JPH01158963A - 細胞増殖因子含有コラーゲンマトリックスの製造法 - Google Patents
細胞増殖因子含有コラーゲンマトリックスの製造法Info
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- JPH01158963A JPH01158963A JP62317326A JP31732687A JPH01158963A JP H01158963 A JPH01158963 A JP H01158963A JP 62317326 A JP62317326 A JP 62317326A JP 31732687 A JP31732687 A JP 31732687A JP H01158963 A JPH01158963 A JP H01158963A
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- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、コラーゲンマトリックスに関する。
さらに詳しくは、本発明は、コラーゲンからなり、細胞
増殖因子を含有するコラーゲンマトリックスに関する。
増殖因子を含有するコラーゲンマトリックスに関する。
本発明のコラーゲンマトリックスは、生体適合性が高く
免疫原性がない上、細胞増殖を促進しうるので、人工皮
膚等の医用材料や細胞増殖用の培地として有用である。
免疫原性がない上、細胞増殖を促進しうるので、人工皮
膚等の医用材料や細胞増殖用の培地として有用である。
［従来の技術およびその問題点］
近年、未変性コラーゲンの抗原性のほとんどを占めるテ
ロペプチドをペプシン等の作用によって除去したアテロ
コラーゲンの応用が研究されており、アテロコラーゲン
をコラーゲンマトリックスに用いることも報告されてい
る。
ロペプチドをペプシン等の作用によって除去したアテロ
コラーゲンの応用が研究されており、アテロコラーゲン
をコラーゲンマトリックスに用いることも報告されてい
る。
一方、細胞増殖因子、例えばある種のホルモン、糖質コ
ルチコイド、上皮細胞成長因子を細胞の培養系に適量加
えると、細胞の増殖速度が著しく促進することが知られ
ている。
ルチコイド、上皮細胞成長因子を細胞の培養系に適量加
えると、細胞の増殖速度が著しく促進することが知られ
ている。
しかし、上記因子を培地に加えた場合にはその効果に持
続性がなく、一過性であるためときどき該因子の補給が
必要であり、さらに培地の交換時ごとに新たに添加しな
ければならない不便さがあった。本発明者らは、鋭意研
究の結果この細胞増殖因子をコラーゲンのマトリックス
中に含有させることによって、その効果を持続させ得る
ことを見出した。
続性がなく、一過性であるためときどき該因子の補給が
必要であり、さらに培地の交換時ごとに新たに添加しな
ければならない不便さがあった。本発明者らは、鋭意研
究の結果この細胞増殖因子をコラーゲンのマトリックス
中に含有させることによって、その効果を持続させ得る
ことを見出した。
［問題点を解決するための手段］
本発明は上記の知見に基づいて完成されたものであり以
下の構成を有する。
下の構成を有する。
１）コラーゲンからなり、全重量の約０．１重量％以上
ＩＯ重量％未満の細胞増殖因子を含有するマトリックス
からなることを特徴とするコラーゲンマトリックス。
ＩＯ重量％未満の細胞増殖因子を含有するマトリックス
からなることを特徴とするコラーゲンマトリックス。
２）コラーゲンがアテロコラーゲンである第１項に記載
のコラーゲンマトリックス。
のコラーゲンマトリックス。
３）細胞増殖因子が、インシュリン、ハイドロコーチゾ
ン、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはウロガストロン
である第１項または第２項に記載のコラーゲンマトリッ
ク、ス。
ン、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはウロガストロン
である第１項または第２項に記載のコラーゲンマトリッ
ク、ス。
４）細胞増殖因子の含有比が、全体の０．２〜３重量％
である第１項ないし第３項のいずれかの項に記載のコラ
ーゲンマトリックス。
である第１項ないし第３項のいずれかの項に記載のコラ
ーゲンマトリックス。
本発明のコラーゲンマトリックスに使用されるコラーゲ
ンは、アテロコラーゲンが好適である。
ンは、アテロコラーゲンが好適である。
アテロコラーゲンは、コラーゲンのほとんどの抗原性を
占めるテロペプチドがペプシン等のプロテアーゼによる
加水分解によって除去されたものである。
占めるテロペプチドがペプシン等のプロテアーゼによる
加水分解によって除去されたものである。
アテロコラーゲンは、このようにテロペプチドが除去さ
れているので、免疫原性がなくまた生体適合性も高い。
れているので、免疫原性がなくまた生体適合性も高い。
本発明において、マトリックスとは格子構造をもつ物質
を意味し、代表例としては、スポンジなどがあげられる
。
を意味し、代表例としては、スポンジなどがあげられる
。
本発明で用いられる細胞増殖因子は、皮膚細胞である表
皮細胞と線維芽細胞の増殖を直接的または間接的に促進
しうるちのであれば特に制限はなく、インシュリン、ハ
イドロコーチゾン、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ） 、ウ
ロガストロン、等が挙げられ、特にインシュリン、ハイ
ドロコーチゾン、上皮細胞成長因子（Ｅ Ｇ Ｆ）ウロ
ガストロンは好適に用いられる。
皮細胞と線維芽細胞の増殖を直接的または間接的に促進
しうるちのであれば特に制限はなく、インシュリン、ハ
イドロコーチゾン、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ） 、ウ
ロガストロン、等が挙げられ、特にインシュリン、ハイ
ドロコーチゾン、上皮細胞成長因子（Ｅ Ｇ Ｆ）ウロ
ガストロンは好適に用いられる。
インシュリンは、スイ臓中のランゲルハンス島のＢ細胞
から分泌される、グロブリンに属するホルモン作用をも
つタンパク質である。インシュリンは、いろいろな細胞
種に対して、ゆっくりと働いて持続的に増殖能を支える
作用を有する因子である。
から分泌される、グロブリンに属するホルモン作用をも
つタンパク質である。インシュリンは、いろいろな細胞
種に対して、ゆっくりと働いて持続的に増殖能を支える
作用を有する因子である。
ハイドロコーチゾンは、糖新生作用のある副腎皮質ホル
モンの１つであり、副腎皮質から単離され、コルチゾン
、１７α−オキシ−１１−デオキシコルチコステロンそ
の他の化合物から合成されている。ハイドロコルチゾン
は、細胞増殖抑制作用を有しく高濃度投与）、一方では
、細胞増殖促進作用も有する（低濃度投与）ことが知ら
れている。
モンの１つであり、副腎皮質から単離され、コルチゾン
、１７α−オキシ−１１−デオキシコルチコステロンそ
の他の化合物から合成されている。ハイドロコルチゾン
は、細胞増殖抑制作用を有しく高濃度投与）、一方では
、細胞増殖促進作用も有する（低濃度投与）ことが知ら
れている。
体中のほとんど全ての組織や細胞に対して、作用するホ
ルモンである。従って抗炎症、抗アレルギー薬等として
のみならず、創傷の治癒などにも使用されている。
ルモンである。従って抗炎症、抗アレルギー薬等として
のみならず、創傷の治癒などにも使用されている。
上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）は、マウス顎下腺より分離
された、上皮細胞の増殖を促進する因子であり、マウス
ＥＧＦ （ｍＥＧＦ）は、５３個のアミノ酸からなるペ
プチドである。皮膚、舌、食道等の上皮組織の細胞増殖
と分化の促進などの作用を有している。
された、上皮細胞の増殖を促進する因子であり、マウス
ＥＧＦ （ｍＥＧＦ）は、５３個のアミノ酸からなるペ
プチドである。皮膚、舌、食道等の上皮組織の細胞増殖
と分化の促進などの作用を有している。
ウロガストロンは、ヒト尿中より単離されたヒト上皮細
胞増殖因子のことであり、上記マウスＥＧＦとは、５３
個のアミノ酸のうち１６個を異にする。ウロガストロン
は、胃液分泌抑制作用とともに細胞増殖作用を有してお
り、創傷治療薬としての用途が期待されている。
胞増殖因子のことであり、上記マウスＥＧＦとは、５３
個のアミノ酸のうち１６個を異にする。ウロガストロン
は、胃液分泌抑制作用とともに細胞増殖作用を有してお
り、創傷治療薬としての用途が期待されている。
以上説明したように、インシュリン、ハイドロコーチゾ
ン等のホルモンは、細胞に対する種々の効果、特に細胞
増殖効果が期待されている。なかでもハイドロコーチゾ
ンは、今や創傷治癒における炎症抑制に欠かせない薬物
とされている。
ン等のホルモンは、細胞に対する種々の効果、特に細胞
増殖効果が期待されている。なかでもハイドロコーチゾ
ンは、今や創傷治癒における炎症抑制に欠かせない薬物
とされている。
培養系におけるインシュリン及びハイドロコーチゾンに
対する増殖効果を第１図に示す。第１図中、縦軸は細胞
数を示し、横軸は培養時間を示す。
対する増殖効果を第１図に示す。第１図中、縦軸は細胞
数を示し、横軸は培養時間を示す。
−〇−はハイドロコーチゾン（Ｈｅ）とインシュリン（
Ｉ ｎｓ）を添加しない場合を示し、−ローはＩｎｓの
みをＩＯμｇ／ｍｌ、−Δ−はＨｅのみを１０ｕｇ／ｒ
ｒｄ、−・−はＨｅを１ ｕ ｇ／ｍ１ＳＩ ｎｓをＩ
Ｏμｇ／ｍＬ−ム−はＨｅを１０ｕｇ／ｍｌ、Ｉｎｓを
５０ｕ ｇ ／ ｍｌ、−一一はＨｅをＬＯｕ ｇ／ｍ
ｌ Ｉ ｎｓを１００μｇ ／ ｍｌ添加した場合を各
々示す。
Ｉ ｎｓ）を添加しない場合を示し、−ローはＩｎｓの
みをＩＯμｇ／ｍｌ、−Δ−はＨｅのみを１０ｕｇ／ｒ
ｒｄ、−・−はＨｅを１ ｕ ｇ／ｍ１ＳＩ ｎｓをＩ
Ｏμｇ／ｍＬ−ム−はＨｅを１０ｕｇ／ｍｌ、Ｉｎｓを
５０ｕ ｇ ／ ｍｌ、−一一はＨｅをＬＯｕ ｇ／ｍ
ｌ Ｉ ｎｓを１００μｇ ／ ｍｌ添加した場合を各
々示す。
なお、細胞増殖因子は、本発明のマトリックス中、全重
量の約０．１〜９重量％、好ましくは０．１〜５重量％
、より好ましくは０．２〜３重量％の量で用いられる。
量の約０．１〜９重量％、好ましくは０．１〜５重量％
、より好ましくは０．２〜３重量％の量で用いられる。
これら細胞増殖因子は、０．１重量％未満ではその効果
がほとんどない。１０重量％以上の量を添加すると、却
って細胞増殖を抑制することが知られている（圧用によ
る「日皮会誌」９Ｂ（１２）、 １２５９〜１２７３
（１９８［ｉ）。
がほとんどない。１０重量％以上の量を添加すると、却
って細胞増殖を抑制することが知られている（圧用によ
る「日皮会誌」９Ｂ（１２）、 １２５９〜１２７３
（１９８［ｉ）。
この細胞増殖因子は、本発明ではマトリックス中に組み
込まれているので、高濃度で添加しなくても、また、使
用中に追加しなくても、効果が持続する。
込まれているので、高濃度で添加しなくても、また、使
用中に追加しなくても、効果が持続する。
本発明の細胞増殖因子含有コラーゲンマトリックスは、
アテロコラーゲン溶液に細胞増殖因子を含む溶液を混合
し、凍結乾燥することによって製造される。
アテロコラーゲン溶液に細胞増殖因子を含む溶液を混合
し、凍結乾燥することによって製造される。
以下本発明を実施例により詳しく説明する。
実施例 １
ハイドロコーチゾン含有のコラーゲン
スポンジの調製
アテロコラーゲン１．ＯｇをＩ）Ｈ３，０の希塩酸溶液
中に溶解して、アテロコラーゲンの濃度を０．３重量／
容量％とした。この溶液を高速で撹拌しながら、ハイド
ロコーチゾンの０，５重量／容量％エタノール溶液をゆ
っくり滴下してさらに１０分間程撹拌した。上記ハイド
ロコーチゾン溶液は、ハイドロコーチゾンの最終的な含
有比が各々０．２５重量％、２．５重量％、５重量％、
１０重量％となるような量で加えた。
中に溶解して、アテロコラーゲンの濃度を０．３重量／
容量％とした。この溶液を高速で撹拌しながら、ハイド
ロコーチゾンの０，５重量／容量％エタノール溶液をゆ
っくり滴下してさらに１０分間程撹拌した。上記ハイド
ロコーチゾン溶液は、ハイドロコーチゾンの最終的な含
有比が各々０．２５重量％、２．５重量％、５重量％、
１０重量％となるような量で加えた。
次に得られた各ハイドロコーチゾン含有アテロコラーゲ
ン溶液をステンレスバットに注入し、−２０℃まで急速
凍結させて十分凍結した後に、−４０℃／ ０．１Ｔｏ
ｒｒ未満の真空下で凍結乾燥すると、ハイドロコーチゾ
ン含有のコラーゲンスポンジが得られた。
ン溶液をステンレスバットに注入し、−２０℃まで急速
凍結させて十分凍結した後に、−４０℃／ ０．１Ｔｏ
ｒｒ未満の真空下で凍結乾燥すると、ハイドロコーチゾ
ン含有のコラーゲンスポンジが得られた。
実施例 ２
インシュリン含有のコラーゲンスポンジの調製アテロコ
ラーゲン１．０ｇをｐＨ３、０の希塩酸溶液中に溶解し
て、アテロコラーゲンの濃度を０．３ｆｆ１ｍ／容量％
とした。この溶液を高速で撹拌しながら、４０単位／
ｍｌの等張インシュリン水溶液を滴下した。このインシ
ュリン溶液は、インシュリンの最終的含有比が各々０．
２５重置火、２，５重量％となるような量で加えた。
ラーゲン１．０ｇをｐＨ３、０の希塩酸溶液中に溶解し
て、アテロコラーゲンの濃度を０．３ｆｆ１ｍ／容量％
とした。この溶液を高速で撹拌しながら、４０単位／
ｍｌの等張インシュリン水溶液を滴下した。このインシ
ュリン溶液は、インシュリンの最終的含有比が各々０．
２５重置火、２，５重量％となるような量で加えた。
次に得られた各インシュリン含有アテロコラーゲン溶液
を実施例１と同様に凍結乾燥したところ、インシュリン
含有のコラーゲンスポンジが得られた。
を実施例１と同様に凍結乾燥したところ、インシュリン
含有のコラーゲンスポンジが得られた。
実施例 ３
ウロガストロン含有のコラーゲンスポンジの調製
ｐＨ３，０の希塩酸に溶解させた０、３重量／容量％の
アテロコラーゲン溶液を高速で撹拌しながら、１重ｆｆ
ｉ／容瓜％のウロガストロン水溶液をゆっくり滴下して
、さらにｌＯ分間程撹拌した。このウロガストロン溶液
は、ウロガストロンの最終的含有比が各々０．２５．２
．５及び１０重量％となるような量で加えた。
アテロコラーゲン溶液を高速で撹拌しながら、１重ｆｆ
ｉ／容瓜％のウロガストロン水溶液をゆっくり滴下して
、さらにｌＯ分間程撹拌した。このウロガストロン溶液
は、ウロガストロンの最終的含有比が各々０．２５．２
．５及び１０重量％となるような量で加えた。
次に得られた各ウロガストロン含有アテロコラーゲン溶
液を実施例１と同様に凍結乾燥したところ、ウロガスト
ロン含有のコラーゲンスポンジが得られた。
液を実施例１と同様に凍結乾燥したところ、ウロガスト
ロン含有のコラーゲンスポンジが得られた。
実施例 ４
実施例１〜３で得られたスポンジ状の各生成物を５０ミ
リＴｏｒｒ未満の真空下で１時間真空にし、次に１１０
℃にまで温度を上げ２４時間以上真空に保ち、その後、
室温にまで温度を下げ、細胞増殖因子含有のコラーゲン
スポンジの熱脱水架橋したものを得た。
リＴｏｒｒ未満の真空下で１時間真空にし、次に１１０
℃にまで温度を上げ２４時間以上真空に保ち、その後、
室温にまで温度を下げ、細胞増殖因子含有のコラーゲン
スポンジの熱脱水架橋したものを得た。
（以下余白）
実施例 ５
細胞増殖含有コラーゲンマトリックスの細胞親和性
上記実施例１〜３に従って製造した各々のスポンジ状の
細胞増殖因子含有コラーゲンの細胞親和性をラットの線
維芽細胞を用いて試験した。
細胞増殖因子含有コラーゲンの細胞親和性をラットの線
維芽細胞を用いて試験した。
６０關の滅菌シャーレ（テルモ株式会社製）に直径３．
５ｃ＋ｎ片のコラーゲンスポンジを置き、線維芽細胞Ｉ
Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ ／ｍｌをこのスポンジ上に滴
下し、３７℃において２４時間培養した。その後さらに
ＦＢＳを含むＤＭＥ培地を３ｍｌ入れて３７℃において
６日間培養した。
５ｃ＋ｎ片のコラーゲンスポンジを置き、線維芽細胞Ｉ
Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ ／ｍｌをこのスポンジ上に滴
下し、３７℃において２４時間培養した。その後さらに
ＦＢＳを含むＤＭＥ培地を３ｍｌ入れて３７℃において
６日間培養した。
培養終了後にコラーゲンスポンジを１０％の中性緩衝ホ
ルマリン液に浸し、線維芽細胞を固定して細胞親和性の
評価を表１に示した。細胞の侵入・増殖性を「細胞活動
性」、細胞によるコラーゲンスポンジの結合組織様変化
を「組織の再構築」として評価した。
ルマリン液に浸し、線維芽細胞を固定して細胞親和性の
評価を表１に示した。細胞の侵入・増殖性を「細胞活動
性」、細胞によるコラーゲンスポンジの結合組織様変化
を「組織の再構築」として評価した。
（以下余白）
表１より明らかなように、コラーゲンマトリックスの細
胞親和性は、細胞増殖因子の含有比が０．２５〜２．５
重量％の場合に優れていた。
胞親和性は、細胞増殖因子の含有比が０．２５〜２．５
重量％の場合に優れていた。
［発明の効果］
本発明は、コラーゲンからなるマトリックス中に一定の
範囲の量の細胞増殖因子を含有するコラーゲンマトリッ
クスよりなり、人工皮膚等の医用材料や細胞増殖用の培
地として有用である。
範囲の量の細胞増殖因子を含有するコラーゲンマトリッ
クスよりなり、人工皮膚等の医用材料や細胞増殖用の培
地として有用である。
本発明のコラーゲンマトリックスにおいて、アテロコラ
ーゲンを使用する場合は、抗原性がなく生体組織への親
和性に優れている。
ーゲンを使用する場合は、抗原性がなく生体組織への親
和性に優れている。
また、細胞増殖因子をマトリックス中に含有するため、
その効果が持続され、培養系中に度々追加する必要もな
く、好適に細胞の増殖因子を促進し、早期の肉芽層形成
、表皮形成ひいては治療促進を図ることができる。
その効果が持続され、培養系中に度々追加する必要もな
く、好適に細胞の増殖因子を促進し、早期の肉芽層形成
、表皮形成ひいては治療促進を図ることができる。
第１図は、細胞増殖因子添加量と培養された細胞数との
関係を示すグラフである。 第１図 暗養時間（時）
関係を示すグラフである。 第１図 暗養時間（時）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）コラーゲンからなり、全重量の約０．１重量％以上
１０重量％未満の細胞増殖因子を含有するマトリックス
からなることを特徴とするコラーゲンマトリックス。 ２）コラーゲンがアテロコラーゲンである特許請求の範
囲第１項に記載のコラーゲンマトリックス。 ３）細胞増殖因子が、インシュリン、ハイドロコーチゾ
ン、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはウロガストロン
である特許請求の範囲第１項または第２項に記載のコラ
ーゲンマトリックス。 ４）細胞増殖因子の含有比が、全体の０．２〜３重量％
である特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかの
項に記載のコラーゲンマトリックス。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62317326A JPH01158963A (ja) | 1987-12-17 | 1987-12-17 | 細胞増殖因子含有コラーゲンマトリックスの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62317326A JPH01158963A (ja) | 1987-12-17 | 1987-12-17 | 細胞増殖因子含有コラーゲンマトリックスの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01158963A true JPH01158963A (ja) | 1989-06-22 |
| JPH0418865B2 JPH0418865B2 (ja) | 1992-03-27 |
Family
ID=18086960
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62317326A Granted JPH01158963A (ja) | 1987-12-17 | 1987-12-17 | 細胞増殖因子含有コラーゲンマトリックスの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01158963A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0364306A2 (en) * | 1988-10-14 | 1990-04-18 | Tutortec Inc. | Process for producing cultured epidermal sheet, product and method of use |
| JPH03236773A (ja) * | 1990-02-14 | 1991-10-22 | Sanyo Chem Ind Ltd | 細胞培養用基材および細胞培養方法 |
| WO1996015818A1 (en) * | 1994-11-22 | 1996-05-30 | Tissue Engineering, Inc. | Biopolymer foams having extracellular matrix particulates |
| US5891558A (en) * | 1994-11-22 | 1999-04-06 | Tissue Engineering, Inc. | Biopolymer foams for use in tissue repair and reconstruction |
| JP2002531181A (ja) * | 1998-12-01 | 2002-09-24 | クック・バイオテック・インコーポレーテッド | 多型コラーゲン性バイオマテリアル医療装置 |
| KR100298846B1 (ko) * | 1998-09-24 | 2003-10-22 | 한국원자력연구소 | 중화키토산스폰지또는중화키토산/콜라겐혼합스폰지를이용한인공진피 |
| US7645595B2 (en) | 2000-03-27 | 2010-01-12 | Shiseido Company, Ltd. | Method of production of artificial skin |
| JP2011193931A (ja) * | 2010-03-17 | 2011-10-06 | Gunze Ltd | Ｄａｎｃｅタンパク質含有組織再生用基材 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6122586A (ja) * | 1984-07-11 | 1986-01-31 | 株式会社明電舎 | 避雷器の動作表示装置 |
| JPS6134830A (ja) * | 1984-07-17 | 1986-02-19 | エヌ・ベー・フイリツプス・フルーイランペンフアブリケン | 可同調マグネトロン用軸受装置 |
-
1987
- 1987-12-17 JP JP62317326A patent/JPH01158963A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6122586A (ja) * | 1984-07-11 | 1986-01-31 | 株式会社明電舎 | 避雷器の動作表示装置 |
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| US5891558A (en) * | 1994-11-22 | 1999-04-06 | Tissue Engineering, Inc. | Biopolymer foams for use in tissue repair and reconstruction |
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| JP2011193931A (ja) * | 2010-03-17 | 2011-10-06 | Gunze Ltd | Ｄａｎｃｅタンパク質含有組織再生用基材 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0418865B2 (ja) | 1992-03-27 |
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