DK150810B - Fremgangsmaade til bestemmelse af et eller flere antigener i en proeve ved hjaelp af antistof bundet til smaa partikler - Google Patents
Fremgangsmaade til bestemmelse af et eller flere antigener i en proeve ved hjaelp af antistof bundet til smaa partikler Download PDFInfo
- Publication number
- DK150810B DK150810B DK593273AA DK593273A DK150810B DK 150810 B DK150810 B DK 150810B DK 593273A A DK593273A A DK 593273AA DK 593273 A DK593273 A DK 593273A DK 150810 B DK150810 B DK 150810B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- polypeptide
- antibodies
- antigens
- particles
- antigen
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 38
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 38
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 38
- 239000002245 particle Substances 0.000 title description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 40
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 40
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 40
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 18
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 15
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 5
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 5
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
- Y10S436/818—Human chorionic gonadotropin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/828—Protein A
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
150810
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til bestemmelse af et eller flere antigener i en prøve ved en immunologisk reaktion mellem antigenet eller antigenerne og specifikt mod antigenet eller antigenerne rettede 5 antistoffer bundet via et polypeptid til overfladen af små partikler som er uopløselige i den væske, i hvilken reaktionen udføres, hvilken reaktion fører til agglutination som indicerer tilstedeværelse af antigenet eller antigenerne i prøven. Med "bestemmelse" menes her og i kravene 10 såvel kvalitativ bestemmelse (fx ved identificering) som kvantitativ bestemmelse.
Sådanne fremgangsmåder er kendt. De kan anvendes til bestemmelse af såvel antigener i opløsning som antigener siddende på overfladen af små partikler såsom bakteriele-15 gemer eller viruspartikler. Et eksempel på bestemmelse som kan udføres efter det angivne princip, er konstatering af forekomst af humant choriongonadotropin (HCG) i legemsvæsker fra kvinder, som skal undersøges for graviditet. Et andet eksempel er typebestemmelse af bakterier, fx i forbindelse 20 med diagnosticering af infektionssygdomme.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved at polypeptidet stammer fra mikroorganismer og har evne til specifikt at binde Fc-delen af antistofferne, så at Fab-delen er orienteret udad fra de uopløselige partikler, 25 og at antistofferne er specifikt fikserede over Fc-delen til polypeptidet.
Med betegnelse "polypeptid" menes her og i de tilhørende krav også proteiner, der som bekendt er polypepti-der, og polypeptidet kan indeholde kulhydratenheder.
30 Der opnås betydelige fordele ved den foreliggende fremgangsmåde. Man kan således opnå en meget høj tæthed af antistoffer på partiklernes overflade, hvilke antistoffer har deres antigenbindende dele (Fab-delene) rettet ud fra partiklen, således at der kan finde en effektiv binding 35 sted til det aktuelle antigen. Herved kan der opnås en godt observerbar og indicerbar agglutination. Hertil kommer lethed ved at fremstille det partikelformede reagensmateriale. Et og samme materiale med påsiddende polypeptid 2 150810 fra mikroorganismer, hvilket polypeptid specifikt kan binde Fc-delen i antistofferne (i det følgende for kortheds skyld benævnt polypeptid I) kan anvendes til fremstilling af reagenser til bestemmelse af forskellige antigener ved 5 at antistoffer specifikt rettet mod disse antigener let kan fikseres via Fc-strukturer til partikelmaterialet. {Ovennævnte antistoffer kaldes i det følgende antistoffer II).
Polypeptid I er et polypeptid stammende fra mikroorganismer, fx fra bakterier, hvilket polypeptid har de 10 ovennævnte egenskaber. Et særligt velegnet eksempel på po-lypeptid I i overensstemmelse med dat ovenstående er det såkaldte protein A fra Staphylococcus aureus eller fragmenter af dette protein, hvilke fragmenter er af polypep-tid-natur og har evne til at binde Fc-delen i de ovennævnte 15 antistoffer. Et andet eksempel er et polypeptid fra Staphylococcus epidermidis. Polypeptider fra nogle stammer af Streptococcus pyogenes (fx gruppe A og C) kan også nævnes som polypeptider som er i stand til at reagere med visse immunoglobuliners Fc-del. Herved kan polypeptid I (fx pro-20 tein Ά eller de ovennævnte fragmenter) være bundet til overfladen af de bakterielegemer, der har frembragt poly-peptidet, hvorved der tilvejebringes en særlig simpel måde til at fremstille et reagensmateriale for fremgangsmåden.
Hensigtsmæssigt kan de partikler, til hvilke poly-25 peptidet som specifikt kan binde Fc-delen i antistofferne er bundet, udgøres af bakterielegemer. Disse bakterielegemer kan udgøres af stafylokokker, fortrinsvis dræbte stafylokokker. Således kan ifølge opfindelsen polypepti-det hensigtmæssigt være protein A og være bundet til 30 overfladen af de bakterielegemer af Staphylococcus aureus som har frembragt det, hvorhos bakterielegemerne er dræbt.
Det er dog også muligt at bruge bakterielegemer af fx. S. epidermidis eller Streptococcus pyogenes gruppe A og C.
Det fra mikroorganismer stammende polypeptid, som 35 kan binde Fc-delen i antistofferne II, kan være bundet til små partikler af en polymer som er uopløselig i den væske, hvori den immunkemiske reaktion udføres. Eksempler på sådanne polymerer 3 150810 er gelpartikler indeholdende kopolymerer af polyhydroxy-forbindelser med bifunktionelle stoffer, fx en kopolymer af dextran og epiklorhydrin ("Sephadex"~j, gelpartikler indeholdende akrylater m.m. De små partikler af polyme-5 rer, som er uopløselige i den væske i hvilken reaktionen udføres, kan dog være kvældbare i væsken.
Det polypeptid,· som binder Fc-delen i antistofferne, kan være bundet til overfladen af de små partikler ved hjælp af bindinger af kovalent karakter, eller ved adsorp-10 tion.
Bakterielegemer kan indeholde et fra bakterielegemerne stammende polypeptid I bundet til overfladen deraf ved naturlig binding og/eller ved binding tilvejebragt ad kunstig vej. Bakterielegemerne med påsiddende polypeptid 15 I, som kan binde Fc-delen i antistofferne, kan være behandlet med et aldehyd, fx formaldehyd eller glutaraldehyd.
De kan være behandlet med varme til dræbning og/eller sterilisering.
Antistofferne, som er specifikt fikseret til det 20 polypeptid som kan binde deres Fc-del, kan tillige være bundet til polypeptidet ved bindinger af kovalent karakter. Sådanne bindinger kan fx tilvejebringes ved hjælp af glutaraldehyd eller bromcyan efter at antistofferne specifikt er fikseret til polypeptidet I.
25 Det eller de antigener der skal bestemmes kan fx udgøres af virusantigener eller bakterieantigener. Antigenet eller antigenerne kan fx være kapselantigener fra bakterier. Antigerne kan også være af fx human eller animalsk oprindelse. Uafhængigt af hvorvidt antigenet eller anti-30 generne stammer fra den ene eller den anden kilde, kan de foreligge i opløsning eller bundet til små partikler såsom de bakterier eller virus, som har dannet dem. I så fald kan de små partikler, til hvilke det polypeptid I som kan binde Fc-delen af antistofferne er bundet, være farvede for 35 at lette iagttagelsen af agglutinationen.
Den beskrevne fremgangsmåde kan anvendes til diagnosticering af fysiologiske eller patologiske tilstande 4 150810 hos mennesker eller dyr, i hvilket et eller flere antigener er involveret, hvorved en prøve som indeholder antigenet eller antigenerne bringes i kontakt med specifikke antistoffer, som er bundet til overfladen af små partikler, 5 hvorved der indtræder en agglutination såfremt prøven indeholder antigenet eller antigenerne. Den patologiske eller fysiologiske tilstand, i hvilken antigenet eller antigenerne er involveret, kan fx være betinget af en sygdom såsom en infektionssygdom. Den fysiologiske tilstand, i hvil-10 ket antigenet eller antigenerne er involveret, kan være betinget af graviditet.
Bestemmelserne kan også udføres som kvantitative bestemmelser på måder som er sædvanlige ved agglutinations-metoder, fx ved at der testes en serie forskellige fortyn-15 dinger af prøven, hvorefter resultatet sammenlignes med analoge forsøg med forskellige fortyndingsgrader af prøver med kendte koncentrationer af antigenet. Herved kan man fx fastslå den største fortynding, som endnu giver agglutination.
20 Som nævnt foran udføres agglutinationsprøven i nær værelse af en væske. I almindelighed vælges der herved en vandig væske, fx en pufret fysiologisk kogsaltopløsning med passende pH-værdi.
Ved variation af reagensmaterialet og forsøgsbetin-25 gelserne kan prøvens følsomhedsgrad reguleres.
Ved fremstilling af partikelmateriale med påsiddende polypeptid I, samt til polypeptid I specifikt fikserede antistoffer II kan man fx gå frem på følgende måde: bakterielegemer, på hvis overflade sidder polypeptid I, dræbes un-30 der milde betingelser, fx ved behandling med formaldehyd eller glutaraldehyd og derefter med kortvarig varmebehandling. Herved bindes også polypeptid I fastere til bakterielegemerne. Det er også muligt at binde polypeptid I til polymerpartikler, fx ved at omsætte disse med BrCN og der-35 efter med polypeptid I ved fremgangsmåder som er kendt ved binding af andre polypeptider til polymerpartikler. Partiklerne med påsiddende polypeptid I bringes derefter i kontakt med en opløsning indeholdende antistoffer II hvis Fc- 5 150810 del specifikt kan fikseres til polypeptid I. Eksempler på sådanne antistoffer II er antistoffer tilhørende IgG-klas-sen fra pattedyr, fx fra kaniner, som udviser meget ringe tilbøjelighed hos partiklerne til at selvagglutinere. Fc-5 delen af disse antistoffer og protein A som eksempel på polypeptid I reagerer specifikt med hinanden, hvorved antistofferne II specifikt fikseres til polypeptid I via deres Fc-dele. Herved bindes antistofferne II via deres Fedel til polypeptid I. Herefter vaskes partikelmaterialet.
10 Man vinder altså et partikelmateriale, på hvilket antistofferne II sidder fæstnet via deres Fc-dele, mens Fab-delene er intakte og kan binde det eller de aktuelle antigener .
Det er kendt at reagenser til det foreliggende for-15 mål og bestående af små partikler, hvortil der er bundet antistoffer, har en vis tilbøjelighed til at undergår selv-agglutination i vandig suspension. Den sagkyndige er imidlertid i stand til at undgå falske resultater på grund af selvagglutination ved at vælge passende betingelser for 20 prøven, fx passende fortyndinger af reagensmaterialet og prøven, eller ved at vælge antistoffer fra en passende dyreart. Sådanne vilkår kan let fastlægges ved præliminære forsøg.
Opfindelsen skal i det følgende beskrives nærmere 25 ved nogle eksempler.
Eksempel 1 ΑΛ1___Fremstilling_af_reagensmateriale 30 Staphylococcus aureus, stamme Cowan I, dyrkes i 500 ml CCY-medium (se Arvidsson et al., Acta Path. Microbiol.
Scand Seet B, 79 (1971) side 399 i rystekultur ved 37°C i 24 timer. Bakterierne skilles fra dyrkningsmediet ved centrifugering og vaskes to gange i fysiologisk kogsaltopløs-35 ning og opslæmmes derpå i 250 ml 0,5%s formaldehyd i fosfatpuf ret kogsaltopløsning (0,15M NaCl, 0,01M natriumfosfat pH 7,4) i vand. Efter tre timer ved stuetemperatur under omrøring skilles bakterierne fra formaldehydopløsnin- 6 150810 gen ved centrifugering og vaskes fire gange i fysiologisk kogsaltopløsning og centrifugeres.
Til de pakkede stafylokokker sættes et ni gange så stort rumfang fysiologisk kogsaltopløsning indeholdende 5 0,1% natriumazid. Denne 10%s suspension af bakterielege mer overtrukket med det på disse bakterier naturligt forekommende protein A pumpes med en hastighed på 500 ml/time gennem et 190 cm langt metalrør med indvendig diameter 4 mm og udvendig diameter 5 mm, nedsænket i et vandbad med 10 en temperatur på 80°C, og derefter med et rør af samme slags nedsænket i vand med en temperatur på 4°C til afkøling af suspensionen. Den på denne måde varmebehandlede stafylokoksuspension centrifugeres derefter, bakterielegemerne opslæmmes i pufferen og centrifugeres på ny og op-15 slæmmes til en 10%s suspension i ovennævnte puffer. Til 1 ml af suspensionen sættes 0,1 ml antiserum med antistoffer specifikt rettet mod det eller de antigener, som man ønsker at bestemme, fx pneumokok-typningssera (fx fra Statens Seruminstitut i København). Efter blandingen vaskes de nu an-20 tistofbeklædte bakterier efter nogle minutter med en puffer (indeholdende 0,1% natriumazid, 0,15M NaCl, 0,2% gelatine, 0,01M natriumfosfat i vand, pH 7,4) og opslæmmes derefter i 10 ml af nævnte puffer.
2 5 ^jL2_-._?!^?!§tilling_af_reagensmateriale_med_farvede_partikler
Til 10 ml af en l%s suspension af partikelmaterialet fra eksempel 1 Al i samme fosfatpuffer sættes 100 μΐ af en amidoschwartzopløsning indeholdende 10 mg af farvestoffer pr. ml. Suspensionen blandes godt med farven, hvor-30 ved bakterielegemerne farves. Suspensionen kan enten anvendes direkte eller efter vask og opslæmning i nævnte fosfatpuffer.
Det farvede reagensmateriale kan anvendes på samme måde som beskrevet i eksemplerne IB, 2 og 3. Takket være 35 at partiklerne er farvede er agglutmationen lettere at iagttage.
7 150810 A._3__Fremstillin2_af_rea2§nsmateriale
Som partikler kan også anvendes streptokokker med højt indhold af Fc-reagerende overfladeprotein, hvorved man gå frem på følgende måde. Streptococcus pyogenes, 5 stamme gruppe A (nr. 235 Kronvall) dyrkes i 1000 ml Todd-Hewitt bouillon med let omrøring ved 37°C i 24 timer. Bakterierne skilles derefter fra mediet ved centrifugering, vaskes en gang i fosfatpufret kogsaltopløsning og opslæm-mes i 0,5% formaldehyd i samme puffer. Efter tre timers 10 omrøring ved stuetemperatur vaskes bakterierne tre gange i fosfatpufret kogsalt og opslæmmes i samme puffer med tilsætning af 0,02% natriumazid til en koncentration på 10"*"^ bakterier pr. ml. Til 6 ml af denne suspension sættes 0,1 ml antiserum, fx pneumokoktypningssera (fra kanin), og 15 blandingen centrifugeres efter 15 minutter ved stuetemperatur. De nu antistofbeklædte streptokokker vaskes derefter med puffer og opslæmmes i 10 ml fosfatpufret kogsaltopløsning indeholdende 0,02% natriumazid. Reagensmaterialet kan anvendes på lignende måde som beskrevet nedenfor og i 20 eksemplerne 2 og 3.
§r_iYB§b§§temmelse_af_bakterier
Typning af pneumokokker i overensstemmelse med det ovenfor beskrevne princip udføres på følgende måde. Herved 25 anvendes reagenspartikler fremstillet ifølge eksempel 1 Al, hvilke partikler i dette tilfælde er beklædt med antistoffer specifikt rettet mod typespecifikke pneumokokantigener vundet ved immunisering af kaniner. Der lægges to dråber reagensvæske på et objektglas, og en lille prøve af den 30 pneumokokstamme, der skal undersøges, taget med en platinøsken suspenderes i reagenset. Blandingen inspiceres i et til tre minutter under vugning, og eventuelt forekomst af agglutination iagttages. Agglutination indebærer at de pågældende pneumokokker er af den type, mod hvilken anti-35 stofferne og dermed reagenset er rettet.
150810 s
Eksempel 2
Bestei™else_af_opløselige_antigener
Dette eksempel kan sikkert påvise forekomsten af opløseligt antigen, nemlig bovint serumalbumin og humant 5 gammaglubulin i fysiologisk kogsaltopløsning indeholdende 1 mg, 0,1 mg og 0,01 mg af de nævnte proteiner pr. ml. Til to dråber af denne opløsning, som skal prøves, sættes der to dråber reagens vundet ifølge eksempel 1 Al, dvs. indeholdende partikler overtrukket med antistoffer specifikt 10 rettet mod det eller de antigener, der skal bestemmes.
Dråberne blandes godt og inspiceres for eventuelt forekomst af agglutination. Agglutination indtraf i samtlige tilfælde hvor prøven indeholdt det antigen, mod hvilket Fab-de-len af antistofferne i reagenset var rettet. Prøver med 15 andre proteinopløsninger udførtes også uden at der fremkom nogen agglutination.
Eksempel 3 2 o sri±ng;_a.f _1ιχ2ΐηθ;η^_ο1ιοΓ ±on2onaLd.otjrop±n_ C^HCGji^
Opløsninger af humant choriongonadotropin (HCG) indeholdende 500.000, 50.000, 5.000, 500 og 50 IE pr. liter afprøvedes med et reagens fremstillet ifølge eksempel 1 og indeholdende partikler overtrukket med antistoffer (dannet 25 i kaniner) rettet mod HCG. Til to dråber af testopløsningen sattes der to dråber af reagenssuspensionen. Agglutination optrådte ved afprøvning af koncentrationen 5.000 IE/ 1 og derover. Der konstateredes ikke nogen agglutination ved 500 og 50 IE/1 under de anvendte forsøgsbetingelser.
30 På tilsvarende måde afprøvede urinprøver fra kvinder. Med nogle urinprøver fra gravide kvinder konstateredes agglutination, men ikke med urin fra ikke-gravide kvinder.
35
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE14328/72A SE368090B (da) | 1972-11-06 | 1972-11-06 | |
| SE1432872 | 1972-11-06 | ||
| SE7301777 | 1973-02-08 | ||
| SE7301777A SE7301777L (da) | 1973-02-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK150810B true DK150810B (da) | 1987-06-22 |
| DK150810C DK150810C (da) | 1988-03-28 |
Family
ID=26655992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK593273A DK150810C (da) | 1972-11-06 | 1973-11-02 | Fremgangsmaade til bestemmelse af et eller flere antigener i en proeve ved hjaelp af antistof bundet til smaa partikler |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4711841A (da) |
| JP (1) | JPS6161062B2 (da) |
| BE (1) | BE806715A (da) |
| CA (1) | CA1022459A (da) |
| CH (1) | CH596555A5 (da) |
| DE (1) | DE2322562C2 (da) |
| DK (1) | DK150810C (da) |
| FI (1) | FI55410C (da) |
| FR (1) | FR2206859A5 (da) |
| GB (1) | GB1406964A (da) |
| NL (1) | NL186657C (da) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK154840B (da) * | 1979-02-28 | 1988-12-27 | Kendrew Biosystems Inc | Fremgangsmaade til magnetisk separering af celler, bakterier og vira og mikrokugler til brug ved fremgangsmaaden |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE387746B (sv) * | 1974-05-29 | 1976-09-13 | Pharmacia Diagnostics Ab | Forfarande for visuellt pavisande av antikroppar i ett vattenhaltigt prov |
| US4189466A (en) | 1975-09-19 | 1980-02-19 | Technical Research Affiliates, Inc. | Detection of rheumatoid factor by antibody sensitized microbial particles |
| DE2644622C3 (de) * | 1976-10-02 | 1979-11-29 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Extraktion von Mikroorganismen und diese enthaltende diagnostische Mittel |
| DE2643208C2 (de) * | 1976-09-25 | 1985-09-05 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches Bestimmungsverfahren |
| ES471585A1 (es) * | 1977-07-15 | 1979-01-16 | Behringwerke Ag | Procedimiento para la determinacion de reactivos fc |
| FR2420572A1 (en) * | 1978-03-24 | 1979-10-19 | Agronomique Inst Nat Rech | Reagent for diagnosis of staphylococcus aureus - prepd. by sensitisation of red blood cells with protein a reactive immunoglobulin(s), then treatment with glutaraldehyde and lyophilisation |
| JPS54139595A (en) * | 1978-04-20 | 1979-10-30 | Mitsubishi Chem Ind | Reagent for detecting antigen |
| US4292403A (en) | 1978-08-24 | 1981-09-29 | Akzona Incorporated | Detection and/or determination of IgM, IgA, IgD and IgE immunoglobulins |
| DE2941575A1 (de) * | 1978-10-19 | 1980-04-30 | Harvard College | Methode zur identifizierung einer virusinfektion und kit hierfuer |
| ATE6698T1 (de) * | 1979-01-18 | 1984-03-15 | Unilever Nv | Verfahren zum nachweis und zur bestimmung spezifisch bindender proteinsubstanzen und mit diesen substanzen bindbarer materialien, testzusammensetzung und reagenziensatz dafuer. |
| US4582793A (en) * | 1982-10-29 | 1986-04-15 | Research Corporation | Anti-RNA polymerase I antibody test for the diagnosis of rheumatological diseases |
| DK17885D0 (da) * | 1985-01-14 | 1985-01-14 | Karlsson Karl Anders | Antiviralt middel |
| JPS6348297A (ja) * | 1986-08-18 | 1988-02-29 | Sanraku Inc | Ｆｃ結合性蛋白質及びその生産菌 |
| SE8703453D0 (sv) * | 1987-09-04 | 1987-09-04 | Sven Kristofer Vilhelm Rubin | Preparation innehallande hogmolekylert bakteriellt protein, antikroppspreparation riktad deremot samt preparationernas anvendning |
| US5424193A (en) * | 1993-02-25 | 1995-06-13 | Quidel Corporation | Assays employing dyed microorganism labels |
| DK0849595T3 (da) * | 1996-12-18 | 2001-05-28 | Diagnostische Forsch Stiftung | Syntetiske partikler som agglutinationsreagenser |
| WO2002086120A1 (fr) * | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Kansai Chemical Engineering Co., Ltd. | Proteine de liaison aux anticorps et d'expression de levure sur couche superficielle cellulaire et utilisation de ladite proteine |
| CN111458522B (zh) * | 2020-04-20 | 2024-01-09 | 杭州英邈生物科技有限公司 | 一种用于检测血浆白细胞介素6天然抗体的检测试剂、试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL125235C (da) * | 1965-04-15 | |||
| US3639558A (en) * | 1968-02-19 | 1972-02-01 | Louis Csizmas | Immunological reagent particles having proteinaceous materials covalently bonded thereto |
| US3882225A (en) * | 1968-12-09 | 1975-05-06 | Miles Lab | Direct agglutination immunological reagent |
| JPS502730B1 (da) * | 1970-12-26 | 1975-01-29 | ||
| DE2322533C2 (de) * | 1972-11-06 | 1986-08-28 | Pharmacia AB, Uppsala | Verfahren zum Binden von Immunoglobulin und Hilfsmittel zur Durchführung des Verfahrens |
| US3966898A (en) * | 1973-06-28 | 1976-06-29 | Pharmacia Diagnostics Ab | Method and reagent for determining immunologic materials |
-
1973
- 1973-05-04 DE DE2322562A patent/DE2322562C2/de not_active Expired
- 1973-10-29 CA CA184,431A patent/CA1022459A/en not_active Expired
- 1973-10-30 BE BE137232A patent/BE806715A/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-10-31 FI FI3373/73A patent/FI55410C/fi active
- 1973-11-02 DK DK593273A patent/DK150810C/da not_active IP Right Cessation
- 1973-11-05 FR FR7339221A patent/FR2206859A5/fr not_active Expired
- 1973-11-05 CH CH1552873A patent/CH596555A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-11-05 JP JP48124336A patent/JPS6161062B2/ja not_active Expired
- 1973-11-06 NL NLAANVRAGE7315184,A patent/NL186657C/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-11-06 GB GB5145973A patent/GB1406964A/en not_active Expired
-
1984
- 1984-10-10 US US06/659,424 patent/US4711841A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK154840B (da) * | 1979-02-28 | 1988-12-27 | Kendrew Biosystems Inc | Fremgangsmaade til magnetisk separering af celler, bakterier og vira og mikrokugler til brug ved fremgangsmaaden |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI55410C (fi) | 1979-07-10 |
| CH596555A5 (da) | 1978-03-15 |
| JPS6161062B2 (da) | 1986-12-24 |
| NL186657B (nl) | 1990-08-16 |
| CA1022459A (en) | 1977-12-13 |
| NL186657C (nl) | 1991-01-16 |
| DK150810C (da) | 1988-03-28 |
| DE2322562C2 (de) | 1984-03-29 |
| NL7315184A (da) | 1974-05-08 |
| AU6172073A (en) | 1975-04-24 |
| JPS49135691A (da) | 1974-12-27 |
| FI55410B (fi) | 1979-03-30 |
| FR2206859A5 (da) | 1974-06-07 |
| DE2322562A1 (de) | 1974-05-09 |
| US4711841A (en) | 1987-12-08 |
| BE806715A (fr) | 1974-04-30 |
| GB1406964A (en) | 1975-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK150810B (da) | Fremgangsmaade til bestemmelse af et eller flere antigener i en proeve ved hjaelp af antistof bundet til smaa partikler | |
| EP0074520B1 (en) | Method and kit for pregnancy detection | |
| EP0064274B1 (en) | Method for assaying antigen-antibody reactions and reagent therefor | |
| DK174032B1 (da) | Sæt samt fremgangsmåde til immunometrisk dosering, der kan anvendes på hele celler | |
| JPH03504412A (ja) | カンピロバクター・ピロリの高分子型細胞関連蛋白の調製法とカンピロバクター・ピロリ感染の血清学的検出のための用法 | |
| JPS63229367A (ja) | 免疫反応性試薬、その製造法及び免疫反応性種を測定するためのその用途 | |
| IE42031B1 (en) | Detection of hepatitis b surface antigen by latex agglutination | |
| JPH0343094A (ja) | 単純ヘルペスウイルス抗原の抽出または測定のための抽出組成物、抽出方法および診断試験キット | |
| US3562384A (en) | Immunological indicator and test system | |
| Adler et al. | The sensitivities of different immunoassays for detecting leptospiral antigen | |
| AU687002B2 (en) | In vitro test for helicobacter pylori | |
| Finger | Immobilizing and precipitating antigens of Paramecium | |
| US4107287A (en) | GC Antigen-specific immunochemical indicator reagent and method for preparing same | |
| JPH05209199A (ja) | 洗浄組成物ならびに歯周病に随伴する微生物の測定のためのキットおよび方法 | |
| CZ2002160A3 (cs) | Způsob imunologické detekce bakterií v darované krvi a tkáních a souprava pro tuto detekci | |
| JPH02298866A (ja) | 酵素検定キット及び完全細胞に適用可能な方法 | |
| JPH09178752A (ja) | 微生物の検出方法及び検出用検査セット | |
| JPS6232363A (ja) | 抗核抗体の検出方法及び装置 | |
| JPH0510954A (ja) | バクテロイデス・インターメデイウス、バクテロイデス・ギンギバリスまたはアクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンスの検出用製品、試験キツトおよびサンドイツチアツセイ | |
| JPS587560A (ja) | 銅，亜鉛−ス−パ−オキシドディスムタ−ゼ測定用試薬 | |
| US20100255511A1 (en) | Immunological tests for the presence of bacteria which make use of antibodies obtained using a specific method | |
| JPH02291966A (ja) | 全細胞に適用できる検定キットおよび方法 | |
| JP3936678B2 (ja) | 抗梅毒トレポネーマ抗体測定試薬及び抗梅毒トレポネーマ抗体の測定方法 | |
| CA1181004A (en) | Suspending medium for immunologic reactions | |
| JPH08233819A (ja) | 感作標識担体、抗原又は抗体の検出方法及び検出用検査セット |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |