NO127685B - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- NO127685B NO127685B NO345868A NO345868A NO127685B NO 127685 B NO127685 B NO 127685B NO 345868 A NO345868 A NO 345868A NO 345868 A NO345868 A NO 345868A NO 127685 B NO127685 B NO 127685B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- reagin
- allergen
- polymer
- reagent
- test
- Prior art date
Links
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 80
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 49
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 24
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 23
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 19
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 11
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 5
- 229920003176 water-insoluble polymer Polymers 0.000 claims description 5
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-O CDP-choline(1+) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-O 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 claims description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 34
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 29
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 10
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 9
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 9
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 9
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 8
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- QZRGKCOWNLSUDK-UHFFFAOYSA-N Iodochlorine Chemical compound ICl QZRGKCOWNLSUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 7
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 6
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 5
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 5
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- -1 Extran Chemical class 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 229940074608 allergen extract Drugs 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- HJTAZXHBEBIQQX-UHFFFAOYSA-N 1,5-bis(chloromethyl)naphthalene Chemical compound C1=CC=C2C(CCl)=CC=CC2=C1CCl HJTAZXHBEBIQQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710134784 Agnoprotein Proteins 0.000 description 2
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 2
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNDPGZBMCMUPRI-XXSWNUTMSA-N [125I][125I] Chemical compound [125I][125I] PNDPGZBMCMUPRI-XXSWNUTMSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- GOLCXWYRSKYTSP-UHFFFAOYSA-N arsenic trioxide Inorganic materials O1[As]2O[As]1O2 GOLCXWYRSKYTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 108700004676 Bence Jones Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- OAAKZKGKPMPJIF-UHFFFAOYSA-N [Cl].[I] Chemical compound [Cl].[I] OAAKZKGKPMPJIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- ICLJVKBSYXENIB-UHFFFAOYSA-N boric acid;carbonic acid Chemical compound OB(O)O.OC(O)=O ICLJVKBSYXENIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical class O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012817 gel-diffusion technique Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical group 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000763 radioactive isotope labeling Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0058—Antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
- A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1015—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against material from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1018—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1078—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being against an immunoglobulin, i.e. being an (anti)-anti-idiotypic antibody
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/16—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
- C07K16/4291—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Botany (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Fremgangsmåte for kvalitativ eller kvantitativ påvis-
ning av reagin-immunglobuliner (reagin-Ig) rettet mot et visst eller visse allergener i vannholdig prøve
samt middel for anvendelse ved fremgangsmåten.
Det er kjent at en del immunogene stoffer, såkalte allergener, hvorav mange er av protein-, peptid- eller kullhydratnatur,
kan gi grunn til allergiske sykdomstilstander, f.eks. astma og høy-
snue. (Slike allergener forekommer generelt og kan stamme fra f.eks. flass, vekstpoller, mikroorganismer, en del parasitter etc). Herved forekommer en spesiell type antilegemer, såkalte reaginer som ut-
gjøres av immunglobuliner, som er rettet spesifikt mot allergenet eller allergenene, vanligvis i meget lave konsentrasjoner i f.eks. pasientens blod og kan påvises i blodserum. Disse spesielle immunglobuliner kalles i det følgende reagin-immunglobulin eller reagin-Ig (se f.eks. Advances in Immunology, volum 3, 1963, side l8l - 183).
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for påvisning av spesifikke reagin-Ig rettet mot allergener i vannholdige prøver. Å påvise reagin-Ig har spesielt1 betydning i forbindelse med diagnosti-sering av overfølsomhet hos mennesker og dyr.
For dette' formål har det tidligere blitt anvendt såkalte hudprøver, idet et prøveallergen tilføres prøveobjektet,;f.eks..intra-kutant. Hvis overfølsomhet (allergi) foreligger oppstår en reaksjon in vivo mellom allergenet og reagin-Ig rettet mot det angjeldende allergen, som får til følge visse symptomer som røddannelse eller hevelse på det sted hvor injiseringen foregikk, hvilket observeres og bedømmes med hensyn til virkningsgraden.
In vivo-undersøkelser er også såkalte provokasjonsprøver, idet pasienten får innånde et allergen i aerosolform. Hvis overføl-somhet mot dette foreligger, fåes en reaksjon, som f.eks. kan gi astmasymptom. Om begge prøvetyper kan det sies at de ér omstendelige og tidskrevende for pasienten, samt i visse tilfelle forenet med ubehag eller fare for dette. I de tilfeller går det ikke an å utføre dem. Videre kreves også en mangfoldighet in vivo-prøver for at man skal kunne diagnostisere en overfølsomhet mot ett visst eller visse allergener.
Tidligere:prøvde in vitro-metdder savner praktisk betydning (se f.eks. Immunological Diseases av Max Samter, J.A. Churchill Ltd., London 1965, side 553).
Oppfinnelsens formål er å tilveiebringe en enkel og til-forlatelig in vitro-metode, hvorved overnevnte ulemper unngås og som kan utføres uten ubehag eller risiko for pasienten.
Oppfinnelsen vedrører altså en fremgangsmåte for kvalitativ eller kvantitativ påvisning av reaginimmunglobuliner (reagin-Ig) rettet mot et spesielt eller spesielle allergener i vannholdige prøver, idet fremgangsmåten er karakterisert ved at prøven, f.eks. en kroppsvæske som blodserum eller blodplasma in vitro bringes i be-røring med en i vann uoppløselig polymer, hvortil det er b.undet et eller flere prøveallergener, idet en reaksjon mellom prøve-allergenet på polymeren og mot dette rettet reagin-Ig finner sted, således at dette reagin-Ig bindes til prøveallergenet på
den uoppløselige polymer og at polymeren med vedsittende prøve>-allergen og reagin-Ig bringes i berøring med enten antilegemer mot reagin-Ig som merkes med et strålingsavgivende atom eller gruppe eller med antilegemer mot reagin-Ig og reagin-Ig som. merkes med en
stråleavgivende atom eller gruppe, hvoretter den uoppløselige polymer med vedsittende stoffer skilles fra væsken, hvoretter strålingen fra den uoppløselige polymer med vedsittende stoffer eller fra den fraskilte væske måles eller virkningen herav eksamineres.
Hvis således reagin-Ig rettet mot allergenet finnes tilstede i prøve, bindes det merkede reagens til den uoppløselige fase og derpå utsender stråling. Sistnevnte øker med økende konsentrasjon av reagin-Ig i prøven. Den flytende fasens stråling minsker i stedet med økende konsentrasjon av reagin-Ig da større mengder merket reagens bindes til den uoppløselige fasen. De utmålte strål-ingsverdier for prøven kan sammenlignes med verdier på konfcrollprøven.
Som bærer av prøveallergenet anvendes i vann uoppløselige polymere. De kan eksempelvis foreligge i form av partikler av vari-erende form og størrelse. Som bærer kan også anvendes polymere i form av f.eks. plane gjenstander som skiver eller bånd eller også f.eks. i form av veggen i et rør, f.eks. innersiden av et prøverør. Bindingen mellom den polymere og prøveallergenet skal være av kjemisk natur, således at prøveallergenet ved normale vaskeoperasjoner ikke. kan løsgjøres fra den polymere. En egnet kjemisk bindingsform er å tilveiebringe broer av kovalent karakter mellom den polymere og prøve-allergenet. For dette formål velges polymeren således at den har egnede reaktive grupper, f.eks. aminogrupper, hydroksylgrupper og karboksylgrupper, for at lett å muliggjøre en bhding av prøvealler-genet til den polymere. Herved velges fortrinnsvis en kjemisk binding med broer med bindinger av kovalent karakter. Spesielt egnet er det å velge polymere bestående av et tredimensjonelt nettverk, sammenholdt av bindinger av kovalent karakter. Slike polymere er selv om de er svellbare i vann eller vannholdige medier helt uoppløse-lige og kan derved ikke slippe i fra seg noe av polymermaterialet eller derpå fast bundet stoff, f.eks. ved vaskningsprosedyre. Eksempel på slike polymere er polymerisat oppnådd ved tverrbinding av stoffer inneholdende et flertall hydroksylgrupper som kullhydrater og sukkeralkoholer, f.eks. åekstran, stivelse, dekstriner og andre poly-saccharider samt polyvinylalkohol med et bifunksjonelt stoff, f.eks. et bifunksjonelt stoff av typen X-R-Z, der eksempelvis X og Z er halogen eller epoksygrupper og R resten av det bifunksjonelle stoff, f.eks. et alifatisk radikal inneholdende 3 til 10 karbonatomer. Andre eksempler på uoppløselige polymermaterial er cellulose, agarosgel, polyaminostyren.
For formålet kan anvendes det kommersielt tilgjengelige produkt "Sephadex" som består av dekstran, tverrbundet med glycerol-eterbroer, oppnådd ved behandling med dekstran med epiklorhydrin. Produktet kan anvendes f.eks. i form av små korn. Sephadex og på lignende måte oppnådde produkter er svellbare i vann, men uoppløse-lige gelprodukter, f.eks. i kornform. De inneholder hydroksylgrupper og kan derved lett substitueres også med andre grupper, f.eks. slike
inneholdende aminogrupper eller karboksylgrupper egner seg derved godt for brodannelse med bindinger av kovalent karakter til prøve-allergenet. Hensiktsmessig velges en slik form av den polymere at det fåes en stor kontaktoverflate, f.eks. små partikler.
Til denne bærepolymer bindes prøveallergenet under milde betingelser således at allergenets immunkjemiske reaktivitet ikke vesentlig minsker. En egnet metode hertil er eksempelvis den som er omtalt av Axén et al. i Nature, volum 214 (1967), side 1'302. Ved kjemisk binding mellom allergenet og den polymere utnyttes reaktive grupper i disse som aminogrupper, hydroksylgrupper, merkaptogrupper, amidgrupper og karboksylgrupper, idet det slåes en bro med kjemisk binding, fortrinnsvis av ko\alent karakter, fra prøveallergenet til den polymere, f.eks. av typen:
allergen - NH - CS - NH - polymer
allergen - NH - CO - NH - polymer
allergen N = N - polymer
allergen - 0 - CO - polymer
allergen - NH - CO - polymer
allergen - CO - NH - polymer
allergen - NH - C - 0 - polymer
0
allergen - NH - C - NH - polymer
NH
Broen mellom allergenet'og den polymere behøver ikke å være strukturbestemt og kan velges av meget skiftende type, da den bare har til oppgave å hindre at allergenet vaskes bort fra det uoppløselige polymer.
Den nye metoden er basert på at reagin-Ig kan bindes til såvel det allergen, som det er spesifikt rettet mot, som til antilegemer generelt rettet mot reagin-Ig. Slike antilegemer er minst bivalente, dvs. de kan binde minst to molekyler reagin-Ig. Antilegemer rettet mot re^in-Ig og også rettet mot reagin-Ig selv kan merkes med et strålingsgivende atom eller gruppe, f.eks. med radioaktivt isotop eller en fluoriserende gruppe.
Sammenlignet med de kjente metoder med utførelse av hud-prøver og provokasjonsprøver har foreliggende fremgangsmåte den fordel at man i en blodprøve fra pasienten på en for denne helt ufarlige måte in vitro, med en meget følsom og enkel metode kan bestemme nærvær av og også mengden av raagin-Ig rettet mot en bestemt type allergen eller en viss gruppe allergener, f.eks dyreallergen og vekstaller-gen. Vesentlig for metoden er at det prøveallergen mot hvilke det reagin-Ig,'som skal bestemmes er rettet er meget fast bundet til en i vann uoppløselig bærer. Reagin-Ig som reagerer med allergenet,
kan således lett separeres fra ikke allergenbundne reaginimmunglobuliner. Under metodens ytterligere arbeidstrinn kan videre di antilegemer resp. det reagin-Ig som ikke er bundet til den polymere,
meget enkelt separeres fra dem, som er bundet til den polymre.
Separeringen av den polymere med vedsittende stoffer
fra væsken kan lett utføres. Hvis den polymere foreligger i partik-kelform kan separeringen skje f.eks. ved enkel sentrifugering eller filtrering.
Separeringen er ufølsom for variasjoner i salt- og proteinkonsentrasjoner i væsken innen fysiologiske grenser. Hele bestemmelsesfremgangsmåten innbefattende separering av fri merkede antilegemer resp. reagin-Ig og polymerbundne merkede antilegemer resp. reagin-Ig kan f.eks. utføres i samme prøverør uten tilsetning av felningsmiddel eller lignende.
Ovenstående metode forutsetter tilgang til isolert reagin-Ig samt antilegemer mot dette.
Reagin-Ig kan utvinnes fra serum fra allergiske pasienter og i spesielle tilfeller fra serum fra pasienter med tumor i de plasmaceller som danner reagin-Ig. Reagin-Ig kan renses ved forskjellige metoder for separering av proteiner som gelfiltrering, ioneut-vekslingskromatografering og elektroforese. I likhet med andre immunglobuliner kan reagin-Ig spaltes kjemisk eller enzymatisk i en antigenbindende del og en del, som er bærer av de klasse-spesifikke determinentene.
Antilegemer mot reagin-Ig kan fremstilles ifølge i og for seg kjente metoder for immunisering av forsøksdyr ved f.eks. gjentatte subkutane interjeksjoner og små mengder reagin-Ig eller fragmenter av reagin-Ig i blanding med et egnet adj uvant, f.eks. Preunds mineraloljesuspensjon. De i dyrene, f.eks. kanin, dannede
antilegemer kan utvinnes fra dyrenes blodserum.
Spesifikke antilegemer, f.eks. antilegemer rettet mot
de klasse-spesifikke determinentene i reagin-Ig kan fåes ved immunisering med spaltstykker av reagin-Ig-molekylene inneholdende disse determinanter eller også ved isolering, av disse spesifikke antilegemer fra en blanding av antilegemer oppnådd ved immunisering med hele reagin-Ig.
Spesifikke antilegemer rettet mot reagin-Ig, kan hvis ønsket, isoleres fra antiserumet ved vanlig immunosorbent-teknikk, idet reagin-Ig kobles til f.eks. bromacetylcellulose og de antilegemer, som er bundet til koblet reagin-Ig, frigjøres ved senkning av pH.
Det er en fordel å anvende spesifikke antilegemer mot
de klassespesifikke determinantene i reagin-Ig for å oppnå høy sikkerhet og nøyaktighet ved bestemmelsene.
Merking med radioaktivt isotop av reagin-Ig reåp. antilegemer mot reagin-Ig kan gjøres på vanlig måte, idet en for formålet egnet isotop velges, f.eks. 12^ Jl (se f.eks. metoden ifølge Hunter og Greenwood, Nature, volum 194, 1962, side 495). Likeledes kan merking med en fluorescensavgivende gruppe foretas på vanlig måte, f.eks. med et fluoresoein-derivat som fluorescein-isotiocyanat.
Allergenholdig ekstrakt, f.eks. fra hund- eller, heste-epitel, timotei- eller bjørkpoller, finnes kommersielt tilgjengelige.
Radioaktivitetsbestemmelsene kan foregå med vanlige metoder, f.eks. ved hjelp av scintillasjonsdetektorer. Likeledes kan fluorescensmålingene skje med vanlige metoder.
Mengden polymer med bundet allergen velges blant
annet med tanke på den ved forsøket nødvendige følsomhetsnivå.
Mengden ved reaksjonen tilsatte antilegemer mot reagin-Ig velges eksempelvis således at et overskudd foreligger i forhold til antallet bindingssteder for disse antilegemer på den polymeres vedsittende stoffer ved full metning av allergenene med reagin-Ig. Likeledes velges hensiktsmessig mengden merkede antilegemer resp. merket reagin-Ig således at et overskudd foreligger i forhold til det maksi-male antall bindingssteder på den polymeres vedsittende stoffer.
I henhold til oppfinnelsen kan prøveallergenet bestå
av et eneste allergen eller en blanding av to eller flere allergener.
I sistnevnte tilfelle byr metoden på den fordel at man ved under-søkelse hurtig kan få et ja-eller nei-svar på spørsmål om overføl-somhet mot ett eller flere allergener i en større gruppe allergener foreligger. Hvis et ja-svar fåes må selvsagt ytterligere bestemmelser gjøres for å fastslå mot hvilket eller hvilke allergener overfølsom-het foreligger innen den større gruppen.
I henhold til oppfinnelsen kan også metoden tilpasses for kvantitativ bestemmelse av reagin-Ig. For dette formål analy-seres en fortynningsserie av prøveserum og resultatet uttrykkes etter samtidig sammenligning med effekten av en standardoppløsning, som analysert på analog måte.
Oppfinnelsen omfatter også et hjelpemiddel for bestemmelse av spesifikke reagin-immunglobuliner (reagin-Ig) rettet mot allergener i vannholdige prøver som er beregnet til å komme til anvendelse ved overnevnte, bestemmelsesmetodé. Hjelpemidlet omfatter et første reagens,, hvori det inngår en i vann med uoppløselig polymer, hvortil det er bundet et eller flere prøveallergen, et annet reagens, hvori det inngår antilegemer mot reagin-Ig og eventuelt et tredje reagens, hvori det inngår reagin-Ig, idet antilegemene mot reagin-Ig gjennom merkning er bibragt evnen til å utsende stråling, hvis det trslje reagens ikke inngår i hjelpemidlet og idet det tredje reagensets reagm-Ig gjennom merkning er bibragt evne til å utsende stråling, idet det første reagens er beregnet til in vitro å bringes i berøring med en vannholdig prøve inneholdende re^in-Ig for å binde reagin-Ig til prøveallergenet {å den uoppløselige polymer og idet det andre reagens eventuelt sammen med det tredje reagens er beregnet til å bringes i berøring med den uoppløselige polymer med vedsittende prøve-allergen og reagin-Ig for dannelse av en blanding inneholdende strålende uoppløselig materiale og uoppløselig polymer og vedsittende stoffer som strålende flytende faser, idet det uoppløselige materialets og den flytende fasens stråling hver er en funksjon av konsentrasjonen av reagin-Ig rettet mot prøveallergenet i prøven.
I henhold til en egnet utførelsesform av oppfinnelsen kan den uoppløselige polymer foreligge i form av partikler.
Reagenset kan ifølge oppfinnelsen inngå i en reagens-kombinasjon, som er beregnet til å anvendes for undersøkelse av prøver fra allergikere.
I reagenskombinasjonen kan det inngå en ampulle eller lignende med antilegemer mot reagin-Ig, fortrinnsvis i tørket, f.eks. lyofilisert form og eventuelt også en ampulle med merket reagin-Ig, fortrinnsvis i tørket, fortrinnsvis i tørket, f.eks. lyofiliært form, idet for det tilfellet at sistnevnte ampulle savnes, antilegemene mot reagin-Ig er merket.
Oppfinnelsen skal i det følgende beskrives ved hjelp av eksempler, som mer i detalj viser gangen ved bestemmelsesmetoden. Eksempel 1.
Bestemmelse av reagin- Ig rettet mot et dyreallergen ( hundeepitel).
A. Fremstilling av partikler med kjemisk bundet allergen.
Som utgangsmateriale anvendes finkornede partikler av
et sampolymerisat av dekstran og epiklorhydrin, hvori dekstranet er tverrbundet med glyserineter-broer (Sephadex, partikkelstørrelse l-10m^u). Sampolymerisatet er uoppløselig i vann, men er svellbart i dette, idet det opptar ca. 2,5 g vann pr. g tørrstoff. Utgangs-materialet aktiveres først med bromcyan i alkalisk oppløsning, hvorpå partiklene av det aktiverte polymerisat vaskes, til en suspensjon av partiklene i vann ble det satt et kommersielt tilgjengelig allergen-, ekstrakt av hundeepitel, hvilket ekstrakt inneholder 0,2 mg/ml, i forholdet 1 ml allergenekstrakt på 100 mg aktivert polymer.' Deretter bindes allergenet kjemisk til det aktiverte sampolymerisat. Etter reaksjonen sentrifugeres partiklene av sampolymerisatet med derved bundet allergen og ble vasket to ganger med 0,5 M NaHCO^; o,l M acetatpuffer; 0,1 M trispuffer med 1$ bovinserumalbumin. Partiklene ble homogenisert og suspendert i 0,1 M trispuffer med 1% bovin serumalbumin.
B. Fremstilling av reagin- Ig.
Reagin-Ig fåes fra serum av en myelom-pasient med høyt innhold av reagin-Ig i blodet. Reagin-Ig ble isolert fra serumet ved saltutfelling, gelfiltrering og ioneutvekslingskromatografi.
Prøver av opptint eller nysamlet plasma fra en pasient med myelomatosis ble fortynrBb med 0,15 M natriumklorid for å inne-holde ca. 15 mg/ml av M-komponenten (reagin-Ig). Utfelling med vannfritt natriumsulfat (18 g/100 ml) ble utført ved 25°C. Etter 1 time ble utfellingen samlet ved sentrifugering (10.000 x g, 20 min. 25°C). Sedimentet ble samlet og vasket med natriumsulfatoppløsning (1| g/100 ml) og oppløst i 0,8 volum 0,1 M natriumfosfatpuffer, pH 7,5. Materialet ble gjenutfelt en gang som omtalt. Etterfølgende den siste utfelling ble sedimentet oppløst til 0,1 M tris-HCl-puffer, pH 8,0 (20°C) og påført på en kolonne (3,2 x 30 cm) av DEAE-Sephadex A-50 frigjort med samme puffer. Materialets eluering ble utført ved en kontinuerlig gradient, fra 0,1 M til 1 M tris-HCl ved en konstant pH på 8,0 ved 20°C. Fraksjoner inneholdende reagin-Ig ble samlet og konsentrert og påført til en kolonne (3,2 x 95 cm) med "Sephadex
G 150" frigjort med 0,1 M tris-HCl - 0,2 M NaCl - 0,002 M EDTANa^~
pH 7,7 og inneholdende 0,02% natriumazid. Materialet ble ført gjennom kolonnen tre ganger (recykling kromatografisk teknikk). Fraksjoner inneholdende reagin-Ig ble samlet og konsentrert ved ultrafiltrering (Visking-rør 8/32") ved 4°C.
Reagin-Ig fremstillet som omtalt var forurenset med mindre enn 0, 1% totalt protein.av andre immunoglobuliner (IgA, IgD, IgG og IgM). Det rensede reagin-Ig har en enkel topp i elektroforese pH 8,6 I = 0,05 migrering i g-y regionen.. Ultrasentrifuger-ingsstudier viste en enkel binding og sedimentasjonskonstant, S°9 <Ln\ J ,W, var beregnet til 8,20 S. Molekylvekten av reagin-Ig var beregnet til å være 200.000 ± 5.000, idet det ble benyttet et delvis spesifikt volum.på 0,713 cm^/g basert på bas.is av monosyre og kullhydratsam-mensetning av reagin-Ig. Diffusjonskonstanten D°„n ., ble beregnet til å være 3)71 x.10 cm /sek.
Reduksjonseksperimenter viser at reagin-Ig består av
to typer av polypeptidkjeder, og således ligner andre serumimmuno-globuliner. Sikkerhet er blitt•oppnådd for nærvær av to lette polypeptidkjeder av molekylvekt 22.600 i reagin-Ig. Molekylvekten av den tunge polypeptidkjedé. innbefattende dets kullhydrat pros-tetiske grupper ble beregnet til å være ca. 77.400 antagende et molarforhold på 1:1 for tunge og lette polypeptidkjeder i nativ reagin-Ig. Aminosyre og kullhydratsammensetningen er vist i tabell 1.
C. Fremstilling av entilegemer mot reagin- Ig.
Kaniner sprøytes intramuskulært-med hver en blanding av 0,5 mg reagin-Ig i 0,2 ml 0,15 M natriumkloridoppløsning og 0,8 ml komplett Freund's adjuvant. Immuniseringen gjentas etter .14.dager og deretter hver uke i tre uker. Etter ytterligere 10 dager uttappes blodet av kaninene og antiserum fremstilles fra blodet ved at dette fikk koagulere og blodkoagelet derpå ble fraskilt.
Antiserumet ble gjort spesifikt ved adsorbsjoh i 1 time ved +37°C og 16 timer ved +4°C. Etter sentrifugerng ble spesifiteten testet ved dette antiserum ved åmmun-elektroforese mot normalt humanserum og med Ochterlony-geldiffusjonsanalyse mot rene immunglobuliner A, G og M, lette polypeptidkjeder fra normalt polet immunglobulin G samt Bence-Jones-proteiner, idet det viste seg å være spesifikt for reagin-Ig. Antiserumet ble anvendt som antilegememateriale for be-stemmelsen.
D. Fremstilling av merket reagin- Ig.
Reagin-Ig ble merket med 125 Jl overensstemmende med en fremgangsmåte omtalt av Hunter og Greenwood, Nature, 194 (1962), side 495. Merkningen kan også utføres i henhold til følgende omtale.
Radioaktivt - jod, ( 125T .)..
Jod-125i. bærefr.itt:,, opprøst s:om: Nå-i: 1 0,1 molar NaOH og
fritt fra reduksjonsmiddel, anvendes:..
J odmonoklor id..
Jodmonoklorid. ble- fr-emstilTet: ifølge J.L. Izzo, W.F. Bale, M,J. Izzo og A. Roncone, J". Biol. Chem.. 239, nrv 11 (1964) 3742 og. jodinnholdet ble bestemt, ved reduksjon av alt jod til jodid med arsen-trioksyd og etterfølgende ti.tr.er.ing,.med: 0,r. mcfer AgNO^. Stamoppløs-ningen av ICI inneholdt 2-,.54-mgr r/ml-i. 0,02 molar KC1, 2,0 molar NaCl og 1,0 molar HC1 og er stabil., ved- vær.e-lsestearperatur i i det minste 18 måneder. Før anvendelsen_b:le.-stamoppløsningen av ICI fortynnet til den nødvendige konsentrasjon. Som. fortynningsmiddel ble det fremstilt en HCl-NaCl-oppløsning., hvis. konsentrasjon ble justert individuelt for hvert eksperiment- for_: å. være vel over de minimumskon-sentrasjoner av HC1. og NaCl.,.. h.vor.ved: ICI. er kjent til å være stabilt (R.W. Helmkamp, M.A. Contreras:-og-W-.E". Bale: Int. J. appl. Radiat. Isotopes, 18 (1967) 737).
Merknings fremgangsmåte-.
Joderingen er basert på.Helmkamps modifikasjon av McFairlanes jodmonokloridmetodei (A.S.. McFairlane, Nature, 182 (1958) 53) med ytterligere modifikasjoner: (J.L. Izzo, W.F. Bale, M.J. Izzo og A. Roncone, J. Biol. Chem.,, 239, nr. 11 (1964) 3743, W.F. Bale, R.W. Helmkamp, T.P. Davis, M..JT... Izzo, R.L. Gooland,, M.A. Contreras og J.L. Spar, Proc.Soc. Exp. Med., 122 (1966) 407 og R.W. Helmkamp, M.A. Contreras og W.F. Bale, Int. J. Appl. Radiat. Isotopes, 18
(1967) 737). Reagin-Ig (100 .ug) ble merket med et molforhold for
ICI til reagin-Ig på 2:1 og ICX til <3>I på 1:1. Følgende oppløs-ninger ble anvendt: Oppløsning I: Reagin-Ig ble oppløst i 0,2 molar tris-H61-puffer pH 8 til en konsentrasjon av 11,17" mg/ml. Dette preparat inneholdt
under 3% aggregat av reagin-Ig: og under 0, 5% IgG.
Oppløsning II: Fortynningsmidlet for stamoppløsningen av ICI ble fremstillet ved å oppløse 2,92.. g. NaCl i 12,5 ml 2,0 molar HC1 og 87,5 ml destillert vann.
Oppløsning III: Den endelige jodmonpkloridoppløsningen ble fremstillet ved å fortynne lOO^ul av stamoppløsningen av ICI med 53,55 ml
av oppløsning II. Oppløsning IV: 7,9yUl av radiojodidet (3,0 mCi) ble satt til 45^ul av oppløsning III og hensatt i et isbad før anvendelse. Alle oppløs-
ninger ble holdt kalde og joderingsreaksjonen utført ved istemperatur. Reagensene ble tilsatt i følgende rekkefølge i et lite glassrør: Til 200/ul boratkarbonatpuffer (0,4 molar, pH9,1) og 8,95/Ul oppløs-ning I (lOO^ug reagin-Ig) ble det satt 50^ul av oppløsning IV og blandet umiddelbart kraftig. Etter 60 sekunder ble det tilsatt 20^ul 0. 1 molar Na^^^, 50/Ul 2% Kl og 200/ul 5% humanserum-albumin-blått (HSA-blått). HSA-blått fremstillet ifølge Melani (F. Melani, K.M. Bartelt, R. Conrads, E.F. Pfeiffer, Z.klin. Chem., 4. Jahrg.1966, hefte 4). Dette ble tilsatt for å minske strålingsskader og adsorb-125
sjon av reagin-Ig mot glassveggene. I-joderte reagin-Ig-preparat kan renses ved anvendelse av tverrbundet dekstran ("Sephadex") eller agarosgelfiltrering ("Sepharose") eller ioneutveksler (som "Dowex" eller "Amberlite". Fraksjoner fra kolonnen ble oppbevart ved omkring 4°C i 0,1 molar tris-HCl-puffer pH 7,72 inneholdende 5% humant serumalbumin. Fraksjonene inneholdende merket reagin-Ig ble slått sammen og oppbevart i frosset tilstand.
Denne metode ga 83,0% binding av den totale jodmengde til reagin-Ig. Det merkede immunglobulinet inneholdt omkring 1 atom 125 I og omkring 1 atom <1>27 I per molekyl (molekylvekt 200.000) og hadde en spesifikk aktivitet på omkring 12 mCi/mg.
E. Bestemmelse.
Analysene ble utført i glassrør eller plastrør med di-mensjoner 50 x 10 mm. 1. 0,5 ml suspensjsn av partikler med kjemisk bundet allergen oppnådd i henhold til punkt A ovenfor, hvilken suspensjon inneholder 1 mg partikler pr. ml, ble innført i hvert av to prøverør. 2. 0,05 ml av det for testing beregnede pasientserum ble satt til det ene av rørene. 3. 0,05 ml kontrollserum fra ikke-allergiker ble satt til det andre rør. 4. Rørinnhidet ble inkubert i 20 timer ved værelsestemperatur, idet rørene fikk rotere langsomt i vertikalplanet. 5. Partiklene ble nedsentrifugert ved 3000 omdr. pr. minutt i 1 min., hvorpå den ovenstående væske ble fjernet. 6. Partiklene ble vasket tre ganger med 0,1 molar trispuffer (pH 7,4) med 1 vekt!? bovint serumalbumin med nedsentrifugering og frasugning av ovenstående væske etter hver vasking. ■ Ved hver. avsugning ble det påsett at faste partikler ikke fulgte med. 7. 0,1 ml av det i henhold til punkt C ovenfor dannede antiserum ble- tilsatt til hvert rør....
8. Inkubering som under punkt 4 ovenfor.
9. Nedsentrifugering som i punkt 5 ovenfor.
10. Vasking som under punkt 6 ovenfor.
11. 0,1 ml av en oppløsning med 125 I-reaginer oppnådd i
henhold til punkt D ovenfor ble tilsatt rørene.
12. Rørinnholdet ble inkubert som under punkt 4.
13. Nedsentrifugering som under punkt 5.
14. Vasking som under punkt 6.
15. Rørene ble plassert i scintillasjonsdetektor for måling av gammastråling.
For vurdering ble den oppnådde verdi på strålingen fra det ene rør sammenlignet med verdien på strålingen fra det andre rør, som inneholdt kontrollserum fra ikke-allergiker.
Alternativt kan etter nedsentrifugering i henhold til punkt 13 ovenfor et visst volum av den ovenstående væske overføres i regnerør, hvoretter gammastrålingen fra 125 I-reagin fritt i opp-løsningen kan måles.
For kvantitativ bestemmelse kan i punkt 2 ovenfor 0,05 ml prøveserum i forskjellige fortynninger tilsettes hvert og ett av et antall prøverør. Et antall prøverør ble på samme måte utstyrt med forskjellige fortynninger av et standardserum. Aktiviteten kan deretter uttrykkes i relasjon til standardserumets.
Eksempel 2.
Bestemmelse av reagin- Ig rettet mot et planteallergen ( bjørkpoller). A. Fremstilling av partikler med kjemisk bundet allergen.
Som utgangsmateriale anvendes fihkornede partikler bestående av dekstran tverrbundet med glycerin-eterbroer ("Sephadex G 25"j superfine) og som er substituert med isotiocyanatfenoksy-hydroksypropylgrupper. Til en suspensjon av 100 mg av partiklene i en vannoppløsning av natriumhydrogenkarbonat ble det satt 1 ml allergenoppløsning (kommersielt tilgjengelig allergenekstrakt) med omtrent samme-konsentrasjon som allergenoppløsningen i eksempel 1. Blandingen ble inkubert i tre døgn ved værelsestemperatur under konstant langsom, vertikal rotasjon. Partiklene ble deretter, sefitr-tfu-gert og vasket to ganger med hver gang 0,5 molar NaHCO^, 0,1 molar
-aoefeatpuffer, 0,1 molar trispuffer med 1% bovint serumalbumin. ' Partiklene ble homogenisert og suspendert i 0,1 molar trispuffer med 1% bovint serumalbumin. B. Isolering av fragment av reagin-Ig inneholdende klasse-spesifikke determinanter ( såkalt Fc- fragment). 100 mg reagin-Ig fremstilt ifølge eksempel 1 B i 0,1 molar natriumfosfatpuffer (pH 7,0) med 0,1 molar cystein ble inkubert ved 37°C i 4 timer med 1 mg pepsin, hvorpå reaksjnnen ble avbrutt ved tilsetning av jodacetamidoppløsriing til en sluttkonsentrasjon på 0,05 molar. Reaksjonsblandingen ble fraksjonert ved gelfiltrering ("Sephadex G 150"), idet det ble anvendt et sampolymerisat av dekstran og epiklorhydrin med vannopptagningsevne 15 g pr. g tørrstoff og eluering av gellagringen skjedde med 0,1 molar tris-HCl, 0,2 molar NaCl-puffer (pH 7,7). Fraksjoner som inneholder Fc-fragment, ble utvunnet for immunisering. C.. Fremstilling av antilegemer mot Fc- fragmentet av reagin- Ig.
Antiserum mot det i henhold til B ovenfor dannede Fc-fragment av reagin-Ig ble oppnådd på samme måte som beskrevet i eksempel 1 C for antiserum mot reagin-Ig. Fra dette antiserum som ble absor-bert på tilsvarende måte som beskrevet i eksempel 1 C, ble det isolert antilegemer rettet mot Fc-fragmenter på følgende måte: 2 g av et kom-pleks mellom bromacetylcellulose og reagin-Ig ble blandet med 34 ml oppløsning inneholdende ca. 95 mg immunoglobulin isolert fra antiserum ved ionebytterkromatografi. De dannede suspensjoner ble aktivert ved pH 7 og +4°C i 2 timer, hvoretter det ble sentrifugert med 20.000 xg i 20 min. ved +10°C. Overvæsken ble fraskilt, cellulosen vasket med 0,15 molar NaCl, 8 molar karbamid, pH 6-7, ble sentrifugert og overvæsken fraskilt. Denne vaskingsprosedyre ble gjentatt til overvæsken ble fri for protein. Celluloseproteinkomplekset ble blandet med 9 ml 0. 1 molar glycin-HCl-puffer (pH 3,1) og inkubert under omrøring ved 37°C i 40 min. Det hele ble sentrifugert og overvæsken dialyeert mot 1200 ml 0,01 molar tris-HCl 0,1 molar NaCl (pH 7,1) ved +4°C i 48 timer. Denne oppløsning inneholder antilegemer i en mengde av 1 mg pr. ml, som er spesifikk for Fc-fragmentet av reagin-Ig og således også mot hele reagin-Ig. Dette antilegememateriale strekker til for noen 10-talls millioner bestemmelser. D. Merkning av antilegemer spesifikke mot Fc-delen av reagin- Ig.
Merkningen ble utført på samme måte som beskrevet ovenfor
i eksempel 1 for reagin-Ig.
E. Bestemmelse.
1. 0,5 ml suspensjon av partikler med kjemisk bundet planteallergen oppnådd i henhold til punkt A ovenfor, hvilken suspensjon inneholder 1 mg partikler pr. ml ble innført i hvert og et av to prøverør.
2. 0,05 ml av det for testing beregnede pasientserum ble
satt til det ene av rørene.
3. 0,05 ml kontrollserum fra ikke-allergiker ble satt til
det andre røret.
4. Rørinnholdet ble inkubert i 5 timer ved værelsestemperatur, idet rørene fikk rotere langsomt i vertikalplanet.
5. Partiklene ble nedsentrifugert ved 3000 omHr. pr. min.
i 1 min., hvorpå ovenstående væske ble fjernet.
6. Partiklene ble vasket tre ganger med 0,1 molar trispuffer pH 7,4 med 1% bovint serumalbumin. Overvæsken ble suget fra etter hver sentrifugering. Ved hver avsugning ble det påsett at faste partikler ikke fulgte med. 7. 0,1 ml av den ifølge punkt C ovenfor oppnådde oppløsning med antilegemer mot Fc-delen av reagin-Ig og merket med 125 I ble tilsatt alle rør. 8. Rørinnholdet ble inkubert 15 timer ved værelsestemperatur, idet rørene ble bragt til å rotere langsomt i vertikalplanet.
9. Partiklene ble nedsentrifugert ved 3000 omdr. pr. min.
i 1 min., hvorpå overvæsken ble fraskilt.
10. Partiklene ble vasket tre ganger med 0,1 molar trispuffer
(pH 7,4) med 1 vekt% bovint serumalbumin med nedsentrifugering og avsugning av overvæsken etter hver vasking. Ved hver avsugning ble det påsett at faste partikler ikke medfulgte. 11. Rørene ble plassert i scintillasjonsdetektor for måling av gammastråling.
For vurdering ble det sammenlignet den oppnådde verdi
på strålingen fra det ene rør med verdi på strålingen fra det andre rør, som inneholdt kontrollserum fra ikke-allergiker.
Alternativt kan etter nedsentrifugeringen i henhold til punkt 9 et visst volum av overvæsken overføres i regnerør, hvoretter gammastrålingen fra merkede antilegemer mot Fc-delen fri i oppløs-ningen måles.
For kvantitativ bestemmelse kan i punkt 2 ovenfor 0,05 ml prøveserum i forskjellige fortynninger tilsettes hvert og et av et antall prøverør. Et antall rør ble på samme måte utstyrt med forskjellige fortynninger av et standardserum. Aktiviteten kan deretter uttrykkes i forhold til standardserumet.
Eksempel 3.
Merking av antilegemer mot reagin- Ig.
Antilegemer mot reagin- Ig.
Disse ble fremstillet ved immunisering av kaniner med reagin-Ig på tilsvarende måte som beskrevet i eksempel 2 C.
Radioaktivt jod ( 125 I).
Jod-125, bærefritt, oppløst som Nal i 0,1 molar NaOH
og fritt fra reduksjonsmiddel ble anvendt.
Jodmonoklorid.
Jodmonoklorid ble fremstillet ifølge J.L. Izzo, W.F. Bale, M.J. Izzo og A. Roncone, J. Biol. Chem, 239, nr. 11 (1964) 3742 og jodinnholdet ble bestemt ved reduksjon av alt jod til jodid med arse-nik-trioksyd og etterfølgende titrering med 0,1 molar AgNO^. Stam-oppløsningen av ICI inneholder 2,54 mg I/ml i 0,02 molar KC1, 2,0 molar NaCl og 1,0 molar HC1 og er stabil ved værelsestemperatur i i det minste 18 måneder. Før anvendelsen ble stamoppløsningen av ICI fortynnet til den nødvendige konsentrasjon. Som fortynningsmiddel ble det fremstillet en HCl-NaCl-oppløsning, hvis konsentrasjon ble justert individuelt for hvert eksempel for å være vel over de minste konsentrasjoner av HC1 og NaCl, hvorved ICI er kjent for å være stabil (R.W. Helmkamp, M.A. Contreras og W.F. Bale: Int. J. appl. Radiat. Isotopes, 18 (1967) 737).
Merkningsfremgangsmåte.
Joderingen er basert på Helmkamps modifikasjon av McFairlanes jodmonokloridmetode (A.S. McFairlane, Nature, 182 (1958) 53)
med ytterligere modifikasjoner (J.L. Izzo, W.F. Bale, M.J. Izzo og A. Roncone, J.Biol. Chem. 2_39, nr. 11 (1964) 3743, W.F. Bale, R.W. Helmkamp, T.P. Davis, M.J. Izzo, R.L. Gooland, M.A. Contreras og I.Lo Spar, Proe. Soc. Exp. Med. 122 (1966) 407 og R.W. Helmkamp, M.A. Contreras og W.F. Bale, Int. J.appl. Radiat. Isotopes, 18 (1967) 737). Antilegemer mot reagin-Ig (100,ug) ble merket med et molforhold for ICI til antilegemer mot reagin-Ig på 2:1 og ICI til 125I på 1:1. Følgende oppløsninger ble anvendt: Oppløsning,I: Antilegemer mot reagin-Ig ble oppløst i 0,2 molar tris-HCl-puffer pH 8 til en konsentrasjon på 10,0 mg/ml.
Oppløsning II: Fortynningsmidlet for stamoppløsningen av ICI ble fremstillet ved å oppløse 5,84 g NaCl i 35 ml 2,0 molar HC1 og 65 ml destillert vann.
Oppløsning III: Den endelige jodmonokloridoppløsning ble fremstillet ved å fortynne 100^ul av stamoppløsningen av ICI med 20,2 ml av opp-løsning II.
Oppløsning IV: 44,29/Ul av radiojodidet.(4,0 mCi) ble satt til 25/Ul av oppløsning III og hensatt i et isbad før anvendelse. Alle opp-løsninger ble holdt kalde og joderingsreaksjonen ble utført ved istemperatur. Reagensene ble tilsatt i følgende rekkefølge i et lite glassrør: Til 200^ul borat-karbonatpuffer (0,4 molar, pH 9,1) og lO^ul oppløsning I (lOO^ug antilegemer mot reagin-Ig) ble satt 50^ul oppløsning IV og blandet umiddelbart kraftig. Etter 60 sekunder ble det tilsatt 20/ul 0,1 molar Na^O^, 50/Ul 2% Kl og 200^1 5% humanserumalbumin-blått (HSA-blått). HSA-blått ble fremstillet ifølge Melani (F. Melani, K.M. Bartelt, R. Conrads, E.F. Pfeiffer, Z.klin. Chem, 4. årgang 1966, hefte 4). Dette ble tilsatt for å minske strålingsskader og adsorbsjon av antilegemer mot reagin-Ig mot glass-
125
veggene. Preparat med I-joderte antilegemer mot reagin-Ig kan renses ved "Sephadex"-tverrbundet dekstran eller "Sepharose"-gelfiltrering (agaros-gel) eller med "Dowex" eller "Amberlite"-ioneutveksler. Fraksjoner fra kolonnen ble oppbevart ved omkring 4°C i 0,1 molar tris-Hcl-puffer pH 7,72 inneholdende 5% HSA. Fraksjonene inneholdende de merkede antilegemer mot reagin-Ig ble slått sammen og oppbevart i frosset tilstand.
Denne metode ga 81,3% binding av den totale jodmengde til antilegemer mot reagin-Ig. Det merkede immunoglobulinet inneholdt omkring 1 atom 125 I og omkring 1 atom <127>I per molekyl (MW 150. 000) og hadde en spesifikk aktivitet på omkring 16 mCi/mg.
Eksempel 4.
Eksempel 1 ble gjentatt, men som polymer ble det anvendt finkornede partikler av mikrokrystallin cellulose.
Claims (3)
1. Fremgangsmåte for kvalitativ eller kvantitativ påvisning av reagin-immunglobuliner (reagin-Ig) rettet mot spesielt allergen,
i vannholdige prøver, karakterisert ved at prøven, f.eks. en kroppsvæske som blodserum eller blodplasma, in vitro bringes i berøring med en i vann uoppløselig polymer, hvortil er bundet ett eller flere prøveallergener, idet en reaksjon mellom prøveallergenet på polymeren og mot dette rettet reagin-Ig finner sted, således at dette reagin-Ig bindes til prøveallergenet på den uoppløselige polymer og at polymeren med vedsittende prøveallergen og reagin-Ig bringes
i berøring med enten antilegemer mot reagin-Ig, som merkes med et strålingsavgivende atom eller gruppe eller med antilegemer mot reagin-Ig og reagin-Ig som merkes med et stråleavgivende atom eller gruppe, hvoretter den uoppløselige polymer med vedsittende stoffer skilles fra væsken, hvoretter strålingen fra den uoppløselige polymer med vedsittende stoffer eller fra den fraskilte væske måles eller virkningen herav eksamineres.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at bindingen mellom prøveallergenet og den polymere er av kovalent natur.
3. • Hjelpemiddel beregnet til å anvendes ved fremgangsmåten i henhold til et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at det omfatter et første reagens hvori det inngår en i vann uoppløselig polymer, hvortil er bundet ett eller flere prøveallergen, et annet reagens, hvori inngår antilegemer mot reagin-Ig og eventuelt et tredje reagens, hvori inngår reagin-Ig idet antilegemene mot reagin-Ig gjennom merkning er bibragt evnen til å utsende stråling, hvis det tredje reagens ikke inngår i hjelpemidlet og idet det tredje reagensets reagin-Ig gjennom merkning er bibragt evne til å utsende stråling, idet det første reagens er beregnet til in vitro å bringes i berøring med en vannholdig prøve inneholdende reagin-Ig for å binde reagin-Ig til prøveallergenet på den uoppløselige polymer og idet det andre reagens eventuelt sammen med det tredje reagens er beregnet til å bringes i berøring med den uoppløselige polymer med vedsittende prøveallergen og reagin-Ig for dannelse av en blanding inneholdende strålende uoppløselig materiale og uoppløselig polymer og vedsittende stoffer samt strålende flytende fase, idet det uoppløselige materialets og den flytende fasens stråling hver er en funksjon av konsentrasjonen av reagin-Ig rettet mot prøveallergenet i prøven.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE1229767A SE341239B (no) | 1967-09-06 | 1967-09-06 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO127685B true NO127685B (no) | 1973-07-30 |
Family
ID=20295495
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO345868A NO127685B (no) | 1967-09-06 | 1968-09-05 | |
| NO247772A NO138182C (no) | 1967-09-06 | 1972-07-11 | Antilegemer spesifikt rettet mot immunglobulin e (ige) eller mot fragment av ige. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO247772A NO138182C (no) | 1967-09-06 | 1972-07-11 | Antilegemer spesifikt rettet mot immunglobulin e (ige) eller mot fragment av ige. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS50892B1 (no) |
| AT (2) | AT295744B (no) |
| BE (1) | BE720341A (no) |
| CH (1) | CH534878A (no) |
| CS (1) | CS191857B2 (no) |
| DK (1) | DK131400B (no) |
| ES (1) | ES357863A1 (no) |
| FI (1) | FI48785C (no) |
| FR (1) | FR1588874A (no) |
| GB (1) | GB1248764A (no) |
| NL (1) | NL162209C (no) |
| NO (2) | NO127685B (no) |
| SE (1) | SE341239B (no) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE31006E (en) * | 1968-09-24 | 1982-08-03 | Akzona Incorporated | Process for the demonstration and determination of reaction components having specific binding affinity for each other |
| DK153425B (da) * | 1975-08-14 | 1988-07-11 | Sinai School Medicine | Fremgangsmaade til bestemmelse af celletype eller kompatibilitet paa en fast matrix. |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL154600B (nl) * | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
| US3966897A (en) * | 1973-04-02 | 1976-06-29 | Marine Colloids, Inc. | Medium for use in bioassay and method of using same |
| US4041146A (en) * | 1975-05-01 | 1977-08-09 | General Electric Company | Method for detection of biological particles |
| AT343822B (de) * | 1976-08-20 | 1978-06-26 | Immuno Ag | Radioimmunologisches verfahren und einrichtung zur bestimmung von antigenen |
| US4289748A (en) * | 1979-05-31 | 1981-09-15 | United States Of America | Ultrasensitive enzymatic radioimmunoassay method |
| FR2502786B1 (fr) * | 1981-03-24 | 1985-06-21 | Stallergenes Laboratoire | Procede de fixation d'antigenes et d'anticorps sur support de polysaccharides, et utilisation du produit ainsi obtenu pour les dosages immunologiques |
| US4481298A (en) * | 1981-04-13 | 1984-11-06 | Amf Incorporated | Pre-precipitated double antibody immunoassay method |
| NL8102178A (nl) * | 1981-05-02 | 1982-12-01 | Stichting Centraal Lab | Werkwijze voor het aantonen van tegen bepaalde antigenen gerichte antistoffen, alsmede inrichting en reagentia voor het uitvoeren van deze werkwijze. |
| JPS6199195U (no) * | 1984-11-30 | 1986-06-25 |
-
1967
- 1967-09-06 SE SE1229767A patent/SE341239B/xx unknown
-
1968
- 1968-08-28 FR FR1588874D patent/FR1588874A/fr not_active Expired
- 1968-08-30 DK DK418468A patent/DK131400B/da not_active IP Right Cessation
- 1968-09-02 CH CH1313868A patent/CH534878A/de not_active IP Right Cessation
- 1968-09-03 BE BE720341D patent/BE720341A/xx not_active IP Right Cessation
- 1968-09-03 GB GB4180168A patent/GB1248764A/en not_active Expired
- 1968-09-04 NL NL6812559A patent/NL162209C/xx not_active IP Right Cessation
- 1968-09-05 FI FI249868A patent/FI48785C/fi active
- 1968-09-05 NO NO345868A patent/NO127685B/no unknown
- 1968-09-06 AT AT359370A patent/AT295744B/de not_active IP Right Cessation
- 1968-09-06 JP JP6421968A patent/JPS50892B1/ja active Pending
- 1968-09-06 CS CS626568A patent/CS191857B2/cs unknown
- 1968-09-06 AT AT873168A patent/AT288593B/de not_active IP Right Cessation
-
1969
- 1969-09-05 ES ES357863A patent/ES357863A1/es not_active Expired
-
1972
- 1972-07-11 NO NO247772A patent/NO138182C/no unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE31006E (en) * | 1968-09-24 | 1982-08-03 | Akzona Incorporated | Process for the demonstration and determination of reaction components having specific binding affinity for each other |
| DK153425B (da) * | 1975-08-14 | 1988-07-11 | Sinai School Medicine | Fremgangsmaade til bestemmelse af celletype eller kompatibilitet paa en fast matrix. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO138182B (no) | 1978-04-10 |
| JPS50892B1 (no) | 1975-01-13 |
| DK131400B (da) | 1975-07-07 |
| DE1798170B1 (de) | 1972-04-27 |
| NL6812559A (no) | 1969-03-10 |
| AT288593B (de) | 1971-03-10 |
| SE341239B (no) | 1971-12-20 |
| BE720341A (no) | 1969-02-17 |
| ES357863A1 (es) | 1970-04-01 |
| GB1248764A (en) | 1971-10-06 |
| NL162209B (nl) | 1979-11-15 |
| NO138182C (no) | 1978-07-26 |
| FR1588874A (no) | 1970-03-16 |
| DK131400C (no) | 1975-11-24 |
| NL162209C (nl) | 1980-04-15 |
| FI48785C (fi) | 1974-12-10 |
| AT295744B (de) | 1972-01-10 |
| CS191857B2 (en) | 1979-07-31 |
| FI48785B (no) | 1974-09-02 |
| CH534878A (de) | 1973-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sapin et al. | Induction of anti-glomerular basement membrane antibodies in the Brown-Norway rat by mercuric chloride. | |
| US4584268A (en) | Method and compositions for carcinoma diagnosis | |
| Askonas et al. | The significance of multiple antibody components in serum of immunized rabbits | |
| US4123427A (en) | Method for the purification of mycobacterial protein antigens and resulting product | |
| JPS6218869B2 (no) | ||
| NO127685B (no) | ||
| DK150810B (da) | Fremgangsmaade til bestemmelse af et eller flere antigener i en proeve ved hjaelp af antistof bundet til smaa partikler | |
| JPH0784479B2 (ja) | Ｌ１蛋白質に対する抗体、該抗体を含んで成る試薬及び該抗体を用いる測定法 | |
| JPS6057254A (ja) | 免疫学的測定法による糖脂質の定量方法 | |
| NO774240L (no) | Fremgangsmaate ved paavisning og bestemmelse av antigener | |
| Aalund et al. | A radioimmunoassay for ochratoxin A: A preliminary investigation | |
| Korngold et al. | The comparative retention of antigen in the skin of immune and normal rabbits as determined with egg albumin labelled with radioactive iodine | |
| Campbell et al. | Immunoadsorbents-Preparation and use of cellulose derivatives | |
| ŁUOWSKI et al. | Biological properties of lipid A from Shigella sonnei | |
| Sarsfield et al. | A modified radioallergosorbent test for the in vitro detection of allergen antibodies | |
| JP2721900B2 (ja) | 癌診断薬及びそれを用いた腫瘍マーカーの回収方法 | |
| CN104977419A (zh) | 一种自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法 | |
| EP0007214B1 (en) | Product for detecting the presence of cancerous or malignant tumor cells | |
| JPH0232258A (ja) | ヒトの体液中の抗体力価の測定法及びクラス特異性抗体の測定法 | |
| DE2126128A1 (de) | Medizinisches Testverfahren, Reagens und Additiv zur Durchführung des Verfahrens | |
| Oka et al. | Purification of two types of sea-squirt antigens | |
| Ceska et al. | Effect of non‐ionic polymers on radioallergoimmunosorbent reactions | |
| Hagadorn et al. | Immunologic and morphologic studies of the acute effect of anti-lung serum | |
| Vogle | The polysaccharides of Candida albicans. | |
| JPS6212859A (ja) | 特定の細菌ポリペプチド及びそれに対する抗体の定量法 |