NL8702234A

NL8702234A - IMPROVEMENTS IN OR WITH REGARD TO ORGANIC COMPOUNDS.

Info

Publication number: NL8702234A
Application number: NL8702234A
Authority: NL
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1986-10-03
Filing date: 1987-09-18
Publication date: 1988-05-02
Also published as: FR2605225A1; PT85848B; NO874143L; SE466531B; FI874320A; IL84061A0; LU87007A1; DK519287D0; GR871528B; IT8748444A0; PT85848A; KR960002738B1; CH678599A5; FI874320A0; MY101943A; FR2605225B1; SE8703788D0; IT1230114B; BE1002058A4; DE3731776A1

Description

* % »*% »

Verbeteringen aan of met betrekking tot organische verbindingen.Improvements to or with respect to organic compounds.

De uitvinding heeft betrekking op de therapeutische lyse van fibrine bloedklonten bij menselijke patiënten.The invention relates to the therapeutic lysis of fibrin blood clots in human patients.

Er zijn verschillende in de natuur voorkomende enzymen bekend voor het deelnemen aan de lyse van fibrineklonten en deze zijn 5 therapeutisch gebruikt voor het lyseren van klonten bij patiënten, bijvoorbeeld coronair-patiënten, waarbij zich levensbedreigende klonten hébben gevormd. Twee van deze enzymen zijn pro-urokinase (pro-üK) en urokinase (UK). Men neemt aan, dat UK in vivo wordt gesynthetiseerd in een enkel-ketenige, zymogene vorm (pro-UK), die door een proteoly-10 tische splitsing wordt omgezet in de twee-ketenige vorm (UK). Een eventuele andere naam voor pro-υκ is enkel-ketenige urinair plasmino-geen aktivator (eku-PA).Several naturally occurring enzymes are known to participate in the lysis of fibrin lumps and have been used therapeutically for lysing lumps in patients, eg coronary patients, where life-threatening lumps have formed. Two of these enzymes are pro-urokinase (pro-üK) and urokinase (UK). UK is believed to be synthesized in vivo in a single-chain, zymogenic form (pro-UK), which is converted to the two-chain form (UK) by a proteolytic cleavage. A possible other name for pro-υκ is single-chain urinary plasmino-no activator (eku-PA).

Beide middelen, UK en pro-UK kunnen voor thrombolyse bij vroeg myocardiaal infarct worden gebruikt teneinde definitieve myocar-15 diaal necrose te beperken of zelfs te voorkomen. UK wordt voor dit doel gebruikt in doses van meer dan 1000000 I.E. en intraveneuze doses die de voorkeur verdienen, bedragen 2000000 tot 3000000 I.E. per toediening. Het gebruik van pro-UK voor deze indicatie is thans in onderzoek en de resultaten tonen tot dusver aan, dat doses 20 boven 6500000 I.E. voor het verkrijgen van goede resultaten nodig zijn.Both agents, UK and pro-UK, can be used for thrombolysis in early myocardial infarction to limit or even prevent definitive myocardial necrosis. UK is used for this purpose in doses above 1000000 I.E. and preferred intravenous doses are from 2000000 to 3000000 IU. per administration. The use of pro-UK for this indication is currently under investigation and the results so far show that doses above 6500000 I.U. necessary to obtain good results.

Oorspronkelijk werd verwacht, dat de werkingen van pro-UK en UK ten hoogste strikt additief waren. Er werd echter gevonden, dat UK verrassenderwijs een synergistisch effekt heeft op de therapeuti-25 sche werking van pro-UK. In het bijzonder werd gevonden, dat wanneer men een aanvankelijke bolus van UK toedient, daaropvolgende toediening van pro-UK effektiever is, wat resulteert in een ingrijpende verlaging van de algehele dosis, die ter verkrijging van het gunstige therapeutische effekt nodig is.Originally, the effects of pro-UK and UK were expected to be at most strictly additive. However, it has been found that UK surprisingly has a synergistic effect on the therapeutic effect of pro-UK. In particular, it has been found that when administering an initial bolus of UK, subsequent administration of pro-UK is more effective, resulting in a dramatic reduction in the overall dose required to obtain the beneficial therapeutic effect.

30 Er werd ook gevonden, dat dit synergistische effekt niet is beperkt tot het geval, waarin aanvankelijke toediening van UK wordt gevolgd door daaropvolgende toediening van pro-UK, maar er werd ook gevonden, dat wanneer men eerst pro-UK toedient, gevolgd door UK, of wanneer men pro-υκ en UK tegelijkertijd toedient, ongeacht of dit 35 geschiedt door aparte infusen of injecties, door één enkele injectie vanuit een spuit met dubbele houder, of door één enkele injectie of 8702234 9» > - 2 - infuus van een mengsel van pro-UK en UK.It was also found that this synergistic effect is not limited to the case where initial administration of UK is followed by subsequent administration of pro-UK, but it was also found that when administering first pro-UK followed by UK , or when pro-υκ and UK are administered at the same time, whether by separate infusions or injections, by a single injection from a double-barreled syringe, or by a single injection or 8702234 9 »> - 2 - infusion of a mixture of pro-UK and UK.

Aldus heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor het lyseren van fibrine bloedklonten bij patiënten, die een dergelijke behandeling behoeven, waarbij men doeltreffende hoeveelheden UK en 5 pro-UK, hetzij tegeljkertijd, hetzij achtereenvolgens binnen een tijd verloop, dat ter verkrijging van een synergistisch effekt voldoende kort is, toedient.Thus, the invention relates to a method of lysing fibrin blood clots in patients in need of such treatment, whereby effective amounts of UK and 5 pro-UK, either simultaneously or sequentially, proceed over time to obtain a synergistic effect is sufficiently short.

De uitvinding heeft ook betrekking op het gebruik van UK samen met pro-UK, in vrije of vaste combinatie, als thrombolytisch mid-10 del. De uitvinding heeft ook nog betrekking op het gebruik van UK voor het bereiden van een middel voor de potentiëring van het thrombolyti-sche effekt van pro-UK.The invention also relates to the use of UK together with pro-UK, in free or fixed combination, as a thrombolytic agent. The invention also further relates to the use of UK for preparing an agent for potentiating the thrombolytic effect of pro-UK.

Met "synergistisch effekt" wordt een fibrine-klont lyseren-de werking bedoeld, die groter is (ofwel in termen van grotere lyseer-15 snelheid, ofwel een grotere hoeveelheid lyse, ofwel beide) dan zou worden verwacht van het additieve effekt van de twee aktieve stoffen bij onafhankelijke toediening.By "synergistic effect" is meant a fibrin lump lysis action which is greater (either in terms of greater lysis rate, or greater amount of lysis, or both) than would be expected from the additive effect of the two active substances when administered independently.

Urokinase kan worden gebruikt in hetzij de vorm met laag molecuulgewicht (LM-UK, M~33000 dalton) hetzij de vorm met hoog mole-20 cuulgewicht (HM-UK, Mr-55000 dalton), waarvan de HM-vorm de voorkeur verdient. Het UK kan worden verkregen uit natuurlijke bronnen (bijvoorbeeld urine) of kan worden verkregen door recombinantENA-methoden, die splitsing inhouden van de aanvankelijk gevormde enkel-ketenige vorm (pro-UK), als vermeld door W.E. Holmes et al, Bio/Technology 25 _3 923 (1985). HM-UK is in de handel verkrijgbaar als Ukidan@ of ® ®Urokinase can be used in either the low molecular weight form (LM-UK, M ~ 33000 daltons) or the high molecular weight form (HM-UK, Mr-55000 daltons), the HM form of which is preferred. The UK can be obtained from natural sources (e.g. urine) or can be obtained by recombinantENA methods involving cleavage of the initially formed single-chain form (pro-UK) as reported by W.E. Holmes et al., Bio / Technology 25, 923 (1985). HM-UK is commercially available as Ukidan @ or ® ®

Actosólv en LM-UK als Abbokinase .Actosólv and LM-UK as Abbokinase.

Pro-UK kan eveneens uit urine worden verkregen als oorspronkelijk beschreven in het Europese octrooischrift 40238, of uit cultures van natuurlijke cellijnen of cellijnen, die door recombinant DNA-30 technologie getransformeerd zijn en kan worden verkregen in vormen, die in glycosylatiegraad of in andere opzichten verschillen.Pro-UK can also be obtained from urine as originally described in European patent 40238, or from cultures of natural cell lines or cell lines, which have been transformed by recombinant DNA-30 technology and can be obtained in forms that are glycosylated or otherwise differences.

Het volgens de uitvinding gebruikte pro-UK is normaliter menselijk pro-UK met de aminozuurreeks als getoond voor pro-UK in figuur A van de Europese octrooiaanvrage 92182 onder veronachtzaming van de 35 volgorde van -20 tot -1. Het bij de uitvinding gebruikte pro-UK kan echter van deze structuur verschillen door substitutie, weglating of toevoeging aan één of meer aminozuurresten, mits het nagenoeg dezelfde biologische werking behoudt. Aldus valt bijvoorbeeld een niet menselijk 870 2 23 4The pro-UK used according to the invention is normally human pro-UK with the amino acid series shown for pro-UK in Figure A of European patent application 92182 disregarding the order of -20 to -1. However, the pro-UK used in the invention may differ from this structure by substitution, deletion or addition to one or more amino acid residues, provided it retains substantially the same biological activity. Thus, for example, a non-human falls 870 2 23 4

Hr ί - 3 - pro-UK of een verbinding als beschreven in de PCT-octrooiaanvrage WO 86/04351 met een ander aminozuur gesubstitueerd voor lys-1 35 en/of phe-157 of als beschreven in de Europese octrooiaanvrage 200451 met substituties of weglatingen aan phe-157 of lys-158 onder de definitie 5 van "pro-υκ" mits het zijn biologische werking behoudt. Voorts vallen afgeknotte vormen van pro-UK, bijvoorbeeld als beschreven door Rijken et al in Thrombosis Research 42 749-760 en 761-768 onder de definitie van "pro-UK” mits de biologische werking behouden blijft.Hr ί - 3 - pro-UK or a compound as described in PCT patent application WO 86/04351 with another amino acid substituted for lys-1 35 and / or phe-157 or as described in European patent application 200451 with substitutions or omissions to phe-157 or lys-158 under definition 5 of "pro-υκ" provided it retains its biological activity. Furthermore, truncated forms of pro-UK, for example as described by Rijken et al in Thrombosis Research 42 749-760 and 761-768, fall within the definition of "pro-UK" provided the biological activity is retained.

Dergelijke moleculen kunnen hun aminoeinde hebben bij lys-136, 10 overeenkomend met enkel-ketenig LM-UK of op andere goede plaatsen, bijvoorbeeld ala-132, lys-144 en glu-150. Vormen van pro-UK met extra aminozuren, bijvoorbeeld een methionine aan het begin, zijn ook inbegrepen, indien werkzaam.Such molecules can have their amino ends at lys-136, 10 corresponding to single-chain LM-UK or at other good sites, for example, ala-132, lys-144 and glu-150. Pro-UK forms with additional amino acids, for example an initial methionine, are also included, if effective.

Ook kan het bij de uitvinding gebruikte UK op overeenkom-15 stige wijze verschillen van elk van de twee normale menselijke UK-moleculen (HM-UK en LM-UK) mits zijn biologische werking behouden blijft.Also, the UK used in the invention may differ similarly from any of the two normal human UK molecules (HM-UK and LM-UK) provided that its biological activity is preserved.

Patiënten, die in het bijzonder baat bij de uitvinding hebben, zijn bijvoorbeeld post-operatieve patiënten, patiënten die 20 onlangs hebben geleden aan myocardiaal infarct, resulterend in klon ten en patiënten, die leiden aan thrombi in de diepe venen. Pro-UK en UK worden afzonderlijk of samen gemengd met een farmaceutisch aanvaardbare drager, bijvoorbeeld zoutoplossing en hetzij intraveneus, hetzij door injectie, parenteraal toegediend in aangetaste 25 arteria of het hart. intraveneuze toediening, die de voorkeur ver dient, kan geschieden door infuus, door een bolusinjectie of door een combinatie van deze.For example, patients particularly benefiting from the invention are post-operative patients, patients who have recently suffered from myocardial infarction resulting in lumps and patients suffering from thrombi in the deep veins. Pro-UK and UK are mixed individually or together with a pharmaceutically acceptable carrier, for example, saline and administered either intravenously or by injection, parenterally in affected artery or the heart. Preferred intravenous administration may be by infusion, by bolus injection or by a combination of these.

Bij voorkeur ontvangt de patiënt voor enige toediening van pro-UK of UK ook heparine, bijvoorbeeld een bolusinjectie van 30 5000 I.E. heparine, eventueel gevolgd door infuus van 1000 I.E./uur heparine. De heparine kan ook worden gegeven in de vorm van een mengsel met pro-UK of UK of als een mengsel alledrie componenten.Preferably, for any administration of pro-UK or UK, the patient also receives heparin, for example, a bolus injection of 30,000 IU. heparin, optionally followed by infusion of 1000 IU / h heparin. The heparin can also be given in the form of a mixture with pro-UK or UK or as a mixture of all three components.

De bij de werkwijze van de uitvinding bij voorkeur gebruikte hoeveelheid UK bedraagt 100000 I.E. tot 300000 I.E., liever 35 150000 I.E. tot 250000 I.E., in het bijzonder 200000 I.E. De bij voorkeur gebruikte hoeveelheid pro-UK is minder dan 6500000 I.E., liever 2000000 I.E. tot 4000000 I.E.The preferred amount of UK used in the process of the invention is 100000 I.U. up to 300,000 IU, more preferably 35,000,000 IU. up to 250,000 IU, in particular 200,000 IU. The preferred amount of pro-UK is less than 6500000 IU, more preferably 2000000 IU. up to 4000000 I.U.

Bovengenoemde hoeveelheid UK is het doeltreffendst bij toe- 8702234 m * - 4 - diening als bolusinjectie 15 minuten of korter voor toediening van pro-UK. Het kan echter voor een gemakkelijke toediening de voorkeur verdienen een mengsel van pro-UK en UK toe te dienen in één enkele injectie of infuus, bij voorkeur als een enkele bolusinjectie. Volgens een verder aspect van de 5 uitvinding heeft zij dan ook betrekking op een farmaceutisch prepa raat, dat een mengsel van UK en pro-UK naast een farmaceutisch aanvaardbaar verdunningsmiddel of drager, of een mengsel van UK en pro-UK in zuivere gevriesdroogde vorm bevat.The above amount of UK is most effective when administered as a bolus injection 15 minutes or less before administration of pro-UK. However, it may be preferable for easy administration to administer a mixture of pro-UK and UK in a single injection or infusion, preferably as a single bolus injection. According to a further aspect of the invention, it therefore relates to a pharmaceutical composition which contains a mixture of UK and pro-UK in addition to a pharmaceutically acceptable diluent or carrier, or a mixture of UK and pro-UK in pure freeze-dried form .

De componenten van het synergistische mengsel van de uit-10 vinding kunnen ook worden aangeboden in de vorm van een tweeling-ver- pakking, dat wil zeggen als één enkele verpakking, die aparte doseer-eenheden van UK en pro-UK bevat, met instructies voor gelijktijdige toediening.The components of the synergistic mixture of the invention may also be presented in twin pack, ie as a single pack containing separate UK and pro-UK dosing units, with instructions for co-administration.

Bij voorkeur is het preparaat nagenoeg zuiver, dat wil zeg-15 gen het bevat nagenoeg geen hoeveelheid aan andere farmaceutisch ak- tieve stoffen dan UK en pro-UK. Liefst is het preparaat analytisch zuiver, dat wil zeggen het bevat geen ander proteïne dan UK en pro-UK in een hoeveelheid, die kan worden aangetoond met de analysemethoden, die op de indieningsdatum van deze aanvrage beschikbaar zijn. Als er 20 een verdunningsmiddel of drager aanwezig is, is dit bij voorkeur steriel water voor injectie of steriele isotone zoutoplossing.Preferably, the formulation is substantially pure, ie it contains substantially no amount of pharmaceutically active substances other than UK and pro-UK. Most preferably, the preparation is analytically pure, i.e. it contains no protein other than UK and pro-UK in an amount which can be demonstrated by the analytical methods available on the filing date of this application. If a diluent or carrier is present, it is preferably sterile water for injection or sterile isotonic saline.

De gewichtsverhouding van UK tot pro-UK bedraagt in het preparaat van de uitvinding bij voorkeur 1: 40 tot 1: 6, 7, liever 1: 20 tot 1: 10 in het bijzonder Ij 15 tot 1: 10. Bij voorkeur is het preparaat 25 verwerkt tot doseereenheidsvormen, bijvoorbeeld fiolen voor injectie of flessen voor infuus, die elk 100000-300000 I.E. UK en 2000000-4000000 I.E. pro-UK bevatten, liever 200000 I.E. UK en 2000000-3000000 I.E. pro-UK.The weight ratio of UK to pro-UK is preferably 1:40 to 1: 6, 7, more preferably 1:20 to 1:10, especially Ij 15 to 1:10, in the composition of the invention. Preferably, the composition is 25 processed into dosage unit forms, for example vials for injection or bottles for infusion, each containing 100000-300000 IU UK and 2000000-4000000 I.E. pro-UK, preferably 200,000 I.E. UK and 2000000-3000000 I.E. pro-UK.

Een dergelijke doseereenheidsvorm bevat een gecombineerde 30 totaaldosis UK en pro-UK van 2100000 tot 4300000 I.E., overeenkomend met ongeveer 21-43 mg proteïne. De hoeveelheden van elke verbinding zijn dus veel lager dan de hoeveelheid, die van elke verbinding nodig is voor optimale klontlyse bij gebruik in afwezigheid van de andere bij dezelfde therapeutische behandeling.Such a dosage unit form contains a combined total dose of UK and pro-UK of 2100000 to 4300000 IU, corresponding to about 21-43 mg of protein. Thus, the amounts of each compound are much less than the amount of each compound required for optimal lump lysis when used in the absence of the others in the same therapeutic treatment.

35 Volgens een ander aspect van de uitvinding geeft men de patiënt een bolusinjectie van UK en een bolusinjectie van pro-UK, gevolgd door een infuus van pro-UK. De als bolus verkregen hoeveelheid UK is als boven beschreven, dat wil zeggen bij voorkeur 100000- 870 2 23 4 - 5 - 300000 I.E., liever 150000-250000 I.E., in het bijzonder 200000 I.E.According to another aspect of the invention, the patient is given a bolus injection of UK and a bolus injection of pro-UK, followed by an infusion of pro-UK. The amount of UK obtained as a bolus is as described above, i.e. preferably 100000-870 2 23 4 - 5-300000 IU, more preferably 150000-250000 IU, especially 200000 IU.

De als bolus verkregen hoeveelheid pro-UK is bij voorkeur 300000-1000000 I.E./ liever 400000-600000 I.E., in het bijzonder 500000 I.E. Deze hoeveelheden kunnen worden toegediend als twee aparte bolusinjec-5 ties, die in willekeurige volgorde worden gegeven of uit een injectie spuit met dubbele houder, of als een enkele bolusin j ectie van een mengsel van UK en pro-UK, wat een ander preparaat volgens de uitvinding vertegenwoordigt.The amount of pro-UK obtained as a bolus is preferably 300000-1000000 IU / more preferably 400000-600000 IU, especially 500000 IU. These amounts can be administered as two separate bolus injections, given in random order or from a double-container syringe, or as a single bolus injection of a mixture of UK and pro-UK, which is a different preparation according to represents the invention.

De gewichtsverhouding van UK tot pro-UK bedraagt in dit 10 preparaat bij voorkeur 1:10 tot 1: 1, liever 1: 4 tot 1: 1, 6, in het bijzonder 1:2,5. Het UK wordt echter bij voorkeur toegediend alvorens ook maar enig pro-UK is gegeven.The weight ratio of UK to pro-UK is preferably 1:10 to 1: 1, more preferably 1: 4 to 1: 1, 6, especially 1: 2.5, in this formulation. However, the UK is preferably administered before any pro-UK has been given.

Ook kan het gewenst zijn heparine samen met de bolus van UK en/of pro-UK toe te dienen. De aan de bovengenoemde hoeveelheden 15 UK, pro-UK of UK/pro-UK mengsel toe te voegen hoeveelheid heparine bedraagt bij voorkeur 1000 tot 10000 I.E., liever ongeveer 5000 I.E.It may also be desirable to administer heparin together with the UK and / or pro-UK bolus. The amount of heparin to be added to the above amounts of UK, pro-UK or UK / pro-UK mixture is preferably 1000 to 10000 IU, more preferably about 5000 IU.

De vervolgens als infuus gegeven hoeveelheid pro-UK is bij voorkeur ongeveer 100000 I.E./minuut, die kan worden gegeven gedurende ongeveer 40 minuten, dat wil zeggen een totaal van 4000000 I.E.The amount of pro-UK subsequently infused is preferably about 100,000 IU / minute, which can be given over about 40 minutes, i.e. a total of 4000000 IU.

20 In vele gevallen kan er opening van de afgesloten arterie optreden binnen 30 minuten of zelfs minder en kan het infuus daarna worden gestopt, indien opening van de arterie is vastgesteld, bijvoorbeeld door coronair angiografie.In many cases, opening of the occluded artery may occur within 30 minutes or even less and the infusion may be stopped thereafter if artery opening has been established, for example, by coronary angiography.

Voor gebruik bij dit aspect van de uitvinding wordt voorzien 25 in een kit, bestaande uit een doseereenheid UK voor injectie, een doseereenheid pro-UK voor injectie en een doseereenheid pro-UK voor infuus. De kit wordt bij voorkeur aangeboden in één enkele verpakking en in combinatie met instructies voor toediening. De doseereeriheids-vormen voor injectie kunnen steriele oplossing van UK of pro-UK in 30 zuiver water of in fysiologische zoutoplossing zijn, of kunnen in gelyofiliseerde of gevriesdroogde vaste vorm verkeren, waaraan steriel water of zoutoplossing wordt toegevoegd voor injectie. De doseer-eenheidsvorm van pro-UK voor infuus kan een oplossing in fysiologische zoutoplossing zijn of een ander steriel waterig medium voor infuus, 35 of een gelyofiliseerde of gevriesdroogde vaste stof of een vloeibaar concentraat, waaruit een infuusoplossing kan worden bereid. De oplossing voor injectie of infuus kan andere componenten bevatten, bijvoorbeeld buff er zouten, zoals Na^HPO^/Na^PO^ en conserveermiddelen, bij- 870223 4 + \ - 6 - voorbeeld mannitol en menselijk albumine en deze componenten kunnen ook aanwezig zijn in de gelyofiliseerde of gevriesdroogde vaste vormen.For use in this aspect of the invention, there is provided a kit consisting of a dosing unit UK for injection, a dosing unit pro-UK for injection and a dosing unit pro-UK for infusion. The kit is preferably presented in a single package and in combination with instructions for administration. The dosage forms for injection may be sterile solution of UK or pro-UK in pure water or in physiological saline, or may be in lyophilized or lyophilized solid, to which sterile water or saline is added for injection. The dosage unit form of pro-UK for infusion may be a solution in physiological saline or another sterile aqueous medium for infusion, or a lyophilized or lyophilized solid or a liquid concentrate from which an infusion solution can be prepared. The solution for injection or infusion may contain other components, for example buffer salts, such as Na ^ HPO ^ / Na ^ PO ^ and preservatives, eg 870223 4 + \ - 6 - for example mannitol and human albumin and these components may also be present in the lyophilized or lyophilized solid forms.

De hoeveelheid UK en pro-UK in de doseereenheidsvormen voor injectie is bij voorkeur als boven beschreven, in het bijzonder 5 200000 I.E. UK en 500000 I.E. pro-UK en de hoeveelheid pro-UK in de doseereenheid voor infuus is bij voorkeur 3000000-5000000 I.E., liever 4000000 I.E.The amount of UK and pro-UK in the dosage unit forms for injection is preferably as described above, especially 5 200,000 I.U. UK and 500000 I.U. pro-UK and the amount of pro-UK in the infusion dosing unit is preferably 3000000-5000000 I.U., more preferably 4000000 I.U.

De combinatie van een lage dosis UK (200000 I.E.) en een lage dosis pro-UK (3000000 I.E.) kan in het merendeel van de gevallen 10 van myocardiaal infarct doeltreffende thrombolyse bewerkstelligen.The combination of a low dose of UK (200,000 IU) and a low dose of pro-UK (300,000 IU) can effect thrombolysis in the majority of myocardial infarction cases.

Voor het verkrijgen van dezelfde mate van succes met UK alleen zouden doses van 2000000 tot 2500000 I.E. nodig zijn en bij dit dosispeil ondervindt men neveneffekten, zoals systemische fibrinogenolyse en verlies van plasminogeen. Ter verkrijging van dezelfde resultaten 15 met pro-UK alleen kunnen doses van duidelijk meer dan 6500000 I.Ë., bijvoorbeeld 9000000 I.E. nodig zijn. Deze resultaten wijzen op een synergistische wisselwerking tussen UK en pro-UK bij klontlyse.To achieve the same degree of success with UK alone, doses of 2000000 to 2500000 I.U. and at this dose level, side effects such as systemic fibrinogenolysis and loss of plasminogen are experienced. To obtain the same results with pro-UK alone, doses well above 6500000 I.E., for example, 9000000 I.E. needed. These results indicate a synergistic interaction between UK and pro-UK in clot lysis.

De hoeveelheid van elke verbinding wordt hier uitgedrukt in hetzij het gewicht (mg) hetzij in Internationale Eenheden (I.E.), 20 gebaseerd op de internationale referentiebereiding van UK, bepaald aan een standaard fibrineplaat (Brakman, Fibrinolysis, A Standardized Fibrin Plate Method and a Fibrinolytic Assay of Platminogen, Schelte-ma & Holkema NV, Amsterdam, 1967, biz. 1-24). Pro-UK wordt bepaald na aktivering met piasmine als beschreven in Gurewich et al., 25 J. Clin. Invest. (1984) 73, blz. 1731-1739. UK (zowel de HM-vorm als de LM-vorm) en pro-UK gaven soortgelijke specifieke aktiviteiten (ongeveer 100000 I.E./mg), zodat de proteïneconcentraties konden worden vergeleken (1 I.E. = 10 ng proteïne).The amount of each compound is expressed here in either weight (mg) or in International Units (IU), based on the international reference preparation of UK, determined on a standard fibrin plate (Brakman, Fibrinolysis, A Standardized Fibrin Plate Method and a Fibrinolytic Assay of Platminogen, Schelte-ma & Holkema NV, Amsterdam, 1967, biz. 1-24). Pro-UK is determined after activation with piasmin as described in Gurewich et al., 25 J. Clin. Invest. (1984) 73, 1731-1739. UK (both the HM form and the LM form) and pro-UK gave similar specific activities (about 100000 IU / mg) so that the protein concentrations could be compared (1 IU = 10 ng protein).

Daar UK gewoonlijk verkrijgbaar is in ampullen, die 30 250.000 I.E. bevatten, kan men, overal waar dit in de beschrijving en voorbeelden vermeld wordt, een dosis van 250.000 I.E. nemen in plaats van 200.000 I.E. Gebruik van een 250.000 I.E. dosis voorkomt de moeilijkheid, dat men 4/5 van een ampul moet schatten en geeft dezelfde gunstige effekten als een 200.000 I..E. dosis.Since UK is usually available in ampoules containing 30 250,000 I.E. wherever stated in the description and examples, a dose of 250,000 I.U. instead of 200,000 I.E. Use of a 250,000 I.U. dose avoids the difficulty of estimating 4/5 of an ampoule and gives the same beneficial effects as a 200,000 I..E. dose.

8702 23 4 - 6a -8702 23 4 - 6a -

Voorbeeld 1Example 1

Een 58-jaar oude vrouw, die aan myocardiaal infarct leed, ontving een bolusinjectie van 200000 I.E. urokinase i.v., gevolgd door een bolusinjectie van 1000000 I.E. pro-urokinase en een infuus van 5 pro-urokinase in een hoeveelheid van 5, 5 miljoen I.E./uur. Na 15 minuten werd partiële perfusie bereikt en volledige perfusie na 30 minuten, dat wil zeggen nadat een totaal van 3250000 I.E. pro-UK was toegediend. Er was 24 uur na toediening nog altijd een volledige perfusie.A 58-year-old woman suffering from myocardial infarction received a bolus injection of 200,000 IU. urokinase IV, followed by a bolus injection of 100,000 I.U. pro-urokinase and an infusion of 5 pro-urokinase in the amount of 5.5 million IU / hour. After 15 minutes partial perfusion was achieved and complete perfusion after 30 minutes, i.e. after a total of 3250000 I.U. pro-UK had been administered. Complete perfusion was still 24 hours after administration.

Voorbeeld 2 10 Een mannelijke patiënt, die aan myocardiaal infarct leed 870223 4 f - 7 - ontving een mengsel van 200000 I.E. urokinase en 2500000 I.E. pro-UK, geinfuseerd in 15 minuten. Aan het einde van deze periode was volledige perfusie verkregen.Example 2 A male patient suffering from myocardial infarction 870223 4 f-7 received a mixture of 200,000 IU. urokinase and 2500000 IU. pro-UK, infused in 15 minutes. Complete perfusion was obtained at the end of this period.

Voorbeeld 3 Doseervormen 5 a) Mengsel voor injectie.Example 3 Dosage forms 5 a) Mixture for injection.

200000 I.E. UK en 2000000 I.E. pro-UK worden in 20 ml steriele isotone zoutoplossing opgelost en verpakt in een fiool-yoor injectie.200000 I.E. UK and 2000000 I.E. pro-UK are dissolved in 20 ml of sterile isotonic saline and packed in a vial-injection.

b) Gevriesdroogd mengsel.b) Freeze-dried mixture.

10 Een oplossing van 200000 I.E. UK en 3000000 I.E. pro-UK10 A solution of 200,000 I.U. UK and 3000000 I.E. pro-UK

wordt gevriesdroogd en de vaste rest wordt in een fiool gesloten, waaraan zoutoplossing voor injectie kan worden toegevoegd.lyophilized and the solid residue closed in a vial to which saline for injection can be added.

c) Injectiespuit met dubbele houder.c) Syringe with double holder.

Eén houder van de voorverpakte injectiespuit bevat 200000 15 I.E. UK in 10 ml steriele isotone zoutoplossing en de andere bevat 3000000 I.E. pro-UK in 10 ml steriele isotone zoutoplossing.One container of the pre-packaged syringe contains 200 000 15 I.U. UK in 10 ml sterile isotonic saline and the other contains 3000000 I.U. pro-UK in 10 ml sterile isotonic saline.

d) Tweelingverpakking.d) Twin pack.

Een tweelingverpakking omvat één fiool, die 200000 I.E. UK in gevriesdroogde vorm bevat en één fiool, die 3000000 I.E. pro-UKA twin pack includes one vial containing 200,000 I.E. UK in lyophilized form and one vial containing 3000000 I.U. pro-UK

20 in gevriesdroogde vorm bevat, met instructies voor gelijktijdige toediening.20 in lyophilized form, with instructions for co-administration.

Voorbeeld 4Example 4

Men vervaardigt de doseervormen van voorbeeld 3 ook onder gebruik van 500000 I.E. pro-UK in plaats van 2000000 of 3000000 I.E.The dosage forms of Example 3 are also prepared using 500000 IU. pro-UK instead of 2000000 or 3000000 I.E.

25 pro-UK.25 pro-UK.

Voorbeeld 5Example 5

Bij een multi-centrale, open, prospectieve clinische proefneming, gebruikte men het volgende protocol:In a multi-central, open, prospective clinical trial, the following protocol was used:

Kriteria voor opneming 30 1) pijn, kenmerkend voor myocardiaal infarct, van tenminste 30 minuten duur.Recording criteria 30 1) pain, characteristic of myocardial infarction, of at least 30 minutes duration.

2) inzet van symptomen minder dan vijf uur voor het begin van lytische therapie.2) onset of symptoms less than five hours before the start of lytic therapy.

3) ECG-bevindingen kenmerkend voor myocardiaal infarct.3) ECG findings characteristic of myocardial infarction.

870 2 23 4 - 8 - v 4) ingewonnen toestemming van patiënt.870 2 23 4 - 8 - v 4) obtained patient's consent.

Kriteria voor uitsluiting 1) contra-indicaties voor coronair angiografie.Exclusion criteria 1) contraindications for coronary angiography.

2) contra-indicaties voor lytische therapie 5 a) begin van therapie met heparine of cumarine.2) contraindications to lytic therapy 5 a) initiation of heparin or coumarin therapy.

b) veneuze of arteriaal punctuur binnen de laatste 8 dagen.b) venous or arterial puncture within the last 8 days.

c) cerebrövasculair voorval binnen dè laatste 2 maanden.c) cerebrovascular event within the last 2 months.

d) aktieve bloeding.d) active bleeding.

e) maag- of twaalfvingerige darmzweer binnen het laatste 10 jaar.e) gastric or duodenal ulcer within the last 10 years.

f) chirurgische operatie binnen de laatste 8 dagen.f) surgical surgery within the last 8 days.

g) haemorragische diathese 3) onvolledige blokkering van coronair arterie (als blijkt uit coronair angiografie) 15 4) partiële of complete reperfusie na toediening van nitro glycerine.g) haemorrhagic diathesis 3) incomplete blockage of coronary artery (as evidenced by coronary angiography) 4) partial or complete reperfusion after administration of nitro glycerine.

5) cardiaal verwant coma.5) cardiac related coma.

6) ernstige hartklep- of hartziekte, hypertrofische cardio- nyopathie.6) severe heart valve or heart disease, hypertrophic cardioyopathy.

20 7) ernstige nier- of leverziekte, die de excretie van pro-urokinase nadelig zou kunnen beïnvloeden.7) severe kidney or liver disease, which could adversely affect the excretion of pro-urokinase.

8) gebruik van orale contraceptiva.8) use of oral contraceptives.

ProcedureProcedure

Patiënten, die aan bovenstaande kriteria voor opneming 25 voldoen, ontvangen 5000 I.E. heparine en men voert een coronair angio grafie uit. Indien een totale arteriale blokkering wordt waargenomen, dient men 100-200 jiq nitroglycerine intracoronair toe en herhaalt angiografie van het geblokkeerde vat. Indien geen opening wordt waargenomen na toedienen van nitroglycerine ontvangt de patiënt 200000 30 I.E. hoog molecuulgewicht-urokinase in een intraveneuze bolusinjectie, gevolgd door 500000 I.E. pro-urokinase i.v. in een bolusinjectie, die over 3 minuten wordt gegeven. Onmiddellijk daarna wordt intraveneus infuus van 4000000 I.E. pro-UK uitgevoerd over 40 minuten. Men voert coronair angiografie uit met tussenpozen van 15 minuten teneinde de.Patients who meet the above criteria for inclusion 25 receive 5000 IU. heparin and coronary angiography is performed. If total arterial blockage is observed, 100-200 µg nitroglycerin is administered intracoronary and angiography of the blocked vessel is repeated. If no opening is observed after administration of nitroglycerin, the patient receives 200,000 30 I.U. high molecular weight urokinase in an intravenous bolus injection followed by 500000 I.U. pro-urokinase i.v. in a bolus injection given in 3 minutes. Immediately afterwards intravenous infusion of 4000000 I.E. pro-UK run in 40 minutes. Coronary angiography is performed at 15 minute intervals to determine

35 voortgang van de klontlyse na te gaan en men herhaalt dit 60 minuten na succesvolle lyse en ook 24 uur en 3 weken na behandeling teneinde na te gaan of er herafsluiting is opgetreden.To monitor the progress of lump lysis and repeat 60 minutes after successful lysis and also 24 hours and 3 weeks after treatment to check whether reclosing has occurred.

8702234 I» h - 9 -8702234 I »h - 9 -

ResultatenResults

Van 19 patiënten, die volgens dit protocol behandeld werden, vertonen er 14 (74%) heropening of patentie van de afgesloten arterie na de 40 minuten infuus. Daarvan vertonen er twee na 24 uur 5 herafsluiting.Of 19 patients treated according to this protocol, 14 (74%) show reopening or patience of the occluded artery after the 40 minute infusion. Of these, two show resealing after 24 hours.

8/022348/02234

Claims

Method for the joint use of urokinase (UK) and pro-urokinase (pro-υκ) in free or fixed combination, characterized in that the substances are used jointly as a thrombolytic agent.

The method according to claim 1, characterized in that the UK dose is from 100,000 to 3,000Q I.E. and the pro-UK dose less than 6,500,000 IU. amounts.

Method according to claim 2, characterized in that the UK dose is 150,000 to 250,000 I.U. and the pro-UK dose 2000000 to 10 4000000 I.E. amounts.

Method according to any one of the preceding claims, characterized in that UK is administered as a bolus injection for an injection or infusion of pro-UK.

5. A method of preparing an agent for potentiating the thrombolytic effect of pro-UK, characterized in that it uses UK.

Twin pack, characterized in that it contains separate dosing units from UK and pro-UK with instructions for co-administration.

Twin pack according to claim 6. characterized in that the dosing unit ranges from UK 100000 to 300000 I.U. and the dosing unit of pro-UK less than 6500000 IU. contains.

Twin pack according to claim 7, characterized in that the dosing unit ranges from 150000 to 250000 I.U. and the dosage unit from pro-UK 2000000 to 4000000 I.U. contains.

9. Kit characterized in that it comprises a UK dosing unit for injection, a pro-UK dosing unit for injection and a pro-UK dosing unit for infusion.

10. Kit according to claim 9, characterized in that the UK dosing unit for injection 150000 to 250000 I.U., the pro-UK dosing unit for injection 400000 to 600000 I.E. and the pro-UK dosing unit for infusion 3000000 to 5000000 I.U. contains.

11. Twin pack or kit according to any one of claims 6-10, characterized in that at least one of the dosage unit forms of UK or pro-UK also contains 1000 to 10000 I.U. contains heparin.

12. Pharmaceutical preparation, characterized in that it is a mixture of UK and pro-UK in addition to a pharmaceutically acceptable diluent or carrier, or a mixture of UK and pro-UK in pure freeze-dried form includes.

13. A composition according to claim 12, characterized in that it contains no significant amount of the pharmaceutically active substance other than UK and pro-UK.

Preparation according to claim 13, characterized in that it contains no protein other than UK and pro-UK in an amount detectable by the available analytical methods.

15. A composition according to any one of claims 12-14, characterized in that the weight ratio of UK to pro-UK is 1:40 to 1: 6.7.

Preparation according to claim 15, characterized in that the weight ratio of UK to pro-UK is 1:15 to 1:10.

Dosage unit form of a preparation according to claim 15, characterized in that it comprises 100,000 to 300,000 I.U. UK and 2000000-4000000 I.E. pro-UK.

Dosage unit form according to claim 17, characterized in that it comprises 2000000 I.U. UK and 2000000 to 3000000 I.E. pro-UK.

Pharmaceutical preparation according to any one of claims 12 to 14, characterized in that the weight ratio of UK to pro-UK is 1: 4 to 1: 1.6.

Dosage unit form of a preparation according to claim 19, characterized in that it is 150000 to 250000 I.U. UK and 400000 to 600000 I.U. pro-UK.

Dosage unit form according to claim 20, characterized in that it additionally comprises 1000 to 10000 IU. contains heparin.

22. Methods, uses and preparations, as described in the description and / or examples. -o-o-o-o-o- 870 2 23 4