NL1003883C2

NL1003883C2 - Het gebruik van vitamine C of van zijn afgeleide of analoge verbindingen voor het stimuleren van de synthese van elastine in de huid.

Info

Publication number: NL1003883C2
Application number: NL1003883A
Authority: NL
Inventors: Alain Meybeck; Frederic Bonte; Marc Dumas; Catherine Chaudagne
Original assignee: Lvmh Rech
Priority date: 1995-08-25
Filing date: 1996-08-26
Publication date: 1997-02-27
Also published as: DE19680859T1; GB2308811A; FR2737971A1; GB2308811A8; BE1009858A5; ES2129013A1; NL1003883A1; JPH10509735A; CH690489A5; GB2308811B; US5801192A; GB9708362D0; WO1996019099A2; AU5407796A; ES2129013B1; FR2737971B1; ITTO960710A1; CA2202629A1; WO1996019099A3; IT1284758B1

Description

Het gebruik van vitamine C of van zijn afgeleide of analoge verbindingen voor het stimuleren van de synthese van elastine in de huid

De onderhavige uitvinding heeft in hoofdzaak betrekking op het gebruik van ascorbinezuur, in het bijzonder L-ascorbinezuur of vitamine C, of op zijn isomeer iso-ascorbinezuur, ook erythorbinezuur, of op hun 5 zouten of esters voor het stimuleren van de synthese van huidelastine. In de onderhavige beschrijving wordt dit geheel van verbindingen voor de gemakkelijkheid aangeduid onder de soortnaam "ascorbineverbinding".

Vitamine C of L-ascorbinezuur is reeds geruime 10 tijd bekend voor zijn fysiologische werking als anti-scheurbuikmiddel, anti-oxydantia zoals beschreven werd door DORVAULT, 23ste uitgave, pagina 1893, uitgave Vigot, januari 1995 of in de Merck Index 1989, 11de uitgave, onder referentie 855.

15 Het is tevens via het artikel van C.L. Philips et al. in J. Invest. Dermatol. 1994, 103. p. 228-232 bekend dat ascorbinezuur de synthese van collageen door de fibroblasten van de huid van de mens bevoordeelt, waarbij het collageen in hoofdzaak verantwoordelijk is 20 voor de weerstandskwaliteiten van de huid ten opzichte van de spanningen waaraan deze wordt onderworpen.

Uit de publikatie van Grégory C. Sephel et al. in J. Invest. Dermatol. 1986, ££, p. 279-285 is bekend dat de produktie van elastine door de fibroblasten bij 25 oudere donoren vermindert. Het is eveneens bekend dat de huidelasticiteit op een aanzienlijke wijze vermindert met ouderdom zoals beschreven door Takema et al. in British Journal of Dermatology 1994, 131. p. 641-648.

Volgens de onderhavige uitvinding heeft men op 30 een verrassende wijze aangetoond dat ascorbineverbindin-gen zorgen voor een stimulering van de synthese van elastine door fibroblasten van de huid, in het bijzonder de fibroblasten van de menselijke huid.

Men wijst erop dat in de huid de elastische 35 vezels een netwerk vormen dat mede zorgt voor de elasticiteit van de huid en bovendien zorgt voor zijn tonische 1 0038 83 2 werking en voor zijn dichtheid. Elastine is het bestanddeel dat in hoofdzaak aanwezig is in deze vezels. Elastine wordt in het begin gesynthetiseerd door de fibroblas-ten onder de vorm van een oplosbaar 70 kDa, het tropo-5 elastine. De vorming van de microvezels wordt vervolgens verkregen door de intramoleculaire binding, .welke desmo-sinen genoemd worden, tussen de lysineverbinding van de polypeptideketen. Deze verbinding verleent aan elastine een grote onoplosbaarheid.

10 Aldus is het de bedoeling door de onderhavige uitvinding dit nieuwe technische probleem op te lossen, welke bestaat in het verschaffen van een oplossing welke een verbeterd^ elasticiteit voor de huid toelaat door het bevorderen van’ de synthese van elastine en dit volgens 15 een oplossing met een eenvoudig concept, en welke gebruiksvriendelijk op een industriële schaal is te vervaardigen en welke zowel een kosmetische en/of een farmaceutische, en in het bijzonder een dermatologische toepassing kent.

20 Volgens een eerste aspect van de onderhavige uitvinding heeft de uitvinding betrekking op het gebruik van ascorbinezuur, in het bijzonder het L-ascorbinezuur of vitamine C, of zijn isomeer erythorbinezuur of op hun zouten of esters, die onder de algemene soortnaam als 25 ascorbineverbindingen.worden aangeduid, als kosmetisch middel bestemd voor het stimuleren van de synthese van elastine door de fibroblasten van de huid, voor het in het bijzonder verbeteren van de elasticiteit van de huid, de toniciteit van de huid of het bevoordelen van verster-30 king van de huid.

De uitvinding heeft volgens een tweede aspect eveneens betrekking op het gebruik van ascorbinezuur, in het bijzonder L-ascorbinezuur of vitamine C, of op zijn isomeer erythorbinezuur of op hun zouten of esters, 35 aangeduid onder de soortnaam als ascorbineverbindingen, voor de bereiding van een farmaceutische samenstelling in het bijzonder een dermatologische samenstelling die bestemd is voor het stimuleren van de synthese van elas- 3

Cine door de fibroblasten van de huid in het bijzonder de huidelasticiteit, de huidtoniciteit of de huidsterkce ce verbeteren.

Het moge duidelijk wezen dat de hierboven 5 genoemde ascorbineverbindingen eveneens kunnen worden gebruikt als een geneesmiddel, eveneens als .preventiemid-del ter verbetering of voor het vermijden van .het verlies-aan elasticiteit, toniciteit of dichtheid van de huid, die in het bijzonder ontstaat door veroudering of door 10 blootstelling aan ultraviolet stralen.

Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm wordt de algenoemde ascorbineverbinding toegepast door het plaatselijk toedienen in een concentratie die gelegen is tussen 0,001 en 5-gewicht% ten opzichte van het gewicht 15 van de volledige samenstelling in een aangepast kosme-tisch of farmaceutisch, in het bijzonder dermatologisch excipiênt, overbrengingsmiddel of aangepaste drager. Een voorkeursconcentratie is gelegen tussen 0,01 en 1-ge-wicht% ten opzichte van het totale gewicht van de samen-20 stelling welke deze bevat.

Volgens een bijzondere uitvoeringsvorm wordt de algenoemde ascorbineverbinding gekozen uit de groep welke bestaat uit ascorbinezuur, natriumascorbaat, magnesiumas-corbaat, natriumascorbylfosfaat, magnesiumascorbylfos-25 faat, erythorbinezuur, natriumerythorbaat, magnesiumeryt-horbaat en de zure, propionische en palmitine zuren van ascorbine- en erythorbinezuren.

Volgens een voordelige uitvoeringsvorm van de uitvinding wordt de ascorbineverbinding volgens de uit-30 vinding in een combinatie gebruikt met een geschikte hoeveelheid van een actief bestanddeel voor het stimuleren van de synthese van de componenten van de extracellu-laire matrix van de huid, waaronder collageen, in het bijzonder het collageen I en het collageen III en de 35 glycosaminoglycanen.

Als een voorbeeld maakt men gebruik van het actief bestanddeel welke de synthese stimuleert van collageen, in het bijzonder van collageen I en collageen 1003883 4 III, het madecassoside, een extract van Centella asiati-ca, of een ginsengextract, in het bijzonder een extract welke het ginsenoside R0 omvat, welke actief bestanddeel een concentratie heeft tussen 0,01 en 5-gewicht% ten 5 opzichte van het gewicht van de uiteindelijke samenstel-ling.

'Als een voorbeeld voor het actieve bestanddeel voor de stimulatie van de synthese van de g-lycosaminogly-canes gebruikt men een plantaardig extract zoals een 10 Filicium decipiens extract, in het bijzonder een extract uit de schors van de wortel van deze plant, beschreven in de Franse octrooiaanvrage 95 07708, of een groeifactor in het bij zonder het PDGF (platelet derived growth factor), een groeifactor afgeleid van de bloedplaatjes.

15 Volgens een andere voorkeursuitvoeringsvorm wordt de algenoemde ascorbineverbinding gebruikt in combinatie met een vitamine, in het bijzonder vitamine A, zijn palmitine, propionine of zure ester of het vicamine E en zijn afgeleiden, in het bijzonder in een concentra-20 tie die gelegen is tussen 0,0001 en 5-gewicht% ten opzichte van het totale gewicht van de samenstelling.

Volgens een derde aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een werkwijze voor de kosmeti-sche of therapeutische behandeling van de huid welke 25 bestemd is voor het voorkomen of voor het corrigeren van een verlies aan elasticiteit, toniciteit of van de dichtheid van de huid, die gekenmerkt is door het omvatten van een aanbrenging op de zones van de te behandelen huid een werkzame hoeveelheid van een ascorbineverbinding gekozen 30 uit de groep die gevormd wordt door ascorbinezuur, in het bijzonder L-ascorbinezuur of vitamine C, erythorbinezuur, en hun zouten en esters die kosmetisch of farmaceutisch aanvaardbaar zijn, voor het stimuleren van de synthese van elastine door de fibroblasten waarbij de ascorbine-35 verbinding wordt ingebracht in een geschikt kosmetisch of farmaceutisch excipiënt.

De uitvoeringsvormen van deze werkwijze hebben eveneens duidelijk betrekking op de algenoemde uitvoe- 1003883 5 ringsvormen voor het gebruik ervan. De uitvinding heeft tevens betrekking op een therapeutisch middel voor het gebruik en volgens de werkwij ze.

Dit heeft tot gevolg dat de ascorbineverbindin-5 gen volgens de uitvinding belangrijk zijn voor de vervaardiging van een kosmetische samenstelling of een farmaceutische samenstelling, in het bijzonder een dermatologische, waarbij men een verbetering van. de huidelas-ticiteit wil verkrijgen.

10 De vakman begrijpt dat het belangrijkste voor deel volgens de uitvinding het bevoordelen van de synthese van elastine is en de gemakkelijkheid van de toepassing ervan dankzij een plaatselijke toediening op de huid.

15 Volgens een vierde aspect heeft de onderhavige uitvinding eveneens betrekking op een werkwijze voor de bereiding van een artificiële huid die verkregen wordt door een cultuur fibroblasten, welke gekenmerkt wordt door het gebruik gedurende tenminste een stap van een 20 cellulaire cultuur met een werkzame hoeveelheid van een ascorbineverbinding zoals hierboven werd gedefinieerd, voor de vergroting van de elastine-inhoud van de artificieel aldus verkregen huid.

Volgens een voordelige uitvoeringsvorm, zijn de 25 fibroblasten die worden gebruikt voor de bereiding van de artificiële huid, fibroblasten van de menselijke huid.

Volgens een andere uitvoeringsvorm wordt de ascorbineverbinding ingebracht in een cellulair cultuur-middenstof, welke bij voorkeur een concentratie heeft 30 tussen 5 micromol per liter en 150 micromol per liter van het middenstof, of bij voorkeur tussen 10 micromol per liter en 50 micromol per liter van het middenstof.

Men kan bijvoorbeeld gebruik maken van een cultuurmiddenstof, of medium welke in de handel verkrijg-35 baar is en in het algemeen wordt gebruikt voor fibro-blastculturen zoals het middenstof MEM, waaraan men een werkzame concentratie van de ascorbineverbinding, in het bijzonder bijvoorbeeld natriumascorbaat, in het bijzonder 1 ;· r q ·; ·' - v. J V. w' 6 een concentratie die gelegen is tussen de waarden die hieronder zijn weergegeven toevoegt.

Andere doelen, kenmerken en voordelen van de onderhavige uitvinding worden verduidelijkt aan de hand 5 van de hieronder weergegeven verklarende beschrijving waarbij verwezen wordt naar de voorbeelden die enkel als niet limitatieve voorbeelden volgens de uitvinding zijn.

In de voorbeelden zijn alle percentages indien niet anders gespecifieerd weergegeven als gewichtpercen-10 tages.

Voorbeeld 1

Voorbeeld van-een proef welke de stimulatie voor de synthese van elastine door de fibroblasten van de mense-15 liike huid aantoont

Het materiaal en de werkwijzen De herkomst van de cellen:

Voor deze studie maakt men gebruik van een normale menselijke fibroblaststam (NMF) afkomstig van de 20 chirurgisch verkregen huid van het aangezicht van een vrouw van 50 jaar. Deze cellen worden verkregen door de werkwij ze voor de explantatie zoals beschreven door Dumas M. et al. in het artikel met als titel "in vitro biosynthesis of type I and III collagens by human dermal fibro-25 blasts from donors of. increasing ages" in Mech. Ageing Dev. 21, (1994), p. 179-187.

Bereiding van de oplossingen voor de te testen nrodukten: Deze van de mens afkomstige normale huidfibro-30 blasten die aldus worden verkregen, worden in een holte van een meerdere holten omvattende cultuurplaat gebracht in een cultuurmiddenstof E 199, waaraan men 2 millimol per liter L-glutamine toevoegt.

24 uur na enten, krijgen verschillende holten 35 een toevoeging van natriumascorbaat met 25 of 150 micro-mol per liter, of natriumascorbylfosfaat in een concentratie van 25 of 150 micromol per liter.

< 7

Men maakt gebruik van zes holten voor elk produkt en voor elke concentratie evenals zes holten die geen te testen produkt ontvangen als referentiecultuur.

De cultuur wordt gedurende 48 uur gevolgd.

5 Na 48 uur cultuurvorming zoals hierboven werd weergegeven doseert men over de overleving van de gese- . creerde elastinecultuur volgens de ELISA-methode afgeleid· van het gebruik voor een kwantificering- van- het collageen welke beschreven is door Dumas. M. et al. in de publika-10 tie die hierboven reeds werd genoemd, met een nauwkeurigheid van een in de handel verkrijgbare menselijk afkomstige polycyclonale anti-elastine antilichaam die worden gebruikt in d^ plaats van de menselijke afkomstige anti-collageen I en II polycyclonale antilichamen.

15 Deze dosering wordt natuurlijk verkregen met andere referentieculturen waaraan geen produkt werd toegediend.

Een uitgebreid gamma in de handel verkregen oplosbaar elastine laat toe een elastine-nanogram op te 20 stellen met waarden van een optische densiteit (OD) die verkregen wordt via de cultuurenten.

Dosering van de proteïnen:

Parallel aan de dosering van elastine wordt een 25 dosering van de cellulaire proteïnen uitgevoerd op de fibroblastculturen na eliminatie van het afgescheiden deel voor het brengen van de gedoseerde hoeveelheid elastine naar een vaste hoeveelheid cellulaire proteïnen. De dosering wordt uitgevoerd door het gebruik van de kit 30 BCA-1 (Bicinchoninic acid kit, in de handel gebracht door Sigma, Frankrijk) na oplossing van het cellulaire tapijt door 0,1 N soda.

Weergave van de resultaten en de gebruikte statistiek: 35 De resultaten worden uitgedrukt in nanogram uitgescheiden elastine door een microgram cellulair proteïne. De kracht A van de stimulatie wordt uitgedrukt 1003883 8 in een percentage berekend volgens de hierna weergegeven formule: q-q» 5 A = ----x 100 qo waarin: q de uitgescheiden hoeveelheid elastine door de behandelde NMF weergeeft, 10 qo de uitgescheiden hoeveelheid elastine door de referentie NMF weergeeft.

De verkregen resultaten op de behandelde culturen (n»6) en 4e referentieculturen (n=6) worden vergeleken met behulp van de test t van Student voor niet gekop-15 pelde series. Elke waarde van p<0,05 duidt op een significant bestaand verschil tussen de elastine-afscheiding van de NMF-referentie en van de behandelde met de produk-ten volgens de uitvinding.

Tabel I toont de proefresultaten met natriumas-20 corbaat in tegenstelling tot tabel II welke de resultaten met magnesiumascorbylfosfaat afgekort VCPMg genoemd, welke een kosmetisch bruikbare verbinding van vitamine C is.

25 TABEL I

Experimentele Uitgescheiden elastine A-activiteit in % Test t van Student voorwaarden ng/pg prot/48 u t σ* p-waarden

Referentie ronder 12,9 ±1,6 2 0 natriumascorbaat

Natriumascorbaat 23,9±2,4 85 <0,0001 25 μΜ

Natriumascorbaat 29 J ±4,2 127 <0,0001

150 pM

35 -=^=-==-====^ *σ: het verschilsoort of standaarddeviatie 1003883 9

TABEL II

Experimentele Uitgescheiden elastine A-activiteit in % Test t van Student voorwaarden ng/pg proc/48 u + σ p-waarden 5 Referentie zonder 12,4±1,6 VCPMg VCPMg 25 pM 293+3,8 137 <0,0001 VCPMg 105 pM 33,7+43 171 <0,0001 10 Conclusie

Zoals weergegeven in tabel I en II, stimuleren op een krachtige wijze natriumascorbaat evenals magnesi-umascorbylfosfaat (VCPMg) op een krachtige wijze de synthese van elastine. Deze stimulatie verhoogt met de 15 concentratie van het geteste produkt.

Men merkt eveneens dat de weergegeven proeven de activiteit voor de stimulatie van de synthese voor elastine maximaal is (+ 171%) in het geval de behandelde culturen met magnesiumascorbylfosfaat werden behandeld 20 wat opmerkzaam is in vergelijking met de activiteit die minimaal is met 85% in het geval waar de cultuur behandeld wordt met natriumascorbaat 25 μΜ, wat eveneens verwonderlijk is. Aldus heeft men aangetoond dat het gebruik van ascorbinezuur of een van zijn afgeleide 25 verbindingen in het bijzonder zijn zouten of esters een stimulatie toelaat voor de synthese van elastine door de fibroblasten op een significante wijze wat bijzonder verrassend is.

30 Voorbeelden van de toepassingen

De samenstellingen zijn hieronder weergegeven als ge-wichtsprocenten.

Voorbeeld 2

Een gel voor de verzorging van het aangezicht: 35 1003883 10 magnesiumascorbylfosfaat ............. 2 hydrogeneerde lecithine .............. l hyaluronzuur ................... 1 carbonpol 941................... 1,25 5 water + bewaarmiddel + triethanolamine.......... aanvullen tot 100

Door een tweemaaldaags lokale toepassing onderaan het aangezicht en de hals van dit verzorgingsprodukt welke 10 een verbeterde en een behoud van de dichtheid en van de toniciteit van de huid van het aangezicht en een vermindering van de rimpels en kraaipoten tot gevolg.

t

Voorbeeld 3 15 Versterkende crème voor het aangezicht: propyleenglycol .................. 1 glycerylstearaat PEG 100............. 2 natrium lauryl sulfaat glycerylstearaat ...... 4 20 glyceryl stearaat ................. 3 cetyl alcoholl.................. 1 capril/capric triglyceryl ............. 3 octyl stearaat.................. 2 advocaatolie ................... 1 25 camelia-olie .................... 1 ascorbyl palmitaat ................ 0,5 palmitaat van vitamine A............. 0,01 tarwe glycoceramiden............... 0,1 melkzuur..................... 0,5 30 Carbopol 940 ................... 0,5 magnesium ascorbylfosfaat ............. 1 water + bewaarmiddel + geurstoffen. . aanvullen tot 100

Deze crème wordt toegepast 's morgens en 's 35 avonds en geeft aan het aangezicht een elasticiteit met een goede toniciteit en een gesloten aspect uiterlijk.

Voorbeeld 4 1 003883 11

Melk voor de verzorging van het lichaam: plantaardige olie ................. 2 caprylic/capric triglyceride ........... 5 5 acetaat van vitamine E.............. 0,56 carbomer..................... 0,-5 xanthaangöm......·.......0,20 hyaluronzuur................... 0,15 natrium erythorbaat................ 0,9 10 ginsengextract.................. 0,1 centella asiatica-extract ............. 0,1 groene thee-extract ................ 0,05 water + bewaarmiddel + verfrissend middel + geurstoffen....... aanvullen tot 100 15

Voor het vermijden van elk risico voor een degradatie van de oxydeerbare bestanddelen in het bijzonder voor natriumerythorbaat wordt deze samenstelling bij voorkeur vervaardigd afgezonderd van elk zuurstofcontact 20 in het bijzonder van de lucht.

Een toepassing op de borststreek 's avonds gedurende een 20-dagenkuur met massage laat toe aan de weefsels van de borststreek hun elasticiteit te bewaren.

25 Voorbeeld 5

Versterkende lotion voor het aangezicht

Deze lotion wordt verkregen door een peroperatief van 5 ml lotion A met 100 mg natrium L-ascorbaat.

30 Lotion A

madecassoside ..................... l ginsenoside R0 ....................l waterige oplossing met 1% hyaluronzuur ........ l glycerol ....................... 2 35 water + bewaarmiddel ......... aanvullen tot 100

Deze versterkende lotion kan worden gecommercialiseerd bijvoorbeeld in de vorm van een flacon met 8 ml 4 r, e·. r \ <. '·< 12 welke 100 mg poeder natrium L-ascorbaat omvat en een verzegelde ampule welke 5 ml lotion A bevat. Bij het gebruik wordt de inhoud van de ampule in de flacon overgebracht en schud men tot een oplossing van de het poe-5 der.

Deze extemparaneuse bereiding welke dagelijks wordt gebruikt, verbetert de elasticiteit van de huid van het aangezicht en heeft aldus een versterkende werking.

De uitvinding heeft eveneens betrekking op alle 10 technische equivalenten van de middelen die hierin werden beschreven evenals hun verscheidenheid aan combinaties.

Claims

1. Gebruik van ascorbinezuur, in het bijzonder van L-ascorbinezuur of vitamine C, of van zijn isomeer erythorbinezuur of van hun zouten of esters, welke worden aangeduid met de soortnaam ascorbineverbindingen, als 5 kosmetisch middel bestemd voor het stimuleren van de synthese van elastine door de fibroblasten van de huid, voor een verbetering in het bijzonder van de huidelasti-citeit, van de toniciteit van de huid of voor het bevorderen van de versterking van de huid.

2. Gebruik van ascorbinezuur, in het bijzonder van L-ascorbinezuur of vitamine C, of van zijn isomeer erythorbinezuur of van hun zouten of esters, welke worden aangeduid met de algemene soortnaam als ascorbineverbindingen, voor de bereiding van een farmaceutische samen-15 stelling, in het bijzonder van een dermatologische samenstelling die bestemd is voor het stimuleren van de synthese van elastine door fibroblasten van de huid voor het verkrijgen van een verbetering van de elasticiteit van de huid in het bijzonder, de toniciteit van de huid of voor 20 de bevordering van de versterking van de huid.

3. Gebruik volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk, dat de algenoemde ascorbineverbinding plaatse-lijk wordt toegepast met een concentratie gelegen tussen 0,001 en 5-gewicht% ten opzichte van het totale gewicht 25 van de samenstelling welke een aangepast excipiënt, transportelement of drager omvat, in het bijzonder welke kosmetisch of farmaceutisch in het bijzonder dermatologisch aangepast is.

4. Gebruik volgens conclusie 3, met het ken-30 merk, dat de algenoemde ascorbineverbinding wordt gebruikt in een concentratie die gelegen is tussen 0,01 en l-gewicht% ten opzichte van het volledige gewicht van deze samenstelling.

5. Gebruik volgens één van de conclusies 1 tot 35 4, met het kenmerk,dat de algenoemde ascorbineverbinding wordt gekozen uit de groep omvattende ascorbinezuur, ^0 o tv ^ natriumascorbaat, magnesiumascorbaat, magnesium of natrium ascorbylfosfaat, erythorbinezuur, natrium erythorbaat, magnesium erythorbaat en hun zure esters, propioon- en palmitine-esters van ascorbine- en erythorbinezuren.

6. Gebruik volgens één van de voorgaande con clusies, met het kenmerk, dat de algenoemde ascorbinever-binding wordt gebruikt in een combinatie met een aangepaste hoeveelheid van een actief bestanddeel welke de synthese van de componenten van de extracellulaire matrix 10 van de huid stimuleren welke collageen is in het bijzonder collageen I en III en de glycosaminoglycanen.

7. Gebruik volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat de algenoemde ascorbineverbinding wordt gebruikt in combinatie met een actief bestanddeel welke de 15 synthese van collageen in het bijzonder van collageen I en collageen III stimuleert, gekozen uit de groep welke omvat het madecassoside, een extract van Centella asiati-ca, een ginsengextract, in het bijzonder het ginsenoside R0 omvattende, in een concentratie van 0,01 tot 5-ge-20 wicht%.

8. Gebruik volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat de algenoemde ascorbineverbinding wordt gebruikt in combinatie met een actief stimulerend bestanddeel voor de synthese van glycosaminoglycanen, gekozen 25 uit de groep welke een extract omvat van Filicium deci-piens, in het bijzonder een extract uit de korst van de wortel van deze plant, en het PDGF (platelet derived growth factor).

9. Gebruik volgens één van de voorgaande con-30 clusies, met het kenmerk, dat de algenoemde ascorbineverbinding wordt gebruikt in combinatie met vitaminen, in het bijzonder met vitamine A, zijn palmitine-ester, propionine-ester, of zijn zure ester, of het vitamine E en zijn afgeleide verbindingen, in een concentratie van 35 0,0001 tot 5-gewicht%.

10. Werkwijze voor de kosmetische behandeling bestemd voor het voorkomen of voor het corrigeren van een verlies aan elasticiteit, toniciteit of dichtheid van de huid, met het kenmerk, dat deze de toepassing omvat op de zones van de huid die dienen te worden behandeld met een werkzame hoeveelheid van een ascorbineverbinding gekozen uit de groepen die worden gevormd door ascorbinezuur, in 5 het bijzonder L-ascorbinezuur of vitamine C, erythorbine-zuur, hun zouten en esters die kosmetisch aangepast zijn voor het stimuleren van de synthese van elastine door de fibroblasten van de huid, waarbij de ascorbineverbinding wordt ingebracht in een kosmetisch aangepast excipiënt.

11. Werkwijze voor de bereiding van een artifi cieel verkregen huid door een cultuur fibroblasten, met het kenmerk, dat men gedurende tenminste een stap van de cellulaire cultuur een werkzame hoeveelheid ascorbineverbinding welke hierboven genoemd werd, toepast voor de 15 verhoging van de hoeveelheid elastine van de aldus bereide artificiële huid.

12. Werkwijze volgens conclusie ll, met het kenmerk, dat men een cultuur fibroblasten van de menselijke huid verkrijgt.

13. Werkwijze volgens conclusie 11 of 12, met het kenmerk, dat de algenoemde ascorbineverbinding wordt ingebouwd in een cellulaire cultuuromgeving in een concentratie gelegen tussen 5 en 150 micromol per liter middenstof of bij voorkeur gelegen tussen 10 en 50 micro-25 mol per liter middenstof.

14. Werkwijze volgens één van de conclusies 11 tot 13, met het kenmerk, dat de ascorbineverbinding die wordt gebruikt natriumascorbaat is.

15. Preparaat, geschikt voor toepassing in het 30 gebruik volgens één van de conclusies 1-9 of in de werkwijze volgens één van de conclusies 10-14.