NO156210B

NO156210B - PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF MONACOLIN K DERIVATIVES.

Info

Publication number: NO156210B
Application number: NO802244A
Authority: NO
Inventors: Yoshio Tsujita; Kazuhiko Tanzawa; Masao Kuroda; Seigo Iwado; Kiyoshi Hamano; Akira Terahara; Sadao Sato
Original assignee: Sankyo Co
Priority date: 1979-07-27
Filing date: 1980-07-25
Publication date: 1987-05-04
Also published as: ATA392380A; SE8005386L; NO156210C; CH647749A5; ES493726A0; PL225901A1; SE445828B; GB2055100A; IT8068211A0; AU6083980A; FI802357A; DK322380A; DD153827A5; ES8105781A1; NL8004303A; FR2462417B1; AT375334B; DE3028284C2; FI71300B; NZ194445A

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte til fremstilling av forbindelser med formelen The present invention relates to a method for producing compounds with the formula

hvor R er et alkalimetallatom, en lavere alkylgruppe eller en fenyllaverealkylgruppe. where R is an alkali metal atom, a lower alkyl group or a phenyl lower alkyl group.

Fra norsk patentsøknad 8004 51 er forbindelsen Monacolin K og fremstillingen av denne ved hjelp av mikroorganismer av slekten Monascus, særlig Monascus ruber stamme 1005 (FERM 4822) kjent. I søknaden er den verdifulle og uventede virkning av forbindelsen Monacolin K som antihyperkolesterolmiddel beskrevet. Fremstilling av Monacolin K ved hjelp av dyrking av forskjellige andre mikroorganismer av slekten Monascus er kjent fra britisk patentsøknad 8007240. Det har ifølge den foreliggende oppfinnelse vist seg at salter og estre av den frie syre som Monacolin K er lakton av, har en antihyperkolesterolvirkning av samme type som Monacolin K, men i sammenlignbar eller større grad. For enkelhets skyld vil disse forbindelser heretter bli benevnt "Monacolin K salter eller estre", og det vil forstås at dette uttrykket betegner salter og estrer av syren som Monacolin K er laktonet av. From Norwegian patent application 8004 51, the compound Monacolin K and its preparation using microorganisms of the genus Monascus, particularly Monascus ruber strain 1005 (FERM 4822) are known. In the application, the valuable and unexpected effect of the compound Monacolin K as an antihypercholesterol agent is described. Production of Monacolin K by means of cultivation of various other microorganisms of the genus Monascus is known from British patent application 8007240. According to the present invention, it has been shown that salts and esters of the free acid of which Monacolin K is the lactone have an anti-hypercholesterol effect of the same type as Monacolin K, but to a comparable or greater extent. For convenience, these compounds will hereinafter be referred to as "Monacolin K salts or esters", and it will be understood that this term denotes salts and esters of the acid of which Monacolin K is the lactone.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kjennetegnes ved at mikroorganismen Monascus ruber SANK 18174 (Ferm.4957) eller Monascus ruber SANK 17075 (CBS 83270) dyrkes under aerobe betingelser i et egnet dyrkningsmedium som inneholder assimilerbare kilder for karbon og nitrogen under dannelse av Monacolin K som deretter overføres til salter og estere på vanlig måte. The method according to the invention is characterized by the fact that the microorganism Monascus ruber SANK 18174 (Ferm.4957) or Monascus ruber SANK 17075 (CBS 83270) is grown under aerobic conditions in a suitable culture medium that contains assimilable sources of carbon and nitrogen with the formation of Monacolin K which is then transferred to salts and esters in the usual way.

Monacolin K saltene kan lettvint omdannes til Monacolin K selv eller til morsyren av Monacolin K ved surgjøring. Den resulterende Monacolin K eller syren vil omdannes til et salt i nærvær av et alkali, f.eks. et alkalimetallhydroksyd eller -karbonat. Denne omdannelse kan utføres kvantitativt og gjen-tatte ganger. Det har vist seg at omdannelse mellom Monacolin K eller dennes morsyre og metallsaltet er sterkt avhengig av pH i mediet som inneholder dem. Den kritiske pH-verdi er ca. 5,0. Under forutsetning av at metallioner er tilgjengelige foreligger Monacolin K alltid i form av et salt når pH er over 5,0. Når pH er under 5,0 vil på den annen side Monacolin K selv, morsyren av Monacolin K eller en blanding av disse to i varierende forhold være tilstede. The Monacolin K salts can easily be converted to Monacolin K itself or to the mother acid of Monacolin K by acidification. The resulting Monacolin K or acid will convert to a salt in the presence of an alkali, e.g. an alkali metal hydroxide or carbonate. This conversion can be carried out quantitatively and repeatedly. It has been shown that conversion between Monacolin K or its malic acid and the metal salt is strongly dependent on the pH of the medium containing them. The critical pH value is approx. 5.0. Provided that metal ions are available, Monacolin K is always present in the form of a salt when the pH is above 5.0. When the pH is below 5.0, on the other hand, Monacolin K itself, the malic acid of Monacolin K or a mixture of these two in varying proportions will be present.

Monacolin K estrene som fremstilles ifølge den foreliggende oppfinnelse er de forbindelser som har den ovenfor angitte formel hvor R er en lavere alkylgruppe eller en fenyllaverealkylgruppe. Eksempler på slike alkylgrupper er metyl-, etyl-, propyl-, isopropyl-, butyl- og heksylgrupper. The Monacolin K esters which are produced according to the present invention are the compounds which have the above formula where R is a lower alkyl group or a phenyl lower alkyl group. Examples of such alkyl groups are methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl and hexyl groups.

Av estrene foretrekkes særlig metyl-, etyl-, butyl- samt bensylostrene. Of the esters, the methyl, ethyl, butyl and benzyl esters are particularly preferred.

Monacolin K saltene og estrene kan lettvint fremstilles ved saltdannelse eller forestring av Monacolin K selv eller av et reaktivt derivat av Monacolin K. Eksempler på egnete reaktive derivater omfatter morsyren av Monacolin K og, når det gjelder fremstillingen av estre, Monacolin K salter (f.eks. de klasser av salter som er beskrevet ovenfor, særlig natrium-, kalium-, magnesium-, aluminium-, jern-, sink-, kobber-, nikkel- eller koboltsaltet). The Monacolin K salts and esters can be easily prepared by salt formation or esterification of Monacolin K itself or of a reactive derivative of Monacolin K. Examples of suitable reactive derivatives include the malic acid of Monacolin K and, in the case of the preparation of esters, Monacolin K salts (e.g. e.g. the classes of salts described above, in particular the sodium, potassium, magnesium, aluminium, iron, zinc, copper, nickel or cobalt salt).

Monacolin K salter kan fremstilles ved enkel omsetning av Monacolin K eller dens morsyre med et oksyd, hydroksyd, karbonat eller bikarbonat, fortrinnsvis et hydroksyd eller karbonat, av det valgte metall. Forsiktighet bør vises for å sikre at reaksjonen utføres ved en pH-verdi på over 5,0, og fortrinnsvis på over 7,0, for å sikre fullstendig omdannelse av Monacolin K eller syren til det ønskete salt. Monacolin K som anvendes ved denne reaksjon vil fortrinnsvis være fremstilt slik som beskrevet i den ovennevnte norske og britiske patentsøknad ved dyrking av en sopp av slekten Monascus og isolering av Monacolin K fra dyrkingsmediet. Monacolin K kan isoleres fra saltdannelsen, eller, noe som foretrekkes, saltdannelsen utføres i løpet av isoleringen og rensingen av Monacolin K fra dyrkingsmediet, slik at Monacolin K isoleres i form av dets ønskete metallsalt. Uansett hvilken fremgangsmåte som velges kan metallsaltet isoleres fra reaksjonssmediet eller dyrkingsmediet ved metoder som er velkjente på området, inklusive de som vil bli beskrevet i det etterfølgende i forbindelse med isoleringen av Monacolin K metallsaltene fra kulturer av Monacolin K salt-produserende sopper. Monacolin K salts can be prepared by simple reaction of Monacolin K or its mother acid with an oxide, hydroxide, carbonate or bicarbonate, preferably a hydroxide or carbonate, of the selected metal. Care should be taken to ensure that the reaction is carried out at a pH above 5.0, and preferably above 7.0, to ensure complete conversion of Monacolin K or the acid to the desired salt. Monacolin K used in this reaction will preferably be prepared as described in the above-mentioned Norwegian and British patent application by cultivating a mushroom of the genus Monascus and isolating Monacolin K from the culture medium. Monacolin K can be isolated from the salt formation, or, more preferably, the salt formation is carried out during the isolation and purification of Monacolin K from the culture medium, so that Monacolin K is isolated in the form of its desired metal salt. Whichever method is chosen, the metal salt can be isolated from the reaction medium or culture medium by methods well known in the art, including those that will be described hereinafter in connection with the isolation of the Monacolin K metal salts from cultures of Monacolin K salt-producing fungi.

Monacolin K estre kan fremstilles ved enkel forestring av Monacolin K eller et reaktivt derivat av denne. Reaksjonen kan utføres ved omsetning av en alkohol med formelen ROH eller et reaktivt derivat av denne, hvor R er en lavere eller en fenyllaverealkylgruppe, med Monacolin K eller dennes morsyre, fortrinnsvis i nærvær av et avvanningsmiddel, f.eks. et syrehalogenid som acetylklorid. Alternativt kan Monacolin K estrene fremstilles ved omsetning av et Monacolin K salt med et halogenid med formelen RX hvor R er en lavere alkylgruppe eller en fenyllaverealkylgruppe, og X er et halogenatom, fortrinnsvis et jodatom. Monacolin K esters can be produced by simple esterification of Monacolin K or a reactive derivative thereof. The reaction can be carried out by reacting an alcohol with the formula ROH or a reactive derivative thereof, where R is a lower or a phenyl lower alkyl group, with Monacolin K or its mother acid, preferably in the presence of a dehydrating agent, e.g. an acid halide such as acetyl chloride. Alternatively, the Monacolin K esters can be prepared by reacting a Monacolin K salt with a halide of the formula RX where R is a lower alkyl group or a phenyl lower alkyl group, and X is a halogen atom, preferably an iodine atom.

Disse mikroorgansimer er tilgjengelige fra anerkjente kultursamlinger, som er angitt med følgende koder: These microorganisms are available from recognized culture collections, which are indicated by the following codes:

Ferm: Fermentation Research Institute, Ferm: Fermentation Research Institute,

Agency of Industrial Science and Agency of Industrial Science and

Technology, Ministry of International Technology, Ministry of International

Trade and Industry, Japan. Trade and Industry, Japan.

CES: Centraal Bureau voor Schimmel- CES: Centraal Bureau voor Schimmel-

cultures, Netherlands. cultures, Netherlands.

Monascus rubser SANK 18174 er en sopp som i den senere tid er blitt isolert fra jord, og dens mikrobiologiske egenskaper er anført nedenfor: Monascus rubser SANK 18174 is a fungus that has recently been isolated from soil, and its microbiological characteristics are listed below:

Monascus ruber SANK ( FERM 4 957) Monascus ruber SANK ( FERM 4 957)

Denne stamme ble isolert fra jord fra Shakotan-cho, Shakotan-gun, Shiribeshi Shicho, Hokkaido-prefektur, Japan, og ble deponert den 27. april 1979 hos nevnte Fermentation Research Insitute under aksesjonsnummer 4957. This strain was isolated from soil from Shakotan-cho, Shakotan-gun, Shiribeshi Shicho, Hokkaido Prefecture, Japan, and was deposited on April 27, 1979 at the said Fermentation Research Insitute under accession number 4957.

Vekst på potet-glukoseagar- og hveteagarmedier er tilsvarende til veksten for stamme SANK 15177 med unntagelse av at det fargende materiale som dannes er svakt lyserødt. Klei-stoteciene har en diameter på 20-70 |im, og stilkenes dimensjoner er 20-60 x 3,0-5,0 jam. Ascier er ikke iakttatt. Ascussporene er fargeløse og ellipseformete, og deres dimensjoner er 5,0-7,0 x 4,0-5,5 |im. Deres overflater er jevne. Sporene er forbundet med hverandre ovenfra og nedover og er fargeløse, og de fleste av dem er pæreformete og har dimensjoner på 6,0-9,5 x 6,0-10,0 ^m. Growth on potato-glucose agar and wheat agar media is similar to the growth for strain SANK 15177, with the exception that the coloring material that is formed is slightly pink. The clay stotheci are 20-70 µm in diameter, and the stem dimensions are 20-60 x 3.0-5.0 µm. Ascier has not been observed. The ascus spores are colorless and elliptical, and their dimensions are 5.0-7.0 x 4.0-5.5 |im. Their surfaces are smooth. The spores are interconnected from top to bottom and are colorless, and most of them are pear-shaped and have dimensions of 6.0-9.5 x 6.0-10.0 ^m.

Basert på iakttagelse av deres ovenfor angitte karak-teristika er alle disse mikroorgansimer av van Tieghem blitt identifisert som stammer av Monascus ruber. Based on observation of their above-mentioned characteristics, all these microorganisms have been identified by van Tieghem as strains of Monascus ruber.

Mikrobiologiske egenskaper for Monascus ruber er rapportert i følgende litteratur: Takada, "Transactions of the Mico-logical Society of Japan", vol. 9, 1969, p. 125-130 [Materials for the Fungus Flora of Japan (7)] og van Tieghem, "Bull. Soc. Botan. France", vol. 31, 1884, p. 227. Ascussporedannelsen av stammen ble rapportert av Cole et al i "Canadian Journal of Botany", vol. 46, 19 68, p. 9 87: Conidium ontogeny in hypho-mycetes. The imperfect state of Monascus ruber and its meristem arthrospores. Microbiological characteristics of Monascus ruber are reported in the following literature: Takada, "Transactions of the Mico-logical Society of Japan", vol. 9, 1969, pp. 125-130 [Materials for the Fungus Flora of Japan (7)] and van Tieghem, "Bull. Soc. Botan. France", vol. 31, 1884, p. 227. The ascus spore formation of the stem was reported by Cole et al in the "Canadian Journal of Botany", vol. 46, 19 68, p. 9 87: Conidium ontogeny in hyphomycetes. The imperfect state of Monascus ruber and its meristem arthrospores.

Monacolin K salter fremstilles ved dyrking av mikroorganismene i et dyrkingsmedium under aerobe betingelser, under anvendelse av samme metoder som er velkjente på området for dyrking av sopp og andre mikroorgansimer. F.eks. kan den valgte stamme av Monascus først dyrkes på et egnet medium, og deretter kan de dannede mikroorganismer samles og innpodes i og dyrkes på et annet dyrkingsmedium til dannelse av det ønskete Monacolin K salt. Dyrkingsmediet som anvendes ved formeringen av mikroorganismen og dyrkingsmediet som anvendes ved fremstillingen av Monacolin K saltet kan være det samme eller forskjellig. Ethvert dyrkingsmedium som er kjent på området for dyrking av sopp kan anvendes under forutsetning av at det inneholder, de nødvendige assimilerbare karbonkilde og en assimilerbar nitrogenkilde. Eksempler på egnete kilder for assimilisert karbon er glukose, maltose, dekstrin, stivelse, laktose, sukrose samt glycerol. Av disse kilder er glukose og glycerol særlig foretrukket for fremstilling av Monacolin K salter. Eksempler på egnete kilder for assimilertbart nitrogen er pepton, kjøttekstrakt, gjær, gjærek-strakt, soyabønnemel, jordnøttmel, kornstøpvæske, riskli samt uorganiske nitrogenkilder. Av disse nitrogenkilder er pepton særlig foretrukket. Ved fremstilling av Monacolin K salter kan et uorganisk salt og/eller et metallsalt om nødvendig tilsettes til dyrkingsmediet. Dessuten kan det dersom det er nødvendig tilsettes en mindre mengde av et tungmetall. Ved fremstillingen av Monacolin K salter er det viktig at det er tilstede i dyrkingsmediet eller i soppen som svarer til metallsaltet som det er ønskelig å fremstille. Monacolin K salts are produced by growing the microorganisms in a culture medium under aerobic conditions, using the same methods that are well known in the field for growing fungi and other microorganisms. E.g. the selected strain of Monascus can first be grown on a suitable medium, and then the microorganisms formed can be collected and inoculated into and grown on another culture medium to form the desired Monacolin K salt. The culture medium used in the propagation of the microorganism and the culture medium used in the production of the Monacolin K salt can be the same or different. Any culture medium known in the field for the cultivation of mushrooms can be used provided that it contains the necessary assimilable carbon source and an assimilable nitrogen source. Examples of suitable sources for assimilated carbon are glucose, maltose, dextrin, starch, lactose, sucrose and glycerol. Of these sources, glucose and glycerol are particularly preferred for the production of Monacolin K salts. Examples of suitable sources for assimilable nitrogen are peptone, meat extract, yeast, yeast extract, soya bean flour, peanut flour, grain casting liquid, rice bran and inorganic nitrogen sources. Of these nitrogen sources, peptone is particularly preferred. When producing Monacolin K salts, an inorganic salt and/or a metal salt can be added to the culture medium if necessary. In addition, if necessary, a smaller amount of a heavy metal can be added. When producing Monacolin K salts, it is important that it is present in the culture medium or in the fungus that corresponds to the metal salt that it is desired to produce.

Det foretrekkes særlig at mikroorganismen først subdyrkes It is particularly preferred that the microorganism is first subcultured

på et potet-dekstroseagarmedium (f.eks. et produkt fra Difco Company) og deretter innpodes i og dyrkes på et annet dyrkingsmedium til dannelse av det ønskete Monacolin K salt. on a potato dextrose agar medium (eg, a product of Difco Company) and then inoculated into and grown on another culture medium to form the desired Monacolin K salt.

Mikroorganismen dyrkes under aerobe betingelser ved dyrkingsmetoder som er velkjent på området, f.eks. fast kultur, rystet kultur eller kultur under lufting og rysting. Mikroorganismen vil vokse i et vidt temperaturområde, f.eks. fra 7 The microorganism is cultivated under aerobic conditions by cultivation methods that are well known in the field, e.g. fixed culture, shaken culture or culture under aeration and shaking. The microorganism will grow in a wide temperature range, e.g. from 7

til 3 5°C, men særlig når mikroorganismen vokser med det formål å frembringe Monacolin K eller et Monacolin K salt ligger den mer foretrukne dyrkingstemperatur i området 2 0-3 0°C. to 35°C, but especially when the microorganism grows with the aim of producing Monacolin K or a Monacolin K salt, the more preferred cultivation temperature is in the range of 20-30°C.

Under dyrkingen av mikroorganismen kan fremstillingen av Monacolin K saltet overvåkes ved å ta prøver av dyrkingsmediet During the cultivation of the microorganism, the production of the Monacolin K salt can be monitored by taking samples of the culture medium

og måle den fysiologiske aktivitet for Monacolin K saltet i dyrkingsmediet ved prøver som vil bli beskrevet nedenfor. and measure the physiological activity of the Monacolin K salt in the culture medium by tests which will be described below.

Dyrking kan deretter fortsettes inntil en betydelig oppsamling Cultivation can then be continued until a significant collection

av Monacolin K salt er oppnådd i dyrkingsmediet. På dette tids-punkt kan Monacolin K saltet deretter isoleres og utvinnes fra dyrkingsmediet og vevene av mikroorganismen ved en vilkårlig egnet kombinasjon av isoleringsmetoder som velges med hensyn til dens fysiologiske og kjemiske egenskaper. F.eks. kan én eller alle av de følgende isoleringsmetoder benyttes: ekstraksjon av væsken fra dyrkingsmediet med et hydrofilt løsningsmiddel som dietyleter, etylacetat eller kloroform, ekstraksjon av organismen med et hydrofilt løsningsmiddel som aceton eller en alkohol, konsentrering f.eks. ved avdamping av alt eller noe av løsningsmidlet under senket trykk, oppløsning i et mer polart løsningsmiddel som aceton eller en alkohol, fjerning av forurensninger med et mindre polart løsningsmiddel som petroleumeter eller heksan, gelfiltrering gjennom en kolonne av et materiale som "Sephadex", of Monacolin K salt is obtained in the culture medium. At this point, the Monacolin K salt can then be isolated and recovered from the culture medium and tissues of the microorganism by any suitable combination of isolation methods chosen with regard to its physiological and chemical properties. E.g. one or all of the following isolation methods can be used: extraction of the liquid from the culture medium with a hydrophilic solvent such as diethyl ether, ethyl acetate or chloroform, extraction of the organism with a hydrophilic solvent such as acetone or an alcohol, concentration e.g. by evaporation of all or some of the solvent under reduced pressure, dissolution in a more polar solvent such as acetone or an alcohol, removal of impurities with a less polar solvent such as petroleum ether or hexane, gel filtration through a column of a material such as "Sephadex",

absorpsjonskromatografi med aktivkull eller silikagel, hurtig væskekromatografi, omdannelse til Monacolin K selv eller dennes morsyre, direkte rensing i form av metallsaltet samt andre liknende metoder. Ved å benytte en egnet kombinasjon av disse metoder kan det ønskete Monacolin K salt isoleres fra dyrkingsmediet som en ren substans. absorption chromatography with activated carbon or silica gel, rapid liquid chromatography, conversion to Monacolin K itself or its mother acid, direct purification in the form of the metal salt and other similar methods. By using a suitable combination of these methods, the desired Monacolin K salt can be isolated from the culture medium as a pure substance.

Som beskrevet i ovennevnte patentsøknader kan Monacolin K selv fremstilles under anvendelse av mikroorganismene og metodene som er beskrevet ovenfor. As described in the above-mentioned patent applications, Monacolin K itself can be produced using the microorganisms and methods described above.

Den fysiologiske aktivitet for Monacolin K salter og estre kan prøves og bestemmes kvantitativt ved følgende prøver, som også kan benyttes i modifisert form for å overvåke fremstillingen av Monacolin K salter under fermenteringsprosessen ifølge oppfinnelsen . The physiological activity of Monacolin K salts and esters can be tested and determined quantitatively by the following tests, which can also be used in modified form to monitor the production of Monacolin K salts during the fermentation process according to the invention.

1. Inhibering av kolesterolbiosyntese. 1. Inhibition of cholesterol biosynthesis.

Slik som Monacolin K selv inhiberer Monacolin K salter og estre spesifikt virkningen av 3-hydroksy-3-metylglutaryl-CoA-reduktase, som er det hastighetsbestemmende enzym i biosyntesen av kolesterol. Tabell 1 nedenfor angir konsentrasjonene (i ng/ml) av forbindelsen ifølge oppfinnelsen som inhiberer virkningen av 3-hydroksy-3-metylglutaryl (HMG)-CoA-reduktase med 50% (ved måling ifølge metoden som er beskrevet i Analytical Biochemistry, vol. 31, 1969, p. 383),og konsentrasjonene (i ng/ml) av forbindelsen ifølge oppfinnelsen som inhiberer kolesterolbiosyntese med 50% (målt ved metoden i Journal of Biological Chemistry, vol. 247, 1972, p. 4914). De tilsvarende resultater for de kjente forbindelser ML-236B (som er en forbindelse som er kjent for å ha liknende type av virkning og fremstilles ved dyrking av mikroorganismer av slekten Penicillium som beskrevet i britisk patent-skrift 1.453.425) er også angitt. Konsentrasjonen av Monacolin K selv "som inhiberer kolesterolbios"yhtesé med 50% er også angitt. Det vil ses at mens konsentrasjonen av ML-236B som er nødvendig for å inhibere kolesterolbiosyntese med 50% er 10,0 ng/ml er den tilsvarende konsentrasjon for Monacolin K estrene av størrelses-orden 1 ng/ml (dvs. ca. 10 ganger bedre), og den tilsvarende konsentrasjon for natriumsaltet av Monacolin K er ca. 0,14 ng/ml (dvs. ca. 70 ganger bedre). Virkningene for saltene og estrene av Monacolin K er sammenliknbare med eller bedre enn virkningen for Monacolin K selv. Like Monacolin K itself, Monacolin K salts and esters specifically inhibit the action of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase, which is the rate-determining enzyme in the biosynthesis of cholesterol. Table 1 below indicates the concentrations (in ng/ml) of the compound according to the invention which inhibit the action of 3-hydroxy-3-methylglutaryl (HMG)-CoA reductase by 50% (when measured according to the method described in Analytical Biochemistry, vol. 31, 1969, p. 383), and the concentrations (in ng/ml) of the compound according to the invention which inhibit cholesterol biosynthesis by 50% (measured by the method in the Journal of Biological Chemistry, vol. 247, 1972, p. 4914). The corresponding results for the known compounds ML-236B (which is a compound known to have a similar type of action and is produced by the cultivation of microorganisms of the genus Penicillium as described in British patent document 1,453,425) are also indicated. The concentration of Monacolin K itself "which inhibits cholesterol bios"yhtesé by 50% is also indicated. It will be seen that while the concentration of ML-236B required to inhibit cholesterol biosynthesis by 50% is 10.0 ng/ml, the corresponding concentration for the Monacolin K esters is of the order of 1 ng/ml (ie approx. 10 times better), and the corresponding concentration for the sodium salt of Monacolin K is approx. 0.14 ng/ml (ie about 70 times better). The effects of the salts and esters of Monacolin K are comparable to or better than the effects of Monacolin K itself.

2. Senkning av blodkolesterolmengder 2. Lowering blood cholesterol levels

Dyrene som ble benyttet ved denne prøve var rotter av stammen Wistar Imamichi som hver hadde kroppsvekt på ca. 300 g. Prøvene ble utført med rottegrupper som hver besto av 5 dyr. Hvert dyr ble intravenøst injisert med 400 mg/kg "Triton" WR-1339, et materiale som er kjent for å øke blodkolesterol-mengden, mens det samtidig ble administrert oralt en av forbindelsene som er angitt i tabell 2 nedenfor i den mengde som er angitt i tabellen. 20 timer etter oral administrering ble rottene ofret ved blødning, og blodet og leverne ble samlet og deres kolesterolmengder ble bestemt på vanlig måte. Resultatene er angitt i tabell 2 som angir senkningen i blod- og lever-kolesterolmengder sammenliknet med en kontrollgruppe av rotter hvortil det bare var blitt administrert "Triton" WR-1339. The animals used in this test were rats of the strain Wistar Imamichi, each of which had a body weight of approx. 300 g. The tests were carried out with groups of rats each consisting of 5 animals. Each animal was intravenously injected with 400 mg/kg of "Triton" WR-1339, a material known to increase blood cholesterol levels, while simultaneously administering orally one of the compounds listed in Table 2 below in the amount indicated in the table. 20 hours after oral administration, the rats were sacrificed by bleeding, and the blood and livers were collected and their cholesterol levels were determined in the usual manner. The results are set forth in Table 2 which indicates the reduction in blood and liver cholesterol levels compared to a control group of rats to which only "Triton" WR-1339 had been administered.

For sammenliknings skyld er de tilsvarende resultater angitt for Monacolin K selv og for ML-236B, men disse forbindelser ble administrert i betydelig større doser enn de som ble benyttet for forbindelsene ifølge oppfinnelsen for å oppnå en sammen-liknbar senkning av kolesterolmengdene. For the sake of comparison, the corresponding results are indicated for Monacolin K itself and for ML-236B, but these compounds were administered in significantly larger doses than those used for the compounds according to the invention in order to achieve a comparable lowering of the cholesterol amounts.

Senkningen i blod- eller leverkolesterolmengde ble beregnet med følgende formel: The reduction in blood or liver cholesterol was calculated using the following formula:

hvor: A = mengde i gruppe som ble behandlet bare med "Triton" where: A = amount in group treated only with "Triton"

WR-1339, WR-1339,

B mengde i ubehandlet kontrollgruppe, B amount in untreated control group,

C = mengde i prøvegruppe. C = quantity in sample group.

3. Akutt toksisitet 3. Acute toxicity

Forbindelsene som ble prøvet var metyl-, etyl-, butyl- The compounds tested were methyl, ethyl, butyl

og benzylestrene samt natrium- og kalsiumsaltene av Monacolin K. Det viste seg at 50% dødelig dose (LD,-q) for hver av disse forbindelser var minst 2000 mg/kg ved oral administrering og minst 500 mg/kg ved intraperitoneal administrering. Forbindelsene har således en meget lav toksisitet. and the benzyl esters as well as the sodium and calcium salts of Monacolin K. It was found that the 50% lethal dose (LD,-q) for each of these compounds was at least 2000 mg/kg by oral administration and at least 500 mg/kg by intraperitoneal administration. The compounds thus have a very low toxicity.

Disse resultater viser at forbindelsene ifølge oppfinnelsen inhiberer biosyntesen av kolesterol, og som et resultat av dette senker kolesterolmengdene i blod. De er således verdifulle medisiner ved behandlingen av hyperlipaemi og åreforkalkning. These results show that the compounds according to the invention inhibit the biosynthesis of cholesterol and, as a result, lower the cholesterol levels in the blood. They are thus valuable medicines in the treatment of hyperlipaemia and atherosclerosis.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres oralt eller parenteralt i form av en kapsel, tablett, injiserbart preparat eller en vilkårlig annen formulering, selv om det van-ligvis foretrekkes å administrere dem oralt. Dosen vil variere avhengig av alderen og kroppsvekten til pasienten og hvor alvor-lig tilstanden er, men generelt er den daglige dose for en voksen fortrinnsvis fra 0,1 til 100 mg, helst fra 0,1 til 10 mg, når det gjelder Monacolin K salter og fra 0,5 til 100 mg, helst fra 0,5 til 10 mg, når det gjelder Monacolin K estre. The compounds according to the invention can be administered orally or parenterally in the form of a capsule, tablet, injectable preparation or any other formulation, although it is usually preferred to administer them orally. The dose will vary depending on the age and body weight of the patient and how serious the condition is, but in general the daily dose for an adult is preferably from 0.1 to 100 mg, preferably from 0.1 to 10 mg, in the case of Monacolin K salts and from 0.5 to 100 mg, preferably from 0.5 to 10 mg, in the case of Monacolin K esters.

Fremstilling av forbindelsene ifølge oppfinnelsen vil bli ytterligere illustrert ved hjelp av de etterfølgende eksempler. Preparation of the compounds according to the invention will be further illustrated by means of the following examples.

Eksempel 1 Example 1

Natriumsalt av Monacolin K Sodium salt of Monacolin K

300 liter av et dyrkingsmedium som hadde en pH på 5,5 før sterilisering og som inneholdt 5% vekt/volum glukose, 0,5% vekt/volum maisstøpvæske, 2% vekt/volum pepton samt 0,5% vekt/volum ammoniumklorid ble anbrakt i en 600 liter fermen-teringsbeholder og innpodet med organismen Monascus ruber SANK 18174 (Ferm. 4957) . Dyrkingen av organismen ble utført i 116 timer ved 26°C med en luftingshastighet på 300 liter pr. min. 300 liters of a culture medium which had a pH of 5.5 before sterilization and which contained 5% w/v glucose, 0.5% w/v corn liquor, 2% w/v peptone and 0.5% w/v ammonium chloride were placed in a 600 liter fermentation vessel and inoculated with the organism Monascus ruber SANK 18174 (Ferm. 4957). The cultivation of the organism was carried out for 116 hours at 26°C with an aeration rate of 300 liters per my.

og omrøring ved 190 omdr./min. Ved slutten av dette tidsrom ble pH i dyrkingsmediet som inneholdt organismen regulert til en verdi på 3,4 ved tilsetning av 6N saltsyre, og deretter ble mediet ekstrahert med 800 liter metanol. 6 kg "Hyflo Super Cel" ble tilsatt, og deretter ble ekstrakten filtrert under anvendelse av en filterpresse, hvorved det ble oppnådd 1100 liter metanolisk ekstrakt. Denne ekstrakt ble vasket med 200 liter av en mettet vandig løsning av natriumklorid og deretter med 180 liter etylcykloheksan. Den resulterende løsning ble ekstrahert med 600 liter etylendiklorid. 50 g tri-fluoreddiksyre ble tilsatt til etylendikloridekstrakten og fikk reagere ved 80°C i 30 min. Reaksjonsblandingen ble deretter vasket etter tur med 200 liter av en 2 prosentig vekt/volum vandig løsning av natriumbikarbonat og 200 liter av en 10 prosentig vekt/volum vandig løsning av natriumklorid. Blandingen ble deretter konsentrert ved inndamping under senket trykk, hvorved det ble oppnådd 135 g av en oljeaktig substans. and stirring at 190 rpm. At the end of this period, the pH of the culture medium containing the organism was adjusted to a value of 3.4 by the addition of 6N hydrochloric acid, and then the medium was extracted with 800 liters of methanol. 6 kg of "Hyflo Super Cel" was added and then the extract was filtered using a filter press, whereby 1100 liters of methanolic extract was obtained. This extract was washed with 200 liters of a saturated aqueous solution of sodium chloride and then with 180 liters of ethyl cyclohexane. The resulting solution was extracted with 600 liters of ethylene dichloride. 50 g of trifluoroacetic acid was added to the ethylene dichloride extract and allowed to react at 80°C for 30 min. The reaction mixture was then washed in turn with 200 liters of a 2 percent w/v aqueous solution of sodium bicarbonate and 200 liters of a 10 percent w/v aqueous solution of sodium chloride. The mixture was then concentrated by evaporation under reduced pressure, whereby 135 g of an oily substance was obtained.

Denne oljeaktige substans ble løst i 400 ml metanol. 20 ml av den resulterende metanoliske løsning, som inneholdt 6,8 g av oljen, ble deretter underkastet preparativ, hurtig væskekromatografi under anvendelse av et system 500 fra Waters Co. Limited, utstyrt med en "Prepac" C^g-kolonne (kolonne med reversert fase). En 85:15 volumblanding av metanol og vann ble anvendt som fremkaller. Fremkalling ble utført ved en strømningshastighet på 200 ml/min. (fremkallingstid ca. 10 min.) ved å iaktta et differensialrefraktometer som var forbundet med kroppen, og fraksjonen som hadde hovedtoppen på differensialrefraktometeret ble fraskilt. Denne operasjon ble gjentatt, og de resulterende hovedtoppfraksjoner ble oppsamlet og konsentrert, hvorved det ble oppnådd 10,2 g av en oljeaktig substans. Denne oljeaktige substans ble løst i 30 ml metanol, og 6 ml av den metanoliske løsning, som inneholdt ca. 2 g av oljen, ble igjen underkastet samme preparative, hurtige væskekromatografi og fremkalt med en 80:20 volumblanding av metanol og vann ved en strømningshastig-het på 200 ml/min. Fraksjonen som viste hovedtoppen ble fraskilt. Denne operasjon ble gjentatt, og hovedtoppfraksjonene ble oppsamlet og konsentrert. Resten ble behandlet med vandig metanol, hvorved det ble oppnådd 1170 mg råkrystaller som ble rekrystallisert atskillige ganger fra etanol, hvorved det ble oppnådd 864 mg krystaller. This oily substance was dissolved in 400 ml of methanol. 20 ml of the resulting methanolic solution, containing 6.8 g of the oil, was then subjected to preparative flash liquid chromatography using a Waters Co. 500 system. Limited, equipped with a "Prepac" C^g column (reversed phase column). An 85:15 volume mixture of methanol and water was used as developer. Development was performed at a flow rate of 200 ml/min. (development time approx. 10 min.) by observing a differential refractometer which was connected to the body, and the fraction which had the main peak on the differential refractometer was separated. This operation was repeated, and the resulting main peak fractions were collected and concentrated, whereby 10.2 g of an oily substance was obtained. This oily substance was dissolved in 30 ml of methanol, and 6 ml of the methanolic solution, which contained approx. 2 g of the oil was again subjected to the same preparative fast liquid chromatography and developed with an 80:20 volume mixture of methanol and water at a flow rate of 200 ml/min. The fraction showing the main peak was separated. This operation was repeated, and the main peak fractions were collected and concentrated. The residue was treated with aqueous methanol, whereby 1170 mg of crude crystals were obtained, which were recrystallized several times from ethanol, whereby 864 mg of crystals were obtained.

Til disse krystaller ble det tilsatt 19,4 ml av 0,1N vandig natriumhydroksyd, og blandingen ble omrørt ved 50-60°C i 3 timer. Uløselige stoffer ble avfiltrert, og filtratet ble lyofilisert til dannelse av 900 mg av natriumsaltet av Monacolin K som hadde følgende egenskaper: To these crystals was added 19.4 ml of 0.1N aqueous sodium hydroxide, and the mixture was stirred at 50-60°C for 3 hours. Insoluble substances were filtered off, and the filtrate was lyophilized to give 900 mg of the sodium salt of Monacolin K which had the following properties:

1. Farge og form: Hvitt pulver 1. Color and form: White powder

2. Elementæranalyse: 2. Elementary analysis:

Beregnet: C: 64,84%, H: 8,38%, Na: 5,17% Calculated: C: 64.84%, H: 8.38%, Na: 5.17%

Funnet: C: 64,78%, H: 8,55%, Na: 5,21%. Found: C: 64.78%, H: 8.55%, Na: 5.21%.

3. Molekylvekt: 3. Molecular weight:

444 jj/ed massespéktrometri (F.D. Mass.fJ . 444 jj/ed mass spectrometry (F.D. Mass.fJ .

4. Molekylformel: 4. Molecular formula:

5. UV-spektrum: 5. UV spectrum:

Som vist i fig. 1, X , : As shown in fig. 1, X , :

^ maks ^ max

232 nm (log e = 4,30) , 232 nm (log e = 4.30) ,

239 nm (log e = 4,36), 239 nm (log e = 4.36),

248 nm (log e = 4,19). 248 nm (log e = 4.19).

6. IR-spektrum (KBr-tabletter): 6. IR spectrum (KBr tablets):

Som vist i fig. 1. As shown in fig. 1.

7. NMR-spektrum (D20): 7. NMR spectrum (D2O):

Som vist i fig. 3. As shown in fig. 3.

8. Hurtig væskekromatografi: 8. Fast Liquid Chromatography:

Oppholdstid: 8,5 minutter, Residence time: 8.5 minutes,

Kolonne: "Microbondapac" C18, Column: "Microbondapac" C18,

60 volum% vandig metanol + 0,1% "PIC-A". 60% by volume aqueous methanol + 0.1% "PIC-A".

Strømningshastighet: 1,5 ml/min. Flow rate: 1.5 ml/min.

Som vist i fig. 4. As shown in fig. 4.

9. Løselighet: 9. Solubility:

Løselig i vann, uløselig i organiske løsningsmidler. Soluble in water, insoluble in organic solvents.

10.Spesifikk dreining: 10.Specific turning:

[ajp<5> = +266° (c = 0,33, vann). [ajp<5> = +266° (c = 0.33, water).

Eksempel 2 Example 2

Natriumsalt av Monacolin K Sodium salt of Monacolin K

300 liter av et dyrkingsmedium som hadde en pH på 7,4 før sterilisering og som inneholdt 1,5% vekt/volum løselig stivelse, 1,5% vekt/volum glycerol, 2,0% vekt/volum fiskemel og 0,2% vekt/ volum kalsiumkarbonat ble anbrakt i en 600 liters fermenterings-beholder og innpodet med organismen Monascus ruber SANK 17075 300 liters of a culture medium which had a pH of 7.4 before sterilization and which contained 1.5% w/v soluble starch, 1.5% w/v glycerol, 2.0% w/v fishmeal and 0.2% weight/volume of calcium carbonate was placed in a 600 liter fermentation container and inoculated with the organism Monascus ruber SANK 17075

(CBS 832.70). Dyrking av organismen ble utført i 120 timer ved 26°C med en luftingshastighet på 300 liter pr. min. og omrøring ved 190 omdr./min. Dyrkingsmediet ble deretter filtrert i en filterpresse hvorved det ble oppnådd 35 kg (våtvekt) av organismen. (CBS 832.70). Cultivation of the organism was carried out for 120 hours at 26°C with an aeration rate of 300 liters per my. and stirring at 190 rpm. The culture medium was then filtered in a filter press whereby 35 kg (wet weight) of the organism was obtained.

Til dette ble det tilsatt 100 liter vann, og blandingens pH-verdi ble regulert til 12 ved tilsetning av natriumhydroksyd under omrøring. Blandingen ble deretter hensatt ved romtemperatur i 1 time, hvoretter 2 kg "Hyflo Super Cel" ble tilsatt til blandingen, som deretter ble filtrert i en filterpresse. Filt-ratets pH ble regulert til en verdi på 10 ved tilsetning av saltsyre, og den resulterende blanding ble deretter adsorbert på en kolonne som inneholdt 5 liter "HP-20"-harpiks som ble vasket med 15 liter henholdsvis vann og en 10 volumprosentig vandig løsning av metanol. Kolonnen ble deretter eluert med 90 volumprosentig vandig metanol. Eluatet ble konsentrert til et volum på ca. 10 liter hvoretter dets pH ble regulert til 2 ved tilsetning av saltsyre, og blandingen ble ekstrahert med etylacetat. Ekstrakten ble vasket med en mettet vandig løsning av natriumklorid, tørket over vannfritt natriumsulfat og deretter konsentrert ved inndamping til tørr tilstand, hvorved det ble oppnådd 50 g av en oljeaktig substans som inneholdt Monacolin K syre. Til denne oljeaktige substans ble det tilsatt tilstrekkelig metanol til å gi et totalt volum på 100 ml. 20 ml av den resulterende løsning ble deretter underkastet preparativ, hurtig væskekromatografi under anvendelse av en kolonne med reversert fase (som beskrevet i eksempel 1), eluert med en 20 volumprosentig vandig løsning av metanol, som inneholdt 2% eddiksyre, ved en strømningshas-tighet på 200 ml/min. Fraksjonen som oppviste hovedtoppen på differensialrefraktometeret ble fraskilt (7-10 min.). De res-terende 80 ml av den metanoliske løsning ble deretter behandlet på samme måte. De resulterende hovedtoppfraksjoner ble oppsamlet, konsentrert og ekstrahert med etylacetat. Ekstrakten ble konsentrert til tørr tilstand etter tilsetning av heptan, hvorved det ble oppnådd 1,2 g av en oljeaktig substans. To this was added 100 liters of water, and the mixture's pH value was adjusted to 12 by adding sodium hydroxide while stirring. The mixture was then left at room temperature for 1 hour, after which 2 kg of "Hyflo Super Cel" was added to the mixture, which was then filtered in a filter press. The pH of the filtrate was adjusted to a value of 10 by the addition of hydrochloric acid, and the resulting mixture was then adsorbed on a column containing 5 liters of "HP-20" resin which was washed with 15 liters of water, respectively, and a 10% by volume aq. solution of methanol. The column was then eluted with 90% by volume aqueous methanol. The eluate was concentrated to a volume of approx. 10 liters after which its pH was adjusted to 2 by the addition of hydrochloric acid, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The extract was washed with a saturated aqueous solution of sodium chloride, dried over anhydrous sodium sulfate and then concentrated by evaporation to dryness, whereby 50 g of an oily substance containing Monacolin K acid was obtained. To this oily substance was added sufficient methanol to give a total volume of 100 ml. 20 ml of the resulting solution was then subjected to preparative flash liquid chromatography using a reversed-phase column (as described in Example 1), eluted with a 20% by volume aqueous solution of methanol, containing 2% acetic acid, at a flow rate of of 200 ml/min. The fraction showing the main peak on the differential refractometer was separated (7-10 min.). The remaining 80 ml of the methanolic solution was then treated in the same way. The resulting major peak fractions were collected, concentrated and extracted with ethyl acetate. The extract was concentrated to dryness after addition of heptane, whereby 1.2 g of an oily substance was obtained.

Denne oljeaktige substans ble løst i 20 ml metanol og deretter underkastet hurtig væskekromatografi som beskrevet ovenfor, hvorved det ble oppnådd 150 mg Monacolin K syre. Til denne ble det tilsatt 2 ml metanol og 100 ml vann, pg den resulterende løsning ble regulert til en pH på 8,0 ved tilsetning av IN van- This oily substance was dissolved in 20 ml of methanol and then subjected to flash liquid chromatography as described above, whereby 150 mg of Monacolin K acid was obtained. To this was added 2 ml of methanol and 100 ml of water, because the resulting solution was adjusted to a pH of 8.0 by adding IN water

dig natriumhydroksyd, hvorved det ble oppnådd en klar, vandig løsning. Denne løsning ble ført gjennom en kolonne som inneholdt 10 ml "HP-20"-harpiks, og deretter ble kolonnen vasket med 100 dig sodium hydroxide, whereby a clear, aqueous solution was obtained. This solution was passed through a column containing 10 ml of "HP-20" resin, and then the column was washed with 100

ml vann og eluert med 80 volumprosentig vandig metanol. Eluatet ble lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 130 mg av natriumsaltet av Monacolin K i form av et hvitt pulver. Produktets egenskaper var de samme som de som angitt for produktet i eksempel 1. ml of water and eluted with 80 volume percent aqueous methanol. The eluate was lyophilized, whereby 130 mg of the sodium salt of Monacolin K was obtained in the form of a white powder. The properties of the product were the same as those stated for the product in Example 1.

Eksempel 3 Example 3

Kalsiumsalt av Monacolin K Calcium salt of Monacolin K

Dyrkingen, ekstraheringen, konsentreringen, den preparative, hurtige væskekromatografi samt rekrystallisasjon fra metanol som er beskrevet i eksempel 1 ble gjentatt. 500 mg av de resulterende krystaller ble deretter løst i 50 ml metylenklorid, og den resulterende løsning ble filtrert gjennom et milliporefilter. 20 ml mettet, vandig løsning.av kalsiumhydroksyd ble tilsatt til filtratet, og deretter ble blandingen omrørt kraftig ved romtemperatur. Når løsningens pH sank til under 8 ble det tilsatt en ytterligere 10 ml porsjon av mettet, vandig løsning av kalsiumhydroksyd, og omrøring ble fortsatt. Da pH ikke lenger sank (etter at totalt 50 ml av den vandige løsning av kalsiumhydroksyd var blitt tilsatt), ble det tilsatt destillert vann, og hele løsningen ble anbrakt i en skilletrakt. Den organiske fase ble oppsamlet og løsnings-midlet avdestillert. Resten ble opparbeidet med heptan, og deretter ble det oppnådd et pulver ved å utsette blandingen for ultralydbølger. Pulveret ble filtrert og tørket, hvorved det ble oppnådd 4 50 mg av kalsiumsaltet av Monacolin K i form av et hvitt pulver. The cultivation, extraction, concentration, preparative, fast liquid chromatography and recrystallization from methanol described in Example 1 were repeated. 500 mg of the resulting crystals were then dissolved in 50 ml of methylene chloride, and the resulting solution was filtered through a millipore filter. 20 ml of saturated aqueous solution of calcium hydroxide was added to the filtrate, and then the mixture was stirred vigorously at room temperature. When the pH of the solution dropped below 8, a further 10 ml portion of saturated aqueous solution of calcium hydroxide was added and stirring was continued. When the pH no longer decreased (after a total of 50 ml of the aqueous solution of calcium hydroxide had been added), distilled water was added and the entire solution placed in a separatory funnel. The organic phase was collected and the solvent distilled off. The residue was worked up with heptane, and then a powder was obtained by exposing the mixture to ultrasonic waves. The powder was filtered and dried, whereby 450 mg of the calcium salt of Monacolin K was obtained in the form of a white powder.

Dette kalsiumsalt hadde følgende egenskaper: This calcium salt had the following properties:

1. Molekylvekt: 882 (ved massespektrometri). 2. Molekylformel: (C24H37°6^2"Ca"1. Molecular weight: 882 (by mass spectrometry). 2. Molecular formula: (C24H37°6^2"Ca"

3. Smeltepunkt: 155-165°C (med spalting). 3. Melting point: 155-165°C (with cleavage).

4. Spesifikk dreining: 4. Specific turning:

[ajp<5> = +209° (c = 1,48, kloroform). [ajp<5> = +209° (c = 1.48, chloroform).

5. IR-spektrum (KBr): 5. IR spectrum (KBr):

Som vist i fig. 5. As shown in fig. 5.

6. NMR-spektrum (CD^OD): Som vist i fig. 6. 6. NMR spectrum (CD^OD): As shown in fig. 6.

Eksempel 4 Example 4

Metylester av Monacolin K Methyl ester of Monacolin K

Dyrkingen, ekstraheringen, konsentreringen, den preparative, hurtige væskekromatografi samt rekrystallisasjon fra etanol som er beskrevet i eksempel 1 ble gjentatt, hvorved det ble oppnådd 864 mg Monacolin K. 200 mg av denne Monacolin K ble løst i 20 The cultivation, extraction, concentration, preparative fast liquid chromatography and recrystallization from ethanol described in Example 1 were repeated, whereby 864 mg of Monacolin K were obtained. 200 mg of this Monacolin K was dissolved in 20

ml metanol, som på forhånd var awannet med "Molecular Sieve 3A". Etter tilsetning av noen få dråper acetylklorid ble løsningen omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Løsningsmidlet ble avdestillert, og resten ble ekstrahert med 50 ml etylacetat. Ekstrakten ble etter tur vasket med 2% vekt/volum vandig løsning av natrium-, bikarbonat og en mettet vandig løsning av natriumklorid og deretter tørket over vannfritt natriumsulfat, hvoretter løsnings-midlet ble avdestillert. Resten ble adsorbert på en kolonne som inneholdt 10 g silikagel ("Wakogel" C-100) som på forhånd var behandlet med benzen. Fraksjonene som ble eluert med en 6:94 volumblanding av etylacetat og benzen ble oppsamlet, og løs-ningsmidlet ble avdestillert, hvorved det ble oppnådd 6 5 mg av metylesteren av Monacolin K som en fargeløs olje. ml of methanol, which was previously dewatered with "Molecular Sieve 3A". After adding a few drops of acetyl chloride, the solution was stirred at room temperature for 3 hours. The solvent was distilled off, and the residue was extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract was washed in turn with a 2% weight/volume aqueous solution of sodium, bicarbonate and a saturated aqueous solution of sodium chloride and then dried over anhydrous sodium sulfate, after which the solvent was distilled off. The residue was adsorbed on a column containing 10 g of silica gel ("Wakogel" C-100) which had been previously treated with benzene. The fractions eluted with a 6:94 volume mixture of ethyl acetate and benzene were collected, and the solvent was distilled off, yielding 65 mg of the methyl ester of Monacolin K as a colorless oil.

Dette produkt hadde følgende egenskaper: This product had the following characteristics:

1. Molekylvekt: 436,6 (ved massespektrometri). 1. Molecular weight: 436.6 (by mass spectrometry).

2. Molekylformel: C25H40°6"2. Molecular formula: C25H40°6"

3. Spesifikk dreining: 3. Specific turning:

[a] Q 5 = +208° (c = 1,05, metanol). [a] Q 5 = +208° (c = 1.05, methanol).

4. IR-spektrum: Som vist i fig. 7. 4. IR spectrum: As shown in fig. 7.

5. NMR-spektrum: Som vist i fig. 8. 5. NMR spectrum: As shown in fig. 8.

Eksempel 5 Example 5

Metylester av Monacolin K Methyl ester of Monacolin K

Natriumsaltet av Monacolin K ble fremstilt slik som beskrevet i eksempel 2. 100 mg av dette natriumsalt ble deretter løst i 2 ml dimetylsulfoksyd, og deretter ble 50 pl metyljodid tilsatt til løsningen. Løsningen ble deretter kokt med tilbake-løpskjøling under omrøring ved 40-50°C i 5 timer i en reaksjons-beholder som var utstyrt med en tilbakeløpskjøler. Reaksjons-blandingen ble deretter fortynnet med 5 ml vann og ekstrahert med 10 ml metylenklorid. Løsningsmidlet ble avdestillert fra ekstrakten, og resten ble adsorbert på en kolonne som inneholdt 10 g silikagel ("Wakogel" C-100) som på forhånd var behandlet med benzen. Fraksjonene som ble eluert med en 4:96 volumblanding av etylacetat og benzen ble oppsamlet, og løsningsmidlet ble avdestillert, hvorved det ble oppnådd 35 mg av metylesteren av Monacolin K i form av en olje. The sodium salt of Monacolin K was prepared as described in example 2. 100 mg of this sodium salt was then dissolved in 2 ml of dimethyl sulfoxide, and then 50 µl of methyl iodide was added to the solution. The solution was then refluxed with stirring at 40-50°C for 5 hours in a reaction vessel equipped with a reflux condenser. The reaction mixture was then diluted with 5 ml of water and extracted with 10 ml of methylene chloride. The solvent was distilled off from the extract, and the residue was adsorbed on a column containing 10 g of silica gel ("Wakogel" C-100) which had been previously treated with benzene. The fractions eluted with a 4:96 volume mixture of ethyl acetate and benzene were collected and the solvent was distilled off, yielding 35 mg of the methyl ester of Monacolin K as an oil.

Eksempel 6 Example 6

Etylester av Monacolin K Ethyl ester of Monacolin K

100 mg Monacolin K, som var fremstilt slik som beskrevet 100 mg Monacolin K, which was prepared as described

i eksempel 1, ble løst i 15 ml etanol som på forhånd var av-vannet med "Molecular Sieve 3A", og noen få dråper acetylklorid ble tilsatt til løsningen. Blandingen ble deretter omrørt ved romtemperatur i 3 timer, hvoretter løsningsmidlet ble avdestillert, og resten ble ekstrahert med 50 ml etylacetat. Ekstrakten ble etter tur vasket med en 2% vekt/volum vandig løsning av. natriumbikarbonat og en mettet vandig løsning av natriumklorid og deretter tørket over vannfritt natriumsulfat. Etter avdestil-lering av løsningsmidlet ble resten adsorbert på en kolonne som inneholdt 10 g silikagel ("Wakogel" C-100) som på forhånd var behandlet med benzen. Fraksjonene som ble eluert med en 6:94 volumblanding av etylacetat og benzen ble oppsamlet, og løs-ningsmidlet ble avdestillert, hvorved det ble oppnådd 30 mg av etylesteren av Monacolin K i form av en fargeløs olje. in Example 1, was dissolved in 15 ml of ethanol previously dewatered with "Molecular Sieve 3A", and a few drops of acetyl chloride were added to the solution. The mixture was then stirred at room temperature for 3 hours, after which the solvent was distilled off, and the residue was extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract was in turn washed with a 2% w/v aqueous solution. sodium bicarbonate and a saturated aqueous solution of sodium chloride and then dried over anhydrous sodium sulfate. After distilling off the solvent, the residue was adsorbed on a column containing 10 g of silica gel ("Wakogel" C-100) which had been previously treated with benzene. The fractions eluted with a 6:94 volume mixture of ethyl acetate and benzene were collected, and the solvent was distilled off, whereby 30 mg of the ethyl ester of Monacolin K was obtained in the form of a colorless oil.

Egenskapene til denne forbindelse var følgende: The properties of this compound were the following:

1. Molekylvekt: 450,6 (ved massespektrometri). 1. Molecular weight: 450.6 (by mass spectrometry).

2. Molekylformel: <C>26H42°6'2. Molecular formula: <C>26H42°6'

3. IR-spektrum (CHCl3): 3. IR spectrum (CHCl3):

Som vist i fig. 9. As shown in fig. 9.

4. NMR-spektrum (CDCl3): 4. NMR spectrum (CDCl3):

Som vist i fig. 10. As shown in fig. 10.

Eksempel 7 Example 7

Butylester av Monacolin K Butyl ester of Monacolin K

200 mg Monacolin K som var fremstilt slik som beskrevet i eksempel 1, ble løst i 20 ml butanol som på forhånd var awannet med "Molecular Sieve 3A". Etter tilsetning av noen få dråper acetylklorid til løsningen ble den resulterende blanding omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Løsningsmidlet ble deretter avdestillert, og resten ble ekstrahert med 50 ml etylacetat. Ekstrakten ble vasket etter tur med en 2 prosentig vekt/volum vandig løsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig løsning av natriumklorid. Løsningen ble deretter tørket over vannfritt natriumsulfat, og løsningsmidlet ble avdestillert. Resten ble adsorbert på en kolonne som inneholdt 10 g silikagel ("Wakogel" C-100) som på forhånd var behandlet med benzen. Fraksjonene som ble eluert med en 4:96 volumblanding av etylacetat og benzen ble oppsamlet, og løsningsmidlet ble avdestillert, hvorved det ble oppnådd 80 mg av butylesteren av Monacolin K i form av en fargeløs olje. 200 mg of Monacolin K, which was prepared as described in Example 1, was dissolved in 20 ml of butanol which had previously been dewatered with "Molecular Sieve 3A". After adding a few drops of acetyl chloride to the solution, the resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The solvent was then distilled off, and the residue was extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract was washed in turn with a 2 percent w/v aqueous solution of sodium bicarbonate and a saturated aqueous solution of sodium chloride. The solution was then dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was distilled off. The residue was adsorbed on a column containing 10 g of silica gel ("Wakogel" C-100) which had been previously treated with benzene. The fractions eluted with a 4:96 volume mixture of ethyl acetate and benzene were collected and the solvent was distilled off, yielding 80 mg of the butyl ester of Monacolin K as a colorless oil.

Denne forbindelse hadde følgende egenskaper: This compound had the following properties:

1. Molekylvekt: 478,7 (ved massespektrometri). 1. Molecular weight: 478.7 (by mass spectrometry).

2. Molekylformel: <C>28H46°6*2. Molecular formula: <C>28H46°6*

3. IR-spektrum (CHCl3): Som vist i fig. 11. 3. IR spectrum (CHCl3): As shown in fig. 11.

4. NMR-spektrum: 4. NMR spectrum:

Som vist i fig. 12. As shown in fig. 12.

Eksempel 8 Example 8

Benzylester av Monacolin K Benzyl ester of Monacolin K

200 mg Monacolin K som var fremstilt slik som beskrevet i eksempel 1, ble løst i 20 ml benzylalkohol som på forhånd var av-vannet med "Molecular Sieve 3A". Etter tilsetning av noen få 200 mg of Monacolin K, which was prepared as described in example 1, was dissolved in 20 ml of benzyl alcohol which had previously been dewatered with "Molecular Sieve 3A". After adding a few

dråper acetylklorid til løsningen bie den resulterende blanding omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Løsningsmidlet ble deretter avdestillert, og resten ble ekstrahert med 50 ml etylacetat. Ekstrakten ble etter tur vasket med en 2 prosentig vekt/volum vandig løsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig løsning drops of acetyl chloride to the solution bee the resulting mixture stirred at room temperature for 3 hours. The solvent was then distilled off, and the residue was extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract was washed in turn with a 2 percent w/v aqueous solution of sodium bicarbonate and a saturated aqueous solution

av natriumklorid. Løsningen ble deretter tørket over vannfritt natriumsulfat, og løsningsmidlet ble avdestillert. Resten ble adsorbert på en kolonne som inneholdt 10 g silikagel ("Wakogel" C-100) som på forhånd var behandlet med benzen. Fraksjonene som ble eluert med en 4:96 volumblanding av etylacetat og benzen ble oppsamlet, og løsningsmidlet ble avdestillert, hvorved det ble oppnådd 70 mg benzylester av Monacolin K i form av en fargeløs olje. of sodium chloride. The solution was then dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was distilled off. The residue was adsorbed on a column containing 10 g of silica gel ("Wakogel" C-100) which had been previously treated with benzene. The fractions eluted with a 4:96 volume mixture of ethyl acetate and benzene were collected, and the solvent was distilled off, yielding 70 mg of the benzyl ester of Monacolin K as a colorless oil.

1. Molekylvekt: 512,6 (ved massespektrometri). 1. Molecular weight: 512.6 (by mass spectrometry).

2. Molekylformel: C3iH4406-2. Molecular formula: C3iH4406-

3. IR-spektrum (CHCl^).3. IR spectrum (CHCl^).

Som vist i fig. 13. As shown in fig. 13.

4. NMR-spektrum (CDC13). 4. NMR spectrum (CDCl 3 ).

Som vist i fig. 14. As shown in fig. 14.

Claims

Process for the preparation of compounds with

the formula

where R is an alkali metal atom, a lower alkyl group or a phenyl lower alkyl group, characterized in that the microorganism Monascus ruber SANK 18174 (Ferm.4957) or Monascus ruber SANK 17075 (CBS 83270) is grown under aerobic conditions in a suitable culture medium containing assimilable sources of carbon and nitrogen during formation of Monacolin K which is then transferred to salts and esters in the usual way.