JP5679684B2 - Danceタンパク質含有組織再生用基材 - Google Patents
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Description
DANCEタンパク質含有組織再生用基材は、コラーゲン溶液を凍結乾燥した後に架橋処理することによりコラーゲンスポンジを作製し、これにDANCEタンパク質を含有するコラーゲン水溶液を含浸させた後、さらに凍結乾燥して製造することができる。
上記DANCEタンパク質含有組織再生用基材に、皮膚細胞を播種し、培養することにより培養皮膚を調製することができる。これを、動物又は人に移植して、弾性線維組織が構築された皮膚を再生することができる。
コラーゲン(新田ゼラチン(株)製、製品名Cellmatrix TypeI−P)を原料とし、0.3重量%、pH3のコラーゲン水溶液を調整した。
細胞はヒト皮膚を処理することによって得られたヒト線維芽細胞を用いた。線維芽細胞を10%ウシ血清添加DMEM培地にて培養し、フルコンフルエントになった細胞をトリプシン処理によって回収した。得られたヒト線維芽細胞を10%ウシ血清添加DMEM/F12培地に懸濁し、線維芽細胞懸濁液を調製した。
コラーゲン(新田ゼラチン(株)製、製品名Cellmatrix TypeI−P)を原料とし、0.3重量%、pH3のコラーゲン水溶液を調整した。
比較例1で得られたDANCEタンパク質を含まないコラーゲンスポンジを用いて、実施例2と同様にして培養皮膚の構築を試み、移植後4週間目に移植した部位の組織を摘出し、ホルマリン固定した後にパラフィンブロックを作製した。
コラーゲン(新田ゼラチン(株)製、製品名Cellmatrix TypeI−P)を原料とし、0.3重量%、pH3のコラーゲン水溶液を調整した。
比較例3で得られた熱架橋を加えていないコラーゲンスポンジを用いて、実施例2と同様にして培養皮膚の構築を試みた。しかし、該スポンジに線維芽細胞懸濁液を添加した後、基材のスポンジはゲル状となってしまい、細胞を含有させることができなかったために、培養皮膚を構築することはできなかった。
凍結乾燥されたDANCEタンパク質(ヒト由来)の粉末4μgを蒸留水で溶解し、10μg/mLのDANCEタンパク質水溶液を作製した。
比較例5で得られた熱架橋を加えていないコラーゲンスポンジを用いて、実施例2と同様にして培養皮膚の構築を試みた。しかし、該スポンジに線維芽細胞懸濁液を添加した後、基材のスポンジはゲル状となってしまい、細胞を含有させることができなかったために、培養皮膚を構築することはできなかった。
実施例2及び比較例2で作製された培養皮膚について、組織切片を作製しEVG(Elastica Van Gieson)染色法を用いて弾性線維組織の存在を評価した。図1は実施例2で作製された培養皮膚のEVG染色組織切片像であり、図2は図1の中で四角く囲まれた部分を拡大した組織切片像である。図3は比較例2で作製された培養皮膚のEVG染色組織切片像であり、図4は図3の中で四角く囲まれた部分を拡大した組織切片像である。
Claims (8)
- DANCEタンパク質含有組織再生用基材の製造方法であって、架橋されたコラーゲンスポンジにDANCEタンパク質含有コラーゲン溶液を含浸させ、その後に凍結乾燥することを特徴とする製造方法。
- 前記DANCEタンパク質含有コラーゲン溶液中、DANCEタンパク質の濃度が1〜10,000ng/mlであり、コラーゲンの濃度が0.1〜1重量%である請求項1に記載の製造方法。
- 前記DANCEタンパク質含有コラーゲン溶液がさらにムコ多糖類を含有する請求項1又は2に記載の製造方法。
- 前記請求項1〜3のいずれかに記載の製造方法により製造されるDANCEタンパク質含有組織再生用基材。
- 弾性線維組織を含有する培養皮膚を構築するために用いる請求項4に記載のDANCEタンパク質含有組織再生用基材。
- 弾性線維組織を含有する培養皮膚の製造方法であって、請求項4に記載のDANCEタンパク質含有組織再生用基材に皮膚細胞を播種し培養することを特徴とする製造方法。
- 前記請求項6に記載の方法で製造される弾性線維組織を含む培養皮膚。
- 弾性線維組織を含有する皮膚を再生する方法であって、請求項4に記載のDANCEタンパク質含有組織再生用基に皮膚細胞を播種し培養することを特徴とする再生方法。
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