1140
caaaatatgg	C3-$C&3M'&2t	catttcatat	gttatctggc	aa caa aagtc	ttactoaaat

1200

136 aoaaatagfca tttatggace tgctaatact tggaatgcaa fcgccagatcg tggtggcgfet

1260 actgccaacc ettefcgacca t-gttcacgta. fc-ca.fettaaca aataa

1305 <21Q> 45 <211> 232 <212> PRT <213> Strep'tococcus <400> 45

Mefc Pro His Leu Ser Lys Slu Alá Phe Lys Lys Sin He Lys Asn Gly

He He Val .Ser Cys Gin AXa Leu Pro Gly Glu Pro Leu Tyr Thr Glu

Ser Gly Gly Val Met Pro Leu Leu Alá Leu Alá Alá Gin Glu Alá G3

Alá Val Giy He Arg Alá Asn Ser Val Arg Asp Ile Lys Gin ile Gin

Giu Val Thr Asn Leu Pro 11« 11« Gly He He Lys Arg Glu Tyr Pro

Pro Gin Glu Pro Phe Ile Thr Alá Thr Met Thr Glu Val Asp Gin Leu

50 95

Alá Ser Leu Asp He Alá Val Ile Alá Leu Asp Cys Thr Leu Arg Gin

LOS .105

L10

Arg Kis Asp Giy Leu Ser Val Alá Glu Phe 11« Gin Lys He Lys Giy

115

120

25

137 ·* φ *φ«

Lys Tyr Pro Glu Gin Leu Leu Met Alá Asp He Ser Thr Phe Glu- Glu

130

140

Gly Lys Asn Alá Phe Glu Alá Gly Vai Asp Phe Val Gly Thr Thr len

160

Ile Glu

175

Len Leu Asn Lys Leu Cys Gin Alá Gly Ile Asp Val Ile Alá Glu Gly

145 iss

Ser Gly Tyr Thr Asp Tyr Xaa Arg Gin Glu Glu Gly Pro Asp

165 170

180

185

190

Lys He His Thr Pro Lys Gin Alá Asn Glu Ile Asn His Lie Gly Val

195

200

Alá Gly He Val Val Gly Gly Alá Ile Thr Arg Pro Lys Glu Ile AXa

210

215

220

Glu Arg Phe Ile Ser Gly Leu Ser

225

230 <210> 46 <211> 39 <212> PRT < 213 > Streptococcas.

<400> 46

Met Ser Ile Lvs· Lys Ser Val. Ile: Gly Phe Cys Leu Gly Alá Alá Alá

Len Ser Mer. Phe Alá Gye Val Asp Ser Ser Glxx Ser Val. Met Alá Alá

Glu. Lys Asp Lys Val Gin He

138 <21ΰ> 47 <211> 409 <212> PRT

<213> Strepto-í.

;occ

US

<400> 4

*7

Gin

Glu

Thr

Asp

Thr

Thr

Trp

Thr

Alá

Arg

Thr

Val

Ser

Glu

Val

Lys

i.

5

10

15

Alá

Asp

Leu

Val

Lys

Gin

.Asp

Asn

Lys

Ser

Ser

Tyr

Thr

Val

Lys

Tyr

20

25

30

Gly

Asp

Thr

Len

Ser

Val

He

Ser

Glu

Ara

Met

Ser

He

Asp

Met

.Asn

35

40

4 5

Val

Leu

Alá

Lys

Ile

Asn

Asn

He

.hl a

.Asp

Ile

Asn

Ile

T<.· r i .L

Pro

50

55

60

Gin

Thr

Thr

Len

Val

Thr

Tyr

Asp

Gin

Lys

Ser

His

Thr

Alá

Thr

nn

'7

Q O

G

f 0

ö V

Ser

Met

-Lys

Ile

Glu

Thr

Pro

Aia

Thr

Asn

Alá

Alá

Gly

Gin

Thr

Thr

65

90:

95

Alá

Thr

Var

Asp

Leu

Lys

Thr

Asn

Gin

SZ 3 A

Ser

Val

Alá

Asp

Gin

x>y s

100

105

Π 0

Vai

Ser

Leu

Asn

xj £

Ile

Stsúc

Gin

W

Mer.

Thr

Pro

Gin

Alá

Ara

Thr

115

120

125

Th r

Ils

Val

Ser

Pro

Met

Lys

Thr

Tyr

S^SfX’

Se r

Alá

Pro

Aia

Leu

Lys

130

135

140

Ser

Lys

Glu

Val

Len

Alá

Gin

Gin

Gin

.í-í-Lcz

Val

Ser

Gin

Ara

Alá

Al a

143

ISO

155

10 0

As η

Glu

Gin

val

Ser

Thr

Alá

Pro

Val

L-VS

S e r

He

Thr

Ser

Glu

Vei

139 165 17© 175

Pro Ara Alá Lys Glu Glu Val Lys Pro Thr Gin Thr Sár val Ser Gin

180

185

ISO

Ser Thr Thr Val Ser Pro Alá Ser Val Ale Alá Glu Thr Pro Alá Pro

195

200

2QÍ

Val Alá Lys· Val Al.a Pro Val Arg Thr Val Alá .Alá Pro Arg Val. Alá !1©

Z j.5

220

Ser Val Lys Val Val Thr Pro Lys Val Slu Thr Gly Alá Ser Pro -Glu

225 :30

235

240

His Val Ser Alá Pro Alá Val Pro Val Thr Thr Thr Se.r Thr Alá Thr <5 45

255

Asp Ser Lys Leu Gin Alá Thr Slu Val Lys Ser Val Pro Val Alá Gin

260

65

Lys Alá Pro Thr Alá Thr Pro Val Alá. Gin Px.o Alá Ser Thr Thr Asn

275

280

285

Alá Val Alá Alá Kis Pro Glu Asn Alá Glv Leu Gin Pro His Val .Alá

190 >95

308

Alá Tyr Lys Glu Lys Val Alá Ser Thr Tyr Gly Val Asn Glu Phe Ser

3QS

315

0

Thr Tyr Arg Alá Gly Asp Pro Gly Asp Kis Gly Lys Gly Leu Alá Val

325 330 325

Asp Phe Ile Val Gly Lys Asn Gin Alá Leu Gly Asn Glu Val Alá Gin

340

350

Tyr Ser Thr Gin Asn Méh Alá Alá Asn Asn He Ser Tyr Val Ile Trp

355 3-50' 365

Gin Gin Lys Phe Tyr Ser Asn Thr Asn Ser He Tyr Gly Pro Alá Asn

Chr Trp Asn Alá Met Pro Asp Arg Gly Gly Val Thr Alá Asn His Tyr

3/9

375

380

140 »»

38S

390

395

400

Asp His Val His Val

Ser Phe Asn Lys

Claims (24)

1. Izolált poiínuklcotid. amely a következük bármelyikét kódolja:

(a) a 39. azonosítószámú szekvencia és a 44. azenositószámú szekvencia közöl választott attóxsmvszekvencíával legalább ?ó%-han azonos amisosav-szekveueiát tartalmazó poiipeprid, amely prtiipepfid megtartotta B csoportba tartozó Sfreptocöccas-okra specifikus im.umnváias2-kíválí6 képességét;

(b) s 39. asonoritószámö szekvencia és a 44. azonosítószámú szekvencia közöl választott amínosavszekveneiával legalább 95%-ban azonos amteosav-szekvfötviáí tartalmazó pölípepad, amely poíipepöd megtartotta 8 csoportba tartozó Stepftwems-okra -specifikus smtsmvaíssz-kiváító képességét; és (¢)- a 44, azonosítószámú amiaosav-szekvmcía egy astígénhatású írsgmessét tartalmazó poiipeptid, amely an'ö-g&xbalású íragmens megtartotta S csoportba tartozó ó'óv^öeoomy-okra specifikus immuttvSasz-kxváltó képességét.

2. Az 1, igénypont szerinti poíinukleotid. amely polipeptiá tartalmaz egy. a 39. azonosítószámú szekvencia és a 44. azonosítószámú szekvencia közöl választott amiaosav-szekvenciát

3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti izolált poíinukleotid, amely a következő szekvenciák hásmeiyikénsk megfelelő szekvencsájú polipeptiáhez .specifikusan köíóde eőeaaayagok képződését kiváltó- pelipepfidet kódol: a 39. azonosítószámú szekvencia és a 44, azonosítószámú szekvencia.

4. Az 1, igénypont szerinti polmukleotid, amely olyan sukla>tíö»zekvenciát. tartalmaz, amely (a) legalább 70%-b-aa azaasos a következő szekvenciák lúffmeiyikévek a 37, azonosítószámú szekvencia, a

42.. ?azönosítószámá szekvencia és a 43. azonosítószámú szekvencia;

(b) legalább 95%-ban azonos a kővetkező szekvenciák bármelyikével: a 37. azonosítószámú szekvencia, a 42. azonosítószámú szekvencia és a 43. azonosítószámú szekvencia; vagy (c) azonos a következő szekvenciák bármelyikével:, a 37. azonosítószámú szekvencia^ a 42, azonosítószámú szekvencia és a 43. azonosítószámú szekvencia.

5. Izolált pelinukkötíő, amely egy 1-4. igénypontok bármelyike szeráfi poíinukleotid komplementere, o, .Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti, izolált polinukleoíki, amely DNS,

7. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti izolált poíinukleotid, amely RNS.

.

8. Vektor, amely 1-4. igénypontok bármelyike szerinti polinukieoíidoí tartalmaz, expresszíéss szabályozó régióhoz működőképesen kapcsoltan,

9. Gazdasejt, amely S, igénypont szerinti vektorral van trsnsziékíáiva.

lő. Eljárás 1-4, igénypontok bármelyike szerinti polmöktoofid által kódolt polipepfid előállítására, nzzuZ firifemceve, begy 9. igénypont szerinti gazdnsejtet a polipeptiá expresszálására alkalmas körülmények közöd tenyésztünk.

1.1 > izolált polípeprid, amely a következők bármelyike:

(a) a 39. azonosítószámú szekvencia vagy a 44. azonosítószámú szekvencia szerinti amíuosavszekvencíával legalább 70%-ban azonos ansíaosav-szekveuciát tarialnnszó izolált polípepfid, amely polipepíid megtartotta B csoportba tartozó áp-eprocoicizs-okríi specifikus imnumváiasz-kiváitó képességét;

♦ ** *

-142(b) a 39. azonoiritószámü szekvencia vagy a 44·, azonosítószámú szekvencia .szerinti amíBOsavszekvenciával legalább 95%-ban. azonos asaíaosav-s2SKkvmciút. tartalmazó izolált polipeptid, amely polipeptiti megtartotta B csoportba tartozó SíropVöcoccrs-okra specifikus: immunválasz-kiváltó képességét;

(c) a 44. azonosítószámú ataiamv-szekvweia egy anrigénhatású i'ragmensét tartalmazó izolált podpeptid, amely antigénltaiásó iragnmos megtartotta B csoportba tartozó SAcptococcss-ökra specifikus immunválnszkiváltó képességét; és (d) a 44. azonosítószámú antinosav-szekveseía két vsgy több anügénhatásó iragmensét tartalmazó izolált poiípcptiü, amely polipeptid megtartotta B csoportba tartozó őn-cpmcoccjcí-okra specifikus immtmválasz-klváltó képességét.

12. A 1.1. igénypont szériád izolált polipeptid, amely tartalmazza a 39. azonosítószámú szekvenciát

13. All. igénypont szerinti izolált pohpepíid, amely úrtaknazza a 44. azonosítószámú szekvenciát.

14. A II, igénypont szerinti izolált pokpeptiá, amely a kővetkező szekvenciák h&mmlyikének megfelelő polipeptidhez specifikusa® kötődő ellenanyagok képződését váltja ki: a 39. azonosítószámú szekvencia és a 44. azonosítószámú szekvencia.

15. A .11, vagy 12, igénypont szerinti izolált polipeptid. ;snelybői az N-termteábs Met deleíálva vám

16. A 11. vagy 12. igénypont szerinti izolált poiipöptiíl, amelyből a szekréciós aminosav-szekvencia áeletálva van.

17. Yskeinakészttruéöv, amely a 11-16. igénypontok bármelyike szerinti poiipeptidet és gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyagot vagykígítószert tartalmaz.

13, A 17. igénypont szerinti vakcímikészíttsény, amely adjavánsl is tartalmaz.

19. A 11-1.6. igénypontok bármelyike szeriad izolált potipeptlá alkalmazása B csoportba tartozó óbrentococca,? okozta fertőzés emberben vagy állatban történő terápiás vagy megelőző kezelésére alkalmas vakcinakészttmény előállítására,

2ö. A 19. igénypont szerinti alkalmazás, altéi az ember vagy -állal ember,

21. A 19, igénypont, szériád alkalmazás. ahol az ember vagy állat tehén.

22. A 17. vagy IS, igénypont szermti vakcinakészísmény, B csoportba tartozó Óricpipcoccns elleni immunválasz indukálására történő alkalmazásra.

23. Izolált ellenanyag vagy antigénkötő foigmense, amely képes specifikusan kötődni olyan poiipeptidhez, melynek ammosav-szekvenciája megegyezik a 39. azonosítószámú szekvencia vagy a 44·. azonosítószámú szekvencia szerinti amínosav-szekvenciával,

24. A 23. igénypont szerinti ellenanyag vagy' aotigénkötő fragmense, amely ell&nasyxtg polikionálís ellenanyag.

25. A 23. igénypont szerinti ellenanyag vagy antigénkötő fragmense, amely ellenanyag monekionális ellenanyag.

26. A 23, igénypont szerinti ellenanyag vsgy antigénkötő feagmense, amely ellenanyag vagy antigénkőtő fragmonse rekombináns.

27. Eljárás B csoportba tartozó Őrippíococcjö' biológiai mintában való jelenlétének kimutatására, azatijetlemezvo, hogy

Λ « ♦ **♦ ψ » « » »·♦» * ♦ ** ♦ »Λ

-143(a) 23-26. igénypontok bármelyike szerinti eltejanysgot vágj' antigénkőíő Sagtnenst & biológiai mintával mka&álunk, miáltal «legyei hozunk létre; és (b) kimutatltik specifikusan kötődött ellenanyag vagy anf igénkötő fragtnsns jelenlétét az elegybem ami B csoportba í&tíezó őfreymx.'txmA jelenlétére atal

28.. Eljárás a 39, azonosítószámú szekvencia vagy a 44, azonosítószámú szekvencia szerinti amiocsavszekvenciával megegyező szekvenciáit! polipeptídbez specifikusan kötődő ellenanyag kása-tatására, azzal· je/fefsezve, hogy·;.

(a) a i 1-16, igénypontok bármelyike szerinti pollpeptidet olyan biológiai mintával inkobáfenk, amely tartalmazza vagy feltételezhetően, tartalmazza az; ellenanyagot, miáltal «legyet hozunk létre; és (fej kimutatjuk specifikusan kötődött poiípeptiő jelenlétéi az elegyben, anú az ellenanyag jelenlétére utal.

29. Eljárás B csoportba tartozó ;$mep,'ococi.w biológiai mintában való jelenlétének kimutatására, űzzedye/lemezve, hogy (a) 1-6. igénypontok bármelyike szerinti poimnkleotídot a biológiai mintával mkufeálutBc, miáltal elegvet hozunk léire; és (b) kimutatjuk specifikusan kötődőit polntuideotid jelenlétét az elegyben, ami B csoportba tartozó ŐlrapíococcMS' jelenlétére utal.