DD153827A5 - PROCESS FOR PREPARING ANTIHYPERCHOLESTERINA MIXTURES - Google Patents
PROCESS FOR PREPARING ANTIHYPERCHOLESTERINA MIXTURES Download PDFInfo
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von antihypercholesterinaemischen Mitteln fuer die Anwendung als Arzneimittel zur Senkung des Cholesterinspiegels, beispielsweise bei Hyperlipaemie oder Arteriosklerose. Ziel der Erfindung ist die Breitstellung von Mitteln mit wesentlich verbesserter antihypercholesterinaemischer Wirkung. Erfindungsgemaess werden Verbindungen der Formel, worin: R ein Metallatom oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe bedeutet und n den reziproken Wert der Wertigkeit des Atoms oder der Gruppe R darstellt, hergestellt, indem Monacolin K oder ein reaktives Derivat daraus in ein Salz ueberfuehrt oder verestert wird oder indem ein Monacolin K-salze bildender Mikroorganismus des Genus Monascus in einem geeigneten Kulturmedium gezuechtet wird und das Monacolin K-salz von dem Kulturmedium getrennt wird.The invention relates to a process for the preparation of antihypercholesterinaemischen agents for use as medicaments for lowering the cholesterol level, for example in hyperlipemia or arteriosclerosis. The aim of the invention is the provision of agents with significantly improved antihypercholesterinaemischer effect. According to the present invention, compounds of the formula wherein: R represents a metal atom or a substituted or unsubstituted alkyl group and n represents the reciprocal value of the valence of the atom or group R are prepared by salifying or esterifying monacolin K or a reactive derivative thereof or by cultivating a Monacolin K-salt-forming microorganism of the genus Monascus in a suitable culture medium and separating the Monacolin K-salt from the culture medium.
Description
•Berlin, den 11. 2. 1981 AP C 07 C/ 222 916 57 954 11• Berlin, 11. 2. 1981 AP C 07 C / 222 916 57 954 11
Verfahren zur Herstellung von antihypercholesterinärnischen MittelnProcess for the preparation of antihypercholesterolärnischen means
Anwendungsgebiet der Erfindung Field of application of the invention
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von antihypercholesterinämischen Mitteln.The invention relates to a process for the preparation of antihypercholesterolemic agents.
Insbesondere betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung der Salze und Ester der freien Säure, die dem Lacton Monacolin K entspricht und deren Verwendung als antihyporcholesterinämische Mittel, beispielsweise zur Behandlung von Hyperlipämie und der Arteriosklerose.In particular, the invention relates to a process for preparing the salts and esters of the free acid corresponding to the lactone monacolin K and their use as antihyporcholesterinämische means, for example for the treatment of hyperlipemia and arteriosclerosis.
Charakteri^CHARACTERI ^
In der OE-PA P 30 06 216.9 ist die Verbindung Monacolin K und ihre Herstellung mit Mokroorganismen des Genus Monascus, insbesondere Monascus ruber Stamm 1005 (FERM 4822) beschrieben. Auch die wertvolle und unerwartete Aktivität der Verbindung Monacolin K als antihypercholesterinämisches Mittel ist offenbarte In der DE-PA P 30 06 215.8 ist die Herstellung von Monacolin !< durch Züchtung verschiedener anderer Mikroorganismen des Genus Monascus beschrieben.In the OE-PA P 30 06 216.9 the compound Monacolin K and its preparation with mocroorganisms of the genus Monascus, in particular Monascus ruber strain 1005 (FERM 4822) is described. The valuable and unexpected activity of the compound Monacolin K as antihypercholesterolemic agent is disclosed in DE-PA P 30 06 215.8, the production of Monacolin! Described <by breeding various other microorganisms of the genus Monascus.
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung von neuen Mitteln mit verbesserter-antihyporcholesterinämischen Aktivität und geringer Toxizität zur Verringerung de3 Cholesterin spiegeis der Patienten. .The object of the invention is to provide novel agents having improved antihyporcholesterolemic activity and low toxicity for reducing the cholesterol level of the patients. ,
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Darlegung ,des VJeSSnS1 .der.. ErfindungExplanation of the VJeSSnS 1 .der .. invention
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde,neue Verbindungen mit verbesserter antihypercholesterinämischer Wirkung aufzufinden und Verfahren zu ihrer Herstellung zur Verfügung zu stellen,*The invention has for its object to find new compounds with improved antihypercholesterolämischer effect and to provide methods for their preparation, *
Es wurde nun gefunden, daß die Salze und Ester der freien Säure, deren· Lacton Monacolin darstellt, eine ähnliche sntihypercholesterinämische Wirkung wie Monacolin _!< in vergleichbarem oder größerem Maße besitzen. Der Einfachheit halber werden diese Derivate im folgenden als Monacolin K-salze bzw«, -ester bezeichnet« Hierbei versteht es sich jedoch, daß es sich um Salze und Ester der Säure handelt,, deren Lacton-Monacolin K ist*It has now been found that the salts and esters of the free acid whose lactone is monacolin, have a similar sntihypercholesterinämische effect as Monacolin _! <To a comparable or greater extent. For the sake of simplicity, these derivatives are referred to hereinafter as Monacolin K salts or "esters". However, it is understood that these are salts and esters of the acid whose lactone monacolin K is *
Die erfind-ungsgemäßen Monacolin K-salze und «ester haben die FormelThe Monacolin K salts according to the invention and esters have the formula
HOHO
X)O(R)1 X) O (R) 1
in der R eine substituierte ader unsubstituierte Alkylgruppe oder ein Meta.llatorn bedeutet und η der Reziprokwert der Wertigkeit der Gruppe bzwe des Atoms R ist«in which R is a substituted or unsubstituted alkyl group or a meta-member, and η is the reciprocal of the valency of the group or e of the atom R «
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Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung der Monacolin K-salze und -ester, bei dem man Monacolin K oder dessen reaktive Derivate verestert bzw. in ein Salz überführt.The invention further provides a process for the preparation of the monacolin K salts and esters, in which monacolin K or its reactive derivatives are esterified or converted into a salt.
Gegenstand der Erfindung iot ferner ein Verfahren zur Her~ Stellung von Monacolin K-salzenf bei dem man einen Mona» colin K-salze bildenden Mikroorganismus des Genus Monascus züchtet und das Monacolin K-salz aus dem Kulturmedium ge~ winnt; 'The invention further iot a method for Her ~ position of monacolin K-salt f which comprises culturing a Mona "Colin K-salts-forming microorganism of the genus Monascus and monacolin K salt from the culture medium ge ~ winnt; '
Die erfindungsgemäßen Monacolin K-salze sind Metallsalze und vorzugsweise Alkalimetallsalze, z. B, Natrium« und Kaliumsalze, Erdalkalimetallsalze, z„ B, Calcium-oder Magnesiunisalze, Salze von Metallen der Gruppe IHa des Periodensystems, z« B. das Aluminiumsalz, und Salze von Übergangsmetallen der Gruppen Ib, Hb und VIII des Periodensystems, z„ B. Eisen-, Nickel-, Kobalt-, Kupfer·» und Zinksalze. Hiervon sind Alkalimetallsalze, Erdalkalimetallsalze und Aluminiumsalze bevorzugt und das Natrium«, Calcium- und Aluminiumsalz besonders bevorzugt.The Monacolin K salts according to the invention are metal salts and preferably alkali metal salts, for. B, sodium and potassium salts, alkaline earth metal salts, z "B, calcium or magnesium salts, salts of metals of group IHa of the Periodic Table, for example the aluminum salt, and salts of transition metals of groups Ib, Hb and VIII of the Periodic Table, z. For example, iron, nickel, cobalt, copper and zinc salts. Of these, alkali metal salts, alkaline earth metal salts and aluminum salts are preferred and the sodium, calcium and aluminum salt is particularly preferred.
Die Monacolin K-salze können durch Ansa-uern leicht in Monacolin K odsr die Säure, von der sich Monacolin K ab~ leitet, überführt werden* Das erhaltene Monacolin K bzw. die Säure können mit einer Alkalibase, z. b. einem Alkalimetallhydroxid oder -carbonat, wieder in ein Salz umgewandelt werden. Diese Umwandlung kann quantitativ und mehrmals durchgeführt werden« Es hat sich gezeigt, daß die Umwandlung zwischen Monacolin K bzw. dessen Stammsäure und dem Metallsalz in enger Beziehung zum pH des Mediums steht, in dem sie enthalten sind» Der kritische pH-Wert beträgt etwa 5,0. Unter vorausgesetzter Verfüg«The Monacolin K salts can easily be converted into Monacolin K by acidification, or the acid from which Monacolin K is derived. The Monacolin K or acid obtained can be reacted with an alkali metal base, for example an alkali metal hydroxide or carbonate, be converted back into a salt. This transformation can be carried out quantitatively and several times. It has been found that the conversion between monacolin K or its parent acid and the metal salt is closely related to the pH of the medium in which they are contained. The critical pH is about 5 , 0th Under condition of availability «
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barkeit von Metallionen liegt Monacolin K bei einem pH über 5,0 stets in Form eines Salzes vor. Andererseits liegen bei einem pH unter 5*0 Monacolin K, dessen Stammsäure oder ein Gemisch aus beiden in variierenden Verhältnissen vor. .In the presence of metal ions, Monacolin K is always in the form of a salt at a pH above 5.0. On the other hand, at a pH below 5%, monacolin K, its parent acid or a mixture of both are present in varying proportions. ,
Die erfindungsgemäßen Monacolin K~ester sind Verbindungen der vorstehenden Formel, in der R eine substituierte oder unoubstituierte Alkylgruppe ist. Die unsubstituierten Alkylgruppen R können geradkettig oder verzweigt sein und enthalten vorzugsweise bis zu 8 Kohlenstoffatome. Spezielle Beispiele für Alkylgruppen R sind Methyl, Äthyl, Propyl, Isopropyl, Butyl und Hexyl«,The monacolinic esters of the invention are compounds of the above formula in which R is a substituted or un-substituted alkyl group. The unsubstituted alkyl groups R may be straight-chain or branched and preferably contain up to 8 carbon atoms. Specific examples of alkyl groups R are methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl and hexyl.
Wenn R eine substituierte Alkylgruppe ist, kann der Sub·« stituent in üblicher Weise aus einer Vielzahl von Gruppen und Atomen· ausgewählt werden, einschließlich Arylgruppen, Acylgruppen, insbesondere Arylcarbonylgruppen, Alkoxygruppen, Halogenatomen und Hydroxylgruppen, Besonders bevorzugte Substituenten sind Aryl- und Arylcarbonylgruppen» d6 h» R stellt eine Aralkyl- oder Arylcarbonylalkylgruppe dar.When R is a substituted alkyl group, the Sub · can "stituent in the usual manner · selected from a plurality of groups and atoms, including aryl groups, acyl groups, in particular arylcarbonyl groups, alkoxy groups, halogen atoms and hydroxyl groups, Particularly preferred substituents are aryl and arylcarbonyl" d 6 h "R represents an aralkyl or arylcarbonylalkyl group.
Bevorzugte Aralkylgruppen R sind substituierte oder . unsubstituierte Benzylgruppen« Die substituierten Benzylgruppen tragen vorzugsweise einen oder mehrere Substituenten aus der Reihe der Alkylgruppen, Alkoxy» gruppen und Halogenatome« Spezielle Beispiele sind Benzyl, 2-Methylbenzyl, 3-Methylbenzylt 4-Methylbenzyl, 2»Äthylbenzylt 3-^thylbenzyl, 4-Äthylbenzyl, 2-Methoxybenzyl, 3-Metho^ybenzyl, 4-Methoxybenzyl, 2-Äthoxy- benzyl, 3-Atho-xybenzyl,. 4-Äthoxybenzyl? 2-Chlorbenzyl,Preferred aralkyl groups R are substituted or. unsubstituted benzyl "The substituted benzyl groups preferably bear one or more substituents from the group of alkyl groups, alkoxy" groups, and halogen atoms "Specific examples benzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl t 4-methylbenzyl, 2» Äthylbenzyl t 3- ^ thylbenzyl, 4-ethylbenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl, 2-ethoxybenzyl, 3-acetoxybenzyl ,. 4-ethoxybenzyl ? 2-chlorobenzyl,
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3-Chlorbenzyl, 4-Chlorbenzyl, 2-Brombenzyl, 3-Brombenzyl und 4-Brombenzyl.3-chlorobenzyl, 4-chlorobenzyl, 2-bromobenzyl, 3-bromobenzyl and 4-bromobenzyl.
Die Arylcarbonylalkylgruppen R sind vorzugsweise substituiert© oder unsubstituierte Phenacylgruppen, Die substituierten Phenacylgruppen tragen vorzugsweise einen oder mehrere Substituenten aus der Reihe der Aikylgruppen, Alkoxygruppen und Halogenatome« Spezielle Beispiele sind Phenacyl, 2-Methylphenacyl, 3-Methylphenacyl } 4~ Methylphenacyl, 2-Äthylphenacyl, 3-Äthylphenacyl, 2-Methoxyphenacyl, 3-Methoxyphenacyl, 4-Methoxyphenacyl,- 2«-Ath~ oxyphenacyl, 3-Äthoxyphenacyl, 4-Äthoxyphenacyl, 2»Chlor~ phenacyl, 3-Chlorphenacyl, 4-Chlorphenacyl, 2-Bromphenacyl, 3»Bromphenocyl und 4-Bromphenacyl«The Arylcarbonylalkylgruppen R are preferably substituted © or unsubstituted phenacyl groups, the substituted phenacyl groups preferably bear one or more substituents selected from the Aikylgruppen, alkoxy groups and halogen atoms, "Specific examples include phenacyl, 2-methylphenacyl, 3-methylphenacyl} 4 ~ methylphenacyl, 2-Äthylphenacyl , 3-ethylphenacyl, 2-methoxyphenacyl, 3-methoxyphenacyl, 4-methoxyphenacyl, 2'-ethoxyphenacyl, 3-ethoxyphenacyl, 4-ethoxyphenacyl, 2-chlorophenacyl, 3-chlorophenacyl, 4-chlorophenacyl, 2-bromophenacyl , 3 "bromophenocyl and 4-bromophenacyl"
Unter den Estern sind Methyl-, Äthyl-, Butyl- und Benzylester besonders bevorzugt«Among the esters, methyl, ethyl, butyl and benzyl esters are particularly preferred «
Die erfindungsgemäßen Monacolin K-salze und Ester können dadurch hergestellt werden, daß man Monacolin K oder ein reaktives Monacolin K-derivat verestert oder in ein Salz überführt. Beispiele für geeignete reaktive Derivate sind die Stammsäure, von der sich Monacolin K ableitet, und, im Falle der Herstellung von Estern, Monacolin i<-Salze> z« B. die vorstehenden Salztypen, insbesondere das Natrium-, Kalium-, Calcium-, Magnesium-, Aluminium-, Eisen-, Zink-. Kupfer-, Nickel- und Kobaltsalz.The Monacolin K salts and esters according to the invention can be prepared by esterifying or salting Monacolin K or a reactive Monacolin K derivative. Examples of suitable reactive derivatives are the parent acid from which monacolin K is derived and, in the case of the preparation of esters, monacolinium salts, the above salt types, in particular the sodium, potassium, calcium, Magnesium, aluminum, iron, zinc. Copper, nickel and cobalt salt.
Monacolin K-salze können durch einfaches Umsetzen von Monacolin K oder seiner Stammsäure mit einem Oxid,.Hydroxid, Carbonat oder Bicarbonate vorzugsweise einem Hydroxid oder CDrbonat, des'gewünschten Metalls hergestellt werden,, Hierbei ist darauf zu achtent daß die Reaktion bei einemMonacolin K-salts can be prepared a hydroxide or CDrbonat, des'gewünschten metal preferably by simply reacting monacolin K or its parent acid with an oxide, .Hydroxid, carbonate or bicarbonates ,, Here it must be ensured that the reaction t at a
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pH von mehr als 5,0, vorzugsweise mehr als 7,0, durchgeführt wird, um eine vollständige Umwandlung von Monacolin K bzw. der Säure in das gewünschte Salz zu erzielen. Das in dieser Reaktion eingesetzte Monacolin K wird vorzugsweise auf die in den vorstehend genannten Patentanmeldungen beschriebene Weise durch Züchtung eines Fungus aus dem Genus Monascus und Isolieren von Monacolin K aus dem Kulturmedium hergestellt. Das Monacolin K kann vor der .Salzbildung aus dem Kulturmedium isoliert und gereinigt werden,· vorzugsweise erfolgt jedoch die Salzbildung im Laufe der Isolierung und Reinigung von " Monacolin K aus dem Kulturmedium, so daß das Monacolin K in Form des gewünschten Metallsalzes isoliert wirde Unabhängig von der Verfahrensweise kann das Metallsalz aus dem Reaktionomedium oder dem Kulturmedium nach an sich bekannten Methoden isoliert werden, z* ß« den nachstehend im Zusammenhang mit der Isolierung von . Monacolin K-M.etallsalzen aus Kulturen von Monacolin K-.salz bildenden Fungi beschriebenen Methoden*pH greater than 5.0, preferably greater than 7.0, to achieve complete conversion of monacolin K or the acid to the desired salt. The monacolin K used in this reaction is preferably prepared by culturing a fungus from the genus Monascus and isolating monacolin K from the culture medium in the manner described in the aforementioned patent applications. The Monacolin K can be isolated before .Salzbildung from the culture medium and purified, · but preferably carried the salt formation during the isolation and purification of "monacolin K from the culture medium so that the Monacolin K is isolated in the form of the desired metal salt e Independent from the procedure the metal salt can be isolated from the reaction medium or the culture medium by methods known per se, eg the methods described below in connection with the isolation of monacolin KM.etallsalts from cultures of monacolin K-salt forming fungi.
Monacolin K-Ester werden durch einfaches Verestern von Monacolin K oder dessen reaktiven Derivaten erhaltene Die Reaktion kann durch Umsetzen einee Alkohols der Formel ROH oder eines entsprechenden reaktiven Derivats (wobei R ein substituierter oder unsubstituisrter Alkylrest ist) mit Monacolin K oder dessen Stammsäure, vorzugsweise in Gegenwart eines Dehydratisierungsmittels, ζ. Β,, eines Säurechlorids, wie Acetylchlorid, durchgeführt werden, Alternativ erhält man Monacolin 1<~ ester durch Umsetzen einos Monacolin K-fifllzes mit einem Halogenid der Fcsrmel RX (wobei R ein substituierter oder unsubstituierter Alkylrest und Xein Hslogenatcmf vorzugsweise ein Dodatom bedeuten)«Monacolin K esters are obtained by simple esterification of Monacolin K or its reactive derivatives. The reaction can be carried out by reacting an alcohol of the formula ROH or a corresponding reactive derivative (wherein R is a substituted or unsubstituted alkyl radical) with monacolin K or its parent acid, preferably in Presence of a dehydrating agent, ζ. Alternatively, monacolin-1-ester is obtained by reacting a Monacolin K-fibril with a halide of the Fcsrmel RX (where R is a substituted or unsubstituted alkyl radical and X is an Hslogenate cm f, preferably a dodotrope). "
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Es ist auch möglich, Monacolin K-salze direkt durch Züchtung eines Monacolin K-salz-bildenden Mikroorganismus des Genus Monascus herzustellen. Hierfür geeignete Mikroorganismen sind z· B. Monascus anka SANK 10171 (IFO 6540); Monascus purpurous SANK 10271 (IFO 45l3){ Monascus ruber SANK 10671 (Ferm 4958), Monascus vitreus SANK 10960 (NIHS 609, e~609; Ferm 4960) ; Monascus paxii SANK 11172 (IFO 8201), Monascus ruber SANK 11272 (IFO 9203); Monascus ruber SANK 13778 (Ferm 4959); Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956), Monascus ruber SANK 17075 (CBS 832,70.); Monascus ruber SANK 17175. (CBS 503*70), Monascus ruber Sank 17275 (ATCC 18199) und Monascus ruber SANK 18174 (Ferm 4957). All diese Mikroorganismen sind bei den folgenden anerkannten Hinterlegungsstellen zugänglich:It is also possible to prepare Monacolin K salts directly by cultivating a monacolin K salt-forming microorganism of the genus Monascus. Microorganisms suitable for this purpose are, for example, Monascus anka SANK 10171 (IFO 6540); Monascus purpurous SANK 10271 (IFO 4513) { Monascus ruber SANK 10671 (Ferm 4958), Monascus vitreus SANK 10960 (NIHS 609, ~ 609, Ferm 4960); Monascus paxii SANK 11172 (IFO 8201), Monascus ruber SANK 11272 (IFO 9203); Monascus ruber SANK 13778 (Ferm 4959); Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956), Monascus ruber SANK 17075 (CBS 832.70.); Monascus ruber SANK 17175. (CBS 503 * 70), Monascus ruber Sank 17275 (ATCC 18199) and Monascus ruber SANK 18174 (Ferm 4957). All of these microorganisms are available at the following recognized depositaries:
IFO = Institut© for Fermentation, Osaka, OapanIFO = Institute © for Fermentation, Osaka, Oapan
Ferm = Fermentation Research Institute, Agency ofFerm = Fermentation Research Institute, Agency of
Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Oapan,Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Oapan,
NIMS = National Institute of Hygenic Sciences, Oapan,NIMS = National Institute of Hygenic Sciences, Oapan,
CBS . a Centraal Bureau voor Schimmelcultures, Niederlande;CBS. a Centraal Bureau voor Schimmelcultures, Netherlands;
ATCC - American Type Culture Collection, Maryland, V4St,A.ATCC - American Type Culture Collection, Maryland, V 4 St, A.
Bevorzugte Stämme des. Genus Monascusf die zur Herstellung von Monacolin K-salze.n .eingesetzt werden können, sind Monascus rubsr SANK 10671, Monaacus ruber·SANK 11272, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 und Monascus ruber SANK 18174«Preferred strains of. Genus Monascus f can be .eingesetzt for the production of monacolin K-salze.n are Monascus rubsr SANK 10671, SANK 11272 · Monaacus ruber, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 and SANK 18174 Monascus ruber "
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Monascus ruber SANK 10671, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 und Monascus ruber SANK 18174 sind Fungi, die erst kürzlich aus dem Erdboden isoliert wurden. Ihre mikrobiologischen Eigenschaften sind im folgenden angegeben,Monascus ruber SANK 10671, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 and Monascus ruber SANK 18174 are fungi that were recently isolated from the ground. Their microbiological properties are given below
Monascus ruber SANK 17177 (FERM 4956)Monascus ruber SANK 17177 (FERM 4956)
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Dieser Stamm·wurde aus einer Bodenprobe isoliert, die bei Tukimino, Yamato-city, Präfektur Kanagawa, 3apan,aufgefunden wurde, und am 27. April 1979 unter der Hinterlegunp-Nr, 4956 beim Fermentation Research Institute hinterlegt,This strain was isolated from a soil sample found at Tukimino, Yamato-city, Kanagawa Prefecture, Japan, and deposited with the Fermentation Research Institute on April 27, 1979, under the Assignment No. 4956,
Der Stamm zeigt gutes Wachstum auf einem Kartoffel-Glucose-Agarmßdium bei 25 C und bildet einen löslichen Farbstoff. der dem Medium einen gelblich-braunen bis rötlich-braunen Farbton verleiht* Er bildet zahlreiche Kleistothezien auf der Basaischicht der Hyphen«The strain shows good growth on a potato-glucose agar medium at 25 C and forms a soluble dye. of the M e dium gives a yellowish-brown to reddish-brown color * It forms numerous cleistothecia on the Basaischicht the hyphae "
Auf Hafermehl-Agarmedium bildet er einen blaßbraunen Farbstoff und zeigt gutes Wachstum, Die Bildung von Kleistothezien ist gut und die gebildeten Kleistothezien sind kugelig mit einem Durchmesser von 30 bis 60 um und sind auf kurzen Stielen ausgebildet« Diese Stiele sind nahezu farblos und verzweigt und haben eine Größe von 25 bis 60 χ 3,5 bis 5,0 um« Die Asci sin-d verschwindend klein undsomit schwer zu beobachten. Die Ascosporen sind farblos und ellipsoid mit den Dimensionen 4,5 bis 6,5 x 4,0 bis 5,0 um und zeigen glatte Oberflächen* Die Konidien sind basipetal verbunden und haben eine Größe von 7,0- bis 10(0 χ 6,0 bis 10/0 jum. Ihre Gewebe sind unterbrochene Obwohl der Stamm bei 37 °C wächst/ ist das beste Wachstum bei 23 bis 30 C zu beobachten»On oatmeal agar medium it forms a pale brown dye and shows good growth. The formation of cleistothecia is good and the cleistothecia formed are spherical with a diameter of 30-60 um and are formed on short stems. These stems are nearly colorless and branched a size of 25 to 60 χ 3.5 to 5.0 um "The asci sin-d vanishingly small and thus difficult to observe. The ascospores are colorless and ellipsoid having dimensions of 4.5 to 6.5 x 4.0 to 5.0 and to show smooth surfaces * The conidia are basipetal connected and have a size of up to 10 7,0- (0 χ 6 , 0 to 10/0 yum. Their tissues are disrupted. Although the strain grows at 37 ° C, the best growth is observed at 23 to 30 ° C »
, AP C 07 C/ 222 916, AP C 07 C / 222 916
* 57 954 11* 57 954 11
Monascus ruber SANK 18174 (FERN 4957)Monascus ruber SANK 18174 (FERN 4957)
Dieser Stamm wurde aus einer Bodenprobe aus Shakotan-cho, ' Shakotan-gun, Shiribeshi Shicho, Präfektur Hokkaido, Dapan, isoliert und am 27. April 1979 unter der Hinterlegungs-Nr,. 4957 beim Fermentation Research Institute hinterlegteThis strain was isolated from a soil sample from Shakotan-cho, 'Shakotan-gun, Shiribeshi Shicho, Hokkaido Prefecture, D a pan, and on April 27, 1979, under the accession number. 4957 deposited with the Fermentation Research Institute
Das Wachstum auf Kartoffel-Glucose-Agar- und Hafermehl-Agarmedium ist ähnlich dem des Stammes SANK 15177, mit der Ausnahme, daß der gebildete .Farbstoff blaßrosa ist. Die Kleistothezien haben einen Durchmesser von 20 bis 70,um und die Abmessungen der Stiele betragen 20 bis 60 χ 3,0 bis 5,0yUm. Asci werden nicht beobachtet» Die Ascosporen sind farblos und ellipsoid mit einer Größe von 5,0 bis 7,0 χ 4,0-bis 5,5 ,um. Ihre Oberflächen sind glatt. Die Konidien sind basipetal miteinander verknüpft und farblos. Die meisten von ihnen sind birnenförmig und haben eine Größe von 6,0 bis 9,5 χ 6,0 bis 10,0 ,um.The growth on potato-glucose agar and oatmeal agar medium is similar to that of the strain SANK 15177, except that the formed dye is pale pink. The cisterns have a diameter of 20 to 70 um, and the dimensions of the stems are 20 to 60 χ 3.0 to 5.0yμm. Asci are not observed »The ascospores are colorless and ellipsoidal with a size of 5.0 to 7.0 χ 4.0 to 5.5, um. Their surfaces are smooth. The conidia are linked together basipetally and colorless. Most of them are pear-shaped and have a size of 6.0 to 9.5 χ 6.0 to 10.0 um.
Aufgrund der genannten Eigenschaften wurden diese Mikroorganismen als Stämme von Monascus ruber van Tieghem indentifiziert*Due to these properties, these microorganisms were identified as strains of Monascus ruber van Tieghem *
Ober die mikrobiologischen Eigenschaften von Monascus ruber wird in den nachstehenden Veröffentlichungen berich~The microbiological properties of Monascus ruber will be discussed in the following publications
Takada, Transactions of the Micological Society of Japan, Bd. 9, Se 125 - 130 (1969) (Materials for the Fungus Flora of Japan (7)) und van Tieghem, Buil.Soc. Botan< France, Bd, 31, S. 227 (1884). über die Ascosporenbildung des Stammes Berichten·Coie et al. in Canadian, Journal of Botany, -Bd*. 45f S. 987 (1968),, "Conidium ontogeny in hyphomyceteso The imporfect stste of Mo'nascue ruber and its meristem arthrospores"„Takada, Transactions of the Micological Society of Japan, Vol 9, S s. 125 - 130 (1969) (Materials for the Fungus Flora of Japan (7)) and van Tieghem, Buil.Soc. Botan <France, Bd, 31, p. 227 (1884). on the Ascosporene Formation of the Strain Reports · Coie et al. in Canadian, Journal of Botany, -Bd *. 45 f . P. 987 (1968), "Conidium ontogeny in hyphomyceteso The imporfect stste of Mo'nascue ruber and its meristem arthrospores""
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Neben den vorstehend genannten Pilzstämmen können beliebige Fungi des Genus Monascus, einschließlich Varietäten und Mutanten, die zur Bildung von Monacolin K-salzen befähigt sind, im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt werden»In addition to the above-mentioned fungal strains, any fungi of the genus Monascus, including varieties and mutants capable of forming monacolin K salts, can be used in the method according to the invention.
Die Monacolin K~salze können durch Züchtung des gewählten Mikroorganismus in einer Kulturbrühe unter aeroben Bedingungen hergestellt werden, wobei die für die Züchtung von Fungi und anderen Mikroorganismen üblichen Techniken angewandt werden* So kann z. B. der gewählte Stamm von Monascus zunächst auf eijiem geeigneten Medium .gezüchtet werden, worauf man den gebildeten Mikroorganismus gewinnt» in ein anderes Kulturmedium einimpft, und in diesem züchtet, um das gewünschte Monacolin K-salz zu erhalten» Hierbei können das für die Vermehrung des Mikroorganismus verwendete Kulturmedium und das für die Bildung von Monacolin K-salzen verwendete Medium gleich oder ver-' schieden sein. Oedes für die Züchtung von Fungi bekannt'e Kulturmedium kann verwendet werden, vorausgesetzt, daß. es die erforderlichen Nährstoffe enthält, insbesondere eine assimilierbare Kohlenstoffquelle und eine assimilierbare Stickstoffquelle«, Beispiele für geeignete assimilier» bare Kohfenstoffquollen sind Glucose, Maltose, Dextrin, Stärke, Lactose, Sucrose.und Glycerin* Hiervon sind Glucose und Glycerin für die Bildung von Monacolin K-salzen 'besonders bevorzugt» Beispiele für geeignete assimilierbare Stickstoffquellen sind Pepton, Fleischextrakt,-Hefe, Hefeextrakt, Sojamehl, Erdnußmehl, Maisquell~ flüssigkeit,.Reiskleie und anorganische Stickstoffquellen. Hervor ist Pepton besonders bevorzugt. Bei der Herstellung der·Monacolin K-salze kann dem Kulturmedium gegebenenfalls ein anorganisches Salz und/oder ein Metallsalz zugesetztThe Monacolin K ~ salts can be prepared by cultivating the selected microorganism in a culture broth under aerobic conditions, using the usual for the cultivation of fungi and other microorganisms techniques. For example, the selected strain of Monascus may first be cultivated on a suitable medium, whereafter the microorganism obtained is inoculated into another culture medium and grown there to obtain the desired Monacolin K salt the medium used for the microorganism and the medium used for the formation of monacolin K salts may be the same or different. Oedes known for the cultivation of fungi culture medium can be used, provided that. It contains the requisite nutrients, in particular an assimilable carbon source and an assimilable nitrogen source. Examples of suitable assimilable carbon swellings are glucose, maltose, dextrin, starch, lactose, sucrose and glycerol. Of these, glucose and glycerol are responsible for the formation of monacolin K Examples of suitable assimilable nitrogen sources are peptone, meat extract, yeast, yeast extract, soybean meal, peanut meal, corn steep liquor, rice bran and inorganic nitrogen sources. Especially peptone is especially preferred. In the preparation of the Monacolin K salts, an inorganic salt and / or a metal salt may optionally be added to the culture medium
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werden. Außerdem können gegebenenfalls geringe Mengen an Schwermetallen zugegeben werden. Bei der Herstellung von Monacolin K-salzen durch Fermentation eines Fungus des Genus Monascus ist es wichtig, daß in dem Kulturmedium oder im Körper des Fungus Metallionen vorhanden sind, die dem herzustellenden Metallsalz entsprechen.become. In addition, small amounts of heavy metals may optionally be added. In the production of Monacolin K salts by fermentation of a genus Monascus genus, it is important that metal ions corresponding to the metal salt to be produced are present in the culture medium or in the body of the fungus.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform wird der Mikroorganismus zunächst auf einem Kartoffel-Dextrose-Agarmedium (z. B. einem Produkt der Difco Company) Bubkultiviert und dann in ein anderes Kulturmedium, eingeimpft und dort gezüchtet, um das gewünschte Monacolin K-salz herzustellen«In a particularly preferred embodiment, the microorganism is first cultured on a potato dextrose agar medium (eg, a product of Difco Company) and then inoculated into another culture medium and grown there to produce the desired Monacolin K salt.
Der Mikroorganismus wird vorzugsweise unter aeroben Bedingungen unter Anwendung üblicher Methoden gezüchtet, z, B. in Festkultur, Schüttelkultur oder belüfteter und gerührter Kultur, Der Mikroorganismus wächst innerhalb eines breiten Temperaturbereiches, z. B. 7 bis 35 0C; insbesondere zur Bildung von Monacolin K oder Monacolin K-salzen ist jedoch eine Züchtungstemperatur von 20 bis 30 0C besonders bevorzugt.The microorganism is preferably grown under aerobic conditions using conventional techniques, e.g., in solid culture, shake culture or aerated and stirred culture. The microorganism grows within a wide temperature range, e.g. B. 7 to 35 0 C; However, in particular for the formation of Monacolin K or Monacolin K salts, a cultivation temperature of 20 to 30 0 C is particularly preferred.
Während der Züchtung des Mikroorganismus kann die Bildung des Monacolin K-oalzes überwacht werden, indem man Proben aus dem Kulturmedium entnimmt und die physiologische Aktivität des Monacolin K-salzes in dom Kulturmedium mit Hilfe der nachstehend beschriebenen Tests mißt«, Die Züchtung kann dann fortgesetzt werdeb, bis in dem Kulturmedium eine Wesentliche Anreicherung von Monacolin K-salz erreicht ist. "Das Mönacolin K-salz kann dann .aus dem Kulturmedium und den Geweben des Mikroorganismus mit Hilfe jedor geeigneten Kombination von Isolierme^hodenDuring the growth of the microorganism, the formation of the monacolin K-oalzes can be monitored by taking samples from the culture medium and measuring the physiological activity of Monacolin K salt in the culture medium by means of the tests described below. The cultivation can then be continued until a substantial enrichment of Monacolin K salt is achieved in the culture medium. "The monacolin K salt can then be extracted from the culture medium and the tissues of the microorganism using any suitable combination of insulating mats
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isoliert und gewonnen werden, die im Hinblick auf seine physikalischen und chemischen Eigenschaften ausgewählt werden.So können z. B* beliebige oder alle der nachstehenden Isoliermethoden angewandt werden: Extraktion der Flüssigkeit aus der Kulturbrühe mit einem hydrophilen Lösungsmittel, wie Diäthyläther, Äthylacetat oder Chloroform; Extraktion des Organismus mit einem hydrophilen Lösungsmittel, wie Aceton oder einem Alkohol; Konzentrieren, Ze Β» duRch Abdampfen eines Teiles oder des gesamten Lösungsmittels unter vermindertem Druck; Lösen in einem stärker polaren Lösungsmittel, wie Aceton oder einem Alkohol; Entfernen von Verunreinigungen mit einem weniger polaren Lösungsmittel, wie Petroläther oder Hexan; Gelfiltration durch eine z«, B. mit Sephadex gefüllte Säule; Absorptionschromatographie an Aktivkohle oder Silicagel, Hochgeschwindigkeits-Flüssigkeitschromatographie; Umwandlung in Monacolin K oder dessen Stammsäure; direkte Reinigung in Form eines Metallsalzes; sowie ähnliche Methoden«, Durch Anwendung einer geeigneten Kombination dieser Verfahren kann das gewünschte Monacolin K-salz aus der Kulturbrühe als Reinsubstanz isoliert werden.isolated and recovered, which are selected in view of its physical and chemical properties. B * any or all of the following isolation methods are used: extraction of the liquid from the culture broth with a hydrophilic solvent such as diethyl ether, ethyl acetate or chloroform; Extraction of the organism with a hydrophilic solvent, such as acetone or an alcohol; Concentrating, Ze Β »steam evaporation of part or all of the solvent under reduced pressure; Dissolving in a more polar solvent, such as acetone or an alcohol; Removing impurities with a less polar solvent such as petroleum ether or hexane; Gel filtration through a column filled with Sephadex; Absorption chromatography on activated carbon or silica gel, high-speed liquid chromatography; Conversion to monacolin K or its parent acid; direct purification in the form of a metal salt; and similar methods. By employing a suitable combination of these methods, the desired Monacolin K salt can be isolated from the culture broth as a pure substance.
Wie in den vorstehend genannten Patentanmeldungen beschrieben, kann auch Monacolin K unter Verwendung der vorstehend genannten Mikroorganismen und Methoden hergestellt werden«As described in the above-referenced patent applications, Monacolin K can also be prepared using the aforementioned microorganisms and methods. "
Die physiologische Aktivität der Monacolin K~salze und -ester kann mit Hilfe der nachstehenden Tests nachgewiesen und quantitativ bestimmt werden«, Diese Teets können auch in modifizierter Form zur 'überwachung der Bildung von Monacolin K-salzen im Verlaufe des erfin» dungsgemäßen Fermentationsverfahrens angewandt werden,The physiological activity of the monacolinic salts and esters can be detected and quantified by the following tests. These teets can also be used in modified form to monitor the formation of monacolin K salts in the course of the fermentation process of the invention .
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- 13 1, Inhibierunq der Cholesterinbiosynthese- 13 1, inhibition of cholesterol biosynthesis
Wie Monacolin K selbst inhibieren auch Monacolin K-salze und -ester spezifisch die Aktivität der 3-Hydroxy-3™ methyl-glutaryl-CoA-Reduktase, die das geschwindigkeitsbestimmende Enzym bei der Biosynthese von Cholesterin ist. In der folgenden Tabelle I sind die Konzentrationen (ng/ml) der erfindungsgemäßen Verbindungen angegeben» die öle Aktivität von 3~Hydroxy«3-methylglutaryl (HMG)-CoA-Reduktase zu 50 % inhibieren (gemessen nach der in Analytical Biochemistry, Bd. 31, S. 383 (1969). beschriebenen Methode). Ferner sind die Konzentrationen (ng/ml) der erfindungsgemäßen Verbindungen angegeben, die die Cholesterinbiosynthese zu 50 % inhibieren (gemessen nach der in Dournal of Biological Chemistryt Bd. 247, S. 4914 (1972) beschriebenen Methode). Zum Vergleich sind die entsprechenden Ergebnisse für die bekannte Verbindung ML~236B genannt, die ein ähnliches Aktivitätsmuster zeigt und durch Züchten von Mikroorganismen des Genus Penicillium zugänglich ist; vgl. GB-PS 1 453 425. Ferner ist die Konzentration-an Monacolin K angegeben, die die Cholesterinbiosynthese zu 50 % inhibiert« Die Ergebnisse zeigen, daß die für eine 50prozentige Inhibierung der Cholesterinbiosynthese erforderliche Konzentration •an ML-2363 10,0 ng/ml beträgt, während die entsprechende Konzentration für die Monacolin K»ester nur etwa 1 ng/ml (d. h» etwa 10 mal besser) und für das Natriumsalz von Monacolin K etwa 0,14 ng/ml (d.h. etwa 70 mal besser) beträgt. Die Aktivitäten der Salze und Ester von Monacolin K sind mit der von Monacolin K vergleichbar oder eogar besser.Like Monacolin K itself, Monacolin K salts and esters specifically inhibit the activity of 3-hydroxy-3 ™ methyl-glutaryl-CoA reductase, which is the rate-limiting enzyme in the biosynthesis of cholesterol. In the following Table I, the concentrations (ng / ml) of the compounds according to the invention are indicated to inhibit the activity of 50 % of 3-hydroxy-3-methylglutaryl (HMG) CoA reductase (measured by the method described in Analytical Biochemistry, Vol. 31, p 383 (1969). Also indicated are the concentrations (ng / ml) of the compounds according to the invention which inhibit cholesterol biosynthesis by 50 % (measured according to the method described in Dournal of Biological Chemistry t Bd. 247, p. 4914 (1972)). For comparison, the corresponding results for the known compound ML ~ 236B are mentioned, which shows a similar activity pattern and is accessible by cultivating microorganisms of the genus Penicillium; see. GB-PS 1,453,425. Also indicated is the concentration of monacolin K which inhibits cholesterol biosynthesis by 50 %. The results show that the concentration required for 50% inhibition of cholesterol biosynthesis is 10.0 ng / ml at ML-2363 while the corresponding concentration for the monacolinic esters is only about 1 ng / ml (i.e., about 10 times better) and for the sodium salt of monacolin K about 0.14 ng / ml (ie about 70 times better) , The activities of the salts and esters of Monacolin K are comparable or even better than those of Monacolin K.
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Die verwendeten Versuchstiere sind Ratten von Stamm Wistar Imamichi mit einem Körpergewicht von etwa 300 g. Die Tests werden an Gruppen von je 5 Ratten durchgeführt. Oedem Tier werden 400 mg/kg Triton WR-1339 (Handelsname für ein Produkts das den Blut-Cholesterinspiegel erhöht) intravenös injiziert, während gleichzeitig eine der in der folgenden Tabelle II genannten Verbindungen in der ebenfalls angegebene Menge oral verabreicht wird« 20. Stunden nach der oralen Verabreichung werden die Ratten durch Verbluten getötet, das Blut und die Leber werden isoliert und die Cholesterinspiegel werden csufThe experimental animals used are rats of strain Wistar Imamichi with a body weight of about 300 g. The tests are performed on groups of 5 rats each. Edema animal to be 400 mg / kg Triton WR-1339 (trade name for a product, the blood cholesterol level increase) was intravenously injected, while one of the listed in the following Table II compounds in which also specified amount is administered orally, "20 hours after By oral administration, the rats are killed by bleeding, the blood and liver are isolated, and cholesterol levels are lowered
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übliche Weise bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle II genannt, wobei die Verringerung der Blut- und Leber-Cholesterinspiegel mit einer Kontrollgruppe von Ratten verglichen werden, denen allein Triton VVR 1339 verabreicht wurde.usual way determined. The results are shown in Table II, where the reduction in blood and liver cholesterol levels are compared to a control group of rats given Triton VVR 1339 alone.
Zum Vergleich sind auch die entsprechenden Ergebnisse für Monacolin K und ML-236B angegeben, die in wesentlich größeren Dosen als die erfindungsgemäßen Verbindungen verabreicht werden müssen, um eine vergMchb.are Verringerung Cholesterinspiegel zu erzielen.For comparison, the corresponding results for Monacolin K and ML-236B are also given, which must be administered in much larger doses than the compounds according to the invention in order to achieve a comparative reduction in cholesterol levels.
Die Senkung des Blut- bzw« Leber-Cholesterinspiegels errechnet sich nach der Formel?The reduction of blood or liver cholesterol is calculated according to the formula?
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228 9^6 57 954 11228 9 ^ 6 57 954 11
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ρ·ρ ·
1 - (C-B) χ 100 A-B1 - (C-B) χ 100 A-B
Hierbei bedeuten A = Spiegel, der nur mit Triton WR-1339Here A = mirror, which only with Triton WR-1339
behandelten Gruppe;treated group;
B - Spiegel der unbehandelten KontrollgruppeB - level of untreated control group
C - Spiegel der Testgruppe.C - level of the test group.
Getestet werden die Methyl-,. Äthyl-, Butyl- und Benzylester sowie die Natrium- und Kaliumsalze von Monacolin K* Die LD - jeder dieser Verbindungen beträgt bei oraler Verabreichung mindestens 2 000 mg/kg und bei intraperitoneal-'or Verabreichung mindestens 500 mg/kg· Die Verbindungen' besitzen somit sehr.niedrige Toxizität*The methyl ,. Ethyl, butyl and benzyl esters and the sodium and potassium salts of Monacolin K * The LD - of each of these compounds is at least 2,000 mg / kg when administered orally and at least 500 mg / kg 'the compounds' when administered intraperitoneally thus very low toxicity *
Diese Ergebnisse zeigen, daß die erfindungsgeme^ßen Verbindungen die Biosynthese von Cholesterin inhibieren und somit den Blut-Cholesterinspiegel senken«, Sie sind daher wertvolle Arzneistoffe zur' Behandlung uer Hyperlipämie und dor Ar t er io sklerose'cThese results show that the erfindungsgeme ^ SEN compounds inhibit the biosynthesis of cholesterol and thus lower blood cholesterol levels, "You are therefore valuable drugs for 'treatment uer hyperlipemia and dor Ar t he io sklerose'c
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können oral oder parenteral in Form von l<apseln, Tabletten, Injektionspräpc^raten oder anderen bekannten Formulierungen verabreicht werden, obwohl normalerweise die orale Verabreichung bevorzugt ist.' Die Dosis richtet sich nach Alter und dem Körpergewicht des Patienten und dem Schweregrad seines Zustande, Im allgemeinen beträgt jedoch die Tagesdosis für Erwachsene vorzugsweise 0,1 bis 100 mg, insbesondere 0,1 bis 10 mg,-im Falle von Monacolin K-salzen; und 0,5 bis 100 mg, insbesondere 0,5 bis 10.mg, im Falle von Monacolin K-estern»The compounds of the invention may be administered orally or parenterally in the form of advise l <a pseln, tablets, Injektionspräpc ^ or other known formulations are administered, although usually, oral administration is preferred. ' The dose depends on the age and body weight of the patient and the severity of his condition. Generally, however, the adult daily dose is preferably 0.1 to 100 mg, especially 0.1 to 10 mg, in the case of Monacolin K salts ; and 0.5 to 100 mg, in particular 0.5 to 10.mg, in the case of Monacolin K esters »
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Au s f uhr unqs'b ei spielA little while ago we played a game
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist in den nachstehenden Beispielen erläutert.The preparation of the compounds according to the invention is illustrated in the examples below.
Na tr ium s^a Iz. von Monaclin KNa trumum iz. from Monaclin K.
300 Liter eines Kulturmediums, dessen pH vor der Sterilisation 5,5 beträgt und das 5 % G/V Glucose, 0,5 % G/V Maisquellflüssigkeit, 2 % G/V Pepton ("Kyokuta" von der Kyokuto Saiyaku KK, Oapan) und 0,5 % G/V Ammoniumchlorid enthält, werden in einen 600 Liter-Fermenter eingebracht und mit Monoscus ruber SANK 18174 (Ferm 4957) beimpft. Die Züchtung des Organismus erfolgt 116 Stunden bei 26 C mit einer Belüftungsrate von 300 Liter/min und unter Rühren mit 190 U/min. Hierauf wird der pH der Kulturbrühe, die den Organismus enthält, durch Zugabe von 6 N Salzsäure auf 3,4 eingestellt, worauf man die Brühe mit 800 Liter Methanol extrahiert. Nach Zugabe von 6 kg Hyflo Super CeI wird der Extrakt mit einer Filterpresse filtriert, wobei 1100 Liter Mothanolextrakt erhalten werden. Dieser Extrakt wird mit 200 Liter gesättigter -wäßriger Natriumchloridlösung und dann mit 18D Liter Äthylcyclohexan gewaschen. Die erhaltene Lösung wird mit 600 Liter Äthylendichlorid extrahiert, worauf man den Extrakt mit 50 g Trifluoressigsäure versetzt und 30 Minuten bei 80 0C-umsetztβ Das Reaktionsgem sch wird dann nacheinander mit 200 Liter einer wäßrigen 2 % G/V Natriumbicarbonatlösung und 200 Liter einer wäßrigen 10 % G/V Natriumchloridlösung gewaschen und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei 135 g einer öligen Substanz erhalten werden.300 liters of a culture medium whose pH is 5.5 before sterilization and the 5% w / v glucose, 0.5% w / v corn steep liquor, 2% w / v peptone ( "Kyokuta" by Kyokuto Seiyaku KK, Oapan) and 0.5 % w / v ammonium chloride are placed in a 600 liter fermenter and inoculated with Monoscus ruber SANK 18174 (Ferm 4957). The organism is grown for 116 hours at 26 C with a ventilation rate of 300 liters / min and with stirring at 190 U / min. Then the pH of the culture broth containing the organism is adjusted to 3.4 by the addition of 6N hydrochloric acid, after which the broth is extracted with 800 liters of methanol. After adding 6 kg of Hyflo Super CeI, the extract is filtered with a filter press to obtain 1100 liters of Mothanol extract. This extract is washed with 200 liters of saturated aqueous sodium chloride solution and then with 18D liter of ethylcyclohexane. The resulting solution is extracted with 600 liters of ethylene dichloride, followed by added the extract with 50 g of trifluoroacetic acid and C-reacted at 80 0 30 minutes β The Reaktionsgem sch is then successively subjected with 200 liters of an aqueous 2% w / v sodium bicarbonate solution and 200 liters washed 10 % w / v sodium chloride solution and evaporated under reduced pressure to give 135 g of an oily substance.
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Diese ölige Substanz wird in 400 rnl Methanol gelöst, worauf man 20 ml der Methanollösung, die 6,8 g dee Öls enthält, der präparativen Schnellflüssigkeitschromatographie unter Verwendung· eines Systems, das mit einer Prepac C^p-Kolonne (Urakehrphasenkontrolle) ausgerüstet ist, unterwirft« Unter Verwendung von Methanol/Wasser (Volumenverhältnis 85 : 15) als Eluiermittel wird die Entwicklung bei einer Strömungsgeschwindigkeit von 200 ml/ min (Entwicklungszeit: etwa 10 min ) durchgeführt, wobei ein mit dem unteren Ende verbundenes Differentialrefrak-. tometer beobachtet wird. Die Fraktion, die in dem Differentialrefraktometer den Hauptpeak ergibt,,wird abgetrennt» Dieses Verfahren wird wiederholt und die erhaltenen Hauptpeak-Fraktionen werden gesammelt und eingeengt ι wobei 10,2 g einer öligen Substanz erhalten werden. Diese wird in 30 ml Methanol gelöst, worauf man 6 ml der Methanollösung, die etwa 2 g des Öls enthalt, nochmals derselben präparativen SchnellflüssigkeitsChromatographie unterwirft und mit Methanol/Wasser (Volumenverhältnis 80 : 20) mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 200 ml/min ertwickelt ο Die den Hauptpeak ergebende Fraktion wird abgetrennt« Dieses Verfahren wird wiederholt und die Hauptpeak-Fraktionen werden gesammelt und konzentriert. Durch Behandeln des Rückstands mit wäßrigem Methanol erhält man 1170 mg Rohrkristalle, die mehrmals aus Äthanol umkristallisiert werden und dabei 864 mg Kristalle ergeben«,This oily substance is dissolved in 400 ml of methanol, followed by 20 ml of the methanol solution containing 6.8 g of the deionized oil, preparative fast liquid chromatography using a system equipped with a Prepac Cp column (reverse-phase control). Using methanol / water (85:15 by volume) as the eluent, development is carried out at a flow rate of 200 ml / min (development time: about 10 minutes) with a differential refractile connected to the lower end. tometer is observed. The fraction giving the main peak in the differential refractometer is separated ,, "This process is repeated and the obtained main peak fractions are pooled and concentrated to give 10.2 ι g of an oily substance are obtained. This is dissolved in 30 ml of methanol, whereupon 6 ml of the methanol solution containing about 2 g of the oil are again subjected to the same preparative rapid-fluid chromatography and treated with methanol / water (volume ratio 80:20) at a flow rate of 200 ml / min The main peak resulting fraction is separated. This process is repeated and the main peak fractions are collected and concentrated. D u rch treating the residue with aqueous methanol to obtain 1170 mg tube crystals which are recrystallized several times from ethanol, thereby giving 864 mg crystals "
Diese Kristalle werden mit 19,4 ml 0,1 N Natronlauge versetzt und 3 Stunden bei 50 bis SO C gerührt« Nach dem Abfiltrieren von unlöslichen Bestandteilen wird das Filtrat gefriergetrocknet und ergibt 900 mg des Natriumsalzes von Monacolin K mit den folgenden Eigenschaften:These crystals are mixed with 19.4 ml of 0.1 N sodium hydroxide solution and stirred for 3 hours at 50 to SO C. After filtering off insoluble constituents, the filtrate is freeze-dried and gives 900 mg of the sodium salt of monacolin K with the following properties:
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1. Farbe und Form: weißes Pulver1. Color and shape: white powder
3. Molekulargewicht: 444 (massenspektrometrisch)3. Molecular weight: 444 (mass spectrometry)
4. Summenformel: C24H37O Na.4. Formula: C 24 H 37 O Na.
5* UV-Absorptionsspektrum: in Fig. 1 gezeigt.5 * UV absorption spectrum: shown in FIG.
232 nm (log £ = 4,30);232 nm (log £ = 4.30);
^ . 239 nm (log £ = 4,36) ;^. 239 nm (log £ = 4.36);
248 nm (log £ =4,19)*248 nm (log = 4.19) *
nlaxnlax
6, IR-»Absorptionsspektrum (KBr): in Fig. 2 gezeigt. 7,' NMf?~Spektrum (D2O): In Fig. 3 gezeigt.6, IR »absorption spectrum (KBr): shown in FIG. 7, 'NMf? ~ Spectrum (D 2 O): shown in FIG.
8» Schnellflüssigkextschromatographie: Verweilzeit: 8,5 min Säule: ' Microbondapac C18; 60 % V/V wäßriges Methanol + 0,1 % PIC-A (Produkt der Waters Co. Limited);8 »Fast liquid chromatography: residence time: 8.5 min Column: 'Microbondapac C18; 60 % v / v aqueous methanol + 0.1 % PIC-A (product of Waters Co. Limited);
Strömungsgeschwindigkeit: 1,5 ml/min In Fig* 4 gezeigt. Flow rate: 1.5 ml / min. Shown in FIG.
9» Löslichkeit: Löslich in'Wasser; unlöslich in orga nischen Lösungsmitteln.9 »Solubility: Soluble in water; insoluble in organic solvents.
ρ _ρ _
10. Spezifische Drehung: ^Jq- +266 (c = 0,33, Wasser).10. Specific rotation: ^ Jq- +266 (c = 0.33, water).
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Beispiel 2 Natriumsalz yon Monacolin KExample 2 Sodium salt of Monacolin K
300 Liter eines Kulturmediums, das vor der Sterilisation einen pH von 7,4 aufweist und 1,5 % G/V lösliche Stärke, 1,5 % G/V Glycerin, 2,0 % G/V Fischmehl und 0,2 G/V Calciumcarbonat enthält, wird in einen 600 Liter-Fermenter eingebracht und mit Monascus ruber SANK 17075 (CBS 832.70) beimpft.. Die Züchtung des Organismus erfolgt 120 Stunden bei 26 C mit einer Belüftungsrate von 300 Liter/min und unter Rühren mit 190 U/minc .300 liters of a culture medium having a pH before sterilization of 7.4 and 1.5% w / v soluble starch, 1.5% w / v glycerol, 2.0 w / v% fish meal and 0.2 G / V calcium carbonate is introduced into a 600 liter fermenter and inoculated with Monascus ruber SANK 17075 (CBS 832.70) .. The organism is grown for 120 hours at 26 C with a ventilation rate of 300 liters / min and with stirring at 190 U / minc.
Die Kulturbrühe wird dann mit einer Filterpresse filtriert, wobei 35 kg (Feuchtgewicht) des Organismus erhalten werden» Dieser wird mit 100 Liter Wasser versetzt und oer pH des Gemisches wird durch Zugabe von Natriumhydroxid unter Rühren auf 12 eingestellt« Das Gemisch wird dann 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen, anschließend mit 2 kg Hyflo Super CeI versetzt und mit einer Filterpresse filtriert* Das Filtrat wird dann durch Zugabe von Salzsäure aufeinen pH von 10 gebracht, worauf man das erhaltene Gemisch auf einer Säule adsorbiert, die 5 Liter HP~20~Harz' enthält, das mit je 15 Liter Wasser und einer lOprozentigen V/V wäßrigen Methanollösung gewaschen wird. Die Säule wird dann mit 90prozentigefn V/V wäßrigen Methanol eluiert, worauf man das Eluat auf ein Volumen von etwa 10 Liter konzentriert, eeinen pH durch Zugabe von Salzsäure auf einen Wert von 2 einstellt und das Gemisch mit Äthylacetat extrahiert« Der Extrakt wird mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft, wobei 50 g einer öligen Substanz erhalten werden, die Monacolin K-saure enthält« Die ölige Substanz' wird mit Methanol auf ein Gesamtvolumen von 100 mlThe culture broth is then filtered using a filter press to obtain 35 kg (wet weight) of the organism will get "This is admixed with 100 liters of water and oer pH of the mixture is adjusted by addition of sodium hydroxide with stirring to 12" The mixture is then for 1 hour at Allowed to stand at room temperature, then admixed with 2 kg Hyflo Super CeI and filtered with a filter press * The filtrate is then brought to a pH of 10 by addition of hydrochloric acid and the resulting mixture is adsorbed on a column containing 5 liters of HP ~ 20 resin. contains, which is washed with 15 liters of water and a lOprozentigen V / V aqueous methanol solution. The column is then eluted with 90% v / v aqueous methanol, after which the eluate is concentrated to a volume of about 10 liters, the pH is adjusted to 2 by the addition of hydrochloric acid, and the mixture is extracted with ethyl acetate Sodium chloride solution, dried over sodium sulfate and evaporated to dryness to give 50 g of an oily substance containing Monacolin K acid. The oily substance is made up to a total volume of 100 ml with methanol
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aufgefüllt. 20 ml der erhaltenen Lösung weeden der präparativen Schnellflüssigkeitschromatographie unter Verwendung der.in Beispiel 1 beschriebenen Umkehrphasenkolonne unterworfen und mit einer 2Oprozentigen V/V-weißrigen Methanollösung, die 2 % Essigsäure enthält, mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 200 ml/min eluiert«, Die Fraktion, die in dem Differentialrefraktometer den Hauptpesk zeigt, wird abgetrennt (7 bis 10 Minuten)« Die restlichen 80 ml der Methanollösung werden dann auf dieselbe Weise behandelt. Die erhaltenen Hauptpeak-Fraktionen werden gesammelt, konzentriert und mit Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird nach Zugabe von Heptan zur Trockene eingeengt und ergibt 1,2 g einer öligen Substanz.refilled. 20 ml of the resulting solution are subjected to preparative rapid liquid chromatography using the reversed-phase column described in Example 1 and eluted with a 2% V / V aqueous methanol solution containing 2% acetic acid at a flow rate of 200 ml / min. showing in the differential refractometer the H a uptpesk is separated (7 to 10 minutes) "the remaining 80 ml of the methanol solution are then treated in the same manner. The obtained main peak fractions are collected, concentrated and extracted with ethyl acetate. The extract is concentrated to dryness after addition of heptane to give 1.2 g of an oily substance.
Diese ölige Substanz wird in 20 ml Methanol gelöst und dann der vorstehenden Schnellf lüssigkeitschro'matographie unterworfen, wobei 150 mg Monacolin K-säure erhalten werden. Diese wird mit 2 ml Methanol und 100 rnl Wasser versetzt, worauf man den pH der erhaltenen Lösung durch Zugabe von 1 N Natronlauge auf 8,0 einstellt und eine klare wäßrige Lösung erhält. Diese Lösung wird durch eine Säule geleitet, die 10 ml HP-20-Harz enthält, worauf man die Säule mit 100 ml Wasser wäscht und mit 80 % V/V wäßrigem Methanol eluiert. Durch Gefriertrocknen .des Eluats erhält man 130 mg des Natriumsalzes von Monacolin K in Form einos weißen Pulvers. Die Eigenschaften dos Produkts sind identisch mit denen des Produkts aus Beispiel 1. . . 'This oily substance is dissolved in 20 ml of methanol and then subjected to the above rapid flow liquid chromatography to obtain 150 mg of monacolin K acid. This is mixed with 2 ml of methanol and 100 ml of water, whereupon the pH of the resulting solution is adjusted to 8.0 by the addition of 1N sodium hydroxide solution and a clear aqueous solution is obtained. This solution is passed through a column containing 10 ml of HP-20 resin, followed by washing the column with 100 ml of water and eluting with 80 % v / v aqueous methanol. By freeze-drying the eluate, 130 mg of the sodium salt of monacolin K are obtained in the form of a white powder. The properties of the product are identical to those of the product from Example 1. , '
Die in Beispiel 1 beschriebene Züchtung, Extraktion, Konzen·The cultivation, extraction, concentrate described in Example 1
~ 22 -~ 22 -
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trierung, preparative Schnellflüssigkeitschromatographie und Urnkristallisation aus Äthanol worden wiederholt. 500 mg der erhaltenen Kristalle werden dann in 50 ml Methylenchlorid gelöst, worauf man die erhaltene Lösung durch ein Millipore-Filter filtriert» Das Filtrat wird mit 20 ml einer gesättigten wäßrigen Calciumhydroxidlösung versetzt und das Gemisch wird bei Raumtemperatur kräftig gerührt. Sobald der pH der Lösung unter einen Wert von 8 sinkt, gibt man weitere 10 ml der gesättigten wäßrigen Calciumhydroxidlösung zu und setzt das Rühren fort« Ytfenn der pH mehr abnimmt (nach Zugabe von insgesamt 50 ml der wäßrigen Calciumhydroxidlösung) versetzt man mit destilliertem Wasser und bringt die gesamte Lösung in einen Trenntrichter ein* Die organische Phase wird gesammelt und das Lösungsmittel wird abdestilliert. Nach Aufarbeiten des Rückstandes mit Heptan wird das erhaltene Pulver einer Ultraschallbehandlung unterworfen,, Das Pulver wird filtriert und getrocknet, wobei 450 mg des CalciumsalzQs von Monacolin K in Form einesweißen Pulvers erhalten werden« Dieses Calciumsalz hat folgende Eigenschaften;tration, preparative fast liquid chromatography and recrystallization from ethanol were repeated. 500 mg of the obtained crystals are then dissolved in 50 ml of methylene chloride, after which the resulting solution is filtered through a Millipore filter. The filtrate is treated with 20 ml of a saturated aqueous calcium hydroxide solution and the mixture is stirred vigorously at room temperature. As soon as the pH of the solution drops below a value of 8, another 10 ml of the saturated aqueous calcium hydroxide solution are added and stirring is continued. If the pH decreases more (after the addition of a total of 50 ml of the aqueous calcium hydroxide solution), it is mixed with distilled water and Place the entire solution in a separatory funnel * Collect the organic phase and distil off the solvent. After working up the residue with heptane, the resulting powder is subjected to ultrasonic treatment. The powder is filtered and dried to give 450 mg of the calcium salt Q of Monacolin K in the form of a white powder. This calcium salt has the following properties;
1. Molekulargewicht: 882 (massenspektrometrisch) 2* Summenformel: (Co.H7~0„)o,Ca1. Molecular weight: 882 (mass spectrometry) 2 * Molecular formula: (C o .H 7 ~ 0 ") o , Ca
3. Schmelzpunkt: 155 bis 165 0C (Zersetzung)3rd melting point: 155 to 165 0 C (decomposition)
4, Spezifische Drehung: /Bc/p5 ='+209° (c= 1,48, Chloro4, Specific rotation: / Bc / p 5 = '+ 209 ° (c = 1.48, chloro
form)shape)
5. IR-Absorptionsspektrum: (KBr): inFig, 5 gezeigt.5. IR absorption spectrum: (KBr): shown in FIG.
' . AP C 07 C/ 222 916'. AP C 07 C / 222 916
57 954 1157 954 11
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6. NMR-Spektrum (CD OD): In Fig» 6 gezeigt. Beispiel -46. NMR Spectrum (CD OD): Shown in FIG. Example -4
Methylester yon Monacolin KMethyl ester of monacolin K
Die in Beispiel 1 beschriebene Züchtung, Extraktion, Konzentrierung, präparative Schnellflüssigkeitschromatographie und Umkristailisation aus Äthanol werden wiederholt, wobei 864 mg Monacolin K erhalten werden« 200 mg Monacolin K werden in 20 ml Methanol .gelöst,'das vorher mit 3 K - Molekularsieb entwässert worden ist. Nach Zugabe von einigen Tropfen Acetylchlorid wird die Lösung 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird abdestil~ liert und aer Rückstand wird mit 50 ml Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird nacheinander mit 2 % G/V wäßriger Natriumbicarbonatlösung und gesättigter wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet " und eingedampft. Der Rückstand wird an einer Säule absorbiert, die 10 g Silicagel (Wakogel C-IOO) enthält, das vorher mit Benzol behandelt wurde. Die mit Äthylacetat/Benzol (Volumenverhältnis 6 : 94) eluierten Fraktionen werden gesammelt und durch Abdestillieren des Lösungsmittels erhält, man 65 mg des Methylesters von Monacolin K als farbloses öl. Dieses Produkt hat folg'ende Eigenschaften:The cultivation, extraction, concentration, preparative rapid liquid chromatography and recrystallization from ethanol described in Example 1 are repeated, giving 864 mg of Monacolin K. "200 mg of Monacolin K are dissolved in 20 ml of methanol, which has been previously dehydrated with 3 K molecular sieves is. After adding a few drops of acetyl chloride, the solution is stirred for 3 hours at room temperature. The solvent is abdestil ~ lines and aer residue is extracted with 50 ml ethyl acetate. The extract is washed successively with 2 % w / v aqueous sodium bicarbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate and evaporated The residue is absorbed on a column containing 10 g of silica gel (Wakogel C-100) previously treated with benzene The fractions eluted with ethyl acetate / benzene (volume ratio 6:94) are collected and obtained by distilling off the solvent, 65 mg of the methyl ester of monacolin K as a colorless oil are obtained.
f : f :
1. Molekulargewicht: 436,6 (massenspektrometrisch)1. Molecular weight: 436.6 (mass spectrometry)
2. Summenformel: - C25H40°6*2. Molecular formula: - C 25 H 40 ° 6 *
3. Spezifische Drehung: /^Jo ~ +20^° (c ~ 1J0Si Methanol)3. Specific rotation: / ^ Jo ~ + 20 ^ ° ( c ~ 1 J 0 Si methanol)
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4. IR-Absorptionsspektrum: In Fig. 7 gezeigt.4. IR Absorption Spectrum: Shown in FIG.
5» NMR-S pek tr urn:5 »NMR spectrometer:
In Fig. S gezeigtIn Fig. S shown
B e i sp i e 1 5B e i sp e e 1 5
Das Natriumsalz von Monacolin K wird gemäß Beispiel 2 hergestellt. 100 mg des Natriumsalzes werden in 2 ml Diniethylsu«lfcxid gelöst und mit 50 ul Methyljodid versetzt» Die Lösung wird dann 5 Stunden unter Rühren bei 40 bis 50 0C in einem mit RückfluSkühier ausgerüsteten Reaktor unter Rückfluß erhitzt. Hierauf verdünnt man das Reaktionsgemisch mit 5 ml Wasser und extrahiert mit 10 ml Methylenchlorid. Das Lösungsmittel wird aus dem Extrakt abdestilliert und der Rücketand wird auf einer Säule adsorbiert, die 10 g Silicagel (Wakogel G-IOO) enthält, das vorher mit Benzol behandelt wurde. Die mit Äthylacetat/Benzol (Volumenverhältnis 4 : 96} eluierten Fraktionen werden gesammelt und durch Abdestil· lieren des Lösungsmittels erhält man 35 mg des Methylesters von Monacolin K in Form eines Öls.The sodium salt of monacolin K is prepared according to Example 2. 100 mg of the sodium salt are "dissolved lfcxid and treated with 50 ul of methyl iodide" in 2 ml Diniethylsu The solution is then heated for 5 hours with stirring at 40 to 50 0 C in a flask equipped with RückfluSkühier reactor under reflux. Then the reaction mixture is diluted with 5 ml of water and extracted with 10 ml of methylene chloride. The solvent is distilled off from the extract and the residue is adsorbed on a column containing 10 g of silica gel (Wakogel G-100) which has been previously treated with benzene. The fractions eluted with ethyl acetate / benzene (volume ratio 4: 96) are collected and distilling off the solvent gives 35 mg of the methyl ester of monacolin K in the form of an oil.
Beispiele Äthylester von Monacolin KExamples of ethyl esters of monacolin K
100 mg des gernäß Beispiel 1 hergestellten Monacolin K100 mg of Monacolin K prepared according to Example 1
ο werden in 15 ml Äthanol gelöst, das vorher mit 3A-MoIektilorsieb entwässert werden ist* Die Lösung wird mit einigen Tropfen Aceiylchlorid vorsetzt, worauf man das Gemisch 3 Stunden bei Raumtemperatur rührt, hieraufο are dissolved in 15 ml of ethanol, which is previously dehydrated with 3A-MoIektilorsieb * The solution is pre-treated with a few drops of aceiyl chloride, whereupon the mixture is stirred for 3 hours at room temperature, then
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AP C 07 C/ 222 916 . 57 954 11AP C 07 C / 222 916. 57 954 11
das Lösungsmittel abdestilliert und den Rückstand mit 50 ml Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird nach~ einander mit 2 % G/V wäßriger Natriumbicarbonatlösung und gesättigter wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet» Nach dem Abdestillie- ren des Lösungsmittels wird der Rückstand auf einer Säule adsorbiert, die 10 g Silicagel C (Wakogel C-IOO) enthält, das vorher mit Benzol behandelt wurde. Die mit Äthylacetat/Benzpl (Volumenverhältnis 6 : 94) eluierten Fraktionen werden- gesammelt und durch Abdestil« lieren des Lösungsmittels erhält man 30 mg de3 Äthylesters von Monacolin K in Form eines farblosen Öls. Diese Verbindunghat folgende Eigenschaften:distilled off the solvent and the residue extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract is washed to ~ one another with 2% w / v aqueous sodium bicarbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution and dried over sodium sulfate "After the Abdestillie- ren the solvent, the residue is adsorbed on a column containing 10 g of silica gel C (Wakogel C-IOO) contains previously treated with benzene. The fractions eluted with ethyl acetate / benzene (volume ratio 6:94) are collected and, by distilling off the solvent, 30 mg of the ethyl ester of monacolin K are obtained in the form of a colorless oil. This connection has the following properties:
1. Molekulargewicht: 450,6 (massenspektrometrisch)1. Molecular weight: 450.6 (mass spectrometry)
2, Summenformel: ^26^4?^6*2, empirical formula: ^ 26 ^ 4? ^ 6 *
3» !R«Absorptionsspektrum. (CHCl-.) : In Fig. 9 gezeigt. 4. NHR-Spektrum (CDCl.,): in Fig. /10 gezeigt.3 »! R« absorption spectrum. (CHCl-.): Shown in FIG. 4. NHR spectrum (CDCl.,): Shown in Fig. / 10.
Beispiel 7 Butvlester von Münacolin KExample 7 Butyl Ester of Münacolin K
200 mg des gemäß Beispiel 1 hergestellten Monacolin K werden in 20 ml Sutanol gelöst, das vorher mit 3 α Mole« kularsieb entwässert worden ist. Nach Zugabe von einigen Tropfen Acetylchlorid wird das erhaltene Gemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, Hierauf destilliert man das Lösungsmittel ab und extrahiert den Rückstand mit 50 ml ftthylacotat« Der Extrakt wird nacheinander mit 2 % G/V wäßriger Natriumbicarbonatlösung und gesättig*200 mg of the monacolin K prepared according to Example 1 are dissolved in 20 ml of sutanol, which has been previously dewatered with 3 μm molecular sieves. After adding a few drops of acetyl chloride, the resulting mixture is stirred for 2 hours at room temperature, then the solvent is distilled off and the residue is extracted with 50 ml of ftthylacotat. The extract is washed successively with 2 % w / v aqueous sodium bicarbonate solution and saturated.
AP C 07 C/ 222 916 57 954 11AP C 07 C / 222 916 57 954 11
ter wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampfte Der Rückstand wird auf einer Säule adsorbiert, die 10 g Silicagel (Wakogel C-100) enthält, das vorher mit Benzol behandelt wurde« Die mit Äthylacetat/Benzol (Volumenverhältnis 4 : 96) eluierten Fraktionen werden gesammelt und durch Abdestillieren des Lösungsmittels erhält man 80 mg des Butylesters von Monacolin K in Form eines farblosen Öls. Diese Verbindung hat folgende Eigenschaften:The residue is adsorbed on a column containing 10 g of silica gel (Wakogel C-100) which has been previously treated with benzene. "The fractions eluted with ethyl acetate / benzene (4: 96 by volume) are filtered off with anhydrous sodium chloride solution are collected and distilled off the solvent to obtain 80 mg of the butyl ester of monacolin K in the form of a colorless oil. This connection has the following properties:
1. Molekulargewicht: 478,7 (massenspektrometrisch)1. Molecular weight: 478.7 (mass spectrometry)
2e Sumrnenf orrnel: C00H.„0«.2 e Sumrnenf orrnel: C 00 H. "0".
do 46 6do 46 6
3· IR-Absorptionsspektrum (CHCl,.): in Fig«, Il gezeigt 4* NMR-Spektrum (CDCl7): In Fig. 12 gezeigt.3 · IR absorption spectrum (CHCl,.): Shown in FIG. 1, 4 * NMR spectrum (CDCl 7 ): shown in FIG.
200 mg des gemäß Beispiel 1 hergestellten Monacolin K werden in 20 ml Benzylalkohol gelöst, der vorher mit200 mg of Monacolin K prepared according to Example 1 are dissolved in 20 ml of benzyl alcohol, previously with
ο 3 A-Molekularsieb entwässert worden ist«, Nach Zugabe einiger Tropfen Acetylchlorid wird das erhaltene Gemisch 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Hierauf destilliert' man das Lösungsmittel ab und extrahiert den Rückstand mit 50 rnl Äthylacetatβ Der Extrakt wird nacheinander mit 2 % G/V wäßriger NatriurabiCarbonatlösung und gesättigter wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft»After the addition of a few drops of acetyl chloride, the resulting mixture is stirred for 3 hours at room temperature. Then ', the solvent is distilled off and the residue extracted with 50 rnl of ethyl acetate β The extract is washed successively with 2% w / v aqueous NatriurabiCarbonatlösung and saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate and evaporated'
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| SI20070A (en) | 1998-09-18 | 2000-04-30 | LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. | NOVEL SALTS OF INHIBITORS OF HMG-CoA REDUCTASE |
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| CA2421018A1 (en) * | 2000-09-06 | 2002-03-14 | Merck & Co., Inc. | Dihydroxy open-acid salt of simvastatin |
| SK242004A3 (en) | 2001-06-13 | 2004-06-08 | Ranbaxy Lab Ltd | Methyl analogs of simvastatin as novel HMG-CoA reductase inhibitors |
| KR100379075B1 (en) | 2002-03-07 | 2003-04-08 | Jinis Biopharmaceuticals Co | Method for producing low cholesterol animal food product and food product therefrom |
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Family Cites Families (2)
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|---|---|---|---|---|
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