JPH0920677A - 創傷治癒剤 - Google Patents
創傷治癒剤Info
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- JPH0920677A JPH0920677A JP7188543A JP18854395A JPH0920677A JP H0920677 A JPH0920677 A JP H0920677A JP 7188543 A JP7188543 A JP 7188543A JP 18854395 A JP18854395 A JP 18854395A JP H0920677 A JPH0920677 A JP H0920677A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 種々の創傷に対し、本質的治療薬となりうる
新しい細胞成長因子を有効成分として含有する、治療効
果や安全性の高い創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／
または細胞成長促進剤を提供する。 【構成】 創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／または
細胞成長促進剤に、有効成分としてトロンボモジュリン
様蛋白質を含有させる。あるいはトロンボモジュリン様
蛋白質に加えてヒト細胞成長因子を含有させる。
新しい細胞成長因子を有効成分として含有する、治療効
果や安全性の高い創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／
または細胞成長促進剤を提供する。 【構成】 創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／または
細胞成長促進剤に、有効成分としてトロンボモジュリン
様蛋白質を含有させる。あるいはトロンボモジュリン様
蛋白質に加えてヒト細胞成長因子を含有させる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はトロンボモジュリン（以
下、ＴＭと略す）様蛋白質を含有することを特徴とする
創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／または細胞成長促
進剤、およびＴＭ様蛋白質とヒト成長因子とを含有する
ことを特徴とする創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／
または細胞成長促進剤に関する。
下、ＴＭと略す）様蛋白質を含有することを特徴とする
創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／または細胞成長促
進剤、およびＴＭ様蛋白質とヒト成長因子とを含有する
ことを特徴とする創傷治癒剤ならびに細胞増殖および／
または細胞成長促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】創傷治癒機構は皮膚、結合組織および支
持組織において類似している。ここでの組織とは、皮
膚、骨、軟骨のみならず、筋肉および器官を包み込むコ
ラーゲン基質からなる支持筋膜をも含むものである。
持組織において類似している。ここでの組織とは、皮
膚、骨、軟骨のみならず、筋肉および器官を包み込むコ
ラーゲン基質からなる支持筋膜をも含むものである。
【０００３】創傷部位における治癒プロセスは、普通い
くつかのグループの特殊な細胞あるいは蛋白質が関与し
ている複雑な生物学的機構によって起こるが、成長因子
が必須であることは良く知られている。成長因子は創傷
領域内に放出され、創傷内に移動し、そこで因子は角質
細胞および線維芽細胞の増殖あるいは成長を刺激し、脈
管形成を開始し、基質形成および創傷領域の再造形を行
う［テンダイクら：バイオ／テクノロジー（Ｂｉｏ／Ｔ
ｅｃｈｎｏｌ．）７，７９３−７９８，１９８９］。
くつかのグループの特殊な細胞あるいは蛋白質が関与し
ている複雑な生物学的機構によって起こるが、成長因子
が必須であることは良く知られている。成長因子は創傷
領域内に放出され、創傷内に移動し、そこで因子は角質
細胞および線維芽細胞の増殖あるいは成長を刺激し、脈
管形成を開始し、基質形成および創傷領域の再造形を行
う［テンダイクら：バイオ／テクノロジー（Ｂｉｏ／Ｔ
ｅｃｈｎｏｌ．）７，７９３−７９８，１９８９］。
【０００４】なお、この際、線維芽細胞は新たなコラー
ゲンを合成し、放出する細胞としても重要である。線維
芽細胞によって生成される他の蛋白質は基質に寄与す
る。このような蛋白質の一つであるフィブロネクチンは
主要な細胞を基盤となる基質に結合することを促進する
重要な物質であり、創傷修復中にその合成が強化され
る。
ゲンを合成し、放出する細胞としても重要である。線維
芽細胞によって生成される他の蛋白質は基質に寄与す
る。このような蛋白質の一つであるフィブロネクチンは
主要な細胞を基盤となる基質に結合することを促進する
重要な物質であり、創傷修復中にその合成が強化され
る。
【０００５】このように、生体の損傷部では成長因子が
タイムリーに放出され、単独でまたは共同して細胞の遊
走・増殖・分化を進めていく。創傷治癒に関与する成長
因子として、上皮細胞成長因子（以下、ＥＧＦと略
す）、線維芽細胞成長因子（以下、ＦＧＦと略す）、イ
ンスリン様成長因子（以下、ＩＧＦと略す）、インスリ
ン、血小板由来成長因子（以下、ＰＤＧＦと略す）など
が良く知られている。ＥＧＦは線維芽細胞、血管内皮細
胞、上皮細胞の増殖あるいは成長を促すほか、上皮細胞
の遊走を促進し、組織修復過程においては上皮の再生に
中心的な役割を果たしている。ＦＧＦは線維芽細胞、血
管平滑筋細胞、血管内皮細胞の増殖あるいは成長を促す
ほか、血管内皮細胞の遊走を促進し、血管再生に中心的
な役割を果たしている。ＩＧＦとしては、ＩＧＦ−１お
よびＩＧＦ−２の２種の分子種が存在することが知られ
ている。ＩＧＦはＰＤＧＦと共同して作用し、線維芽細
胞の増殖あるいは成長や上皮細胞の正常な分化増殖を促
進する。現在、これらの因子について、それぞれ臨床応
用研究が進められているが、創傷治癒剤としての効果は
必ずしも十分とは言えず、より効果的な成長因子あるい
は創傷治癒剤が切望されているのが現状である。
タイムリーに放出され、単独でまたは共同して細胞の遊
走・増殖・分化を進めていく。創傷治癒に関与する成長
因子として、上皮細胞成長因子（以下、ＥＧＦと略
す）、線維芽細胞成長因子（以下、ＦＧＦと略す）、イ
ンスリン様成長因子（以下、ＩＧＦと略す）、インスリ
ン、血小板由来成長因子（以下、ＰＤＧＦと略す）など
が良く知られている。ＥＧＦは線維芽細胞、血管内皮細
胞、上皮細胞の増殖あるいは成長を促すほか、上皮細胞
の遊走を促進し、組織修復過程においては上皮の再生に
中心的な役割を果たしている。ＦＧＦは線維芽細胞、血
管平滑筋細胞、血管内皮細胞の増殖あるいは成長を促す
ほか、血管内皮細胞の遊走を促進し、血管再生に中心的
な役割を果たしている。ＩＧＦとしては、ＩＧＦ−１お
よびＩＧＦ−２の２種の分子種が存在することが知られ
ている。ＩＧＦはＰＤＧＦと共同して作用し、線維芽細
胞の増殖あるいは成長や上皮細胞の正常な分化増殖を促
進する。現在、これらの因子について、それぞれ臨床応
用研究が進められているが、創傷治癒剤としての効果は
必ずしも十分とは言えず、より効果的な成長因子あるい
は創傷治癒剤が切望されているのが現状である。
【０００６】一方、ＴＭは１９８１年にエスモンらによ
り血管内皮細胞表面上に存在する抗凝固物質として発見
され［プロシーデイングス オブ ザ ナショナル ア
カデミー オブ サイエンシーズ オブ ザ ユーエス
エー（Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ．）７８，２２４９−２２５４，１９８１］、その後
１９８７年に鈴木らによりその全一次構造が明らかにさ
れた［エンボ ジャーナル（ＥＭＢＯ Ｊ．）６，１８
９１−１８９７、１９８７；Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６，
４３５０−４３５７，１９８７］糖蛋白質である。ＴＭ
は、トロンビンと１：１で結合し、トロンビンの凝固促
進作用を抑制するとともにトロンビンによるプロテイン
Ｃ活性化を著しく促進させることにより効率よく凝固系
を抑制することから、播種性血管内凝固症候群（ＤＩ
Ｃ）、各種血栓症等の予防や治療に有用であることが示
唆されており、近年では、遺伝子組み替え技術を利用し
て、ＴＭのアミノ酸配列の部分構造を有する様々なヒト
ＴＭ様蛋白質［特開平１−６２１９、Ｂｉｏｃｈｉｍ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１２０５巻，ｐ１６２−
１７０，１９９４］を用いて、ＤＩＣ治療薬としての臨
床応用が試みられつつある。
り血管内皮細胞表面上に存在する抗凝固物質として発見
され［プロシーデイングス オブ ザ ナショナル ア
カデミー オブ サイエンシーズ オブ ザ ユーエス
エー（Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ．）７８，２２４９−２２５４，１９８１］、その後
１９８７年に鈴木らによりその全一次構造が明らかにさ
れた［エンボ ジャーナル（ＥＭＢＯ Ｊ．）６，１８
９１−１８９７、１９８７；Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６，
４３５０−４３５７，１９８７］糖蛋白質である。ＴＭ
は、トロンビンと１：１で結合し、トロンビンの凝固促
進作用を抑制するとともにトロンビンによるプロテイン
Ｃ活性化を著しく促進させることにより効率よく凝固系
を抑制することから、播種性血管内凝固症候群（ＤＩ
Ｃ）、各種血栓症等の予防や治療に有用であることが示
唆されており、近年では、遺伝子組み替え技術を利用し
て、ＴＭのアミノ酸配列の部分構造を有する様々なヒト
ＴＭ様蛋白質［特開平１−６２１９、Ｂｉｏｃｈｉｍ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１２０５巻，ｐ１６２−
１７０，１９９４］を用いて、ＤＩＣ治療薬としての臨
床応用が試みられつつある。
【０００７】このようにＴＭは広く凝固線溶系に作用す
る分子であると考えられているが、他方、細胞機能に及
ぼす影響についてはほとんど知られていない。
る分子であると考えられているが、他方、細胞機能に及
ぼす影響についてはほとんど知られていない。
【０００８】今田らは、マウステトラカルシノーマＦ９
細胞をレチノイン酸あるいはサイクリックＡＭＰ（ｃＡ
ＭＰ）で内胚葉系細胞に分化させると、マウスＴＭと同
じ機能を有し、また、遺伝子クローニングの結果マウス
ＴＭとまったく同一であることが明らかとなったフェト
モジュリン（以下、ＦＭと略す）が内胚葉系細胞に発現
されること、さらに、ＴＭ／ＦＭが血管内のみならず、
組織液と直接接することのない組織、あるいはまた、細
胞間の相互作用の場、例えば、肺胞、神経上皮、心房、
洞結節、および胚発生の中期から後期にかけて心臓のペ
ースメーカーなどに一時的に発現されることを報告した
［デベロップメンタル バイオロジー（Ｄｅｖ．Ｂｉｏ
ｌ．）１４０、１１３−１２２、１９９０］。
細胞をレチノイン酸あるいはサイクリックＡＭＰ（ｃＡ
ＭＰ）で内胚葉系細胞に分化させると、マウスＴＭと同
じ機能を有し、また、遺伝子クローニングの結果マウス
ＴＭとまったく同一であることが明らかとなったフェト
モジュリン（以下、ＦＭと略す）が内胚葉系細胞に発現
されること、さらに、ＴＭ／ＦＭが血管内のみならず、
組織液と直接接することのない組織、あるいはまた、細
胞間の相互作用の場、例えば、肺胞、神経上皮、心房、
洞結節、および胚発生の中期から後期にかけて心臓のペ
ースメーカーなどに一時的に発現されることを報告した
［デベロップメンタル バイオロジー（Ｄｅｖ．Ｂｉｏ
ｌ．）１４０、１１３−１２２、１９９０］。
【０００９】以上のような報告が見られるが、ＴＭが細
胞に対して直接増殖および／または成長促進作用を有す
ることを記載した報告は知られていない。
胞に対して直接増殖および／または成長促進作用を有す
ることを記載した報告は知られていない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】創傷に対し、その本質
的治療薬となりうる新しい細胞成長因子を有効成分とし
て含有する、より有効で安全性の高い創傷治癒剤ならび
に細胞増殖および／または細胞成長促進剤を提供するこ
とが本発明の課題である。
的治療薬となりうる新しい細胞成長因子を有効成分とし
て含有する、より有効で安全性の高い創傷治癒剤ならび
に細胞増殖および／または細胞成長促進剤を提供するこ
とが本発明の課題である。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者は、ＴＭの各種
細胞に対する増殖あるいは成長促進効果に関する研究を
行っている途上、ＴＭが抗凝固作用を示す濃度に比し、
はるかに低濃度において、スイス３Ｔ３細胞に直接作用
しその成長および増殖を促進することを見いだし、さら
には他の成長因子とともに用いると一層高い活性を示す
という事実を見いだし、さらに鋭意研究を重ねて本発明
を完成した。
細胞に対する増殖あるいは成長促進効果に関する研究を
行っている途上、ＴＭが抗凝固作用を示す濃度に比し、
はるかに低濃度において、スイス３Ｔ３細胞に直接作用
しその成長および増殖を促進することを見いだし、さら
には他の成長因子とともに用いると一層高い活性を示す
という事実を見いだし、さらに鋭意研究を重ねて本発明
を完成した。
【００１２】本発明の第１の態様は、ＴＭ様蛋白質を有
効成分として含有することを特徴とする創傷治癒剤であ
る。ＴＭ様蛋白質は、以下のアミノ酸配列１あるいは以
下の特徴１または特徴２を有することが好ましい。 （アミノ酸配列１） 1 10 Gln Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly 11 20 Ala Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly 21 30 Cys Glu His Ala Cys Asn Ala Ile Pro Gly 31 40 Ala Pro Arg Cys Gln Cys Pro Ala Gly Ala 41 50 Ala Leu Gln Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr 51 60 Ala Ser Ala Thr Gln Ser Cys Asn Asp Leu 61 70 Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp 71 80 Gln Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu 81 90 Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gln His 91 100 Arg Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys Ile Leu 101 110 Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gln Arg Cys Val 111 120 Asn Thr Gln Gly Gly Phe Glu Cys His Cys 121 130 Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu 131 140 Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe Arg 141 150 Ala Asn Cys Glu Tyr Gln Cys Gln Pro Leu 151 160 Asn Gln Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala 161 170 Glu Gly Phe Ala Pro Ile Pro His Glu Pro 171 180 His Arg Cys Gln Met Phe Cys Asn Gln Thr 181 190 Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr 191 200 Gln Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr 201 210 Ile Leu Asp Asp Gly Phe Ile Cys Thr Asp 211 220 Ile Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe Cys 221 230 Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr 231 240 Phe Glu Cys Ile Cys Gly Pro Asp Ser Ala 241 250 Leu Val Arg His Ile Gly Thr Asp Cys Asp 251 253 Ser Gly Lys ただし、２４２番目の Val は Ala に置換されていても
よい。
効成分として含有することを特徴とする創傷治癒剤であ
る。ＴＭ様蛋白質は、以下のアミノ酸配列１あるいは以
下の特徴１または特徴２を有することが好ましい。 （アミノ酸配列１） 1 10 Gln Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly 11 20 Ala Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly 21 30 Cys Glu His Ala Cys Asn Ala Ile Pro Gly 31 40 Ala Pro Arg Cys Gln Cys Pro Ala Gly Ala 41 50 Ala Leu Gln Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr 51 60 Ala Ser Ala Thr Gln Ser Cys Asn Asp Leu 61 70 Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp 71 80 Gln Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu 81 90 Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gln His 91 100 Arg Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys Ile Leu 101 110 Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gln Arg Cys Val 111 120 Asn Thr Gln Gly Gly Phe Glu Cys His Cys 121 130 Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu 131 140 Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe Arg 141 150 Ala Asn Cys Glu Tyr Gln Cys Gln Pro Leu 151 160 Asn Gln Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala 161 170 Glu Gly Phe Ala Pro Ile Pro His Glu Pro 171 180 His Arg Cys Gln Met Phe Cys Asn Gln Thr 181 190 Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr 191 200 Gln Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr 201 210 Ile Leu Asp Asp Gly Phe Ile Cys Thr Asp 211 220 Ile Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe Cys 221 230 Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr 231 240 Phe Glu Cys Ile Cys Gly Pro Asp Ser Ala 241 250 Leu Val Arg His Ile Gly Thr Asp Cys Asp 251 253 Ser Gly Lys ただし、２４２番目の Val は Ala に置換されていても
よい。
【００１３】（特徴１：以下の部分構造および性質を有
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７２，０００±３，０００［非還元状態で
のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）により測定］ ロ）等電点 ３．９±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：５．５±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：２．２±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：２．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：７．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７２，０００±３，０００［非還元状態で
のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）により測定］ ロ）等電点 ３．９±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：５．５±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：２．２±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：２．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：７．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
【００１４】（特徴２：以下の部分構造および性質を有
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７９，０００±３，０００［非還元状態で
のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定］ ロ）等電点 ３．８±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：６．２±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：３．１±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：３．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：６．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７９，０００±３，０００［非還元状態で
のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定］ ロ）等電点 ３．８±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：６．２±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：３．１±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：３．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：６．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
【００１５】本発明の第２の態様は、ＴＭ様蛋白質とヒ
ト細胞成長因子とを含有することを特徴とする創傷治癒
剤である。ここで、ＴＭ様蛋白質としては、上述の第１
の態様と同様に、上述のアミノ酸配列１あるいは特徴１
または特徴２を有するものが好ましい。また、ヒト細胞
成長因子は、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥ
ＧＦ又はヒト塩基性ＦＧＦ（以下、ｂ−ＦＧＦと略す）
であることが好ましい。
ト細胞成長因子とを含有することを特徴とする創傷治癒
剤である。ここで、ＴＭ様蛋白質としては、上述の第１
の態様と同様に、上述のアミノ酸配列１あるいは特徴１
または特徴２を有するものが好ましい。また、ヒト細胞
成長因子は、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥ
ＧＦ又はヒト塩基性ＦＧＦ（以下、ｂ−ＦＧＦと略す）
であることが好ましい。
【００１６】ＴＭ様蛋白質とヒト細胞成長因子との組み
合わせとしては、上述のアミノ酸配列１を有するＴＭ様
蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧ
Ｆおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なくとも一つとの組み合わ
せ、上述の特徴１を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ
−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧ
Ｆの少なくとも一つとの組み合わせ、あるいは、上述の
特徴２を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒト
インスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なく
とも一つとの組み合わせが好ましい。
合わせとしては、上述のアミノ酸配列１を有するＴＭ様
蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧ
Ｆおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なくとも一つとの組み合わ
せ、上述の特徴１を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ
−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧ
Ｆの少なくとも一つとの組み合わせ、あるいは、上述の
特徴２を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒト
インスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なく
とも一つとの組み合わせが好ましい。
【００１７】本発明の第３の態様は、ＴＭ様蛋白質を有
効成分として含有することを特徴とする細胞増殖および
／または細胞成長促進剤である。好ましくは、肉芽組織
形成促進剤である。本発明の第３の態様で使用するＴＭ
様蛋白質は、上述の本発明の第１の態様で使用するＴＭ
様蛋白質と同様のもの、即ち、以下のアミノ酸配列１あ
るいは特徴１または特徴２を有するものが好ましい。
効成分として含有することを特徴とする細胞増殖および
／または細胞成長促進剤である。好ましくは、肉芽組織
形成促進剤である。本発明の第３の態様で使用するＴＭ
様蛋白質は、上述の本発明の第１の態様で使用するＴＭ
様蛋白質と同様のもの、即ち、以下のアミノ酸配列１あ
るいは特徴１または特徴２を有するものが好ましい。
【００１８】（アミノ酸配列１） 1 10 Gln Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly 11 20 Ala Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly 21 30 Cys Glu His Ala Cys Asn Ala Ile Pro Gly 31 40 Ala Pro Arg Cys Gln Cys Pro Ala Gly Ala 41 50 Ala Leu Gln Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr 51 60 Ala Ser Ala Thr Gln Ser Cys Asn Asp Leu 61 70 Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp 71 80 Gln Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu 81 90 Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gln His 91 100 Arg Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys Ile Leu 101 110 Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gln Arg Cys Val 111 120 Asn Thr Gln Gly Gly Phe Glu Cys His Cys 121 130 Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu 131 140 Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe Arg 141 150 Ala Asn Cys Glu Tyr Gln Cys Gln Pro Leu 151 160 Asn Gln Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala 161 170 Glu Gly Phe Ala Pro Ile Pro His Glu Pro 171 180 His Arg Cys Gln Met Phe Cys Asn Gln Thr 181 190 Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr 191 200 Gln Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr 201 210 Ile Leu Asp Asp Gly Phe Ile Cys Thr Asp 211 220 Ile Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe Cys 221 230 Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr 231 240 Phe Glu Cys Ile Cys Gly Pro Asp Ser Ala 241 250 Leu Val Arg His Ile Gly Thr Asp Cys Asp 251 253 Ser Gly Lys ただし、２４２番目の Val は Ala に置換されていても
よい。
よい。
【００１９】（特徴１：以下の部分構造および性質を有
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７２，０００±３，０００［非還元状態で
のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）により測定］ ロ）等電点 ３．９±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：５．５±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：２．２±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：２．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：７．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７２，０００±３，０００［非還元状態で
のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）により測定］ ロ）等電点 ３．９±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：５．５±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：２．２±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：２．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：７．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
【００２０】（特徴２：以下の部分構造および性質を有
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７９，０００±３，０００［非還元状態で
のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定］ ロ）等電点 ３．８±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：６．２±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：３．１±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：３．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：６．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
するトロンボモジュリン様蛋白質） イ）分子量 ７９，０００±３，０００［非還元状態で
のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定］ ロ）等電点 ３．８±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：６．２±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：３．１±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：３．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ ホ）アミノ酸組成：ｍｏｌ％で表示 アスパラギン酸 ９．５±２．０ トレオニン ４．０±１．５ セリン ５．１±１．５ グルタミン酸 １０．９±２．５ プロリン ９．３±１．５ グリシン １１．０±３．０ アラニン １１．７±３．０ システイン ８．０±４．０ バリン ５．９±１．５ メチオニン １．１±０．５ イソロイシン ２．８±１．５ ロイシン ７．５±２．０ チロシン １．６±１．５ フェニルアラニン ３．７±１．５ ヒスチジン ２．５±１．０ リジン ０．８±０．５ アルギニン ４．６±１．５ ヘ）安定性： ｐＨ安定性：ｐＨ２〜１０の範囲で安定 熱安定性：６０℃、３００分処理で安定 変性剤安定性：１％（Ｗ／Ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）、６Ｍ塩酸グアニジンおよび８Ｍ尿素溶液中
でそれぞれ安定 ト）紫外吸収：６．７±１．０［２８０ｎｍにおける１
％水溶液の１ｃｍ光路長の吸光度］ チ）由来：ヒト尿由来物質であることが好ましい。
【００２１】本発明の第４の態様は、ＴＭ様蛋白質とヒ
ト細胞成長因子とを含有することを特徴とする細胞増殖
および／または細胞成長促進剤である。好ましくは、肉
芽組織形成促進剤である。ここで、ＴＭ様蛋白質として
は、上述の第３の態様と同様に、上述のアミノ酸配列１
あるいは特徴１または特徴２を有するものが好ましい。
また、ヒト細胞成長因子は、ヒトＩＧＦ−１、ヒトイン
スリン、ヒトＥＧＦ又はヒトｂ−ＦＧＦであることが好
ましい。
ト細胞成長因子とを含有することを特徴とする細胞増殖
および／または細胞成長促進剤である。好ましくは、肉
芽組織形成促進剤である。ここで、ＴＭ様蛋白質として
は、上述の第３の態様と同様に、上述のアミノ酸配列１
あるいは特徴１または特徴２を有するものが好ましい。
また、ヒト細胞成長因子は、ヒトＩＧＦ−１、ヒトイン
スリン、ヒトＥＧＦ又はヒトｂ−ＦＧＦであることが好
ましい。
【００２２】ＴＭ様蛋白質とヒト細胞成長因子との組み
合わせとしては、上述のアミノ酸配列１を有するＴＭ様
蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧ
Ｆおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なくとも一つとの組み合わ
せ、上述の特徴１を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ
−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧ
Ｆの少なくとも一つとの組み合わせ、あるいは、上述の
特徴２を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒト
インスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なく
とも一つとの組み合わせが好ましい。
合わせとしては、上述のアミノ酸配列１を有するＴＭ様
蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧ
Ｆおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なくとも一つとの組み合わ
せ、上述の特徴１を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ
−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧ
Ｆの少なくとも一つとの組み合わせ、あるいは、上述の
特徴２を有するＴＭ様蛋白質と、ヒトＩＧＦ−１、ヒト
インスリン、ヒトＥＧＦおよびヒトｂ−ＦＧＦの少なく
とも一つとの組み合わせが好ましい。
【００２３】以下、本発明を詳細に説明する。
【００２４】本明細書において、「ＴＭ様蛋白質」の語
は、ＴＭおよびＴＭの生物学的もしくは免疫学的活性に
必要な一部分のアミノ酸配列を有するペプチド又はそれ
らの類似物を意味する。また、「創傷」の語は、外力に
よって生じた組織損傷を総括していうが、皮膚や粘膜面
の連続性が離断した解放性損傷を創、連続性が保持され
た閉鎖性損傷を傷として区別して用いられることがあ
り、「創傷治癒」は、炎症反応が起こり、毛細血管等の
透過性亢進や白血球等の遊走が起こって細菌や壊死物質
が貪食除去されると共にフィブリン沈着等が起こる滲出
破壊相、毛細血管の新生や線維芽細胞の増殖が始まり、
肉芽が出現し、フィブリンが吸収されてコラーゲンに置
き換わってゆく繊維増殖相および新生血管や滲出細胞が
減少し始め、コラーゲン量が増加して創の収縮が起きる
成熟期の機転をとる［南山堂医学大辞典、南山堂，１１
５６−１１５７頁，１９９０］とされ、本発明において
もこれらの意味を包含する。肉芽（組織）とは、盛んに
増殖している若い結合組織のことで、創傷の壊死性組織
を吸収し、欠損部を埋め、線維化をおこす創傷治癒に際
して形成される重要な組織である。線維芽細胞が肉芽組
織の基本的構成細胞である。また、「創傷治癒剤」の語
は、種々の創傷、例えば、角膜潰瘍、放射線角膜傷、角
膜移植その他の手術誘発眼内創傷のような眼創傷、およ
び切開、やけど、切り傷、破傷、深部術創、皮膚移植に
よるドナー部位創および潰瘍（皮膚、とこずれ、静脈う
っ血および糖尿病）のような皮膚創のごとき上皮損傷、
あるいは消化管の潰瘍、口腔・気道または尿路のごとき
粘膜の損傷など、さらに、乾せん、日焼け、皮膚発疹の
ような皮膚障害等、の治癒を促進するための治療剤を広
く包含する。
は、ＴＭおよびＴＭの生物学的もしくは免疫学的活性に
必要な一部分のアミノ酸配列を有するペプチド又はそれ
らの類似物を意味する。また、「創傷」の語は、外力に
よって生じた組織損傷を総括していうが、皮膚や粘膜面
の連続性が離断した解放性損傷を創、連続性が保持され
た閉鎖性損傷を傷として区別して用いられることがあ
り、「創傷治癒」は、炎症反応が起こり、毛細血管等の
透過性亢進や白血球等の遊走が起こって細菌や壊死物質
が貪食除去されると共にフィブリン沈着等が起こる滲出
破壊相、毛細血管の新生や線維芽細胞の増殖が始まり、
肉芽が出現し、フィブリンが吸収されてコラーゲンに置
き換わってゆく繊維増殖相および新生血管や滲出細胞が
減少し始め、コラーゲン量が増加して創の収縮が起きる
成熟期の機転をとる［南山堂医学大辞典、南山堂，１１
５６−１１５７頁，１９９０］とされ、本発明において
もこれらの意味を包含する。肉芽（組織）とは、盛んに
増殖している若い結合組織のことで、創傷の壊死性組織
を吸収し、欠損部を埋め、線維化をおこす創傷治癒に際
して形成される重要な組織である。線維芽細胞が肉芽組
織の基本的構成細胞である。また、「創傷治癒剤」の語
は、種々の創傷、例えば、角膜潰瘍、放射線角膜傷、角
膜移植その他の手術誘発眼内創傷のような眼創傷、およ
び切開、やけど、切り傷、破傷、深部術創、皮膚移植に
よるドナー部位創および潰瘍（皮膚、とこずれ、静脈う
っ血および糖尿病）のような皮膚創のごとき上皮損傷、
あるいは消化管の潰瘍、口腔・気道または尿路のごとき
粘膜の損傷など、さらに、乾せん、日焼け、皮膚発疹の
ような皮膚障害等、の治癒を促進するための治療剤を広
く包含する。
【００２５】本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、天然型あ
るいは遺伝子工学的に生産されたもののいずれでも良
く、遺伝子工学的手法により得られる改変型あるいはキ
メラ型であっても良い。医薬品とする場合、好ましくは
ヒト由来のＴＭが望まれる。また、ヒト由来のＴＭは膜
結合性であり、完全長のアミノ酸配列を持つものは水に
対する溶解性が低い。このため、本発明においては完全
長のアミノ酸配列を持たず、溶解性の高いＴＭ（以下、
可溶性ＴＭと略する）がさらに好ましい。
るいは遺伝子工学的に生産されたもののいずれでも良
く、遺伝子工学的手法により得られる改変型あるいはキ
メラ型であっても良い。医薬品とする場合、好ましくは
ヒト由来のＴＭが望まれる。また、ヒト由来のＴＭは膜
結合性であり、完全長のアミノ酸配列を持つものは水に
対する溶解性が低い。このため、本発明においては完全
長のアミノ酸配列を持たず、溶解性の高いＴＭ（以下、
可溶性ＴＭと略する）がさらに好ましい。
【００２６】このようなＴＭは、天然型については、例
えば、ヒト胎盤由来のＴＭ［特開昭６０−１９９８１
９］があげられる。また、可溶性ＴＭとしては、非還元
状態での分子量が５５，０００〜５８，０００および６
０，０００〜６５，０００のヒト尿由来可溶性ＴＭ［特
開平３−８６９００］および非還元状態での分子量が７
２，０００±３，０００および７９，０００±３，００
０のヒト尿由来可溶性ＴＭ［特開平３−２１８３９９］
が挙げられる。これらの内、分子量が７２，０００±
３，０００および７９，０００±３，０００のヒト尿由
来可溶性ＴＭが好ましい。これらヒト尿由来可溶性ＴＭ
は、特開平３−２１８３９９号公報に記載されているよ
うに、それぞれ、前述の本発明で好ましく使用すること
ができるＴＭ様蛋白質の特徴１または特徴２を有してい
る。
えば、ヒト胎盤由来のＴＭ［特開昭６０−１９９８１
９］があげられる。また、可溶性ＴＭとしては、非還元
状態での分子量が５５，０００〜５８，０００および６
０，０００〜６５，０００のヒト尿由来可溶性ＴＭ［特
開平３−８６９００］および非還元状態での分子量が７
２，０００±３，０００および７９，０００±３，００
０のヒト尿由来可溶性ＴＭ［特開平３−２１８３９９］
が挙げられる。これらの内、分子量が７２，０００±
３，０００および７９，０００±３，０００のヒト尿由
来可溶性ＴＭが好ましい。これらヒト尿由来可溶性ＴＭ
は、特開平３−２１８３９９号公報に記載されているよ
うに、それぞれ、前述の本発明で好ましく使用すること
ができるＴＭ様蛋白質の特徴１または特徴２を有してい
る。
【００２７】また、本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、遺
伝子組み替え技術で生産することができる。ヒトの治療
剤に用いるためには、ヒトのアミノ酸配列を有するもの
が好ましい。具体的には、遺伝子工学的手法により製造
され、鈴木らにより示されたヒトＴＭの一次構造［ＥＭ
ＢＯ．Ｊ．６，１８９１−１８９７，１９８７；Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．２６，４３５０−４３５７，１９８７］を有
するポリペプチドおよびその生物学的もしくは免疫学的
活性に必要な一部分のアミノ酸配列からなるフラグメン
トが挙げられる。
伝子組み替え技術で生産することができる。ヒトの治療
剤に用いるためには、ヒトのアミノ酸配列を有するもの
が好ましい。具体的には、遺伝子工学的手法により製造
され、鈴木らにより示されたヒトＴＭの一次構造［ＥＭ
ＢＯ．Ｊ．６，１８９１−１８９７，１９８７；Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．２６，４３５０−４３５７，１９８７］を有
するポリペプチドおよびその生物学的もしくは免疫学的
活性に必要な一部分のアミノ酸配列からなるフラグメン
トが挙げられる。
【００２８】鈴木らによれば、完全長のヒトＴＭは５５
７アミノ酸残基により構成され、それは、Ｎ末端より順
に、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４およびＤ５の５つのドメイ
ン構造から構成される。また、その抗凝固活性は６つの
上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）様構造の繰り返しから成る
Ｄ２ドメインの、４番目から６番目のドメイン（Ｅ４５
６）に限局することが報告されている。本発明の治癒剤
に使用し得るフラグメントの例としては、鈴木らにより
開示されたＥ４５６ペプチド構造を包含する種々のペプ
チドフラグメント［特開平１−６２１９］あるいは名和
らにより示された可溶性ＴＭ様蛋白質［バイオケミカル
アンド バイオフィジカル リサーチコミュニケーシ
ョンズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃ
ｏｍｍｕｎ．）１７１，７２９−７３７，１９９０］な
どが挙げられる。さらに具体的には、Ｄ２ドメインのＥ
ＧＦ様構造の１番目から６番目までのドメイン構造（以
下、Ｅ１２３４５６とする）を包含する、ヒトＴＭのＮ
末端より２１４−４６６番目のアミノ酸残基により構成
されるペプチド（以下、ＴＭＥ1-6 とする）、１−４９
１番目のアミノ酸残基により構成されるペプチド（以
下、ｒｓＴＭとする）、２２７−４６２番目のアミノ酸
残基により構成されるペプチド（Ｄ２）、１−４９７番
目のアミノ酸残基により構成されるペプチド（以下、Ｄ
１２３とする）、１−４６２番目のアミノ酸残基により
構成されるペプチド（Ｄ１２）、２２７−４９７番目の
アミノ酸残基により構成されるペプチド（Ｄ２３）、１
−５５７番目のアミノ酸残基により構成されるペプチド
（Ｄ１２３４５）、３４５−４６２番目のアミノ酸残基
により構成されるペプチド（Ｅ４５６）などが好まし
い。そして、これらのフラグメントの内、ＴＭの第２番
目のドメイン、すなわちＥＧＦ様構造ドメインの１番目
から６番目までの構造を包含する、２１４−４６６番目
のアミノ酸残基により構成されるフラグメント（ＴＭＥ
1-6 )、即ち、前述のアミノ酸配列１を有するもの、ｒ
ｓＴＭあるいはＤ１２３が最も好ましい。
７アミノ酸残基により構成され、それは、Ｎ末端より順
に、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４およびＤ５の５つのドメイ
ン構造から構成される。また、その抗凝固活性は６つの
上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）様構造の繰り返しから成る
Ｄ２ドメインの、４番目から６番目のドメイン（Ｅ４５
６）に限局することが報告されている。本発明の治癒剤
に使用し得るフラグメントの例としては、鈴木らにより
開示されたＥ４５６ペプチド構造を包含する種々のペプ
チドフラグメント［特開平１−６２１９］あるいは名和
らにより示された可溶性ＴＭ様蛋白質［バイオケミカル
アンド バイオフィジカル リサーチコミュニケーシ
ョンズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃ
ｏｍｍｕｎ．）１７１，７２９−７３７，１９９０］な
どが挙げられる。さらに具体的には、Ｄ２ドメインのＥ
ＧＦ様構造の１番目から６番目までのドメイン構造（以
下、Ｅ１２３４５６とする）を包含する、ヒトＴＭのＮ
末端より２１４−４６６番目のアミノ酸残基により構成
されるペプチド（以下、ＴＭＥ1-6 とする）、１−４９
１番目のアミノ酸残基により構成されるペプチド（以
下、ｒｓＴＭとする）、２２７−４６２番目のアミノ酸
残基により構成されるペプチド（Ｄ２）、１−４９７番
目のアミノ酸残基により構成されるペプチド（以下、Ｄ
１２３とする）、１−４６２番目のアミノ酸残基により
構成されるペプチド（Ｄ１２）、２２７−４９７番目の
アミノ酸残基により構成されるペプチド（Ｄ２３）、１
−５５７番目のアミノ酸残基により構成されるペプチド
（Ｄ１２３４５）、３４５−４６２番目のアミノ酸残基
により構成されるペプチド（Ｅ４５６）などが好まし
い。そして、これらのフラグメントの内、ＴＭの第２番
目のドメイン、すなわちＥＧＦ様構造ドメインの１番目
から６番目までの構造を包含する、２１４−４６６番目
のアミノ酸残基により構成されるフラグメント（ＴＭＥ
1-6 )、即ち、前述のアミノ酸配列１を有するもの、ｒ
ｓＴＭあるいはＤ１２３が最も好ましい。
【００２９】なお、上記フラグメントは遺伝子組み替え
技術を用いて、ＴＭ又は上記ペプチドの構造の一部を欠
失させたり、アミノ酸を他のアミノ酸で置換あるいは修
飾した改変体およびＯ−グリコシド結合糖鎖あるいはＮ
−グリコシド結合糖鎖などの糖鎖を修飾あるいは欠失さ
せた類似物などでも良い。具体的には、上記ポリペプチ
ドの構成アミノ酸が一部欠如している［ＷＯ９２／００
３２５、特開平２−２５５６９９、ＥＰ０４７４２７３
Ａ２］か、他のアミノ酸に置換されたもの［ＷＯ９１／
１５５１４、ＷＯ９３／１５５７５５、平５−３１０７
８７］が挙げられる。また、メチオニンを他のアミノ酸
に置換することによって酸化を防止したもの［ＷＯ９１
／１５５１４］、あるいはアミノ酸配列を修飾すること
によって蛋白分解酵素による分解を防止したもの［ＷＯ
９３／１５７５５］が挙げられる。また、コンドロイチ
ン及び／又はコンドロイチン硫酸を含む糖鎖を有するも
の［ＷＯ９１／０４２７６、ＷＯ９１／０５８０３、Ｅ
Ｐ０４１２８４１Ａ１］、ウシトロンボモジュリン由来
の酸性アミノ酸配列を含むＯ−グリコシド糖鎖結合部位
を付加し、コンドロイチン硫酸糖鎖を結合させたもの
［ＥＰ０４８８３１７Ａ２］、あるいは、Ｏ−グリコシ
ル化部位領域の糖鎖を修飾あるいはＯ−グリコシル化部
位領域を欠失させたもの［ＷＯ９２／０３１４９］、コ
ンドロイチン及び／又はコンドロイチン硫酸を含まない
もの［特開平４−２１０７００］などが挙げられる。
技術を用いて、ＴＭ又は上記ペプチドの構造の一部を欠
失させたり、アミノ酸を他のアミノ酸で置換あるいは修
飾した改変体およびＯ−グリコシド結合糖鎖あるいはＮ
−グリコシド結合糖鎖などの糖鎖を修飾あるいは欠失さ
せた類似物などでも良い。具体的には、上記ポリペプチ
ドの構成アミノ酸が一部欠如している［ＷＯ９２／００
３２５、特開平２−２５５６９９、ＥＰ０４７４２７３
Ａ２］か、他のアミノ酸に置換されたもの［ＷＯ９１／
１５５１４、ＷＯ９３／１５５７５５、平５−３１０７
８７］が挙げられる。また、メチオニンを他のアミノ酸
に置換することによって酸化を防止したもの［ＷＯ９１
／１５５１４］、あるいはアミノ酸配列を修飾すること
によって蛋白分解酵素による分解を防止したもの［ＷＯ
９３／１５７５５］が挙げられる。また、コンドロイチ
ン及び／又はコンドロイチン硫酸を含む糖鎖を有するも
の［ＷＯ９１／０４２７６、ＷＯ９１／０５８０３、Ｅ
Ｐ０４１２８４１Ａ１］、ウシトロンボモジュリン由来
の酸性アミノ酸配列を含むＯ−グリコシド糖鎖結合部位
を付加し、コンドロイチン硫酸糖鎖を結合させたもの
［ＥＰ０４８８３１７Ａ２］、あるいは、Ｏ−グリコシ
ル化部位領域の糖鎖を修飾あるいはＯ−グリコシル化部
位領域を欠失させたもの［ＷＯ９２／０３１４９］、コ
ンドロイチン及び／又はコンドロイチン硫酸を含まない
もの［特開平４−２１０７００］などが挙げられる。
【００３０】本発明第２の態様ならびに第４の態様は、
以上のようなＴＭ様蛋白質の他にヒト細胞成長因子も有
効成分として含有するものである。これにより、ＴＭ様
蛋白質又はヒト細胞成長因子単独から創傷治癒剤ならび
に細胞増殖および／または細胞成長促進剤を構成した場
合に対して、大きな治癒効果ならびに促進効果を得るこ
とが可能となる。
以上のようなＴＭ様蛋白質の他にヒト細胞成長因子も有
効成分として含有するものである。これにより、ＴＭ様
蛋白質又はヒト細胞成長因子単独から創傷治癒剤ならび
に細胞増殖および／または細胞成長促進剤を構成した場
合に対して、大きな治癒効果ならびに促進効果を得るこ
とが可能となる。
【００３１】本発明において、ヒト細胞成長因子として
は、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧＦ、ヒ
トｂ−ＦＧＦの中から選ばれる１種を使用するか、ある
いは複数種を併用することが好ましい。
は、ヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒトＥＧＦ、ヒ
トｂ−ＦＧＦの中から選ばれる１種を使用するか、ある
いは複数種を併用することが好ましい。
【００３２】また、本発明においては、細胞成長因子と
して上述のようにヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒ
トＥＧＦ、ヒトｂ−ＦＧＦを含有することができるが、
これらに限定されない。それぞれ、ＩＧＦ、インスリ
ン、ＥＧＦ、ＦＧＦ様活性を有する物質であればいずれ
でも良い（蛋白質核酸酵素，３６巻，７号，１０７８−
１０８７頁，１２３７−１２４６頁，１９９１、臨床免
疫，２７巻，Ｓｕｐｐｌ．１６，３０７−３１６頁，１
９９５）。例えば、動物の体内や動物細胞で産生される
天然由来の物質、遺伝子組み替え技術で生産される物
質、また遺伝子組み替え技術で、これらの構造の一部を
欠失させたり、アミノ酸を他のアミノ酸で置換あるいは
修飾した改変体および糖鎖を修飾あるいは欠失させた類
似物などが挙げられる。好ましくは、ヒト由来かヒト由
来と同等構造を有するものがよい。これらのいくつかは
市販品として入手することができる。また、このような
ヒト細胞成長因子としては、公知のいかなる製剤学的製
造法により得られたものでも使用することができる。
して上述のようにヒトＩＧＦ−１、ヒトインスリン、ヒ
トＥＧＦ、ヒトｂ−ＦＧＦを含有することができるが、
これらに限定されない。それぞれ、ＩＧＦ、インスリ
ン、ＥＧＦ、ＦＧＦ様活性を有する物質であればいずれ
でも良い（蛋白質核酸酵素，３６巻，７号，１０７８−
１０８７頁，１２３７−１２４６頁，１９９１、臨床免
疫，２７巻，Ｓｕｐｐｌ．１６，３０７−３１６頁，１
９９５）。例えば、動物の体内や動物細胞で産生される
天然由来の物質、遺伝子組み替え技術で生産される物
質、また遺伝子組み替え技術で、これらの構造の一部を
欠失させたり、アミノ酸を他のアミノ酸で置換あるいは
修飾した改変体および糖鎖を修飾あるいは欠失させた類
似物などが挙げられる。好ましくは、ヒト由来かヒト由
来と同等構造を有するものがよい。これらのいくつかは
市販品として入手することができる。また、このような
ヒト細胞成長因子としては、公知のいかなる製剤学的製
造法により得られたものでも使用することができる。
【００３３】本発明の第１の態様及び第２の態様のいず
れの治癒剤ならびに本発明の第３の態様及び第４の態様
のいずれの細胞増殖および／または細胞成長促進剤も種
々の剤型にすることができ、その場合に種々の添加剤等
の成分を配合することができる。例えば、ＴＭ様蛋白質
は、薬剤として一般的に用いられる適当な担体または、
媒体、例えば滅菌水や生理食塩水、植物油（例、ゴマ
油、オリーブ油）、鉱油（例、ワセリン、パラフィ
ン）、高級アルコール（例、セタノール、ステアリルア
ルコール）、高級脂肪酸（例、ステアリン酸、パルミチ
ン酸）、無害性有機溶媒（例、エタノール）等、さらに
は必要に応じて賦形剤（例、マンニトール、カルボキシ
メチルセルロース）、着色剤、乳化剤（例、コレステロ
ール）、懸濁剤（例、アラビアゴム）、界面活性剤
（例、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油系界面活性剤、
ポリエチレングリコール系界面活性剤）、溶解補助剤
（例、界面活性剤、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウ
ム）、吸着防止剤（例、非イオン性界面活性剤、ゼラチ
ン）、安定化剤（例、アミノ酸、糖、糖アルコール、ア
ルブミン）または保存剤（例、ベンジルアルコール、パ
ラベン）、保湿剤（例、尿素、コレステロール）、酸化
防止剤（例、トコフェロール）等と適宜組み合わせて、
生体に効果的に投与するのに適した注射剤、経皮吸収
剤、点眼剤、経鼻吸収剤、経口剤等の医薬用製剤、好ま
しくは注射剤もしくは経皮吸収剤に調製することが出来
る。例えば、注射剤の製剤としては、凍結乾燥品や、注
射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに封入した形等で提供
できる。また、経皮吸収剤としては、液剤、軟膏剤、ク
リーム剤、ゲル剤、バップ剤、人工皮膚類等で提供でき
る。
れの治癒剤ならびに本発明の第３の態様及び第４の態様
のいずれの細胞増殖および／または細胞成長促進剤も種
々の剤型にすることができ、その場合に種々の添加剤等
の成分を配合することができる。例えば、ＴＭ様蛋白質
は、薬剤として一般的に用いられる適当な担体または、
媒体、例えば滅菌水や生理食塩水、植物油（例、ゴマ
油、オリーブ油）、鉱油（例、ワセリン、パラフィ
ン）、高級アルコール（例、セタノール、ステアリルア
ルコール）、高級脂肪酸（例、ステアリン酸、パルミチ
ン酸）、無害性有機溶媒（例、エタノール）等、さらに
は必要に応じて賦形剤（例、マンニトール、カルボキシ
メチルセルロース）、着色剤、乳化剤（例、コレステロ
ール）、懸濁剤（例、アラビアゴム）、界面活性剤
（例、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油系界面活性剤、
ポリエチレングリコール系界面活性剤）、溶解補助剤
（例、界面活性剤、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウ
ム）、吸着防止剤（例、非イオン性界面活性剤、ゼラチ
ン）、安定化剤（例、アミノ酸、糖、糖アルコール、ア
ルブミン）または保存剤（例、ベンジルアルコール、パ
ラベン）、保湿剤（例、尿素、コレステロール）、酸化
防止剤（例、トコフェロール）等と適宜組み合わせて、
生体に効果的に投与するのに適した注射剤、経皮吸収
剤、点眼剤、経鼻吸収剤、経口剤等の医薬用製剤、好ま
しくは注射剤もしくは経皮吸収剤に調製することが出来
る。例えば、注射剤の製剤としては、凍結乾燥品や、注
射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに封入した形等で提供
できる。また、経皮吸収剤としては、液剤、軟膏剤、ク
リーム剤、ゲル剤、バップ剤、人工皮膚類等で提供でき
る。
【００３４】本発明の創傷治癒剤の投与方法としては、
例えば、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、経口投与
等の方法によって、ＴＭ様蛋白質量として一日約０．０
１〜１０００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、０．１〜
１００μｇ／ｋｇとなる量を投与したり、浸透圧ポンプ
等に封入し生体に留置することにより連続的に投与する
ことができる。なお、ＴＭ様蛋白質に加えてヒトＩＧＦ
−１またはヒトインスリンまたはヒトＥＧＦまたはヒト
ｂ−ＦＧＦを有効成分として含有させた製剤は、上記の
ＴＭ様蛋白質投与と同時に、各因子をそれぞれ、一日約
０．０１〜１０００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、
０．１〜１００μｇ／ｋｇとなる量を投与することが好
ましい。
例えば、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、経口投与
等の方法によって、ＴＭ様蛋白質量として一日約０．０
１〜１０００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、０．１〜
１００μｇ／ｋｇとなる量を投与したり、浸透圧ポンプ
等に封入し生体に留置することにより連続的に投与する
ことができる。なお、ＴＭ様蛋白質に加えてヒトＩＧＦ
−１またはヒトインスリンまたはヒトＥＧＦまたはヒト
ｂ−ＦＧＦを有効成分として含有させた製剤は、上記の
ＴＭ様蛋白質投与と同時に、各因子をそれぞれ、一日約
０．０１〜１０００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、
０．１〜１００μｇ／ｋｇとなる量を投与することが好
ましい。
【００３５】また、経皮吸収剤として、熱傷、創傷部位
に、液剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、バップ剤等の
方法により局所適用することにより、例えば、ＴＭ様蛋
白質濃度を約０．００１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに
好ましくは、０．０１〜１００μｇ／ｍｌの濃度で適用
することができる。なお、ヒトＴＭ様蛋白質に加えてヒ
トＩＧＦ−１またはヒトインスリンまたはヒトＥＧＦま
たはヒトｂ−ＦＧＦを有効成分として含有する製剤は、
上記のＴＭ様蛋白質適用と同時に、各因子をそれぞれ、
一日約０．０１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに好ましく
は、０．１〜１００μｇ／ｍｌとなる量を適用する。
に、液剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、バップ剤等の
方法により局所適用することにより、例えば、ＴＭ様蛋
白質濃度を約０．００１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに
好ましくは、０．０１〜１００μｇ／ｍｌの濃度で適用
することができる。なお、ヒトＴＭ様蛋白質に加えてヒ
トＩＧＦ−１またはヒトインスリンまたはヒトＥＧＦま
たはヒトｂ−ＦＧＦを有効成分として含有する製剤は、
上記のＴＭ様蛋白質適用と同時に、各因子をそれぞれ、
一日約０．０１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに好ましく
は、０．１〜１００μｇ／ｍｌとなる量を適用する。
【００３６】さらに、熱傷の時に用いる培養皮膚移植等
に際しては、細胞の培養液中に、例えば、ヒトＴＭ様蛋
白質濃度を約０．００１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに
好ましくは、０．０１〜１００μｇ／ｍｌの濃度で添加
することもできる。なお、ＴＭ様蛋白質に加えてヒトＩ
ＧＦ−１またはヒトインスリンまたはヒトＥＧＦまたは
ヒトｂ−ＦＧＦをＴＭ様蛋白質添加と同時に、各因子を
それぞれ、約０．０１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに好
ましくは、０．１〜１００μｇ／ｍｌの濃度で添加する
こともできる。
に際しては、細胞の培養液中に、例えば、ヒトＴＭ様蛋
白質濃度を約０．００１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに
好ましくは、０．０１〜１００μｇ／ｍｌの濃度で添加
することもできる。なお、ＴＭ様蛋白質に加えてヒトＩ
ＧＦ−１またはヒトインスリンまたはヒトＥＧＦまたは
ヒトｂ−ＦＧＦをＴＭ様蛋白質添加と同時に、各因子を
それぞれ、約０．０１〜１０００μｇ／ｍｌ、さらに好
ましくは、０．１〜１００μｇ／ｍｌの濃度で添加する
こともできる。
【００３７】
【作用】本発明の創傷治癒剤は、有効成分として、線維
芽細胞などの細胞の成長および増殖促進効果を発揮する
ＴＭ様蛋白質、あるいはＴＭ様蛋白質とヒト細胞成長因
子の双方を含有するので、種々の創傷、例えば、角膜潰
瘍、放射線角膜傷、角膜移植その他の手術誘発眼内創傷
のような眼創傷および切開、やけど、切り傷、破傷、深
部術創、皮膚移植によるドナー部位創および潰瘍（皮
膚、とこずれ、静脈うっ血および糖尿病）のような皮膚
創のごとき上皮損傷、あるいは消化管の潰瘍、口腔・気
道または尿路のごとき粘膜の損傷などの治療に用いるこ
とができる。さらに、乾せん、日焼け、皮膚発疹のよう
な皮膚傷害にも用いることができる。
芽細胞などの細胞の成長および増殖促進効果を発揮する
ＴＭ様蛋白質、あるいはＴＭ様蛋白質とヒト細胞成長因
子の双方を含有するので、種々の創傷、例えば、角膜潰
瘍、放射線角膜傷、角膜移植その他の手術誘発眼内創傷
のような眼創傷および切開、やけど、切り傷、破傷、深
部術創、皮膚移植によるドナー部位創および潰瘍（皮
膚、とこずれ、静脈うっ血および糖尿病）のような皮膚
創のごとき上皮損傷、あるいは消化管の潰瘍、口腔・気
道または尿路のごとき粘膜の損傷などの治療に用いるこ
とができる。さらに、乾せん、日焼け、皮膚発疹のよう
な皮膚傷害にも用いることができる。
【００３８】本発明の細胞増殖および／または細胞成長
促進剤は、特に線維芽細胞の増殖／成長を促進し、肉芽
組織形成促進に働く。また、細胞培養系に添加すること
により、細胞の増殖を促進することができる。移植に用
いるヒト細胞の培養液に添加してそのヒト細胞を培養す
ることもできる。
促進剤は、特に線維芽細胞の増殖／成長を促進し、肉芽
組織形成促進に働く。また、細胞培養系に添加すること
により、細胞の増殖を促進することができる。移植に用
いるヒト細胞の培養液に添加してそのヒト細胞を培養す
ることもできる。
【００３９】
【実施例】以下にＴＭ様蛋白質の取得例及び本発明の実
施例を挙げて、本発明をより具体的に説明するが、本発
明に用いるＴＭ様蛋白質は、以下の取得例にあげたもの
に限定されることはなく、また、本発明は以下の実施例
に限定されるものでもない。
施例を挙げて、本発明をより具体的に説明するが、本発
明に用いるＴＭ様蛋白質は、以下の取得例にあげたもの
に限定されることはなく、また、本発明は以下の実施例
に限定されるものでもない。
【００４０】取得例１（ヒトＴＭ様蛋白質の取得例：Ｔ
ＭＥ1-6 ) 名和らの方法［バイオケミカル アンド バイオフィジ
カル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）１７
１、７２９−７３７、１９９０］に準じて、ｐＲＳ７Ｔ
Ｍを調製した。すなわち、ヒトｃＤＮＡライブラリーよ
り得たＴＭ遺伝子のフラグメントをｐＵＣ１１９発現ベ
クターに挿入した後、制限酵素処理を行いｐＲＳ７ＴＭ
を調製した。さらに、ｐＲＳ７ＴＭのＴＭシグナルシー
ケンスをインターフェロンγシグナルシーケンスで置き
換え、さらにＮ末端シーケンスを欠失させた。すなわ
ち、Ｓａｌ−ＢｓｔＮ１制限酵素処理により８０ｂｐの
新しいシグナルシーケンスを含むフラグメントを、Ｐｓ
ｔＩ制限酵素処理により１番目のＥＧＦドメインをコー
ドしているフラグメントを取得した後、リンカーと結合
させｐＴＭＰ２２を作製した。このｐＴＭＰ２２をＨｉ
ｎｄＩＩＩ−ＭｌｕＩ制限酵素処理し、生じたフラグメ
ントをｐＴＭｓ０７のＨｉｎｄＩＩＩ−ＭｌｕＩフラグ
メントと置換しｐＰ７ＴＭを作製した。Ｓｅｒ／Ｔｈｒ
ｒｉｃｈ領域を欠失させるためにｐＴＭｓ０７をＨｉ
ｎ ｃＩＩ制限酵素処理してフラグメントを単離し、さ
らにＨｐａＩＩ制限酵素処理を行うことにより６番目の
ＥＧＦドメインをコードしている７０ｂｐのフラグメン
トを取得した。このフラグメントのＬｙｓ−４６６の後
にストップコドンを含むリンカーを結合させた後、Ａｐ
ａ Ｉ−Ｘｂａ Ｉ制限酵素処理を行い、生じたフラグ
メントをｐＰ７ＴＭのＡｐａ Ｉ−Ｘｂａ Ｉ部位に組
み込みｐＰＧ３ＴＭを作製した。
ＭＥ1-6 ) 名和らの方法［バイオケミカル アンド バイオフィジ
カル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）１７
１、７２９−７３７、１９９０］に準じて、ｐＲＳ７Ｔ
Ｍを調製した。すなわち、ヒトｃＤＮＡライブラリーよ
り得たＴＭ遺伝子のフラグメントをｐＵＣ１１９発現ベ
クターに挿入した後、制限酵素処理を行いｐＲＳ７ＴＭ
を調製した。さらに、ｐＲＳ７ＴＭのＴＭシグナルシー
ケンスをインターフェロンγシグナルシーケンスで置き
換え、さらにＮ末端シーケンスを欠失させた。すなわ
ち、Ｓａｌ−ＢｓｔＮ１制限酵素処理により８０ｂｐの
新しいシグナルシーケンスを含むフラグメントを、Ｐｓ
ｔＩ制限酵素処理により１番目のＥＧＦドメインをコー
ドしているフラグメントを取得した後、リンカーと結合
させｐＴＭＰ２２を作製した。このｐＴＭＰ２２をＨｉ
ｎｄＩＩＩ−ＭｌｕＩ制限酵素処理し、生じたフラグメ
ントをｐＴＭｓ０７のＨｉｎｄＩＩＩ−ＭｌｕＩフラグ
メントと置換しｐＰ７ＴＭを作製した。Ｓｅｒ／Ｔｈｒ
ｒｉｃｈ領域を欠失させるためにｐＴＭｓ０７をＨｉ
ｎ ｃＩＩ制限酵素処理してフラグメントを単離し、さ
らにＨｐａＩＩ制限酵素処理を行うことにより６番目の
ＥＧＦドメインをコードしている７０ｂｐのフラグメン
トを取得した。このフラグメントのＬｙｓ−４６６の後
にストップコドンを含むリンカーを結合させた後、Ａｐ
ａ Ｉ−Ｘｂａ Ｉ制限酵素処理を行い、生じたフラグ
メントをｐＰ７ＴＭのＡｐａ Ｉ−Ｘｂａ Ｉ部位に組
み込みｐＰＧ３ＴＭを作製した。
【００４１】このプラスミド（ｐＰＧ３ＴＭ）を、常法
に従ってチャイニーズハムスター卵母細胞株（ＣＨＯ−
Ｋ１細胞株）にトランスフェクトした。この細胞を選択
培地でさらに２〜３週間培養することにより安定した形
質転換細胞を選抜し、生じたコロニーをさらに培養し
た。この培養上清を抗ＴＭモノクローナル抗体カラムと
ゲル濾過により精製し、ＴＭＥ1-6 を得た。
に従ってチャイニーズハムスター卵母細胞株（ＣＨＯ−
Ｋ１細胞株）にトランスフェクトした。この細胞を選択
培地でさらに２〜３週間培養することにより安定した形
質転換細胞を選抜し、生じたコロニーをさらに培養し
た。この培養上清を抗ＴＭモノクローナル抗体カラムと
ゲル濾過により精製し、ＴＭＥ1-6 を得た。
【００４２】取得例２（可溶性ＴＭの取得例：ＵＴＭ
０） 特開平３−２１８３９９号公報に記載された方法に準じ
て調製した。すなわち、原尿１００Ｌをアクリル繊維で
濾過して尿中のウロキナーゼを吸着除去し、通過尿を限
外濾過膜を使用して脱塩濃縮した。次いで、ＤＥＡＥセ
ルロース（ワットマン社製）カラム、ＤＩＰ−トロンビ
ン−アガロースクロマトグラフィーおよびセファクリル
Ｓ−３００（ファルマシアファインケミカル社製）カラ
ムを用いて順次精製し、活性画分を採取した（以下、Ｕ
ＴＭ０とする）。この画分は一晩蒸留水に対して透析し
た後凍結乾燥した。
０） 特開平３−２１８３９９号公報に記載された方法に準じ
て調製した。すなわち、原尿１００Ｌをアクリル繊維で
濾過して尿中のウロキナーゼを吸着除去し、通過尿を限
外濾過膜を使用して脱塩濃縮した。次いで、ＤＥＡＥセ
ルロース（ワットマン社製）カラム、ＤＩＰ−トロンビ
ン−アガロースクロマトグラフィーおよびセファクリル
Ｓ−３００（ファルマシアファインケミカル社製）カラ
ムを用いて順次精製し、活性画分を採取した（以下、Ｕ
ＴＭ０とする）。この画分は一晩蒸留水に対して透析し
た後凍結乾燥した。
【００４３】取得例３（可溶性ＴＭの取得例：ｒｓＴ
Ｍ） 名和らの方法［バイオケミカル アンド バイオフィジ
カル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）１７
１、７２９−７３７、１９９０］に準じて、ｐＲＳ７Ｔ
Ｍを調製した。すなわち、ヒトｃＤＮＡライブラリーよ
り得たＴＭ遺伝子のフラグメントをｐＵＣ１１９発現ベ
クターに挿入した後、制限酵素処理等を行い、ｒｓＴＭ
をコードするプラスミドｐＴＭｓ０７を調製した。さら
に、Ｎｅｏr 遺伝子を組み込み、発現プラスミドｐＴＭ
ｓ０７−ｎｅｏを作製した。
Ｍ） 名和らの方法［バイオケミカル アンド バイオフィジ
カル リサーチ コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．）１７
１、７２９−７３７、１９９０］に準じて、ｐＲＳ７Ｔ
Ｍを調製した。すなわち、ヒトｃＤＮＡライブラリーよ
り得たＴＭ遺伝子のフラグメントをｐＵＣ１１９発現ベ
クターに挿入した後、制限酵素処理等を行い、ｒｓＴＭ
をコードするプラスミドｐＴＭｓ０７を調製した。さら
に、Ｎｅｏr 遺伝子を組み込み、発現プラスミドｐＴＭ
ｓ０７−ｎｅｏを作製した。
【００４４】このプラスミド（ｐＴＭｓ０７−ｎｅｏ）
を、常法に従ってチャイニーズハムスター卵母細胞株
（ＣＨＯ−Ｋ１細胞株）にトランスフェクトした。この
細胞を選択培地でさらに２〜３週間培養することにより
安定した形質転換細胞を選抜し、生じたコロニーをさら
に培養した。この培養上清を抗ＴＭモノクローナル抗体
カラムとゲル濾過により精製し、ｒｓＴＭを得た。
を、常法に従ってチャイニーズハムスター卵母細胞株
（ＣＨＯ−Ｋ１細胞株）にトランスフェクトした。この
細胞を選択培地でさらに２〜３週間培養することにより
安定した形質転換細胞を選抜し、生じたコロニーをさら
に培養した。この培養上清を抗ＴＭモノクローナル抗体
カラムとゲル濾過により精製し、ｒｓＴＭを得た。
【００４５】取得例４（可溶性ＴＭの取得例：Ｄ１２
３） ＷＯ９２／００３２５号公報の方法に準じて製造した。
すなわち、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーより釣り上げ
たＤＮＡを利用してアミノ末端のアミノ酸配列がＡｌａ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−であるアミノ酸４９７残基よりなる
可溶性トロンボモジュリンを発現するベクターを調製
し、これをＣＨＯ細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行
って高発現株を得た。この高発現株の培養液をＤＩＰ−
トロンビン−アガロースカラムとゲル濾過により精製
し、Ｄ１２３を得た。
３） ＷＯ９２／００３２５号公報の方法に準じて製造した。
すなわち、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーより釣り上げ
たＤＮＡを利用してアミノ末端のアミノ酸配列がＡｌａ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−であるアミノ酸４９７残基よりなる
可溶性トロンボモジュリンを発現するベクターを調製
し、これをＣＨＯ細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行
って高発現株を得た。この高発現株の培養液をＤＩＰ−
トロンビン−アガロースカラムとゲル濾過により精製
し、Ｄ１２３を得た。
【００４６】実施例１（ヒトＴＭによる線維芽細胞に対
する効果１：増殖促進効果） スイス３Ｔ３細胞（Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂａｎｋ）を１０％牛胎児血清（以
下、ＣＳと略す。：ギブコ社）を含むＤＭＥＭ培地（ギ
ブコ社）に懸濁し、３５ｍｍの培養プレートに１ウェル
あたり１×１０４個の密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ
2 ／９５％Ａｉｒの条件で培養した。２４時間後に５０
ｎｇ／ｍｌのヒトＴＭを含む種々の濃度のＣＳを含むＤ
ＭＥＭ培地（０．１〜１０％ＣＳ）に培地交換し、その
後は２日間に一度（図１の矢印参照）培地交換した。細
胞は０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ／０．０２％ＥＤＴＡで
処理し、細胞数を測定した。なお、ヒトＴＭは、取得例
１に記載した方法に従い、ヒトＴＭのＥ１２３４５６を
包含するペプチド（ＴＭＥ1-6 ）をチャイニーズハムス
ター卵母細胞（ＣＨＯ−Ｋ１細胞）で発現後、均一に精
製したものを使用した。
する効果１：増殖促進効果） スイス３Ｔ３細胞（Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂａｎｋ）を１０％牛胎児血清（以
下、ＣＳと略す。：ギブコ社）を含むＤＭＥＭ培地（ギ
ブコ社）に懸濁し、３５ｍｍの培養プレートに１ウェル
あたり１×１０４個の密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ
2 ／９５％Ａｉｒの条件で培養した。２４時間後に５０
ｎｇ／ｍｌのヒトＴＭを含む種々の濃度のＣＳを含むＤ
ＭＥＭ培地（０．１〜１０％ＣＳ）に培地交換し、その
後は２日間に一度（図１の矢印参照）培地交換した。細
胞は０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ／０．０２％ＥＤＴＡで
処理し、細胞数を測定した。なお、ヒトＴＭは、取得例
１に記載した方法に従い、ヒトＴＭのＥ１２３４５６を
包含するペプチド（ＴＭＥ1-6 ）をチャイニーズハムス
ター卵母細胞（ＣＨＯ−Ｋ１細胞）で発現後、均一に精
製したものを使用した。
【００４７】この結果を図１に示す。図１から明らかな
ように、ＴＭＥ1-6 は０．１％あるいは１％血清の存在
下で細胞増殖作用を示した。また、ＵＴＭ０、ｒｓＴＭ
およびＤ１２３も同様の作用を示す。
ように、ＴＭＥ1-6 は０．１％あるいは１％血清の存在
下で細胞増殖作用を示した。また、ＵＴＭ０、ｒｓＴＭ
およびＤ１２３も同様の作用を示す。
【００４８】一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖促進能
は、ｉｎ ｖｉｖｏでの組織の成長を起こし得る細胞分
化と直接関連しており、強いｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖促進
能を有する物質がｉｎ ｖｉｖｏにおいても成長刺激効
果を有することは成長因子の研究においては良く知られ
ているところである。従って、ヒトＴＭ様蛋白質は、生
体でも効果を有することがわかる。
は、ｉｎ ｖｉｖｏでの組織の成長を起こし得る細胞分
化と直接関連しており、強いｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖促進
能を有する物質がｉｎ ｖｉｖｏにおいても成長刺激効
果を有することは成長因子の研究においては良く知られ
ているところである。従って、ヒトＴＭ様蛋白質は、生
体でも効果を有することがわかる。
【００４９】実施例２（ヒトＴＭによる線維芽細胞に対
する効果２：ＤＮＡ合成促進効果） スイス３Ｔ３細胞を１０％ＣＳを含むＤＭＥＭ培地に懸
濁し、９６ウェルのマイクロタイタープレートに播種
し、３７℃、５％ＣＯ2 ／９５％Ａｉｒの条件でコンフ
ルエントになるまで増殖させた。次いで、培養液を０．
１％ＣＳを含む（又は含まない）ＤＭＥＭ培地で置換し
４８時間培養することにより、細胞は完全に非活動性と
なった。次に、表１及び図２に示すように、種々の濃度
のヒトＴＭおよび種々の濃度の成長因子を添加し、３７
℃、２０時間培養した。その後3Ｈ-チミジン（１μＣｉ
／ウェル）を加え、さらに８時間培養した。ウェルを氷
冷リン酸緩衝液（以下、ＰＢＳと略す）で洗浄して、過
剰の3Ｈ-チミジンを除いた後、細胞を０．２５％ｔｒｙ
ｐｓｉｎ／０．０２％ＥＤＴＡで処理してプレートより
剥離させ、グラスファイバーフィルター上に集めた。細
胞を氷冷したトリクロル酢酸で洗浄後、フィルター上に
残存する放射能を液体シンチレーションカウンターによ
り測定した。なお、ヒトＴＭは、取得例１に従い、ヒト
ＴＭのＥ１２３４５６を包含するペプチド（ＴＭＥ
1-6 ）をチャイニーズハムスター卵母細胞（ＣＨＯ−Ｋ
１細胞）で発現後、均一に精製したもの、取得例２に従
い精製したヒト尿由来可溶性ＴＭ（ＵＴＭ０）および取
得例３に従い精製したｒｓＴＭを使用した。ＩＧＦ−１
およびｂＦＧＦはインタージェン社、インスリンは和光
純薬、ＥＧＦはアップステートバイオテクノロジー社よ
りそれぞれ購入して使用した。
する効果２：ＤＮＡ合成促進効果） スイス３Ｔ３細胞を１０％ＣＳを含むＤＭＥＭ培地に懸
濁し、９６ウェルのマイクロタイタープレートに播種
し、３７℃、５％ＣＯ2 ／９５％Ａｉｒの条件でコンフ
ルエントになるまで増殖させた。次いで、培養液を０．
１％ＣＳを含む（又は含まない）ＤＭＥＭ培地で置換し
４８時間培養することにより、細胞は完全に非活動性と
なった。次に、表１及び図２に示すように、種々の濃度
のヒトＴＭおよび種々の濃度の成長因子を添加し、３７
℃、２０時間培養した。その後3Ｈ-チミジン（１μＣｉ
／ウェル）を加え、さらに８時間培養した。ウェルを氷
冷リン酸緩衝液（以下、ＰＢＳと略す）で洗浄して、過
剰の3Ｈ-チミジンを除いた後、細胞を０．２５％ｔｒｙ
ｐｓｉｎ／０．０２％ＥＤＴＡで処理してプレートより
剥離させ、グラスファイバーフィルター上に集めた。細
胞を氷冷したトリクロル酢酸で洗浄後、フィルター上に
残存する放射能を液体シンチレーションカウンターによ
り測定した。なお、ヒトＴＭは、取得例１に従い、ヒト
ＴＭのＥ１２３４５６を包含するペプチド（ＴＭＥ
1-6 ）をチャイニーズハムスター卵母細胞（ＣＨＯ−Ｋ
１細胞）で発現後、均一に精製したもの、取得例２に従
い精製したヒト尿由来可溶性ＴＭ（ＵＴＭ０）および取
得例３に従い精製したｒｓＴＭを使用した。ＩＧＦ−１
およびｂＦＧＦはインタージェン社、インスリンは和光
純薬、ＥＧＦはアップステートバイオテクノロジー社よ
りそれぞれ購入して使用した。
【００５０】結果を図２、図３および表１に示す。
【００５１】図２から明らかなように、ＴＭＥ1-6 は血
清の存在下あるいは非存在下においてＤＮＡ合成促進作
用を示した。また、図３から明らかなように、ＴＭＥ
1-6 、ｒｓＴＭおよびＵＴＭ０いずれもＤＮＡ合成促進
作用を示し、ＵＴＭ０が最も強い作用を示した。
清の存在下あるいは非存在下においてＤＮＡ合成促進作
用を示した。また、図３から明らかなように、ＴＭＥ
1-6 、ｒｓＴＭおよびＵＴＭ０いずれもＤＮＡ合成促進
作用を示し、ＵＴＭ０が最も強い作用を示した。
【００５２】
【表１】 添加サンフ゜ル 3H-チミシ゛ン取り込み(dpm/ウェル) 無添加 +ＴＭＥ1-6 (50ng/ml) 無添加(対照) 2775±230 4867±470＊＊ ヒト IGF-1(10ng/ml) 4013±695 8011±926＊＊ ヒト insulin(1μg/ml) 6924±925 15124±650＊＊ ヒト EGF(10ng/ml) 10608±686 12891±870 ヒト bFGF(1ng/ml) 8416±793 10665±391＊ 10%CS 145867±10101 N.D. ＊;ｐ＜０．０５ ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝５） ＊＊;ｐ＜０．０１ ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝５） 表１から明らかなように、ＴＭＥ1-6 は単独でＤＮＡ合
成促進作用を示すのみならず、細胞成長因子として知ら
れているＥＧＦやｂ−ＦＧＦとは相加的な作用を示し、
インスリンあるいはＩＧＦ−１とは相乗的なＤＮＡ合成
促進作用を示した。また、ＵＴＭ０、ｒｓＴＭおよびＤ
１２３も同様の作用を示した。
成促進作用を示すのみならず、細胞成長因子として知ら
れているＥＧＦやｂ−ＦＧＦとは相加的な作用を示し、
インスリンあるいはＩＧＦ−１とは相乗的なＤＮＡ合成
促進作用を示した。また、ＵＴＭ０、ｒｓＴＭおよびＤ
１２３も同様の作用を示した。
【００５３】実施例３（ヒトＴＭによる線維芽細胞に対
する効果３：グルコース輸送促進効果） 浜中らの方法［エクスペリメンタル セル リサーチ
（Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．）１８６、８３−８９、
１９９０］に準じて実施した。すなわち、スイス３Ｔ３
細胞を１０％ＣＳを含むＤＭＥＭ培地に懸濁し、２４ウ
ェルのマルチプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ2 ／
９５％Ａｉｒの条件でコンフルエントになるまで増殖さ
せた。次いで、培養液を０．５％ＣＳを含むＤＭＥＭ培
地で置換し４８時間培養した後、５０ｎｇ／ｍｌのヒト
ＴＭ、１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦあるいは１０％ＣＳを添加
し、３７℃、６時間培養した。細胞をＫＲＰ緩衝液（１
４０ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、０．９ｍＭ
ＣａＣｌ2 、１．４７ｍＭＫＨ2ＰＯ4 、８．０６ｍ
Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4 、０．４９ｍＭ ＭｇＣｌ2 、０．
１％ウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）で一回洗浄した
後、０．５ｍｌの同緩衝液で３７℃、３０分間プレイン
キュベートした。その後２−デオキシ−Ｄ−［１−
3Ｈ］グルコース（０．５μＣｉ／ウェル、１０μＭ）
を加え、１０分間培養した。ウェルを２５ｍＭグルコー
スを含む氷冷ＰＢＳで３回洗浄して過剰の放射能を除い
た後、０．１％ＳＤＳ処理して細胞破砕液を得、その放
射能を液体シンチレーションカウンターにより測定し
た。なお、ヒトＴＭは、実施例に従い、ヒトＴＭのＥ１
２３４５６ドメインを包含するペプチド（ＴＭＥ1-6 )
をチャイニーズハムスター卵母細胞（ＣＨＯ−Ｋ１細
胞）で発現後、均一に精製したものを使用した。ＥＧＦ
はアップステートバイオテクノロジー社より購入して使
用した。結果を表２に示す。
する効果３：グルコース輸送促進効果） 浜中らの方法［エクスペリメンタル セル リサーチ
（Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．）１８６、８３−８９、
１９９０］に準じて実施した。すなわち、スイス３Ｔ３
細胞を１０％ＣＳを含むＤＭＥＭ培地に懸濁し、２４ウ
ェルのマルチプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ2 ／
９５％Ａｉｒの条件でコンフルエントになるまで増殖さ
せた。次いで、培養液を０．５％ＣＳを含むＤＭＥＭ培
地で置換し４８時間培養した後、５０ｎｇ／ｍｌのヒト
ＴＭ、１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦあるいは１０％ＣＳを添加
し、３７℃、６時間培養した。細胞をＫＲＰ緩衝液（１
４０ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、０．９ｍＭ
ＣａＣｌ2 、１．４７ｍＭＫＨ2ＰＯ4 、８．０６ｍ
Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4 、０．４９ｍＭ ＭｇＣｌ2 、０．
１％ウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）で一回洗浄した
後、０．５ｍｌの同緩衝液で３７℃、３０分間プレイン
キュベートした。その後２−デオキシ−Ｄ−［１−
3Ｈ］グルコース（０．５μＣｉ／ウェル、１０μＭ）
を加え、１０分間培養した。ウェルを２５ｍＭグルコー
スを含む氷冷ＰＢＳで３回洗浄して過剰の放射能を除い
た後、０．１％ＳＤＳ処理して細胞破砕液を得、その放
射能を液体シンチレーションカウンターにより測定し
た。なお、ヒトＴＭは、実施例に従い、ヒトＴＭのＥ１
２３４５６ドメインを包含するペプチド（ＴＭＥ1-6 )
をチャイニーズハムスター卵母細胞（ＣＨＯ−Ｋ１細
胞）で発現後、均一に精製したものを使用した。ＥＧＦ
はアップステートバイオテクノロジー社より購入して使
用した。結果を表２に示す。
【００５４】
【表２】 ＊;ｐ＜０．０５ ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝５） ＊＊;ｐ＜０．０１ ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝５） 表２から明らかなように、ＴＭＥ1-6 は２−デオキシグ
ルコース取り込みの促進作用を示した。また、ＵＴＭ
０、ｒｓＴＭおよびＤ１２３も同様の作用を示した。
ルコース取り込みの促進作用を示した。また、ＵＴＭ
０、ｒｓＴＭおよびＤ１２３も同様の作用を示した。
【００５５】実施例４（製剤例１） 以下の成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
【００５６】 ＴＭＥ1-6 ５ ｍｇ 精製ゼラチン ５０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ
【００５７】実施例５（製剤例２） 以下の成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
【００５８】 ＵＴＭ０ ５ ｍｇ アルブミン ２０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ
【００５９】実施例６（製剤例３） 以下の成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
【００６０】 ｒｓＴＭ １０ ｍｇ 精製ゼラチン ５０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ
【００６１】実施例７（製剤例４） 以下の成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
したあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結
乾燥して注射用製剤を調製した。
【００６２】 Ｄ１２３ １０ ｍｇ アルブミン ２０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ
【００６３】実施例８（製剤例５） 以下の成分を混合、撹拌して均一な組成物（軟膏剤）を
調製した。
調製した。
【００６４】 ＴＭＥ1-6 ０．０１％ 白色ワセリン ９６．８％ 流動パラフィン ３ ％ ジブチルヒドロキシトルエン ０．２％
【００６５】実施例９（製剤例６） 以下の成分を混合、撹拌して均一な組成物（軟膏剤）を
調製した。
調製した。
【００６６】 ＵＴＭ０ ０．０１％ ＩＧＦ−１ ０．０１％ 白色ワセリン ９６．８％ 流動パラフィン ３ ％ ジブチルヒドロキシトルエン ０．２％
【００６７】
【発明の効果】本発明の創傷治癒剤ならびに細胞増殖お
よび／または細胞成長促進剤は、組織損傷部位の細胞、
例えば線維芽細胞などの細胞の成長あるいは増殖を促進
する効果を発揮するヒトＴＭ様蛋白質、あるいはヒトＴ
Ｍ様蛋白質に加えてさらにヒト細胞成長因子を含有する
ので、種々の創傷、例えば、角膜潰瘍、放射線角膜傷、
角膜移植、他の手術誘発眼内創傷のような眼創傷および
切開、やけど、切り傷、破傷、深部術創、皮膚移植によ
るドナー部位創および潰瘍（皮膚、とこずれ、静脈うっ
血および糖尿病）のような皮膚創のごとき上皮損傷、あ
るいは消化管の潰瘍、口腔・気道または尿路のごとき粘
膜の損傷などの治療に用いることができる。さらに、乾
せん、日焼け、皮膚発疹のような皮膚傷害にも用いるこ
とができる。
よび／または細胞成長促進剤は、組織損傷部位の細胞、
例えば線維芽細胞などの細胞の成長あるいは増殖を促進
する効果を発揮するヒトＴＭ様蛋白質、あるいはヒトＴ
Ｍ様蛋白質に加えてさらにヒト細胞成長因子を含有する
ので、種々の創傷、例えば、角膜潰瘍、放射線角膜傷、
角膜移植、他の手術誘発眼内創傷のような眼創傷および
切開、やけど、切り傷、破傷、深部術創、皮膚移植によ
るドナー部位創および潰瘍（皮膚、とこずれ、静脈うっ
血および糖尿病）のような皮膚創のごとき上皮損傷、あ
るいは消化管の潰瘍、口腔・気道または尿路のごとき粘
膜の損傷などの治療に用いることができる。さらに、乾
せん、日焼け、皮膚発疹のような皮膚傷害にも用いるこ
とができる。
【００６８】また、本発明の製剤は、上記の創傷に対
し、公知の製剤に比較して、より優れた作用を有してお
り、創傷治癒剤として有用である。
し、公知の製剤に比較して、より優れた作用を有してお
り、創傷治癒剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＴＭＥ1-6 のスイス３Ｔ３細胞の増殖
に及ぼす影響を示したグラフである。数値は、平均値±
標準誤差で表している。
に及ぼす影響を示したグラフである。数値は、平均値±
標準誤差で表している。
【図２】図２は、ＴＭＥ1-6 のスイス３Ｔ３細胞のＤＮ
Ａ合成に及ぼす影響を示したグラフである。
Ａ合成に及ぼす影響を示したグラフである。
【図３】図３は、ＴＭＥ1-6 、ｒｓＴＭおよびＵＴＭ０
のスイス３Ｔ３細胞のＤＮＡ合成に及ぼす影響を示した
グラフである。数値は、平均値±標準偏差で表してい
る。
のスイス３Ｔ３細胞のＤＮＡ合成に及ぼす影響を示した
グラフである。数値は、平均値±標準偏差で表してい
る。
Claims (12)
- 【請求項１】 トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分
として含有することを特徴とする創傷治癒剤。 - 【請求項２】 前記トロンボモジュリン様蛋白質が、以
下のアミノ酸配列１を有する請求項１に記載の創傷治癒
剤。 （アミノ酸配列１） 1 10 Gln Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly 11 20 Ala Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly 21 30 Cys Glu His Ala Cys Asn Ala Ile Pro Gly 31 40 Ala Pro Arg Cys Gln Cys Pro Ala Gly Ala 41 50 Ala Leu Gln Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr 51 60 Ala Ser Ala Thr Gln Ser Cys Asn Asp Leu 61 70 Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp 71 80 Gln Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu 81 90 Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gln His 91 100 Arg Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys Ile Leu 101 110 Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gln Arg Cys Val 111 120 Asn Thr Gln Gly Gly Phe Glu Cys His Cys 121 130 Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu 131 140 Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe Arg 141 150 Ala Asn Cys Glu Tyr Gln Cys Gln Pro Leu 151 160 Asn Gln Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala 161 170 Glu Gly Phe Ala Pro Ile Pro His Glu Pro 171 180 His Arg Cys Gln Met Phe Cys Asn Gln Thr 181 190 Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr 191 200 Gln Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr 201 210 Ile Leu Asp Asp Gly Phe Ile Cys Thr Asp 211 220 Ile Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe Cys 221 230 Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr 231 240 Phe Glu Cys Ile Cys Gly Pro Asp Ser Ala 241 250 Leu Val Arg His Ile Gly Thr Asp Cys Asp 251 253 Ser Gly Lys - 【請求項３】 前記トロンボモジュリン様蛋白質が、以
下の部分構造および性質を有する請求項１に記載の創傷
治癒剤。 イ）分子量 ７２，０００±３，０００［非還元状態で
のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）により測定］ ロ）等電点 ３．９±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：５．５±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：２．２±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：２．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ - 【請求項４】 前記トロンボモジュリン様蛋白質が、以
下の部分構造および性質を有する請求項１に記載の創傷
治癒剤。 イ）分子量 ７９，０００±３，０００［非還元状態で
のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定］ ロ）等電点 ３．８±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：６．２±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：３．１±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：３．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ - 【請求項５】 さらに、ヒト細胞成長因子を有効成分と
して含有する請求項１〜４のいずれかに記載の創傷治癒
剤。 - 【請求項６】 ヒト細胞成長因子として、ヒトインスリ
ン様細胞成長因子−１、ヒトインスリン、ヒト上皮細胞
成長因子および塩基性線維芽細胞成長因子の少なくとも
一つを含有する請求項５に記載の創傷治癒剤。 - 【請求項７】 トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分
として含有することを特徴とする細胞増殖および／また
は細胞成長促進剤。 - 【請求項８】 前記トロンボモジュリン様蛋白質が、以
下のアミノ酸配列１を有する請求項７に記載の細胞増殖
および／または細胞成長促進剤。 （アミノ酸配列１） 1 10 Gln Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly 11 20 Ala Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly 21 30 Cys Glu His Ala Cys Asn Ala Ile Pro Gly 31 40 Ala Pro Arg Cys Gln Cys Pro Ala Gly Ala 41 50 Ala Leu Gln Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr 51 60 Ala Ser Ala Thr Gln Ser Cys Asn Asp Leu 61 70 Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp 71 80 Gln Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu 81 90 Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gln His 91 100 Arg Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys Ile Leu 101 110 Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gln Arg Cys Val 111 120 Asn Thr Gln Gly Gly Phe Glu Cys His Cys 121 130 Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu 131 140 Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe Arg 141 150 Ala Asn Cys Glu Tyr Gln Cys Gln Pro Leu 151 160 Asn Gln Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala 161 170 Glu Gly Phe Ala Pro Ile Pro His Glu Pro 171 180 His Arg Cys Gln Met Phe Cys Asn Gln Thr 181 190 Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr 191 200 Gln Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr 201 210 Ile Leu Asp Asp Gly Phe Ile Cys Thr Asp 211 220 Ile Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe Cys 221 230 Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr 231 240 Phe Glu Cys Ile Cys Gly Pro Asp Ser Ala 241 250 Leu Val Arg His Ile Gly Thr Asp Cys Asp 251 253 Ser Gly Lys - 【請求項９】 前記トロンボモジュリン様蛋白質が、以
下の部分構造および性質を有する請求項７に記載の細胞
増殖および／または細胞成長促進剤。 イ）分子量 ７２，０００±３，０００［非還元状態で
のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）により測定］ ロ）等電点 ３．９±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：５．５±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：２．２±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：２．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ - 【請求項１０】 前記トロンボモジュリン様蛋白質が、
以下の部分構造および性質を有する請求項７に記載の細
胞増殖および／または細胞成長促進剤。 イ）分子量 ７９，０００±３，０００［非還元状態で
のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定］ ロ）等電点 ３．８±０．２ ハ）末端アミノ酸配列 Ｎ末端 ：Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ− Ｃ末端 ：−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ、または−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ａｒｇ ニ）糖含量（重量％） 中性糖 ：６．２±１．０％［フェノール硫酸法で測
定］ アミノ糖 ：３．１±１．０％［Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇ
ａｎ法（Ｂｌｉｘ変法）で測定］ シアル酸 ：３．８±１．５％［Ｗａｒｒｅｎ法で測
定］ - 【請求項１１】 さらにヒト細胞成長因子を有効成分と
して含有する請求項７〜１０のいずれかに記載の細胞増
殖および／または細胞成長促進剤。 - 【請求項１２】 ヒト細胞成長因子として、ヒトインス
リン様細胞成長因子−１、ヒトインスリン、ヒト上皮細
胞成長因子および塩基性線維芽細胞成長因子の少なくと
も一つを含有する請求項１１に記載の細胞増殖および／
または細胞成長促進剤。
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Cited By (6)
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-
1995
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| US10709767B2 (en) | 2012-05-31 | 2020-07-14 | Kinki University | Agent for prophylactic and/or therapeutic treatment of peripheral neuropathic pain caused by anticancer agent |
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