NO153298B

NO153298B - Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive n-methylenderivater av thienamycin

Info

Publication number: NO153298B
Application number: NO763958A
Authority: NO
Inventors: Burton Grant Christensen; William Joseph Leanza; Kenneth James Wildonger
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1975-11-21
Filing date: 1976-11-19
Publication date: 1985-11-11
Also published as: SG10983G; NL189297C; AU512383B2; GB1570990A; HU180865B; CA1083577A; CH633800A5; BG34037A3; DK157401B; FR2332012B1; PH16714A; IE44433L; NL7612939A; PL110937B1; EG12261A; DD127742A5; AT358168B; DK157401C; DE2652679C2; DK523576A

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en analogifremgangsmåte ved fremstilling av terapeutisk sktive substituerte N-metnylen-derivater av thienamycin. Slike forbindelser og deres farma-søytisk godtagbare salter og estere er nyttige som antibiotica.

Thienamycin er omtalt og beskrevet i US patent

nr. 3 950 357.

Thienamycin har følgende struktur:

Det er et fortsatt behov for nye antibiotica.

Uheldigvis er der ingen statisk effektivitet av et gitt antibioticum fordi fortsatt vid anvendelse av et hvilket som helst slikt antibioticum selektivt bevirker dannelsen av resistente stammer av patogener. Dessuten lider de.kjente antibiotica av den ulempe at de er virksomme bare mot visse typer av mikroorganismer. Søkingen etter nye antibiotica fortset-er følgelig.

Det har uventet vist seg at fremgangsmåteforbindelsene er bredspektrede antibiotica som er nyttige i dyre- og humanterapi, og i livløse systemer.

Det er et mål ved foreliggende oppfinnelse å fremstille en ny gruppe antibiotica som har den basiske ring-struktur av thienamycin (I), men som bétegnes som substituerte N-methylenderivater derav. Disse antibiotica er virksomme mot et bredt område av patogener som representativt innbefatter både grampositive bakterier som S. aureus, Strep. pyogenes og B. subtilis og gramnegative bakterier som E. coli, Proteus morganii, K.lebsiella, Serratia og Pseudomonas. Videre mål er å fremstille ikke-giftige farmasøytisk godtagbare salter og estere derav.

De substituerte N-methylen-thienamycin-derivater som fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse, kan betegnes ved følgende strukturformel:

og p-t-butylbenzyl-, 3-methyl-2-buten-l-yl- og pivaloxymethyl-esterne derav, og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori R^" er hydrogen, alkyl med 1-6 carbonatomer, alkenyl med 2- 6 carbonatomer, cyano, cycloalkyl eller cycloalkenyl med 3- 6 carbonatomer, alkylthioalkyl, carboxyalkyl eller 2dialkyl-amino med 1-6 carbonatomer, trifluorethyl eller benzyl, og R er hydrogen 12 12 eller R og R er alkyl med 1-6 carbonatomer eller R og R sammen med nitrogenatomet er piperidyl, og R er hydrogen, fenyl pyridyl, thiazolyl, amino, aminoalkyl, azidoalkyl, alkyl, trifluormethyl, alkoxyalkyl, thioalkyl eller alkyloxalimid med 1-6 carbonatomer i alkylgruppene og alkenyl med 2-6 carbonatomer, eller hvor R er -OR3 eller -SR<a> hvori Ra er methylbenzyl, ethylallyl, 2-thienylmethallyl, p-nitrobenzyl eller CH3~0-CH2.

Fremgangsmåteforbindelsene fremstilles bekvemt fra thienamycin (I) eller et egnet carboxylderivat derav.

Slike carboxylderivater av thienamycin har strukturformel:

hvor gruppen (R 3') innbefatter konvensjonelle beskyttende eller carboxyl-blokkerende grupper. Uttrykket "blokkerende grupper" er her anvendt på samme måte og i henhold til læren i US patent nr. 3 697 515.

Utgangsmaterialene Ic fremstilles i henhold til følgende skjema; men det bør merkes at direkte forestring, uten be-skyttelse av aminogruppen, også er mulig.

11 2 1

hvor X' = 0, R og R er acyl og Th betegner thienamycin-skjelettet. R 3 1 er som tidligere angitt.

I alminnelighet utføres overføringen (1—>Ic) ved

kjente konvensjonelle metoder. Slike metoder innbefatter:

1) Omsetning av 1 (eller I) med et diazoalkan som diazomethan, fenyldiazomethan, ■ difenyldiazomethan og lignende,

i et oppløsningsmiddel som dioxan, ethylacetat, acetonitril og lignende, ved en temperatur fra 0° C til tilbakeløpstemperatu-

ren i fra noen få minutter til 2 timer.

2) Omsetning av et alkalimetallsalt av 1 med et

aktivert alkylhalogenid som methyljodid, benzylbromid, eller m-fenoxybenzylbromid, p-t-butylbenzylbromid, pivaloyloxymethyl-klorid og lignende. Passende reaksjonsbetingelser innbefatter oppløsningsmidler som hexamethylfosforamid og lignende, ved en temperatur fra 0° til 60° C i fra noen få minutter til 4 timer.

3) Omsetning av 1 med en alkohol som methanol,

ethanol, benzylalkohol og lignende. Denne reaksjon kan utfø-

res i nærvær av et carbodiimid-kondenseringsmiddel som di-cyclohexylcarbodiimid eller lignende. Passende oppløsningsmid-

ler, ved en temperatur fra 0° C til tilbakeløpstemperaturen for fra 15 minutter til 18 timer, innbefatter kloroform, methyl-

klorid, methylenklorid og lignende.

4) Omsetninq av et N-acylert syreanhydrid av 1 fremstilt ved å omsette den frie syre l^med et syreklorid som ethylklorformiat, benzylklorformiat og lignende, med en alko-

hol som de som er angitt under 3) under de samme reaksjonsbetingelser som angitt for 3). Anhydridet fremstilles ved å om-

sette 1^ og syrekloridet i et oppløsningsmiddel som tetrahydro-

furan (THF), methylenklorid og lignende, ved en temperatur fra 25° C til tilbakeløpstemperaturen fra 15 minutter til 10 timer.

5) Omsetning av labile estere av 1 som trimethyl-silylesteren, dimethyl-t-butylsilylesteren eller lignende, med R^ X° hvor X° er halogen som brom eller klor, og R^ er som

ovenfor angitt, i et oppløsningsmiddel som THF, methylenklorid eller lignende, ved en temperatur fra 0° C til tilbakeløpstem-peraturen i fra 15 minutter til 16 timer. For eksempel i henhold til følgende skjema:

hvor TMS er triorganosilyl som trimethylsilyl, og de andre symboler er som ovenfor angitt.

Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er Kjennetegnet ved at en forbindelse med formel:

eller et egnet carboxylderivat derav: omsettes med en imidoester: eller et imidohalogenid: hvori -X°R" er en forlatende gruppe og X' er halogen, X° er 0 eller S, og R ] , R 2 og R er som ovenfor angitt, eller omsettes med en forbindelse av formel:

hvori -X"R° er en fjernbar gruppe hvori X" er oxygen eller svovel, og R <1> og R 2er H eller C-^-Cg alkyl, eller at de erholdte forbindelser forestres eller omdannes til salter på kjent måte.

Passende oppløsningsmiddel avhengig av identiteten av thienamycin-substratet og reagenset, innbefatter vann, dioxan, tetrahydrofuran (THF), dimethylformamid (DMF, kloroform, aceton, acetonitril eller blandinger derav. Reaksjonen utføres ved en temperatur fra 0°C til ca. 25°C i fra 1 til ca. 6 timer. Det er intet kritisk med hensyn til den nøyaktige identitet av reaksjons-oppløsningsmidlet eller de variable med reaksjonen innen de ovenfor beskrevne grenser, forutsatt bare at reaksjonsmidlet er inert eller i det vesentlige inert overfor det påregnede reaksjonsforløp. Passende reagenser inkluderer representativt:

a) Imido-estere:

Methyl-formimidat, ethyl-formimidat, methyl-acetimidat, ethyl-acetimidat, methyl-benzimidat, ethyl-4-pyridyl-carboximidat, methyl-fenylacetimidat, methyl-3-thienyl-carboximidat, methyl-azidoacetimidat, methyl-kloracetimidat, methyl-cyclohexylcar-boximidat, methyl-2-furylcarboximidat, methy1-p-nitrobenzimidat, methyl-2,4-dimethoxybenzimidat, ethyl-N-methyl-formimidat, methyl-N-methyl-formimidat, methy1-N-isopropyl-formimidat og lignende.

Slike imidoesterreagenser (a) fremstilles bekvemt ved en hvilken som helst av en rekke kjente metoder, som: 1) Omsetningen av et nitril, RCN, med en lavere alkanol i nærvær av HC1 i henhold til den velkjente Pinner-syntese. 2) Omsetningen av et nitril, RCN, med en lavere alkanol i nærvær av en base. Typisk utføres reaksjonen ved 0 - 40° C i nærvær av et overskudd av alkoholen med en kataly-tisk mengde av et alkalimetallalkoxyd i fra 15 minutter til 4 timer. ^ 3) Omsetningen av et amid, RC" NHR , med et alkyl-klorformiat, som methylklorformiat ved 25 - 45° C i 1 - 4 timer.

4) Omsetningen av et N-substituert amid,

O O

"1 "12

RCNHR eller RCNR R , med en ekvivalent av et alkyleringsmid-del som triethyloxonium-fluorborat i et inert oppløsningsmiddel som ether, kloroform eller lignende, ved 0 - 23° C i fra 10 minutter til 2 timer. 5) Overføringen av en lett tilgjengelig imidoester, RCNR' (R<1> kan være hydrogen), til den ønskede imidoester, OR" RCNR"<1>", ved omsetning av den førstnevnte med et alkylamin, R'NH2, OR" 1 en blanding av vann og et ublandbart oppløsningsmiddel som ether eller kloroform, ved 0 - 23° C i fra 5 minutter til 1 time. b) Substituerte imidohalogenider: Klorpiperidino-methyliumklorid, klordimethylforminium-

klorid, klordiethyl-forminium-klorid og lignende.

Slike imidohalogenidreagenser (b) fremstilles be-

kvemt ved en hvilken som helst av en rekke kjente metoder som:

1) Omsetningen av et N,N-disubstituert amid,

0

"12

RCNR R , med et halogeneringsmiddel som thionylklorid, fosgen, fosforpentaklorid eller lignende, i et inert oppløsningsmiddel som kloroform, methylenklorid og lignende, ved 0 - 40° C i 1 -

5 timer.

X"R°

12I

(b) - OR- pseudoureaer og - SR- pseudothioureaer: R R N =NR

O-methyl-pseudourea, S-methylpseudothiourea, S-methyl-pseudothionitrourea, 0-2,4-diklorfenyl-pseudourea, S-p-nitro-fenyl-pseudothiourea, O-N,N-trimethylpseudourea og lignende.

Reaksjonen som involverer reagensene (a), kan represen-

tativt vises ved det følgende diagram:

hvor OR" er den uttredende gruppe av imidoesterreagenset, og

3<1> 3 3'

R, R , R og X' er som ovenfor angitt og R' er H eller R

3 3'

Denne reaksjon er særlig egnet for utførelsesformer hvor R og R er hydrogen, og X<1> er oxygen.

Reaksjonen som involverer reagensene (b), kan representativt vises ved følgende diagram:

hvor alle symboler er som ovenfor angitt. Når produkt 2 ønskes

3 31

er passende R og R trimethylsilyl og X<1> er oxygen.

Reaksjonen som involverer reagensene (c), kan representativt vises ved følgende diagram:

3<1> 1 2

hvor X<1>, R , R og R er som ovenfor angitt; X" er oxygen eller svovel, og R er som angitt og fortrinnsvis er lavere alkyl.

Passende oppløsningsmidler for slike reaksjoner innbe-

fatter vann og puffrede vandige polare organiske oppløsningsmid-delblandinger ved pH 7 - 9 eller vannfrie polare organiske opp-løsningsmidler som dimethylformamid eller hexamethylfosforamid ved en temperatur fra 0° til 40° C i fra 1 til 24 timer.

Fremgangsmåteforbindelsene (II) danner en lang rekke forskjellige farmakologisk godtagbare salter som syreaddisjonssalter, f.eks. med saltsyre, hydrogenbromid, svo-

velsyre, salpetersyre, toluen-p-sulfonsyre og methan-sulfonsyre.

Saltene av fremgangsmåteforbindelsene er farmakologisk godtagbare ikke-giftige derivater som kan anvendes som den aktive bestanddel i passende former av farmasøytiske enhetsdoser. De kan dessuten kombineres med andre droqer for å gi preparater med et bredt aktivitetsspektrum.

De nye fremgangsmåteforbindelser er verdifulle anti-

biotica som er aktive mot forskjellige gram-positive og gram-

negative bakterier, og følgelig finner anvendelse i human- og veterinærmedisinen. Fremgangsmåteforbindelsene kan derfor an-

vendes som antibakterielle droger for behandling av infeksjoner bevirket av gram-positive eller gram-negative bakterier, f .eks.

mot Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumo-

niae, Serratia, Salmonella typhosa, Pseudomonas og Bacterium proteus. De antibakterielle midler kan videre anvendes som tilsetninger til dyrefor for å konsentrere foret og som desin-feksjonsmidler .

Den antibakterielle aktivitet av enkelte av fremgangs-måtef orbindelsene er som følger:

Fremgangsmåteforbindelsene kan anvendes alene eller i kombinasjon som en aktiv bestanddel av en hvilken som helst av en rekke farmasøytiske preparater. Disse antibiotica og deres tilsvarende salter kan anvendes i kapselform eller som tablet-ter, pulvere eller flytende oppløsninger eller som suspensjoner eller eliksirer. De kan administreres oralt, intravenøst eller intramuskulært.

De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen. I eksemp-lene er thienamycin-ringsystemet (I) betegnet med følgende symbol: hvor den. sekundære alkoholgruppe, aminogruppen og carboxylgrup-pen er illustrert. Forbindelser som fremstilles ifølge oppfinnelsen, kan således bekvemt angis som følger:

hvor R, R 1 og R 2 er som ovenfor angitt.

Eksempel 1

Fremstilling av silylert thienamycin

80,0 mg thienamycin suspenderes i 40 ml tetrahydrofuran (THF) under en nitrogenatmosfære og inndampes til 10 ml;

1,0 ml- hexamethyldisilazan og 300 pl trimethylklorsilan tilsettes. Blandingen omsettes i 20 minutter ved 25° C under kraftig omrøring. Susensjonen sentrifugeres så for å fjerne ammonium-klorid. Den overstående væske inndampes til en olje under en nitrogenstrøm for videre omsetning.

Eksempel la

Fremstilling av thienamycin- N- piperidiir- l- yT- methylenderivat

57 mg (162 ymol) thienamycin silyleres ved den ovenfor beskrevne fremgangsmåte. Det silylerte antibioticum Th-(TMS)3 oppløses i 6 ml methylenklorid i en skillevegglukket kolbe under positivt nitrogentrykk og avkjøles i et tørris-acetonbad. Til den magnetisk omrørte oppløsning tilsettes 180 yl av en oppløsning av 644 ymol triethylamin i methylenklorid. Dette etterfølges av tilsetning av en oppløsning av 67 mg (405 ymol) klorpiperidinomethyliumklorid i 465 yl methylenklorid. Etter 1 time i tørrisbadet tilsettes reaksjonsoppløsningen hur- - tig til 50 ml tetrahydrofuran - pH 7, 0,1 N fosfatpuffer (1:1) oppløsning..Blandingen inndampes så under vakuum til 10 ml for å få en homogen oppløsning. Oppløsningen vaskes med 2 x 5 ml ethylacetat og 2 x 5 ml ether og pumpes kort under vakuum. Denne vandige oppløsning kromatograferes så på en "XAD-2" harpikskolonne (60 ml lag). Produktet elueres i 10 % vandig tetrahydrofuran (etter vanneluering) hvorved man får 12,9 mg (22 %) produkt (målt i oppløsning under antagelse av e = 8030, det samme som thienamycin. Papirkromatografi Rf 0,42 (4:1:5, n-butanol:ethanol:vann).

Eksempel 2

Fremstilling av N- benzimidoyl- thienamycin

59 mg (212 ymol) thienamycin oppløses i 4,5 ml av en 33 % N,N-dimethylformamid - pH 7 fosfatpuffer (0,05 N)-oppløs-ning og innstilles på pH 9,5 under anvendelse av 2,5N natriumhydroxyd med en automatisk byrette. Oppløsningen magnetomrøres ved 25° C og 340 mg (1981 ymol) methylbenzimidat-hydroklorid tilsettes én gang. Etter 30 minutter ekstraheres opløsningen to ganger med et like stort volum kloroform og innstilles med fortynnet vandig fosforsyre på pH 7,0. Den puffrede opløsning kromatograferes på 65 ml "XAD-2" harpiks. Kolonnen elueres først med vann fulgt av 10 % vandig tetrahydrofuran som eluerer produktet. Denne fraksjon inndampes til halvt volum og fryse-tørres hvorved man får 50 mg av produktet. Elektroforetisk mobilitet (50 V/cm, 20 min, pH 7 0,1 N fosfatpuffer) er 1,5 cm mot anoden. UV ^maks = 300 nm (e 6 960) pH 7 0,IN fosfatpuffer.

Eksempel 3

F remstilling av N- benzimidoyl- thienamycin, p- t- butylbenzyl- ester 3,2 mg benzimidoyl-thienamycin suspenderes i 75 1 hexamethylfosforamid inneholdende 3,8 yl p-t-butyl-benzylbromid og magnetomrøres ved 22° C. Etter 45 minutter fåes en oppløsning som omrøres i ytterligere 1 time. Produktet felles så fra oppløsningen med ether og råproduktet kromatograferes på en 250' ym tykk silicagelplate utviklet i 7:3, kloroform:ethanol. Båndet ved R^ 0,6 fjernes og elueres med ethanol hvorved man får N-benzimidoyl-thienamycin, p-t-butylbenzyl-ester-hydrobro-mid. Massespektr. m/e 521 (M<+>), 487, 444, 418, 341, 323, 297, 226, 147. Eksempel 4

Fremstilling av N-benzimidoyl-thienamycin-3-methyl-2-buten-1- yl- ester

5,9 mg benzimidoyl-thienamycin opløses i 100 yl hexamethylfosforamid inneholdende 4,8 yl l-brom-3-methyl-2-buten og 0,5 ul triethylamin og omrøres magnetisk ved 22° C. Etter 1 time kromatograferes den rå reaksjonsblanding på en 250 ym tykk silicagelplate utviklet i 8:2, kloroform:ethanol. Båndet for R f 0,1 - R^ 0,3 fjernes og elueres med ethanol. Benzimidoyl-thienamycin-3-methy1-2-buten-l-yl-ester-hydrobro-mid isoleres som et fast stoff etter felning fra en ethanol-kloroformoppløsning med hexan.

Eksempel 5

Fremstilling av N- formimidoyl- thienamycin

517 mg thienamycin oppløses i 25 ml pH 7 0,1N fosfatpuffer og avkjøles i et isbad under magnetrøring. Oppløsningen innstilles på pH 8,5 med 2,5N natriumhydroxydoppløsning avgitt fra en automatisk byrette. Under opprettholdelse av en pH på

8,5 tilsettes 711 mg methyl-formimidat-hydroklorid porsjonsvis i løpet av 2-3 minutter. Etter ytterligere 10 minutter bringes oppløsningens pH på 7,0 under anvendelse av 2,5N saltsyre.

Oppløsningen kromatograferes på en kolonne av 150 ml "XAD-2"-harpiks som elueres med vann. N-formimidoyl-thienamycinderiva-tet elueres i 1,5 - 2,0 kolonnevolum (200 - 300 ml) og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (217 mg).

UV (pH 7 0,1N fosfatpuffer) X . 297 nm (8 590).

_, maks

ir (Nujol grøt) 1767 cm (B-lactam)

nmr (D20) <fl, 37 (d, J=6Hz, CH3-CH) , 3,0 - 3,75

(m, -CH3-), 4,2 - 4,8 (m, <C>5H, CgH, C?H), 7,86

NH

(s, -C-H)

ETcsempel 6

Fremstilling av N- guanyl- thienamycin

8,9 mg thienamycin oppløses i 0,7 ml pH 7 0,IN fosfatpuffer og 0,3 ml N,N-dimethylformamid, og oppløsningen bringes på pH 9,5 ved tilsetning av 2,5N natriumhydroxydoppløsning. Til den magnetisk omrørte opløsning tilsettes 43 mg O-methyl-isourea-hydrogensulfat hvilket bevirker et svakt fall i pH. Ytterligere natriumhydroxydoppløsning tilsettes for å bringe pH tilbake til 9,5 og opløsningen omrøres i 30 minutter ved 23° C. Oppløsningen syres så til pH 7,0. En prøve av oppløs-ningen inneholdende en blanding av thienamycin og N-guanyl-thienamycin viser to biotisk aktive soner etter elektroforese (50 V/cm, 20 minutter, 0,05N pH 7 fosfatpuffer) og biotauto-grafi på S. aureus-plater.

Eksempel 7

Fremstilling av N- guanyl- thienamycin

11 mg thienamycin oppløses i 1 ml pH 7 0,IN fosfatpuffer og innstilles på pH 8,3 med 0,1N natriumhydroxyd ved hjelp av en automatisk byrette. Til den magnetisk omrørte opp-løsning tilsettes 76 mg 0-2,4,5-triklorfenylisourea-hydroklorid porsjonsvis for å tillate den automatiske byrette å opprett-holde en nesten konstant pH. Reaksjonen får forløpe i 4 timer ved 22° C og blandingen innstilles så igjen på pH 7,0 ved tilsetning av fortynnet syre. En prøve av denne oppløsning inneholdende thienamycin og N-guanyl-thienamycin underkastes elektroforese (50 VOcm, 25 minutter, pH 7 0,1N fosfatpuffer) og viser en positiv Sakaguchi-spraysone ved 2,0 cm mot anoden og en positiv ninhydrin-spraysone ved 1,5 cm i samme retning.

Eksempel 8

Fremstilling av N- dimethylaminomethylen- thienamycin

16,5 mg thienamycin silyleres med 200 yl hexamethyldisilazan og 60 yl trimethylklorsilan på vanlig måte. Det silylerte thienamycin suspenderes i 1 ml ethanol-fri kloroform under magnetrøring under nitrogenatmosfære. Blandingen avkjø-les til -45° C og en oppløsning av 21 yl triethylamin i 21 yl

kloroform tilsettes fulgt av en oppløsning av 11,5 mg (klor-methylen)-dimethylammoniumklorid i 50 yl kloroform. Blandingen oppvarmes til -25° C i løpet av 1 time og 5 ml Q,IN pH 7 fosfatpuffer tilsettes. Blandingen omrøres kraftig i 15 minutter. Vannfasen fraskilles og inneholder N-dimethylaminomethylen-thienamycin som har en elektroforetisk mobilitet (50 V/cm,

1 time, pH 7 puffer) på 3,6 cm mot katoden.

Eksempel 9

Fremstilling av N-formimidoyl - thienamycin-pivaloxymethyl-ester- hydrobromid 10 mg N-aminomethylen-thienamycin oppløses i 200 yl hexamethylfosforamid inneholdende 10 pl brommethyl-pivalat og 1 yl triethylamin og omrøres magnetisk ved 22° C. Etter 2 timer oppløses hexamethylfosforamidoppløsningen i 2 ml methylenklorid og produktet felles med en 50 % hexan-etheroppløsning. Bunnfallet opløses i en vandig 10 %-ig tetrahydrofuranopløs-ning og kromatograferes på en "XAD-2" harpikspakket kolonne. N-formimidoyl-thienamycin-ivaloxymethylester isoleres som et fast stoff etter tetrahydrofuraneluering av kolonnen og lyofiliseres.

E ksempel 10

Fr emstilling av N- trifluoracetimidoyl- thienamycin

19 9 mg thienamycin oppløses i 7 ml pH 7 Q,1N fosfatpuffer og innstilles på pH 8,5 med IN natriumhydroxydoppløs-ning. Under opprettholdelse av denne pH med en automatisk byrette tilsettes en oppløsning av 355 yl methyl-trifluoracet-imidat i 2,5 ml dioxan på én gang. Etter 30 minutter gjeninn-stilles pH på 7,0 ved tilsetning av IN saltsyre. Opløsningen kromatograf eres så på Dowex 50-X4<®>harpiks (200 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) og elueres med vann. N-trifluoracetimidoyl-thienamycinderivatet elueres i det første halve kolonnevolum. Dette eluat rekromatograferes på lignende måte på "Dowex 50-X4"

(100 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) og det første kolonnevolum inndampes og kromatograferes på 30 ml "XAD-2" harpiks. N-trifluoracetimidoyl-thienamycinderivatet elueres i 2,5 - 5,0 kolonnevolum som lyofiliseres til et hvitt fast stoff (15 mg).

UV (pH 7 0,1N fosfatpuffer) X . 302 nm (e 4 450).

_-i ms Jes

ir (Nujol grøt) 1750 cm (B-lactam).

Elektroforese: (50 V/cm, 20 min, pH 7, 0,1N fosfatpuffer)

mobilitet 2,0 cm (mot katoden)

Eksempel H Fremstilling av N- acetimidoyl- thienamycin

190 mg thienamycin oppløses i 13 ml pH 7 0,1N fosfatpuffer og avkj0j.es i et isbad under magnetisk omrøring. Opp-løsningen innstilles på pH 8,5 med 2,5N natriumhydroxydoppløs-ning avgitt fra en automatisk byrette. Under opprettholdelse av en pH på 8,5 tilsettes 400 mg ethyl-acetimidat-hydroklorid porsjonsvis i løpet av noen få minutter. Etter ytterligere 40 minutter innstilles oppløsningen på pH 7,0 med 2,5N saltsyre. Oppløsningen kromatograferes så på Dowex 50-X8® harpiks (250 ml, Na<+> formen, 100 - 200 mesh) og elueres med vann. N-acetimidoyl-derivatet elueres i 1 - 2 kolonnevolum (240 - 520 ml)

og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (88 mg).

UV (pH 7 0,1N fosfatpuffer) *maks 297 nm (e 7 620).

ir (Nujol grøt) 1774 cm ^, 3-lactam. viti nmr (D20)<fl,27 (d, J=6 Hz, CH3-CH) 2,24 (S, -C-CH3)

3,2 - 3,5 (m, -CH2), 3,5 - 3,9 (m, -CH2~)

4,2 - 4,6 (m; <C>5H<,> C6R,<C>?H).

Eksempel 12

Fremstilling av N-[( 4- pyridyl)-( imino)- methyl]- thienamycin

80 mg (0,294 mmol) thienamycin oppløses i 24,7 mg (0,294,mmol i 2,0 ml) vandig natriumbicarbonat ved 25° C. 8Q

mg (0,588 mmol) methyl-isonicotinimidat oppløses i oppløsnin-gen og reaksjonsforløp følges med prøver tatt på visse tids-punkter under anvendelse av meget nøyaktig væskekromatografi (HPL): Waters instrument; 0,2 x 61 cm Clg "Bondapak reverse phase column"; 1,5 ml/min vandig 10 % THF; UV (254 nm) og R.I. monitorer. Reaksjonen er i det vesentlige fullstendig i løpet av 40 minutter, og reaksjonsoppløsningen kromatograferes direkte på en 18,4 x 270 mm "XAD" harpikskolonne idet det først elueres med avionisert, destillert vann, og derpå gåes over til vandig 10 % THF. Eluatet følges ved UV og HPLC anvendes for å bestem-me det rene produkt.. Riktige fraksjoner forenes og lyofiliseres hvorved man får et farveløst, voluminøst pulver (80 mg 73 %).

UV X ^2° 298 nm (e 7 888); IR (Nujol grøt) 1762 cm"1 (B-lactam) ; NMR (60 MHz, D20) , (fl, 27, 3H (d, J=7Hz, CH3H(CH)); éi ,75 og 8,80, 4H, (m, m, 4-pyridyl); EPLC, 1,58 x retensjon av thienamycin, betingelser som ovenfor.

Eksempel 13

Ved å følge fremgangsmåten i eksempel 12, men ved å erstatte reagenset med méthyl-picolinimidat, fåes: N-[(2-pyridyl)-(imino)-methyl]-thienamycin (85 mg 77 %)

UV A<H>2° 267, 300 nm (e 8 150), 7 600); IR (Nujol grøt)

rn 9. Tv s

1764 cm (B-lactam); NMR (60 MHz, D20), <f 1,24, 3H (d, J=7Hz, CH3-CH(OH)) ; 'cf 7 ,80 , 8,07, 8,80, 4H (m,m,m, 2-pyridyl); KPLC, 1,8 x retensjon av thienamycin.

Eksempel 14

Ved å følge fremgangsmåten i eksempel 12, men ved å erstatte reagenset med methyl-nicotinimidat, fåes: N-[(3-pyridyl-(imino)-methyl]-thienamycin (77 mg, 70 %) : UV XH2° 264, 299 nm, (e 5570, 6120); IR, (Nujol grøt),

mci.K.s

1766 cm (B-lactam); NMR, (60 MHz, D20), cf 1,24, 3H (d, J= 7Hz, CH3-CH(OH)); cf 7,6, 8,2, 8,9, 4H, (m,m,m, 3-pyridyl); HPLC, 1,57 x retensjon av thienamycin.

Eksempel 15

Ved å følge fremgangsmåten i eksempel 12, men ved å erstatte reagenset med methyl-4-thiazolcarboximidat, fåes: N-[(4-thiazolylimino)-methyl]-thienamycin (99 mg, 89 %): UV X H2? 300 nm, (e 7530); IR (nujol grøt) 1764 cm"1 (B- maks

lactam) ; NMR (60 MHz, D20) , cf 1,23, 3H, (d, J=7Hz, CH_3'CH(OH)); cf8,60, 9,17, 2H (d, d, J=2Hz, 4-thiazolyl) ; HPLC, 1,8 x retensjonstid av thienamycin.

Eksempel JL6

Fremstilling av N'-(2-methylthioethyl)-N-formimidoyl-thienamycin

105 mg thienamycin oppløses i 5 ml pH 7 0,1N fosfatpuffer og til dette tilsettes en oppløsning av 300 yl ethyl-N-2-methylthioethyl-formimidat i 2 ml tetrahydrofuran. Oppløs-ningens pH innstilles på og holdes ved 8,5 under anvendelse av en automatisk byrette som avgir IN natriumhydroxyd. Etter 30

minutter innstilles pH på 7,0 med 2,5N saltsyre. Oppløsningen kromatograferes på en kolonne med Dowex 50-X4® harpiks (53 ml, Na formen, 200 - 400 mesh) forsvnt med isvannkappe, under eluering med. avionisert vann. N'-[2-methylthioethyl]-N-formimidoyl-derivatet elueres i 2 - 4 kolonnevolum og lyofiliseres hvorved man får et hvitt fast stoff.

U.v. (pH 7 0,1N fosfatpuffer) Xmaks 298 (e 7760)

i.r. (Nujol grøt) 1760 cm<-1> (B-lactam).

ERsempel 17

Fremstilling av N'- t- butyl- N- formimidoyl- thienamycin

105 mg thienamycin oppløses i 5 ml pH 7 0,IN fosfatpuffer og til dette tilsettes en oppløsning av 290 mg ethyl-N-t-butyl-formimidat i 1 ml tetrahydrofuran. Oppløsningens pH innstilles på og holdes ved 8,5 under anvendelse av en automatisk byrette som avgir IN natriumhydroxyd. Etter 30 minutter innstilles pH på 7,0 med 2,5N saltsyre. Oppløsningen kromatograf eres på en kolonne av Dowex 50-harpiks (53 ml, Na+ formen, 200 - 400 mesh) forsynt med isvannkappe, og elueres med avionisert vann. Fraksjonene inneholdende tittelproduktet forenes og lyofiliseres.

Eksempel 18

Fremstilling av N1 -[l-Methyl-2-propenyl]-N-formimidoyl-thienamycin

126 mg thienamycin oppløses i 6 ml pH 7 0,1N fosfatpuffer og oppløsningns pH innstilles på 8,5 under anvendelse av en automatisk byrette som avgir IN natriumhydroxyd. Til denne omrørte oppløsning tilsettes 300 1 ethyl-N-l-methyl-2-propenyl-formimidat-hydroklorid mens pH holdes ved 8,5. Etter 30 minutter innstilles oppløsningens pH på 7,0 med 2,5N saltsyre og oppløsningen kromatograferes på en kolonne med Dowex 50-X4® harpiks (49 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) forsynt med en is-vannkappe, og elueres med avionisert vann. N'-[1-methy1-2-propenyl]-N-formimidoyl-derivatet elueres i 2 - 4 kolonnevolum og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (59 mg). U.V. (pH 7 0. 1N fosfatpuffe<r>) X 1113. K, S 29-.9 nm (e = 7820)

1. r. (Nujol grøt) 1760 cm" (3-lactam).

Eksempel 19

Fremstilling av N'- dimethylamino- N- formimidoyl- thienamycin

115 mg thienamycin oppløses i 7 ml pH 7 0,1N fosfatpuffer og oppløsningens pH innstilles på 8,5 med en automatisk byrette som avgir IN natriumhydroxyd. Til denne omrørte opp-løsning tilsettes 284 mg methyl-N-dimethylamino-formimidat-hydroklorid mens pH holdes på 8,5. Etter 20 minutter innstilles pH på 7,0 under anvendelse av 2,5N saltsyre og oppløsningen

kromatograferes på Dowex 50-X4® harpiks (53 ml, Na<+> formen,

200 - 400 mesh)eluert med avionisert vann. Kromatografien ut-føres i en kolonne med vannkappe ved 3° C. N'-dimethylamino-N-formimidoyl-derivatet elueres i 2 kolonnevolum og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (40 mg) UV (ph 7, 0,1 N fosfatpuffer) X 298 nm (e 6 910) ir (Nujol grøt) 1760 cm-1 (B-lactam) nmr (D20) 6 1,29 (d, J=6 Hz, CH3"CH), 2,59 (s, N (CH3)2), 7,<7>6 (s,

NCH) .

Eksempel 20

Fremstilling av methyl- oxalimidoyl- thienamycin

105 mg thienamycin oppløses i 5 ml pH 7 0,1 N fosfatpuffer og oppløsningens pH innstilles på 8,5 med en automatisk byrette som avgir 1 N natriumhydroxyd. Til denne oppløsning tilsettes 200 yl methyl-oxalimidat mens pH holdes på 8,5. Etter 30 minutter innstilles pH nå 7,0 under anvendelse av 2,5 N

(R)

saltsyre og oppløsningen kromatograferes på Dowex 50-X4 hariks (53 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) eluert med avionisert vann. Kromatografien utføres i en kolonne med vannkappe ved 3° C. Methyl-oxalimidoyl-derivatet elueres i 2 kolonnevolum og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (44 mg) uv (pH 7 0,1 N fosfatpuffer) Xmaks 298 nm (e 6 230) ir (Nujol grøt) 1760 cm"<1> (3-lactam); nmr (D20) 51,27 (d, J=6 Hz, CH3-CH), 3,87 (s, -0CH3).

Eksempel 21

Fremstilling av N- propionimidoyl- thienamycin

114 mg thienamycin oppløses i 10 ml pH 7 0,IN fosfatpuffer og oppløsningens pH innstilles på 8,5 med en automatisk byrette som avgir 1 N natriumhydroxyd. 231 mg fast ethyl-propionimidat-hydroklorid tilseytes porsjonsvis så hurtig som mulig idet pH holdes nær 8,5. Etter 30 minutter innstilles pH på 7,0 med 2,5 N saltsyre, og oppløsningen kromatograferes på Dowex 50-X4<®> harpiks (72 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) eluert med avionisert vann. N-propionimidoyl-derivatet elueres i 2 kolonnevolum og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (76 mg), uv (pH 7 0,1 N fosfatpuffer) Xmaks 298 nm (e 7 830) nmr (D20) 61,28 (d, j=6 Hz, CH3 CH(OH)), 1,23 (t, J= 8 Hz, -CH2"<CH>3), 2,50 (q, J= 8 Hz, CH2CH3).

Eksempel 2 2

Fremstilling av N'- methyl- N- formimidoyl- thienamycin

140 mg thienamycin oppløses i 10 ml pH 7 0,IN fosfatpuffer og opløsningens pH innstilles på 8,5 med en automatisk byrette som avgir 1 N natriumhydroxyd. Til denne oppløsning tilsettes 200 yl methyl-N-methyl-formimidat-hydroklorid mens pH holdes ved 8,5. Etter 40 minutter innstilles pH på 7,0 med 2,5

'" " (r)

N saltsyre, og opløsningen kromatograferes på Dowex 50-X4^ harpiks (72 ml, Na+ formen, 200 - 400 mesh) eluert med avionisert vann. N'-methyl-N-formimidoyl-derivatet elueres i 2 kolonnevolum og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (43 mg) . uv (pli 7 0,1 N fosfatpuffer) Xmaks 298 nm (e 7 250) ir (Nujol grøt) 1765 cm<-1> (B-lactam). nmr. (D20) & 1,29 (d, J=Hz, CH3~CH), 2,92 (s, N-CH3) 7.,_80 (s, N-CH).

Eksempel 2 3

Fremstilling av N'- benzyl- N- formimidoyl- thienamycin

110 mg thienamycin opløses i 7 ml pH 7 0,1 N fosfatpuffer og oppløsningens pH innstilles på 8,5 med en automatisk byrette som avgir 1 N natriumhydroxyd. En oppløsning av 572 mg ethyl-N-benzyl-formimidat-fluorborat i 2 ml p<->dioxan tilsettes til den puffrede oppløsning mens pH holdes på 8,5. Etter 20

minutter innstilles oppløsningens dH på 7,0 med 2,5 N saltsyre og kromatograferes på Dowex 50-X4® harpiks (53 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) eluert med avionisert vann. Kromatografien ut-føres i en kolonne med vannkappe ved 3° C. N'-benzyl-N-formimidoyl-derivatet elueres i 2 kolonnevolum og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (5 mg). uv (pH 7 0,1 N fosfatpuffer) Xmaks 295 nm (e 3 980) ir (Nujol grøt) 1765 cm"<1> (B-lactam) nmr (D20) 51,29 (d, J= 6 Hz, CH3CH), 4,44 (s, CH2~Ar), 7,37 (s, aryl), 8,14 (s, NCH).

Eksempel 24

Fremstilling av N'- isopropy1- N- formimidoyl- thienamycin

110 mg thienamycin oppløses i 7 ml pH 7 0,IN fosfatpuffer og opløsningens pH innstilles på 8,5 med en automatisk byrette som avgir IN natriumhydroxyd. En oppløsning av 300 mg methyl-N-isopropyl-formimidat-hydroklorid i 1 ml p-dioxan til-

settes til den magnetisk omrørte puffrede oppløsning mens pH

holdes ved 8,5. Etter 25 minutter innstilles opløsningens pH

på 7,0 med 2,5N saltsyre og kromatograferes på Dowex 50-X4®

harpiks (53 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) eluert med avioni-

sert vann. Kromatografien utføres i en kolonne med vannkappe ved 3° C. N<1->isopropyl-N-formimidoyl-derivatet elueres i 2 kolonnevolum og lyofiliseres til et hvitt fast stoff (12 mg).

UV (pH 7 0,1N fosfatpuffer) Xmaks 299 nm (e 8 130) ir (Nujol

grøt) 1760 cm"<1> (3-lactam) nmr (D20) 6 1,26 (d, J=6Hz, CH3CH(OH)),

1,29 (d, J=6Hz, CH(CH3)3), 7,89 (s, NHCH), 7,96 (s, NHCH).

Eksempel 25

Fremstilling av N( N'- allyl- formimidoyl)- thienamycin

Til en foravkjølt prøve på 123 mg (0,452 mmol) thienamycin tilsettes 13 ml kold 0,IN fosfatuffer. Oppløsningen innstilles på pH 9 med IN natriumhydroxyd. Til denne basiske opp-løsning ved 2° C tilsettes på én gang 0,3 g ethyl-N-allyl-f ormimidat-hydroklorid. pH faller til 7,3 og biringes tilbake til 8,5 med ytterligere natriumhydroxyd. Reaksjonsblandingen om-røres ved 2° C i ytterligere 30 minutter og pH innstilles på 7 med kold 0,1N svovelsyre. Reaksjonsblandingen analyseres under anvendelse av høytrykks væskekromatografi på en C-^g-"Porosil" kolonne, utvikles med 10 % vandig tetrahydrofuran og viser seg å oppvise bare spormengder av thienamycin (retensjonstid 5 min) og i det vesentlige rent produkt (retensjonstid 10,5 minutter). Reaksjonsblandingen kromatograferes på en Dowex-50x4^ kolonne (60 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh) idet der elueres med vann ved en strømningshastighet på 0,5 ml/min.cm 2 harpikslag. Etter å ha kastet de første 400 ml eluat, lyofiliseres de neste 150 ml hvorved man får produktet. Utbytte 96 mg (63 %). UV Amaks 301 nm , 24,6 optiske densitetsenheter/mg. (NE^OH utslukket) 90 % renhet. IR Nujol oppviser C=0 ved 5,67 y og 5,90 y. NMR 100 MHz D2O viser at det er en 1:1 blanding av syn- og anti-N(N'-allylformimidoyl)-thienamycin.

Eksempel 26

Fremstilling av N- ( N '- trif luorethyl- formimidoyl )- thienamycin

Til 123 mg (0,452 mmol) av en foravkjølt prøve av thienamycin tilsettes 15 ml kold 0,IN fosfatuffer. Oppløsnin-gen innstilles på pH 9 med IN natriumhydroxyd. Til den alka-liske oppløsning ved 0 - 2° C tilsettes 0,2 ml ethyl-N-trifluorethyl-formimidat i 2 ml dioxan porsjonsvis i løpet av 30 minutter. Reaksjonsblandingens pH holdes ved 8,5-9 under tilsetningen. Reaksjonsblandingen omrøres i noen få minutter. Etter at tilsetningen av imidat er avsluttet og pH er bragt til 7 med kold 0,IN svovelsyre, opviser HPLC, C1g-"Porosil" revers fase under anvendelse av 10 % vandig tetrahydrofuran en ny topp ved 12,2 nm tilskrevet det ønskede produkt. Blandingen kromatogra-(R)

feres på en Dowex 50x4^kolonne (60 ml, 200 - 400 mesh). Kolonnen elueres med vann ved en strømningshastighet på 0,5 ml/

2

min.cm harpiksskikt. Forløpet kastes og fraksjoner inneholdende produktet forenes og lyofiliseres hvorved man får et hygroskopisk fast stoff, 10,2 mg, Xmaks 302 nm.

Eksempel 27

Fremstilling av N-(N'-carboxymethyl-formimidoyl)-thienamycin-natriumsalt

130 mg thienamycin oppløses 4 ml nH 7 0,1N fosfatpuffer og 5QQ mg fast natrium-ethyl-N-carboxymethyl-formimidat tilsettes på én gang. Oppløsningens pH innstilles på 8,5 ved en automatisk byrette som avgir IN natriumhydroxyd. Etter 25 minutter ved pH 8,5 innstilles oppløsningen på pH 7,0 med 2,5N saltsyre. Oppløsningen kromatograferes så på en kolonne av

Dowex 50-X4<®>harpiks (51 ml, Na<+> formen, 200 - 400 mesh)forsynt med is-vannkappe, og eluert med avionisert vann. Eluatet av det første kolonnevolum ble forenet og inndampet til 7 ml. Denne opløsning ble så kromatografert på en kolonne av "XAD-2" harpiks (53 ml) med en is-vannkappe, og eluert med avionisert vann. Det annet, tredje og fjerde kolonnevolum ble oppsamlet og forenet og lyofilisert hvorved man fikk natrium-N-(N'-carboxy-methylformimidoyl)-thienamycin (25 mg). UV (pH 7 0,IN fosfatpuffer) X maks 300 nm (e 6 390) ir (Nujol grøt) 1755 cm"<1> (B-lactam) nmr (D20) 6 1,29 (d, J=6 Hz, CH3CH), 7,85 (s, NCH).

Eksempel 28

h

F remstilling av N-( 3- azidopropionimidoyl)- thienamycin

Til en oppløsning av 133 mg thienamycin i 10 ml 0,IM pH 7,0 fosfatpuffer tilsettes 1,2 g 0-ethyl-3-azidopropionimi-dat-hydroklorid mens oppløsningen holdes ved pH 8,5 med 2,5N natriumhydroxyd. Blandingen omrøres ved 0° C i 0,5 time, nøy-traliseres så med 2,5N saltsyre til pH 7,0, inndampes til 5 ml og kromatograf eres på en Dowex 50W x 8w(r)kolonne (Na-formen)

38 mm x 30,5 cm) som elueres med vann hvorved man får 30 mg av

H O

det ønskede produkt. Produktet viser UV X 2 300 nm; høy-maks trykks-væskekromatografi (HPLC) retensjonstid på 10 minutter sammenlignet med den på 4,8 min for utgangsmaterialet under de samme betingelser (3,18 mm x 61 cm, "Bondapak C^g" revers fase-kolonne eluert med 10 % THF i vann ved en strømningshastighet på 1,5 ml/min); elektroforetisk mobilitet 5 mm mot katoden ved 50V/cm i 20 minutter i 0,05M pH 7,0 fosfatpuffer.

Eksempel 29

Fremstilling av N-( 3- aminopropionimidoyl)- thienamycin

43 mg N-(3-azidopropionimidozyl)-thienamycin (I) i 40 ml vann hydrogeneres under 1 atm hydrogen i nærvær av 0,1 g 10 % palladium-på-trekull i 3o minutter. Elektroforese av den dannede blanding viser et nytt bioaktivt produkt som beveger seg 30 mm mot katoden (50 V/cm i 20 minutter i 0,05M pH 7,0 fosfatpuffer) i tillegg til utgangsmaterialet (I) som beveger seg 5 mm mot katoden. Den elektroforetiske mobilitet av produktet stemmer overens med det for det ventede produkt (II). Den erholdte reaksjonsblanding fra hydrogeneringsreaksjonen nøytraliseres med 2,5 N saltsyre og katalysatoren frafiltreres. Filtratet inndampes til 10 ml og kromatograferes på "XAD-2" harpiks (2,3 cm x 16 cm kolonne). Kolonnen elueres med vann for å få det ønskede produkt (II) som hydrokloridet etter lyo-

filisering (23 mg, N-(3-aminopropionimidoyl)-thienamycin-

H O

hydroklorid). UV A 2, = 301 nm ( = 7080), IR: nujol mull

, maks

1765 cm ; NMR: 609MHz, D20 & 1,30 ppm, (dublet, 3), 6 2,60 -

3,72 ppm (multiplet, 11) og 6 4,18 ppm (multiplet, 2).

Eksempel 30 Fremstilling av N- nitroguanyl- thienamycin

131 mg thienamycin oppløses i en oppløsning av 10 ml dimethylsulfoxyd, 0,30 ml tri-n-butylamin og 0,3 g 2-methyl-l-nitro-2-thiopseudourea. Oppløsningen oppvarmes i et vannbad ved 45° C mens en strøm av nitrogen bobles kraftig gjennom opp-løsningen. Etter 50 minutter inndampes opløsningen under høy-

vakuum til 1,0 ml og oppløses i 7 ml 0,05N pH 7 fosfatpuffer.

Det uomsatte thiopseudourea felles og fjernes ved filtrering. Oppløsningen kromatograferes så på Dowex 50-X4<®> hariks (53 ml,

200 - 400 mesh, Na+ formen) og elueres med vann. N-nitroguanyl-derivatet elueres i det første kolonnevolum og lyofiliseres til et fast stoff (23 %).

UV (pH 7 0,1N fosfatpuffer) A maks <2>69 nm (E 11 000)

Elektroforese (40 V/cm, pH 7 0,IN fosfatpuffer, 20 min) 3,0 cm

mot katoden.

Eksempel 31

Fremstilling av N- isobutyrimidoyl- thienamycin """"

Ved å følge fremgangsmåten i eksempel H, men ved å

erstatte ethyl-acetimidat-hydroklorid med isobutyrimidat-hydro-

klorid og tillate reaksjonen å forløpe ved 20° C og pH 8,2, fåes N-isobutyrimidoyl-thienamycin (14 %).

UV (pH 7 0,1N fosfatpuffer) Amaks 298 nm (e 8 290)

NMR (D2/ S 1,27 (d, J=7Hz, CH(CH3)2, 1,29

(d, J=6HZ, CH3CH(OH), 2,79 (heptet, J=7Hz, CH(CH3)2).

Eksempel 32

Fremstilling av N'- methyl- N- acetimidoyl- thienamycin

Ved å følge fremgangsmåten i eksempel 11, men ved å

erstatte ethyl-acetimidat-hydroklorid med methyl-N-methy1-

acetimidat, fåes N-methyl-N<1->acetimidoyl-thienamycin (10 %).

UV (pH 7 0,1 N fosfatpuffer) Xmaks 298 nm (e 6 700)

IR (Nujol grøt) 1750 cm"<1> (3-lactam), 1660 cm"1 (C=NCH3)

NMR (D20) 6 1,27 (d, J=6Hz, CH3CH(0H), 2,22 og 2,25

N

M

(S, N-C-CH3), 2,97 (S, NCH3')

Eksempel 3 3

Fremstilling av N'- methyl- N- formimidoyl- thienamycin

Ved å følge fremgangsmåten i eksempel 11, men ved å erstatte ethyl-acetimidat-hydroklorid med ethyl-N-methyl-formimidat-hydroklorid, fåes N'-methyl-N-formimidoyl-thienamycin (10 %) .

UV (pH 7 0,1N fosfatpuffer) A maks- 298 nm

NMR (D20) 6 1,30 (d, J=6Hz, CH_3 CH(OH), 2,92 (S, N-CH3),

N

.7,78, (S, -CH)

Eksempel 34

Ved å følge fremgangsmåten i eksempel 11, men ved å erstatte reagenset med en ekvivalent mengde methy1-methoxyacet-imidat, fåes: N-(methoxyacetimidoyl)-thienamycin (34 %);

UV X H2° 198, 301 nm (e 16 180, 8 700);

maks ,

IR (Nujol grøt) 1760 cm (3-lactam);

NMR (60 MHz, D2<D) 6 1,28, 3H, (d, J=6Hz, CH3'CH(OH);

63,50, 3H, (S, CH3-0-CH2) 6 4,35, 2H, (S, CH3-0"CH2);

HPLC, 1,50 x retensjonstiden for thienamycin.

E ksempel 3 5

Fremstilling av N-[ N'- ethylformimidoyl]- thienamycin

100 mg thienamycin i 10 ml 0,IM pH 7,0 fosfatpuffer

innstilles og holdes på pH 8,5 - 9,0 med 2,5N natriumhydroxyd.

Til oppløsningen tilsettes 300 mg ethyl-N-ethylformimidat-

hydroklorid. Blandingen omrøres ved 23° C i 20 minutter, nøy-traliseres så til pH 7,0 med 2,5 N saltsyre og kromatograferes på en Dowex-50 X8® (Na formen) ionebytterkolonne (38 mm x 254

mm). Kolonnen elueres med vann idet der taes 6,7 ml fraksjoner. Fraksjonene 40 - 90 forenes, inndampes og frysetørres hvorved

man får 15 mg fast produkt. Elektroforese av produktet ved 50 V/cm i 20 minutter i 0,1 M, pH 7,0 fosfatpuffer viser en enkelt bioaktiv sone som beveger seg 2 mm mot katoden.

uv A <H>2° 301 nm; nmr (100 MH2, D20) ; 6 7,77 (S) og 7,82 (S)

maks

(formimidoyl CH).

Eksempel 36

Fremstilling av N-[ N'- cyclopropylformimidoyl]- thienamycin

100 mg thienamycin i 10 ml 0,1 M, pH 7,0 fosfatpuffer innstilles og holdes på pH 8,5 - 9,0 mens 300 mg ethyl-N-cyclopropylformimidat-hydroklorid tilsettes dråpevis til opp-

løsningen. Blandingen omrøres ved 23° C i 40 minutter, nøytra-

liseres så og kromatograferes på en Dowex-50X8 ( r) (Na-formen) ionebyttekolonne (38 mm x 254 mm). Kolonnen elueres med vann,

idet der oppsamles 6,5 ml fraksjoner. Fraksjonene 43 - 95 for-

enes, inndampes og frysetørres hvorved man får 54 mg av det faste produkt. Elektroforese av produktet viser en enkelt bioaktiv sone som beveger seg 10 mm mot katoden (50 V/cm,

1 time i 0,05 M pH 7,0 fosfatpuffer).

uv X H2° 301 nm; Nmr (100 MHz, D20): 0,60 - 1,30 ppm

(m, cyclopropyl) og 7,80 ppm (formimidoyl CH).

Eksempe3 37

Ved å gå frem som beskrevet i de foregående eksempler, ble følgende forbindelser fremstilt:

For-

Claims

Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av formel:

og p-t-butylbenzyl-, 3-methyl-2-buten-l-yl- og pivaloxymethyl-esterne derav, og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori R er hydrogen, alkyl med 1-6 carbonatomer, alkenyl med 2- 6 carbonatomer, cyano, cycloalkyl eller cycloalkenyl med 3- 6 carbonatomer, alkylthioalkyl, carboxyalkyl eller dialkyl-amino med 1-6 carbonatomer, trifluorethyl eller benzyl, og R 2er hydrogen 12 12 eller R . og R er alkyl med 1-6 carbonatomer eller R og R sammen med nitrogenatomet er piperidyl, og R er hydrogen, fenyl pyridyl, thiazolyl, amino, aminoalkyl, azidoalkyl, alkyl,

trifluormethyl, alkoxyalkyl, thioalkyl eller alkyloxalimid med 1-6 carbonatomer i alkylgruppene og alkenyl med 2-6 carbonatomer, eller hvor R er -0R<a> eller -SRa hvori Ra er methylbenzyl, ethylallyl, 2-thienylmethallyl, p-nitrobenzyl eller CH3-0-CH2, karakterisert ved at

en forbindelse med formel:

eller et egnet carboxylderivat derav '.

omsettes med en imidoester:

eller et imidohalogenid:

hvori -X°R" er en forlatende gruppe og X' er halogen, X er 0 eller S, og R 1 , R 2 og R er som ovenfor angitt,

eller omsettes med en forbindelse av formel:

hvori -X"R° er en fjernbar qruppe hvori X" er oxygen eller svovel, 12

og R og R er H eller C-^-Cg alkyl, eller at de erholdte forbindelser forestres eller omdannes til salter på kjent måte.