NL8005121A

NL8005121A - Biologisch actieve peptiden.

Info

Publication number: NL8005121A
Application number: NL8005121A
Authority: NL
Original assignee: Erba Farmitalia
Priority date: 1979-09-20
Filing date: 1980-09-11
Publication date: 1981-03-24
Also published as: CH645342A5; ATA463580A; CA1156221A; GB2070618B; SE448879B; IT1196916B; DK149754C; IL61037A; FI802876A; IE801947L; IT8024755A0; YU240880A; FR2465713A1; AT381100B; FI73699B; AU6240380A; NZ194961A; IE50793B1; US4350627A; HU186749B

Description

1.. 4 YO 0943

Biologisch actieve peptiden,

Be uitvinding heeft betrekking op nieuwe biologisch actieve peptiden, farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan, alsmede op werkwijzen ter bereiding en toepassing van deze peptiden als therapeutische middelen, 5 In het bijzonder heeft de uitvinding betrekking op pep tiden met de algemene formule

T

X - Tyr - A - Phe - 3 - 0 - ïï waarin X waterstof, een beschermende groep voor een eindstan-dig N-atoom gekozen uit acyl-beschermende groepen, aromatische 10 urethaan-beschermende groepen, alkyl-beschermende groepen, aralkyl-beschermende groepen, alsmede alifatische urethaan-beschermende groepen of een rest van een natuurlijk L-aminozuur of een dipeptide van twee natuurlijke L-aminozuren, waarin de vrije aminogroep is vervangen door één van de bovengenoemde 15 beschermende groepen voor een eindstandig IT-atoom, betekent} Y waterstof of een beschermende groep voor de fenolische hy-droxylgroep van tyrosine gekozen uit tetrahydropyranyl, methyl, tert.butyl, trityl, benzyl, 2,4-dichloorbenzyl, benzyloxycarbonyl, 2-broombenzyloxycarbonyl, tert.butyloxy-20 carbonyl en lager acyl, bij voorkeur formyl, acetyl, trifluor- acetyl, benzyl of propionyl is; A een D-aminozuurrest met één door een lagere alkyl- of lagere thioalkylgroep gevormde zij-keten voorstelt; B een neutrale L-aminozuurrest, in het bijzonder uit de groep o-aminofenylazijnzuur (Phg), Ala, Yal, 25 lie, Leu, Pro, Met, Ser, Thr, Phe, Tyr, Trp, een glycinerest of een fT-methylaminozuurester, zoals sarcosine, L-N-methyl-alanine of L-iT-methylfenylalanine betekent; C al of niet aanwezig is en wanneer aanwezig is, de rest van een aminozuur of een di- of tripeptide voorstelt en de rest een a-aminozuur, 30 doelmatig uit de groep Gly, Ala, Yal, normaal Yaline (NYa),

Leu, Ile, α-amino-n-boterzuur (Abu), Phg, Phe, Trp, Tyr, Ser,

Thr, Eomoserine (HSe), Met, Met-sulfoxyde, β-cyclohexylalanine en p-gesubstitueerd Phe, waarbij de substituent chloor, broom, fluor, amino of nitro is; een ct-iminozuur, doelmatig uit de 8005121 - 2 - groep Pro, 3-hydroxypyroline, 4-hydroxyproline, pipecoline-zuur, 2-azetidinecarbonzuur, 4-thiazolidinecarbonzuur, £ proline; een β-aminozuur, doelmatig uit de groep β-alanine, β-fenyl-β-aminopΓopionzuuΓ, β-aminoboterzuur, of een ïf-methyl-5 aminozuur, doelmatig uit de groep Sar, ÏT-methylfenylalanine (MePhe), N-methylalanine (MeAla), welke alle in de D- of L-configuratie zijn, met het voorschrift dat ze noch basisch noch zuur zijn; een dipeptide, doelmatig uit de groep van di-peptiden die afkomstig zijn uit de condensatie van a-amino-, 10 β-amino-, oc-imino- en Ν’-methylaminozuren, als boven gedefini eerd, onder voorwaarde dat de beide aminozuren niet gelijk zijn; een tripeptide, doelmatig uit de groep van de tripepti-den J-L-M, waarin J Tyr, Trp, Phe, Phg, hexahydro-Phe, Gly,

Val of p-gesubstitueerd fenyl is, waarin de substituent 15 chloor, broom, fluor, amino of nitro is, L Val, Leu, Ile, Gly,

Ala, NVa, Sar, MePhe, MeAla of een β-amino- of a-iminozuur als boven gedefinieerd zijn en ffi Ser, HSe, Thr, Abu of Gly betekenen, onder voorwaarde dat J van L en L van M verschillend zijn, is; 20 de hydroxyaminozuren zijn niet beschermd of door een be schermende groep voor de hydroxyfunctie beschermd; geschikte beschermende groepen zijn methyl, tert.butyl, trityl, benzyl, 2,4-dichloorbenzyl, benzyloxycarbonyl, 2-broombenzyloxycarbonyl, tert.butyloxycarbonyl of lager acyl, in het bijzonder 25 formyl, acetyl, trichlooracetyl, benzyl of propionyl; W OH, OH, !THg, NHR, NH^ of ÏTHNHE' , waarbij R eventueel gesubstitueerd, al of niet vertakte alkyl met 1-10 koolstofatomen, geschikt methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sec. butyl, isobutyl of 2,2,2-trifluorethyl; cyoloalkyl met 1-10 30 koolstofatomen, geschikt cyclohexyl of adamantyl, of aralkyl met 6-8 koolstofatomen, geschikt fenyl, benzyl of fenylethyl; en R’ waterstof, al of niet vertakte alkyl met 1-10 koolstofatomen, cycloalkyl met 1-10 koolstofatomen of aralkyl met 6-8 koolstofatomen, geschikt met de onder R aangegeven betekenis; 35 alkenyl met 2-8 koolstofatomen, bij voorkeur allyl; rechte, 8005121

» JS

- 3 - vertakte of cyclische alifatische acyl met 1-16 koolstofatomen, geschikt formyl, acetyl, propionyl, butyryl, lauryl of 1-adamantancarbonyl, eventueel gesubstitueerd met hydroxy, amino, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of halogeen (in het bij-5 zonder trifluoracetyl); aromatisch acyl, zoals benzoyl, fenyl- acetyl of cinnamyl, eventueel gesubstitueerd met hydroxy, amino, halogeen of alkoxy met 1-4 koolstofatomen; rechte, vertakte of cyclische alifatische urethanen met 3-11 koolstofatomen, geschikt zoals voor X gedefinieerd; of aromatische ure-10 thaneh, geschikt zoals voor X gedefinieerd voorstellen*

Wanneer X een acyl-beschermende groep is, is deze bij voorkeur formyl, acetyl, trifluoracetyl, propionyl en benzoyl; wanneer X een aromatisch urethaan-beschermende groep is, is deze bij voorkeur geschikt benzyloxycarbonyl, 2,4-dichloor-15 benzyloxycarbonyl, 2-broombenzyloxycarbonyl, 4-nitrotenzyloxy- carbonyl en 4-methoxybenzyloxycarbonyl; wanneer X een alifatische urethaan-beschermende groep is is deze bij voorkeur tert.butyloxycarbonyl, 1-methylcyclobutyloxy-carbonyl, adamantyloxycarbonyl of isobornyloxycarbonyl; 20 wanneer X een alkyl-beschermende groep is betreft deze bij voorkeur trityl, benzyl, methyl, ethyl en isopropyl; wanneer X een rest van een natuurlijk L-aminozuur is, wordt deze bij voorkeur gekozen uit de groep Gly, Ala, Leu, Met,

Lys, Arg, His, Phe, Trp, Ser en Thr; 25 wanneer X een dipeptide uit twee natuurlijke L-aminozuren is, betreft dit bij voorkeur twee L-aminozuren van de bovengenoemde groep; doelmatig betreft het hier Arg-Arg, Arg-Lys,

Lys-Arg, Lys-Lys, Leu-Eis, His-Leu, Leu-Leu, Leu-Met, Met-Leu, Leu-Trp, Trp-Leu, Thr- Ala, Ala-Thr, Ser-Ala en Ala-Ser.

30 A is bij voorkeur een D-aminozuurrest uit de groep Ala, val, ile, leu, pro, ser, thr, met, met-sulfoxyde, S-ethylhomo-cysteine. De kleine letters geven dl-aminozuurresten aan. Zouten van verbindingen met de algemene formule 1 met trifluor-azijnzuur, fluorwaterstofzuur, azijnzuur, chloorwaterstoizuur, 35 broomwaterstofzuur, alsmede andere farmaceutisch aanvaardbare 8005121 - - 4 - zouten van verbindingen met de algemene formule 1 vallen onder het kader van de uitvinding.

De synthese van de peptiden volgens de uitvinding kan ' hetzij volgens klassieke oplossingsmethoden of in de vaste 5 fase op polymere dragers worden uitgevoerd. Voorbeelden van beide werkwijzen worden hierna aangegeven. Bij de klassieke oplossingsmethode bestaat de synthese in wezen uit geschikte op elkaar volgende condensaties van beschermde aminozuren of peptiden. De condensatie wordt zodanig uitgevoerd, dat de 10 verkregen peptiden de gewenste volgorde van 4-7 aminozuurres- ten vertonen. Van de aminozuren en peptiden, die volgens de uit de polypeptidechemie bekende methoden worden gecondenseerd, zijn de bij de vorming van de peptidebinding niet betrokken amino- en carboxylgroepen, door een geschikte be-15 schermende groep beschermd.

De hydroxylfuncties van de gehydroxyleerde aminozuren kunnen door geschikte beschermende groepen worden beschermd (gedurende de totale synthese of slechts gedurende enige trappen) of zij kunnen onbeschermd blijven. De beschermende 20 groepen kunnen door acidylose, verzeping of hydrogenolyse worden verwijderd.

Voor het beschermen van de aminogroepen komen b.v. de volgende beschermende groepen in aanmerking: benzyloxycarbonyl (Z); tert.butyloxycarbonyl (BOC), trityl, formyl, trifluor-25 acetyl, o-nitrofenylsulfenyl.

Voor het beschermen van carboxylgroepen komen b.v. de volgende beschermende groepen in aanmerking: methyl, ethyl, tert.butyl, benzyl, p-nitrobenzyl.

Voor het beschermen van hydroxygroepen komen b.v. de 30 volgende beschermende groepen in aanmerking: acetyl, tert.

butyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, 2-broombenzyloxycarbonyl, tetrahydropyranyl, tert.butyl, trityl, benzyl, 2,4-dichloor-benzyl, methyl.

De condensatie tussen een aminogroep van een molecuul en 35 een carboxylgroep van een ander molecuul ter vorming van de 8005121 - 5 - * * peptidebinding kan door een geactiveerd acylderivaat, zoals een gemengd anhydride, een azide, een geactiveerde ester en dergelijke of door directe condensatie tussen een vrije amino-groep en een vrije carboxylgroep in aanwezigheid van een con-5 densatiemiddel, zoals dicyclohexylcarbodiimide, alleen of te zamen met een de racemisering verhinderend middel, zoals H-hydroxysuceinimide of 1-hydroxybenzotriazool, plaatsvinden.

De condensatie kan in een oplosmiddel, zoals dimethylformami-de, pyridine, acetonitril, tetrahydrofuran en dergelijke wor-10 den uitgevoerd. De reactietemperatuur kan van -30°C tot aan kamertemperatuur lopen. De reactietijd "bedraagt in het algemeen 1-120 uur. Het syntheseschema, de beschermende groepen en de condensatiemiddelen worden alle zodanig gekozen, dat het gevaar van racemisering wordt vermeden. Reacties ter ver-15 wijdering van de beschermende groepen worden volgens in de polypeptidechemie bekende methoden uitgevoerd.

Peptiden, waarin W OR is, worden b.v., uitgaande van het aminozuur met eindstandig koolstofatoom, dat met de geschikte alcohol is veresterd, bereid. Peptiden, waarin Ί OH betekent, 20 kunnen b.v. door hydrolyse van peptiden, waarin J OR is, worden bereid. Feptiden, waarin W de betekenissen HHR en HRg heeft, kunnen door middel van ammonolyse van de overeenkomstige esters worden verkregen.

Bij de vastefasemethode wordt een polymere drager toege-25 past. Het polymeer is bij voorkeur een copolymeer van styreen met 1-2^ divinylbenzeen als verknopingsmiddel, hetgeen tot gevolg heeft, dat het polystyreenpolymeer in de meeste organische oplosmiddelen volledig onoplosbaar is. De synthese wordt begonnen aan het eindstandige koolstofatoom van het peptide, 30 doordat het gewenste aminozuur wordt bevestigd aan een chloor- gemethyleerde hars, hydroxymethylhars of een benzhydrylamine-hars. De amino- en zijketenbeschermende groepen zijn de in de klassieke oplossingssynthese beschreven groepen.

Bij de bereiding van de verbindingen van de uitvinding 35 wordt een aminobeschermd aminozuur met behulp van b.v. een 8095121 - 6 - cesiumbicarbonaatkatalysator aan de chloor-gemethyleerde hars of met behulp van een condensatiemiddel, zoals dicyclohexyl-carbodiimine, aan een hydroxymethyl- of benzhydrylaminehars gekoppeld.

$ Na de eerste koppeling wordt de amino-beschermende groep * door geschikte reactanten, met inbegrip van trifluorazijnzuur-of zoutzuuroplossingen, in organische oplosmiddelen bij kamertemperatuur verwijderd. Na de verwijdering van de amino-be-schermende groep worden de overblijvende beschermde aminozu-10 ren trapsgewijze in de gewenste volgorde gekoppeld om het ge wenste peptide te verkrijgen. Elk beschermd aminozuur wordt in het algemeen in een drievoudige overmaat onder toepassing van een geschikte carboxylgroepactivator, zoals dicyclohexyl-carbodiimide in oplossing, b.v. methyleenchloride-dimethyl-15 formamide-mengsels, omgezet.

Nadat de gewenste aminozuurvolgorde is bereikt, wordt het gewenste peptide uit de harsdrager door behandeling met een reactant, zoals fluorwaterstof, die niet alleen het peptide van de hars afsplitst, maar ook het grootste deel van de 20 overblijvende zijketenbeschermende groepen afsplitst, verwij dert. Wanneer een chloorgemethyleerde of hydroxygemethyleerde hars wordt toegepast, leidt de fluorwaterstofbehandeling tot de vorming van het vrije peptide zuur (W => 0H)_. Wanneer een benzhydrylaminehars wordt toegepast, leidt de fluorwaterstof-25 behandeling rechtstreeks tot het vrije peptideamide (W = NE2).

Wanneer een chloorgemethyleerde of hydroxygemethyleerde hars wordt toegepast, kan anderzijds het peptide, waarvan de zijke-ten is beschermd, door behandeling van de peptidehars met ammoniak of een alkyl- of dialkylamine worden gesplitst, waar-30 bij het gewenste, in de zijketen beschermde amide, alkylamide of dialkylamide (W = NSj, NEE of NR2) wordt verkregen. De beschermende groep van de zijketen kan dan op op zichzelf bekende wijze worden verwijderd.

Bij de bereiding van de esters volgens de uitvinding 35 (w = or), worden de harsen ter bereiding van het zuur (W = Oïï) 8005121

* V

' - 7 - toegepast en wordt het peptide met de "beschermde zijketen met een "base en de geschikte alcohol gesplitst. De beschermende groep van de zijketen wordt dan op gebruikelijke wijze verwijderd. Anderzijds kunnen de peptidezuren en -amiden uit de pep-5 tide-esters door verzeping of ammonolyse worden verkregen.

Hydrazido- of gesubstitueerde hydrazidoderivaten volgens de uitvinding worden door condensatie van het ïï-beschermde peptide of het aminozuur met een geschikt gesubstitueerd hydrazine, zoals benzylcarbazaat, tert.butylcarbazaat, adamantyl-10 carbazaat, fenylhydrazine of adamantylhydrazine of door omzet ten van het ÏT-beschermde peptide of aminozuurhydrazide met een geschikt alkyleringsmiddel, zoals een alkylchloride, al of niet met een geschikt acyleringsmiddel, zoals benzylchloor-formiaat, tert.butylchloorformiaat en adamantylfluorformiaat 15 bereid,

De hier toegepaste symbolen zijn de gebruikelijk in de peptidechemie toegepaste symbolen. In de volgende voorbeelden worden D-aminozuurresten met kleine letters aangegeven; b.v. is ala = D-Ala.

20 H^-waarden worden op voorbeklede silicagel 60 $254 (Merck)-platen, laagdikte 0,25 mm, lengte van de plaat 20 cm, onder toepassing van de volgende ontwikkelingssystemen bepaald:

Systeem A: benzeen-ethylacetaat-azijnzuur-water 25 (10:10:2:1) (bovenste fase); systeem B: benzeen-ethylacetaat-azijnzuur-water (100:100:40:15) (bovenste fase); systeem C: n-butylalcohol-azijnzuur-water (4:1:1); systeem D: chloroform-methylalcohol-32^ ammoniumhydroxyde 30 (65:45:20); systeem S: chloroform-methylalcohol (8:2).

Analyses volgens dunnelaagchromatografie werden niet onder standaardomstandigheden uitgevoerd. Aldus kunnen de Bewaarden in het bijzonder bij verschillende temperaturen anders 35 zijn. De smeltpunten werden in open capillairs bepaald en zijn 8005121 - 8 - niet gecorrigeerd. De meeste van de derivaten werden week en ontleedden voor het smelten. Oplosmiddelen voor kristallisatie, neerslaan of malen worden tussen haakjes aangegeven.

ïïoogspannings-papierelektroforese werd met een Phero-5 graaf-Original-Frankfurt-type 64-inrichting op Schleicher en

Schull-papier nr. 2317 "bij 1600 V (40 V/cm) en pH 1,2 (miere-zuur-azijnzuur-water 123»100»777) uitgevoerd. Elektroforeti-sche mohiliteiten (E 1,2) worden ten opzichte van die van glutaminezuur aangegeven.

10 Verbindingen met de algemene formule 1 tonen interessan te farmacologische effecten in met laboratoriumdieren uitgevoerde proeven. In het bijzonder tonen de verbindingen met de algemene formule 1 activiteit ten opzichte van het centrale zenuwstelsel in de vorm van analgetics, anti-psychotica en 15 neuro-endocrinologische middelen.

De analgetische werkzaamheid werd aan muizen volgens de staartknikproef, beschreven door Haffner in Deutsch 3ied. Wochenschrift 55» 731» 1929» onderzocht. De beproefde verbindingen werden intraveneus, subcutaan, intraperitoneaal of 20 oraal toegediend. Bij intraveneuze of subcutane toediening toonden de beproefde produkten in doseringen van in het algemeen 0,2-50 mg/kg een analgetische werking. Verbindingen met de algemene formule 1 tonen receptor-affiniteiten voor centrale analgetica, wanneer zij in vitro in rattenhersenen volgens 25 de door Pert en Snyder in i'olec. Pharmacol. 10, 878, 197·*, be schreven methode werden beproefd. Aldus kunnen verbindingen met de algemene formule 1 dienen als therapeutische middelen voor de bestrijding van pijn.

Verbindingen met de algemene formule 1 vertonen ook acti-30 viteit ten aanzien van het centrale zenuwstelsel met de karak teristieke eigenschappen van anti-psychotica, zoals door proeven is aangetoond, die volgens de door -Janssen, Jageneau en Schellekens in Psychopharmacologia (Berl.) 1_, 399» 19^0 beschreven methoden aan ratten zijn uitgevoerd. Actieve doserin-35 gen bedragen in het algemeen 0,2-60 mg/kg. Aldus kunnen de 8005121 - 9 - verbindingen met de algemene formule 1 als anti-psychotica therapeutisch worden toegepast.

Verbindingen met de algemene formule 1 stimuleren onder andere het vrijmaken van het groeihormoon en van prolactine, 5 soals door radioimmunoproeven aan ratten is aangetoond, die volgens de door Niswender, Chen, Midgley, Mettes, Ellis in Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 150. 793» 1968 beschreven methode werden uitgevoerd. Actieve doseringen zijn in het algemeen 0,01-10 mg/kg. Aldus kunnen de verbindingen volgens formule 1 10 worden toegepast voor het stimuleren van het vrijmaken van het groeihormoon en van prolactine. Aldus vallen ook de therapeutische toepassingen van de verbindingen met de algemene . formule 1 onder het kader van de uitvinding. Voor therapeutische' doeleinden worden de verbindingen met de algemene formu-15 le 1 en de zouten daarvan tezamen met gebruikelijke farmaceu tisch aanvaardbare dragers of verdunningsmiddelen toegediend.

Voorkeursuitvoeringsvormen van de uitvinding zijnj 8005121 m - 10 - Η - Tyr - ala - Phe - Gly - OMe . (16)5 H - Tyr - ala - Phe - Gly - OH 07)} H - Tyr - ala - Phe - Gly - NH2 . (19); H - Tyr - ala - Phe - Gly - NH - NH2 . 2 HCl; 5 H - Tyr - ala - Phe - Gly - NH - NH - Z . HCl ^ "\ 09')i H - Tyr - ala - Phe - Gly - NH - NH - CO - CII2 - 0¾ - CH3 . HCl i 21 ') i H - Tyr - ala - Phe - Gly - NHNIILrl . HCl; H - Tyr - ala - Phe - Gly - NHNIIBnl . HCl; H - Tyr - ala - Phe - Gly - NHNIIAdoc; 10 h - Tyr - ala - Phe - Gly - NIINIIBoc;

' J

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Nil - NH - CO - dl2 - CH2 - CH3 ; (20’) J

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - NH - NH - Z ’ ' ' ' /(9)

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - NH - NH2 t ^'(10), (12’); H - Tyr - met - Phe - Gly - NHNIIZ . HCl; 15 H - Tyr - met (0) - Phe - Gly - NHNIIZ . HCl; H - Tyr - met - Phe - Gly - NIINII2 . 2IIC1; H - Tyr - met (0) - Phe - Gly - NIINII2; H - Tyr - ala - Phe - Phe - Nil - NH - Z ; H - Tyr - ala - Phe - Phe - NH - NH2 ; 20 boc - Tyr - ala - Phe - Phe - NH - NH - Z ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Phe - NH - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Sar - NH - NH2 . 2HC1 ; H - Tyr - ala - Phe - Sar - NH - NH - Z . HCl ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Sar - NH - NH2 ; 25 Boc - Tyr - ala - Phe - Sar - NH - NH - Z ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - NH2 . CF3C00H V (15);

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - NH2 (14); H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - NH - Ad . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - NH - CH2CF3 . HCl; 30 h - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - NH - NH - Z.HCl (13»)5 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - NH - NH2 ;

Boc - Tyr - .ala - Phe - Gly - Tyr - NH - NH - Z (17'}; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - NH - NH - CgHg ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - NH - NH - tyr - H.2HC1 (23'} 35 Boc - Tyr - a.la - Phe - Gly· - NH -·NH - tyr - Boc (22)? H - Tyr - ala - Phe - Gly - tyr - NH2 . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - tyr - NHNHZ . HCl ; 8005121 -11 - Η - Tyr - ala - Phe - Gly - Pro - NH2 . HC1 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Ser - NH2 . HC1 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Leu - NH2 . HC1 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Leu - NH - NH - Z ; 5 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Leu - NH - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Met - NII2 . HC1 ; H - Tyr - .ala - Phe - Gly - Met(O) - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Nva - NH2 ; H - Tyr - met - Phe - Gly - Tyr - NH2 . HC1 ; 10 H - Tyr - met - Phe - Gly - Pro - NH2 ; H - Tyr - niet - Phe - Gly - Nva - NH2 ? H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr - NII2 . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr - NHNHZ . HC1 ; H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr - NIINH2 ; '15 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - NH2 . IIC1 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Pro - NII2 . HC1 ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - NH2 ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - (Bzl) - Pro - NH2 ; II - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Ser - NH2 . CP3 COOH ; 20 boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Ser - NH2 ? H - Tyr - ala - Phe - Gly - Pro - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NII2 . CF-jCOOII (13); H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Pro - Ser - NH2 ; H - Tyr -. ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Pro - Ser(Bzl) - NH2 . HC1 ; 25 II - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser(Bzl) - NH2.HCl;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Pro - Ser - NHjOOi Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NH2 (12)} H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - OMe . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - OH . HCl ; 30 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NHMe . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NHEt . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NH - CH(CH3)2; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NH - NH - Z . HCl (74.*); - H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Sec - NH - NH2 ; 35 Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NH - NH - Z ..(13’)» H - Tyr - ala - Phe - Gly - Phe - Pro - Ser - NH2 . HCl ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Phe - Pro - Ser - NH2; 8005121 - 12 - Η - Tyr - ala - Phe - Gly - Trp - Pro - Ser - NH2 . HCl?

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Trp - Pro - Ser - NH2? H - Tyr - ala - Phe - Gly - Gly - Pro - Ser - NH2 . HCl; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Phc(N02) - Pro - Ser - NHj.HCl; 5 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Phe(F) - Pro - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Cha - Pro - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Phg - Pro - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Me) - Pro - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Hyp - Ser - NH2 . HCl ; 10 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Hyp - Ser(Bzl) - NH2 . HCl ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Hyp - Ser - NH2 ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Hyp - Ser (Bzl) -NII2; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Me) - Hyp - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Val - Ser - NH2 . CF3COOH; 15 Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Val - Ser - nh2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Gly - Ser - NH2 . CF-jCOOH;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Gly - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Ppa - Ser - NH2 . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Ppa - Ser - NH2 ; 20 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Aze - Ser - NH2 . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Aze - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Tia - Ser - NH2 . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - Tia - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - ^Pr - Ser - NH2 . HCl ; 25 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr (Bzl) - /\Pr - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - 3Hyp - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - 3Hyp - Ser(Bzl)-NH2; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - alio Hyp - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr(Bzl) - alio Hyp - Ser(Bzl) - NI^ ; 50 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - BAla - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Phe - Hyp - Ser - NH2 . HCl ? H - Tyr - ala - Phe - Gly - Phe - Hyp - Ser(Bzl) - NH2.HC1;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Phe - Hyp - Ser - NH2 ;

Boc - Tyr - ala - Phe - Gly - Phe - Hyp - Ser(Bzl) - NH2; 55 H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Abu - NH- . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Gly - NH2 . HCl ; H - Tyr - met - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NH2 . HCl ; 8005121

.A

- 13 - Η - Tyr - met(Ο) - Phe - GXy - Tyr - Pro - Ser - nh2 ; H - Tyr - ala - Phe - Phe - Tyr - Pro - Ser - NH2 · HC1; H - Tyr - 5la - Phe - Phe - Tyr(Bzl) - Pro - Ser - NI^.HCl? Boc - Tyr - ala - Phe - Phe - Tyr - Pro - Ser - NH2 ; 5 H - Tyr - ala - Phe - MePhe - Tyr - Pro - Ser - OMe . HCl; H - Tyr - ala - Phe - MePhe - Tyr - Pro - Ser - NH^ . HCl; H - Tyr - ala - Phe - MePhe - tyr - Pro - Ser - ΌΗ ; H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr - Pro - Ser - NH2 . HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr(Bzl) - Pro - Ser - NH2 ? 10 H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr - Hyp - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr(Bzl) - Hyp - Ser(Bzl) -NH2? H - Tyr· - ala - Phe - Pro - Tyr - Pro - Ser - NH2 · HCl ; H - Tyr - ala - Phe - Pro - Tyr(Bzl) - Pro - Ser - NH2 ; H - Tyr - ala - Phe - Pro - Tyr - Hyp - Ser - NH2 ; 15 H - Tyr - ala - Phe - Pro - Tyr(Bzl) - Hyp - Ser(Bzl)-NH2.

Me « CH3; Et = CHgCHjj Z » "benzyloxyoarbonyl; -'tri = lauryl;

Bnl a "benzoyl; 3zl = "benzyl;

Ad = adamantyl; met(O) = D-methionine-sulfoxyde; 20 MePhe = IT-methylfenylalanine; Ppa = pipeoolinezuur;

Aze = 2-azetidinecarbonzimr; Tia = 4-thiazolidinecarbonzuur; _ - - Phe(LT02) = p-nitro-fenylalanine;

y^ooH

H

Ahu = e-amino-n-boterznur; Tyr(Bzl) = tyrosine-O-bensylether;

Ser(Ezl) = serine-O-benzyl- Cha = hexahydrcfenylalanine; ether; 25 Phg = fenylglycine; Phe(P) = p-fluorfenylalanine; βΑΙη = β-alanine; allo Hyp = 4-allohydroxyproline; 3Hyp = hetzij 3-hydroxyproline NvA = normaal valine of 3-allohydroxyproline; Tyr(Ms) = tyrosine-O-methylether.

80 0 5 1 2 1 - U -

De volgende voorbeelden geven een nadere toelichting van de uitvinding zonder dat zij beperkend zijn bedoeld.

Voorbeeld I

De bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-BHg.CFj-5 COOH (13)

Trap 1j Boc-Pro-Ser-Ba2 0).

Aan een oplossing van 1,0 g (4,65 mmol) Boc-Pro-OH in 10 ml watervrij tetrahydrofuran werden 0,52 ml (4,65 mmol) B-methylmorfoline en 0,45 ml (4,65 mmol) ethylchloorformiaat 10 na elkaar bij een temperatuur van -12°C toegevoegd. Ba roeren bij deze temperatuur gedurende 2 minuten werd een koude oplossing van 0,48 g (4,65 mmol) H-Ser-HH2 (R.W. Hanson en H. B. Rydon, J. Can. Soc. 836, 1964) ia 10 ml dimethylformamide toegevoegd. Het reactiemengsel werd 3 uur bij -10°C en 1 uur 15 bij 20°C geroerd, waarna de zouten werden afgefiltreerd en in vacuum ingedampt. Het residu werd met tetrahydrofuran aangewreven en gefiltreerd en de oplossing nogmaals in vacuum ingedampt. Door kristallisatie uit methanol-diëthylether werd I, 1 g van de verbinding volgens formule 1 verkregen, 20 smp. 138°C, 58,9° (c - 1 in MeOH), RfJt = 0,15, Efj =* 0,33.

Trap 2: H-Po-Ser-HH2.CF3C00H (2).

1,0 g (3,3 mmol) Boc-Pro-Ser-NH2 (1) werd in 10 ml tri-fluorazijnzuur bij 0°C opgelost. Ba 30 minuten bij 0°C werd 25 de oplossing in vacuum ingedampt, met methanol verdund en nog maals in vacuum ingedampt. Het produkt volgens formule 2 werd uit diëthylether-petroleumether geïsoleerd, opbrengst 1,0 g, smeltpunt 48-50°C, Hfc * 0,10.

Trap 3? Boc-Tyr (Bzl)-Pro-Ser-BE2 (3)*

30 Sen oplossing van 1,0 g (3,2 mmol) E-Pro-Ser-NHg.CFjCOOH

(2) in 35 ml dimethylformamide werd tot 0°C gekoeld, waarna 0,36 ml (3,2 mmol) B -methylmorfoline en vervolgens 1,2 g (3,2 mmol) Boc-Tyr (Bzl)-OH, 0,43 g (3,2 mmol) 1-hydroxybenzo-triazool en 0,73 S (3,52 mmol) dicyclohexylcarbodiimide wer-35 den toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur bij 8005121 * * -15 - 0°C en gedurende de nacht hij kamertemperatuur geroerd, daarna gefiltreerd en in vacuum ingedampt. Het residu werd in ethylacetaat opgelost en de oplossing achtereenvolgens met HaCl-verzadigde oplossingen van 1 M citroenzuur, 1 M HaHCO^ 5 en water gewassen. De organische oplossing werd met watervrij

HagSO^ gedroogd en het oplosmiddel onder vacuum verwijderd.

Het produkt (3) werd in een opbrengst van 1,4 g door kristallisatie uit ethylacetaat-petroleumether gewonnen? smeltpunt 115°C, £~aJ*5 = -22,9° (o-1 in MeOH), Rf^ = 0,20.

10 Trap 4: H-TyrCBzlJ-Pro-Ser-HHg.CPjCOOH (4).

Er werd te werk gegaan als in trap (2), waarbij uit 1,0 g (1,8 mmol) Boc-Tyr(Ezl)-Pro-Ser-ÏÏH2 (3) 1,0 g van de verbinding volgens formule 4 werd verkregen, * -7,4° (c = 1 in MeOH), Rf^ = 0,59, smeltpunt 54-57°C (ontleding).

15 Trap 5: Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (5).

0,42 ml (3,8 mmol) H-methylmorfoline en 0,3 ml (3,8 mmol) ethylchloorformiaat werden na elkaar bij -12°C toegevoegd aan een oplossing van 1,0 g (3,8 mmol) Βοσ-Phe-OH in 10 ml watervrij tetrahydrofuran. Ha roeren bij deze temperatuur geduren-20 de 2 minuten werd een koude oplossing van 0,95 S (5,7 mmol) ïï-Gly-HH-HY-Z-HCl (K. Hofman et al., J. Amer. Chem. Soc. 94, 6171, 1972) en 0,4 ml (3,7 mmol) H-methylmorfoline in 14 ml dimethylformamide toegevoegd. Het reactiemengsel werd 3 uur bij -10°C en 1 uur bij 20°C geroerd, waarna de zouten werden 25 afgefiltreerd en in vacuum werd ingedampt. Het residu werd in ethylacetaat opgelost en meerdere malen achter elkaar met HaCl-verzadigde oplossingen van 1 M citroenzuur, 1 M HaHCO^ en water gewassen. De organische laag werd via watervrij Ha2S0^ gedroogd en het oplosmiddel onder vacuum verwijderd.

30 Het produkt (formule 5) werd in een opbrengst van 1,4 g uit methanoldiisopropylether gewonnen, smeltpunt 143°C, - +5,6° (o = 1 ia MeOH), Rf = 0,63.

Trap 6: H-Phe-Gly-HH-NE-Z.HCl (6).

1,0 g (2,1 mmol) Boo-Phe-Gly-NH-HH-Z (5) werd 30 minuten 35 bij kamertemperatuur met 10 ml van een 1,3 n oplossing van 8005121 - 16 - chloorwaterstofzuur in ijsazijnzuur behandeld. Bij verwijdering van het oplosmiddel onder vacuum bij 30°C en malen van het residu met diëthylether werd 0,89 g van een verbinding volgens formule 6 verkregen, smeltpunt 178°C, - +45° 5 (c - 1 in MeOH), Sfc = 0,73.

Trap 7* Boc-ala-Phe-Gly-UH-HH-Z (7)·

Uitgaande van 1,0 g (5,3 mmol) Boc-ala-OH en 2,09 g (5,1 mmol) H-Phe-Gly-UY-NH-Z.HCl (6), waarbij te werk werd gegaan als in trap (5), werd 2,5 g van de verbinding volgens 10 formule 7 uit methanol-diisopropylether verkregen, smeltpunt 165°C, fajl5 = +8° (c - 1 in MeOH), Rf^ = 0,51.

Trap 8: H-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z.HC1 (formule 8).

Uitgaande van 1,0 g (1,8 mmol) Boc-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (formule 7)» waarbij te werk werd gegaan zoals in trap 6, 15 werd 0,84 g van de verbinding volgens formule 8 verkregen, smeltpunt 180°C, a +0»2° (o - 1 in MeOH), Rfc = 0,75.

Trap 9ί Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NE-ÏTT-Z (formule 9).

Uitgaande van 1,0 g (3,5 mmol) Boc-Tyr-OH en 1,65 g (3,4 mmol) E-ala-Phe?Gly-NH-NH-Z.HCl (formule 8) waarbij te 20 werk werd gegaan, zoals in trap 5» werd 2,24 g van de verbin ding volgens formule 9 verkregen (kristallisatie uit methanol-diisopropylether) , smeltpunt 148°C - +16,2° (c = 1 in

MeOH), Rf = 0,38.

Trap 10: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NHg (formule 10).

25 1,0 g (1,4 mmol) 3oc-Tyr-ala-Phe-Gly-NY-NH-Z (formule 9) in 10 ml methanol werd bij kamertemperatuur in aanwezigheid van 0,27 g 1Q$'s Pd/C gehydrogeneerd. De katalysator werd af-gefiltreerd en de oplossing in vacuum geconcentreerd. Door verdunnen met ethylacetaat werd 0,64 g van de verbinding vol-30 gens formule 10 verkregen, smeltpunt 148°C, = +26,6° (c = 1 in MeOH), Rfg = 0,34.

Trap 11: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr (BzlJ-Pro-Ser-NHj (formule 11).

Aan een oplossing van 2,0 g (3>5 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-35 Gly-UH-UHg (formule 10) in 20 ml watervrij dimethylformamide 8005121 - 17 - werd 2,18 ml )8,75 mmol) 4ΪΓ chloorwaterstofzuur in watervrij tetrahydrofuran en 0,45 ml (3,8 mmol) n-butylnitriet na elkaar bij een temperatuur van -30°C toegevoegd. Ha gedurende 30 minuten roeren bij deze temperatuur, werden 1 ml (8,75 mmol) 5 ïT-methylmorfoline en daarna een koude oplossing (-30 C) van 1,66 g (2,91 mmol) H-Tyr^BzlJ-Pro-Ser-NHg.CF^COOH (formule 4) en 0,35 ml (2,91 mmol) H-methylmorfoline in 40 ml dimethyl-formamide toegevoegd. Men liet het reactiemengsel gedurende 3 dagen lang bij -9°C reageren, waarna de zouten werden afge-10 filtreerd, het oplosmiddel in vacuum verwijderd en het pro- dukt uit methanol-ethylacetaat-diëthylether werd neergeslagen. Het ruwe produkt werd door kolomchromatografie over silicagel (Merck, 0,062-0,210 mm) gereinigd, waarbij werd geëlueerd met ethylacetaat-methanol (8:2); men verkreeg 2,0 g van de verbin-15 ding volgens formule 11 uit methanol-diëthylether, smeltpunt 135°C, - “5,3° (c = 1 in MeOE), Ef^ = 0,24.

Trap 12: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2 (formule 12), 1,3 g (1,3 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-(Bzl)-Pro-Ser-HHg (formule 11) opgelost in 20 ml methanol werd bij 35°G in 20 aanwezigheid van 0,30 g 1Q$'s Pd/C gehydrogeneerd. De kataly sator werd afgefiltreerd en de oplossing onder vacuum geconcentreerd. Door verdunnen met diëthylether werd 1,1 g van een verbinding volgens formule 12 verkregen, smeltpunt 160-165°C, (ontleding), - -7,6° (c - 1 in MeOE), Efj - 0,11, 25 Efc = 0,80.

Trap 13 : H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-HH2.GP^C00H (formule 13).

1,0 g (1,1 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-HH2 (formule 12) werd 30 minuten bij 0°C met 10 ml trifluorazijn-30 zuur behandeld. Het oplosmiddel werd onder vacuum verwijderd en het residu met diëthylether gemalen, waarbij 0,90 g van de verbinding volgens formule 13 werd verkregen, smeltpunt 159— 160°C, /“aj^5 = +5,5° (c = 1 in Me OH), Είβ = 0,51.

Voorbeeld II

35 Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-HH^CF^COOH

8005121 »18·· (formule 15)·

Trap is Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NHg (formule 14).

2,74 g (4,8 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-HHg (formule 10) werd in 50 ml watervrij dimetiiylformamide opgelost en tot 5 -30°C gekoeld. 2,0 ml (12 mmol) 6ST chloorwaterstofzuur in wa tervrij tetrahydrofuran en 0,63 ml (5,28 mmol) n-butylnitriet werden na elkaar toegevoegd en het reactiemengsel 30 minuten hij -30°C geroerd. 1,34 ml (12 mmol) n-methylmorfoline werd hij -40°C toegevoegd, waarna een voorgekoelde (-40°C) oplos-10 sing van 0,865 g (4,0 mmol) E-Tyr-lTH^.HCl (K. Blau en S.G.

Waley, Bioohem. J. £2, 538, 1954) en 0,456 ml (4,0 mmol) N-methylmorfoline in 5° ml dimethylformamide werd toegevoegd.

Het reactiemengsel werd 6 dagen lang hij -10°C in reactie gebracht en daarna tot een klein volume geconcentreerd, de zou-15 ten afgefiltreerd en het produkt, door verdunnen met chloro form, neergeslagen. Boor kristallisatie uit methyl-alcohol-chloroform werd 2,0 g van de verbinding volgens formule 14 verkregen, smeltpunt 127-129°C, - +19,9° (o » 1 in

MeOS), HfA = 0,15, EfB = 0,56.

20 Trap 2: E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NEg.CFjCOOE (formule 15).

1,0 g (1,4 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-EH^ (formule 14) liet men hij 0°0 30 minuten met 12 ml trifluorazijnzuur reageren. Het zuur werd onder vacuum afgedampt en het residu met diëthylether gemalen. Boor kristallisatie uit isopropylalco-25 hol-diïsopropylether werd 0,94 g van de verbinding volgens formule 15 verkregen, smeltpunt 145-14ö0C, - 34,5° (c = 1 in MeOE), Hfg = 0,65.

Vastefasesynthesej

De synthese op een polymere drager kan h.v. volgens één 30 van de nu volgende methoden worden uitgevoerd.

Werkwijze A:

Bereiding van Boc-(AA) -(AA) . ..... (AA).-hydroxymethyl-

XI XX· I I

polystyreenester.

Voorgemethyleerde polystyreenhars werd met het eerste 35 Boc-aminozuur (Boc-AA^-0H) volgens Gisin, Helv, ‘Chim. Acta £6, 8005121 - 19 - 1470 (1973) veresterd. De polystyreenester werd volgens voorschrift A voor het opnemen van Boc-(aa)2-0H, ..... Boc-(AA)n-OH behandeld om de in de titel genoemde hars te verkrijgen. Voorschrift A: 5 1. driemaal wassen met CHgClg, 2. tweemaal behandelen met TFA-CH2C12 (1 * 1) gedurende 1 minuut, 3. behandelen met TFA-CïïgClg (1*1) gedurende 30 minuten, 4« viermaal wassen met CHgClg, 10 5· tweemaal behandelen met 10^’s T3A in 012C12 geduren de 1 minuut, 6. behandelen met 10$' s TEA in CH2C12 gedurende 10 minuten, 7. driemaal wassen met CH2C12, 15 8. driemaal wassen met DMF, 9. driemaal wassen met CHgClg, 10. toevoegen van 2 of 3 equivalenten van het symmetrische anhydride van het overeenkomstige aminozuurde-rivaat, bereid, zoals door Hagenmayer en Frank, 20 Heppe-Seyler1s Z. Physiol. Chem. 353. 1973 (1972) » beschreven, opgelost in CHgClg} reactietijd 1-2 uren, 11. driemaal wassen met CH2C12, 12. driemaal wassen met isopropylalcohol, 13· driemaal wassen met CHgClg, 25 14« proef-ninhydrinereactie volgens Kaiser e.a. Annal.

Biochem. ü, 595 (1970).

Indien een onvolledige reactie optreedt, dienen de trappen 4-14 te worden herhaald.

De afkortingen voor de in dit voorschrift A toegepaste 30 oplosmiddelen en reactanten zijn als volgt: TFA: trifluorazijnzuur, TEA: triëthylamine, DMF: dimethylformamide.

Werkwijze B: 35 Bereiding van H-(AAn-(AA)n 1..... (AA).,-hydroxymethyl- 8005121 - 20- polys tyre ene ster.

?Ta het invoeren van het laatste aminozuurderivaat volgens voorschrift A (werkwijze A) werd de hars driemaal met azijnzuur gewassen, waarna de trappen 1-9 werden herhaald en 5 viermaal met isopropylaloohol werd gewassen*

Werkwijze Ci

Bereiding van Boc-(AA)n-(AAjl_1 ..... (AA^-benzhydryl- aminehars.

Boc-(AA)1-0H werd via dicyclohexylcarbodiimide aan de 10 henzhydrylaminehars gebonden zoals door Pietta e,a* in <7,

Org. Chem. £2, 44 (1974) is beschreven. ITiet-omgezette amino-groepen werden met azijnzuuranhydride/pyridine/CïïgClg (2:1:10) geacetyleerd. Het polystyreenamide werd daarna volgens voorschrift A (werkwijze a) voor het invoeren van de 15 andere aminozuurresten behandeld om de in de titel genoemde hars te verkrijgen.

Werkwijze D:

Bereiding van H-(AA)n-(AA)n_1 ..... (AA)^-benzhydryl- aminehars.

20 3r werd te werk gegaan volgens werkwijze B, echter werd uitgegaan van de peptidehars van werkwijze C.

Voorbeeld III

Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-OMe (formule 16).

1 g peptidehars van werkwijze B met de benodigde volg-25 orde aan aminozuurresten (ingevoerd als Boc-Gly-OH, Boc-Phe- OH, 3oc-ala-0H en Boc-Tyr-OH, in deze volgorde), werd in 25 ml methylalcohol en 2 ml triëthylamine 5 dagen bij kamertemperatuur gesuspendeerd. De hars werd afgefiltreerd, met dimethyl-formamide gewassen en het oplosmiddel in vacuum afgedampt.

30 Door kristallisatie van het residu uit isopropylaloohol werd 0,16 g van de in de titel genoemde verbinding (formule 16) verkregen, smeltpunt 216-218°G, C*Jf - -32,6° (o = 1 in DSEP), Hf q * 0,70; aminozuurverhoudingen: Gly, 104; al a 1,06; Tyr 0,99; Phe 1,00.

8005121 - 21 -

Voorbeeld IT

Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-OH (formule 17)* (i) 1 g van dezelfde peptidehars als in voorbeeld III werd 45 minuten bij 0°C met 10 ml waterstofvrij HF (via CoF^ 5 gedestilleerd) met een gehalte aan 1 ml anisool behandeld. De ' fluorwaterstof werd onder verminderde druk ingedampt en het anisool door wassen met diisopropylether verwijderd. Het ruwe peptide werd uit de hars geëxtraheerd met 50$'s azijnzuur, daarna door chromatograferen over een zuil van Sephadex G-15 10 en elueren met 0,5 N azijnzuur gereinigd en tenslotte door be handelen met Amberlite IR0-45 (CH,C00”) in het acetaat omgezet.

(ii) Anderzijds werd 0,10 g peptideëster (formule 16) in 5 ml HgO en 5 ml methylalcohol gesuspendeerd en bij kamertemperatuur gedurende 90 minuten lang met 0,32 ml 1ïF HaOH ver- 15 zeept, 0,32ml 1n HC1 werden toegevoegd en de oplossing onder vacuum geconcentreerd. Door verdunnen met 95$'s ethanol werd 0,08 g van de in de titel genoemde verbinding (formule 17) verkregen, smeltpunt 250-252°C (ontleding), = 2,8° (c = 1 in DMF), Rfg » 0,56. Aminozuurverhoudingen: Gly 1,04, 20 ala 0,94, Tyr 1,00, Phe 1,05.

Voorbeeld V

Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-NHg (formule 19).

(i) 1 g van dezelfde peptidehars als in voorbeeld III werd in 10 ml van een (1:1)-mengsel van methylalcohol-dimethyl-25 formamide gesuspendeerd en bij 0°C met ammoniak verzadigd.

Eet reactiemengsel werd 3 dagen bij kamertemperatuur geroerd, waarna de hars werd afgefiltreerd, met dimethylformamide gewassen en het oplosmiddel in vacuum werd afgedampt. Het residu werd met een oplossing van chloorwaterstofzuur in watervrij 30 tetrahydrofuran behandeld en het produkt uit isopropylalcohol als het hydrochloride gewonnen. Sr werd 0,09 g van de in de titel genoemde verbinding volgens formule 19 verkregen, smeltpunt 206°C, faj™ = +49,9° (o = 1 in 2.1eOH), Rf = 0,58. Aminozuurverhoudingen: Gly 1,05, ala 1,00, Tyr 0,91, Phe 1,03. 35 (ii) Anderzijds kon het gelijke peptide (formule 19) uit 8005121 - 22 - de peptidehars van werkwijze B (met de vereiste volgorde aan aminozuurresten) worden verkregen, waarbij op dezelfde wijze als in voorbeeld 17 (i) beschreven, werd te werk gegaan. Yoorbeeld 71 5 Bereiding van E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NI-ÏÏH-Z.ECl (formule 14')·

Trap 1: Boc-Ser-NH-ÏTE-Z (formule 1')

Aan een oplossing van 1,0 g (4,87 mmol) Boc-Ser-OH in 20 ml watervrij tetrahydrofuran werd 0,55 ml (4,87 mmol) N-10 methylmorfoline en 0,49 ml (4»87 mmol) ethylchloroformiaat na elkaar bij een temperatuur van -12°C toegevoegd. Na gedurende 2 minuten roeren bij deze temperatuur werd een koude oplossing van 1,0 g (4,87 mmol) HgN-NH-Z-HCl en 0,55 ml (4,87 mmol) N-methylmorfoline in 20 ml dimethylformamide toegevoegd. Biet re-15 actiemengsel werd 3 uur bij -10°C en 1 uur bij -20°C geroerd, waarna de zouten werden afgefiltreerd en in vacuum werd ingedampt «

Eet residu werd in ethylacetaat opgelost en meerdere malen achter elkaar met een NaCl-verzadigde oplossing van 1 M

20 citroenzuur, 1 M NaïïCO, en water gewassen. Be organische laag 3 werd via watervrij Na^SO^ gedroogd en het oplosmiddel onder vacuum verwijderd. Het produkt werd door kolomchromatografie over·silicagel gezuiverd, waarbij met CECl,:MeOH =98:2 werd geëlueerd. Be bij dunnelaagchromatografie homogene fracties 25 werden verzameld en het oplosmiddel onder vacuum verwijderd.

Boor malen met diëthylether-petroleumether werd 1,4 S van de verbinding volgens formule 1' verkregen, smeltpunt 42-46°C, - 25»8° (o - 1 in MeOH), Hf = 0,52.

Trap 2: E-Ser-M-NE-Z.ECl (formule 2*).

30 1,0 g (2,83 mmol) Boc-Ser-NH-NE-Z (formule 1') werd in 10 ml van een 4n-oplossing van chloorwaterstofzuur in watervrij tetrahydrofuran bij kamertemperatuur opgelost. Na 30 minuten bij kamertemperatuur werd diëthylether toegevoegd en het neerslag gefiltreerd.

• 35 Het ruwe produkt werd uit absolute ethanol-diëthylether 8005121 - 23 - herkristalliseerd, waarbij 0,7 g van de in de titel genoemde verbinding werd verkregen, smeltpunt 110-115°0, C-Jf -+ 20,7° (o - 1 in MeOH), Hfc = 0,495 E,, 2 = 1,16.

Bal

Trap 3* Boc-Tyr-Pro-OH (formule 3‘)· 5 1,0 g (8,7 mmol) H-Pro-OH werd bij kamertemperatuur in 4,35 ml 2ÏÏT HaOH opgelost. Daarna werd de oplossing tot 0°C gekoeld, met 10 ml dimethylformamide verdund, waarna de oplosmiddelen onder vacuum bij 35°0 werden verwijderd. Het residu werd in 10 ml dimethylformamide gesuspendeerd, en 4»3 g 10 (8,7 mmol) · -Bzl

Boc-Tyr-OHp toegevoegd. Het reactiemengsel werd 1 uur bij kamertemperatuur geroerd en daarna onder vacuum ingedampt. Het residu werd in water opgelost en meerdere malen met ethylacetaat gewassen. De waterlaag werd op 0°C afgekoeld, met 5n waterige chloorwaterstofzuuroplossing op een pH van 2 15 aangezuurd en daarna met ethylacetaat geëxtraheerd. De organi sche laag werd met een NaCl-verzadigde waterige oplossing tot neutraal gewassen en met watervrij HagSO^ gedroogd? bij het verwijderen van het oplosmiddel bij 30°C werd 3,7 g van de verbinding volgens formule 3’ verkregen, smeltpunt 97-100°C 20 (ontleding), Z“aJ7^5 * 15,70 (o * 1 in MeOH), Rf = 0,70? E5,8 = °»^·

Trap 4: Boc-Tyr-Pro-OH (formule 4')·

Bzl 1,0 g (2,13 mmol) Boc-Tyr-Pro-OH (formule 3’) in 15 ml methanol werd in aanwezigheid van 0,27 g 10$'s Pd/C bij 30°C 25 gehydrogeneerd. De katalysator werd afgefiltreerd en de oplos sing met ethylacetaat verdund en onder vacuum tot neerslaan geconcentreerd. Er werd 0,7 g van de verbinding, volgens formule 4' verkregen, smeltpunt 136-138°C, « -25,0° (c = 1 in MeOH), Rf^ = 0,42; Ε$ Q = 0,52.

30 Trap 5* Boc-Tyr-Pro-Ser-NH-HH-Z (formule 5')»

Uitgaande van 1,0 g (2,65 mmol) Boc-Tyr-Pro-OH (formule 4’) en 0,77 g (2,65 mmol) E-Ser-NH-NH-Z.EC1 (formule 2'), waarbij te werk werd gegaan, zoals in trap 1, werd 1,46 g van 8005121 - 24 - de verbinding volgens formule 5' verkregen. (Kristallisatie uit diëthylether-petroleumether)', smeltpunt 116-118°C, Z”a_7^5 = -46, f (c = 1 in MeOH), HfA = 0,17, Hfj - 0,37.

Trap 6: H-Tyr-Pro-Ser-NH-UH-Z.HCl (formule 6')«

5 Uitgaande van 1,0 g (1,63 mmol) Boc-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z

(formule 5’) waarbij te werk werd gegaan zoals in trap 2, werd 0,78 g van de verbinding volgens formule 6' uit diëthyl-ether verkregen, smeltpunt 172-174°C, -38,4° (c » 1 in MeOH), Hfc = 0,46; E1 2 - 0,79.

10 Trap 7* Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (formule 7')·

Uitgaande van 1,0 g (3,8 mmol) Boc-Phe-OH en 0,95 g (3,7 mmol) H-Gly-HH-NH-Z.HCl (K. Hofmann e.a. J. Am. Chem.

Soc. 24, 6171, 1972), waarbij te werk werd gegaan zoals in trap 1, werd 1,4 g van de verbinding volgens formule 7' uit 15 methanol-diisopropylether verkregen, smeltpunt 143°C, Co-Jf - + 5,6° (o = 1 in MeOH), Hf = 0,63.

Trap 8: E-Phe-Gly-NH-NH-Z.HCl (formule 8').

1,0 g (2,1 mmol) Boc-Phe-Gly-NE-NH-Z (formule 7') werd 13 minuten bij kamertemperatuur met 10 ml van een 1,3n oplos-20 sing van chloorwaterstofzuur in azijnzuur behandeld. Ha ver wijdering van het oplosmiddel onder vacuum bij 30°C en malen van het residu met diëthylether, werd 0,89 g van de verbinding volgens formule 8' verkregen, smeltpunt 178°C, - +45° (c - 1 in MeOH), Hf = 0,78; E1 2 = 0,88.

25 Trap 95 Boc-ala-Phe-Gly-NH-HH-Z (formule 9')·

Uitgaande van 1,0 g (5,3 mmol) 3oc-ala-0H en 2,09 g (5,1 mmol) H-Phe-Gly-NH-NH-Z.ECl (formule 8’)., waarbij te werk werd gegaan zoals in trap 5, werd 2,5 g van de verbinding volgens formule 9' uit methanol-diisopropylether verkregen, 30 smeltpunt 165°C, = +8° (c = 1 in MeOH), Rf^ = 0,51.

Trap 10: H-ala-?he-Gly-NE-NH-Z-HCl (formule 10»). Uitgaande van 1,0 g (1,8 mmol) Boc-ala-Phe-Gly-NE-HH-Z (formule 9')» waarbij te werk werd gegaan als in trap 6, werd 0,8 kg van de verbinding volgens formule 10' verkregen, smelt-35 punt 180°C, /"V7?5 = +0,2° (o . 1 in MeOH), Kfc = 0,755 8005121 - 25 - B, 2 ~ 0,80.

Trap 11: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-FH-NH-Z (formule 11').

Uitgaande van 1,0 g (3,5 mmol) Boc-Tyr-ΟΞ en 1,65 g (3,4 mmol) H-ala-Phe-Gly-FH-FE-Z.HCl (formule 10'), waarbij 5 te werk werd gegaan ala in trap 5, werd 2,24 g van de verbin ding volgens formule 11’ verkregen (kristallisatie uit methanol-diisopropylether), smeltpunt 148°C, ZV? -(c = 1 in MeOH), EfA * 0,38.

Trap 12: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-FH-FHj (formule 12’)· 10 1,0 g (1,4 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-FH-NH-Z (formule 11') in 10 ml methanol werd bij kamertemperatuur in aanwezigheid van 0,27 g 10^'s Pd/C gehydrogeneerd. Door te werk te gaan volgens trap 4 werd 0,64 g van de verbinding volgens formule 12' verkregen, smeltpunt 148°C, = +26, 6° (c = 1 in 15 MeOH), RfB - 0,34; E-, 2 = 0,57-

Trap 13: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z (formule 131) *

Aan een oplossing van 1 g (1,75 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-FH-NHg (formule 12') in 15 mi watervrij dimethylformamide 20 werden 1,1 ml (4,38 mmol) 4^ chloorwaterstofzuur in watervrij tetrahydrofuran en 0,2 ml (1,93 mmol) n-butylnitrist na elkaar bij een temperatuur van -30°C toegevoegd. Fa roeren bij deze temperatuur gedurende 30 minuten werd 0,5 ml (4,38 mmol) F-methyl-morfoline toegevoegd, waarna een koude oplos-25 sing (-30°C) van 0,803 g (1,46 mmol) H-Tyr-Pro-Ser-M-NH-Z.ECl (formule 6') en 0,16 ml (1,A6 mmol) F-methyl-morfoline in 15 ml watervrij dimethylformamide werd toegevoegd. Het reactie-mengsel liet men 2 dagen bij -9°C reageren, waarna de zouten werden afgefiltreerd, het oplosmiddel onder vacuum verwijderd 30 en het produkt in 10$'s citroenzuuroplossing, tot 0°C gekoeld, werd uitgegoten. Het neerslag werd gefiltreerd, met water neutraal gewassen en in vacuum gedroogd. Het produkt werd uit ethylacetaat-diëthylether herkristalliseerd, waarbij 1,15 g van de verbinding volgens formule 13' werd verkregen, smelt-35 punt 140-150°C, - -20,3° (o . 1 in MeOE), BfB = 0,17, 8005121 - 26 -

Rfc = 0,92.

Trap 14: H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-HE-UH-Z.HCl (formule 14').

Uitgaande van 1,0 g (0,95 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-5 Pro-Ser-HH-HH-Z (formule 15’)» waarbij te werk werd gegaan zoals in trap 2, werd 0,89 g van de verbinding volgens formule 14’ uit ethylacetaat verkregen, smeltpunt 170°C (ontleding) fajV = -1,8° (c = 1 in Me OH), Z~a-7p5 = +1>°° (o - 1 in AcOH), Efc » 0,69} E1 2 - 0,50.

10 Voorbeeld 711

Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-HH-HH-Z.HCl (formule 18')·

Trap 1: Boc-Tyr-UÏÏ-HH-Z (formule 15')·

Aan een oplossing van 1,0 g (3»55 mmol) Boc-Tyr-OÏÏ in 20 ml watervrij tetrahydrofuran werden 0,4 ml (3,55 mmol) 15 H-methylmorfoline en 0,48 ml (3,55 mmol) isobutylchloorformi-aat na elkaar "bij een temperatuur van -12°C toegevoegd. Ha gedurende 2 minuten roeren Bij deze temperatuur werd een koude oplossing van 0,72 g (3»55 mmol) ^H-UH-Z.HCl en 0,4 ml H-methylmorfoline in 20 ml dimethylformamide toegevoegd. Het 20 reactiemengsel werd 90 minuten Bij -10°C geroerd, waarna de zouten werden afgefiltreerd en in vacuum werden ingedampt.

Het residu werd in ethylacetaat opgelost en meerdere malen achter elkaar met een waterige oplossing van 1 M citroenzuur, 1U HaHCO^ en verzadigde UaCl gewassen.

25 Be organische laag werd met watervrij HajSO^ gedroogd en na verwijdering van het oplosmiddel werd 1,3 g van de verbinding volgens formule 15' verkregen, smeltpunt 68-70°C, Γο-Jf - -5,85° (c = 2 in MeOH), Rf^ - 0,76.

Trap 2: H-Tyr-HH-NH-Z.HCl (formule 16'), 30 1,0 g (2,33 mmol) Boc-Tyr-HH-UH-Z (formule 15') werd in 10 ml van een 4 n oplossing van chloorwaterstofzuur in watervrij tetrahydrofuran Bij kamertemperatuur opgelost. Ha 30 minuten Bij kamertemperatuur werd het oplosmiddel onder vacuum verwijderd en het produkt uit isopropylalcohol-diëthylether 35 neergeslagen. Er werd 0,76 g van de verbinding volgens formule 8005121 - 27 - 16» verkregen, smeltpunt 103-105°C, ZX7S5 = +48,8° (c ='1 in MeOH), Rfc * O,70; 2 = 0,92.

Trap 3« Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH-M-Z (formule 17')·

Aan een oplossing van 1,0 g (1,75 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-5 Gly-NH-ïJïïg (formule 12') in 15 ml watervrij dimethylformamide werden 1,1 ml (4»38 mmol) 4Π chloorwaterstofzuur in watervrij tetrahydrofuran en 0,2 ml (1,93 mmol) n-butylnitriet na elkaar bij een temperatuur van -30°C toegevoegd, Ha gedurende 30 minuten roeren bij deze temperatuur werden 0,*5 ml (4,38 mmol) 10 U-methylmorfoline en daarna een koude oplossing (-30°G) van 0,555 g (1,46 mmol) H-Tyr-HH-NH-Z.ECl (formule 16') en 0,16 ml (1,46 mmol) H-methylmorfoline in 15 ml watervrij dimethylformamide toegevoegd. Het reactiemengsel liet men 3 dagen lang bij -9°C reageren, waarna de zouten werden afgefiltreerd en 15 het oplosmiddel onder vacuum werd verwijderd. Het produkt werd in een tot 0°C afgekoelde 10^’s waterige citroenzuurop-lossing geschonken. Het neerslag werd gefiltreerd, met water gewassen tot het neutraal was en in vacuum gedroogd.

Het produkt werd uit isopropylalcohol-diëthylether her-20 kristalliseerd. Sr werd 0,85 g van de verbinding volgens formule 17' verkregen, smeltpunt 137-150°C, = +3>8° (c =* 1 in MeOH), Rf^ * 0,27, Efj = 0,52,

Trap 4: H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH-HH-Z.HCl (formule 18'). Uitgaande van 1,0 g (1,15 mmol) Eoc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-25 M-HH-Z (formule 17')> waarbij te werk werd gegaan zoals in

trap 2, werd 0,83 g van de verbinding volgens formule 18' uit ethylacetaat verkregen, smeltpunt 190-192°C (ontleding), fajV = +19,9° (o - 1 in MeOH), Rfc = 0,81? E1 2 = 0,59. Voorbeeld VIII

30 Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-UH-iiH-Z.HCl (formule 19’)*

Uitgaande van 1,0 g (1,60 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-UH-Z (formule 11')» waarbij te werk werd gegaan zoals in trap 8 van voorbeeld VI, werden 0,70 g van de verbinding volgens formule 19’ uit ethylacetaat verkregen, smeltpunt 215°0, 35 - +33° (o - 1 in MeOH), Ef0 - 0,70; E * 0,62.

8005121 - 28 -

Voorbeeld IX

Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-CO-CHg-CHg-CH^.Hül (formule 21').

Trap 1: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-CO-CH^CH^GH^ (for-5 mule 20').

Uitgaande van 0,12 ml (1,3 mmol) boterzuur en 0,742 g (1,3 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NHg (formule 12'), waarbij te werk werd gegaan, zoals in trap 1 van voorbeeld VI, werden 0,8 g van de verbinding volgens formule 20' uit ethylacetaat 10 verkregen, smeltpunt 125°C (ontleding), * +18»3° (c * 1 in MeOH), Rfj = 0,37.

Trap 2ï E-Tyr-ala-Phe-Gly-UH-ïïH-CO-CHg-CHg-CH^.HCl. Uitgaande van 1,0 g (1,46 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-MH-NH-CO-Gïïj-Cïïj-GH^ (formule 20') waarbij te werk werd gegaan 15 zoals in trap 2 van voorbeeld VI, werden na reiniging door kolomchromatografie over silicagel en elueren met chloroform-methanol = 9s1 0,58 g van de verbinding volgens formule 21' uit isopropylalcohol-diëthylether verkregen, smeltpunt 215-218°C (ontleding), s +40,1° (c = 1 in MeOH), Rfc » 20 0,67, RfD - 0,84; E1j2 = 0,75.

Voorbeeld X

Bereiding van H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH- ·- _ {D) -C0-gn-CH2-^(^J^-0iI. 2 HC1 (H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-ty r-H. 2HC1 (formule 23').

25 Trap 1: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-tyr-Boc (formule 22').

Uitgaande van 1,0 g (3,55 mmol) Eoc-tyr-OH en 2,03 g (3,55 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-KH-NHg (formule 12'), waarbij te werk werd gegaan zoals in trap 1 van voorbeeld VI, werden 2,3 g van de verbinding volgens formule 22' uit ethylacetaat 30 verkregen, smeltpunt 145-150°C, / = +14,8° (c = 1 in

MeOH), RfA - 0,26, RfB * 0,39·

Trap 2: H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Tyr-E.2HC1 (formule 23'). Uitgaande van 1,0 g (1,2 mmol) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-tyr-Boc (formule 22'), waarbij te werk werd gegaan zoals in 8005121 - 29 - trap 2 van voorbeeld I, werden 0,760 g van de verbinding volgens formule 23’ uit diëthylether verkregen. Smeltpunt 210-215°C (ontleding), = +13,5° (c = 1 in Me OH), RfQ = 0,48; E. 0 * 0,84.

5 > —

Tolgens het klassieke oplossingsproces werden ook de volgende verdere derivaten gesynthetiseerd.

(20) H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NHg.2 HC1, smeltpunt 190-195°C (ontleding) (diëthylether); Rf^ 0,50; E1 2 1,09.

(21) H-Tyr-ala-Phe-Sar-NH-NH0.2 HC1, smeltpunt 193-197°C

1 o * (ontleding) (tetrahydrofuran); Rf^ 0,47; E1 2 1,12.

(22) E-Tyr-ala-Phe-Sar-IïH-IïH-Z.HC1, smeltpunt 150-155°C (ontleding) (ethylacetaat); Rf^ 0,70} E^ 2 0,59.

(23) Boc-Tyr-ala-Phe-Sar-NE-NH2, smeltpunt 110—115°G (ontleding) (ethylacetaat-diëthylether); Rf-, 0,32; E- 0 0,57.

(24) Boc-Tyr-ala-Phe-Phe-HH-NHj, smeltpunt 180-183°C (ontleding) (ethylacetaat)5 Rf^ 0,54; 3^ 2 0,49.

(25) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-NHg.HCl, smeltpunt circa 200°C (ontleding) (ethylacetaat); Rf^ 0,58; E1 2 0,59.

2 (26) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr (Bzl)-Pro-NH2.HCl, smeltpunt circa 180°C (ontleding) (diëthylether); Rf-, 0,63; E. „ 0,53«

^ ^ Q

(27) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-NHg, smeltpunt 170-175 C (ontleding) (diisopropylether); Rf^ 0,24.

(28) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-?ro-NH2, smeltpunt 143°C

^ (diëthylether); Rf^ 0,47.

(29) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Ser-lTHg.CF^COOH, smeltpunt 150-153°C

(ontleding) (diëthylether); Rfc 0,59; E1 2 0,57.

(30) 3oc-Tyr-ala-Phe«Gly-Tyr-Ser-NE2, smeltpunt circa 110°C

(ontleding) (ethylacetaat); Rf_ 0,15; Hf-, 0,83.

o υ

(31) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH2.HClt smeltpunt 210-220°C

30 (ontleding) (isopropylalkohol-diëthylether); Rfc 0,44;

RfD 0,66; E1j2 0,51.

(32) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-Hyp-Ser(Bzl)-NH2.HGl, smeltpunt 175”180°C (ontleding) (methylalkohol-diëthylether)5 Rf0 0,675 E1j2 0,44.

8005121 - 31 - (46) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Trp-Pro-Ser-NEgj smeltpunt 175-180°C (ontleding) (methylalkohol-ethylacetaat); Rf^ 0,12;

Rfc 0,81; Hf 0,86.

(47) H-Tyr-ala-Fhe-Phe-Tyr-Pro-Ser-NHg.HCl, smeltpunt 195— ^ 200°C (ontleding (diëthylether); Rf^ 0,66; Rf^ 0,82; S1 2 0,50.

(48) H-Tyr-ala-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH2.HCl, smeltpunt 160-180°C (ontleding) (ethylalkohol-diëthylether);

Rfc 0,72} RfD 0,90} E1 2 0,46.

(49) Boc-Tyr-ala-Phe-Phe-Tyr-Pro-Ser-NHj, smeltpunt 140-145°C (diethylether); Rf^ 0,18; Rfc = 0,88.

(50) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Leu-NHg.HCl, smeltpunt 143-147°C

(isopropylalkohol-diëthylether); + 8,1° (c 1>

MeOH), Rfc 0,735 E1 2 0,62.

(51) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Met-ÜHg.ECl, smeltpunt 220-225°C (isopropylalkohol-diisopropylether); £+ 13,5° (0 1, MeOH); B£Q 0,68; E1 2 0,63.

(52) H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NHg.HCl, smeltpunt 195-200°C (ontleding) (diëthylether); Rf^ 0,49» E^. 2 0,49» 20 ZT\7j3 + 18.0° (0 1, H»0H).

(53) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Gly-Pro-Ser-ïfé^.HCl, smeltpunt 180°C

(ontleding) (diëthylether)5 0 (c 1, MeOH);

Hfg 0,32; E^ 2 0,58· (54) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Fro-Ser-NEMe.HCl, smeltpunt 240°0 (ontleding) (diëthylether); 0 (0 1, MeOE); 25 Rfc 0,55? E 0,52.

(55) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-PrOfSer-NEET,HC1, smeltpunt 235°C

' 0 A λ (ontleding) (diëthylether)5 - 3,54 (c 1, MeOH);

Rfc 0,62; E1 2 0,52.

(56) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Fro-Ser-OMe.HCl, smeltpunt 240°C

^ (ontleding) (diëthylether); “4,5° (0 1, MeOH);

Rfc 0,66; E1 2 0,55.

(57) H-Tyr-met-Phe-Gly-NEHHZ.HCl, smeltpunt 140-143°C (CÏÏCl^/diëthylether); /“ajjj8 - 21,6° (ο 1, DMT); afC E1,2 °»54.

V J 9 @005121 - 32-- (53) H-Tyr-met (O) -Phe-Gly-HHNEZ.HC1, smeltpunt 11-5-120°C (CECl^/diëthylether); c«Jl - 23,2° (c 1, DMF);

Hfc 0,69; E1>2 0,53.

(59) H-Tyr-ala-Phe-Gly-HEHHLrl.SCl, smeltpunt 191-198°C

5 (ontleding) (isopropylalkohol-diëthylether); + 46,0° (c 1, MeOH); Efc 0,84; E1 g 0,41.

(60) H-Tyr-ala-Phe-Gly-HEHEBnl.HCl, smeltpunt 254-258°G (ontleding) (CH^OH/CHCl^/ethylacetaat); /“aj^6 + 41,4° (c 1, MeOH); Efc 0,79? E1>2 0,63.

10 (61) H-Tyr-ala-Fhe-Gly-HEHEAdoc. smeltpunt 142-144°C (ontleding) (isopropylalkohol/diëthylether); + 20,7° (c 1, MeOH); Bfc 0,78; E1 2 0,47- (62) H-Tyr-ala-Pke-Gly-lIHMBoc j smeltpunt 154°C (ontleding) (diëthylether); Hfc 0,79? S1>2 0,60; + 27,9° 15 (c, 1, MeOH).

(63) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Pro-NH2.HC1; (64) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Ser-NHg.HCl; (65) H-Tyr-ala-Phe-Gly-tyr-NHg.HCl; (66) H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr. 1TH2.HC15 20 (67) H-Tyr-met-Phe-Gly-Tyr-NHg.HCl; s (68) H-Tyr-met-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-Mg.HCl? (69) H-Tyr-ala-Phe-Pro-Tyr-Pro-Ser-Mg.HCl; (70) H-Tyr-ala-Phe-MePhe-Tyr-Pro-Ser-HHg.HCl; (71) H-Tyr-ala-Phe-MePhe-Tyr-Pro-Ser-OMe.HCl? 25 (72) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Ppa-Ser-HHg.HCli (73) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Aze-Ser-JTH^HGl; (74) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Tia-Ser-HH2.HC1; (75) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr- APr-ser-NHg.HCl; (76) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe(H02)-Pro-Ser-HH2.HC1; 30 (77) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-A'bu-UHg.HCli (78) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Gly-NHg.HCl; (79) H-Tyr-ala-?he-Gly-Tyr(Bzl)-Pro-Ser(Bzl)-NH2.HCl; (80) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser(Bzl)-NHg.E®1; (81) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-HH-Ad,HC1; 35 (82) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-OH.HCl; 8005121 - 33 - (83) E-Tyr-ala-Fhe-Gly-Tyr-M-CHgCF^.HCl} (84) E-Tyr-met-Phe-Gly-MNEj.ECl; (85) H-Tyr-ala-Phe-Gly-tyr-HEHHZ.HCl* (86) Ξ-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-ΝΕΝΞΖ.EC15

5 (87) E-Tyr-ala-Phe-Sar-SH-NH-Z.HCl* smeltpunt 150-155°G

(ontleding) (ethylacetaat); Rf^ = 0,70; (88) Boc-Tyr-ala-Phe-Sar-M-NE-Z5 (89) E-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NE-EE-Z.HC1; (90) Boc-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NE-NE-Z; 10 (91) E-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NE-NH-Boc.EClj (92) Tfa-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NE-NE-Boc; (93) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-M-EH-Ph.HC1; (94) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-BH-NE-Phj ( 95 ) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-M-NH-Boc. HC1; 15 (96) Tfa-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NE-M-Boc; (97) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH-NE-Adoc.SCIj (98) Tfa-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-BH-NE-Adoc j (99) E-Tyr-ala-?he-Gly-Tyr-HH-HH-Ad.EC15 (100) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NE-BH-Ad; 20 (id ) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NE-EE-CgE^; (102) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Pro-Ser-EE^; (103) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl) -Pro-Ser-NEg» (104) E-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-EE-NEj.

8005121

Claims

1, Verbinding met de algemene formule V X-Tyr-A-Phe-B-C-W waarin X waterstof, een beschermende groep voor een eindstan-dig ST-atoom, gekozen uit acylbeschermende groepen, aromati-5 sche urethaanbeschermende groepen, alkylbeschermende groepen, aralkylbeschermende groepen, alifatische urethaanbeschermende groepen of ook een rest van een natuurlijk L-aminozuur of een dipeptide van twee natuurlijke L-aminozuren, waarin de vrije aminogioep door één van de voornoemde beschermende 10 groepen voor een eindstandig H-atoom kan zijn vervangen, betekent, Y waterstof of een beschermende groep voor de fenolische hy-droxylgroep van tyrosine, gekozen uit tetrahydropyranyl, methyl, tert.butyl, trityl, benzyl, 2,4-dichloorbenzyl, 15 benzyloxycarbonyl, 2-broombenzyloxycarbonyl, tert.butyloxy- carbonyl of lager alkyl voorstelt;. A een D-aminozuurrest met een zijketen bestaande uit een lagere alkyl- en lagere dialkylgroep betekent; B een neutrale L-aminozuurrest, glycinerest of een N-methyl-20 ammoniumzuurrest is; C al of niet aanwezig is en wanneer deze aanwezig is, de rest van een aminozuur, waarbij het aminozuur een α-amino, een oc-imino, een β-imino- of een ïï-methylaminozuur hetzij met een L- of met D-configuratie is, met de voorwaarde, dat ze noch 25 basisch noch zuur zijn en dat in het geval van hydroxyamino- zuren de hydroxygroep vrij of door een van de onder Y genoemde beschermende groeien is beschermd of een di- of tripeptide-rest voorstelt, die uit de onder C genoemde aminozuren bestaat en 50 ff de betekenissen OH, OH, XHj, NHH, of KÏÏHHB' heeft, waar bij H eventueel een gesubstitueerde rechte of vertakte alkyl met 1-10 koolstofatomen, cycloalkyl met 1-10 koolstofatomen of aralkyl met 6-8 koolstofatomen, doelmatig fenyl, benzyl of $005121 - 35 - fenylethyl betekent en R' waterstof, een rechte of vertakte alkyl met 1-10 koolstofatomen, cycloalkyl of aralkyl met 6-8 koolstofatomen, alkenyl met 2-8 koolstofatomen, rechte, vertakte of cyclische alifatische acyl met 1-16 koolstofgroepen, 5 eventueel gesubstitueerd door hydroxy, amino, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of halogeen, aromatisch acyl, eventueel gesubstitueerd door hydroxy, amino, halogeen of alkoxy met 1-4 koolstofatomen; rechte, vertakte of cyclische alifatische urethanen met 3-11 koolstofatomen of aromatische urethanen 10 voorstelt alsmede de farmaceutisch aanvaardbare zouten daar van.

2. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat A een D-aminozuurrest uit de groep ala, val, ile, leu, pro, ser, thr, met, metsulfoxyde en S-ethylhomocysteine is, 15

3· Verbinding volgens conclusies 1-2, met het kenmerk, dat B de rest van een neutraal L-aminozuur uit de groep van a-aminofenylazijnzuur, Ala, Val, lie, Leu, Pro, Met, Ser, Thr, Phe, Tyr, Trp, Gly, Sar, L-IT-methylalanine en L-JT-methylfenyl-alanine is. 20

4· Verbinding volgens conclusies 1-3 waarin C al of niet aanwezig is en wanneer deze aanwezig is, de rest van een aminozuur uit de groep Gly, Ala, Val, normaal Valine, Leu, Ile, α-amino-H-boterzuur, Phg, Phe, Trp, Tyr, Ser, Thr, Homoserine, Met, Met-sulfoxyde, β-cyclohexylanaline en p-gesubstitueerde 25 Phe betekent, waarbij de substituent uit chloor, broom, fluor, amino en nitro wordt gekozen; of - van een a-iminozuur uit de groep pro-3-hydroxyproline, 4-hydroxyproline, pipecolinezuur, 2-azetidinecarbonzuur, 4-thiazolidinecarbonzuur en ^-proline voorstelt; of 30. van een β-aminozuur uit de groep β-alanine-, 3-fenyl-p- aminopropionzuur of β-aminoboterzuur betekent; of - van een ΙΓ-methylaminozuur uit de groep sar, JT-methylfenyl-alanine en H-methylalanine, die alle hetzij de L- of L-confi-guratie vertonen; of 35. van een dipeptide uit de groep dipeptiden afkomstig van de 8005121 -36- condensatie ran a-amino-, β-amino-, α-imino- of 2T-methy 1 aminozuur, als hoven gedefinieerd zijn, met de voorwaarde, dat de heide aminozuren niet dezelfde zijn* of van een tripeptide uit de groep tripeptiden J-L-M, waarin J Tyr, Phe, Phg, hexa-5 hydro-Phe, Gly, Tal, p-gesuhstitueerd Phe is, waarbij de sub- stituenten kunnen worden gekozen uit de groep chloor, broom, fluor, amino en nitro, L Tal, Leu, lie, Gly, Ala, JTva, Sar, MePhe, MeAla of een β-amino- of a-iminozuur betekent, zoals boven gedefinieerd en M Ser, HSe, Thr, Abu of Gly is, onder 10 voorwaarde dat J een andere betekenis als L en L een andere betekenis als M heeft.

5» Farmaceutisch preparaat, dat als actief bestanddeel een verbinding volgens formule 1, als beschreven in conclusies 1-4 bezit, tezamen met een geschikt verdunningsmiddel of 15 geschikte drager. t 8005121