HU186749B

HU186749B - Process for preparing new, biologically active peptides

Info

Publication number: HU186749B
Application number: HU802306A
Authority: HU
Inventors: Castiglione Roberto De; Fiorenzo Faoro; Giuseppe Perseo; Silvano Piani; Francesco Santangelo
Original assignee: Erba Farmitalia
Priority date: 1979-09-20
Filing date: 1980-09-19
Publication date: 1985-09-30
Also published as: FI73699C; DK149754C; FR2465713B1; FI802876A; DK394280A; DE3034897A1; NL8005121A; SE8006596L; US4350627A; IE50793B1; CH645342A5; FI73699B; SE448879B; YU240880A; AU6240380A; DK149754B; GB2070618B; IT8024755A0; IE801947L; IT1196916B

Description

A találmány tárgya eljárás új, biológiailag aktív peptidek és azok fiziológiailag elfogadható sóinak az előállítására. Az új peptidek az (1) általános képletnek

Y

I

X-Tyr-A-Phe-B-C-W (I) felelnek meg. Az (I) általános képletben

X jelentése hidrogénatom vagy terc-butoxi-karbonílcsoport,

Y jelentése hidrogénatom vagy benzilcsoport,

A jelentése D-Ala vagy' - amennyiben B = Gly és C vegyi kötés vagy Tyr-Pro-Ser tripeptid A jelentése D-Meí; vagy D-Mct(o) is lehet,

B jelentése Gly vagy — amennyiben C jelentése vegyi kötés, Tyr, Tyr(Bzl)-Pro-Ser vagy Tyr-Pro-Ser tripeptid B jelentése Sár, Phe, Pro, MePhe is lehet,

C jelentése vegyi kötés vagy Tyr-Pro-Ser vagy Tyr, D-Tyr, Ser, Pro, Leu, Met (Met(o), Tyr-Ser, TyrPro, Trp-Pro-Ser, Gly-Pro-Ser- Phe-Hyp-Ser, Phe (NOjj-Pro-Ser, Phe(F)-Pro-Ser, Phe-Pro-Ser, TyrGiy-Ser, Pha-Pro-Ser, Tyr-Val-Ser, Tyr-Hyp-Ser, Tyr-Ppa-Ser, Tyr-D-APr-Ser, Tyr-Tia-Scr, Tyr-APrSer, Tyr-Pro-Abu, Tyr-Pro-GIy, Cha-Pro-Ser, ProSer vagy Nva is lehet, adott esetben a Tyr vagy Ser csoport hidroxilcsoportja benzilcsoporttal védett,

W hidroxilcsoportot, aniinocsoportot, hidrazinocsoportot vagy -NHR, illetve -NHNHR' általános képletű csoportot jelent, ahol

R jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport, adamantilcsoport vagy 2,2,2-trifiuorctilcsoport és

R' jelentése benzoxikarbonil-, adamantil-oxikarbon.il-, terc-bufiloxikarbonil-, 2-5 szénatomos alkanoil-, lauroil-, benzoil-, D-liroziJ-, D-(N-terc-butik>xikarboníi)-tirozil vagy fenilcsoport.

Az alábbiakban az L-aminosavakat nagy kezdőbetűvel, a D-aminosavakat kis kezdőbetűvel jelöltük.

A találmány az (I) általános kcpletű vegyületek farmakológiaiíag elfogadható sóira, így trifluorecetsavval, hídrogénfluoriddal, ecetsavval, sósavval, hidrogénbromiddal képezett sóira is kiterjed.

Az (I) általános képletű peptideket vagy a peptidkémiában szokásos módszerek segítségével, vagy szilárd fázison, így polimerhordozón történő szintézissel állíthatjuk elő. Mindkét módszerre kiviteli példákat adunk.

A klasszikus megoldás lényegében védett aminosavak vagy peptidek rendre történő kondenzálásából áh. A kondenzációt úgy vezetjük, hogy a kapott peptidekben a kívánt 4-7 aminosav-csoport a kívánt sorrendben kapcsolódjék. A polipcptid-kémiában szokásos módon kondenzált aminosavakat és peptideket a peptid-kötcs kialakulásában részt nem vevő amino- és karboxil-csoportjaikban alkalmas védőcsoportokkal védjük.

A hidroxilezctt aminosavak hidroxi-csoportjai az egész szintézis alatt vagy csak néhány szintézis-lépesben alkalmas védőcsoportokkal védve lehetnek. A védöcsoportokat acidolízis, elszappanosítás vagy hidrogenolízis segítségével távolítjuk el.

Az aminocsoport megvédésére például az alábbi csoportok alkalmasak;

benziloxikarboml- (Z), terc-butiloxikarbonil- (Boc), tritil-, formil-, trifiuoracetil-, o-niirofenil-szulfenil-csoport.

A karboxilcsoportok megvédésére például metil-, etil-, teic-butil-, benzil-, p-nitrobenzil-csoporíot alkalma5 zunk.

A hidroxi-csoportok megvédésére alkalmas védőcsoportok az alábbiak;

acetil-, terc-butiloxikarbonil-, benziloxikarbonü-, 2-brómbenziloxikarbonil-, tetrahidropiranil-, terc-butil-,

Ifiül-, benzil-, 2,4-diklórbenzil-csoport.

A pcplid-kötést eredményező kondenzáció közben az egyik molekula aminocsoportja reagál egy másik molekula karboxil-csoportjával. Az aminosavat vagy pepiidet aktív acil-származék, így például vegyes anhidrid, azid vagy aktív észter alakjában vihetjük reakcióba, de lehetséges szabad aminosav és szabad karboxilcsoport kondenzáló szer, így dicikiohexil-karbodiimid jelenlé tében végzett kendenzálása is, amikoris valamilyen, a racemát-képződést gátló anyagot, például N-hidroxiszuk20 cinimid vagy 1-hidroxibenzotriazolt is adhatunk az elegyhez.

A kondenzálást oldószeres közegben, ig\4 dimetilformamidban, piridinben, acetonitrilben, tetrahidrofuránban végezhetjük.

A reakcióhőmérséklet -30 °C cs szobahőmérséklet közötti érték.

A reakcióidő 1 és 120 óra között ingadozik.

A reakció módját, a védőcsoportokat és a kondenzáló szert úgy választjuk meg, hogy racemát ne képződjék.

A védó’csoportokat a pclipeptíd-kémiában szokásos módszerek segítségével távolítjuk cl,

W szubsztituens helyén -OR csoportot hordozó peptidek előállításához például a megfelelő alkohollal észterezett C-terminális aminosavtól indulunk ki, W csoport35 ként hidroxlcsoportot hordozó peptideket, például a W csoportként -OR csoportot hordozó peptidek hidrolízisével állíthatunk elő. Az olyan peptidek, amelyekben W jelentése ~NH₂, -NHR vagy -NR₂. a megfelelő észterek ammonolízisével nyerhetők.

A szüárdfázisú szintézisben polimer hordozót alkalmazunk, Polimerként előnyösen sztirol és 5 -2 súíy% divinílbenzol kopoíimerjét alkalmazunk; a diviniibenzol hatására a polisztirol a legtöbb szerves oldószerben teljesen oldhatatlanná válik.

a szintézist a peptid terminális C-atomjánál kezdjük úgy, hogy a kívánt aminosavat valamilyen klórmctilezett gyantához, hidroximetilgyantábo?. vagy benzhidiilamlngyantához kapcsoljuk.

Az aminocsoportok és oldalláncok védőcsoportjai a

5θ klasszikus eljárás ismertetése során felsoroltak.

Az (I) általános képletű vegyületek előállításához az amiuocsoporíjában védett aminosavat például ceziumbikarhonát-kaializátor segítségével a klórmetilez.ett gyantához, vagy kondenzáló szer, így dicikiohexil-karbodiimid jelenlétében a hidroximetil- vagy benzhidrilamin-gyantához kapcsoljuk. Utána az aminocsoport védőcsopcrtját alkalmas vegyszerekkel (írifluorecetsav vagy sósav szerves oldószeres oldatával) szobahőin érsekle len eltávolítjuk. Ezt követően a védett aminosavakat lépésenként, a

6° kívánt sorrendben kondenzáljuk, így a kívánt pepiid keletkezik.

A védett aminosavakat általában háromszoros feleslegben, alkalmas karboxilesoport-aktiváló katalizátor, így dicikiohexil-karbodiimid jelenlétében, oldószeres közegS5

-2186 749 ben, például metilénklorid és dimetilformamid elegyében visszük reakcióba.

Miután a kívánt aminosav-sorrend létrejött, a pepiidet például fiuorhidrogénnel a hordozó gy antától elválasztjuk, A fluorhidrogén nemcsak a pepiidet oldja le a gyantáról, hanem az oldalláncok védőcsoportjainak nagy részét is lehasítja. Klórmetilezett vagy hídroximetilezett gyanta alkalmazása esetén a fluorhitírogénes kezelés a szabad peptidsavhoz (W = OH) vezet, míg benzhidrilamin-gyanta esetén a szabad peptidamid (W = NH₂) képződik. A klórmetilezett vagy hidroximetilezeít gyantáról a pepiidet ammóniával, alkil- vagy diaikilaminnal is leoidhatjuk. Az oldalláncban védett pepiidből így az oídalláncban védett amid vagy alkilamid (W = NH₂, —NHR) képződik. Az oldailánc védőcsoportját utána önmagában ismert módon eltávolíthatjuk.

A peptidsavak, illetve -amidok másrészt a megfelelő peptidészterek elszappanosítása vagy ammonolízise útján is kaphatók.

Hidrazido- vagy helyettesített hidrazido-származékokat a találmány értelmében az N-védett pepiid vagy aminosav és a megfelelően szubsztituált hidrazin, így benziikarbazát, terc-butilkarbazát, adamantil-karbazát, fenilhidrazin vagy adamantil-hidrazin kondenzáiásával állítunk elő, vagy pedig úgy, hogy az N-védett pepiidet vagy aminosav-hidrazidot alkalmas alkilezőszerrel, így benzilklórformiáttal, terc-hutiiklórformiáttal vagy/ adamantilfluorformiáttal reagáltatjuk.

Az alkalmazott jelölések a peptidkémiában szokásosak. A D-aminosavakat kis kezdőbetűkkel jelöltük, így például ala - D-AIa.

A példákban megadott Rf-értéke két 60 F_2S4 jelű szílikagél-lemezeken (Merck; rétegvastagság 0,25 mm, lemezhossz: 20 cm) az alábbi futtató elegyek alkalmazásával határoztuk meg:

A rendszer: benzol -erilaeetát-ecetsav-víz (10:10:2:1) (felső fázis),

B rendszer: benzol—etilacetáí—ecetsav—víz (100:100:40:15) (felső fázis),

C rendszer: n-butanol— ecetsav—víz (4:1:1),

D rendszer' kIoroform-mctanoI-32 %-os ammóniumhidroxid-oldat (65 ;45 :20),

E rendszer: kloroform-metanol (8:2).

A vékonyrétegkromatográfiai elemzést szobahőmérsékleten (20 °C ± 3 °C) végezzük, emiatt az Rf-értékek ±5 %-kal változhatnak. Az 1,2 pH mellett mért clektroforetikus mobolitást (glutaminsavra vonatkoztatva) Ej ₂jelöléssel adjuk meg. Az olvadáspontokat nyitott kapillárisban határozzuk meg, a kapott értéket nem korrigáltuk. A legtöbb (1) általános képletű vegyület olvadás előtt megpuhul és bomlik. A kristályosítás, kicsapás vagy eldörzsöiés során alkalmazott mindenkori oldószert zárójelben a vegyület után feltüntetjük.

A nagyfeszültségű papír clektroforézishez Pherograph Original Frankfurt 64 típusú készüléket használtunk, a Schleicher und Sebül! cég 2317 sz. elektrofcrézis-papírjával. Feszültség: 1600 V (40 V/cm); pH-éríe'k: 1,2 (haiigyasav/ecctsav/víz 123:100:777),

Az (I) általános képletű vegyületek állatkísérletekben értékes farmakológiai hatásokat mutatnak. Különösen a központi idegrendszerre hatnak mint fájdalomcsillapítók, antípszichotikumok és nsuroendokrinológiai hatóanyagok.

A találmány szerint előállítható peptidek perifériás opioid hatásait a tengerimalac kipreparált hosszanti csípőbéíizmán, továbbá az egér ondóvezetékén tanulmányoztuk.

A peptideknek az elektromosan stimulált simaizomzati készítményekre kifejtett hatásának kritériuma a rágásnak az a maximális gátlása volt, amelyet az anyaggal való érintkezés után 5 percen belül megfigyeltünk; minden egyes pepiiddel 3—5 kísérletet végeztünk, ín vitro tesztekben.

A tengerimalac csípőbelét (ileumát) Gyang és Kosterlitz (Agonist and antagoníst actions of morphine-like drugs on the guínea-pig isolated ileum, Br. J.Pharmac, Chemother., 27, 514-527. [19661) leírása szerint készítettük elő, és 15 ml térfogatú szervfürdőben függesztettük fel. A szöveteket a módosított Krebs-oidatban helyezőik el, amelyet Kosterliíz, Lydon és Watt (The effects of adrenaliné and isoprenaline on inhibitory a and β adrenoceptors in the longitudinal muscle of the guinea-pig ileum. Br. J. Pharmac.,39, 398-413 [1970]), írtak le, összetétele a következő (inillimólban): nátrium-kiorid 118, íkálinni-klorid. 4,75, kalcium-klorid 254, kálium-dihidrogén-foszfát 11,9, magnézium-szulfát 0,12, nátrium-hidrogén-karbonát 25, glukóz 11; tartalmaz továbbá hexametónium-kloridot (0,069 mM), és mepyram ne maíeátot (0,125 pM), telítve 95 % oxigént és 5 % széri-dioxidot tartalmazó gázkeverékkel. A fürdő hőrnérsékbtc 36 °C volt. A hosszanti izom rángásszerű összehúzódásait feszültségstvivő fejjel (DY 1, Basile, Milano) izonetrikusan rögzítőt(ük ésmikrodinamiméteren kijelezve jegyeztük (Basile, Milano). A szervfalon belüli idegeket 0,5 müliszekundiim időtartamú, derékszögű impulzusokkal stimuláltuk, amelyeket 10 másodperces időközikben adtunk, szupramaximálís feszültség alkalmazásával. A csípőbeiel általában 3—5 másodpercig érintkez*ettük az. opioid peptidekkel, amíg elértük a maximális gátlást.

λζ egér ondóvezetékét Hughes, Kosterlitz és Leslie (Effcct of morphíne on adrencrgic tiansmission in the mouse was deferens. Assessment of agonist and antagonist potencies of narcotic anlgesics. Br. J. Pbarniac.,53, 371-381. [1975]) leírása szerint készítettük elő. Egy, vagy — ritkábban - két pár vezetéket rögzítettünk 8 ml térfogatú szervfürdőben. A hosszanti összehúzódásokat úgyanúgy regisztráltuk, mint ahogyan ezt a tengerimalaccsípőbél esetében leírtuk. A szöveteket módosított Krebs-oidatban helyeztük el, ennek összetétele a következő volt (inillimólokbanj: nátrium-kiorid 118, káliumklóid 4,75, kalcium-klorid 2,54, káliuro-dihidrogénfos. fát 0,93, nátrium-hidrogén-karbonát 25, glukóz 11; tartalmazott továbbá aszkorbinsavat (0,1 mM) és nátríum-acetátot (0,027 mM), telítve 95 % oxigénből és 5 % szén-dioxidból álló gázkeverékkel. A fürdőhőmérséklet 36 °C volt. A szervfalon belüli idegeket 1 milliszekundm.i időtartamú, derékszögű impulzusok sorozatával stimuláltuk, ezeket 15 — 20 másodpesces intervallumokban adtuk, és egy-egy sorozat 6-7 stimulusbó! állt 100 miEiszekundum időközökkel. Az impulzusok áthaladtak a F néken elhelyezett platinatűn és egy vertikális irányú, plarinadrólból kiképzett gyűrűn (5 mm magas cs Í0 mm szé'es), amelyet a szervfürdő tetején rögzítettünk).

\ vizsgálati eredményeket az 1. táblázatban közöljük, ahol a l;-Tyr-aIa-Phie-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH₂ ’ CiNCOOll ludását 100-nak vettük, cs az analógok hatást,t moláris alapon,százalékban fejeztük ki.

A H-Tyr-a!a-Phe-Cly-Tyr-Pro-Ser-NH₂-CF₃COOH a különböző tesztekben a következő hatást mutatta: a i 86 74 >

tengerimalac csípőbelén: 3,3 nM (IC_S0); az egér ondóvezetékén 29 nM (1C_5O).

1. táblázat

Képlet	Tcngcri- malac csípó'bél	Egér ondó- vezetéke
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-ProSer-NIÍ₂ TFA	100	100
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-ProSer-NH-Me · HCI	80	90
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-P: 0Ser-NH-EPHCl	70-80	90
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro- Ser-NH-NH₂ · 2 HCI	80-90	70-80
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro- Ser-NH-NH-Z-HCl	120-160	150
H-Tyr-ala -Phe-Gly -Tyr-ProSer-OMe-HCl	80	90
H -Tyr -ala -Pl íe -Gly-Tyr -Pro Ser(Bzl)-NH₂ · HCI	70-90	270-300
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-ProGly-NH₂ - HCI	70-80	65-70
H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-HypSer-NH₂ · HCI	85-90	85-90
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-GlySer-NH₂ ’ TFA	30	12-15
H-Tyr-ala -Phe-Gly -Tyr(Bzl)-ProSer-NH^HCI		40-50
H-Tyr-ala -Phe -Gly-Phe -ProSer-NH₂ - HCI	40-50	50 55
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Trp-ProSer-NH₂ - HCI	50-60	50-60
H-Tyr-ala -Phe-Sar-Tyr-ProSer-NH₂ · HCI	110-140	110-120
11-Tyr-ala-Phe-Phe-Tyr-ProSer-NH₂ · HCI	25-30	25-30
H-Tyr-ala -Phe-Gly-Tyr(Bzl)Pro-Ser(Bzl)-NH₂ - HCI		250-500
H-Tyr-ala -Phe -Gly-Phe-Hy pSer-NH₂HC1	70-80	50
H-Tyr-ala -Phe -Gly-Tyr(Bzi)Hyp-Ser(Bzl)-NH₂ · HCI	12-18	300-1500
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-HypSer(Bzl)-NH₂ · HCI	70-80	80-85
H-Tyr-ala -Phe-Gly-Tyr-ProNH₂ · TFA	44-52	35-40
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bd)- Pro-NH₂ - TFA	2—4	40-60
Η -T yr -ala -Phe -Gly -Ser NH₂ · TFA	30-40	35-50
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH- Ad-HCl	3-6	35-40
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NHNH-Z-HC1	50-60	70-75
Η-Tyr -ala -Phe Oly -Tyr -NHNH-Ph · HCI	12-17	60-110
H-Tyr-ala-Phe-Gly-tyr-NH₂ - HCI	17-19	190-230

l. táblázat folytatása

Képlet	Tengeri- malac csípőbe!	Egér- ondó- vezetéke
11-Tyr-ala-Pre-Gly-LeuNH₂ - HCI	15-17	150-190
H-Tyr-ala -Phe-Gly-MetNH₂ · HCI	14-16	33-36
H-Tyr-ala-Phe-Gly-tyr-NH-NHZ HCI	8-12	25-32
H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NH- NH-Z-HC1	55-70	80-150
11-Tyr-ala-Phe-Gly-TyrNH₂-TFA	40-45	54-62

A központi idegrendszerre kifejtett fájdalomcsillapító látást in '/ivó határoztuk meg patkányon (farokelhúzási ítail ílickj és forrólemez próbák) intracerebroveníriculais (agykamrába történő adagolással. A hatást 2—3 dódsszintcn mertük, cs minden csoport 5 patkányból állt.

240—260 g testsúlyú hím Wístar patkányokat használunk. A deimophint és a rokon vegyületeket agykamiába ’ecskendeztiik Chermat és Simon (Injection intraventrizulaire cérebrale chez le rat anesthésié. J. Pharmac. /ParisJ 6, 489- 492. [1975]) leírása szerint, 10 μΐ térfogatban. A farokelhúzási (tail flick) próbában (D’Amour és Smith, A method os evaluating analgesic activity in he rat. J. Pharmac. exp. Tiiei. 72, 74—79 [1941]) a sugárzó hő hatásának kitett farok elhúzásának íatenciadejét automatikusan mértük 0,1 másodperc pontossággal. Az egyes kísérletekben 10 állatból átló csoportokat nasználíunk. Az állatoknak a sugárzó hővel és a forró emezzel szemben megnyilvánuló reakcióidejét a befecskendezés előtt 30 és 15 perccel, majd ezt követően a be♦eeskendezés utáni első órában minden 15 percben, és az azt követő 3 órában minden 30 percben megmértük. Az ED₅₀ értékeket ás a 95 %-os megbízhatósági határokat így számítoltuk ki, ahogyan ezt egerek esetében leírták.

A H-Tyr-ala-Phe-Gly-lyr-Pro-Ser-NHi-CFjCOOH haásáí (00-nak vettük, ennek a vegyikéinek a hatása; a következők voltak: a fonólemez próbában: 13,3 pmól/ naíkány (ED₅₀); a farokelhúzási próbában: 23 pmól/ patkány (ED50). Az eredményeket a 2. táblázatban közöljük.

2. táblázat

Patkány (agykamrába történő be fecske;; d ezéssel)

Képlet _______

Forró- Faroklemez elhúzási próba próba

H-Tyr-ab -Phe-Gly -Tyr-ProSer-NH₂TFA 100 100

H -Tyr -a 1 a -Pb e -G! y -Ty r-Pro Ser-NIl-Me-HCl 30 1

11-Tyr-ala-Phe-Glv-Tyr-ProSer-NH-Et · ÍÍCi 5 1

-4186 749

Képlet	Patkány (agykamrába történő befecskendezéssel)
Forró- iemez próba	Farok- eiiiúzási próba
H -Tyr-ala -Phe -Gly -Tvr-Pro Ser-NH-NH₂ · 2 HC1	70-80	7-15
H-Tyr-ala-Phe-Giy-Tyr-ProSer-NH-NH-Z· HCl	120	25-30
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro- Ser(Bzl)-NH₂ · HC1	20	8
H -Tyr -ala -Phe -Gly -Tyr -ProGly-NH₂ - HCl	20	8
H-Ty i -ala-Phe -Gly -Tyr -Hy pSer-NH₂ · HCl	90-110	70-80
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Val- Ser-NH₂-TFA	5
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Gly- Ser-NHj-TFA	10
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Pro- Sei-NH₂ · HCl	70	10-20
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Trp-Pro- Ser-NH₂ “HCl	30	3-5
H-Tyr-ala -Phe-Sar-Tyr-ProSer-NH₂ · HCl	100	70
H-Tyr-ala-Phe-Phe-Tyr-ProSer-NH₂ “HCl	10
H-Tyr-ala -Phe-Gly-Phe-HypSer-NH₂ · HCl	70	5
H-Tyr-ala-Phe-Giy-Tyr(Bzl)Hyp-Ser(Bzi)-NH₂ · HCl	10
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp- Ser(özl)-NH₂ ’ HCl	55	-
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro- NH₂“TFA	25	14
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)Pro-NH₂«TEA	2
H-Tyr-ala-Piie-Gly-Tyr-SerNH₂-TFA	8	1
H-Tyr-ala-Phe-GIy-TyrNH₂ · TFA.	27	12
H-Tyr-ala-Phe-GIy-TyrNHNH₂ “ 2 HCl	20-30	_
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr- NHNHZ-HCÍ	20-40	12
H -Ty r -ala -Phe -Gly-tyrNH₂ - HCl	6	1,5
H-Tyr-ala-Phe-Gly-LeuNH₂»HCl	0,5
H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NHNH-Z-HCl	20-40	14
H-Tyr-a!a-Phe-Gly-NH₂ · HCl	22	12
H-Tyr-ala -Phe-Gly-OH	6	—
H-Tyr-ala-Phe-Gly-NIH- NIV2HCI	12
H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH- Z-HCI	8	2

A találmány szerinti peptidek további hatásait patkányokban vizsgáltuk in vivő módszerekkel, az antinoci-^;ceptív (a fájdalom megérzését gátló), prolaktin-felszabadító és a gyomor-bélrendszer mozgékonyságát gátló, hatékonyság kiértékelése céljából.

A peptideket 1 :2 arányú víz-etanol elegyben oldottuk, és a vizsgálatokat hím Sprague—Dawley patkányokon végezzük 4 mg/kg szubkután úton adagolt screen (szűrővizsgálati) dózissal (dózisonként körülbelül 10 állattal végeztük a vizsgálatokat). (Haffner, Deutsch. Med. Worschr.,55, 731 [1929]).

Az antinociceptív hatékonyság kiértékelése céljából az altatókat a vegyülelekkel, illetve a vivőanyaggal kezeltük 60 perccel a farok alsó részének becsípése előtt. Az

állatot akkor tekintettük a kezelés által védettnek (a fájdalommal szemben), ha a nociceptív ingerre való válasza 30 másodperccel később következett be („cut-off” idő). Meghatároztuk az ED_SO értéket olyan peptidek esetében, amelyek a 4 mg/kg szűrővizsgálati dózis alkalmazásakor hatásosak voltak.
3. táblázat
A farokbecsípcsre adott válasz gátlása beadás után 60 perccel (EDjo mg/kg)
Képiét		^Εθ50
11 -Ty r-ala -Pb e-Gly -Ty i -Pro-Ser -Ν 11₂		1,2
H-Tyr-ala-Plie-GIy-Tyr-Pro-Ser-NHMe		2
H -Tyr-ala -Phe - Gly - Ty r-Hy p-Ser-N H₂		0,7
H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Gly-Ser-NH₂		4
H-Tjr-ala-Pbe-Gly-Phe-Pro-Ser-NH₂		4
H-Tyr-aia-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH₂		2,5
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp-Ser-NH₂		0,8
H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr(Bzl)-Hyp-Ser(Bzl)-NH₂	4

A prolaktin-felszabadulásra gyakorolt hatás kiértékelése céljából az állatokat a vegyületek beadagolása után 30 perccel (E. L. fjen és munkatársai: Life Sciences, 19, 837 [1976]).

. A szérum-prolaktii! szinteket standard RIA eljárással határoztuk meg, N1AMDD reagensek felhasználásával (Niswender, Chen, Mídgley, Mettes, Pilis; Proc. Soc. Éxp. Bioi. Med., J30, 793 [1969]). Az eredményeket a kontrolláltatok protaktin-felszabadulását meghaladó prolakt'n százalékos értékében fejeztük ki. Az erős antinociceplív hatású vegyületek esetében a vizsgálatot alacsonyabb dózisszinten (0,5 mg/kg) végeztük. Az eredményeket a 4. táblázatban összegeztük.

-5186 749

4. táblázat

A prolaktin-szintek beadás után 30 perccel

----;-...----.......-. 5

Képlet	%-os növekedés a kontiollokkal szemben
H-Tyr-aIa-Phe-GIy-Tyr-Pro-Ser-NII₂	214^x
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHMe	342
H-Tyr -ala -Phe -Gly -Tyr-Pro-Ser -NHEt	107
H-Tyr-ala-Phe-Gly Tyr-Pro-Ser-NHNHZ	. 133
H-Tyr-ala-Phe Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH₂	404*
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Pro-Ser-NH₂	360
H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH₂	342
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp-Ser-NH₂	185*

- —- _2θ ^xNagyhatású vegyület.

Végül néhány vizsgálatot végeztünk a gyomor-bélrendszer mozgékonyságára gyakorolt gátló hatás kiérté- 25 kelése céljából, a „csontszéneíetési próba” alkalmazásával.

Az állatok gyomorszondán át 10 vegyes %-os csontszén-szuszpcnziót adtunk 5 vegyes %-os gnmiarabikum oldatban. A patkányoknak 1 ml ilyen szuszpenziót 30 adtunk, a peptid szubkután beadása után 40 perccel. Minden egyes kísérletben kontrollállatokai alkalmaztunk, ezeknek fiziológiás konyhasó-oldatot adtunk. 20 perc elteltével az állatokat lefejeztük, és az egész vékonybelet eltávolítottuk. A vékonybelet teljes hosszában pa- 35 pírra terítettük, és azt a távolságot, amennyire a csontszén haladt, a gyomor záróizmától, a vékonybél teljes hosszúságának százalékos értékében fejeztük ki; a vékonybél és vakbél találkozási pontja közötti távolságot tekintettük. 40

Az eredményeket százalékos gátlási értékekben fejeztük ki a kontóitokkal szemben, és az 5. táblázatban foglaltuk össze.

5. táblázat

Az etetett csontszén bélben való áthaladásának gátlása beadás után 60 perccel 50

Képlet	kontroli- értékek %-a	55
11 -Tyr-ala-Phc-Gly-Tyr-Pro-Ser-Níh	39
H-Tyr-ala-Phe -Gly -Tyr-Pro -Scr-N i 1 Me	2b
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHEt	22	60
H-Tyr-ala-Phe-Gíy-Tyr-Pto-Ser-NHNHj	24
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NIINHZ	34
H-Ty r-ala -Phe -Gly -Tyr -Hy p-Ssr -N H₂	41
H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Gly-Ser-N H₂	39
H-Tyr-ala-Phe-Gív -I’he -Pro -Ser -NH ₂	34	65

Képlet	A kontroli- értékek
H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH₂	16
H-Ty r-ala-Phe-Phe-Ty r-Pro-Ser-NH 2	22
H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr(BzI)-Pro-Ser(BzI)-NH₂	17
H-Tyr-ala-Phe-GIy-Phe-Hyp-Ser-NH₂	34
Il-Tyr-ala-Phe.-Gly-Tyr(Bzl)-Hyp-Ser(Bzl)-NH;	í 22
II-Tyr-ala-Phe-GIy-Phe-Hyp-Ser(Bzl)-NH₂	18

A lerapcutikus alkalmazás céljából az (Ϊ) általános képletű vegyületek farmakológiailag elfogadható sóit alkalmazzuk megfelelő hordozó és hígító anyagokkal.

Az alábbi (1) általános képletű vegyületek különösen előnyösek:

H-Tyr-ala-Phe-GIy-OMe (XVI);

H-Tyr-ala-Phe-Gly-OH (XVII);

H-Tyr-ala-Phe-GIy-NHj (XIX);

H-Tyr-ala-Phe-Glv-NH-NH₂ -2 HCi);

H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z· NC1 (XIX’);

H-Tvr-ala-PIte-Gly-NH-NH-CO-CHj -CH₂CH₃ · HCI (XXI’); H-Tyr-ala-Phe-Gly-NIINHLrl · HCI; H-Tyr-ala-Phe-Gly-NHNHBn 1 · HCI; Il-Tyr-ala-Phe-Giy-NHNíIAdoc; H-Tyr-ala-Phe-GIv-NHNHBoc;

Boc-Tyi -ala-Phe-GSy-NH-NH-CO-CH₂-CH₂-CH (XX⁵); Boc-Tyr-ala-Phe-Cly-NH-NH-Z (IX)’ (XT’); Boc-Tyr-ala-Plie-GIy-Níi-Nllj fX) - (XII’);

H-Tyr -meí-Phe -Gly -NHNHZ · HCI; H-Tyr-meí(O)-Phs-G!v-NHNHZ ’ HCI;

H-Tyr-met-Phe-Gly-NUNÍl, · 2 HCI;

H-Tyr-mci(O)-Pbc-GIv-NHNH₂;

B-Tyr-ala-Phe-Phe-NH-NH-Z;

H-Tvr-ak-Phe-Phe-NH-Nilj; Boc-Tyr-ala-Phe-Phe-NH-NH-Z;

Boc-Tys -ala-Phe Phe-NH-NH₂;

H-Tyr-aía-Phe-Sar-NH-NH₂·2 HCI; H-Tyr-ala-Phe-Sar-NH-NH-Z*HCl; Boc-Tyr-a!a-Phe-Sar-Nií-NH₂; Boc-Tyr-a!a-Phe-Sar-NH-NH-Z; H-Tyr-ala-rhe-Gly-Tyr-NH₂.· CF₃ GOGH (XV); Boc-Tyr-a1a-Phe-Gly-Tyr-NH₂ (XIV); H-Tyr-íila-Phe-GIy-Tyr-NH Ad · HCI;

H-Tyr-aia-Phe-Gly-Tyr-NH-CH₂ CF₃ · HCI; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NHNH-Z’ HCI fXVIH⁵);

H Tyr-ala-Phe-Gly -Tyr-NH-NH₂;

Soc-Tyr-ala-Phe-G!y-Tyi -NH-NH-Z (XVII’);

i-Tyt-aia-Pbe-GIy-Tyr-NH-NH-Ce H₅; H-Tyr-aIa-Phe-Gly-NH-NH-tyr-H*2 HCI (XXIII⁵); Boc-Tyr-ala-Phe-GIy-NH NH-tyr-Boc (XXII); H-Tyr-ala-Phe-Gly-tyi-NH₂ · HCI; H-Tyr-a'a-Phe-GIy-tyr-NUNHZ’HCI;

11-Tyr-tiia-Phe-GIy-Pro-NJ s₂ - ί ÍGl; íl-Tyr-ala-Phc-Gly-Scí-N! 1₂ HCI;

H-Tyr-afa-Phc-GIy-kni-Nílj - HCi; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Leú-NH-NH-Z;

H-Tyr-ala-Phe-Gly-Leu-NH-NH₂;

H-Tyr-ala-Phe-GIy-Met-NHj · HCI;

⁷1 -Tyr-ala Phe -Gly -Me t{ O)-NH₂;

: 1 -Ty r -al a -Phe -Gly -N va -ΝI i₂;

-6186 749

H -Tyr -me t -Phe -Gly -Ty r -N 1I₂ · HCl;

H-Tyr-met-Phe-Gly-Pio-NH₂;

H-Tyr-met-Phe-Gly-Nva-NH₂;

H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NH₂ - HCl;

H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NHNHZ· HCl:

H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NHNH₂;

H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Pro-NH₂ ° HCl;

H Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-Pro-NH₂ · HCl; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-NH₂; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-(Bz!)-Pro-NH₂;

H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Ser-NH₂ · CF₃COOH; Boc-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Pro-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH₂ · CF₃COOH (XIII); H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH₂;' ' H-Tyr-aia-Phe-Gly-Tyi(Bzl)-Pro-Ser(Bz!TNH₂ »HCl; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser(Bzl)-NH₂ · HCl; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH₂ (XI); Boc-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Pro-Ser-NH₂ (XII); H-Tyr-aJa-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-OMe · HCl;

H -Tyr -ala -Phe -Gly -Tyr -Pro -Ser -OH · HCl;

H-Tyr-ala-Phe -Gly -Tyr -Pro-Ser-NHME* HCl; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHÁt^c HCl; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-CH(CH₃ )₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z· HCl (XVI’); H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Sec-NH-NH₂; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z (ΧΠΓ);

H-Tyr-ala-Phe-GIy-Phe-Pro-Ser-NH₂ ’HCl;

Boc -Ty r-ala -Phe -Gly -Phe -Pro -Ser -NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Trp-Pro-Ser-NH₂ · HCl; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Trp-Pro-Ser-NH₂; H-Tyr-aIa-Phe-GIy-Gly-Pro-Scr-NH₂ °HCI; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe(NO₂)-Pro-Ser-NH₂ · HCl; H-Tyr-ala-Phe -GIy-Phe(F)-Pro -Ser -NH₂; H-Ty_r-ala-Phe-Gly-Cha-Pro-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phg-Pro-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Me)-Pro-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH₂ ⁰ HCl; H-Tyr-ala-Fhe-Gly-Tyr(Bzl)-Hyp-Ser(Bzl)-NH2 ·HCl; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH2; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(BzI)-Hyp-Ser(Bzi)-NH2; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Me)-Hyp-Ser-NH2; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Val-Ser-NH2 » CF3COOH; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Val-Ser-NH2, H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Gly-Ser-NH2»CF3COOH; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Gly-Ser-NH2; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Ppa-Ser-NH2 » HCl; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzí)-Ppa-Ser- NH2; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Aze-Ser-NH2 ⁰HCl; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-Aze-Ser-NH2; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Tia-Ser-NH₂ · HCl; H-Tyr-ala-Phe-C>ly-Tyr(Bzl)-Tia-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Fly-Tyr-APr-Ser-NH₂ ° HCl; H-Tyr-aIa-Fhe-Gly-Tyr(Bzl)-APr-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-3Hyp-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-3Hyp-Ser(Bzl)-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-allo Hyp-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-alIo Hyp-Ser(Bzl)-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyrj3Ala-Ser-NH_z; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp-Ser-NH₂ ·HCl; H-Tyr-ala-Phe-GIy-Phe-Hyp-Ser(Bzl)-NH₂«HCl; BoC'Tyr-aIa-Phe-Gly-Phe-Hyp-Ser-NH₂;

Boc-Tyr-ala-Plie-Gly-Phe-Hyp-Sei(Bzl)- NH₂; H-Tyr-a!a-Phe-Gly-Tyr-Pro-Abu-NH₂ ° HCl; H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr Pro-Gly-NH₂ ·HCl;

H-Tyr-met-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH₂ = HCl; H-Tyr-ir.ct(O)-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH₂:

Η-Tyr al3-Phc-Phe-Tyr-Pro-Ser-NH₂ - HCl; Η-Tyr ala-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH₂ ° HCl; Boc-Tyr-ala-Phe-Phe-Tyr-Pro-Ser-NH₂; H-Ty/ala-Phe-MePhe-Tyr-Pro-Ser-OMe · HCl; Η-Tyr aIa-Phe-MePlie-Tyr-Pro-Ser-NH₂ · HCl; Η-Tyr ala-Phe-MePhe-tyr-Pro-Ser-OH;

Η-Tyr ala-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH₂ ’ HCl; Η-Tyr ala-Plie-Sar-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH₂;

Η-Tyr ala-Phe-Sar-Tyr-Hyp-Ser-NH₂;

Η-Tyr ala-Phe-Sar-Tyr(Bzl)-Hyp-Ser(Bzl)-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Pro-Tyr-Pro-Ser-NH₂ ⁰ HCl; H-Tyr-ala-Plie-Pro-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NII₂; H-Tyr-ala-Phe-Pro-Tyr-Hyp-Ser-NH₂; H-Tyr-ala-Phe-Pio-Tyr(BzI)-Hyp-Ser(BzI)-NH₂.

A rövidítések értelmezése:

Me	= -CH₃
Z	= benziloxikarbonil-csoport
Bnl	= benzoil-csoport
Ad	= adamantil-csoport
MePhe	= N-metilfenilalanin
Azé	- 2-acelidinkaibonsav
APr	= 3-pirrolin-2-karbonsav
Abu	= a-amino-n-vajsav
Ser(Bzl)	= szerin-O-benziléter
Phg	= fenilglicin
0Ala	= 0-alanin
3Hyp	= 3-hidroxi-prolin vagy 3-alloiűdroxí-prolin
Át	= CH₃CH₂-
l.rl	= lauroilcsoport
Bzl	= ben zil-csoport
mct(O)	= O-metionin-szulfoxid
Ppa	= pipekolinsav
Tia	= 4-tiazolidin-karbonsav
Phe(NO₂)	= p-mtro-fenilalanin
Tyr(BzI)	= tirozin-O-benziléter
Cha	= hexahidrofenilalanin
Phe(F)	= p-fluorfenilalanin
allo Hyp	= 4 -allohidroxi -prolin
NvA	- valin
Tyr(Me)	- tirozín -O-metiléter
Adós	= adamantiloxikarbonil-csoport

1. példa

H-Tyr-ala-Phe Gly-Tyr-Pro-Ser-NH₂ ’ 'CF₃-COOH (XIII)

1. lépés: Boc-Pro-Ser-NH₂ (I)

1.0 g (4.65 mmól) Boc-Pro-OH 10 ml vízmentes tetrahídr ofuránnal készített oldatához —12 °C-on 0,52 ml (4,65 mmól) N-inctil-morfolint, majd 0,45 ml (4,65 mmól) klórhangyasav-ctilésztert adunk. A fenti hőmérsékf-tcn az elegyet 2 percen át keverjük, majd 0,48 g (4,65 mmól) H-Ser-NH₂ (R, W. Hanson és Η. N. Rydon: J. (hon. Soc. 836. 1964) 10 ml dimetilformamiddal készített hűtött oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet —IC ^JC-on 3 órán át, majd 20 °C-on egy órán át keverjük, utána a sókat kiszűrjük és a szűrletet vákuumban be-71

186 749 pároljuk. A maradékhoz tetrahidrofuránt adunk, és a szűrt oldatot még egyszer vákuumban bepároljuk. A terméket metanol és dietilcfér eíegyéből kristályosítjuk. 1,1 g cím szerinti terméket kapunk. Op.: 138 °C; [q]²⁵ = = -58,9 ° (c = 1. metanol); R^ = 0,15, R? = 0,33.

2. lépés: H-Pro-Ser-NH₂ °CF₃COOH (II)

1,0 g (3,3 mmól) Boc-Pro-Ser-NH₂ (I) 0 °C-on 10 ml trifluorecetsawal készített oldatát 0 °C-on 30 percen át állni hagyjuk, utána vákuumban bepároljuk. A maradékot metanolban oldjuk, és az oldatot vákuumban bepároljuk. A terméket dietiléter és petroléter eíegyéből kristályosítjuk. 1,0 g (II) képletű vegyületet kapunk, Op.: 48-50’C, Rp = 0,10.

3. lépés: Boc-Tyr(Bd)-Pro-Ser-NII₂ (111)

A 2. lépés szerint kapott termék 1,0 g-ját (3,2 mmól) 35 ml dimetilformamidban oldjuk. Az oldatot 0 °C-ra hú'tjük, majd 0,36 ml (3,2 mmól) N-metil-morfoIint, utána 1,2 g (3,2 mmól) Boc-Tyr(Bzl)-OH-t, 0,43 g (3,2 mmól) l-hldroxi-benzotiiazolt és 0,73 g (3,52 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet 0 °C-on egy órán át, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük, utána szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, és az oldatot citromsav nátriumkloriddal telített 1 M oldatával, utána nátriumhldrogénkarbonáí nátriumkloriddal telített 1 M oldatával, végül vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes náíriumszulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. Etilacetát és petroléter eíegyéből kristályosítva 1,4 g (III) képletű terméket kapunk, Op.: 1 í 5 °C; [o^⁵ = -22,9° (c = 1, metanol); rA = 0,20.

4. lépés: H-Tyr(Bzí)-Pro-Ser-NH₂ »CF₃COOH (IV)

1,0 g (1 ,S mmól) Bcc-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH₂-t a 2.

lépésben leírtak szerint reagáltatunk. 1,0 g cím szerinti terméket kapunk. Op.: 54-57 °C (bomlás); [β]θ⁵ = —7,4° (c = 1. metanol); = 0,59.

5. lépés: Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (V)

1,3 g (3,8 mmól) Boc-Phe-OH 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához 0 °C-on 0,42 ml (3,8 mmól) N-nietil-morfoíint, majd 0,3 ml (3,8 mmól) etilklórformiátot adunk. A reakcióelegyet 0 °Con 2 percen át keverjük, majd 0,95 g (3,7 mmól) H-Gly-NH-NZZ4HC1 (K. Hofman et al.: J. Amer. Chem. Soc. 94 617! [1972]) és 0,4 m! (3,7 mmól) N-metil-morfoün 15 .ml dimetilformamiddal készített, hűtött oldatát adjuk hozzá. Az elegyet -10 °C-on 3 órán át, utána 20 °C-c:i egy órán át keverjük, utána a sókat kiszűrjük és a születet vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és az oldatot többszörösen citromsav nátriumkloriddal telített 1M oldatával, nátriumhidrogénkarbonát nátriumkloridda! telített 1M oldatával és vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. Metanol és diizopropiléter elegyébó'l kristályosítva 1,4 g cím szerinti terméket kapunk, Op.: 143 °C [a]l^{s =} +5,6° (c = 1. metanol). R^=0,63.

6. lépés: H-Phc-Gly-NH ΝΠ-Ζ· 11C1 (V!)

1,0 g (2,1 mmól) (V) képletű vegyületet 10 percen át szobahőmérsékleten 10 m! jégecetes 1,3 n sósav-oldattal kezelünk. Az oldószeri 30 °C-cn vákuumban eltávolítjuk és a maradékot dietiléterrel eldörzsöljük. 0,89 g (VI) képletű cím szerinti vegyületet kapunk. Op.: 178 °C;

[a]p⁵ = +45° (c = 1. metanol). Rp = 0,78.

7.lépés: Boc-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (VII)

1,0 g (5,3 mmól) Boc-ala-OH-t és 2,09 (5,1 mmól) H-Phe-Gly-NH-NH-Z’ llCl-t az 5. lépésben leírtak szerint reagáltatunk. Metanol és diizopropiiéter eíegyéből kristályosítva 2,5 g (VII) képletű cím szerinti vegyületet kapunk. Op.: 165 °C, [e]²⁵ =4-8° (c= 1. metanol), = = 0,51.

8. lépés: H-aía-Phe-Gíy-NH-NH-Z’ HCf (Vili)

A 7. lépés szerint kapott Boc-a]a-Phe-Gly-NH-NH-Z 1,0 g-jától kiindulva a ő. lépésben leírtak szerint járunk el. 0,84 g cím szerinti (Vili) képletű vegyületet kapunk, amely 180 °C-on olvad. [a]L⁵ = 0,2° fc - 1. metanol). Rp=O,75,

9.lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z(IX)

I, 0 g (3,5 mmól) Boc-Tyr-OH és 1,65 g (3,4 mmól) H-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z· HC1 reakciója útján 2,24 g(IX) képletű vegyületet kapunk. Op.: 148 °C (metanol-diizopropíléter). [a]²⁵ - 4-16,2° (c - í. metanol). RÁ = = 0,38.

10. lépés: Boc-Tyr-aia-Phe-GIy-NH-NH₂ (X)

A 9. lépés szerint kapott Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NHZ 1,0 g-ját (1,4 mmól) 10 ml metanolban szobahőmérsékleten 0,27 g 10 %-os palfádiunr-aktívszén jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrietet vákuumban betöményítjuk. Etilacetát. hozzáadására a termék kiválik. Hozam: 0,64 g; Op.: 148 °C- [^a]|/ = . =f'4-26,ó°; (c = 1. metanol). R® = 0,34.

II. lépés: Boc-Tyr-ala-Phc-Glv-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH₂(XI)

2,0 g (3,5 mmól) Boc-Tyr-a!a-Phe-Gly-NH-NH₂ 20 ml vízmentes dimetilformamiddal készített oldatához vízmentes tetrahidrofuránnal készített 4 n hidrogénkloridoldatból 2,18 ml-t, majd 0,45 ml (3,85 mmól) n-buülnitrilet adunk -30 °C-on. A reakcióelegyet -30 °C-on 30 percen át keverjük, majd 1 in! (8,75 mmól) N-metil-morfo’int és utána 1,66 g (2,91 mmól) H-Tyr(BzJ)-Pro-SerNH₂ ’CF₃COOH (IV) és 0,33 ml {2,91 mmól) N-metilmorfolin 40 ml dimeiilforinamiddal készített, —30 °C-ra hűtött oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet —9 °C-on 3 napig állni hagyjuk, utána a sókat kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a terméket metanol, etilacetát és dietiléter eíegyéből kristályosítjuk. A nyers terméket Siükagéllei (Merck. 70-230 mesli) végzett oszlopkromatográfiával tisztítjuk, etilacetát és metanol 8:2 arányban készített elegy ével eluálva. 2,0 g terméket kapunk, amely 135 °C-on olvad. [ο]θ - —5,3 ° fc = l. metanol). R^=0.24.

12. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Pro-Ser-NHj (XII)

1,3 g (1,3 mmól) Boc-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr(BzI)-ProSer-NHj ’CF₃COOH (XI) 20 mi metanollal készített oldatát 35 °C-on 0,30 g 10 %os palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük és a szíírlelet vákuumban belöményítjük. Dietiléter hozzáadására 1,1 g cím szerinti terméket kapunk, amely 160— 163 °C-on bomlás közben olvad, [ajp⁵ = —7,6° (c = 1, metanol)., = 0,11. R^ =0,80.

13. lépés: H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Pro-Ser-NH, (XIII)

A 12. lépésben kapott (ΧΪΪ) képletű Boc-Tyr-ala-PheGly-Iyr-Pro-Scr-NHj 1,0 g-játll.l mól)0°C-on 30percen

18b 749 át 10 ml trifluorecetsavval kezeljük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot dietiíéterrel eldörzsöljük. 0,90 g cím szerinti terméket kapunk, amely 159160 °C-on olvad. [<t]p = +5,5° (c = 1. metanol). Rj' = = 0,51.

2. példa

H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH₂ · CF₃COOH (XV)

1. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-Gíy-Tyr-NH₂ (XIV)

2,74 g (4,8 mmól) Boc-Tyr-a!a-Phe-Gly-NH-NH₂ ^X) 50 ml vízmentes dimetilformamiddal készített, -30 Cra hűtött oldatához vízmentes telrahiárofuránnal készített ón hidrogénklorid-oldatból 2,0 rnl-t (12 mmól), majd 0,63 ml (5,28 mmól) n-butilnitritet adunk. A reakcióelegyet -30 °C-on 30 percen át keverjük, utána —40 °C-ra hűtjük és 1,34 ml (12 mmól) N-metii-morfolint adunk hozzá. Ezt követően 0,865 g (4,0 mmól) H-Tyr-NH₂-HCI (K. Biau és S. G. Waley: Biochem. J. 57. 538 [1954]) és 0,456 ml (4,0 mmól) N-meEI-morfolin 50 ml dimetilformamiddal készített, -40 °C-ra hűtött oldatát adjuk a reakcióelegyhez. Az elegyet -10 °Con 7 napig állni hagyjuk, kis térfogatra betóményítjük, a sókat kiszűrjük és a szűrletből a terméket kloroformmal kicsapjuk. Metanol és kloroform elegyéből kristályosítva 2,0 g (XIV) képletű vegyületet kapunk, amely 127-129 °C-on olvad. [a]p = + 19,9° (c= 1. metanol). R^ =0,15, Rp=0,56.

2. lépés: H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH₂ ·CF₃COOH (XV)

1,0 g (XIV) képletű terméket 0 °C-on 30 percen át 12 ml trifluorecetsavval reagáitatunk. A savat vákuumban elpároljuk és a maradékot dietiléterrel eidörzsöljük. Izopropilalkohol és dietiléter elegyéből kristályosítva 0,94 g cím szerinti terméket nyerünk, amely 145—146 °C-on olvad. [a]p = +34,5° (c = 1, metanol), = 0,65.

Szilárdfázisú szintézis

A) eljárásváltozat: 3οο-(ΑΑ)_η-(ΑΑ)₁₁_ι...(ΑΑ)₁-1ύάroximetil-polisztirolészter

Klórmetilezetí polisztirol gyantát az első Boc-aminosawal (Boc-AAj-OH) Gisin (Helv. Cilim. Acta 56 1476 [1973]) szerint észterezünk. A cím szerinti gyantaszármazék előállítása céljából az alábbi kezelést végezzük:

1. háromszor mosás metiléndikloriddal,

2. kétszer I-í perces kezelés trifluorecctsav és metiléndiklorid 1:1 arányú elegyévei,

3. 30 perces kezelés a fenti oldószereleggyeí,

4. négyszeres mosás metiíénkloriddal,

5. kétszer 1—1 perces kezelés 10 % trifluorecetsavat tartalmazó metiíénkloriddal,

6. 10 perces kezelés 10 % trifluoreceísavat tartalmazó metiíénkloriddal,

7. háromszoros mosás metiíénkloriddal,

8. háromszoros mosás dimetilformamiddal,

9. háromszoros mosás metiíénkloriddal,

10. a megfelelő aminosav-származék szimmetrikus anhidridje 2 vagy 3 egyer.értékének hozzáadása (előállít'-a Hagenmayer és Frank szerint, 1. Hoppé-Seyler’s Z. Physiol. Chem. 353 1973 11972]). Az anhidrid oldva metilénkloridban, reakcióidő 1-2 óra.

háromszoros mosás metiíénkloriddal, háromszoros mosás izopropanollal, háromszoros mosás metiíénkloriddal, ícszt-ninhidrm-reakció (Kaiser et al.: Annál. Biochem. 34, 595 [1970]). Nem teljes reakció esetén a

4—14 műveleteket megismételjük.

B) eljárásváltozat: H-(AA)_n-(AA)_n_i...(AA)!-hidroximr til-poliszti rol észter.

Ml rtán az utolsó aminosav-származékot az A) eljárásváltozat szerint beépítettük, a gyantát háromszor ecetsavval mossuk, utána az 1-9. műveleteket megismételjük, majd a gyantát négyszer izopropanollal mossuk.

C) eljárásváltozat: Boc-(AA)_n- (AA)_n_ j ...(AA)i beiizlidrilamin-gyanta.

Bcc-(AA)] -OH-t diciklohexilkarbodiimid segítségével a benzhidrilgyantához kapcsolunk (Pietta et al: J. Org, Chem. 39, 44 [1974]). A reakcióba nem lépett aminocsopcrtokat ecetsavanhidrid-piridin-mcíilénklorid 2:1:10 arány ú elegyévei acetilczzük. A kapott polisztirol-amidot az A) eljárás szerint kezeljük a cím szerinti gyanta előállítására.

C) eljárásváltozat: H-(AA}_n-(AA)_n_i ...(AA)j -benzhidrilamin-gyanta.

A C) eljárás változat szerint kapott peptid-gyantából kiindulva a B) eljárásváltozat szerint dolgozunk.

3. példa

Tyr-ala-Phe-GIy-OMc (XVI)

Λ megfelelő aminosav-csoportokat (Öoc-Gíy-OH, BocPhe-OH, Boc-ala-OH, illetve Boc-Tyr-OH alakjában) tartalmazó B) szerinti gyantából 1 g-ot 25 ml metanol és ml trietilamin elegyében szobahőmérsékleten 3 napon át áPni hagyunk. Utána a gyantát kiszűrjük, dimetilformamiddal mossuk, és az oldószert vákuumban bepároljuk. A maradékot jzopropanolból kristályosítva 0,16 g cím szerinti terméket nyerünk. Op.: 2! 6—218 °C [α]θ⁸ = = —32,6° (c = 1, dimelilforinamid), R^ =0,70. Aminösavelemzés: Gly 1,04; ala 1,06: Tyr 0,99; Phe 1,00.

4. példa

H-Tyr-ala-Phe-Gly-OH (XVII) (!) A 3. példában szereplő peptidgyantából l g-ot 0 °C-on 1 ml anizolt tartalmazó vízmentes (CoF₃ felett desz .illáit) 10 ml hidrogcníluoriddal 45 percen át kezelünk. A hidrogénfluoridot csökkentett nyomáson bepárcljuk és az anizolt diizopropiiéterrei mosva eltávolítjuk. A nyers pepiidet 50 %-os ecetsawa! extraháljuk, majd Sephadex G-15 gyantával töltött oszlopon 0,5 n eceCavval eluálva tisztítjuk. A pepiidet AmberÜte 1RA-45 jelű acetátformájú gyantával kezelve acetáttá alakítjuk.

{i) 0,10 g (XV!) képletű pcptidcsztcrt 5 ml víz és ii 1 mekum! elegyében sziiszpcndálunk és 0,32 ml n náliiumliidroxid-oldattal szobahőmérsékleten 90 percen át e’szappaiiosítjuk. Az oldatot vákuumban betöményítjiik, majd 95 %-os etanolt adunk hozzá. 0,08 g (XVII) képletű, cím szerinti terméket kapunk, Op.; 250—252 °C (bomlás), [a]” - -2.8° (c = l, dimetilforir.amid), R?= = 0,56. Aminösav-elemzés: Gly l ,04; ala 0,94; Tyr 1,00; Phe i ,05.

-9186 749

5. példa

H-Tyr-aIa-Phe-Gly-NH₂ (XIX) (i) A 3. példában leírt peptidgyantából 1 g-ot metanol és dimetilformamid 1 :1 arányú elegyében (10 ml) szuszpendálunk, és a szuszpenzjót 0 °C-on ammónia-gázzal telítjük. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 napon ál keverjük, utána a gyantát kiszűrjük, diinetilformamjdúal mossuk, és az oldószert vákuumban bepároljuk. A maradékot hidrogénkloriddal vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatával kezeljük. 0,09 g cím szerinti (XIX) képletű vegyületet különítünk el izopropanolbói kristályosítva. Op.: 206 °C, [α]θ⁸ = +49,9° (c = 1, metanol), R.C = 0,58. Aminosav-elemzés: Gly 1,05, ala 1,00, Tyr 0,91,Phe 1,03.

(ii) Az aminosavakat megfelelő sorrendben tartalmazó

D) szerinti gyantából szintén állíthatjuk elő a cím szerinti peptidet. Ez esetben a 4. példa (i) bekezdése szerint járunk el.

6. példa

H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z· HCl (XIV’)

1. lépés: Boc-Ser-NH-NH-Z (Γ)

1,0 g (4,87 mmól) Boc-Ser-OH 20 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához -12 °C-on egymás után 0,55 ml (4,87 minői) N-mctil-morfolínt, majd 0,49 ml (4,87 mmól) etilklórformiátot adunk. Az elegyet —12 °C-on 2 percen át keverjük, és utána 1,0 g (4,87 mmól) H₂N-NH-Z*HC1 és 0,55 ml (4,87 mmól) N-metil-niorfolin 20 ml dimetilformamiddal készített hűtött o'idatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet -10 °C-on 3 órán át, majd 20 °C-on 1 órán át keverjük, utána a sókat kiszűrjük és a szíírletet vákuumban bepároljuk.

A maradékot etilaeetátban oldjuk.es az oldatot többször citromsav konyhasóval telített 1M oldatával, nátriumhidrogénkarbonát 1M oldatával, majd vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A terméket Siiikagéllel töltött oszlopon kloroform és metanol 98:2 arányú elegyével eluálva tisztítjuk. A vékonyrétegkromatográfiailag egységes frakciókat összegyűjtjük és oldószermentesítjük. A maradékot dietiléter és petroléter Hegyével eldörzsölve 1,4 g (Ϊ’) képletű vegvületet kapunk. Op.: 42-46 °C; [ajíf = -25,8° (c = 1, metanol), R* = 0,52.

2. lépés: H-Ser-NI Í-NH-Z· HC1 (1Γ)

1,0 g (2,83 mmól) Boc-Ser-NH-NH-Z (Γ) hidrogénklorid vízmentes tetrahidrofuránnal készített 10 ml 4 n oldatával készített oldatát szobahőmérsékleten 30 percen át állni hagyjuk, utána dietilétert adunk hozzá, és a csapadékot szűrjük. A nyers terméket etanol és dietiléter vízmentes elegyéből átkristályosítjuk. 0,7 g cím szerinti terméket kapunk. Op.: 110—115 °C; [ajl⁵ = = +20,7° (c = 1 .metanol).= 0,49; E₁₂ = 1,16.

3. lépés: Boc-Tyr(Bzl)-Pro-OH (111’)

1,0 g (8,7 mmól) H-Pro-OH-t szobahőmérsékleten

4,35 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatban oldunk. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, 10 mi dimetilformamiddal hígítjuk, majd az oldószert vákuumban 35 °C-on eltávolítjuk. A maradékot 10 ml dimetilformamidban szuszpendáljuk, és a szuszpenzióhoz 4,3 g (8,7 mmól) Boc-Tyr(Bzl)- ¹⁰

ONp-t adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1 órán á( keverjük, majd vákuumban bepároíjuk. A maradékot vízben oldjuk, és az oldatot többször etilacetáttal mossuk. A vizes fázist 0 °C-ra hűtjük, 5 n vizes sósavoldattal pH 2 értékre savanyítjuk, majd etilacetáttal extraháljuk.

A szerves fázist konyhasóval telített vizes nátriumhidrogenkarbonát-oldattal semlegesre mossuk és vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk. Az oldószert 30°C-on eltávolítjuk. 3,7 g (1ΙΓ) képletű vegyületet kapunk. Op.: 97—100 °C (bomlás), [α]θ = -15,7° (c = 1, metanol), R^ =0,70;E_5jS =0,35.

4. lépés: Boc-Tyr-Pro-OH (IV’)

1,0 g (2,13 mmól) (ΠΓ) képletű vegyületet 15 ml metanolban 0,27 g, 10 %-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében 30 °C-on hidrogénezünk. A katalizátort kiszűrjük, az oldatot etilacetáttal hígítjuk és vákuumban kristályosodásig betörnényítjük. 0,7 g (IV) képletű vegyületet kapunk. Op.: 136-138 °C; [a]^⁵ = —25,0° (c = = 1, metanol), = 0,42; E_{s s} =0,52.

5. lépés: Boe-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z (V’)

1,0 g (2,65 mmól) (IV) képletű vegyületet 0,77 g (2,65 mmól) (1Γ) képletű vegyülettel az 1. lépésben leírtak szerint reagáltatva 1.46 g (V) képletű vegyületet kapunk, A dietiléter és petroléter Hegyéből kristályosított vegyület 116-118 °C-on olvad, [ajj^ = -46,5° (c = = 1, metanol); R* =0,17, R**= 0,37.

6. lépés: H-Tyr-Pro-Scr-NH-NH-Z’HCl

1,0 g (1,63 mmól) (V’) képletű vegyületet a 2- lépésben megadott módon reagáltatva 0,78 g (VE) képletű vegyületet állítunk elő. A vegyület dieíiléterbői átkristályosítva 172-174 °C-on olvad, [a]^⁵ = -38,4° (c = !, metanol), R^ = 0,46; Ej ₂ = 0,79.

7. lépés: Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (VII’)

1,0 g (3.8 mmól) Boc-Phe-OH-t és 0,95 g (3,7 mmól) H-GIy-NH-NH-ZHCl-t (K. Hofrnann et al.: J. Am. Chem. Soc. 94, 61?! [1972]) az 1. lépés szerint reagáltatva 1,4 g (VI!’) képletű vegyületet kapunk,amely metanol és diizopropíléter Hegyéből átkrístáiyosítva 143 °C-on olvad, [c]²^ = +5,6° (c - 1, metanol). R^ =0,63.

8. lépés: H-Phe-Gly-Níl-NH-Z^j HC1 (Vili’)

1.0 g (2,1 mmól) (ViC) képletű vegyületet szobahőmérsékleten 30 percen át 10 ml jégecetes 1,3 n hidrogénklorid-oldattal kezelünk. Az oldószert vákuumban 30 °C-on eltávolítjuk és a maradékot dietiléterrel eldörzsöljük. 0,89 g (Vili’) képletű vegyületet kapunk. Op.: 178 °C; [0¾⁵ = +45° (e = 1, metanol), = 0,78; E, ₂ = = 0,88.

9. lépés: Boc-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (IX’)

1,0 g (5,3 mmól) Boc-ala-OH-t és 2,09 g (5,1 mmól) (VlfJ') képletű vegyületet az 5. lépés szerint reagáltatva

2,5 g (IX’) kcpletű vegyületet kapunk, amely metanol és diizopropíléter Hegyéből átkristályosítva 165 °C-on olvad. [a]p⁵ = +8° (c= I, metanol); =0,51.

10. lépés: H-ala-Phe-GIy-NH-NII-Z· HCl (X’)

1,0 g (í ,8 mmól) (IX’) képletű vegyületből kiindulva a 6. lépés szerint járunk el, és 0,84 g (X’) képletű vegyületet kapunk, amely 180 °C-on olvad, [ü]^⁵ = +0,2° (c = 1, metanol), = 0.75; E_{! 2} = 0,80.

-10186 749

11. icpcs: Boc-Tyr-ala-Phc-Gíy-ΝΗ-ΝΠ-Ζ (XI )

1,0 g (3,5 mmóí) Boc-Tyr-OII-t és 1,65 g (3,4 minő!) (X’) képletű vegyületet az 5. lépés szerint reagáitatva

2,24 g (XI’) képletű vegyületet kapunk. A metanol és diizopropiléter elegyéből kristályosított anyag 148 °C-on olvadja]²^ = + 16,2° (c= 1 .metanol), R* =0,38.

12. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-GÍy-NH-NH₂ (XiP)

1,0 g (1,4 mmól) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (XI’) 10 ml metanollal készített oldatát szobahőmérsékleten 0,27 g 10 %-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakcióelegyet a 4. lépés szerint feldolgozva 0,64 g (ΧΙΓ) képletű vegyületet kapunk, amely 148 °C-on olvad. [a]²⁵ =+26,6° (c= 1, metanol), R? = 0,34; E_J2= 0,57.

13. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z (ΧΠΓ)

I g (1,75 mmól) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH₂ (XIP) 15 ml vízmentes dimetilformamiddal készített oldatához —30 °C-on 1,1 ml (4,38 mmól) vízmentes tetrahidrofurános 4 n hidrogénklorid-oldatot, majd 0,2 nrl (1,93 mmól) n-butilnitritet adunk. A reakcióelegyet -30 °Con 30 percen át keverjük, utána 0,5 ml (4.38 mmól) N-nretil-mórfolint, majd 0,803 g (1,46 mmól) (VP) képletű H-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z’HCl és 0,16 ml (1,46 mmól) N-metil-morfolin 15 ml vízmentes dimetilformanriddal készített oldatát adjuk hozzá, A reakcióelegyet —9 °C-on2 napon át állni hagyjuk, utána a sókat kiszűrjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a terméket 0 °C-ra hűtött 10%-oscitromsav-oIdatba öntjük, A csapadékot szűrjük, vízzel semlegesre mossuk cs vákuumban szárítjuk. Az etilacetát és dietiléter elegyéből átkrístályosított termék 140-150 °C-on olvad. Hozam: 1,15 g; Md ⁼ “^{7 * * * * * * * * * * * * 2O * *}>³° (^{c =} b metanol), R® = 0,17; ítf = 0,92.

14. lépés: H-Tyr-aIa-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-N!I-NH-Z“ •HCI (XIV’)

1,0 g (0,95 mmól) (Χ1ΙΓ) képletű vegyületből kiindulva a 2. lépés szerint járunk el, és 0,89 g (XIV’) képletű vegyületet kapunk, amely etilacetátból átkristályosítva 170 °C-on bomlás közben olvad, Γα]θ⁵ = -1,8° (c = = 1, metanol), [ajk⁵ = +1,0° (c = 1, ecetsav), RÍ = 0,69; Ei,₂ ⁼0,50.

7. példa

H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH-NH-Z· HCI (XVIIP)

1. lépés: Boc-Tyr-NH-NH-Z (XV )

1,0 g (3,55 mmól) Boc-Tyr-OH 20 ml vízmentes íeírahidrofuránoal készített oldatához —12 °C-on 0,4 mi (3,55 mnról) N-metil-morfolint, majd 0,48 ml (3,55 mmól) izobutilklórformjátot adunk. Az oldatot -I2°Con 2 percen át keverjük, majd 0,72 g (3,55 mmól)

II₂N-NII-Zⁿ HCI és 0,4 in! N-mctilmorfolin 20 in! dimetilformamiddal készített, hűtőit oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet - 10 °C-on 90 percen át keverjük, utána a sókat kiszűrjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk.

A maradékot etilacetátban oldjuk, és az oldatot többször dtromsav !M vizes oldatával, nátriumlridrogéiikaibonát

ÍM vizes oldatával, valamint telített konyhasó-oldattal mossuk.

A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és hcpároljuk. 1,3 g (XV) képletű vegyületet kapunk, amely 68-70 °C-on olvad, [a]^⁵ = -5,85° (c = 2, metanol), R]5 = 0,76.

2. lépés: H-Tyr-NH-NH-Z·HCI (XVP)

1.0 g (2,33 minői) (XV’) képletű Boc-Tyr-NH-NH-Z 10 ml vízmentes tetrahidrofurános 4 n hidrogénkloridoldaPal készített oldatát szobahőmérsékleten 30 percen át állni hagyjuk. Utána az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a terméket izopropanol és dietiléter elegyéből kicsapjuk. 0,76 g (XVP) képletű vegyületet kapunk, aroel·-’ 103-105 °C-on olvad, [ö]²⁵ =+48,8° (c= l,metanoí), RC= 0,70; E₁₂ =0,92.

3. lépés: Boc-Tyr-ala-Phc-GIy-Tyr-NH-NH-Z (XV1P)

1,0 g (1,75 rnmói) (XII’) képletű Boc-Tyr-ala-PheGly-NH-NH₂ 15 ml vízmentes dimetilformamiddal készített oldatához egymás után -30 °C-on 1,1 ml (4,38 mmó') vízmentes tetrahidrofurános 4 n hidrogénkloridoldatot, majd 0,2 ml (1,93 mmól) n-butilnitriteí adunk, A re< kcióelegvet a megadott hőmérsékleten 30 percen át keverjük, majd 0,5 ml (4,38 mmól) N-nreíil-nrorfolint, utam 0,535 g (1,46 mnról) H-Tyr-NH-NH-Z·HCI és 0,16 ml ( ,46 mmól) N-metil-morfolin 15 nrl vízmentes dimetílformamiddal készített oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet -9 °C-on 3 napon át állni hagyjuk, majd a sókat kiszűrjük és az oldószert vákuumban el pároljuk. A terméket 0 °C-ra hűtött 10 %-os citromsav-oidatba öntjük. A csapadékot szűrjük, vízzel semlegesre mossuk, majd vákuumban szárítjuk. Az izopropanol és dietiléter elegyéből átkristályosított termék 137 — 150 °C-on olvad. Hozam: 0,85 g, [a]²⁵ = +3,8° (c = 1, metanol), RÁ = = 0,2+R^ =0,52.

4. lépés: H-Tvr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH-NH-Z'HCl ÍXVÍH’)

1,3 g (1.15 mmól) (XVli¹) képletű Boc-Tyr-ala-PheGly+yr-NH-NH-Z-tő! kiindulva a 2. lépés szerint járunk cl. 0,83 g (XVIIP) képletű vegyületet kapunk, amely etilaietátból átkristályosítva 190—192 °C-on bomlás közben olvad. [α]λ⁵ = +19,9° (c = 1, metanol), R^ = =0,81 :E_1;2 =0,59.

8. példa

H-Tyr-ala-Phe-GIy-NH-NH-Z·HCI (XIX0 1.0 g (1,60 mnról) (XP) képletű Boc-Tyr-ala-Phe-GlyNH-NH-Z-től kiindulva a 6. példa 8. lépése szerint járunk el. 0,70 g (XIX’) képletű vegyületet kapunk, amely etilacetátból kristályosítva 215 °C-on olvad, [a]^ =+33° (c = 1, metanol), Rf = 0,7ö;E₁₂ =0,62.

9. példa

IITyr-ala-Phe-G!y-NU~NH-CO-CH₂-CH₂-CIIj· •HCI (XXI ’)

I. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-CO-CH₂-CH₂CIi₃ (XX’)

0,i2 ml (1,3 mmó!) vajsavat cs 0,742 g (1,3 mmó!) (XII’) képletű Boc-Tyr-aia-Plie-Gly-NH-NH₂-t a 6. példa

1. lépése szerint reagállatunk. 0,8 g (XX’) képletű vegyü11

-111

186 749 letet kapunk, amely etilacetátból átkristályosítva 125 °C-on bomlás közben olvad, [α]1⁵ = + 18,3° (c = 1, metanol), RB = 0.37.

2. lépés: H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-CO-CH₂-CH₂CHjMICl

1,0 g (1,46 mmól) (XX’) képletű Boc-Tyr-ala-PheGly-NH-NH-CO-CH₂-CH₂-CH₃-tól a 6. példa 2. lépése szerint járunk el. A nyers terméket oszlopkromatográfiával, Silikagélen és eluensként. kloroform és metanol 9:1 arányú elegyét alkalmazva tisztítjuk. 0,58 g (ΧΧΓ) képletű vegyületet kapunk, amely izopropanol és dietiléter elegyéből átkristályosítva 215-218 °C-on bomlás közben olvad, [a]²⁵ = +40,1° (c = 1, metanol), R? = 0,67, R*/=0,84;E_!>2 =0,75.

10. példa

H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-tyr-H· 2 HC1 (XXIII')

1. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-tyr-Boc (ΧΧΙΓ) 1,0 g (3,55 mmól) Boc-tyr-OH-t és 2,03 g (3,55 mmól) (Χ1Γ) képletű Boc-Tyr-aIa-Phe-Gly-NH-NI!₂-t a

6. példa 1. lépése szerint reagáltatva 2,3 g (XXII’j képletű vegyületet kapunk, amely etilacetátból kristályosítva 145—150 °C-on olvad. [a]l^s = +14,8° (c = 1, metanol), R^ = 0,26; R® = 0,39.

2. lépés: H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-tyt-H’2 HCI (XXIli’)

1,0 g (1,2 mmól) (ΧΧΙΓ) képletű vegyidéiből kiindulva az 1. példa 2. lépése szerint járunk el, 0,760 g (ΧΧΙΙΓ) képletű vegyületet kapunk, amely dietiléterbő! kristályosítva 210-215 °C-on bomlás közben olvad. [a]p = +13,5° (c - 1, metanol), R^ = 0,48;E_í2 =0,84.

A klasszikus módszer szerint az alábbi vegyületeket is előállítjuk [szögletes zárójelben: hozam%):

(XX) H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-Níí₂ »2 HCI. OP.: 190-195 °C (bomlás) (dietiléter); R^ = 0,50; E_{t 2} = 1,09. [42 %} (XXI) H-Tyr-aIa-Phe-Sar-NH-NH₂ -2 HCI. Op.: 193-197 °C (bomlás) (tetrahidrofurán); R^ = 0,47; Ej ₂ = = 1,12.(33%] (XXII) H-Tyr-aIa-PIie-Sar-NH-NH-Z«HCl. Op.: 150-155 °C (bomlás) (etilacetát); = 0,70; E_J2 = 0,59. [43 %] (XXIII) Boc-Tyr-aIa-Phe-Sar-NH-NH₂. Op.: 110-115 °C (bomlás) (etilacetát-dietilcter); R^B = 0,32;

E, ₂ =0,57. [41 %] (XXIV) ’ Boc-Tyr-aIa-Phe-Phe-NH-NH₂. Op.: 180-183 °C (bomlás) (etilacetát); R® = 0,54; E₁₂ =0,49. [42 %} (XXV) H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Pro-NH₂ HCI. Op.: 200 °C körül (bomlás) (etilacetát); R^ = 0,58; Ej ₂ = = 0,59. [18%] (XXV!) H-Tyr-ala Phe-Gly Tyr(Bzl)-Pro-Nll₂ HCI. Op.: 180°C körül (bomlás) (dietiléter); Rp = 0,63;

F. ₁₂ = 0,53.(20%] (XXVII)’ Boc-Tyr-a!a-Phe-Gly-Tyr-Pro-NH₂. Op.: 170— 175 °C (bomlás) (diizopropilétcr); R® = 0,24. [29 %] (XXVIII) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bz!)-Pro-NH₂. Op.: 143 °C (dietiléter); R® = 0,47. [35 %] (XXIX) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Ser-NH₂ · CF,COOH.

Op.: 150-153 °C (bomlás) (dietiléter); R? = 0,59; E_2>2 =0,57. [32 %] (XXX) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Ser-NHj. Op.: 110 ^eC körül (bomlás) (etilacetát); R?= 0,15; Rp = 0,83. [34 %] (XXXI) H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Hyp-Ser-NH₂ · HCI. Op. 210-220 °C (bomlás) (Izopropilalkohol-dietiléter); R^ = 0,44; R^ = 0,66; Ej ₂ =0,51.(31 %] (XXXII) H-Tyr-ala-Phe-Gíy-Tyr(Bzlj-Hyp-Ser(Bzl)-NH₂ ’ •HCI. Op.: 175-180 C (bomlás) (metilalkoholdietiléter); R^ = 0,67; E_{t 2} = 0,44. [25 %] (XXX11J) Boc-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Hyp-Ser-NH₂. Op.: 156-160 °C (bomlás) (etilacetát-dieíiléter). R? = = 0.75. [31 %1 (XXXIV) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bz!)-Hyp-Ser(Bzl)NH₂. Op.: 130-136 C (bomlás) (izopropilalkohol-etilacetát); R? = 0,33,R? =0,95. [26 %] (XXXV, H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Va!-Ser-NH₂ · •CF₃COOH. Op.: 203-206 °C (bomlás) (dietiléter); R? = 0,71; Ej ₂ = 0,51. [25 %] (XXXVi) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Val-Ser-NH₂. Op,: 230 °C (bomlás) (diizopropiléter); Rp = 0,47. [28 %] (XXXVII) H-Tyr ala-Phe-Gly-Tyi-G!y-Ser-NU₂ · •CF₃COOH. Op.: 180-190 °C (bomlás) (dietiléter); Rp = 0,51; R? = 0,75; E, ₂ = 0,52. [28 %] (XXXVIII) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr GÍy-Ser-NHj. Op.:

245-250 °C (bomlás) (dietiléter-petroléter); Rp = = 0,79.(25 %] (XXXIX) H-Tyr-ala-Phe-Gly-P!ie-Pro-Ser-NH₂ 'HCI, Op.: 190—195 °C (bomlás, (metilalkohol-dietiléter); = 0,84; E₁₎₂ =0,52.(15 %] (XL) Boc-Tyr-aIa-Phe-Gly-Phe-Pro-Ser-NH_:. Op.: 155-=160 °C (bomlás) (meíila’kchol-etilacetáí); R? = = 0,16; Rp =0,80. [21 %] (XLI) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp-Ser-NH₂ ’HCl. Op.: >300 °C (bomlás) (metilalkohol-etilacetát); Rj = = 0,47; R? = 0,75; E_J2= 0,51. [17 %] (XLII) H-Tyr-aIa-Phe-GIy-Phe-Hyp-Ser(Bzl)-NH₂ ’ •HCI. Op.: 160-170 C (beadás) (izopropilalkohol-etilacetát); R? = 0,65; Ej ₂ -.0,50, [20 %] (XL111) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp-Sér-NK₂. Op.;

165 — 170 °C (bomlás) (metilalkohol-dietiléter); Rp =0,75. [26 %] (XLIV) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp-Ser(Bzí)-NH₂.

Op.: 140-145 °C (bomlás) (izopropilalkohol-etilacetát); Rp = 0,25; Rp = 0,90. [29 %] (XLV) ÍI-Tyr-a1a-Phc-Gly-Trp-Pro-Ser-NH₂-Ha. Op.: 210—220 °C (bomlás) (izopropiíalkohol-etilacetát); Rp = 0,54; Rf> = 0,79; E_1i2 = 0,50. [21 %] (XLVI) Boc-Tyr-ala-Piie-G!y-Tip-Prc-Ser-NH₂. Op.;

175-180 °C (bomlás, (metilalkohol-etilacetát); R® =0,12; Rp= 0,81; Rp= 0,86. [30 %] (XLVllj H-Tyr-ala-Phe-Phe-Tyr-Pro-Ser-NH₂ °HC1. Op.: 195 -200 °C (bomlás) (dietiléter); Rp = 0,66; RP =0,82; Ej ₂ =0,50.(19%,] (XLVIII) ll-Tyr.ala-Pbe-Phe-Tyr(Bzt,-Pro-Ser-NH₂ « •HCI. Op.: 160 180 °C (bomlás) (etilalkohol-dietiléíer); Rp = 0,72; Ιίθ = 0,90; E_1>2 = 0,46. [21 %] (XLÍX) Boc-Tyr-aIa-Plie-Phe-Tyr-Pro-Ser-NH₂. Op.:

140 145 °C (dietiléter); R_f ^ö = 0,18; Rp = 0,88. [28 %]

CL.) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Lcu-NH₂IICl. Op.: 143-147 ^eC

-12186 749 (izopropilalkohol-dietiléter); [»](/ = +8,1° (c = 1, metanol); Rf = 0,73; Ej ₂ = 0,62. [29 %] (LI) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Met-NH₂’HCl. Op.; 220-225 °C; (izopropilalkohol-diizopropiléter); [a]l³ = = +13,5° (c - 1, metanol); R.f =0,68;É_{l 2} =0,63. [25 %] (LII) H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH₂ ’HCl. Op.:

195-200 °C (bomlás) (dietiléter); Rf = 0,49; Ej ₂ = 0,49; [a]³³ = +18,0° (c = 1, metanol). [15%) (Lili) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Gly-Pro-Ser NH₂ ’HCl. Op.:

180 °C (bomlás) (dietiléter); [a]p° = 0 (c = 1, metanol); Rf =0,32; E,_j2'= 0,58. [20 %] (L1V) H-Tyr-ala-PIie-G!y-Tyr-Pro-Ser-N'HMe· HCI. Op.: 240 °C (bomlás) (dietiléter); [a]^⁸ = 0(c = 1,metanol); Rf =0,55; Ej ₂ =0,52. [16 %] (LV) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHÁt’HCl. Op.: 235 °C (bomlás) (dietiléter); [a]³⁸ = -3,54 (c = = 1, metanol); l<f = 0,62; E_1j2 = 0,52. [17 %] (LVI) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-OMe· HC1. Op.:

240 °C (bomlás) (dietiléter); [a]²⁸ = -4,5° (c = 1, metanol); Rf = 0,66; Ej ₂ = 0,55. [16 %] (LVII) H-Tvr-met-Phe-GIy-NriNHZ-HCl. Op.: 140-143 °C (CHC1₃/dietiléter); [af_D ⁸ = —21,6 ( c = 1, dimetilformamid); Rf = 0,79; Ej ₂ =0,54. [40 %} (LVíII) H-Tyr-met(O)-Phe-Gly-NHNHZ°HCl. Om: 115120 °C (CHC1₃/dietiléter); [»]²⁸ = -23,2 (c = 1, dimetilformamid); Rf = 0,69; E< ₂' = 0,53. [42 %] (LIX) H-Tyr-ala-Phe-Gly-NHNHLrl-HCl. Op.: 191-198 °C (bomlás) (izopropilalkohol-dietiléter); [a]l³ ~ = +46,0° (c = i, metanol); Rf = 0,84; E, ₂'= 0,41. [31 %] (LX) H-Tyr-ala-Phe-Gly-NHNHBnl’HCl. Op.: 254-258 °C (bomlás) (CFIsOH/CHCl^etilacetát); [a]²® = = +41,1° (c= 1, metanol), Rf = 0,79; Ej ₂= 0,63. [29 %1 (LXI) H,Tyr-ala-Phe-Gly-NHNHAdoc. Op. 142-144 °C (izopropilalkohol/dietiléter); [a]_Df =0,78;E_lj2=0,47.

(c = 1, metanol); Rf = 0,78;E

235 °C = +2,3° 100 °C (bomlás) = + 20,7° [25 %] (LXII) H-Tyr-ala-Phe-Gly-NHNHBoc. Op.: 154 °C (bomlás) (dietiléter); Rf = 0,79; Ej_>2 = 0,60; [α]θ³ = = +27,9° (c = 1, metanol) . [27 %] (LXI1I) H-Tyr-ala-Phe Gly-Pro-NH₂ HCI, op.: (dietiléter), Rf = 0,46, E_1>2 = 0,64, [a]p (c = 1, metanol); hozam: 27 % (LXIV) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Ser-NH₂’HCl, op.:

(bomlás közben) (izopropanol/diizopropil-éter), Rf = 0,52, E,₎₂ = 0,65, hozam: 26 %; [a]p° = * +40,7° (c = 1, metanol) (LXV) H-Tyl-ala-Phe-Glv-tyr-NH₂ · HC1. Op.: 230 °C (dietil-éter) Rf: 0,76, E_1>2 = 0,57, [a]^ =+49,4° (c - 1, metanol) (LXVI) H-Tyr-met-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH₂ ’HCl, Rf = = 0,56, Ej ₂ = 0,50, hozam: 16 %;

(LXVll) H-Tyr-ála-Phe-PiO-Tyr-Pro-Ser-NH₂ · HC1.

Op.: 200-205 °C (bomlás közben) (dietil-éter), Rf = 0,46, Ej₂ = 0,51, [aj^⁵ = -29,8°, hozam: 15%;

(LXVII1) H-Tyr-ala-Phe-MePhe-Tyr-Pro-Ser-NH₂ · HC!

NO °C (bomlás közben) (etil-acetát), Rp 0,74, E_1j2 = 0,44, [aJb“²² op.: 210 G (bomlás közben) (etil-acetát), = —49,9° (c = 1 dimetil-formamid), hozam: 17 %;

(LXIX) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Ppa-Ser-NH₂ ’ HCI, op.: 222 °C (bomlás közben) (etil-acetát), Rf = 0,73, Ej_j2 = 0,52, [a]p ~²² = +1,1° (c = 1, metanol), hozam: 16 %;

(LXX> H-Tyr-aIa-Phe-GIy-Tyr-Tia-Ser-NH₂ · 1IC1. Op.: 225—228 °C, (bomlás közben) (dietil-éter), Rf =

0,73, E_J>2 =0,51, [»]f ²² ~ -8,9° (c = 1, metanol), hozam: 15 %;

(LXX1) A) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Apr-Ser-NH-,’HCl 8) H-Tyr-aIa-Phe-Gly-Tyr-APr-Ser-NH₂’HCI

A) op.: 188 °C (bomlás közben) (dietil-éter), Rf = = 0,58, E_1>2 = 0,52, [a]*» = -40,6° (c = 1, metanol), hozam: 18 %

B) op.: 185 °C (bomlás közben) (dietil-éter), Rf = = 0,62, E_1j2 = 0,52, [aj³⁰ =+106,9 (c = 1, metanol) (LXXI1) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe(N0₂)-Pro-Ser-NH₂ ’HCl, Ej ₂ =0,50, hozam; 19%;

(LXXiil) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe(F)-Pro-Ser-NH₂ ’HCl, E_1|2=0,51;

(LXX1V) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Cha-Pro-Ser-NH₂ ’HCl, ^Ei,2 = 0,52;

(LXXV) H-Tyr-ala-Phe-G]y-Plig-Pro-Ser-NH₂ ’ HCI,

Ej,2 * 0.53;

(LXXVf) H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Pro-Abu-NH₂ - HCI,

Ej_>2 = 0,52; hozam: 19%;

(LXXV1Í) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Gly-NH₂ · HCI.

Op.: 179-185 °C (bomlás közben) (metanol/diizopropil-éter), Rf = 0,57, E_{! 2} = 0,51. [a]^ = = + 14,8° (c = 1, metanol), hozam: 19 % (LXXVII1) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-Pro-Ser(Bzl)NH₂ ’HCl. Op.: 160 °C (bomlás közben) (izopropanol/dietil-éter), Rf = 0,81, Ej ₂ = 0,44, [a]p° = = +9,9° (c = 1, metanol), hozam: *20 %;

(LXX1X) H-Tyr-ala-Phc-Gly-Tyr-Pro-Ser(Bzl)-NH₂ ’HCl. Op.: 174 °C (dietil-éter), Rf = 0,79, E_1>2'= 0,48, [a]’⁹~²² =+4,8° (c = 1, metanol), hozam: 19 %;

(LXXX) H-Tyr-ala-Piie-Gly-Tyr-NHAd’HCl. Op.: 160 C (dietil-éter), Rf = 0,90, E_)>2 = 0,52, [a]^⁵ = = + 17,2° (c = 1, metanol), hozam: 26 %;

(LXXX1) 11-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-OH’HCl. Op.: 215 °C (bomlás közben) (izopropanol/dietil-éter), Rf =0,57, E₁₂ = 0,50,[α]θ² =+2,4° (c=l,metanol), hozam: 13 %;

(LXXXII) H-Tyr-aIa-Phe-Gly-Tyr-NHCH₂CF₃ °HC1. Op.: 200-203 °C (kloroform/dietii-éter), Rf - 0,88, Ei ₂ = 0,57, [α}1° =+32,4°, hozam: 27 %;

(LXXXlíl) H-Tyr-ala-Phe-Gly-tyr-NHNHZ’HCI. Op.: 225 °C (dietil-éter), Rf = 0,85, E₁₂ = 0,50, [qj^2S =+48,l°(c= 1, metanol), hozam: 22 %;

(LXXX1V) H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NHNHZ, Rf>0,90, Rp =0,15, E_j>2 =0,53, [ctjp° =+30,6° (c = l,metanol), hozam: 19 (LXXXV) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NHNHPh· HCI. Op.: 220 °C (bomlás közben) (izopropanol/düzopropiléter), Rf = 0,85, E_)<2 = 0,52, [a)p - +8,6° (a szabad bázis, e = I, inétanol), hozam: 23 %;

(LKXXVI) H-Tyr-ala-Phe-GIy Pro-Ser-NH₂ HCI, Rf = = 0.32, Ej ₂ = 0,67, hozam: ! 9 %;

(LXXXV11) H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-NH₂ ’ ’HCl. Op.: 169 °C (bomlás közben) (metanol/etilacetát), Rf = 0,65, E_1>2 = 0,46, [aj|f =+5,4° (c = = 1, metanol).hozam: 22%::

-131

186 749 (LXXXVIII) H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr-Pro-Ser-NHNHj •IlCl. Öp.: 198-200 °C (bomlás közben) (izopropanol/etii-acetát), =0,52, Ej ₂ = 0,86, [α]^ = = -1,4°(c = 1, metanol), hozam: 25 %;

(LXXXIX)_o H-Tyr-ala-Phe-GIy-Met(O)-NH₂’HCl. Op.: 125 °C (bomlás közben) (diizopropil-éter), R^ = = 0,37, Ej ₂'=0,60:

(XC) H-Tyr-ala-Phe-GIy-Nva-NH₂ · PICI. Op.: 210 ^cC (dietil-éter), R^ = 0,70, E_1>2 = 0,63, [αβ⁵ = +27,9° (c = 1, metanol);

(XCI) H-Tyr(Bzl)-ala-Plie-GIy-Tyr-Pro-Ser-NH₂ · IlCl.

Op.: 189-192 °C (bomlás közben) (metanol/diizopropil-éter). = 0,66, Ej ₂ = 0,45.

Megjegyezzük, hogy a hozamadatok a negyedik aminosav kiindulási anyagként alkalmazott reakciókcpes származékán alapulnak, például H-Tyr-ala-Phe-GYp- NHNH₂‘2 HC1.

Claims

1. Eljárás (I) általános képletű

Y í

X-Tyr-A-Phe-B-C-W (í) vegyületek - az (I) általános képletben

X jelentése hidrogénatom vagy terc-butoxikarbonjlcsoport,

Y jelentése hidrogénatom vagy benzílcsoport,

A jelentése D-Ala vagy - amennyiben B = Gly és C vegyi kötés vagy Tyr-Pro-Ser tripeptid A jelentése D-Met vagy D-Met(o) is lehet,

B jelentése Gly vagy — amennyiben C jelentése vegyi kötés, Tyr, Tyr (Bzl)-Pro-Ser vagy Tyr-Pro-Ser tripeptid B jelentése Sár, Phe, Pro, MePhe is lehet,

C jelentése vegyi kötés vagy Tyr-Pro-Ser, Tyr, D-Tyr, Ser, Pro, Leu, Met, Tyr-Ser, Trp-Pro-Ser, Gly-PtoSer, Phe-Hyp-Ser, Phe-Pro-Ser, Tyr-Gly-Ser, TyrVal-Ser, Tyr-Hyp-Ser, Tyr-Ppa-Ser, Tyr-Tia-Ser, Tyr-D-APr-Ser, Tyr-Pro-Abu, TyrPro-Gly, CbaPro-Ser, Pro-Ser vagy Nva, mely csoportokban adott esetben a Tyr vagy Ser csoport hidioxHcsoportja benzilcsoporttal védett,

W hidroxilcsoportot, aminocsoportot, vagy -NHR²vagy -OR^S általános képletű csoportot jelent, ahol

R¹ jelentése 1 -A szénatornos alkilcsoport,

R² jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, adamantil-csoport vagy 2,2,2-trifiuoretiI-csoport - és gyógyászatilag elfogadható sóiknak az előállítására, azzal jellemezve, hogy a fenti aminosavakat vagy aminosav-származekokat vagy jz azokat tartalmazó peptidfrakciókat az (i) általános képletnek megfelelő sorrendben kondenzáljuk, miközben vagy egy terminális karboxilcsoportot vagy egy terminális aminocsoportot akti válunk, míg a többi reakciókcpes csoportokat védőcsoporttal látjuk el, majd adott esetben a védőcsoportokat eltávolítjuk, és kívánt esetben a termékből gyógyászaiilag elfogadható sót képezünk.

(Elsőbbsége: 1979. 09. 20.)

2. Eljárás (1) általános képletű vegyületek

Y

I

X-Tyr-A-Phe-B-C-W (I) az (1) általános képletben

X jelentése hidrogénatom vagy terc-butoxikarbonilcsoport,

Y jelentése hidrogénatom vagy benzílcsoport,

A jelentése D-Ala vagy - amennyiben B = Gly ás C vegyi kötés vagy Tyr-Pro-Ser tripeptid A jelentése D-Met vagy D-Met(o) is lehet,

B jelentése Gly vagy - amennyiben C jelentése vegyi kötés, Tyr, Tyr(Bzl)-Pro-Ser vagy Tyr-Pro-Ser tripeptid B jelentése Sár, Phe,Pro, MePhe is lehet,

C jelentése vegyi kötés vagy Tyr-Pro-Ser, Tyr, D-Tyr, Ser, Pro, Leu, Met, Meí(o), Tyr-Ser, Tyr-Pro, Trp-Pro-Ser, Gly Pro-Ser. Phe-Hyp-Ser, Phe(NO₂)Pro-Ser, Phe(F)-Pro-Ser, Phe-Pro-Ser, Pha-Pro-Ser, Tyr-GIy-Scr, Tyr-Val-Ser, Tyr-Hyp-Ser, Tyr-PpaScr, Tyr-Tia-Scr, Tyr-D-APr-Ser, Tyr-ΔΡι-Ser, TyrPro-Abu, Tyr-Pro-GIy, Cha-Pro-Ser, Pro-Ser vagy Nva, mely csoportokban adott esetben a Tyr- vagy Ser-csoport hidroxilcsoportja benzilcsoporttal védett.

W hidroxilcsoportot, aminocsoportot, hidrazinocsoportoí vagy -NHNHR' általános képletű csoportot jelent, ahol

R' jelentése benzoxikarbonil-, adamantil-oxikarbonil-, terc-butiloxikarbonil-, 2-5 szénatomos alkanoií-, lauroii-, benzojj-, D-tirozil-, D-(N-terc-butiIoxikarbonH)-t!rozil- vagy fenilcsoport — és gyógyászatilag elfogadható sóiknak az előállítására, azzal jellemezve, hogy a fenti aminosavakat vagy aminossv-származékokat vagy az azokat tartalmazó peptidfrakciókat az (I) általános képletnek megfelelő sorrendben kondenzáljuk, miközben vagy egy terminális kárboxilcsoportoí vagy egy terminális aminocsoportot aktiválunk, míg a többi reakcíóképes csoportokat védőcsoporttaí látjuk el, majd adott esetben a védőcsoportokat eltávolítjuk, és kívánt esetben a termékből gyógyászatilag elfogadható sőt képezünk.

(Elsőbbsége: 1980.05.09.) •

3. Eljárás főleg fájdalomcsillapító gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű pepiidet. — az (I) általános képletben X, Y, A,B,C cs W jelentése az 1. igénypont tárgyi körében megadott - vagy annak gyógyászatilag elfogadható sóját a gyógyászatban szokásos hordozó- és segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.

(Elsőbbsége: 1979. 09. 20.)

-14186 749

4. Eljárás főleg fájdalomcsillapító gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű pepiidet - az (I) általános képletben X, Y, A, B, C és W jelentése a 2. igénypont tárgyi körében megadott vagy annak gyógyászatilag elfogadható sóját a gyógyászatban szokásos hordozó- és segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. (1980. 05.09.)