NO163744B - Fremgangsmaate ved fremstilling av stabile salter av sulfo-adenosyl-l-methionin (same). - Google Patents

Fremgangsmaate ved fremstilling av stabile salter av sulfo-adenosyl-l-methionin (same). Download PDF

Info

Publication number
NO163744B
NO163744B NO851963A NO851963A NO163744B NO 163744 B NO163744 B NO 163744B NO 851963 A NO851963 A NO 851963A NO 851963 A NO851963 A NO 851963A NO 163744 B NO163744 B NO 163744B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
same
salts
product
sulfuric acid
water
Prior art date
Application number
NO851963A
Other languages
English (en)
Other versions
NO851963L (no
NO163744C (no
Inventor
Federico Gennari
Original Assignee
Bioresearch Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioresearch Spa filed Critical Bioresearch Spa
Publication of NO851963L publication Critical patent/NO851963L/no
Publication of NO163744B publication Critical patent/NO163744B/no
Publication of NO163744C publication Critical patent/NO163744C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y10S435/921—Candida
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y10S435/94—Saccharomyces
    • Y10S435/942—Saccharomyces cerevisiae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte
for fremstilling av nye, stabile salter av sulfo-adenosyl-L-methionin (SAMe).
Nærmere bestemt vedrører oppfinnelsen en fremgangs-
måte for fremstilling av SAMe-salter av sulfonsyrer eller av langkjedede svovelsyreestere eller av dioctylsulfosuccinat, som er spesielt egnet for oral farmasøytisk bruk.
Sulfo-adenosyl-L-methionin (SAMe) er den viktigste biologiske methylgruppedonor og det er derfor i den senere tid funnet viktige terapeutiske anvendelser av forbindelsen.
Hovedproblemene forbundet med bruk av dette produkt
i stor skala er dets varmeustabilitet selv ved omgivelsestemperatur, samt den komplekse fremstilling og rensing av produktet.
Produktet har derfor vært gjenstand for en rekke patenter rettet både mot fremstillingen av nye, stabile salter og mot tilveiebringelse av fremstillingsfremgangsmåter som kan gjennomføres i industriell målestokk.
Foreliggende søker har innlevert visse patentsøknader vedrørende både nye, stabile salter og fremgangsmåter for fremstilling av sulfo-adenosyl-L-methionin (italienske patenter nr. 1 043 885, 1 002 016, 1 002 036 og 1 054 175, italienske patentsøknader nr. 23603A/81 og 22622A/8?) .
SAMe-salter som for tiden er kjent er alle svært opp-løselige i vann, hygroskopiske, sterkt sure og særlig egnet for bruk i injiserbare farmasøytiske preparater. Den utstrakte bruk av disse salter i farmasøytiske preparater for oral administrering byr imidlertid på alvorlige problemer forbundet med de spesielt hygroskopiske egenskaper til SAMe-salter som gjør det vanskelig å håndtere pulverne som inneholder saltene, og med den dårlige SAMe-absorpsjon i for-døyelseskanalen som ikke gjør det mulig å nå opp til passende konsentrasjonsnivåer i blodet til å oppnå den ønskede farma-kologiske virkning.
I så henseende er situasjonen blitt vesentlig for-bedret ved å bruke gastroresistente preparater som alle-
rede er patentert av foreliggende søker (italiensk patent-søknad nr. 22621A/83).
Situasjonen er imidlertid fortsatt langt fra perfekt ettersom forsøksdata fra dyr indikerer en biotilgjengelighet etter oral administrering som varierer fra 3% til 20% ved den anvendte forsøksmodell.
Vi har nå oppfunnet en ny fremgangsmåte for fremstilling av nye SAMe-salter som er stabile ved omgivelsestemperatur, uoppløselige i vann og oppløselige i mange organiske oppløsningsmidler som f.eks. alkoholer,
en blanding av methanol og kloroform i forholdet 1:1, en blanding av ethanol og kloroform i forholdet 1:1, aceton og andre oppløsningsmidler med middels polaritet, noe sem gir høy absorpsjon i fordøyelseskanalen slik at man oppnår en biotilgjengelighet etter oral administrering i så høy størrelses-orden som 70 til 80%.
Disse utgjør derfor den ideelle løsning for orale farmasøytiske preparater som inneholder S-adenosyl-L-methionin, på grunn av de ikke-hygroskopiske egenskaper og absorpsjonen i fordøyelseskanalen.
Vi har funnet .at de foreliggende SAMe-salter
kan fremstilles ved hjelp av en ny fremgangsmåte som har be-tydelige fordeler når det gjelder enkelhet og økonomi sammenlignet med kjente fremgangsmåter.
SAMe-saltene fremstilt ifølge foreliggende fremgangsmåte har følgende generelle formel:
hvor m er 0 eller 1, n er 1,5 når p er 2, og er 3 når p er 1, R er valgt fra gruppen bestående av alkyl, fenylalkyl og carboxyalkyl, idet den rettkjedede eller forgrenede alkylkjede inneholder fra 8 til 18 carbonatomer. Nærmere bestemt utgjøres saltene fremstilt ifølge foreliggende fremgangsmåte av SAMe-salter av sulfonsyrer, eller SAMe-salter av svovelsyreestere, eller SAMe-salter av dioctylsulforavsyre som faller innenfor den ovenfor nevnte formel (I) hvor uttrykket "dioctylsulforavsyre" betegner den frie syre av handelsproduktet "dioctylsulfosuccinat".
Fremgangsmåten for fremstilling av SAMe-salter ifølge foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved:
a) anrikning av utgangsgjæren med SAMe ved å tilsette methionin i en mengde mellom 2 og 12 umol pr. ml, b) cellelyse og utvinning av en vandig oppløsning som er rik på SAMe (cellelysat), idet cellelysen utføres ved
behandling av den anrikede gjær først med vann og ethylacetat og deretter med erv svovelsyreoppløsning som ligger
mellom 0,1 N og 0,5 N, fortrinnsvis 0,35 N,
c) rensing av cellelysatet ved ultrafiltrering, idet det brukes membraner med en nominell "cut-off" på 10.000, d) utfelling av SAMe med en sulfonsyre, en svovelsyreester eller dioctvlsulforavsyre, e) separasjon av det utfelte produkt ved hjelp av et trykk-.filter eller en sentrifuge, vasking av produktet med
'destillert vann og tørking av produktet under vakuum ved en temperatur som fortrinnsvis ligger mellom 50 og 20°C under et resttrykk som er mindre enn 1 mmHg.
Disse og andre kjennetegn og fordeler ved SAMe-saltene og ved fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse for fremstilling av disse vil komme tydligere frem ut fra den nærmere beskrivelse som er gitt nedenunder og som vedrører foretrukne fremgangsmåter for utøvelse av de forskjellige trinn i fremgangsmåten, og ut fra resultatene av prøver på absorpsjonen av SAMe-saltet i fordøyelseskanalen.
Fremgangsmåten ifølge foreliygende oppfinnelse gjør det mulig å oppnå SAMe-salter som svarer til den ovenfor nevnte generelle formel (I), på en lettvint og økonomisk fordelaktig måte. Således kan SAMe-saltene, ettersom de er uoppløselige i vann, erholdes med en god grad av renhet ved direkte utfelling fra cellelysater eller tilsvarende dyrk-ningsvæsker som inneholder SAMe, ved hjelp av behandlingen med sulfonsyrer eller svovelsyreestere eller dioctylsulfosuccinat, som definert ovenfor, slik at det fåes SAMe-salter i henhold til formel (I).
Langkjedede sulfonsyrer er tildels tilgjengelige kommersielt i form av natriumsalter derav, eller de kan eventuelt lett fremstilles fra de tilsvarende bromider ved behandling med natriumsulfitt i overensstemmelse med den følgende reaksjon:
hver R er som definert ovenfor.
Langkjedede svovelsyreestere, f.eks. natriumlauryl-sulfat, og dioctylsulfosuccinat er lett tilgjengelige i handelen.
Fremgangsmåten utføres i overensstemmelse med de følgende trinn: a) anrikning av gjøren med SAMe ved å tilsette methionin i en mengde mellom 2 og 12 ymol pr. ml, til kulturer av Saccharomyces cerevisiae, Torulopsis utilis, Candida utilis etc. under betingelsene som er beskrevet av Schlenk, Enzymologia, 29, 283 (1965) .
b) cellelyse etterfulgt av utvinning av en SAMe-rik oppløsning (cellelysat): lysen utføres ved å behandle den
anrikede gjær først med en oppløsning av vann og ethylacetat i et volumforhold mellom 3:1 og 0,5:1, fortrinnsvis mellom 1,2:1 og 0,8:1, mengden oppløsning av vann og ethylacetat som brukes ligger mellom 1/20 og 1/2, fortrinnsvis mellom 1/4 og 1/5 av den fuktige cellevekt, og behandlingen fortsettes i et tidsrom mellom 15 og 4 5 minutter, fortrinnsvis 30 minutter. Svovelsyre i en konsentrasjon mellom 0,1 N og 0,5 N, fortrinnsvis 0,35 N, tilsettes så i en mengde mellom 1:1 og 0,2:1, fortrinnsvis mellom 0,5:1 og 0,6:1, basert på fuktig cellevekt. Behandlingen fortsettes i et tidsrom mellom 1 og 2 timer og fortrinnsvis 1,5 timer, ved omgivelsestemperatur. Cellelyse utført på denne måte forårsaker at praktisk talt 100% av den tilstedeværende SAMe går over i oppløsning,
c) rensing av cellelysatet: dette utføres fortrinnsvis ved å utsette lysatet fra trinn b) for ultrafiltrering, idet det anvendes membraner med en nominell "cut-off" på 10.000, noe som gjør det mulig å fjerne proteinrestene og polysaccha-ridrestene med høy molekylvekt, som ellers ville feste seg til SAMe-utfellingen ved adsorpsjon, d) utfelling av SAMe-saltet: det fremstilles en vandig oppløsning ved å oppløse, for hvert mol SAMe i cellelysatet
som skal utfelles, mellom 2,5 og 5 mol, fortrinnsvis ca. 3,5
mol, av det ønskede natriumsalt av sulfonsyre eller av den ønskede svovelsyreester eller av dioctylsulfosuccinat, i en minimal mengde destillert vann og eventuelt varme opp for å lette oppløsningen, og deretter avkjøles det, oppløsningen surgjøres med 2 mol svovelsyre pr. mol SAMe som skal utfelles, og tilføres cellelysatet erholdt i de forutgående trinn slik at det uoppløselige SAMe-salt øyeblikkelig blandes og felles ut i forholdet 3 mol syre pr. mol SAMe. Reaksjonsblandingen holdes under omrøring i 3 0 minutter,
e) filtrering og tørking: filtrering kan utføres ved hjelp av de vanlige apparater og fremgangsmåter, den utføres
fortrinnsvis i et trykkfilter eller en sentrifuge, produktet vaskes forsiktig med destillert vann og tørkes under vakuum ved en temperatur som er fortrinnsvis mellom 50 og 20°C og med et resttrykk som er mindre enn 1 mmHg.
Når man følger den beskrevne fremgangsmåte, ligger utbyttet av SAMe mellom 80 og 95% og renheten av de erholdte SAMe-salter har et gjennomsnitt på 99%.
SAMe-saltene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er spesielt egnet for bruk i orale farmasøytiske preparater som inneholder den som aktiv bestanddel, enten alene eller sammen med farmasøytiske akseptable tilsetningsstoffer og faste hjelpestoffer.
Det er også mulig å bruke de nye SAMe-saltene i farma-søytiske former som er absolutt nye når det gjelder SAMe slik som suppositorier, kremer eller salver.
Som angitt ovenfor, er hovedfordelen ved de nye SAMe-saltene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse den høye absorpsjons-grad i fordøyelseskanalen sammenlignet med hittil kjente vannoppløselige SAMe-salter.
Absorpsjonen ble undersøkt på 110 hanrotter av type Sprague Dawley med vekt 210 g som hadde fastet siden den foregående kveld.
Produktene administreres i oppløsning eller i en 2% vandig suspensjon av gummi arabicum.
For hvert produkt opereres 5 rotter under etherbe-døvelse slik at stoffet som undersøkes innføres i den øvre del av tynntarmen. Snittet i tarmveggen lukkes med ligatur og dyrene sys igjen.
Produktet administreres til ytterligere 5 dyr oralt
ved hjelp av en magesonde.
Det tas en blodprøve fra halevenen med en gang og
ved 10, 20, 40, 60, 90, 120, 180 og 240 minutter etter admi-nistreringen og SAMe-konsentrasjonen bestemmes i prøven ved hjelp av den modifiserte fremgangsmåte til Baldessarini and Kopin (J. Neurochem. 13: 769, 1966).
Konsentrasjonsverdiene i plasma minus startverdiene plottes mot tiden og arealene under tidskurvene beregnes ved hjelp av trapes- og kurvemetoden for ekstrapolering.
De oppnådde resultater er gjengitt i tabell 1 og
viser en betydelig høyere absorpsjon for SAMe-saltene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse enn for andre SAMe-salter.
hvor:
SAMe S04~PTS = SAMe disulfat-p-toluensulfonat Sl = SAMe trimethansulfonat
S5 = SAMe tripentansulfonat
Nedenunder er det gjengitt eksempler på fremstilling av de foreliggende SAMe-salter.
Eksemp el 1
Fremstilling av natriumsalter av sulfonsyre med generell formel RS03Na
80 liter destillert vann, 10 liter 95% ethanol og
10 liter n-butanol ble tilsatt til 27,7 kg (100 mol) 1-brom-tetradecan. Det ble tilsatt 13,9 kg (110 mol) vannfritt natriumsulfitt og blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 5 dager.
Etter at reaksjonen var avsluttet, ble blandingen for-tynnet med 300 liter destillert vann, varmet opp inntil fullstendig oppløsning hadde funnet sted og produktet fikk utkrystallisere over natten ved 15°C.
Det på denne måte erholdte natriumsalt av tetradecansulfonsyre ble frafiltrert, vasket med 50 liter destillert vann og deretter med 50 liter aceton.
Produktet ble suspendert i 50 liter aceton, oppvarmet til 50°C for å ekstrahere myristinalkoholen som var blitt dannet under omsetningen, hensatt til avkjøling og frafiltrert. Det ble vasket med aceton og tørket under vakuum. 24 kg natriumsalt av tetradecansulfonsyre ble erholdt (molart utbytte ca. 80%) som et krystallinsk hvitt pulver som er oppløselig i vann med inntil 1% ved 4 0°C hvorved det fåes en klar, fargeløs oppløsning. Elementæranalyse: <C>14H2g03SNa
Ved å bruke 24,5 kg 1-bromdodecan og gå frem på en måte som nøyaktig tilsvarer den beskrevne, ble det erholdt 21,7 kg natriumsalt av dodecahsulfonsyre.
Ved å bruke 3 0,5 kg 1-bromhexadecan ble det erholdt 26,3 kg natriumsalt av hexadecansulfonsyre.
Endelig ble det ved å bruke 33,3 kg 1-bromoctadecan erholdt 28,5 kg natriumsalt av octadecansulfonsyre.
Eksempel 2
Fremstilling av SAMe- trihexadecansulfonat ( S16)
220 liter ethylacetat og 220 liter vann ble tilsatt ved omgivelsestemperatur til 1800 kg gjær som var anriket med SAMe (6,88 g/kg) ifølge Schlenk [Enzymologia 29, 283
(1965) ] ved å tilsette methionin i en mengde mellom 2 og 12 umol pr. ml.
Etter kraftig omrøring i 30 minutter ble 1000 liter 0,35 N svovelsyre tilsatt og omrøringen ble fortsatt i ytterligere en og en halv time.
Det ble filtrert gjennom et rotasjonsfilter som ble vasket med vann hvorved man fikk 2800 liter av en oppløsning som inneholdt 4,40 g/liter SAMe, svarende til 99,5% av det som er tilstede i utgangsmaterialet.
Den på denne måte erholdte SAMe-oppløsning (pH 2,5) ble tilført et ultrafiltreringsapparat under anvendelse av rørformede membraner med "cut-off" på 10.000.
Permeatet som forlot membranene ble samlet opp i en passende beholder hvoretter konsentratet kontinuerlig ble resirkulert inntil et sluttvolum på 200 liter. På dette punkt ble destillert vann tilsatt og resirkuleringen ble fortsatt inntil SAMe var fullstendig ekstrahert. Det ble erholdt 3500 ultrafiltrert lysat som inneholdt 12,2 kg SAMe-ion. 3 5 kg natriumhexadecansulfonat ble oppløst separat i 2500 liter deionisert vann ved 50°C og 6 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt.
Oppløsningen ble tilsatt cellelysatet. Det dannet seg øyeblikkelig et bunnfall. Blandingen ble avkjølt til 20°C og hensatt under omrøring i 30 minutter. Bunnfallet ble frafiltrert gjennom et trykkfilter og vasket med 300 liter destillert vann.
Det ble så plassert i en vakuumtørker ved 4 0°C og 0,5 mmHg resttrykk inntil det gjenværende fuktighetsinnhold i produktet er mindre enn 1%.
Det ble erholdt 37 kg hvitt pulver som etter analyse viste seg å ha følgende sammensetning:
svarende til saltet av SAMe.3 hexadecansulfonat.
Produktet foreligger i form av et hvitt pulver som er uoppløselig i vann og lett oppløselig i methanol, ethanol og aceton. Det er oppløselig i en 2:1 blanding av methanol og kloroform med inntil 5% ved 2 5°C under dannelse av en fargeløs oppløsning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt for urenheter. Elementæranalyse: C.cH„~N,OrS•3C,,H-.O^S
15 22 6 5 16 34 3
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i
100 ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med E1% = 106,7.
Eksempel 3
Fremstilling av SAMe- trioctadeca nsulfonat ( S18)
Fremgangsmåten ifølge eksempel 2 ble fulgt hvorved man fikk 3500 liter ultrafiltrert lysat som inneholdt 12,2 kg SAMe-ion.
38 kg natriumoctadecansulfonat ble oppløst i 3400 liter deionisert vann ved 50°C og 6 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt. Fremgangsmåten ifølge eksempel 2 ble fulgt hvorved man fikk 4 0 kg hvitt pulver som etter analyse viste den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe'3 octadecansulfonat.
Produktet forelå i form av et hvitt pulver som var uoppløselig i vann og i methanol, ethanol og aceton.
Det er oppløselig i en 1:1 blanding av methanol og kloroform med inntil 5% ved 20°C under dannelse av en farge-løs oppløsning. Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28 (1971) viste at produktet var fritt for urenheter.
Elementæranalyse: C15H22N6°5S"3C18H38°3S
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i
100 ml av en blanding av 10% kloroform, 60% methanol og 30% vann) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med = 100,3.
Eksem pel 4
Fremstilling av SA Me- tritetr adecan sulfonat ( S14)
Fremgangsmåten ifølge eksempel 2 ble fulgt hvorved man fikk 3500 liter ultrafiltrert lysat som inneholdt 12,2 SAMe-ion. 32 kg natriumtetradecansulfonat ble oppløst i 2000 liter deionisert vann ved 50°C og 6 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt.
Fremgangsmåten ifølge eksempel 2 ble fulgt hvorved man fikk 34 kg hvitt pulver som etter analyse viste seg å ha følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe«3 tetradecansulfonat
Produktet forelå i form av et hvitt pulver SOm var uopp-løselig i vann og oppløselig i methanol eller ethanol med inntil 5% under dannelse av en fargeløs oppløsning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biocem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt for urenheter.
Elementæranalyse: C15H22N6°5S '3C14H30°3S
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i 100 ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved
259 nm med E1% = bl4.
Eksempel 5
Frems tilling av SAMe-t ridodecansulf onat ( S12)
Fremgangsmåten ifølge eksempel 2 ble fulgt hvorved man fikk 3500 liter ultrafiltrert lysat som inneholdt 12,2 kg SAMe-ion.
Lysatet ble regulert til pH 6 ved å tilsette 2 N NaOH. Det ble fremstilt en kolonne som inneholdt 200 liter Amberlite w CG50 harpiks i H -form som var forsiktig vasket med destillert vann.
Lysatet ble sendt gjennom harpikskolonnen ved en hastighet på 600 liter/time som ble holdt konstant under hele fremgangsmåten. 200 liter destillert vann, 400 liter 0,1 M eddiksyre og 200 liter destillert vann ble deretter sendt gjennom i rekkefølge. SAMe ble eluert med 500 liter 0,2 5 N svovelsyre.
De 500- liter eluat som ble erholdt på denne måte, inneholdt 11,5 kg SAMe-ion.
23,5 kg natriumdodecansulfonat ble oppløst i 1000 liter deionisert vann ved 40°C og 4,5 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt.
Den således erholdte oppløsning ble tilsatt til eluatet som inneholdt SAMe. Det ble øyeblikkelig dannet en utfelling.
Blandingen ble avkjølt til 20°C og hensatt under om-røring i 3 0 minutter.
Utfellingen ble frafiltrert i et trykkfilter og vasket med 300 liter destillert vann. Den ble tørket i en vakuum-tørker ved 4 0°C under 0,5 mmHg restrykk inntil det resterende fuktighetsinnhold i produktet var mindre enn 1%.
30,3 kg hvitt pulver ble erholdt som etter analyse viste seg å ha den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe 3•dodecansulfonat.
Produktet forelå i form av et hvitt pulver som var uoppløselig i vann og oppløselig i methanol, ethanol og iso-propanol med inntil 5% under dannelse av en fargeløs oppløs-ning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt for urenheter.
Elementæranalyse: <C>15<H>22<N>6°5<S>"3C12H26°3<S>
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i 100 ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med E1% = 122,3.
Eksempel 6
Fremstilling av SAMe- trilaurylsulfat ( S012)
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fulgt hvorved man fikk 500 liter eluat som inneholdt 11,5 kg SAMe-ion.
27,7 kg kommersielt tilgjengelig 90% natriumlauryl-sulfat U.S.P. ble oppløst i 500 liter destillert vann og 4,5 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt.
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fortsatt hvo.rved man fikk 30,6 kg hvitt pulver som etter analyse viste seg å ha den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe<3 laurylsulfat.
Produktet forelå i form av et hvitt pulver som var uoppløselig i vann og oppløselig i methanol og ethanol med inntil 5% under dannelse av en fargeløs oppløsning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt for urenheter. Elementæranalyse: C, cHooN,0cS «30,_H_,0.S
15 22 6 5 12 26 4
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i 100 ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med E1% = 117,4.
Eksempel 7
Fremst illing av S AMe-t ridodec ylbenzensulfonat ( SB12)
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fulgt hvorved man fikk 500 liter eluat som inneholdt 11,5 kg SAMe-ion.
35,5 kg kommersielt tilgjengelig 58% natriumdodecyl-benzensulfonat ble oppløst i 600 liter deionisert vann og 4,5 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt.
(Det bør legges merke til at uttrykket "natriumdode-cylbenzensulfonat" er handelsnavnet for en blanding av natriumalkylbenzensulfonater med den følgende gjennomsnitt-lige sammensetning: C1Q = 5%, C1;L = 45-50%, C12 = 35%, C±3 = 10-15%, C14 0,05%, svarende til den empiriske formel C^gH^gO^SNa).
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fulgt hvorved man fikk 35 kg lysegult pulver som etter analyse viste seg å ha den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe•3 dodecylbenzensulfonat.
Produktet forelå i form av et gult pulver som var uoppløselig i vann og oppløselig i methanol og ethanol med inntil 5% hvorved det ble dannet en klar oppløsning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt or urenheter.
Elementæranalyse: C^5H22N6°5S '3C18H30°3S
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i 100 ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med E19. = 109.
Eksem pel 8
Fremstilling av SAMe- tri " dioctylsulf osuccinat"
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fulgt hvorved
man fikk 500 liter eluat som inneholdt 11/5 kg SAMe-ion.
38,5 kg kommersielt tilgjengelig natriumsalt av dioctylsulf osuccinat ble oppløst 2000 liter deionisert vann ved 40°C og 4,5 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt.
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fortsatt hvorved man fikk 43,5 kg hvitt pulver som etter analyse viste seg å
ha den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe«3 dioctylsulfosuccinat.
Produktet forelå i form av et hvitt pulver som var uoppløselig i vann og oppløselig i methanol og ethanol med inntil 5% under dannelse av en fargeløs klar oppløsning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt for urenheter.
Elementæranalyse: <c>i5<H>22N6°5<S>"3C20H38°7<S>
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i 100 ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med E1% = 84,4.
Eksemp el 9
Fremstilling av SAMe- triundecansulfonat
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fulgt hvorved man fikk 500 liter eluat som inneholdt 11,5 kg SAMe-ion.
22,5 kg natriumundecansulfonat ble oppløst i 500 liter vann ved 40°C og 4,5 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt.
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fulgt hvorved man fikk 29 kg hvitt pulver som etter analyse viste seg å ha den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe«3 undecansulfonat.
Produktet forelå i form av et hvitt pulver som var uoppløselig i vann og oppløselig i methanol og ethanol med inntil 10% under dannelse av en fargeløs klar oppløsning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt for urenheter.
Elementæranalyse: <C>15<H>22<N>6°5<S>'3C11H24°3<S>
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i 100 ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med E^% = 127.
Eksempel 10
Frems tilli ng av SAMe- tridecansulfonat
Fremgangsmåten ifølge eksempel 5 ble fulgt hvorved man fikk 500 liter eluat som inneholdt 11,5 kg SAMe-ion.
21,5 kg natriumdecansulfonat ble oppløst i 400 liter deionisert vann ved 4 0°C og 4,5 kg konsentrert svovelsyre ble tilsatt. Fremgangsmåten ifølge eksempel ble fortsatt hvorved man fikk 26,6 kg hvitt pulver som etter analyse viste seg å ha den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe•3 decansulfonat.
Produktet forelå i form av et hvitt pulver som var
uoppløselig i vann og oppløselig i methanol og ethanol med inntil 10% under dannelse av en klar fargeløs oppløsning.
Tynnskiktkromatografi ifølge Anal. Biochem. 4, 16-28
(1971) viste at produktet var fritt for urenheter.
Elementæranalyse: ci5H22N6°5S'3C10H22°3<S>
Det ultrafiolette spektrum for produktet (3 mg i 100
ml 1:1 vann-methanol) viste et absorpsjonsmaksimum ved 259 nm med E1% = 132.

Claims (2)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av stabile salter av sulfo-adenosyl-L-methionin (SAMe) som er spesielt egnet for oral farmasøytisk bruk, med den generelle formel: hvor m er 0 eller 1, n er 1,5 når p er 2, og er 3 når p er 1, R er valgt fra gruppen bestående av alkyl, fenylalkyl og carboxyalkyl, hvori den rettkjedede eller forgrenede alkylkjede inneholder fra 8 til 18/carbonatomer, og særlig for fremstilling av SAMe-salter av sulfonsyrer, av svovelsyreestere eller av dioctylsulforavsyre, karakterisert veda) anrikning av utgangsgjæren med SAMe ved å tilsette methionin i en mengde mellom 2 og 12 ymol pr. ml, b) cellelyse og utvinning av en vandig oppløsning som er rik på SAMe (cellelysat), idet cellelysen utføres ved behandling av den anrikede gjær først med vann og ethylacetat og deretter med en svovelsyreoppløsning som ligger mellom 0,1 N og 0,5 N, fortrinnsvis 0,35 N, c) rensing av cellelysatet ved ultrafiltrering, idet det brukes membraner med en nominell "cut-off" på 10.000, d) utfelling av SAMe med en sulfonsyre, en svovelsyreester eller dioctylsulforavsyre, e) separasjon av det utfelte produkt ved hjelp av et trykk- .filter eller en sentrifuge, vasking av produktet med destillert vann og tørking av produktet under vakuum ved en temperatur som fortrinnsvis ligger mellom 50 og 20°C under et resttrykk som er mindre enn 1 mmHg.
2. Fremgangsmåte for fremstilling av stabile SAMe-salter ifølge krav 1, karakterisert ved at det stabile SAMe-salt utfelles ved å behandle cellelysatet med sulfonsyrene eller med svovelsyreestrene eller med dioctylsulforavsyre slik at det molare forhold mellom utfellingsmidlene og SAMe ligger mellom 5:1 og 2,5:1, fortrinnsvis 3,5:1.
NO851963A 1984-05-16 1985-05-15 Fremgangsmaate ved fremstilling av stabile salter av sulfo-adenosyl-l-methionin (same). NO163744C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT20940/84A IT1173992B (it) 1984-05-16 1984-05-16 Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente idonei per uso farmaceutico orale

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO851963L NO851963L (no) 1985-11-18
NO163744B true NO163744B (no) 1990-04-02
NO163744C NO163744C (no) 1990-07-11

Family

ID=11174364

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO851963A NO163744C (no) 1984-05-16 1985-05-15 Fremgangsmaate ved fremstilling av stabile salter av sulfo-adenosyl-l-methionin (same).

Country Status (21)

Country Link
US (1) US5128249A (no)
EP (1) EP0162324B1 (no)
JP (1) JPH0630606B2 (no)
AT (1) ATE36541T1 (no)
AU (1) AU568435B2 (no)
CA (1) CA1241611A (no)
DE (1) DE3564436D1 (no)
DK (1) DK161971C (no)
EG (1) EG17393A (no)
ES (1) ES543198A0 (no)
FI (1) FI85288C (no)
GR (1) GR851183B (no)
IE (1) IE58694B1 (no)
IN (1) IN162826B (no)
IT (1) IT1173992B (no)
MX (1) MX7438E (no)
NO (1) NO163744C (no)
PT (1) PT80453B (no)
SU (1) SU1487816A3 (no)
YU (1) YU44498B (no)
ZA (1) ZA853296B (no)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1173990B (it) * 1984-05-16 1987-06-24 Bioresearch Spa Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente adatti per uso parenterale
IT1177373B (it) * 1984-12-06 1987-08-26 Bioresearch Spa Sali della 5'-metiltio-5'-deossiadenosina con acidi solfonici a lunga catena alchilica
IT1200589B (it) * 1985-02-14 1989-01-27 Gibipharma Spa Derivati naturali attivita farmagologica
AU2538588A (en) * 1987-10-09 1989-05-02 Mario De Rosa Lipophilic salts of s-adenosyl-l-methionine (sam) with acylated taurine derivatives
GB9211779D0 (en) * 1992-06-03 1992-07-15 Ciba Geigy Ag Amine salts
CA2122342A1 (en) * 1992-09-04 1994-03-17 Hironori Kawabata Pharmaceutical composition
US6492349B1 (en) 1993-03-31 2002-12-10 Nutramax Laboratories, Inc. Aminosugar and glycosaminoglycan composition for the treatment and repair of connective tissue
US6255295B1 (en) 1996-12-23 2001-07-03 Nutramax Laboratories, Inc. Aminosugar, glycosaminoglycan or glycosaminoglycan-like compounds, and s-adenosylmethionine composition for the protection, treatment, repair, and reduction of inflammation of connective tissue
IT1317920B1 (it) * 2000-10-20 2003-07-15 Univ Roma S-adenosilmetionina e suoi derivati per il trattamento e laprevenzione della malattia di alzheimer.
US6759395B2 (en) 2000-12-18 2004-07-06 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals, Ltd. Soft-gelatin capsule comprising S-adenosylmethionine and a method for producing the same
AU2002228321A1 (en) * 2000-12-18 2002-07-01 Orchid Chemicals And Pharmaceuticals Limited A novel soft-gelatin capsule comprising s-adenosylmethionine and a method for producing the same
US6649753B2 (en) 2001-06-07 2003-11-18 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation
WO2002102823A1 (en) * 2001-06-14 2002-12-27 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Limited Stable salts of s-adenosyl-l-methionine (same) and the process for their preparation
DE60102938T2 (de) * 2001-12-12 2005-03-31 Chemistry & Health International B.V. Lagerstabile Granulate, die S-Adenosylmethionin enthalten, und Verfahren zu ihrer Herstellung
US20050272687A1 (en) * 2004-06-08 2005-12-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-l-methionine
US20090012036A1 (en) * 2005-05-24 2009-01-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-L-methionine
US8148348B2 (en) * 2006-01-17 2012-04-03 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Method of stabilizing S-adenosyl-L-methionine and stabilized composition
US20090088404A1 (en) * 2007-01-31 2009-04-02 Methylation Sciences International Srl Extended Release Pharmaceutical Formulations of S-Adenosylmethionine
CA2677053C (en) * 2007-01-31 2016-03-15 Methylation Sciences International Srl Extended release pharmaceutical formulations of s-adenosylmethionine
US20090197824A1 (en) * 2008-01-31 2009-08-06 Methylation Sciences International Srl Extended Release Pharmaceutical Formulations of S-Adenosylmethionine
US20100004191A1 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Rolland F Hebert Compositions of S-adenosyl-L-methionine.
US8329208B2 (en) 2009-07-28 2012-12-11 Methylation Sciences International Srl Pharmacokinetics of S-adenosylmethionine formulations
US20110027342A1 (en) * 2009-07-28 2011-02-03 Msi Methylation Sciences, Inc. S-adenosylmethionine formulations with enhanced bioavailability
CN106074589A (zh) 2012-10-17 2016-11-09 甲基化物科学国际有限公司 包含s‑腺苷甲硫氨酸及没食子酸酯的组合物
EP2945959B1 (en) 2013-01-16 2020-05-13 Hebert Sam-E LLC Stable indole-3-propionate salts of s-adenosyl-l-methionine
CN103265595B (zh) * 2013-05-21 2015-12-23 南京基准生物科技有限公司 一种酿酒酵母发酵液中提取s-腺苷甲硫氨酸的方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE37913B1 (en) * 1972-08-02 1977-11-09 Bioresearch Sas Salt of s-adenosyl-l-methionine
IE39517B1 (en) * 1973-06-27 1978-10-25 Bioresearch Sas Double salts of s-adenosyl-l-methhionine
AR221676A1 (es) * 1974-07-12 1981-03-13 Bioresearch Sas Procedimiento para la preparacion de sales estables sulfonicas y/o sulfuricas de la s-adenosil-l-metionina,particularmente utiles como donadores especificos de metilo para las reacciones bioquimicas de transferencia del grupo ch3;asi como tambien las reacciones fundamentales en el metabolismo lipilico,protilico y glucidico
JPS53107485A (en) * 1977-02-28 1978-09-19 Yamasa Shoyu Co Ltd Preparation of s-adenosyl-l-methionine salt
GB2064523B (en) * 1979-12-04 1983-06-29 Kanegafuchi Chemical Ind Stable composition of s-adenosyl-l-methionine
GB2116172B (en) * 1982-02-25 1986-07-09 Nippon Zeon Co Microbial cells containing s-adenosyl methionine in high concentrations and process for production of s adenosyl methionine
IT1169773B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina
JPS60102796A (ja) * 1983-11-09 1985-06-06 三洋電機株式会社 リ−ドレス部品の端子接続方法
IT1173990B (it) * 1984-05-16 1987-06-24 Bioresearch Spa Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente adatti per uso parenterale

Also Published As

Publication number Publication date
FI851953A0 (fi) 1985-05-16
YU44498B (en) 1990-08-31
EP0162324B1 (en) 1988-08-17
DK161971B (da) 1991-09-02
SU1487816A3 (ru) 1989-06-15
AU568435B2 (en) 1987-12-24
DK215685A (da) 1985-11-17
FI85288C (fi) 1992-03-25
JPS60255799A (ja) 1985-12-17
ES8602939A1 (es) 1985-12-16
DK161971C (da) 1992-02-10
DE3564436D1 (en) 1988-09-22
YU80185A (en) 1988-02-29
FI85288B (fi) 1991-12-13
PT80453B (pt) 1987-08-19
IN162826B (no) 1988-07-16
IT8420940A1 (it) 1985-11-16
NO851963L (no) 1985-11-18
FI851953L (fi) 1985-11-17
IT1173992B (it) 1987-06-24
AU4251785A (en) 1985-11-21
JPH0630606B2 (ja) 1994-04-27
IT8420940A0 (it) 1984-05-16
ES543198A0 (es) 1985-12-16
ATE36541T1 (de) 1988-09-15
DK215685D0 (da) 1985-05-15
MX7438E (es) 1988-11-15
NO163744C (no) 1990-07-11
GR851183B (no) 1985-11-25
ZA853296B (en) 1985-12-24
IE58694B1 (en) 1993-11-03
EP0162324A1 (en) 1985-11-27
PT80453A (en) 1985-06-01
IE851188L (en) 1985-11-16
US5128249A (en) 1992-07-07
CA1241611A (en) 1988-09-06
EG17393A (en) 1989-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO163744B (no) Fremgangsmaate ved fremstilling av stabile salter av sulfo-adenosyl-l-methionin (same).
US4990606A (en) Stable sulpho-adenosyl-L-methionine (SAMe) salts, particularly suitable for parenteral use
FI72118C (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara ornitin- och argininsalter.
US20100105889A1 (en) Process for the preparation of pentosan polysulfate or salts thereof
WO1989003389A1 (en) Lipophilic salts of s-adenosyl-l-methionine (sam) with acylated taurine derivatives
JP2003534349A (ja) （ｓｓ，ｒｓ）−ｓ−アデノシル−ｌ−メチオニンの薬剤として許容される塩の調製方法
AU2019350699B2 (en) Process of making calcium alpha-ketoglutarate
FI80709B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara salter av 5&#39;-metyltio-5&#39;deoxiadenocin med laong alkylkedja innehaollande sulfonsyror.
FI77043C (fi) Foerfarande foer framstaellning av stabila sulfoadenocyl-l-metioninsalter.
Jamieson The Synthesis of 5'-Deoxy-5'-S-(3-methylthiopropylamine) sulfoniumadenosine (“Decarboxylated S-Adenosylmethionine”)
JPH0115496B2 (no)
EP0611369A1 (en) Process for preparing (s) (+)-4,4&#39;-(1-methyl-1,2-ethanediyl)-bis(2,6-piperazinedione)
NO167024B (no) Fremgangsmaate for rensing av karnitin.
JP3052357B2 (ja) ポリエン系抗生物質の精製法
CH661929A5 (fr) Sulfate double de desoxyfructosyl-serotonine et de creatinine, sa preparation et medicament le contenant.
JPH0517204B2 (no)
JPS5929080B2 (ja) 抗生物質ｓｆ−１５４０物質の新規誘導体及びその製法
HU190077B (en) Process for elaborating of enzyme-fluids consisting of nigericin
JPS6062986A (ja) 新規物質ｃ−１
NO121499B (no)