NO174105B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av antikoagulerendepeptider - Google Patents

Analogifremgangsmaate for fremstilling av antikoagulerendepeptider Download PDF

Info

Publication number
NO174105B
NO174105B NO88880268A NO880268A NO174105B NO 174105 B NO174105 B NO 174105B NO 88880268 A NO88880268 A NO 88880268A NO 880268 A NO880268 A NO 880268A NO 174105 B NO174105 B NO 174105B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
glu
pro
phe
asp
tyr
Prior art date
Application number
NO88880268A
Other languages
English (en)
Other versions
NO880268L (no
NO880268D0 (no
NO174105C (no
Inventor
John L Krstenansky
Simon J T Mao
Original Assignee
Merrell Dow Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merrell Dow Pharma filed Critical Merrell Dow Pharma
Publication of NO880268D0 publication Critical patent/NO880268D0/no
Publication of NO880268L publication Critical patent/NO880268L/no
Publication of NO174105B publication Critical patent/NO174105B/no
Publication of NO174105C publication Critical patent/NO174105C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

Antikoagulerende midler er anvendbare terapeutiske midler ved farmakologisk behandling av f.eks. akutt, dyp venøs trombose, pulmonar embolisme, akutt, arteriell emboliser-ing av ekstremitetene, myocarddalt infarkt og utbredt intra-vaskulær koagulering. Profylaktisk administrering av antikoagulerende midler er antatt å forhindre en gjentagelse av embolisme i pasienter med reumatisk eller arteriosclerotisk hjertesykdom og forhindre visse tromboemboliske komplika-sjoner ved kirurgi. Administrering av antikoagulerende midler er også blitt indikert ved behandling av koronar arterie og cerebrovaskulær sykdom. Arteriell trombose, spesi-elt i arteriene som supplerer hjertemuskelen og hjernen, er en førende årsak til død.
Hirudin er et 65 rests polypeptid isolert fra spytt-kjertlene av igler. Det er et antikoagulerende middel som er en trombinspesifikk inhibitor. Selv om det er relativt kraftig, synes den kliniske bruk av hirudin isolert fra igle-ekstrakter, å være lite sannsynlig på grunn av dets begrensede mengde, kostbarhet og allergiske reaksjoner som vanligvis følger administrering av ethvert fremmed protein av denne størrelse.
Det er nå funnet en spesifikk region av hirudin som er ansvarlig, i det minste delvis, for dets antikoagulerende aktivitet. Denne region er blitt kjemisk syntetisert, og visse av dets analoger synes å bindes til gjenkjennelsesstedet av trombin, men ikke det enzymatiske spaltningssted som er rommessig adskilt. Binding av de syntetiske peptider forhindrer konkurrerende binding av fibrinogenet til gjenkjennelsesstedet for trombin, en forutsetning for fibrin-produksjon og klumpdannelse. Peptidene ifølge oppfinnelsen utviser signifikant antikoagulerende aktivitet, og deres uvanlige evne til å binde bare til gjenkjennelsesstedet uten binding til splittingsstedet av trombin kan utgjøre et viten-skapelig interessant og terapeutisk signifikant supplement til den antikoagulerende terapi.
Oppfinnelsen angår således en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive peptidderivater av formel
hvori
X er hydrogen, en alkylgruppe med fra 1 til 6 carbonatomer, eller en lavere alkanoylgruppe med fra 2 til 10 carbonatomer;
Ax er en binding eller er et peptidfragment inneholdende fra 1 til 6 aminosyrerester valgt fra Ser, His, Asn,
Asp eller Gly;
A2 er Phe der Phe eventuelt er parasubstituert med halogen eller nitro, p-(2-thienyl)-alanin, Tyr, 0-methyltyrosyl eller Trp;
A3 er Glu;
A4 er Glu, Ala eller Pro;
A5 er Ile, Val, Leu, Nie eller Phe;
A6 er Pro, Hyp, Sar, NMePgl eller D-Ala;
A7 er Glu, Ala eller Gin;
A8 er Glu, Asp eller Ala;
A9 er en lipofil aminosyre valgt fra Tyr, Phe, Leu, Cha og Pro eller er et dipeptid inneholdende minst én av
disse lipofile aminosyrer;
A10 er en binding eller er et peptidfragment inneholdende fra 1 til 4 aminosyrerester valgt fra Leu, Gin, Ala, Tyr, Asp, Glu, Pro, Phe, Orn, Lys, D-Lys, His eller
D-Asp, og
Y er en carboxyterminal rest valgt fra 0H eller amino; og farmasøytisk akseptable salter derav.
Følgende fellesforkortelser for aminosyrene anvendes i foreliggende beskrivelse:
Gly - glycin
Ala - alanin
Val - valin
Leu - leucin
Ile - isoleucin
Pro - prolin
Phe - fenylalanin
Trp - tryptofan
Met - methionin
Ser - serin
Thr - threonin
Cys - cystein
Tyr - tyrosin
Asn - asparagin
Gin - glutamin
Asp - asparaginsyre
Glu - glutaminsyre
Lys - lysin
Arg - arginin
His - histidin
Nie - norleucin
Hyp - hydroxyprolin 3,4-dehydroPro - 3,4-dehydroprolin Tyr(S03H) - tyrosinsulfat
Pgl - fenylglycin
NMePgl - N-methyl-fenylglycin
Sar - sarcocin (N-itiethylglycin) pSubPhe - para-substituert fenylalanin SubPhe - ortho, meta eller para, mono- eller di-substituert fenylalanin DAla - D-alanin
Ac - acetyl
Suc - succinyl
pClPhe - para-klor-fenylalanin pNC^Phe - para-nitro-fenylalanin Cha - cyclohexylalanin
Orn - ornithin
Glt - glutaryl
Mal - maleyl
Npa - (3-(2-nafthyl)-alanin
Uttrykket "lipofil aminosyre" innbefatter Tyr, Phe, L3U, Nie, Ile, Val, His og Pro.
De naturlige aminosyrer med unntak av glycin, inne-holder et chiralt carbonatom. Med mindre annet spesifikt er angitt, er de optisk aktive aminosyrer det her henvises til, av L-konfigurasjon. Eksempelvis kan enhver av aminosyrene av eller A^-gruppen være av D- eller L-konfigurasjon. Som vanlig er strukturen av peptidene skrevet ut her slik at aminoenden er på venstre side av kjeden og carboxy-enden på høyre side av kjeden.
Polypeptidene av formel 1 kan danne farmasøytisk akseptable salter med enhver ikke-toksisk, organisk eller uorganisk syre. Eksempler på uorganiske syrer som danner egnede salter, innbefatter saltsyre, hydrobromsyre, svovel-syre og fosforsyre og sure metallsalter slik som natrium-monohydrogenorthofosfat og kaliumhydrogensulfat. Eksempler på organiske syrer som danner egnede salter, innbefatter mono-, di- og tricarboxylsyrer. Eksempler på slike syrer er f.eks. eddiksyre, glycolsyre, melkesyre, pyruvsyre, malonsyre, ravsyre, glutarsyre, fumarsyre, eplesyre, vin-syre, sitronsyre, ascorbinsyre, maleinsyre, hydroxymalein-syre, benzosyre, hydroxybenzosyre, fenyleddiksyre, kanel-syre, salicylsyre, 2-fenoxybenzosyre og sulfonsyrer slik som methansulfonsyre og 2-hydroxyethansulfonsyre. Salter av den carboxyterminale aminosyredel innbefatter de ikke-toksiske carboxylsyresalter dannet med enhver egnet uorganisk eller organisk base. Eksempelvis innbefatter disse salter de med alkalimetaller, slik som f.eks. natrium og kalium; jordalkalimetaller slik som calcium og magnesium; lette metaller fra gruppe HIA innbefattende aluminium; og organiske primære, sekundære og tertiære aminer slik som f.eks. trialkylaminer, innbefattende triethylamin, procain, dibenzylamin, 1-ethenamin, N,N<1->dibenzylethylendiamin, dihydroabietylamin, N-(lavere)alkylpiperidin og ethvert annet egnet amin.
Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjenne-tegnet ved at peptidderivatene fremstilles ved fast fase-blokksyntese ved at en egnet, beskyttet aminosyre av formel A1 bindes til en aktivert harpiksbærer, hvoretter de andre alfa-amino-beskyttende aminosyrer fra A2 til A10 bindes til den terminale aminogruppe av den voksende peptidkjede som i mellomtiden er blitt avdekket ved fjerning av dens aminobeskyttende gruppe.
Ved denne prosedyre bindes en a-aminobeskyttet aminosyre til en. harpiksbærer. Den anvendte harpiksbærer kan være en hvilken som helst egnet harpiks hensiktsmessig anvendt innen faget for fast fase-fremstilling av polypeptider, fortrinnsvis polystyren som er blitt tverrbundet med fra 0,5 til 3% divinylbenzen, som enten er blitt klormethylert eller hydroxymethylert for å tilveiebringe steder for esterdann-else med den opprinnelig innførte ct-aminobeskyttede aminosyre .
Et eksempel på en hydroxymethylharpiks er beskrevet
av Bodanszky et al., Chem. Ind. (London) 38_, 1597-98 (1966). En klormethylert harpiks er kommersielt tilgjengelig fra
Bio Rad Laboratories, Richmond, California, og fremstill-ingen av en slik harpiks er beskrevet av Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis" (Freeman & Co., San Fran-cisco 1969), kapittel 1, s. 1-6. Den beskyttede aminosyre bindes til harpiksen ved prosedyren ifølge Gisin, Heiv.
Chem. Acta, 5_6 , 1476 (1973) . Mange harpiksbundne,
beskyttede aminosyrer er kommersielt tilgjengelige. For å fremstille et polypeptid ifølge oppfinnelsen hvori den carboxyterminale ende er en Thr-rest, kan eksempelvis et tert-butyloxycarbonyl- (Boe) beskyttet Thr bundet til en benzylert, hydroxymethylert fenylacetamidomethyl- (PAM) harpiks anvendes, og denne er kommersielt tilgjengelig.
Etter kobling av den oc-aminobeskyttede aminosyre til harpiksbæreren, fjernes den beskyttende gruppe under anvendelse av hvilken som helst egnet prosedyre slik som ved anvendelse av trifluoreddiksyre i methylenklorid, trifluoreddiksyre alene eller HC1 i dioxan. Avbeskyttelsen utføres ved en temperatur på mellom 0°C og romtemperatur. Andre standard spaltningsreagenser og betingelser for fjerning av spesifikke a-aminobeskyttende grupper kan anvendes. Etter fjerning av den a-aminobeskyttende gruppe kobles de andre aminobeskyttede aminosyrer trinnvis i den ønskede rekkefølge. Alternativt kan multiple aminosyre-grupper kobles ved oppløsningsmetoden før kobling med den harpiksopplagrede aminosyresekvens.
Den a-aminobeskyttende gruppe anvendt med hver aminosyre innført i polypeptidsekvensen, kan være en hvilken som helst beskyttende gruppe velkjent innen faget. Blant klassene av a-aminobeskyttende grupper som tas i betraktning, er (1) acyltype-beskyttende grupper slik som: formyl, tri-fluoracetyl, fthalyl, toluensulfonyl (tosyl), benzensul-fonyl, nitrofenylsulfenyl, tritylsulfenyl, o-nitrofenoxy-acetyl og a-klorbutyryl; (2) aromatiske urethantype-beskyttende grupper slik som benzyloxycarbonyl og substituert benzyloxycarbonyl slik som p-klorbenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzylcarbonyl, p-brombenzyloxycarbonyl, p-methoxy-benzyloxycarbonyl, 1-(p-bifenylyl)-1-methylethoxycarbonyl, a,a-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl og benzhydryloxy-carbonyl; (3) alifatiske urethanbeskyttende grupper slik som tert-butyloxycarbonyl (Boe), diisopropylmethoxycarbonyl, isopropyloxycarbonyl, ethoxycarbonyl og allyloxycarbonyl; (4) cycloalkylurethantype-beskyttende grupper slik som cyclopentyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl og cyclohexyl-oxycarbonyl; (5) thiourethantype-beskyttende grupper slik som fenylthiocarbonyl; (6) alkyltype-beskyttende grupper slik som trifenylmethyl (trityl) og benzyl; og (7) tri-alkylsilangrupper slik som trimethylsilan. Den foretrukne a-aminobeskyttende gruppe er tert-butyloxycarbonyl.
Valg av et egnet koblingsreagens fører til den kjente teknikk. Et særlig egnet koblingsreagens hvor aminosyren som skal adderes er Gin, Asn eller Arg, er N,N-diisopropyl-carbodiimid og 1-hydroxybenzotriazol. Anvendelse av disse reagenser forhindrer nitril- og lactamdannelse. Andre koblingsmidler er (1) carbodiimider (f.eks. N,N<1->dicyclo-hexylcarbodiimid og N-ethyl-N'-(7-dimethylaminopropylcarbo-diimid); (2) cyanamider (f.eks. N,N-dibenzylcyanamid); (3) keteniminer; (4) isoxazoliumsalter (f.eks. N-ethyl-5-fenyl-isoxazolium-3 *-sulfonat); (5) monocykliske, nitrogen-holdige, heterocykliske amider av aromatisk karakter inneholdende 1 til 4 nitrogener i ringen slik som imidazolider, pyrazolider og 1,2,4-triazolider. Spesifikke heterocykliske amider som er anvendbare, innbefatter N,N'-carbonyldiimidazol og N,N-carbonyl-di-l,2,4-triazol; (6) alkoxylert acetylen (f.eks. ethoxyacetylen); (7) reagenser som danner et blandet anhydrid med carboxyIdelen av aminosyren (f.eks. ethylklorformiat og isobutylklor-formiat) eller det symmetriske anhydrid av aminosyren som skal kobles (f.eks. Boc-Ala-O-Ala-Boc) og (8) nitrogen-holdige, heterocykliske forbindelser som har en hydroxygruppe på et ringnitrogen (f.eks. N-hydroxyfthalimid, N-hydroxy-succinimid og 1-hydroxybenzotriazol). Andre aktiverende reagenser og deres anvendelse i peptidkobling er beskrevet av Kapoor, J. Pharm. Sei., _59, s. 1-27 (1970). Søkeren foretrekker anvendelse av det symmetriske anhydrid som koblingsreagens for alle aminosyrer bortsett fra Arg, Asn og Gin.
Hver beskyttet aminosyre eller aminosyresekvens inn-føres i fast fase-reaktoren i et ca. firedobbelt overskudd, og koblingen utføres i et medium av dimethylformamid: methylenklorid (1:1) eller i dimethylformamid alene, eller fortrinnsvis methylenklorid alene. I tilfeller hvor ufull-stendig kobling finner sted, gjentas koblingsprosedyren før fjerning av den a-aminobeskyttende gruppe, før kobling av neste aminosyre i fast fase-reaktoren. Vellykketheten ved koblingsreaksjonen ved hvert trinn av syntesen overvåkes ved ninhydrinreaksjonen som beskrevet av E. Kaiser et al., Ana lyt. Biochem. 34.' 595 (1970) .
Etter at den ønskede aminosyresekvens er blitt erholdt, fjernes peptidet fra harpiksen. Dette kan utføres ved hydrolyse slik som ved behandling av det harpiksbundne polypeptid med en løsning av dimethylsulfid, p-cresol og thiocresol i fortynnet vandig hydrofluorsyre.
Som kjent innen faget vedrørende fase fase-peptid-syntese, bærer mange av aminosyrene funksjonaliteter som krever beskyttelse under kjedefremstillingen. Anvendelse og valg av den egnede beskyttende gruppe hører til fagmannens kunnskap og vil avhenge av den aminosyre som skal beskyttes og nærvær av andre beskyttede aminosyrerester på peptidet. Valg av en slik sidekjedebeskyttende gruppe er kritisk ved at den må være en som ikke fjernes ved splitting under splitting av den beskyttende gruppe av a-aminodelen. - Eksempelvis er egnede sidekjede-beskyttende grupper for lysin benzyloxycarbonyl og substituert benzyloxycarbonyl, hvilken substituent er valgt fra halogen (f.eks. klor, brom, fluor) og nitro (f.eks. 2-klorbenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxy-carbonyl, 3,4-diklorbenzyloxycarbonyl), tosyl, t-amyloxy-carbonyl, t-butyloxycarbonyl og diisopropylmethoxycarbonyl. Den alkoholiske hydroxygruppe av threonin og serin kan beskyttes med en acetyl-, benzoyl-, tert-butyl-, trityl-, benzyl-, 2,6-diklorbenzyl- eller benzyloxycarbonylgruppe. Den foretrukne beskyttende gruppe er benzyl.
Disse grupper kan fjernes ved prosedyrer velkjente innen faget. Typisk foretas fjerning av beskyttende grupper etter at peptidkjedesyntesen er fullført, men de beskyttende grupper kan fjernes ved et hvilket som helst annet egnet tidspunkt.
Den antikoagulerende dose av et peptidderivat fremstilt ifølge oppfinnelsen er fra 0,2 mg/kg til 250 mg/kg kroppsvekt pr. dag avhengig av pasienten, strengheten av den trombotiske tilstand som skal behandles og det valgte peptidderivat.
Den egnede dose for en bestemt pasient kan lett bestemmes. Fortrinnsvis vil fra 1 til 4 daglige doser administreres, typisk med fra 5 mg til 100 mg aktiv forbindelse pr. dose.
Antikoagulerende terapi er indikert for behandling
og forhindring av et utall av trombotiske tilstander, i særdeleshet koronar arterie og cerebrovaskulær sykdom. Fag-mannen er velkjent med omstendigheter som krever antikoa-
gulerende behandling. Med uttrykket "pasient" anvendt her, menes pattedyr slik som primater, innbefattende mennesker, sauer, hester, kveg, griser, hunder, katter, rotter og mus.
Selv om enkelte av peptidderivatene kan overleve passasje gjennom tarmen etter oral administrering, er ikke-oral administrering foretrukket, f.eks. subkutan, intra-venøs, intramuskulær eller intraperitoneal; administrering ved depotinjeksjon; ved implantatpreparat; eller ved påføring på slimhinner, slik som i nese, svelg og bronchialkanaler, eksempelvis i en aerosol inneholdende et peptidderivat ifølge oppfinnelsen i form av spray eller tørt pulver.
For parenteral administrering kan forbindelsene administreres som injiserbare doser av en løsning eller sus-pensjon av forbindelsen i et fysiologisk akseptabelt fortynn-ingsmiddel med en farmasøytisk bærer som kan være en steril væske slik som vann og oljer, med eller uten tilsetning av et overflateaktivt middel og andre farmasøytisk akseptable hjelpestoffer. Eksempler på oljer som kan anvendes i disse preparater, er petroleumoljer, og de av animalsk, vegetabilsk eller syntetisk opprinnelse, f.eks. peanøttolje, soyabønne-olje og mineralolje. Generelt er vann, saltvann, vandig dextrose og beslektede sukkerløsninger, ethanol og glycoler slik som propylenglycol eller polyethylenglycol, foretrukne væskeformige bærere, i særdeleshet for injiserbare løsninger.
Forbindelsene kan administreres i form av en depotinjeksjon eller implantatpreparat som kan formuleres på en slik måte at det muliggjøres en forsinket frigivelse av den aktive bestanddel. Den aktive bestanddel kan være presset til pellets eller små sylindre og implanteres subkutant eller intramuskulært som depotinjeksjoner eller implantater. Implantater kan anvende inerte materialer slik som bioned-brytbare polymerer eller syntetiske silikoner, f.eks. "Silastic", silikongummi fremstilt av Dow-Corning Corporation.
Oppfinnelsen illustreres nærmere i de etterfølgende eksempler.
Eksempel 1
Fremstilling av H- Gly- Asp- Phe- Glu- Glu- Ile- Pro- Glu- Glu- Tyr-Leu- Gln- OH
Peptidet ble syntetisert ved fast fase-metoder under anvendelse av 0,1 mmol av en 0,66 mmol/g Boc-Gln-PAM-harpiks. Doble symmetriske anhydridkoblinger ble utført med 2,0 mmol Na-Boc-aminosyre (Peptides International) bortsett fra Boc-Gln som ble koblet med DCC/HOBT-metoden. Den anvendte sidekjedebeskyttelse var: Asp(Chx), Glu(Bzl), Tyr(2-BrZ). Etter endt syntese ble Na-Boc-beskyttelsen fjernet med 50% trifluoreddiksyre i methylenklorid. Harpiksen ble vasket tre ganger med methylenklorid, ble nøytralisert med tre vask-inger med 10% diisopropylethylamin i methylenklorid, ble vasket tre ganger med methylenklorid og tørket i vakuum. Peptidet ble avbeskyttet og spaltet fra harpiksen med HF inneholdende 2% anisol ved 0°C i 35 minutter. HF ble fjernet i vakuum ved 0°C, peptidet ble utfelt med ethylether, ble ekstrahert fra harpiksen med 30% vandig eddiksyre og lyofilisert.
Peptidet ble renset ved avsaltning på en 92 x 2,6 cm Sephadex<®> G-15 kolonne i 5% vandig eddiksyre og ble lyofilisert. Preparativ HPLC ble utført på en C 18 Vydac® 218TP1010 (250 x 10 mm) kolonne med 24% acetonitril i 0,1% vandig trifluoreddiksyre ved 5 ml/min. Hovedtoppen ble opp-samlet og lyofilisert under dannelse av 101 mg av det ønskede produkt (58% utbytte basert på startharpikssubstitusjon). Homogenitet ble bestemt ved HPLC og TLC. HPLC "Vydac"
18
218TP54 (250 x 4,6 mm) C kolonne, 2 ml/min., t = 1,9 min.: elueringstid med en 15-40% acetonitril i 0,1% trifluoreddiksyre-lineærgradient ved 1%/min. (HPLC) var 14,4 minutter.
TLC: [Merck 5715 20 x 20 cm Silicagel<®>60 plater (0,25 mm tykkelse)] n-butanol/eddiksyre/vann/pyridien (6:1,2:4,8:6) (TLC I) Rf = 0,42; isopropanol/kons. ammonium-hydroxyd/vann (3:1:1) (TLC II) Rf = 0,32; n-butanol/eddiksyre/vann (4:5:5) (TLC III) Rf = 0,70.
FAB-MS: (M + H) - 1468,4 - 1 mp (beregn. 1468,6). Amino-syreanalyse: (6N HC1 hydrolyse; 24 timer ved 106°C). Asx 1,03 (1); Glx 5,05 (5); Pro 1,03 (1); Gly 1,00 (1); Ile 0,97 (1); Letr 1,01 (1); Tyr 0,93 (1); Phe 0,98 (1); NH^ 1,06 (1). £280 = 1254. 85 vekt% peptidinnhold.
På samme måte ble peptidene ifølge eksempel 2-32 fremstilt.
Eksempel 2
Ac-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 3
H-Asn-Asp-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 4
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 5
H-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 6
H-Asp-Phe-Glu-Ala-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 7
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Ala-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 8
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Ala-OH
Eksempel 9
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Glu-Leu-Ala-OH
Eksempel 10
Ac-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 11
Ac-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 12
Suc-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 13
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-NH2
Eksempel 14
H-Gly-Asp-Tyr-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 15
H-Gly-Asp-Trp-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-GLu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 16
H-Gly-Asp-pClPhe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 17
H-Gly-Asp-pN02Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 18
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Sar-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 19
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-DAla-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 20
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Hyp-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 21
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-NMePgl-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 22
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Asp-Glu-OH
Eksempel 23
H-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 24
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Pro-NH2
Eksempel 25
Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Pro-NH2
Eksempel 26
H-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gln-OH
Eksempel 27
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gln-OH
Eksempel 28
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Gln-OH
Eksempel 29
Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Pro-NH2
Eksempel 30
H-Gly-Asp-p-(2-thienyl)alanyl-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 31
H-Gly-Ala-O-methyltyrosyl-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 32
Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Pro-OH
Peptidene fra eksempel 2-32 har følgende egenskaper:
Eksempel 33
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Ala-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 34
H-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Leu-Gln-OH
Eksempel 35
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Leu-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 3 6
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Val-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 37
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Phe-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 38
H-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 39
Suc-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln-OH
Eksempel 40
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-Glu-OH
Eksempel 41
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Phe-Asp-Glu-OH Eksempel 42
Ac-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-0rn-NH2
Eksempel 43
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Tyr-Glu-OH
Eksonpel 44
H-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Tyr-Gln-OH
Eksempel 45
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Lys-NH2
Eksempel 4 6
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-D-Lys-NH2
Eksempel 47
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-0rn-NH2
Eksempel 48
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Tyr-Lys-NH2
Eksempel 4 9
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Lys-OH
Eksempel 50
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-His-Lys-OH
Eksempel 51
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-Lys-NH2
Eksempel 52
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Leu-Phe-Lys-NH2
Eksempel 53
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Gln-Glu-Ala-Phe-Lys-NH2
Eksempel 54
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Glu-OH
Eksempel 55
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Phe-Gln-OH
Eksempel 56
Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-Asp-OH
Eksempel 5 7
H-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Asp-Ala-Tyr-D-Asp-OH
Peptidene ifølge eksempel 33-57 har følgende egenskaper :

Claims (1)

  1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive peptidderivater av formel
    hvori
    X er hydrogen, en alkylgruppe med fra 1 til 6 carbon
    atomer, eller en lavere alkanoylgruppe med fra 2 til 10 carbonatomer;
    Ax er en binding eller er et peptidfragment inneholdende
    fra 1 til 6 aminosyrerester valgt fra Ser, His, Asn, Asp eller Gly;
    A2 er Phe der Phe eventuelt er parasubstituert med
    halogen eller nitro, (3-( 2-thienyl)-alanin, Tyr, 0-methyltyrosyl eller Trp;
    A3 er Glu;
    A4 er Glu, Ala eller Pro;
    A5 er Ile, Val, Leu, Nie eller Phe;
    A6 er Pro, Hyp, Sar, NMePgl eller D-Ala;
    A7 er Glu, Ala eller Gin;
    A8 er Glu, Asp eller Ala;
    A9 er en lipofil aminosyre valgt fra Tyr, Phe, Leu, Cha
    og Pro eller er et dipeptid inneholdende minst én av disse lipofile aminosyrer;
    A10 er en binding eller er et peptidfragment inneholdende
    fra 1 til 4 aminosyrerester valgt fra Leu, Gin, Ala, Tyr, Asp, Glu, Pro, Phe, Orn, Lys, D-Lys, His eller D-Asp, og
    Y er en carboxyterminal rest valgt fra 0H eller amino; og farmasøytisk akseptable salter derav, karakterisert ved at de fremstilles ved fast fase-blokksyntese ved at en egnet, beskyttet aminosyre av formel Ax bindes til en aktivert harpiksbærer, hvoretter de andre alfa-amino-beskyttende aminosyrer fra A2 til A10 bindes til den terminale aminogruppe av den voksende peptidkjede som i mellomtiden er blitt avdekket ved fjerning av dens aminobeskyttende gruppe.
NO880268A 1987-01-23 1988-01-22 Analogifremgangsmåte for fremstilling av antikoagulerende peptider NO174105C (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US641787A 1987-01-23 1987-01-23
US5316287A 1987-05-21 1987-05-21

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO880268D0 NO880268D0 (no) 1988-01-22
NO880268L NO880268L (no) 1988-07-25
NO174105B true NO174105B (no) 1993-12-06
NO174105C NO174105C (no) 1994-03-16

Family

ID=26675603

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO880268A NO174105C (no) 1987-01-23 1988-01-22 Analogifremgangsmåte for fremstilling av antikoagulerende peptider

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP0276014B1 (no)
JP (1) JP2709817B2 (no)
KR (1) KR960014105B1 (no)
CN (1) CN88100260A (no)
AR (1) AR245140A1 (no)
AT (1) ATE110743T1 (no)
AU (1) AU601801B2 (no)
CA (1) CA1341032C (no)
DE (1) DE3851238T2 (no)
DK (1) DK173757B1 (no)
ES (1) ES2063740T3 (no)
FI (1) FI89060C (no)
HU (1) HU199159B (no)
IE (1) IE63547B1 (no)
IL (1) IL85159A (no)
NO (1) NO174105C (no)
NZ (1) NZ223236A (no)
PH (1) PH26263A (no)
PT (1) PT86600B (no)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6005071A (en) * 1987-01-23 1999-12-21 Merrell Pharmaceuticals Inc. Anticoagulant peptides
US5789540A (en) * 1987-01-23 1998-08-04 Merrell Pharmaceuticals Inc. Anticoagulant peptides
US5192745A (en) * 1987-05-21 1993-03-09 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Cyclic anticoagulant peptides
US5236898A (en) * 1987-05-21 1993-08-17 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Cyclic anticoagulant peptides
US5256559A (en) * 1988-03-04 1993-10-26 Biogen, Inc. Methods and compositions for inhibiting platelet aggregation
NZ228995A (en) * 1988-05-10 1992-03-26 Merrell Dow Pharma Hirudin peptide derivatives and pharmaceutical compositions
JPH04503660A (ja) * 1988-12-05 1992-07-02 バイオジェン インコーポレイテッド 血小板凝集抑制の方法及び組成物
ZA899247B (en) * 1988-12-07 1990-09-26 Merrell Dow Pharma Anticoagulant peptides
US5232912A (en) * 1988-12-07 1993-08-03 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Anticoagulant peptides
US5240913A (en) * 1989-08-18 1993-08-31 Biogen, Inc. Inhibitors of thrombin
US5196404B1 (en) * 1989-08-18 1996-09-10 Biogen Inc Inhibitors of thrombin
US5192747A (en) * 1989-10-03 1993-03-09 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Anticoagulant peptides
CA2026376C (en) * 1989-10-03 2002-01-01 John L. Krstenansky Anticoagulant peptides
ZA907743B (en) * 1989-10-03 1991-07-31 Merrell Dow Pharma Radiolabeled anticoagulant peptides
AU641215B2 (en) * 1990-02-13 1993-09-16 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Stabilized sulfonate, sulfate, phosphonate and phosphate derivatives of hirudin
DE4005591A1 (de) * 1990-02-22 1991-09-05 Behringwerke Ag Die blutgerinnung inhibierende peptide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US6060451A (en) * 1990-06-15 2000-05-09 The National Research Council Of Canada Thrombin inhibitors based on the amino acid sequence of hirudin
AU640502B2 (en) * 1990-07-24 1993-08-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Analogs of hirudin having antiplatelet activity
WO1992001710A1 (en) * 1990-07-24 1992-02-06 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Anticoagulant peptides
US5574012A (en) * 1990-07-24 1996-11-12 Merrell Pharmaceuticals Inc. Analogs of hirudin having anti-platelet activity
US5242810A (en) * 1990-12-07 1993-09-07 Biogen, Inc. Bifunctional inhibitors of thrombin and platelet activation
DE4103649A1 (de) * 1991-02-07 1992-08-13 Basf Ag Neue antikoagulatorisch wirksame peptide
US5767235A (en) * 1991-03-05 1998-06-16 Nippon Mining Company Limited Anticoagulant hirudin variants and methods for their production
ATE142642T1 (de) * 1991-03-05 1996-09-15 Japan Energy Corp Hirudinanalog oder dessen salz, dessen herstellung und das als aktiven bestandteil enthaltende antikoagulanz
IT1250689B (it) * 1991-07-22 1995-04-21 Marco Gerna Analoghi dell'irudina e procedimento per la loro preparazione
AU2442792A (en) * 1991-07-31 1993-03-02 Institut Pasteur Polypeptides capable of (in vivo) induction of antibodies themselves capable of inhibiting the invasion of red blood corpuscles by merozoites of (p.falciparum), related products and their use in producing vaccine compositions
CN1124964A (zh) * 1993-06-11 1996-06-19 默里尔药物公司 三功能抗凝血酶和抗血小板的肽
GB9426038D0 (en) 1994-12-22 1995-02-22 Iaf Biochem Int Low molecular weight bicyclic thrombin inhibitors
US6057314A (en) * 1995-12-21 2000-05-02 Biochem Pharma Inc. Low molecular weight bicyclic thrombin inhibitors
US5831003A (en) * 1996-06-28 1998-11-03 Bayer Corporation Peptides which bind to prothrombin and thrombin
GB0209249D0 (en) * 2002-04-23 2002-06-05 Evolutec Ltd Anticoagulants
GB0711779D0 (en) * 2007-06-18 2007-07-25 Univ Singapore Thrombin inhibitor
CN102757479B (zh) * 2012-05-09 2014-04-30 北京林业大学 高活性降血压肽及其制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3445517C2 (de) * 1984-12-13 1993-11-18 Ciba Geigy Für ein Hirudin-ähnliches Protein codierende DNA-Sequenz und Verfahren zur Herstellung eines Hirudin-ähnlichen Proteins
DE3445532A1 (de) * 1984-12-13 1986-06-19 Plantorgan Werk Heinrich G.E. Christensen, KG, 2903 Bad Zwischenahn Hirudin-pa, desulfatohirudine-pa, verfahren zur herstellung und pharmazeutische mittel, die diese wirkstoffe enthalten
DE3506992A1 (de) * 1985-02-27 1986-08-28 Plantorgan Werk Heinrich G.E. Christensen, KG, 2903 Bad Zwischenahn Modifizierte hirudine, verfahren zu deren herstellung und pharmazeutische mittel, die diese wirkstoffe enthalten
MY101203A (en) * 1985-12-12 1991-08-17 Ucp Gen Pharma Ag Production of thrombin iinhibitors.

Also Published As

Publication number Publication date
IL85159A0 (en) 1988-06-30
IE880167L (en) 1988-07-23
CN88100260A (zh) 1988-11-09
KR880009045A (ko) 1988-09-13
EP0276014A3 (en) 1990-05-16
DE3851238T2 (de) 1995-03-16
CA1341032C (en) 2000-06-20
AU601801B2 (en) 1990-09-20
IE63547B1 (en) 1995-05-17
AR245140A1 (es) 1993-12-30
EP0276014A2 (en) 1988-07-27
DK173757B1 (da) 2001-09-10
DE3851238D1 (de) 1994-10-06
NO880268L (no) 1988-07-25
PH26263A (en) 1992-04-01
DK31088D0 (da) 1988-01-22
HUT46339A (en) 1988-10-28
JPS63215698A (ja) 1988-09-08
FI880286A0 (fi) 1988-01-22
PT86600B (pt) 1991-12-31
FI89060B (fi) 1993-04-30
PT86600A (pt) 1988-02-01
FI880286A (fi) 1988-07-24
ES2063740T3 (es) 1995-01-16
AU1072988A (en) 1988-07-28
FI89060C (fi) 1993-08-10
NO880268D0 (no) 1988-01-22
JP2709817B2 (ja) 1998-02-04
HU199159B (en) 1990-01-29
NO174105C (no) 1994-03-16
KR960014105B1 (ko) 1996-10-14
NZ223236A (en) 1989-11-28
IL85159A (en) 1993-04-04
ATE110743T1 (de) 1994-09-15
EP0276014B1 (en) 1994-08-31
DK31088A (da) 1988-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO174105B (no) Analogifremgangsmaate for fremstilling av antikoagulerendepeptider
CA1340646C (en) Cyclic anticoagulant peptides
EP0291981B1 (en) Cyclic anticoagulant peptides
EP0443429B1 (en) Stabilized sulfonate and sulfate derivatives of hirudin
CA1341354C (en) Anticoagulant peptide alcohols
EP0540574B1 (en) Anticoagulant peptides
EP0372503B1 (en) Anticoagulant peptides
KR100200463B1 (ko) 항혈소판 작용을 갖는 히루딘 동족체
US5236898A (en) Cyclic anticoagulant peptides
US6005071A (en) Anticoagulant peptides
US4971953A (en) Anticoagulant peptide alcohols
US5789540A (en) Anticoagulant peptides
US5574012A (en) Analogs of hirudin having anti-platelet activity