NL8301798A - Werkwijze voor de kwantitatieve bepaling van voederadditieven. - Google Patents

Description

λ* N/31.4 71-Kp/Pf/vdM - * - 1 -

Werkwijze voor de kwantitatieve bepaling van voederadditieven.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor de kwantitatieve bepaling van additieven in veevoeder en op een test-set voor gebruik bij een dergelijke werkwijze.

5 Het is algemeen gebruik voederadditieven op te nemen in veevoer welke bijdragen tot de voedingskwaliteiten van het voer en welke de functie hebben de groei te bevorderen. Een dergelijk voederadditief is monensine, dat een wijd verbreid in zowel vee- als pluimveevoer toegepast produkt is en 10 wordt beschreven in het Amerikaanse octrooischrift 3.501.568. Andere soortgelijke additieven welke in het algemeen als ionoforen worden aangeduid, zijn bijv. narasine en salinomy-cine.

Wij hebben een handige méthode ontwikkeld, waar-15 mee het gehalte aan dergelijke voederadditieven in de berei-dingswerkwijze of onder praktische toepassingsomstandigheden kwantitatief bepaald kan worden.

De uitvinding verschaft een werkwijze voor de kwantitatieve bepaling van de hoeveelheid van een ionofoor in 20 een voer, welke werkwijze omvat de menging van het voer met een alcoholisch oplosmiddel, de toevoeging van een zuur met een pKa~waarde beneden 4 en van een kleur-veroorzakend aryl-aldehyde, beide in vaste vorm, aan de verkregen oplossing bij een temperatuur die voldoende is om een kleuringsreactie te 25 doen verlopen en door vergelijking van de zo verkregen kleur met een standaard.

Het gebruik van vaste teststoffen en in het bijzonder van een zuur in vaste vorm bij de testmethode bleek praktische verbeteringen op te leveren. Voorbeelden van kleur-30 veroorzakende arylaldehydes zijn vanilline, ethylvanilline, 2,4-dimethoxybenzaldehyde, 3,4-dimethoxybenzaldehyde, 2,4,5-trimethoxybenzaldehyde, 4-dimethylaminobenzaldehyde, cinnam-aldehyde en andere arylaldehydes met electron-donerende sub-stituenten, terwijl vanilline als aldehyde de meeste voorkeur 35 verdient. Het is niet noodzakelijk dat het aldehyde op zich een vaste stof is, mits het wordt toegepast in vaste vorm, 8301798 w - 2 - zoals bijv. geadsorbeerd op een vaste drager.

Toepassing van vloeibare bestanddelen bij testen voor de kwantitatieve bepaling van ionofoor, zoals bijv oplos-singen van vanilline en van een vloeibaar zuur vereisten de 5 katalyse van de reactie van vanilline met ionofoor, leidt tot aanzienlijk ongemak wanneer een snelle bepaling gemaakt moet worden onder praktische omstandigheden en bleek onbetrouwbare resultaten op te leveren. Geheel verrassend is de werkwijze volgens de onderhavige uitvinding niet alleen eenvoudiger uit 10 te voeren, maar levert deze ook een grotere betrouwbaarheid op. De werkwijze volgens de uitvinding kan ook worden toegepast ter bevestiging van de afwezigheid van ionofoor in een voer, wanneer bijv. dit gebruikt zal worden voor dieren zoals een paard, dat negatief op ionoforen reageert.

15 De werkwijze volgens de uitvinding kan worden toegepast voor de kwantitatieve bepaling van ionoforen, zoals bijv. narasine en salinomycine en in het bijzonder monensine. Vaste zuren die gebruikt kunnen worden zijn bijv. 5-sulfosali-cylzuur, sulfaminezuur, hydroxylamine-O-sulfonzuur en p-tolu-20 eensulfonzuur. De voorkeur verdient 5-sulfosalicylzuur. Bij voorkeur wordt als oplosmiddel voor menging met het voeder methanol gebruikt, maar andere alcoholische oplosmiddelen, zoals bijv. ethanol, kunnen hetzij alleen, hetzij als een alco-holwatermengsel dat voldoende alcohol voor doelmatige extrac-25 tie van het ionofoorbestanddeel bevat, worden gebruikt.

De kleur die door de interactie van ionofoor in het voer met arylaldehyde en zuur wordt teweeg gebracht, wordt kwantitatief bepaald door vergelijking met een standaard, zoals bijv. een kleuroplossing, die is bereid door menging van 30 een bekende hoeveelheid ionofoor met aldehyde en zuur, of door gebruik van een gekalibreerde kleurkaart. Teneinde een kleur te doen ontstaan is het noodzakelijk te verzekeren dat de reactie plaatsvindt bij een geschikte temperatuur, die bij voorkeur in het gebied van 50-70°C, in het bijzonder 60°C, 35 ligt, die bijv. teweeg wordt gebracht door een de oplossing bevattend vat in een verhit waterbad te dompelen.

In de praktijk is het dikwijls het beste de oplossing die door menging van het voeder met een alcoholisch 8301798 " - 3 - oplosmiddel is gevormd te decanteren en vervolgens deze vloeistof te mengen, met arylaldehyde en zuur op een dragermedium, zoals bijv. een schijf uit filtermateriaal of met grotere voorkeur met tabletten uit arylaldehyde en zuur. Aangezien het 5 moeilijk kan zijn de zuurcomponent en het arylaldehyde samen in stabiele vorm te brengen, verdient het de voorkeur twee gescheiden tabletten te gebruiken, die elk één van de bestanddelen bevat. Zowel het vaste zuur als het arylaldehyde kunnen eenvoudig in tabletvorm worden gebracht. In het geval van 10 vloeibare aldehydes kan het materiaal geadsorbeerd worden op geschikte dragers bij de samenstelling van het tablet. Dienovereenkomstig is een voorkeurswerkwijze volgens de uitvinding een werkwijze welke bestaat uit de volgende trappen: (a) menging van een op vanilline-positief iono- 15 foor bevattend voer met een alcoholisch op losmiddel , (b) decantering van een gedeelte van de bovenstaande vloeistof, (c) toevoeging van één of meer tabletten die een 20 vast zuur met een pK beneden 4 bevatten en cl één of meer tabletten die vanilline bevatten, aan dit gedeelte van de bovenstaande vloeistof bij een temperatuur die voldoende is om een kleurreactie teweeg te brengen, en 25 (d) vergelijking van de zo gevormde kleur met een standaard, die gekozen is in overeenstemming met de specifieke hoeveelheden en volumes van toegepaste proef materialen.

Duidelijk zal zijn dat de hoeveelheid voer, het 30 volume van het oplosmiddel en andere toegepaste hoeveelheden zorgvuldig moeten worden gekozen teneinde aan te sluiten bij de vereisten van de standaard. Om praktische redenen zal de hoeveelheid voer bij voorkeur worden vastgelegd op een waarde van 3, 4 of 5 g, die bijv. gemeten kan worden door een kolf of 35 een buis tot aan een aangegeven merkteken te vullen. Een gegeven volume oplosmiddel van bijv. 8-12 ml kan dan worden toegevoegd en het mengsel wordt gedurende een periode van 1 tot 2 min verhit. Een gegeven gedeelte van de bovenstaande vloeistof, 8301798 * ·*.

V* - 4 - k.* bijv. 1,5 tot 2,5 ml, wordt daarop gedecanteerd in een tweede kolf of buis, waaraan de tabletten van het zuur en het aryl-aldehyde worden toegevoegd, in het algemeen telkens één van deze twee bestanddelen. De tabletten bevatten een geschikte 5 hoeveelheid van de zuurkatalysator of vanilline, teneinde een kwantificeerbare kleurreactie teweeg te brengen, die vergeleken kan worden met de standaardkleuroplossing of gekalibreerde kleurkaart. Bij voorkeur wordt een overmaat zuur en vanilline toegepast en de hoeveelheid per tablet zuur kan bijv. 40-60 mg 10 en vanilline 40-60 mg zijn. De standaardkleuroplossing kan worden bereid door een tablet die een gegeven hoeveelheid van ionofoor-100, 200 of 300 pg bevat, met een passende hoeveelheid oplosmiddel te mengen.

Zoals boven aangegeven moet de test worden uit-15 gevoerd bij een temperatuur die voldoende is om een kleurreactie tussen de bestanddelen teweeg te brengen. We hebben gevonden dat de optimale temperatuur 60°C bedraagt en dat het het eenvoudigste is te verwarmen nadat het arylaldehyde en het zuur reeds zijn toegevoegd aan de alcoholische oplossing.

20 Anderzijds echter kan het oplosmiddel eerst worden opgewarmd tot 6Q°C voordat het wordt gemengd met het voer of later verwarmd worden juist vóór toevoeging van het zuur en het aldehyde.

De gebruikte tabletten kunnen op gebruikelijke 25 wijze worden vervaardigd, waarbij het vaste zuur of aldehyde wordt vermengd met een passende hoeveelheid vulstof en opper-vlak-actieve stof. Doorgaans zijn de samenstellingen van der-gelijke tabletten als volgt: ' 'tablet' 1 5-sulfosalicylzuur 50 mg 30 magnesiumstearaat Q,25 mg

Aerosi.1 0,25 mg tablet 2 vanilline 50 mg magnesiumstearaat 0,25 mg

Aerosil 0,25 mg 35 De uitvinding omvat tevens een test-set speciaal voor toepassing bij de werkwijze volgens de uitvinding, welke set een extractievat omvat, dat bij voorkeur overeenkomstig de hoeveelheid te extraheren voer, het volume toe te voegen op- 8301798 fcv - 5 - losmiddel en het te decanteren volume van de bovenstaande vloeistof gekalibreerd is, een testvat voor waarneming van de kleur van de bovenstaande vloeistof, een vat dat oplosmiddelen bevat, tabletten met standaardhoeveelheden vast zuur en kleur-5 veroorzakend arylaldehyde en een kleurkaart of één of meer tabletten met standaardhoeveelheid ionofoor.

De uitvinding wordt thans nader toegelicht aan de hand van het volgende voorbeeld.

VOORBEELD

10 Een standaardkleuroplossing werd eerst bereid door menging van een tablet dat 100 jiq monensine bevatte met 2 ml methanol in een reageerbuis, toevoeging van 50 mg 5-sulfosalicylzuur en 50 mg vanilline in de vorm van aparte tabletten en handhaving van het mengsel bij 60°C door dompe-15 ling in een waterbad. Toen de bestanddelen oplosten ontstond een rode kleuring.

Voor vergelijking met deze standaardoplossing werd 5 g veevoer, dat een bekende hoeveelheid monensine van 50 delen per miljoen bevatte, gebracht in een extractiekolf, werd 20 hieraan 10 ml methanol toegevoegd, werd het mengsel geschud en werd de bovenstaande vloeistof beproefd op de kleurreactie.

Een gedeelte (2 ml) van de bovenstaande vloeistof werd gegoten in een reageerbuis en 50 mg 5-sulfosalicylzuur en 50 mg vanilline werden toegevoegd in de vorm van aparte tabletten. De 25 reageerbuis werd gedompeld in een waterbad van 60°C en op deze temperatuur gehouden totdat beide tabletten waren opgelost.

Een rode kleuring ontwikkelde zich en bij vergelijking met de standaardkleuroplossing werd waargenomen dat de kleur minder intens was. Hieruit konden twee conclusies worden getrokken, 30 (a) dat ionofoor aanwezig was in het voer en (b) dat het ionofoor aanwezig was in een hoeveelheid beneden 100 delen per miljoen.

35 8301798

Claims (7)

1. Werkwijze voor de kwantitatieve bepaling van de hoeveelheid van een ionofoor in een voer, met het kenmerk , dat het voer gemengd wordt met een alcoho-5 lisch oplosmiddel, een zuur met een PKa_waarde beneden 4 en een kleur-veroorzakend arylaldehyde, beide in vaste vorm, worden toegevoegd aan de verkregen oplossing bij een temperatuur die voldoende is voor de opwekking van een kleurreactie en de zo verkregen kleur wordt vergeleken met een standaard.

2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk , dat het kleur-veroorzakende arylaldehyde vanilline is.

3. Werkwijze volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk, dat het zuur 5-sulfosalicylzuur is.

4. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat deze de volgende trappen omvat: (a) menging van een voer dat een op vanilline positief ionofoor bevat met een alcoholisch oplosmiddel, 20 (b) decantering van een gedeelte van de boven staande vloeistof, (c) toevoeging van één of meer tabletten die een vast zuur met een pK beneden 4 bevatten, a alsmede ëën of meer tabletten die vanilline 25 bevatten, aan het genoemde gedeelte van de bovenstaande vloeistof bij een temperatuur die voldoende is voor de opwekking van een kleurreactie en (d) vergelijking van de zo gevormde kleur met 30 een standaard, betrokken op de gegeven hoe veelheden en volumes van de toegepaste proefmaterialen.

5. Werkwijze volgens een der voorgaande conclusies voor de kwantitatieve bepaling vein de hoeveelheid monen- 35 sine in een voer.

6. Test-set voor gebruik bij een werkwijze volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk , dat deze set omvat een extractievat, een 8301798 - 7 - testvat voor waarneming van de kleur van de bovenstaande vloeistof, een oplosmiddel bevattend vat, tabletten met standaardhoeveelheden vast zuur en kleur-veroorzakend arylaldehyde en een kleurkaart of één of meer tabletten met standaardhoe-5 veelheid ionofoor.

7. Test-set volgens conclusie 6, met het kenmerk , dat het extractievat gekalibreerd is voor de hoeveelheid te extraheren voer, het toe te voegen volume oplosmiddel en het te decanteren volume bovenstaande vloeistof. 10 8301708