NL8004303A

NL8004303A - MONACOLINE K CONNECTIONS.

Info

Publication number: NL8004303A
Application number: NL8004303A
Authority: NL
Original assignee: Sankyo Co
Priority date: 1979-07-27
Filing date: 1980-07-27
Publication date: 1981-01-29
Also published as: SE445828B; ATA392380A; DD153827A5; FR2462417B1; DE3028284A1; FR2462417A1; NZ194445A; NO156210B; ES8105781A1; FI71300B; NO156210C; GB2055100A; AT375334B; DK322380A; PL225901A1; NO802244L; DE3028284C2; AU6083980A; FI802357A; CH647749A5

Description

** *** *

803271/vdV803271 / vdV

Korte aanduiding: Monacoline K-verbindingen.Short designation: Monacoline K compounds.

5 De uitvinding heeft betrekking op zouten en esters van het vrije zuur van Monacoline K-lacton, alsmede op de werkwijze voor hun bereiding en op fran gebruik als anti-hypercholestere*mische middelen.The invention relates to salts and esters of the free acid of Monacoline K-lactone, as well as to the process for their preparation and to the use as anti-hypercholesteric agents.

De Britse octrooiaanvrage 80057^8 beschrijft de verbinding Monacoline-K en zijn bereiding door micro-organismen van het geslacht 10 Monascus, in het bijzonder de Monascus rub^er-stam in 1005 (FERM 4822).British patent application 80057 ^ 8 describes the compound Monacoline-K and its preparation by microorganisms of the genus Monascus, in particular the Monascus rubber strain in 1005 (FERM 4822).

In de onderhavige aanvrage wordt de waardevolle en onverwachte werking van de Monacoline K-verbinding als anti-hypercholesteremiemiddel beschreven.In the present application, the valuable and unexpected action of the Monacoline K compound as an anti-hypercholesteremic agent is described.

In de Britse octrooiaanvrage 8007240 wordt de bereiding beschreven van Monacoline K door kweken van een variëteit van andere 15 micro-organismen van het geslacht Monascus. Men heeft nu gevonden dat de zouten en esters van het vrije zuur, waarvan Monacoline K het lacton is, een vergelijkbare of sterkere, gelijksoortige anti-hypercholesteremische werking bezitten als Monacoline K. Deze verbindingen zullen hierna aangeduid worden als Monacoline K-zouten of -esters, waarbij het vanzelf spreekt 20 dat hiermee de zouten en esters van het zuur bedoeld worden, waarvan Monacoline K de lacton is.British patent application 8007240 describes the preparation of Monacoline K by cultivating a variety of other microorganisms of the genus Monascus. It has now been found that the salts and esters of the free acid, of which Monacoline K is the lactone, have a similar or stronger, similar anti-hypercholesteremic activity as Monacoline K. These compounds will hereinafter be referred to as Monacoline K salts or esters it being understood that this refers to the salts and esters of the acid, of which Monacoline K is the lactone.

De Monacoline K-zouten en -esters volgens de onderhavige uitvinding bezitten de formule 1 van het formuleblad, waarin S een al niet gesubstitueerde alkylgroep of een metaalatoom en n het omgekeerde van 25 de waardigheid van de door R weergegeven groep of atoom voorstelt.The Monacoline K salts and esters of the present invention have the formula 1 of the formula sheet, wherein S represents an already unsubstituted alkyl group or a metal atom and n the inverse of the value of the group or atom represented by R.

De uitvinding heeft eveneens betrekking op een werkwijze voor de bereiding van Monacoline K-zouten en -esters door omzetting van Monacoline K of een reactief derivaat daarvan in een zout of ester.The invention also relates to a process for the preparation of Monacoline K salts and esters by converting Monacoline K or a reactive derivative thereof into a salt or ester.

De uitvinding heeft verder betrekking op een werkwijze 30 voor de bereiding van de zouten van Monacoline K door kweken van een micro-organisme van het geslacht Monascus dat een Monacoline K-zout levert en afscheiden van het Monacoline K-zout uit het kweekmedium.The invention further relates to a method for the preparation of the salts of Monacoline K by cultivating a microorganism of the genus Monascus which supplies a Monacoline K salt and separating the Monacoline K salt from the culture medium.

De Monacoline-K-zouten volgens de onderhavige uitvinding zijn metaalzouten en bij voorkeur: alkalimetaalzouten, zoals natrium-, 35 kaliurazouten, aardalkalimetaalzouten, zoals calcium- of magnesiumzouten; zouten van metalen uit groep lila van het Periodiek Systeem der Elementen, zoals het aluminiumzout, of zouten van de overgangsmetalen uit de groepen Ib, Ilb, en VIII van het Periodiek Systeem der Elementen, zoals ijzer-, nikkel-, kobalt-, koper- en zinkzouten. Van deze metaalzouten wordt de 40 voorkeur gegeven aan alkalimetaalzouten, aardalkalimetaalzouten en het -2- aluminiumzout, in het bijzonder natrium-, kalium- en aluminiumzouten·The Monacoline K salts of the present invention are metal salts and preferably: alkali metal salts such as sodium, kaliura salts, alkaline earth metal salts such as calcium or magnesium salts; salts of metals of group lila of the Periodic Table of the Elements, such as the aluminum salt, or salts of the transition metals of groups Ib, Ilb, and VIII of the Periodic Table of the Elements, such as iron, nickel, cobalt, copper and zinc salts. Of these metal salts, preference is given to alkali metal salts, alkaline earth metal salts and the -2-aluminum salt, in particular sodium, potassium and aluminum salts ·

Men kan de Monacoline K-zouten gemakkelijk door aanzuren in Monacoline K of het basiszuur van Monacoline K omzetten· Het verkregen Monacoline K of zuur worden in aanwezigheid van een alkali, 5 bijvoorbeeld alkalimetaalhydroxyde of -carbonaat, in het zout omgezet·The Monacoline K salts can easily be converted by acidification into Monacoline K or the basic acid of Monacoline K · The Monacoline K or acid obtained are converted into the salt in the presence of an alkali, for example alkali metal hydroxide or carbonate ·

Deze omzetting kan kwantitatief en herhaalde malen worden uitgevoerd· Men heeft vastgesteld dat de omzetting van Monacoline K of het zuur in het metaalzout in sterke mate van de pH van het medium afhankelijk is· De kritische pH-waarde bedraagt ongeveer 5* Als metaal-10 ionen aanwezig zijn bezit Monacoline K bij een pH boven 5 steeds de vorm van een zout· Als daarentegen de pH beneden 5 ligt verkrijgt men Monacoline K zelf, of het basiszuur waarvan Monacoline K is afgeleid of een mengsel van deze twee in verschillende verhoudingen.This conversion can be carried out quantitatively and repeatedly · It has been found that the conversion of Monacoline K or the acid into the metal salt is highly dependent on the pH of the medium · The critical pH value is about 5 * As metal-10 ions are present Monacoline K is always in the form of a salt at a pH above 5. If, on the other hand, the pH is below 5, Monacoline K itself is obtained, or the basic acid from which Monacoline K is derived or a mixture of the two in different proportions.

De Monacoline K-esters volgens de uitvinding bezitten 15 de formule 1 van het formuleblad, waarin R een al dan niet gesubstitueerde alkylgroep voorstelt. Als R een aiet-gesubstitueerde alkylgroep voorstelt bezit deze groep een rechte of vertakte keten met bij voorkeur 1-8 kool-stofatomen. Voorbeelden van dergelijke door R voorgestelde alkylgroepen zijn de methyl-, ethyl-, propyl-, isopropyl-, butyl- en hexylgroepen.The Monacoline K esters according to the invention have the formula 1 of the formula sheet, in which R represents an unsubstituted or substituted alkyl group. When R represents an a-substituted alkyl group, this group has a straight or branched chain, preferably 1-8 carbon atoms. Examples of such alkyl groups represented by R are the methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl and hexyl groups.

20 Als R een gesubstitueerde alkylgroep voorstelt kan de substituent zoals bekend uit een groot aantal groepen en atomen gekozen worden, onder andere arylgroepen, acylgroepen (in het bijzonder arylcarbo nylgroepen), alkoxygroepen, halogeenatomen, en hydroxylgroepen. Substitu-enten waaraan in het bijzonder de voorkeur wordt gegeven zijn de aryl-25 groepen en arylcarbonylgroepen, dat wil zeggen dat R een aralkylgroep of een arylcarbonylalkylgroep voorstelt·When R represents a substituted alkyl group, the substituent is known to be selected from a wide variety of groups and atoms, including aryl groups, acyl groups (especially aryl carbonyl groups), alkoxy groups, halogen atoms, and hydroxyl groups. Particularly preferred substituents are the aryl-25 groups and arylcarbonyl groups, i.e. R represents an aralkyl group or an arylcarbonylalkyl group

Als R een aralkylgroep voorstelt geeft men de voorkeur aan een al dan niet gesubstitueerde benzylgroep· Gesubstitueerde benzyl-groepen bezitten bij voorkeur een of meer substituenten bestaande uit een 30 alkylgroep, alkoxygroep of halogeenatoom. Voorbeelden van dergelijke ben-zylgroepen zijn benzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, Jf-methylbenzyl, 2- ethylbenzyl, 3-ethylbenzyl,- 2-methoxy benzyl, 3-methoxybenzyl, ^-methoxy-benzyl, 2-ethoxybenzyl, 3-ethoxybenzyl, V-ethoxybenzyl, 2-chloorbenzyl, 3- chloorbenzyl, ^-chloorbenzyl, 2-broombenzyl, 3-broombenzyl of ^-broom-35 benzyl·/ 4-ethylbenzylgroepen.When R represents an aralkyl group, preference is given to a substituted or unsubstituted benzyl group. Substituted benzyl groups preferably have one or more substituents consisting of an alkyl group, alkoxy group or halogen atom. Examples of such benzyl groups are benzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, Jf-methylbenzyl, 2-ethylbenzyl, 3-ethylbenzyl, -2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 1-methoxy-benzyl, 2-ethoxybenzyl, 3 ethoxybenzyl, V-ethoxybenzyl, 2-chlorobenzyl, 3-chlorobenzyl, chlorobenzyl, 2-bromobenzyl, 3-bromobenzyl or bromobenzyl / 4-ethylbenzyl groups.

Als R een arylcarbonylalkylgroep voorstelt is dit bij voorkeur een al dan niet gesubstitueerde fenacylgroep. De gesubstitueerde fenacylgroepen bevatten bij voorkeur één of meer substituenten bestaande uit een alkylgroep, alkoxygroep of halogeenatoom· Voorbeelden van derge- 8004303 * Λ -3- lijke fenacylgroepen zijn fenacyl, 2-methylfenacyl, 3-fflethylfenacyl, b-methylfenacyl, 2-ethylfenacyl, 3-ethylfenacyl, b-ethylfenacyl, 2-methoxy-fenacyl, 3-methoxyfenacyl, 4-methoxyfenacyl, 2-ethoxyfenacyl, 3-ethoxy-fenacyl, ^-ethoxyfenacyl, 2-chloorfenacyl, 3-chloorfenacyl, ^-chloorfena-5 cyl, 2-broomfenacyl, 3-broomfenacyl of 4-broomfenacyl.When R represents an arylcarbonylalkyl group, it is preferably a substituted or unsubstituted phenacyl group. The substituted phenacyl groups preferably contain one or more substituents consisting of an alkyl group, alkoxy group or halogen atom. Examples of such 8004303 * Λ -3-like phenacyl groups are phenacyl, 2-methylphenacyl, 3-phenylphenacyl, b-methylphenacyl, 2-ethylphenacyl, 3-ethylphenacyl, b-ethylphenacyl, 2-methoxy-phenacyl, 3-methoxyphenacyl, 4-methoxyphenacyl, 2-ethoxyphenacyl, 3-ethoxy-phenacyl, ^ -ethoxyphenacyl, 2-chlorophenacyl, 3-chlorophenacyl, ^ -chlorophen-5 cyl , 2-bromophenacyl, 3-bromophenacyl or 4-bromophenacyl.

Van de esters gaat de voorkeur uit naar methyl-, ethyl-butyl- en benzylesters.The esters are preferred for methyl, ethyl-butyl and benzyl esters.

Men kan de Monacoline K-zouten en -esters volgens de uitvinding gemakkelijk bereiden door omzetten in een zout of veresteren 10 van Monacoline K zelf of van een reactief Monacoline K-derivaat. Voorbeelden van geschikte reaktieve derivaten zijn het basiszuur waarvan Monacoline K is geleid en voor de bereiding van esters: Monacoline K-zouten (bijvoorbeeld de bovengenoemde groepen van zouten, in het bijzonder de ‘ natrium-, kalium-, calcium-, magnesium-, aluminium-, ijzer-, zink-, koper-15 of kobaltzouten).The Monacoline K salts and esters according to the invention can be easily prepared by converting into a salt or esterification of Monacoline K itself or of a reactive Monacoline K derivative. Examples of suitable reactive derivatives are the basic acid from which Monacoline K is derived and for the preparation of esters: Monacoline K salts (for example, the above groups of salts, in particular the sodium, potassium, calcium, magnesium, aluminum -, iron, zinc, copper-15 or cobalt salts).

Men kan de Monacoline K-zouten bereiden door rechtstreekse reaktie van Monacoline K of het basiszuur met een oxyde, hydroxyde, carbonaat of bicarbonaat, bij voorkeur het hydroxyde of carbonaat van het gekozen metaal. Hierbij moet ervoor worden gezorgd dat de reaktie bij een 20 pH boven 5» en bij voorkeur boven 7 wordt uitgevoerd om Monacoline K of het zuur volledig in het gewenste zout om te kunnen zetten. Het bij deze reaktie gebruikte Monacoline K wordt bij voorkeur bereid zoals beschreven in de hierboven genooemde octrooiaanvrage(n) door kweken van een schimmel van het geslacht Monascus en isoleren van Monacoline K uit het kweekmedium.The Monacoline K salts can be prepared by direct reaction of Monacoline K or the base acid with an oxide, hydroxide, carbonate or bicarbonate, preferably the hydroxide or carbonate of the selected metal. It must be ensured here that the reaction is carried out at a pH above 5 and preferably above 7 in order to be able to completely convert Monacoline K or the acid into the desired salt. The Monacoline K used in this reaction is preferably prepared as described in the above-mentioned patent application (s) by cultivating a fungus of the genus Monascus and isolating Monacoline K from the culture medium.

25 Men kan Monacoline K uit het kweekmedium isoleren en vóór omzetting in het zout zuiveren, waarbij men bij voorkeur het zout tijdens het isoleren en zuiveren van Monacoline K in het kweekmedium vormt, zodat Monacoline K in de vorm van het gewenste metaalzout geïsoleerd wordt. Onafhankelijk van de toegepaste methode kan het metaalzout volgens een bekende werkwijze 30 uit het reaktiemedium of het kweekmedium geïsoleerd worden met inbegrip' van de hierna beschreven werkwijzen die op de isolatie van Monacoline K-metaalzouten uit de kweek van de Monacoline K-zout leverende schimmels betrekking hebben.Monacoline K can be isolated from the culture medium and purified before conversion into the salt, preferably the salt is formed during the isolation and purification of Monacoline K in the culture medium so that Monacoline K is isolated in the form of the desired metal salt. Regardless of the method used, the metal salt can be isolated by a known method from the reaction medium or the culture medium, including the methods described below which relate to the isolation of Monacoline K metal salts from the culture of the Monacoline K salt-producing fungi to have.

Men kan de Monacoline K-esters bereiden door rechtstreek-33 se verestering van Monacoline K of van de reactieve derivaten daarvan, door reaktie van een alcohol met de formule ROH (of een reaktief derivaat daarvan), waarin R een al dan niet gesubstitueerde alkylgroep voorstelt, met Monacoline K of het basiszuur, bij voorkeur in aanwezigheid van een dehydraterend middel, bijvoorbeeld een zuurhalogenide, zoals acetylchloride.The Monacoline K esters can be prepared by direct esterification of Monacoline K or its reactive derivatives, by reaction of an alcohol of the formula ROH (or a reactive derivative thereof), wherein R represents an unsubstituted or substituted alkyl group , with Monacoline K or the base acid, preferably in the presence of a dehydrating agent, for example an acid halide, such as acetyl chloride.

ft η n i 3 o 3 -4-ft η n i 3 o 3 -4-

Men kan Monacoline K-esters ook bereiden door reaktie van een Honacoline K-zout met een halogenide met formule EX (waarin E een al of niet gesubstitueerde alkylgroep en X een halogeenatoom, bij voorkeur een joodatoom voorstelt).Monacoline K esters can also be prepared by reacting an Honacoline K salt with a halide of formula EX (wherein E represents an unsubstituted or substituted alkyl group and X represents a halogen atom, preferably an iodine atom).

5 Men kan Monacoline K ook rechtstreeks bereiden door kweken van een Monacoline K-zout leverend micro-organisme van het geslacht Monascus. Micro-organismen die volgens de onderhavige werkwijze gebruikt kunnen worden zijn: Monascus anka SANK 10171 (IFO 6540), Monascus nurpurous SANK 10271 (IFO 4513); Monascus ruber SANK 10671 (Ferm 4958)? Monascus 10 vitreus SANK 10960 (NIHS 609, e-609; Ferm 4960); Monascus paxii SANK 11172 (IFO 8201); Monascus ruber SANK 11272 (ΠΡΟ 9203); Monascus ruber SANK 13778 (Ferm 4959); Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956); Monascus ruber SANK 17075 (CBS 832.70); Monascus ruber SANK 17*175 (CBS 503.70); Monascus ruber SANK 17275 (ATCC 18199); en Monascus ruber SANK 18174 (Ferm 4957).Monacoline K can also be prepared directly by cultivating a Monacoline K salt-yielding microorganism of the genus Monascus. Microorganisms that can be used according to the present method are: Monascus anka SANK 10171 (IFO 6540), Monascus nurpurous SANK 10271 (IFO 4513); Monascus ruber SANK 10671 (Ferm 4958)? Monascus 10 vitreous SANK 10960 (NIHS 609, e-609; Ferm 4960); Monascus paxii SANK 11172 (IFO 8201); Monascus ruber SANK 11272 (ΠΡΟ 9203); Monascus ruber SANK 13778 (Ferm 4959); Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956); Monascus ruber SANK 17075 (CBS 832.70); Monascus ruber SANK 17 * 175 (CBS 503.70); Monascus ruber SANK 17275 (ATCC 18199); and Monascus ruber SANK 18174 (Ferm 4957).

15 Deze micro-organismen zijn allen uit erkende collecties verkrijgbaar en zijn met de volgende codes aangegeven.15 These microorganisms are all available from recognized collections and are identified by the following codes.

IFO = Institute for Fermentation, Osaka, Japan.IFO = Institute for Fermentation, Osaka, Japan.

Ferm = Fermentation Eesearch Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of Inter-20 national Trade and Industry, Japan; NIHS = National Institute of Hygenic Sciences, Japan; CBS = Centraal Bureau voor Schimmelculturen, Nederland; ATCC = American Type Culture Collection, Maryland, U.S.A.Ferm = Fermentation Eesearch Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of Inter-20 national Trade and Industry, Japan; NIHS = National Institute of Hygenic Sciences, Japan; CBS = Central Bureau for Mold Cultures, the Netherlands; ATCC = American Type Culture Collection, Maryland, U.S.A.

De stammen van het geslacht Monascus waaraan volgens de 25 werkwijze der uitvinding ter bereiding van Monacoline K-zouten de voorkeur wordt gegeven zijn Monascus ruber SANK 10671, Monascus ruber SANK 11272, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 en Monascus ruber SANK 18174, Monascus ruber SANK 10671, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 en Monascus ruber SANK 18174, en zijn alien door Aanvraag-30 ster onlangs uit de bodem geïsoleerde schimmels met de volgende microbiologische eigenschappen:The strains of the genus Monascus preferred according to the method of the invention for the preparation of Monacoline K salts are Monascus ruber SANK 10671, Monascus ruber SANK 11272, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 and Monascus ruber SANK 18174, Monascus ruber SANK 10671, Monascus ruber SANK 13778, Monascus ruber SANK 15177 and Monascus ruber SANK 18174, and are alien fungi recently isolated from the soil by Application 30 star with the following microbiological properties:

Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956)Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956)

Dit geslacht is geïsoleerd uit de bodem in Tukimino, :: Yamato-City, Kanagawa-prefectuur, Japan en op 27 april 1979 onder No. 4956 35 bij het eerdergenoemde Fermentation Research Institute gedeponeerd.This genus has been isolated from the soil in Tukimino, :: Yamato-City, Kanagawa Prefecture, Japan and on April 27, 1979 under No. 4956 35 deposited with the aforementioned Fermentation Research Institute.

Het geslacht groeit bij 25°G goed op een aardappel-glucose-agar-medium en levert een oplosbaar gekleurd materiaal met in het medium een geel-bruine tot rood-bruine kleur en vormt cleistothecen op de basale hyphenlaag.The genus grows well on a potato-glucose agar medium at 25 ° G and yields a soluble colored material with a yellow-brown to red-brown color in the medium and forms cleistotheces on the basal hyphen layer.

8004303 t ·* -5-8004303 t * -5-

Op havermeel-agar-agar-medium ontstaat een lichtbruin gekleurd materiaal en treedt een goede groei op. De vorming van sferische cleistothecen met een diameter van 30-60 micron op korte stengels is goed.A light brown colored material is formed on oatmeal agar medium and good growth occurs. The formation of spherical cleistotheces with a diameter of 30-60 microns on short stems is good.

De stengels zijn vrijwel kleurloos en vertakt met afmetingen van 25-60 x 5 3,5-5,0 micron. De asci verdwijnen en zijn dus moeilijk waar te nemen. De ascosporen zijn kleurloos en ellipsoidevorming en bezitten afmetingen van **,5-6,5 x **,0-5,0 micron met een glad oppervlak. De conidien zijn aan hun basis met elkaar verbonden en bezitten afmetingen van 7,0-10,0 x 6,0-10,0 micron. Hun weefsels zijn gescheurd.The stems are nearly colorless and branched with dimensions of 25-60 x 5 3.5-5.0 microns. The asci disappear and are therefore difficult to observe. The ascospores are colorless and ellipsoidal in shape and have dimensions of ** 5-6.5 x **, 0-5.0 microns with a smooth surface. The conidien are bonded together at their base and have dimensions of 7.0-10.0 x 6.0-10.0 microns. Their tissues are torn.

10 Hoewel de stam bij 37°C groeit wordt de beste groei tussen 23°C 'en 30°C waargenomen.Although the strain grows at 37 ° C, the best growth between 23 ° C and 30 ° C is observed.

Monascus ruber SANK 10671 (Ferm **958) ·Monascus ruber SANK 10671 (Ferm ** 958)

Deze stam is geïsoleerd uit de bodem in Shinagawa-ku,This trunk has been isolated from the soil in Shinagawa-ku,

Tokio, Japan en op 27 april 1979 onder no. **958 bij het eerdergenoemde 15 Fermentation Research Institute gedeponeerd.Tokyo, Japan and deposited with the aforementioned 15 Fermentation Research Institute on April 27, 1979 under No. ** 958.

De groei op aardappel-glucose-agar-agar- en havermeel-agar-agar-medium komt overeen met die van de stam SANK 15177, behalve dat de gevormde oplosbare kleurstof donkerrood is. De diameter van de cleistothecen bedraagt 30-80 micron en de afmetingen van de stengels zijn 30-70 20 x 3,0-5,0 micron. Asci werden niet waargenomen. De ascosporen zijn kleurloos en ellipsvormig met afmetingen van **,5-6,5 x **,0-5,0 micron. De conidien zijn kleurloos en pyrivormig of eivormig met afmetingen van 6,0-10,0 x 6,0-8,5 micron.The growth on potato glucose agar and oatmeal agar medium is similar to that of the strain SANK 15177, except that the soluble dye formed is dark red. The diameter of the cleistothecians is 30-80 microns and the dimensions of the stems are 30-70 20 x 3.0-5.0 microns. Asci were not observed. The ascospores are colorless and elliptical with dimensions of **, 5-6.5 x **, 0-5.0 microns. The conidien are colorless and pyri-shaped or ovoid with dimensions of 6.0-10.0 x 6.0-8.5 microns.

Monascus ruber SANK 13778 (FERM **959).Monascus ruber SANK 13778 (FERM ** 959).

25 Deze stam is geisoleerd uit de bodem in Inawashiro-cho,25 This trunk is isolated from the soil in Inawashiro-cho,

Nagata, Yama-gun, Fukushima-prefectuur, Japan en op 27 april 1979 onder No. **959 bij het eerdergenoemde Fermentation Research Institute gedeponeerd.Nagata, Yama-gun, Fukushima Prefecture, Japan and April 27, 1979 under No. ** 959 deposited with the aforementioned Fermentation Research Institute.

De groei op aardappel-glucose-agar-agar- en havermeel-agar-agar-medium komt overeen met die van de stam SANK 15177, behalve dat 30 het gevormde oplosbare gekleurde materiaal licht roodbruin tot roodbruin is. De cleistothecen bezitten een diameter van 35-75 micron en de stengels afmetingen van 30-70 x 3,5-5,0 micron. Asci worden niet waargenomen. De ascosporen zijn kleurloos en ellipsvormig met afmetingen van **,5-6,0 x **,0-5,0 micron en een glad oppervlak. De afmetingen van de conidien be-35 dragen 7,0-10,0 x 6,0-10,0 micron.The growth on potato glucose agar and oatmeal agar medium is similar to that of the strain SANK 15177, except that the soluble colored material formed is light reddish brown to reddish brown. The cleistotheces are 35-75 microns in diameter and the stems are 30-70 x 3.5-5.0 microns in diameter. Asci are not observed. The ascospores are colorless and elliptical with dimensions of **, 5-6.0 x **, 0-5.0 microns and a smooth surface. The dimensions of the conidien are 7.0-10.0 x 6.0-10.0 microns.

Monascus ruber SANK 1817** (FERM **957).Monascus ruber SANK 1817 ** (FERM ** 957).

Deze stam is geisoleerd uit de bodem in Shakotan-cho, Shakotan-gun, Shiribeshi Shicho, Kokkaido-prefectuur, Japan en op 27 april 1979 onder No. **957 bij het eerdergenoemde Fermentation Research Institute snru3 03 -6- gedeponeerd.This trunk has been isolated from the soil in Shakotan-cho, Shakotan-gun, Shiribeshi Shicho, Kokkaido Prefecture, Japan and on April 27, 1979 under No. ** 957 deposited with the aforementioned Fermentation Research Institute snru3 03-6-.

De groei op aardappel-glueose-agar-agar- en havermeel-agar-agarmedium koot overeen met die van de stam SANK 15177» behalve dat het gevormde gekleurde materiaal lichtrose is· De cleistothecen bezitten 5 een diameter van 20-70 micron en de afmetingen van de stengels bedragen 20-60 x 5,0-5,0 micron. Asci werden niet waargenomen. De ascosporen zijn kleurloos en ellipsvormig en bezitten afmetingen van 5»0-7»0 x 4,0-5,5 micron en een glad oppervlak. De conidien zijn aan hun basis onderling verbonden en kleurloos en de meeste van hen zijn pyrivormig en bezitten 10 afmetingen van 6,0-9,5 x 6,0-10,0 micron.The growth on potato glueose agar agar and oatmeal agar medium was similar to that of the strain SANK 15177 »except that the colored material formed is light pink · The cleistotheces have a diameter of 20-70 microns and the dimensions of the stems are 20-60 x 5.0-5.0 microns. Asci were not observed. The ascospores are colorless and elliptical and have dimensions of 5 0-7 0 x 4.0-5.5 microns and a smooth surface. The conidien are interconnected at their base and colorless and most of them are pyri-shaped and have dimensions of 6.0-9.5 x 6.0-10.0 microns.

Op basis van bovengenoemde eigenschappen werden deze micro-organismen geïdentificeerd als behorende tot de stam Monascus ruber van Tieghem.Based on the above mentioned properties, these micro-organisms were identified as belonging to the strain Monascus ruber van Tieghem.

De microbiologische eigenschappen van Monascus ruber 15 zijn vermeld in de onderstaaande literatuur: Takada, Transactions of the Micrological Society of Japan, j?, 125-1350 (19&9) (material for the Fungus Flora of Japan (7) en van Tieghem, Bull, Soc. Botan, France, 31, 227 (188½). De ascosporenvorming van de stam is gerapporteerd door Cole et al in de Canadian Journal of Botany, 46, 987 (1968), "Conidium ontogeny in 20 hyphomycetes. The imperfect state of Monascus ruber and its meristem arthro6poΓes,,.The microbiological properties of Monascus ruber 15 are stated in the literature below: Takada, Transactions of the Micrological Society of Japan, j ?, 125-1350 (19 & 9) (material for the Fungus Flora of Japan (7) and van Tieghem, Bull, Soc. Botan, France, 31, 227 (188½). The ascospore formation of the strain has been reported by Cole et al in the Canadian Journal of Botany, 46, 987 (1968), "Conidium ontogeny in 20 hyphomycetes. The imperfect state of Monascus ruber and its meristem arthro6poΓes ,,.

Behalve de bovengenoemde schimmelstammen kan men volgens de werkwijze der uitvinding ook de schimmels van het geslacht Monascus, de variëteiten en mutaties inbegrepen, die in staat zijn Monacoline K-25 zouten te leveren, gebruiken.In addition to the above fungal strains, the fungi of the genus Monascus, including the varieties and mutations, which are capable of providing Monacoline K-25 salts, may also be used in accordance with the method of the invention.

Monacoline K kan door kweken van het gekozen micro-orga-nisme in een kweekmedium onder aerobe omstandigheden en onder toepassing van de methoden die algemeen voor het kweken van schimmels en andere micro-organismen bekend zijn, worden verkregen. Men kan bijvoorbeeld de gekozen 30 Monascus-stam eerst op een geschikt medium kweken, de gevormde micro-organismen verzamelen en op een ander medium enten en kweken onder vorming van het gewenste Monacoline K-zout. Men kan voor de vermenigvuldiging van het micro-organsime en voor de vorming van Monacoline K-zout hetzelfde medium of andere media gebruiken.Monacoline K can be obtained by culturing the selected microorganism in a culture medium under aerobic conditions and using the methods commonly known for culturing fungi and other microorganisms. For example, the selected Monascus strain can first be grown on a suitable medium, collected the microorganisms formed, and seeded on another medium and grown to form the desired Monacoline K salt. The same medium or other media can be used for the multiplication of the micro-organism and for the formation of Monacoline K salt.

33 Voor het kweken van schimmels kan elk bekend kweekmedium, dat de nodige bekende voedingsbestanddelen, in het bijzonder een assimileerbare koolstof-stikstofbron bevat, worden gebruikt. Voorbeelden van geschikte assimileerbare koolstofbronnen zijn, glucose, maltose, dextrine, zetmeel, lactose, sucrose en glycerine, waarbij aan glucose, glycerine en 8004303 + * zetmeel de / voorkeur wordt gegeven. Voorbeelden van geschikte assimileerbare stikstof-bronnen zijn pepton, vleesextract, gist, gistextract, sojabonenmeel, aard-notenmeel, mais-weekvloeistof, rijstzeoelen en anorganische stikstofbronnen, waarbij in het bijzonder aan pepton de voorkeur wordt gegeven, Bij de 5 bereiding van Monacoline K-zout kan zonodig een anorganisch zout en/of metaalzout aan het kweekmedium worden toegevoegd· Voorts kan, indien nodig ook een gering? hoeveelheid van een zwaar metaal worden toegevoegd. Bij de bereiding van Monacoline K-zouten door fermentatie met een schimmel van het geslacht Monascus is het van belang dat in het kweekmedium of binnen-10 in de schimmel metaalionen aanwezig zijn die overeenkomen met de metaal-zouten die men wenst te bereiden.Any known culture medium containing the necessary known nutrient components, in particular an assimilable carbon nitrogen source, can be used for fungal cultivation. Examples of suitable assimilable carbon sources are glucose, maltose, dextrin, starch, lactose, sucrose and glycerine, with glucose, glycerine and 8004303 + * starch being preferred. Examples of suitable assimilable nitrogen sources are peptone, meat extract, yeast, yeast extract, soybean meal, groundnut meal, corn soaking liquid, rice seals and inorganic nitrogen sources, with peptone being particularly preferred. In the preparation of Monacoline K- if necessary, an inorganic salt and / or metal salt can be added to the culture medium. Furthermore, if necessary, a small amount? amount of a heavy metal. In the preparation of Monacoline K salts by fermentation with a fungus of the genus Monascus, it is important that metal ions are present in the culture medium or within the fungus corresponding to the metal salts that one wishes to prepare.

In het bijzonder verdient het de voorkeur de micro-orga-nismen eerst op een aardappel-dextrose-agarmedium (bijvoorbeeld een pro-dukt van Difco Company) te kweken en daarna op een ander kweekmedium te 15 enten en te kweken onder vorming van het gewenste Monacoline K-zout.In particular, it is preferred to first culture the microorganisms on a potato dextrose agar medium (eg, a product from Difco Company) and then seed and culture on another culture medium to form the desired Monacoline K salt.

Het micro-organisme wordt bij voorkeur gekweekt onder aerobe omstandigheden onder toepassing van bekende kweekmethoden, bijvoorbeeld een vaste kweek, een schudkweek of kweken onder beluchting en roeren.The microorganism is preferably grown under aerobic conditions using known culture methods, for example, solid culture, shake culture, or culture under aeration and stirring.

Het micro-organisme groeit bij sterk uiteenlopende températren, dat wil 20 zeggen tussen 7°C en 35°C, waarbij in het bijzonder bij de vorming vanThe microorganism grows at widely varying temperature ranges, ie between 7 ° C and 35 ° C, particularly in the formation of

OO

Monacoline K of een Monacoline K-zout, een kweektempeatuur van 20 C tot 30°C de voorkeur verdient.Monacoline K or a Monacoline K salt, a culture temperature of 20 C to 30 ° C is preferred.

Tijdens het kweken van het micro-organisme kan de vorming van Monacoline K nagegaan worden door monsters van het kweekmedium 23 te nemen en de fysiologische werkzaamheid van Monacoline K-zout in het kweekmedium volgens de hierna beschreven proeven te bepalen. Het kweken kan dan voortgezet worden tot een aanzienlijke opeenhoping van Monacoline K-zout in het kweekmedium is bereikt, waarna het Monacoline K-zout geïsoleerd en uit de kweekvloeistof gewonnen kan worden en de weefsels van de 30 micro-organismen met behulp van elke geschikte combinatie van isolatie-methoden, rekening houdend met de fysische en chemische eigenschappen. Bijvoorbeeld kunnen één of meer van de volgende isolatiemethoden toegepast worden, extractie van de vloeistof uit het kweekmedium met een hydrofiel oplosmiddel (bijvoorbeeld diethylether, ethylacetaat of chloroform); 35 extractie van het organisme met een hydrofiel, oplosmiddel (zoals aceton of een alcohol); concentratie, bijvoorbeeldίΑόστ verdampen van het gehele of een deel van het oplosmiddel onder verminderde druk; oplossen in een meer polair oplosmiddel (bijvoorbeeld aceton of een alcohol); verwijdering van verontreinigingen met een minder polair oplosmiddel (zoals petroleum-onn Π Π7 -8- ether of hexaan); gel-filtratie door een kolom met een materiaal zoals Sephadex (in de handel verkrijgbaar produkt van Pharmacia, Co·, Ltd· U.S.A.); absorptiechromatografie met aktieve kool of silicagel; snelle vloeistof-chromatografie, omzetting in Monacoline K zelf of het basis'zuur; direkte 5 zuivering in de vorm van het metaalzout; en andere soorgelijke methoden·During the cultivation of the microorganism, the formation of Monacoline K can be monitored by taking samples of the culture medium 23 and determining the physiological activity of Monacoline K salt in the culture medium according to the tests described below. Culturing can then be continued until a significant build-up of Monacoline K salt in the culture medium is reached, after which the Monacoline K salt can be isolated and recovered from the broth and the tissues of the microorganisms using any suitable combination of isolation methods, taking into account physical and chemical properties. For example, one or more of the following isolation methods can be used, extraction of the liquid from the culture medium with a hydrophilic solvent (e.g. diethyl ether, ethyl acetate or chloroform); Extraction of the organism with a hydrophilic, solvent (such as acetone or an alcohol); concentration, for example, ΑόΑόΑόστ evaporating all or part of the solvent under reduced pressure; dissolving in a more polar solvent (e.g. acetone or an alcohol); removal of impurities with a less polar solvent (such as petroleum one-Π Π7-8 ether or hexane); gel filtration through a column with a material such as Sephadex (commercially available product from Pharmacia, Co., Ltd., U.S.A.); absorption chromatography with active carbon or silica gel; rapid liquid chromatography, conversion to Monacoline K itself or the base acid; direct purification in the form of the metal salt; and other similar methods

Door toepassing van een geschikte combinatie van deze methoden kan het gewenste Monacoline K-zout als een zuivere stof uit het kweekmedium geïsoleerd worden·By using an appropriate combination of these methods, the desired Monacoline K salt can be isolated as a pure substance from the culture medium

Zoals in de genoemde octrooiaanvragen beschreven, kan 10 Monacoline K zelf ook met behulp van de bovenbeschrevm micro-organismen en methoden bereid worden.As described in the aforementioned patent applications, Monacoline K itself can also be prepared with the aid of the micro-organisms and methods described above.

De fysiologische werkzaamheid van Monacoline K-zouten en esters kan onder toepassing van de volgende proeven die ook in gewijzigde vorm kunnen worden toegepast, kwantitatief onderzocht en bepaald 15 worden om de bereiding van Monacoline K-zouten volgens de fermentatie-werkwijze der onderhavige uitvinding doorlopend te kunnen controleren· 1« Remming van cholesterolbiosynthese.The physiological activity of Monacoline K salts and esters can be quantitatively tested and determined using the following tests, which can also be used in modified form, to continuously prepare the preparation of Monacoline K salts by the fermentation process of the present invention. can control · 1 «Inhibition of cholesterol biosynthesis.

Zoals Monacoline K zelf, remmen Monacoline K-zouten en -esters in het bijzonder de werking van 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA-20 reductase, dat het snelheidsbepalende enzym bij de biosynthese van cholesterol is. In Tabel A zijn de concentraties (in n©/nl) van de verbindingen volgens de uitvinding aangegeven die de werking van 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl(HMG)-CoA-reductase met 50$ afremmen (zoals bepaald volgens de methode beschreven in Analytical Biochemistry, 31» 3^3 (1969)) en de 25 concentraties in ng/ml van de verbinding volgens de uitvinding die de cholesterolbiosynthese met 50$ afremt (zoals gemeten volgens de methode beschreven in Journal of Biological Chemistry, 2*t7. ^91½ (1972))· Ook de overeenkomtige resultaten van de bekende verbindingen ML-236B (een verbinding die een soortgelijke werking bezit en die door kweken van micro-30 organismen van het geslacht Penicillium bereid worden, beschreven in het Britse octrooischrift 1.^53*^25) zijn aangegeven· Verder zijn aangegeven de concentratie van Monacoline K zelf die de cholesterolbiosynthese met 50$ remt* Het blijkt nu dat wanneer de concentratie van ML-236B, nodig om de cholesterolbiosynthese met 50$ te remmen, 10,0 ng/ml bedraagt, de 35 overeenkomstige concentratie van Monacoline K-esters 1 ng/ml bedraagt (dat wil zeggen ongeveer 10 x beter),, terwijl de overeenkomstige con- .centratie van het natriumzout van Monacoline K ongeveer 0,14 ng/ml bedraagt(d.w.z.ongeveer 70 x beter). De werking van de zouten en esters van Monacoline K kunnen worden vergeleken met of zijn beter/" „ dan die van Monacoline K zelf. _ _ Λ _ F' 800 43 03 V t -9- _TABEL A_Like Monacoline K itself, Monacoline K salts and esters, in particular, inhibit the action of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA-20 reductase, which is the rate-determining enzyme in cholesterol biosynthesis. Table A shows the concentrations (in n © / nl) of the compounds of the invention which inhibit the action of 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl (HMG) -CoA reductase by 50% (as determined by the method described in Analytical Biochemistry, 31-3 ^ 3 (1969)) and the concentrations in ng / ml of the compound of the invention which inhibits cholesterol biosynthesis by 50% (as measured by the method described in Journal of Biological Chemistry, 2 * t7. ^ 91½ (1972)) Also the similar results of the known compounds ML-236B (a compound having a similar effect and prepared by cultivation of microorganisms of the genus Penicillium, are described in British Patent 1 . ^ 53 * ^ 25) are indicated · Also indicated are the concentration of Monacoline K itself which inhibits cholesterol biosynthesis by $ 50 * It now appears that when the concentration of ML-236B, necessary to inhibit cholesterol biosynthesis, $ 10 .0 ng / ml The corresponding concentration of Monacoline K esters is 1 ng / ml (ie about 10x better), while the corresponding concentration of the sodium salt of Monacoline K is about 0.14 ng / ml (ie about 70 x better). The performance of the salts and esters of Monacoline K can be compared to or better than that of Monacoline K itself. _ _ Λ _ F '800 43 03 V t -9- _ TABLE A_

Concentratie (ng/ml) voor de afremming met HMG-CoA-reductase cholesterolbiosynthese 5 methylester 70,0 1,2 ethylester 12,0 1,3 butylester 15,0 2,0 benzylester 11,0 1,1 natriumzout 2,0 0,14 10 calciumzout 12,0 1,8Concentration (ng / ml) for inhibition with HMG-CoA reductase cholesterol biosynthesis 5 methyl ester 70.0 1.2 ethyl ester 12.0 1.3 butyl ester 15.0 2.0 benzyl ester 11.0 1.1 sodium salt 2.0 0 , 14 10 calcium salt 12.0 1.8

Monacoline K - 2,0 ML - 236b 10,0 10,0 15 2. Verlaging van het cholesterolgehalte in bloed en lever bi.i ratten.Monacoline K - 2.0 ML - 236b 10.0 10.0 15 2. Reduction in blood and liver cholesterol levels in rats.

De bij de proef gebruikte dieren waren ratten van de stam Wistar Imamichi met een lichaamsgewicht van ongeveer 300 g. De proeven werden uitgevoerd met groepen van elk 5 ratten. Elk dier werd intraveneus met kQQ mg/kg Triton WR-1339 (een handelsprodukt, waarvan 20 bekend is dat het het cholesterolgehalte in het bloed verhoogt) ingespoten, terwijl gelijktijdig oraal een van de verbindingen in Tabel B met de in de tabel aangegeven hoeveelheden werd toegediend. 20 Uren na orale toediening werden de ratten gedood door aderlating, het bloed en de levers verzameld en de cholesterolgehalten met behulp van de gebruikelijke 25 middelen bepaald. De resultaten zijn in Tabel B samengevat waarin de verlaging van het cholesterolgehalte in het bloed en in de lever vergeleken wordt mé die van een blanco groep ratten die alleen Triton WR-1339 hadden ontvangen.The animals used in the experiment were rats of the Wistar Imamichi strain with a body weight of about 300 g. The tests were performed with groups of 5 rats each. Each animal was injected intravenously with kQQ mg / kg Triton WR-1339 (a commercial product, 20 known to increase blood cholesterol), while simultaneously administering one of the compounds in Table B in the amounts indicated in the table administered. 20 hours after oral administration, the rats were sacrificed by bloodletting, blood and livers collected and cholesterol levels determined by conventional means. The results are summarized in Table B comparing the decrease in blood and liver cholesterol levels with that of a blank group of rats receiving only Triton WR-1339.

Ter vergelijking, worden de overeenkomstige resultaten 30 van Monacoline K zelf en van ML-236B gegeven, waarbij deze verbindingen echter in aanzienlijk grotere hoeveelheden dan die van de verbinding volgens de uitvinding worden toegediend om een vergelijkbare verlaging van het cholesterolgehalte te verkrijgen.For comparison, the corresponding results of Monacoline K itself and of ML-236B are given, however, these compounds are administered in considerably greater amounts than those of the compound of the invention to obtain a comparable reduction in cholesterol levels.

35 8004303 -10- _TABEL B________35 8004303 -10- _TABLE B________

Verlaging cholesterolgehalte in % Verbinding Dosis mgAg bloed lever methylester 5 23,8 18,½ 5 ethylester 5 23,3 18,0 butylester 5 19,5 15*7 benzylester 5 18,5 natriumzout 2 27,5 18,9 calciumzout 5 21,½ 17»1 10-—-Reduction in cholesterol level in% Compound Dose mgAg blood liver methyl ester 5 23.8 18, ½ 5 ethyl ester 5 23.3 18.0 butyl ester 5 19.5 15 * 7 benzyl ester 5 18.5 sodium salt 2 27.5 18.9 calcium salt 5 21 , ½ 17 »1 10 -—-

Monacoline K 10 22,½ 16,½ ML-236B to 2^6 20,9Monacoline K 10 22, ½ 16, ½ ML-236B to 2 ^ 6 20.9

De verlaging van het cholesterolgehalte in bloed of 1_(c - B) 15 lever volgt uit de formule —£·· g — x 100 , waarin A het gehalte in de groep aangeeft die alleen met Triton WB-1339 is behandeld; B het gehalte in de onbehandelde blancogroep en C het gehalte in de proefgroep.The reduction in blood cholesterol or liver (c - B) 15 follows from the formula - £ g - x 100, where A indicates the level in the group treated with Triton WB-1339 only; B the content in the untreated blank group and C the content in the test group.

3. Acute giftigheid.3. Acute toxicity.

De onderzochte verbindingen waren de methyl-, ethyl-, 20 butyl- en benzylesters en de natrium- en calciumzouten van Monacoline K* Men heeft gevonden dat de 5C$’s lethale dosis (LD^q) van deze verbindingen tenminste 2000 mg/kg bij orale toediening en tenminste 500 mg/kg bij intraperitoneale toediening bedroeg. De giftigheid van de verbindingen is dus zeer laag.The compounds tested were the methyl, ethyl, butyl and benzyl esters and the sodium and calcium salts of Monacoline K *. The 5C $ lethal dose (LD ^ q) of these compounds was found to be at least 2000 mg / kg for oral administration and at least 500 mg / kg for intraperitoneal administration. Thus, the toxicity of the compounds is very low.

25 Uit deze resultaten volgt dat de verbindingen volgens de uitvinding de biosynthese van de cholesterol remmen, daardoor het cholesteolgehalte in bloed verlagen en dus waardevolle geneesmiddelen zijn bij de behandeling van hyperlipemie en arteriosclerosis.From these results it follows that the compounds according to the invention inhibit the biosynthesis of the cholesterol, thereby lowering the cholesteol level in blood and thus are valuable drugs in the treatment of hyperlipemia and arteriosclerosis.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen oraal of 30 parenteraal worden toegediend in de vorm van capsules, tabletten, injek-tiepreparaten of elk andere bekende vorm, hoewel gewoonlijk de voorkeur wordt gegeven aan orale toediening. De dosis varieert afhankelijk van de leeftijd, het lichaamsgewicht van de patient en de ernst van de toestand, maar in het algemeen bedraagt de dagelijkse hoeveelheid voor vol-35 wassenen bij voorkeur 0,1-100 mg, meer in het bijzonder 1-10 mg voorThe compounds of the invention can be administered orally or parenterally in the form of capsules, tablets, injection preparations or any other known form, although oral administration is usually preferred. The dose varies depending on the age, body weight of the patient and the severity of the condition, but generally the daily amount for adults is preferably 0.1-100 mg, more preferably 1-10 mg. in front of

Monacoline K-zouten en 0,5-100 mg, bij voorkeur 0,5-10 mg voor Monacoline K-esters.Monacoline K salts and 0.5-100 mg, preferably 0.5-10 mg for Monacoline K esters.

De bereiding van de verbindingen volgens de uitvinding wordt aan de hand van de volgende voorbeelden nader toegelicht· 800 4303 ψ \ -11-The preparation of the compounds according to the invention is further illustrated by the following examples: 800 4303 ψ \ -11-

VOORBEELD IEXAMPLE I

Natrimnzout van Monacoliae K.Natrimn salt from Monacoliae K.

Men brengt 300 1 van een kweekmedium ret een pH vóór sterilisatie van 5,5, dat 5$ gew/vol. glucose, 0,5# gew/vol. maiskweek-5 vloeistof, 2# gew/vol. pepton (merk Kyokuto, produkt van Kyokuto Seiyaku KK, Japan) en 0,5# gew/vol. ammoniumchloride bevat, in een fermentatie-tank van 600 liter en ent met het organisme Monascus ruber SANK 1817^ (Ferm ^957)· Men kweekt het organisme 116 uren bij 26°C met een beluch-tingssnelheid van 300 liter/min. en een roersnelheid van 190 omw./min.300 L of culture medium is brought to a pH before sterilization of 5.5, which is 5 wt / vol. glucose, 0.5 # w / v. corn culture-5 liquid, 2 # w / v. peptone (Kyokuto brand, product of Kyokuto Seiyaku KK, Japan) and 0.5 # w / v. contains ammonium chloride, in a 600 liter fermentation tank and inoculates with the organism Monascus ruber SANK 1817 ^ (Ferm ^ 957). The organism is grown at 26 ° C for 116 hours at an aeration rate of 300 liters / min. and a stirring speed of 190 rpm.

10 Hierna wordt de pH van het cultuurmedium dat het organisme bevat door toevoeging van 6N zoutzuur op 3Λ ingesteld, waarna het medium met 800 liter methanol wordt geëxtraheerd.After this, the pH of the culture medium containing the organism is adjusted to 3Λ by adding 6N hydrochloric acid, after which the medium is extracted with 800 liters of methanol.

Men voegt 6 kg Hyflo Super Cel toe, waarna men het ex-trakt met een filterpers filtreert waardoor men 1100 liter methanolextrakt 15 verkrijgt. Men wast dit extrakt met 200 liter van een verzadigde oplossing van natriumchloride in water en vervolgens met 180 liter ethylcyclo-hexaan. De verkregen oplossing wordt met 600 liter ethyleendichloride geëxtraheerd en aan het ethyleendichloride-extrakt 50 g trifluorazijnzuur toegevoegd, waarna men 30 minuten bij 80°C laat reageren. Het reaktie-20 mengsel wordt nu achtereenvolgens met 200 1 van een 2#’s gew./vol. oplossing van natriumbicarbonaat in water en met 200 liter van een 10#'s gew./vol. oplossing van natriumchloride in water gewassen. Daarna concentreert men het mengsel door indampen onder verminderde druk en verkrijgt 135 g van een olieachtige stof.6 kg of Hyflo Super Cel are added and the extract is filtered with a filter press to obtain 1100 liters of methanol extract. This extract is washed with 200 liters of a saturated aqueous sodium chloride solution and then with 180 liters of ethylcyclohexane. The resulting solution is extracted with 600 liters of ethylene dichloride and 50 g of trifluoroacetic acid are added to the ethylene dichloride extract and the mixture is allowed to react for 30 minutes at 80 ° C. The reaction-20 mixture is now successively filled with 200 l of a 2 # w / v. solution of sodium bicarbonate in water and with 200 liters of a 10 # w / v. solution of sodium chloride in water. The mixture is then concentrated by evaporation under reduced pressure to obtain 135 g of an oily substance.

25 Men lost de olieachtige stof op in **00 ml methanol en onderwerpt 20 ml van de verkregen methanoloplossing (die 6,8 g olie bevat) aan preparatieve snelle vloeistofchromatografie in een Waters Co. Ltd.The oily substance is dissolved in ** 00 ml of methanol and 20 ml of the obtained methanol solution (containing 6.8 g of oil) is subjected to preparative liquid chromatography in a Waters Co. Ltd.

System 500» uitgerust met een Prepac C^g kolom (omgekeerde fasekolom). Als ontwikkelaar gebruikt men een mengsel van methanol en water in de volume-30 verhouding 85 : 15· Men ontwikkelt bij een stroomsnelheid van 200 ml/min.System 500 »equipped with a Prepac C ^ g column (inverted phase column). The developer used is a mixture of methanol and water in the volume ratio of 85: 15. Development is carried out at a flow rate of 200 ml / min.

(ontwikkeltijd ongeveer 10 minuten), en leest een differentiaalrefrakto-meter af die verbonden is met het lichaam, waarbij men de fraktie die de hoogste piek op de differentiaalrefraktometer aangeeft afscheidt. Na herhaling van deze behandeling verzamelt men de verkregen frakties met de 35 hoogste pieken en concentreert onder vorming van 10,2 g van een olieachtige stof. Men lost de olieachtige stof op in 30 ml methanol en onderwerpt 6 ml van de methanoloplossing (die ongeveer 2 g olie bevat) opnieuw aan dezelfde preparatieve snelle vloeistofchromatografie, waarbij men met een mengsel van methanol en water met een volumeverhouding van 80 : 20 en een flOIU 3 03 -12- stroomsnelheid van 200 ml/min. ontwikkelt· Se fraktie met de hoogste piek wordt afgescheiden. Se bewerking wordt herhaald en de frakties met de hoogste pieken verzameld en geconcentreerd. Men behandelt het residu met methanol en water waardoor men 1170 mg ruwe kristallen verkrijgt, die men 5 enige malen uit ethanol herkristalliseert onder vorming van 864 mg kridallen.(development time about 10 minutes), and reads a differential refractometer connected to the body, separating the fraction indicating the highest peak on the differential refractometer. After repeating this treatment, the fractions obtained with the highest peaks are collected and concentrated to give 10.2 g of an oily substance. The oily substance is dissolved in 30 ml of methanol and 6 ml of the methanol solution (containing about 2 g of oil) is again subjected to the same preparative rapid liquid chromatography, using a mixture of methanol and water with a volume ratio of 80:20 and a flOIU 3 03 -12- flow rate of 200 ml / min. develops · Se fraction with the highest peak is separated. The operation is repeated and the highest peak fractions are collected and concentrated. The residue is treated with methanol and water to give 1170 mg of crude crystals, which is recrystallized from ethanol several times to give 864 mg of crystals.

Aan deze kristallen voegt men 19,4 ml van een 0,1N oplossing van natriumhydroxyde in water toe en roert het mengsel 3 uren bij 50-60°C. Men filtreert de onoplosbare bestanddelen af en droogt het 10 filtraat uit bevroren toestand waardoor men 900 mg natriumzout van Monacoline K verkrijgt met de volgende eigenschappen: 1. Kleur en vorm: wit poeder 2. Elementair analyse:To these crystals, 19.4 ml of a 0.1N aqueous sodium hydroxide solution is added and the mixture is stirred at 50-60 ° C for 3 hours. The insolubles are filtered off and the filtrate is dried from the frozen state, whereby 900 mg of the sodium salt of Monacoline K are obtained, with the following properties: 1. Color and form: white powder. 2. Elemental analysis:

Berekend : C, 64,84%, H, 8,38%, Na, 5,1?% 15 Gevonden : C, 64,78%, H, 8,53%, Na, 5,21% 3. Molecuulgewicht: 444 (massaspectrometrie (F.B.Mass.)) 4. Molecuulformule: C^H^OgNa 5. Ultravioletabsorptiespectrum: zie Fig. 1 van de tekening, \max : 20 232 nm (log , = 4,30) 239 um (log ï = 4,36) 248 nm (log = 4,19) 6. Infraroodabsorptiespectrum (KBr korrel):Calculated: C, 64.84%, H, 8.38%, Na, 5.1%, Found: C, 64.78%, H, 8.53%, Na, 5.21%. 3. Molecular weight: 444 (Mass Spectrometry (FBMass.)) 4. Molecular Formula: C ^ H ^ OgNa 5. Ultraviolet Absorption Spectrum: See Fig. 1 of the drawing, \ max: 20 232 nm (log, = 4.30) 239 µm (log ï = 4.36) 248 nm (log = 4.19) 6. Infrared absorption spectrum (KBr grain):

Zie Fig. 2 van de tekening; 25 7. Kernmagnetisch resonantiespectrum (BgO):See Fig. 2 of the drawing; 25 7. Nuclear magnetic resonance spectrum (BgO):

Zie Fig. 3 van de tekening; 8. Snelle vloeistofchromatografie:See Fig. 3 of the drawing; 8. Rapid liquid chromatography:

Tijdsduur: 8,8 minutenDuration: 8.8 minutes

Kolom, Microbondapac C18; 30 60%'s vol/vol waterige methanol + 0,1%'s PIC-A (van de firma Waters Co. Ltd.); Stroomsnelheid 1,5 ml/min.Column, Microbondapac C18; 60% vol / vol aqueous methanol + 0.1% PIC-A (from Waters Co. Ltd.); Flow rate 1.5 ml / min.

Zie Fig. 4 van de tekening 9. Oplosbaarheid:See Fig. 4 of the drawing 9. Solubility:

Oplosbaar in water, onoplosbaar in organische oplos-35 middelen; 10. Soortelijke rotatie: M d5 = +266° (c = °i33, water).Soluble in water, insoluble in organic solvents; 10. Specific rotation: M d5 = + 266 ° (c = ° i33, water).

VOOBBEELB IIEXAMPLE B II

Natriumzout van Monacoline K.Sodium salt of Monacoline K.

800 4 3 03 * « -13-800 4 3 03 * «-13-

Men brengt 300 liter van een kweekmedium met een pH 7,k vóór sterilisatie, dat 1,5$ gew/vol. oplosbaar zetmeel, 1,5$ gew/vol glycerol, 2$ gew/vol· vismeel en 0,2$ gew/vol· calciumcarbonaat bevat, in een fermentatietank van 600 1 en ent met het organisme Monascus ruber 5 SANK 17075 (CBS 832.70). Men kweekt het organisme 120 uren bij 2ó°C met een beluchtingssnelheid van 300 1/min. en een roersnelheid van 190 omw/ min. Vervolgens filtreert men de kweekvloeistof in een filterpers, waarbij men 35 hg (nat gewicht) van het organisme verkrijgt.300 liters of a culture medium of pH 7, k is introduced before sterilization, which is 1.5% w / v. contains soluble starch, 1.5 wt / vol glycerol, 2 wt / vol fish meal and 0.2 wt / vol calcium carbonate, in a 600 l fermentation tank and inoculate with the organism Monascus ruber 5 SANK 17075 (CBS 832.70 ). The organism is cultivated for 120 hours at 200C at an aeration rate of 300 rpm. and a stirring speed of 190 rpm. The broth is then filtered in a filter press to obtain 35 hg (wet weight) of the organism.

Hieraan voegt men 100 liter water toe en brengt onder 10 roeren de pH van het mengsel met natriumhydroxyde op 12. Men laat het mengsel 1 uur bij kamertempeatuur staan en voegt vervolgens 2 kg Hyflo Super Cel aan het mengsel toe dat men in een filterpers filtreert. Men brengt de pH van het filtraat door toevoegen van zoutzuur op 10 en absorbeert het verkregen mengsel in een kolom die 5 liter HP-20 hars bevat dat 15 gewassen is met 15 liter water en 15 liter van een 10$*s vol/vol oplossing van methanol en water. De kolom wordt vervolgens met 9C$'s vol/vol water-methanol geelueerd en het eluaat tot een volume van ongeveer 10 liter geconcentreerd, waarna men de pH door toevoegen van zoutzuur op 2 brengt en het mengsel met ethylacetaat extraheert. Men wast het extrakt met een ver-20 zadigde oplossing van natriumchloride in water, droogt boven watervrij natriumsulfaat en concentreert vervolgens door indampen tot droog onder vorming van 50 g van een olieachtige substantie die Monacoline K-zuur bevat. Aan de olieachtige stof voegt men methanol tot een totaal volume van 100 ml toe. Van de verkregen oplossing wordt 20 ml aan preparatieve snelle 25 vloeistofchromatografie onderworpen met behulp van een omgekeerde fase-kolom (zoals beschreven in Voorbeeld I) en met 2C$ vol/vol oplossing van methanol in water (die 2% azijnzuur bevat) bij een stroomsnelheid van 200 ml/min. geelueerd. De fraktie die op de differentiaalrefraktometer de hoogste piek toont wordt afgescheiden (7-10 minuten). De resterende 80 30 ml van de methanoloplossing behandelt men op dezelfde wijze. De verkregen frakties met de hoogste pieken worden verzameld, geconcentreerd en met ethylacetaat geëxtraheerd. Het extrakt wordt na toevoeging van heptaan tot droog ingedampt onder vorming van 1,2 g van een olieachtige stof.To this is added 100 liters of water and the pH of the mixture with sodium hydroxide is adjusted to 12 with stirring, the mixture is left for 1 hour at room temperature and then 2 kg of Hyflo Super Cel are added to the mixture which is filtered in a filter press. The pH of the filtrate is adjusted to 10 by adding hydrochloric acid and the resulting mixture is absorbed in a column containing 5 liters of HP-20 resin, which has been washed with 15 liters of water and 15 liters of a 10% vol / vol solution. of methanol and water. The column is then eluted with 9% vol / vol water-methanol and the eluate is concentrated to a volume of about 10 liters, after which the pH is adjusted to 2 by adding hydrochloric acid and the mixture is extracted with ethyl acetate. The extract is washed with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate, and then concentrated by evaporation to dryness to yield 50 g of an oily substance containing Monacolin K acid. Methanol is added to the oily substance to a total volume of 100 ml. 20 ml of the resulting solution is subjected to preparative rapid liquid chromatography using an inverse phase column (as described in Example I) and with 2C $ vol / vol solution of methanol in water (containing 2% acetic acid) at a flow rate of 200 ml / min. eluted. The fraction showing the highest peak on the differential refractometer is separated (7-10 minutes). The remaining 80 ml of the methanol solution is treated in the same manner. The highest peak fractions obtained are collected, concentrated and extracted with ethyl acetate. The extract is evaporated to dryness after addition of heptane to form 1.2 g of an oily substance.

Men lost het olieachtige produkt op in 20 mlnethanol, 35 onderwerpt aan snelle vloeistofchromatografie zoals hierboven beschreven en verkrijgt 150 ml Monacoline K-zuur. Hieraan voegt men 2 mlnethanol toe en 100 ml water toe en stelt de pH van de verkregen oplossing met 1N natriumhydroxyde in op 8 en verkrijgt een heldere waterige oplossing. Deze oplossing leidt men door een kolom die 10 ml HP-20 hars bevat, wast de 8004303 -14- kolom met 100 ml water en elueert met 80$ vol/vol methanol in water. Hen droogt het eluaat uit bevroren toestand en verkrijgt 130 mg natriumzout van Monacoline K in de vorm van een wit poeder. De eigenschappen van het produkt zijn gelijk aan die van het produkt van Voorbeeld I.The oily product is dissolved in 20 ml of ethanol, subjected to rapid liquid chromatography as described above and 150 ml of Monacoline K-acid are obtained. To this is added 2 ml of ethanol and 100 ml of water and the pH of the resulting solution is adjusted to 8 with 1N sodium hydroxide and a clear aqueous solution is obtained. This solution is passed through a column containing 10 ml of HP-20 resin, the 8004303-14 column is washed with 100 ml of water and eluted with 80% v / v methanol in water. The eluate dries from a frozen state to obtain 130 mg of the sodium salt of Monacoline K in the form of a white powder. The properties of the product are the same as those of the product of Example I.

5 VOORBEELD IIIEXAMPLE III

Calciumzout van Monacoline K.Calcium salt from Monacoline K.

Men herhaalt de kweek, extraktie, concentratie, prepara-tieve snelle vloeistofchromatografie en herkristalliseert uit ethanol zoals beschreven in Voorbeeld I. Men lost 500 mg van de verkregen kristallen 10 op in 50 ml methyleenchloride en filtreert de verkregen oplossing door een milliporienfilter. Aan het filtraat voegt men 20 ml toe van een verzadigde oplossing van calciumhydroxyde in water en roert het mengsel krachtig bij kamertemperatuur. Zodra de pH van de oplossing 'beneden 8 daalt voegt men opnieuw 10 ml van een verzadigde oplossing van calciumhydroxyde in water 15 toe en roert verder. AI3 de pH niet meer daalt (na toevoegen van in totaal 50 ml van de oplossing van calciumhydroxyde in water) voegt men gedestilleerd water toe en brengt de gehele oplossing in een scheitrechter. Men verzamelt de organische fase en destilleert het oplosmiddel af. Men behandelt het residu met heptaan en verkrijgt als men het mengsel ultrasoon 20 behandelt een poeder. Men filtreert het poeder en droogt waardoor men 450 mg van het calciumzout van Monacoline K in de vorm van een wit poeder verkrijgt.The culture, extraction, concentration, preparative rapid liquid chromatography are repeated and recrystallized from ethanol as described in Example 1. 500 mg of the resulting crystals are dissolved in 50 ml of methylene chloride and the resulting solution is filtered through a millipore filter. 20 ml of a saturated aqueous solution of calcium hydroxide are added to the filtrate and the mixture is stirred vigorously at room temperature. As soon as the pH of the solution falls below 8, 10 ml of a saturated aqueous solution of calcium hydroxide are again added and the mixture is stirred. If the pH no longer drops (after adding a total of 50 ml of the aqueous calcium hydroxide solution), distilled water is added and the whole solution is placed in a separating funnel. The organic phase is collected and the solvent is distilled off. The residue is treated with heptane and, when the mixture is treated ultrasonically, a powder is obtained. The powder is filtered and dried to give 450 mg of the calcium salt of Monacoline K in the form of a white powder.

Dit calciumzout bezat de volgende eigenschappen.This calcium salt had the following properties.

1. Molecuulgewicht : 882 (massaspectrometrie)· 25 2. Molecuulformule: (C^H^Og^.Ca 3. Smeltpunt : 155-165°C (onder ontleding) 4. Soortelijke rotatie: ^ = +209° (c = 1,48, chloroform).1. Molecular weight: 882 (mass spectrometry) 25 2. Molecular formula: (C ^ H ^ Og ^. Ca 3. Melting point: 155-165 ° C (under decomposition) 4. Specific rotation: ^ = + 209 ° (c = 1 , 48, chloroform).

5. Infraroodabsorptiespectrum (KBr): 30 Zie Fig. 5 van de tekening.5. Infrared absorption spectrum (KBr): 30 See Fig. 5 of the drawing.

6. Kernmagnetisch resonantiespectrum (CD^OD):6. Nuclear magnetic resonance spectrum (CD ^ OD):

Zie Fig. 6 van de tekening.See Fig. 6 of the drawing.

VOORBEELD IVEXAMPLE IV

Methylester van Monacoline K.Methyl ester of Monacoline K.

35 Men herhaalt de kweek, extraktie, concentratie, prepara tieve snelle vloeistofchromatografie en herkristallisatie uit ethanol zoals beschreven in Voorbeeld I, waarbij men 864 mg Monacoline K verkrijgt. Men lost 200 mg Monacoline K op in 20 ml methanol (die tevoren met mole-cuulzeef 3A gedehydrateerd is). Na toevoegen van enkele druppels acetyl- 8004303 -15- chloride roert men de oplossing 3 uren bij kamertemperatuur. Men destilleert het oplosmiddel af en extraheert het residu met 50 ml ethylacetaat. Men wast het extrakt eerst met een 2#'s gew/vol. oplossing van natriumbicarbonaat in water en daarna met een verzadigde oplossing van natrium-5 chloride in water, waarna men boven watervrij natriumsulfaat droogt en het oplosmiddel afdestilleert· Het residu wordt in een kolom geadsorbeerd, die 10 g met benzeen behandeld silicagel (Wakogel C-100) bevat. Men verzamelt de frakties die met een mengsel van ethylacetaat en benzeen in de volumeverhouding 6 : 9** geelueerd zijn en destilleert het oplosmiddel af 10 onder vorming van 65 mg methylester van Monacoline K in de vorm van een kleurloze olie.The culture, extraction, concentration, preparative rapid liquid chromatography and recrystallization from ethanol are repeated as described in Example I, whereby 864 mg of Monacoline K are obtained. 200 mg of Monacoline K are dissolved in 20 ml of methanol (previously dehydrated with 3A molecular sieve). After adding a few drops of acetyl-8004303-15 chloride, the solution is stirred at room temperature for 3 hours. The solvent is distilled off and the residue is extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract is first washed with a 2 # 's w / v. aqueous sodium bicarbonate solution and then with a saturated aqueous sodium chloride solution, then dried over anhydrous sodium sulfate and the solvent distilled off · The residue is adsorbed in a column containing 10 g of benzene-treated silica gel (Wakogel C-100 ) contains. The fractions eluted with a mixture of ethyl acetate and benzene in the volume ratio of 6: 9 ** are collected and the solvent is distilled off to give 65 mg of methyl ester of Monacoline K as a colorless oil.

Dit produkt bezit de volgende eigenschappen: 1. Molecuulgewicht : **36,6 (massaspectrometrie); 2. Molecuulformule: C^H^Og; 15 3. Soortelijke rotatie: H,25 = +208° (c = 1,05 methanol).This product has the following properties: 1. Molecular weight: ** 36.6 (mass spectrometry); 2. Molecular formula: C 1 H 2 Og; 3. Specific rotation: H, 25 = + 208 ° (c = 1.05 methanol).

**. Infraroodabsorptiespectrum:**. Infrared absorption spectrum:

Zie Fig. 7 van de tekening; 5. Kernmagnetisch resonantiespectrum: 20 Zie Fig. 8 van de tekening.See Fig. 7 of the drawing; 5. Nuclear magnetic resonance spectrum: 20 See Fig. 8 of the drawing.

VOORBEELD VEXAMPLE V

Methylester van Monacoline K.Methyl ester of Monacoline K.

Men bereidt het natriumzout van Monacoline K zoals beschreven in Voorbeeld II, Vervolgens lost men 100 mg van het natriumzout 25 op in 2 ml dimethylsulfoxyde en voegt 50 jH methyljodide aan de oplossing toe. Men kookt de oplossing onder roeren 5 uren bij **0-50°C in een reak-tor voorzien van een terugvloeikoeler. Men verdunt het reaktiemengsel met 5 ml water en extraheert met 10 ml methyleenchloride. Men destilleert het oplosmiddel van het extrakt af en adsorbeert het residu in een kolom die 30 10 g tevoren met benzeen behandeld silicagel (Wakogel C-100) bevat. Men verzamelt de met een mengsel van ethylacetaat en benzeen in de volumeverhouding k : 96 geelueerde frakties en destilleert het oplosmiddel af waardoor men 35 mg van het methylester van Monacoline K in de vorm van een olie verkrijgt,The sodium salt of Monacoline K is prepared as described in Example II. Then 100 mg of the sodium salt 25 are dissolved in 2 ml of dimethyl sulfoxide and 50 µH of methyl iodide are added to the solution. The solution is boiled under stirring at ** 0-50 ° C for 5 hours in a refluxed reactor. The reaction mixture is diluted with 5 ml of water and extracted with 10 ml of methylene chloride. The solvent is distilled off from the extract and the residue is adsorbed into a column containing 10 g of previously benzene-treated silica gel (Wakogel C-100). The fractions eluted with the mixture of ethyl acetate and benzene in the volume ratio of K: 96 are collected and the solvent is distilled off to give 35 mg of the methyl ester of Monacoline K in the form of an oil.

35 VOORBEELD VIEXAMPLE VI

Ethylester van Monacoline K.Ethyl ester of Monacoline K.

Men lost 100 mg Monacoline K (bereiding zoals beschreven in Voorbeeld I) op in 15 ml ethanol die van tevoren met Molecuulzeef 3A gedehydrateerd is, waarna men enkele druppels acetylchloride aan de op- 800 43 03 -16- lossing toevoegt. Men roert het mengsel 3 uren bij kamertemperatuur, destilleert het oplosmiddel af en extraheert het residu met 50 ml ethylace-taat. Men wast het extrakt achtereenvolgens met een 2#'s gew/vol. oplossing van natriumbicarbonaat in water en een verzadigde oplossing van 5 natriumchloride in water waarna men boven watervrij natriumsulfaat droogt. Na afdestilleren van het oplosmiddel, adsorbeert men het residu in een kolom die 10 g tevoren met benzeen behandeld silicagel (Wakogel C-100) bevat. De frakties die met een mengsel van ethylacetaat en benzeen in de volumeverhouding 6 : 94 elueren verzamelt men en destilleert het oplos-<I0 middel af onder vorming van 30 mg ethylester van Monacoline K in de vorm van een kleurloze olie.100 mg of Monacoline K (preparation as described in Example I) are dissolved in 15 ml of ethanol previously dehydrated with molecular sieve 3A, after which a few drops of acetyl chloride are added to the solution. The mixture is stirred at room temperature for 3 hours, the solvent is distilled off and the residue is extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract is washed successively with 2 # w / v. aqueous sodium bicarbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution, then dried over anhydrous sodium sulfate. After distilling off the solvent, the residue is adsorbed in a column containing 10 g of previously benzene-treated silica gel (Wakogel C-100). The fractions eluting with a mixture of ethyl acetate and benzene in the volume ratio 6:94 are collected and the solvent distilled off to give 30 mg of ethyl ester of Monacoline K as a colorless oil.

De eigenschappen van deze verbinding zijn als volgt: 1. Molecuulgewicht : 450,6 (massaspectrometrie).The properties of this compound are as follows: 1. Molecular weight: 450.6 (mass spectrometry).

2. Molecuulformule : 3. Infraroodabsorptiespectrum (CHCl^):2. Molecular formula: 3. Infrared absorption spectrum (CHCl ^):

Zie Fig. 9 van de tekening.See Fig. 9 of the drawing.

4. Kernmagnetisch resonantiespectrum (CDCl^):4. Nuclear magnetic resonance spectrum (CDCl ^):

Zie Fig. 10 van de tekening.See Fig. 10 of the drawing.

VOORBEELD VIIEXAMPLE VII

20 Butylester van Monacoline K.20 Butyl ester from Monacoline K.

Men lost 200 mg Monacoline K (bereid zoals beschreven in Voorbeeld I) op in 20 ml butanol dat tevoren met een molecuulzeef 3A gedehydrateerd is. Na toevoegen van enkele druppels acetylchloride aan de oplossing roert men het mengsel 2 uren bij kamertemperatuur. Men destil-25 leert het oplosmiddel af en extraheert het residu met 50 ml ethylacetaat. Men wast het extrakt achtereenvolgens met 2# gew/vol. natriumbicarbonaat in water en een verzadigde oplossing van natriumchloride in water. Men droogt de oplossing boven watervrij natriumsulfaat en destilleert het oplosmiddel af. Men adsorbeert het residu in een kolom die 10 g tevoren met 50 benzeen behandeld silicagel (Wakogel C-100) bevat. Men verzamelt de frak-tie die met een mengsel van ethylacetaat en benzeen in de volumeverhouding 4 : 96 elueert en destilleert het oplosmiddel af waardoor men 80 mg butylester van Monacoline K in de vorm van een kleurloze olie verkrijgt.200 mg of Monacoline K (prepared as described in Example I) are dissolved in 20 ml of butanol previously dehydrated with a 3A molecular sieve. After adding a few drops of acetyl chloride to the solution, the mixture is stirred at room temperature for 2 hours. The solvent is distilled off and the residue is extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract is washed successively with 2 # w / v. sodium bicarbonate in water and a saturated solution of sodium chloride in water. The solution is dried over anhydrous sodium sulfate and the solvent is distilled off. The residue is adsorbed into a column containing 10 g of 50 benzene-treated silica gel (Wakogel C-100). The fraction which is eluted with a mixture of ethyl acetate and benzene in the volume ratio of 4: 96 is collected and the solvent is distilled off to give 80 mg of the butyl ester of Monacoline K as a colorless oil.

De verbinding bezit de volgende eigenschappen: 35 1. Molecuulgewicht : 478,7 (massaspectrometrie).The compound has the following properties: 1. Molecular weight: 478.7 (mass spectrometry).

2. Molecuulformule: ^28^46^6 3. Infraroodabsorptiespectrum (CHCl^):2. Molecular formula: ^ 28 ^ 46 ^ 6 3. Infrared absorption spectrum (CHCl ^):

Zie Fig. 11 van de tekening.See Fig. 11 of the drawing.

4. Kernmagnetisch resonantiespectrum (CDCl^): 8004303 -17-4. Nuclear magnetic resonance spectrum (CDCl ^): 8004303 -17-

Zie Fig. 12 van de tekening.See Fig. 12 of the drawing.

VOORBEELD VIIIEXAMPLE VIII

Benzylester van Monacoline K.Benzyl ester from Monacoline K.

Men lost 200 mg Monacoline K (bereid zoals beschreven 5 in Voorbeeld I) op in 20 ml benzylalcohol dat tevoren met molecuulzeef 3A gedehydrateerd is. Na toevoegen van enkele druppels acetylchloride aan de oplossing roert men het verkregen mengsel 3 uren bij kamertemperatuur. Men destilleert het oplosmiddel af en extraheert het residu met 50 ml ethylacetaat. Men wast het extrakt achtereenvolgens met een 2$’s gew/vol. 10 oplossing van natriumbicarbonaat in water en een verzadigde oplossing van natriumchloride in water. Men droogt de oplossing boven watervrij natriumsulfaat en destilleert het oplosmiddel af. Het residu wordt in een kolom, die 10 g vooraf met benzeen behandeld silicagel (Wakogel G-100) bevat, geadsorbeerd. De frakties die met een mengsel van ethylacetaat en 15 benzeen in een volumeverhouding k : 96 elueren worden verzameld en het oplosmiddel gedestilleerd waardoor men 70 mg benzylester van Monacoline K in de vorm van kleurloze olie verkrijgt.200 mg of Monacoline K (prepared as described in Example I) are dissolved in 20 ml of benzyl alcohol previously dehydrated with molecular sieve 3A. After adding a few drops of acetyl chloride to the solution, the resulting mixture is stirred at room temperature for 3 hours. The solvent is distilled off and the residue is extracted with 50 ml of ethyl acetate. The extract is washed successively with a 2 wt / vol. A solution of sodium bicarbonate in water and a saturated solution of sodium chloride in water. The solution is dried over anhydrous sodium sulfate and the solvent is distilled off. The residue is adsorbed in a column containing 10 g of pre-treated benzene silica gel (Wakogel G-100). The fractions eluting with a mixture of ethyl acetate and benzene in a volume ratio of k: 96 are collected and the solvent is distilled to give 70 mg of the benzyl ester of Monacoline K in the form of colorless oil.

De verbinding bezit de volgende eigenschappen: 1. Molecuulgewicht : 512,6 (massaspectrometrie).The compound has the following properties: 1. Molecular weight: 512.6 (mass spectrometry).

20 2. Molecuulformule : W2. Molecular formula: W

3. Infraroodabsorptiespectrum (CHCl^):3. Infrared absorption spectrum (CHCl ^):

Zie Fig. 13 van de tekening.See Fig. 13 of the drawing.

Kernmagnetisch resonantiespectrum (CDCl^):Nuclear magnetic resonance spectrum (CDCl ^):

Zie Fig. 14 van de tekening.See Fig. 14 of the drawing.

25 800430325 8004303

Claims

1. Compounds having anti-hypercholesterethetic activity of the general formula 1 of the formula sheet, wherein R represents a metal atom or an unsubstituted or substituted alkyl group and n the inverse of the dignity of the atom or group represented by R ·

Monacoline K salts according to claim 1, characterized in that R represents a metal atom

Salts according to claim 2, characterized in that the metal atom is sodium, potassium, calcium, magnesium, aluminum, iron, zinc, copper, nickel or cobalt · k. Salts according to claim 3, characterized in that the metal is sodium, calcium or aluminum

Monacoline K esters according to claim 1, characterized in that R represents an unsubstituted or substituted alkyl group and n represents the number 1 ·

Esters according to claim 5, characterized in that R represents an alkyl group, an aralkyl group or an acylalkyl group.

Esters according to claim 6, characterized in that R represents an alkyl group, an aralkyl group or an arylcarbonylalkyl group.

Esters according to claim 7, characterized in that R represents an alkyl group, a substituted or unsubstituted benzyl group or a substituted or unsubstituted phenacyl group. Esters according to claim 8, characterized in that R represents an alkyl group, a a benzyl group or a benzyl group with 1 or more alkyl, alkoxy or halo substituents, a phenacyl group or a phenacyl group with one or more alkyl, alkoxy or halo substituents · 10 · Esters according to claim 5 », characterized in that R is a methyl -, ethyl, butyl or benzyl group

11. Process for the preparation of Monacoline K salts and esters, characterized in that Monacoline K or a reactive derivative thereof is converted into a salt or ester.

12. Process according to claim 11, characterized in that the reactive derivative is the basic acid of Monacoline K or a Monacoline K salt ·

The process according to claim 11, characterized in that the Monacoline K esters are prepared by reacting a halide of formula RX (wherein R represents an alkyl-8004303-19 group which is not substituted or X and a halogen atom). with a Monacoline K salt.

14. Process according to claim 11, characterized in that the Monacoline K esters are prepared by reacting an alcohol of the formula EOH (in which E represents an unsubstituted or substituted alkyl group 5) with Monacoline K or the basic acid thereof, in the presence of a dehydrating agent.

15. Process for the preparation of Monacoline K salts, characterized in that a Monacoline K salt-forming microorganism of the genus Monascus is grown in a suitable culture medium and the Monacoline K salt is separated from the culture medium.

16. A method according to claim 15, characterized in that said microorganism of the genus Monascus: Monascus anka SANK 10171 (IFO 65 ^ 0); Monascus nurourous SANK 10271 (IFO 4513); Monascus ruber SANK 1067I (Ferm 4958); Monascus vitreus SANK 10960 15 (NIHS 609, e-609; Ferm 4960); Monascus paxii SANK 11172 (IFO 8201); Monascus ruber SANK 11272 (IFO 9203); Monascus ruber SANK 13778 (Ferm 4959); Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956); Monascus ruber SANK 17075 (CBS 832.70); Monascus ruber SANK 17175 (CBS 503 * 70); Monascus ruber SANK 17275 (AiPCC 18199)? or Monascus ruber is SANK 18174 (Ferm 4957).

Method according to claim 15, characterized in that said microorganism: Monascus ruber SANK 10671 (Ferm 4958); Monascus ruber SANK 11272 (IFO 9203); Monascus ruber SANK 13778 (Ferm 4959); Monascus ruber SANK 15177 (Ferm 4956); Monascus ruber SANK 1817 ^ (Ferm 4957). 18. Method according to claim 15, characterized in that the metal is: sodium, potassium, calcium, magnesium, aluminum, iron, zinc, copper, nickel or cobalt.

Process according to claim 18, characterized in that the metal is sodium, calcium or aluminum.

A process for the preparation of a medicament, characterized in that a compound of formula 1, wherein the substituents have the aforementioned meaning, is brought into a form suitable for medical administration. 800 4 3 03 35