CS258112B2 - Method of vanilin-positive ionoforming substance quantity determination - Google Patents

Description

Vynález se týká způsobu stanovení množství ionoforní látky pozitivní na vanilin, jako naipr. monensinu, v krmivu pro zvířata.

V praxi je běžné přidávat do· krmivá pro zvířata různé krmné přísady, které přispívají ke zvýšení výživné hodnoty tohoto krmivá nebo tyto krmné přísady plní roli promotorů růstu. Jednou z těchto krmných přísad je monensin, což je látka, které se běžně používá v širokém měřítku jak u hovězího dobytka, tak i u drůbeže, přičemž tato látka je uváděna v patentu Spojených států amerických č. 3 501 568. Jako další přísady podobné povahy, které jsou všeobecně označovány jako ionoforní látky, je možno například uvést narasin a salinomycin.

Použití kapalných chemických látek při provádění testů za účelem stanovení ionoforních látek, jako jsou například roztoky vanilinu a různých kyselin v kapalné formě, které jsou nutné ke katalyzování reakce vanilinu s ionoforní látkou, vykazuje značné nevýhody, zvláště jestliže je zapotřebí provést rychlé stanovení v praktických podmínkách, přičemž bylo rovněž zjištěné, že za těchto podmínek se dosahuje nespolehlivých výsledků.

Cílem uvedeného vynálezu je nalézt vhodnou metodu stanovení obsahu těchto ionoforních látek pozitivních na vanilin, pomocí které by bylo možno provádět stanovení jak v průběhu přípravy krmivá, tak i během praktického použití krmivá.

Podstata způsobu stanovení množství ionoforní látky pozitivní na vanilin, jáko je například monensinu v krmivu spočívá podle uvedeného vynálezu v tom, že se smísí 3 až 5 g krmivá <s 8 až 12 ml alkoholického rozpouštědla, potom se přidá к 1,5 až 2,5 ml roztoku nad usazeninou 40 až 60 mg kyseliny 5-sulfosalicylové a 40 až 60 mg vanilinu při teplotě v rozmezí od 50 do 70 °C a zabarvení -tohoto roztoku se porovná se standardem. Ve výhodném provedení se uvedená kyselina 5-sulfosalicylová a vanilin přidají ve formě tablety nebo tablet obsahujících jednu nebo oibě tyto látky.

Výhody postupu podle uvedeného vynálezu spočívají v tom, že při praktickém provádění tohoto postupu je možno použít testovacích látek, a zejména to pl-atí o kyselině, v pevné formě.

Podle uvedeného vynálezu byla zcela neočekávatelně nalezena metoda, která je jednak vhodnější к použití a jednak dává mnohem spolehlivější výsledky.

' Postup podle uvedeného vynálezu je možno samozřejmě použít i к důkazu nepřítomnosti ionoforních látek pozitivních na vanilin v krmivu, jestliže je toto krmivo určeno pro taková zvířata, která reagují nepříznivě na tyto ionoforní látky, které jsou pozitivní na vanilin, jako jsou například koně.

Jako dalších arylaldehydů, vyvolávajících zabarvení roztoku, je možno kromě vanilinu použít rovněž:

ethylvanilinu,

2.4- dimethoxybenzaldehydu,

3.4- dimethoxybenizaldehydu, 2,4,5-trimethoxybenzaldehydu, 4 diinethylaminobenzaldehydu, aldehydu kyseliny skořicové a podobné další arylaldehydy se substituenty, které jsou donorem elektronů. Uvedený aldehyd nemusí být jako takový v pevné formě, přičemž se předpokládá, že v pevné formě se použije v těch případech, kdy je absorbován na pevném nosičovém materiálu.

Postup podle uvedeného vynálezu je možno rovněž použít ke stanovení takových ionoforních látek, jako jsou například narasin a salinomycin, zejména je však vhodný ke stanovení monensinu.

Jako příklad kyselin v pevné formě, kterých je možno rovněž použít při provádění postupu podle vynálezu kromě kyseliny 5-sulfosalicylové, je možno uvést kyselinu:

sulfamovou, kyselinu hydroxylamin-O-sulfonovou a kyselinu p-toluensulfonovou.

Výhodným rozpouštědlem, které se míchá s krmivém v postupu podle vynálezu, je methanol, ovšem je možno použít i dalších jiných alkoholických rozpouštědel, jako je například ethanol, přičemž je možno použít těchto rozpouštědel samotných nebo ve formě vodné alkoholické směsi, která obsahuje dostatečné množství alkoholu к extrahování ionoforních složek pozitivních na va.nilla účinným způsobem.

Zabarvení vyvolané interakcí mezi ionoforní látkou pozitivní na vanilin, která je obsažena v krmivu, a arylaldehydem a kyselinou se vyhodnotí porovnáním se standardem, což může být například barevný roztok připravený smícháním zmarného množství ionoforní látky s aldehydem a s kyselinou nebo je možno použít kalibrované barevné škály.

Za účelem vyvolání barevné změny je nutné, aiby reakce probíhala při vhodné teplotě, která se podle uvedeného vynálezu pohybuje v rozmezí od 50 do 70 °C, zejména se používá teplota 60 °C, přičemž této teploty se dosáhne například ponořením nádoby, která obsahuje daný roztok do zahřívané vodní lázně.

Při praktickém provádění tohoto stanovení podle vynálezu je často nejlepší dekantovat roztok, který se vytvoří při smíchámí alkoholického rozpouštědla s krmivém, a potom smíchat kapalinu nad usazeninou s aldehydem a s kyselinou na nosném médiu, 'jako je například kotouč filtračního materiálu, nebo je ještě výhodnější smíchat uvedený roztok s arylaldehydem a s kyselinou ve formě tablet. Vzhledem к tomu, že v některých případech může být obtížné smí258112 chat kyselinu a arylaldehyd tak, aby vznikla stabilní forma této směsi, je výhodné používat dvou tablet zvlášť, piůčemž každá obsahuje jednu z uvedených složek. Jak kyselina v pevném stavu, tak i arylaldehyd mohou být snadno připraveny ve formě tablety. V případě kapalných aldehydů může být látka adsorbovánana na vhodné nosičové látce ve formě tablety. Praktické provádění postupu stanovení podle uvedeného vynálezu zahrnuje následující stupně:

— smíchávání krmivá, které obsahuje ionoforní látku pozitivní na vanilin, s alkoholickým rozpouštědlem, — dekantování podílu kapaliny nad usazeninou.

' — přidání jedné nebo více tablet, které obsahují kyselinu v pevném stavu, přičemž hodnota ipKa této kyseliny je menší než 4, a dále jedné nebo více tablet obsahující vanilin к uvedenému podílu kapaliny nad usazeninou při teplotě dostatečné к vyvolání barevné reakce, a — porovnání takto vzniklého zabarvení se standardem vybraným podle použitých specifických množství a objemů testovaných materiálů.

Ze shora uvedeného je zřejmé, že množství krmivá, objem rozpouštědla a další použitá množství látek, je třeba vhodně zvolit tak, aby se shodovaly s podmínkami, za •kterých byl připraven standard. Při praktických podmínkách je množství krmivá ve výhodném provedení podle vynálezu 3, 4 nebo 5 gramů, což je možno odměřovat například tak, že se plní odpovídající nádobka, jako je například lahvička nebo trubice, •do označené značky. Potom se .přidá rozpouštědlo o specifickém objemu, například •8 až 12 .mililitrů, a tato směs se potom zahřeje a udržuje se při této teplotě po dobu •jedné až dvou minut. Určený podíl kapaliny had usazeninou, například 1,5 mililitru až •2,5 mililitru, se potom dekantuje ve druhé nádobě, do které se potom přidají tablety kyseliny a arylaldehydu, obvykle po jedné z obou uvedených složek. Tyto tablety obsahují vhodné množství kyseliny jako katalyizátoru a vanilinu tak, aby bylo možno vyvolat stanovitelnou barevnou reakci, a vzniklé zabarvení se potom porovná se standardním barevným roztokem nebo s kalibrovanou barevnou škálou. Ve výhodném provedení podle uvedeného vynálezu se použije přebytku kyseliny a vanilinu, přičemž •například množství kyseliny v uvedené tabletě se pohybuje v· rozmezí od 40 do 60 miligramů a množství vanilinu v tabletě se pohybuje v rozmezí od 40 do 60 miligramů. Standardní barevný roztok je možno připravit smícháním tablety obsahující například určité množství ionoformní látky pozitivní na vanilin, to znamená 100, 200 nebo 300 mikrogramů, se vhodným množstvím rozpouštědla.

Jak již bylo shora uvedeno, je nutno testovací postup provést při teplotě, která je dostačující к vyvolání barevné reakce mezi uvedenými složkami. Podle uvedeného vynálezu bylo zjištěno, že tato optimální teplota je 60 °C, přičemž nejvýhodnější je provést zahřívání poté, co se arylaldehyd a kyselina přidaly к alkoholickému roztoku. V alternativním provedení podle uvedeného vynálezu je ovšem samozřejmě možné nejdříve zahřát rozpouštědlo na teplotu 60 °Ó před smísením s krmivém nebo později provést zahřátí těsně před přidáním kyseliny a arylaldehydu.

Použité tablety mohou být připraveny běžnými postupy a za pomoci běžných prostředků, přičemž se .kyselina v pevné formě nebo arylaldehyd smísí se vhodným množstvím plnivového materiálu a povrchově aktivního činidla. Jako typické příklady složení těchto tablet je možno uvést následující směsi:

Tableta 1:

5-sulfosalicylová
kyselina	50	miligramů
stearát hořečnatý	0,25	miligramu
aerosil	0,25	miligramu
Tableta 2:
vanilin	50	miligramů
stearát hořečnatý	0,25	miligramu
aerosil	0,25	miligramu

Postup podle vynálezu je možno například provádět v testovací aparatuře, která je tvořena extrakční 'nádobou, ve výhodném provedení ve stupňovitém uspořádání podle množství krmivá, které se má extrahovat, objemu přidávaného rozpouštědla a objemu kapaliny nad usazeninou, která se má dekantovat, a dále testovací nádobou pro pozorování zabarvení kapaliny nad usazeninou, nádobou obsahující rozpouštědlo, tablety o standardním množství kyseliny a arylaldehydu, vyvolávajícím zabarvení roztoku, ke které dále náleží barevná škála nebo jedna nebo více tablet se standardním množstvím ionoformní látky pozitivní na vanilin.

Postup podle uvedeného vynálezu bude v dalším ilustrován s pomocí příkladu praktického provedení.

Příklad

Podle tohoto provedení byl nejdříve připraven standardní barevný roztok smícháním tablety, která obsahovala 100 mikrogramů monensinu, se 2 mililitry methanolu v testovací trubici, přičemž bylo přidáno 5Ό miligramů kyseliny 5-sulfosalicylové a 50 miligramů vanilinu ve formě samostatných tablet, a takto získaná směs byla udržována na teplotě 60 °C, přičemž bylo po258112 užito vodní lázně. Po rozpuštění tablet vzniklo červené zabarvení.

Pro porovnání s tímto standardním roztokem bylo 5 gramů krmivá pro hovězí dobytek, které obsahovalo známé množství 50 ppm monensinu, vloženo do extrakční nádoby, dále bylo přidáno 10 mililitrů methanolu, takto získaná směs byla protřepána a kapalina nad usazeninou byla zkoumána na barevnou reakci. Potom byly 2 mililitry kapaliny nad usazeninou nality do testovací trubice a dále bylo přidáno 50 miligramů kyseliny 5-sulfosalicylové a 50 miligramů vanilinu ve formě samostatných tablet. Tato testovací trubice byla potom ponořena do vodní lázně zahřáté na teplotu 60 °C a při této teplotě byla udržována až do té doby, dokud se tablety nerozpustily. Při tomto postupu se roztok zabarvil, přičemž při srovnání se standardním barevným roztokem bylo možno· zjistit, že zabarvení je méně intenzívní. Z těchto dvou závěrů bylo možno odvodit že:

— v krmivu je přítomna ionoformní látka pozitivní na vanilin, a — množství této- ionofor-ní látky je menší než 100 ppm.

Claims (2)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob stanovení množství ionoforní látky pozitivní na vanilin, jako například monensinu, v krmivu vyznačující se tím, že se smísí 3 až 5 gramů krmivá s 8 až 12 mililitry alkoholického rozpouštědla, potom se přidá к 1,5 až 2,5 mililitru roztoku nad usazeninou 40 až 60 miligramů kyseliny 5-sulfosalicylové a 40 až 60 miligramů vanilinu při teplotě v rozmezí od 50 do 70 °C a zabarvení tohoto roztoku se porovná se standardem.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že uvedená kyselina 5-sulfosalicylová a vanilin se přidají ve formě tablety nebo tablet obsahujících jednu nebo obě tyto látky.