NL8702234A - Verbeteringen aan of met betrekking tot organische verbindingen. - Google Patents

Description

* % »

Verbeteringen aan of met betrekking tot organische verbindingen.

De uitvinding heeft betrekking op de therapeutische lyse van fibrine bloedklonten bij menselijke patiënten.

Er zijn verschillende in de natuur voorkomende enzymen bekend voor het deelnemen aan de lyse van fibrineklonten en deze zijn 5 therapeutisch gebruikt voor het lyseren van klonten bij patiënten, bijvoorbeeld coronair-patiënten, waarbij zich levensbedreigende klonten hébben gevormd. Twee van deze enzymen zijn pro-urokinase (pro-üK) en urokinase (UK). Men neemt aan, dat UK in vivo wordt gesynthetiseerd in een enkel-ketenige, zymogene vorm (pro-UK), die door een proteoly-10 tische splitsing wordt omgezet in de twee-ketenige vorm (UK). Een eventuele andere naam voor pro-υκ is enkel-ketenige urinair plasmino-geen aktivator (eku-PA).

Beide middelen, UK en pro-UK kunnen voor thrombolyse bij vroeg myocardiaal infarct worden gebruikt teneinde definitieve myocar-15 diaal necrose te beperken of zelfs te voorkomen. UK wordt voor dit doel gebruikt in doses van meer dan 1000000 I.E. en intraveneuze doses die de voorkeur verdienen, bedragen 2000000 tot 3000000 I.E. per toediening. Het gebruik van pro-UK voor deze indicatie is thans in onderzoek en de resultaten tonen tot dusver aan, dat doses 20 boven 6500000 I.E. voor het verkrijgen van goede resultaten nodig zijn.

Oorspronkelijk werd verwacht, dat de werkingen van pro-UK en UK ten hoogste strikt additief waren. Er werd echter gevonden, dat UK verrassenderwijs een synergistisch effekt heeft op de therapeuti-25 sche werking van pro-UK. In het bijzonder werd gevonden, dat wanneer men een aanvankelijke bolus van UK toedient, daaropvolgende toediening van pro-UK effektiever is, wat resulteert in een ingrijpende verlaging van de algehele dosis, die ter verkrijging van het gunstige therapeutische effekt nodig is.

30 Er werd ook gevonden, dat dit synergistische effekt niet is beperkt tot het geval, waarin aanvankelijke toediening van UK wordt gevolgd door daaropvolgende toediening van pro-UK, maar er werd ook gevonden, dat wanneer men eerst pro-UK toedient, gevolgd door UK, of wanneer men pro-υκ en UK tegelijkertijd toedient, ongeacht of dit 35 geschiedt door aparte infusen of injecties, door één enkele injectie vanuit een spuit met dubbele houder, of door één enkele injectie of 8702234 9» > - 2 - infuus van een mengsel van pro-UK en UK.

Aldus heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor het lyseren van fibrine bloedklonten bij patiënten, die een dergelijke behandeling behoeven, waarbij men doeltreffende hoeveelheden UK en 5 pro-UK, hetzij tegeljkertijd, hetzij achtereenvolgens binnen een tijd verloop, dat ter verkrijging van een synergistisch effekt voldoende kort is, toedient.

De uitvinding heeft ook betrekking op het gebruik van UK samen met pro-UK, in vrije of vaste combinatie, als thrombolytisch mid-10 del. De uitvinding heeft ook nog betrekking op het gebruik van UK voor het bereiden van een middel voor de potentiëring van het thrombolyti-sche effekt van pro-UK.

Met "synergistisch effekt" wordt een fibrine-klont lyseren-de werking bedoeld, die groter is (ofwel in termen van grotere lyseer-15 snelheid, ofwel een grotere hoeveelheid lyse, ofwel beide) dan zou worden verwacht van het additieve effekt van de twee aktieve stoffen bij onafhankelijke toediening.

Urokinase kan worden gebruikt in hetzij de vorm met laag molecuulgewicht (LM-UK, M~33000 dalton) hetzij de vorm met hoog mole-20 cuulgewicht (HM-UK, Mr-55000 dalton), waarvan de HM-vorm de voorkeur verdient. Het UK kan worden verkregen uit natuurlijke bronnen (bijvoorbeeld urine) of kan worden verkregen door recombinantENA-methoden, die splitsing inhouden van de aanvankelijk gevormde enkel-ketenige vorm (pro-UK), als vermeld door W.E. Holmes et al, Bio/Technology 25 _3 923 (1985). HM-UK is in de handel verkrijgbaar als Ukidan@ of ® ®

Actosólv en LM-UK als Abbokinase .

Pro-UK kan eveneens uit urine worden verkregen als oorspronkelijk beschreven in het Europese octrooischrift 40238, of uit cultures van natuurlijke cellijnen of cellijnen, die door recombinant DNA-30 technologie getransformeerd zijn en kan worden verkregen in vormen, die in glycosylatiegraad of in andere opzichten verschillen.

Het volgens de uitvinding gebruikte pro-UK is normaliter menselijk pro-UK met de aminozuurreeks als getoond voor pro-UK in figuur A van de Europese octrooiaanvrage 92182 onder veronachtzaming van de 35 volgorde van -20 tot -1. Het bij de uitvinding gebruikte pro-UK kan echter van deze structuur verschillen door substitutie, weglating of toevoeging aan één of meer aminozuurresten, mits het nagenoeg dezelfde biologische werking behoudt. Aldus valt bijvoorbeeld een niet menselijk 870 2 23 4

Hr ί - 3 - pro-UK of een verbinding als beschreven in de PCT-octrooiaanvrage WO 86/04351 met een ander aminozuur gesubstitueerd voor lys-1 35 en/of phe-157 of als beschreven in de Europese octrooiaanvrage 200451 met substituties of weglatingen aan phe-157 of lys-158 onder de definitie 5 van "pro-υκ" mits het zijn biologische werking behoudt. Voorts vallen afgeknotte vormen van pro-UK, bijvoorbeeld als beschreven door Rijken et al in Thrombosis Research 42 749-760 en 761-768 onder de definitie van "pro-UK” mits de biologische werking behouden blijft.

Dergelijke moleculen kunnen hun aminoeinde hebben bij lys-136, 10 overeenkomend met enkel-ketenig LM-UK of op andere goede plaatsen, bijvoorbeeld ala-132, lys-144 en glu-150. Vormen van pro-UK met extra aminozuren, bijvoorbeeld een methionine aan het begin, zijn ook inbegrepen, indien werkzaam.

Ook kan het bij de uitvinding gebruikte UK op overeenkom-15 stige wijze verschillen van elk van de twee normale menselijke UK-moleculen (HM-UK en LM-UK) mits zijn biologische werking behouden blijft.

Patiënten, die in het bijzonder baat bij de uitvinding hebben, zijn bijvoorbeeld post-operatieve patiënten, patiënten die 20 onlangs hebben geleden aan myocardiaal infarct, resulterend in klon ten en patiënten, die leiden aan thrombi in de diepe venen. Pro-UK en UK worden afzonderlijk of samen gemengd met een farmaceutisch aanvaardbare drager, bijvoorbeeld zoutoplossing en hetzij intraveneus, hetzij door injectie, parenteraal toegediend in aangetaste 25 arteria of het hart. intraveneuze toediening, die de voorkeur ver dient, kan geschieden door infuus, door een bolusinjectie of door een combinatie van deze.

Bij voorkeur ontvangt de patiënt voor enige toediening van pro-UK of UK ook heparine, bijvoorbeeld een bolusinjectie van 30 5000 I.E. heparine, eventueel gevolgd door infuus van 1000 I.E./uur heparine. De heparine kan ook worden gegeven in de vorm van een mengsel met pro-UK of UK of als een mengsel alledrie componenten.

De bij de werkwijze van de uitvinding bij voorkeur gebruikte hoeveelheid UK bedraagt 100000 I.E. tot 300000 I.E., liever 35 150000 I.E. tot 250000 I.E., in het bijzonder 200000 I.E. De bij voorkeur gebruikte hoeveelheid pro-UK is minder dan 6500000 I.E., liever 2000000 I.E. tot 4000000 I.E.

Bovengenoemde hoeveelheid UK is het doeltreffendst bij toe- 8702234 m * - 4 - diening als bolusinjectie 15 minuten of korter voor toediening van pro-UK. Het kan echter voor een gemakkelijke toediening de voorkeur verdienen een mengsel van pro-UK en UK toe te dienen in één enkele injectie of infuus, bij voorkeur als een enkele bolusinjectie. Volgens een verder aspect van de 5 uitvinding heeft zij dan ook betrekking op een farmaceutisch prepa raat, dat een mengsel van UK en pro-UK naast een farmaceutisch aanvaardbaar verdunningsmiddel of drager, of een mengsel van UK en pro-UK in zuivere gevriesdroogde vorm bevat.

De componenten van het synergistische mengsel van de uit-10 vinding kunnen ook worden aangeboden in de vorm van een tweeling-ver- pakking, dat wil zeggen als één enkele verpakking, die aparte doseer-eenheden van UK en pro-UK bevat, met instructies voor gelijktijdige toediening.

Bij voorkeur is het preparaat nagenoeg zuiver, dat wil zeg-15 gen het bevat nagenoeg geen hoeveelheid aan andere farmaceutisch ak- tieve stoffen dan UK en pro-UK. Liefst is het preparaat analytisch zuiver, dat wil zeggen het bevat geen ander proteïne dan UK en pro-UK in een hoeveelheid, die kan worden aangetoond met de analysemethoden, die op de indieningsdatum van deze aanvrage beschikbaar zijn. Als er 20 een verdunningsmiddel of drager aanwezig is, is dit bij voorkeur steriel water voor injectie of steriele isotone zoutoplossing.

De gewichtsverhouding van UK tot pro-UK bedraagt in het preparaat van de uitvinding bij voorkeur 1: 40 tot 1: 6, 7, liever 1: 20 tot 1: 10 in het bijzonder Ij 15 tot 1: 10. Bij voorkeur is het preparaat 25 verwerkt tot doseereenheidsvormen, bijvoorbeeld fiolen voor injectie of flessen voor infuus, die elk 100000-300000 I.E. UK en 2000000-4000000 I.E. pro-UK bevatten, liever 200000 I.E. UK en 2000000-3000000 I.E. pro-UK.

Een dergelijke doseereenheidsvorm bevat een gecombineerde 30 totaaldosis UK en pro-UK van 2100000 tot 4300000 I.E., overeenkomend met ongeveer 21-43 mg proteïne. De hoeveelheden van elke verbinding zijn dus veel lager dan de hoeveelheid, die van elke verbinding nodig is voor optimale klontlyse bij gebruik in afwezigheid van de andere bij dezelfde therapeutische behandeling.

35 Volgens een ander aspect van de uitvinding geeft men de patiënt een bolusinjectie van UK en een bolusinjectie van pro-UK, gevolgd door een infuus van pro-UK. De als bolus verkregen hoeveelheid UK is als boven beschreven, dat wil zeggen bij voorkeur 100000- 870 2 23 4 - 5 - 300000 I.E., liever 150000-250000 I.E., in het bijzonder 200000 I.E.

De als bolus verkregen hoeveelheid pro-UK is bij voorkeur 300000-1000000 I.E./ liever 400000-600000 I.E., in het bijzonder 500000 I.E. Deze hoeveelheden kunnen worden toegediend als twee aparte bolusinjec-5 ties, die in willekeurige volgorde worden gegeven of uit een injectie spuit met dubbele houder, of als een enkele bolusin j ectie van een mengsel van UK en pro-UK, wat een ander preparaat volgens de uitvinding vertegenwoordigt.

De gewichtsverhouding van UK tot pro-UK bedraagt in dit 10 preparaat bij voorkeur 1:10 tot 1: 1, liever 1: 4 tot 1: 1, 6, in het bijzonder 1:2,5. Het UK wordt echter bij voorkeur toegediend alvorens ook maar enig pro-UK is gegeven.

Ook kan het gewenst zijn heparine samen met de bolus van UK en/of pro-UK toe te dienen. De aan de bovengenoemde hoeveelheden 15 UK, pro-UK of UK/pro-UK mengsel toe te voegen hoeveelheid heparine bedraagt bij voorkeur 1000 tot 10000 I.E., liever ongeveer 5000 I.E.

De vervolgens als infuus gegeven hoeveelheid pro-UK is bij voorkeur ongeveer 100000 I.E./minuut, die kan worden gegeven gedurende ongeveer 40 minuten, dat wil zeggen een totaal van 4000000 I.E.

20 In vele gevallen kan er opening van de afgesloten arterie optreden binnen 30 minuten of zelfs minder en kan het infuus daarna worden gestopt, indien opening van de arterie is vastgesteld, bijvoorbeeld door coronair angiografie.

Voor gebruik bij dit aspect van de uitvinding wordt voorzien 25 in een kit, bestaande uit een doseereenheid UK voor injectie, een doseereenheid pro-UK voor injectie en een doseereenheid pro-UK voor infuus. De kit wordt bij voorkeur aangeboden in één enkele verpakking en in combinatie met instructies voor toediening. De doseereeriheids-vormen voor injectie kunnen steriele oplossing van UK of pro-UK in 30 zuiver water of in fysiologische zoutoplossing zijn, of kunnen in gelyofiliseerde of gevriesdroogde vaste vorm verkeren, waaraan steriel water of zoutoplossing wordt toegevoegd voor injectie. De doseer-eenheidsvorm van pro-UK voor infuus kan een oplossing in fysiologische zoutoplossing zijn of een ander steriel waterig medium voor infuus, 35 of een gelyofiliseerde of gevriesdroogde vaste stof of een vloeibaar concentraat, waaruit een infuusoplossing kan worden bereid. De oplossing voor injectie of infuus kan andere componenten bevatten, bijvoorbeeld buff er zouten, zoals Na^HPO^/Na^PO^ en conserveermiddelen, bij- 870223 4 + \ - 6 - voorbeeld mannitol en menselijk albumine en deze componenten kunnen ook aanwezig zijn in de gelyofiliseerde of gevriesdroogde vaste vormen.

De hoeveelheid UK en pro-UK in de doseereenheidsvormen voor injectie is bij voorkeur als boven beschreven, in het bijzonder 5 200000 I.E. UK en 500000 I.E. pro-UK en de hoeveelheid pro-UK in de doseereenheid voor infuus is bij voorkeur 3000000-5000000 I.E., liever 4000000 I.E.

De combinatie van een lage dosis UK (200000 I.E.) en een lage dosis pro-UK (3000000 I.E.) kan in het merendeel van de gevallen 10 van myocardiaal infarct doeltreffende thrombolyse bewerkstelligen.

Voor het verkrijgen van dezelfde mate van succes met UK alleen zouden doses van 2000000 tot 2500000 I.E. nodig zijn en bij dit dosispeil ondervindt men neveneffekten, zoals systemische fibrinogenolyse en verlies van plasminogeen. Ter verkrijging van dezelfde resultaten 15 met pro-UK alleen kunnen doses van duidelijk meer dan 6500000 I.Ë., bijvoorbeeld 9000000 I.E. nodig zijn. Deze resultaten wijzen op een synergistische wisselwerking tussen UK en pro-UK bij klontlyse.

De hoeveelheid van elke verbinding wordt hier uitgedrukt in hetzij het gewicht (mg) hetzij in Internationale Eenheden (I.E.), 20 gebaseerd op de internationale referentiebereiding van UK, bepaald aan een standaard fibrineplaat (Brakman, Fibrinolysis, A Standardized Fibrin Plate Method and a Fibrinolytic Assay of Platminogen, Schelte-ma & Holkema NV, Amsterdam, 1967, biz. 1-24). Pro-UK wordt bepaald na aktivering met piasmine als beschreven in Gurewich et al., 25 J. Clin. Invest. (1984) 73, blz. 1731-1739. UK (zowel de HM-vorm als de LM-vorm) en pro-UK gaven soortgelijke specifieke aktiviteiten (ongeveer 100000 I.E./mg), zodat de proteïneconcentraties konden worden vergeleken (1 I.E. = 10 ng proteïne).

Daar UK gewoonlijk verkrijgbaar is in ampullen, die 30 250.000 I.E. bevatten, kan men, overal waar dit in de beschrijving en voorbeelden vermeld wordt, een dosis van 250.000 I.E. nemen in plaats van 200.000 I.E. Gebruik van een 250.000 I.E. dosis voorkomt de moeilijkheid, dat men 4/5 van een ampul moet schatten en geeft dezelfde gunstige effekten als een 200.000 I..E. dosis.

8702 23 4 - 6a -

Voorbeeld 1

Een 58-jaar oude vrouw, die aan myocardiaal infarct leed, ontving een bolusinjectie van 200000 I.E. urokinase i.v., gevolgd door een bolusinjectie van 1000000 I.E. pro-urokinase en een infuus van 5 pro-urokinase in een hoeveelheid van 5, 5 miljoen I.E./uur. Na 15 minuten werd partiële perfusie bereikt en volledige perfusie na 30 minuten, dat wil zeggen nadat een totaal van 3250000 I.E. pro-UK was toegediend. Er was 24 uur na toediening nog altijd een volledige perfusie.

Voorbeeld 2 10 Een mannelijke patiënt, die aan myocardiaal infarct leed 870223 4 f - 7 - ontving een mengsel van 200000 I.E. urokinase en 2500000 I.E. pro-UK, geinfuseerd in 15 minuten. Aan het einde van deze periode was volledige perfusie verkregen.

Voorbeeld 3 Doseervormen 5 a) Mengsel voor injectie.

200000 I.E. UK en 2000000 I.E. pro-UK worden in 20 ml steriele isotone zoutoplossing opgelost en verpakt in een fiool-yoor injectie.

b) Gevriesdroogd mengsel.

10 Een oplossing van 200000 I.E. UK en 3000000 I.E. pro-UK

wordt gevriesdroogd en de vaste rest wordt in een fiool gesloten, waaraan zoutoplossing voor injectie kan worden toegevoegd.

c) Injectiespuit met dubbele houder.

Eén houder van de voorverpakte injectiespuit bevat 200000 15 I.E. UK in 10 ml steriele isotone zoutoplossing en de andere bevat 3000000 I.E. pro-UK in 10 ml steriele isotone zoutoplossing.

d) Tweelingverpakking.

Een tweelingverpakking omvat één fiool, die 200000 I.E. UK in gevriesdroogde vorm bevat en één fiool, die 3000000 I.E. pro-UK

20 in gevriesdroogde vorm bevat, met instructies voor gelijktijdige toediening.

Voorbeeld 4

Men vervaardigt de doseervormen van voorbeeld 3 ook onder gebruik van 500000 I.E. pro-UK in plaats van 2000000 of 3000000 I.E.

25 pro-UK.

Voorbeeld 5

Bij een multi-centrale, open, prospectieve clinische proefneming, gebruikte men het volgende protocol:

Kriteria voor opneming 30 1) pijn, kenmerkend voor myocardiaal infarct, van tenminste 30 minuten duur.

2) inzet van symptomen minder dan vijf uur voor het begin van lytische therapie.

3) ECG-bevindingen kenmerkend voor myocardiaal infarct.

870 2 23 4 - 8 - v 4) ingewonnen toestemming van patiënt.

Kriteria voor uitsluiting 1) contra-indicaties voor coronair angiografie.

2) contra-indicaties voor lytische therapie 5 a) begin van therapie met heparine of cumarine.

b) veneuze of arteriaal punctuur binnen de laatste 8 dagen.

c) cerebrövasculair voorval binnen dè laatste 2 maanden.

d) aktieve bloeding.

e) maag- of twaalfvingerige darmzweer binnen het laatste 10 jaar.

f) chirurgische operatie binnen de laatste 8 dagen.

g) haemorragische diathese 3) onvolledige blokkering van coronair arterie (als blijkt uit coronair angiografie) 15 4) partiële of complete reperfusie na toediening van nitro glycerine.

5) cardiaal verwant coma.

6) ernstige hartklep- of hartziekte, hypertrofische cardio- nyopathie.

20 7) ernstige nier- of leverziekte, die de excretie van pro-urokinase nadelig zou kunnen beïnvloeden.

8) gebruik van orale contraceptiva.

Procedure

Patiënten, die aan bovenstaande kriteria voor opneming 25 voldoen, ontvangen 5000 I.E. heparine en men voert een coronair angio grafie uit. Indien een totale arteriale blokkering wordt waargenomen, dient men 100-200 jiq nitroglycerine intracoronair toe en herhaalt angiografie van het geblokkeerde vat. Indien geen opening wordt waargenomen na toedienen van nitroglycerine ontvangt de patiënt 200000 30 I.E. hoog molecuulgewicht-urokinase in een intraveneuze bolusinjectie, gevolgd door 500000 I.E. pro-urokinase i.v. in een bolusinjectie, die over 3 minuten wordt gegeven. Onmiddellijk daarna wordt intraveneus infuus van 4000000 I.E. pro-UK uitgevoerd over 40 minuten. Men voert coronair angiografie uit met tussenpozen van 15 minuten teneinde de.

35 voortgang van de klontlyse na te gaan en men herhaalt dit 60 minuten na succesvolle lyse en ook 24 uur en 3 weken na behandeling teneinde na te gaan of er herafsluiting is opgetreden.

8702234 I» h - 9 -

Resultaten

Van 19 patiënten, die volgens dit protocol behandeld werden, vertonen er 14 (74%) heropening of patentie van de afgesloten arterie na de 40 minuten infuus. Daarvan vertonen er twee na 24 uur 5 herafsluiting.

8/02234

Claims (22)

1. Werkwijze voor het gezamenlijk gebruik van urokinase (UK) en pro-urokinase (pro-υκ) in vrije of vaste combinatie, met het kenmerk, dat men de stoffen gezamenlijk als thrombolytisch middel gebruikt.

2. Werkwijze volgens conclusie 1 met het kenmerk, dat de UK-dosis 100000 tot 3000QQ I.E. en de pro-UK-dosis minder dan 6500000 I.E. bedraagt.

3. Werkwijze volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat de UK-dosis 150000 tot 250000 I.E. en de pro-UK-dosis 2000000 tot 10 4000000 I.E. bedraagt.

4. Werkwijze volgens één der voorgaande conclusies,met het kenmerk dat men UK als een bolusinjectie toedient voor een injectie of infuus van pro-UK.

5. Werkwijze voor het bereiden van een middel voor het 15 potentiëren van het thrombolytisch effekt van pro-UK met het kenmerk, dat men daarbij UK gebruikt.

6. Tweelingverpakking, met het kenmerk, dat zij aparte do-seereenheden van UK en pro-UK met instructies voor gelijktijdige toediening bevat.

7. Tweelingverpakking volgens conclusie 6,. met het kenmerk, dat de doseereenheid van UK 100000 tot 300000 I.E. en de doseereenheid van pro-UK minder dan 6500000 I.E. bevat.

8. Tweelingverpakking volgens conclusie 7, met het kenmerk, dat de doseereenheid van UK 150000 tot 250000 I.E. en de doseereen- 25 heid van pro-UK 2000000 tot 4000000 I.E. bevat.

9. Kit, met het kenmerk, dat zij een doseereenheid van UK voor injectie, een doseereenheid van pro-UK voor injectie en een doseereenheid van pro-UK voor infuus omvat.

10. Kit volgens conclusie 9, met het kenmerk, dat de doseer- 30 eenheid van UK voor injectie 150000 tot 250000 I.E., de doseereenheid van pro-UK voor injectie 400000 tot 600000 I.E. en de doseereenheid van pro-UK voor infuus 3000000 tot 5000000 I.E. bevat.

11. Tweelingverpakking of kit volgens één der conclusies 6-10, met het kenmerk, dat tenminste één van de doseereenheidsvormen 35 van UK of pro-UK ook 1000 tot 10000 I.E. heparine bevat.

12. Farmaceutisch preparaat, met het kenmerk, dat het een mengsel van UK en pro-UK naast een farmaceutisch aanvaardbaar verdun- 8702234 * » t -it - ningsmiddel of drager, of een mengsel van UK en pro-UK in zuivere, gevriesdroogde vorm omvat.

13. Preparaat volgens conclusie 12, met het kenmerk, dat het geen hoeveelheid van betekenis aan de andere farmaceutisch 5 aktieve stof dan UK en pro-UK bevat.

14. Preparaat volgens conclusie 13, met het kenmerk, dat het geen ander proteïne dan UK en pro-UK in een met de beschikbare analytische methoden waarneembare hoeveelheid bevat.

15. Preparaat volgens één der conclusies 12-14, met het 10 kenmerk, dat de gewichtsverhouding van UK tot pro-UK 1:40 tot 1:6,7 bedraagt.

16. Preparaat volgens conclusie 15, met het kenmerk, dat de gewichtsverhouding van UK tot pro-UK 1: 15 tot 1: 10 bedraagt.

17. Doseereenheidsvorm van een preparaat volgens conclusie 15 15, met het kenmerk, dat zij 100000 tot 300000 I.E. UK en 2000000 tot 4000000 I.E. pro-UK bevat.

18. Doseereenheidsvorm volgens conclusie 17, met het kenmerk, dat zij 2000000 I.E. UK en 2000000 tot 3000000 I.E. pro-UK bevat.

19. Farmaceutisch preparaat volgens één der conclusies 12- 14, met het kenmerk, dat de gewichtsverhouding van UK tot pro-UK 1:4 tot 1:1,6 bedraagt.

20. Doseereenheidsvorm van een preparaat volgens conclusie 19, met het kenmerk, dat zij 150000 tot 250000 I.E. UK en 400000 tot 25 600000 I.E. pro-UK bevat.

21. Doseereenheidsvorm volgens conclusie 20, met het kenmerk, dat zij bovendien 1000 tot 10000 I.E. heparine bevat.

22. Werkwijzen, toepassingen en preparaten, zoals beschreven in de beschrijving en/of voorbeelden. -o-o-o-o-o- 870 2 23 4