JPH101439A - 神経変性疾患治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】神経変性疾患を治療する効果があり、副作用が
軽度で安全な治療剤の提供。 【解決手段】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
して含有することを特徴とする神経変性疾患治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はトロンボモジュリン
（以下、ＴＭと略す）様蛋白質を有効成分として含有す
ることを特徴とする神経変性疾患治療剤に関する。

【０００２】

【従来技術】現在、中枢の神経変性疾患である、アルツ
ハイマー型痴呆症、パーキンソン病、ハンチントン舞踏
病、脳外傷あるいは脳損傷による神経障害等の治療剤と
して、ホパンテン酸カルシウム、イデベノン等の脳代謝
賦活薬や、ニカルジピン、シンナリジン等の脳循環改善
薬や、レボドパ等の脳機能改善薬が用いられているが、
これらの薬物の作用機序については不明な点が多く、臨
床的な治療効果も不十分であり、対症療法的に用いられ
ているのが実状である。また、末梢の神経変性疾患であ
る筋萎縮性側索硬化症、糖尿病性神経障害、及び制癌剤
による神経障害、アルコール性神経障害等などにおいて
も、筋弛緩薬、抗痙攣薬あるいはビタミン剤等の対症療
法がほとんどすべてであり、臨床的な治療効果も不十分
であるのが実状である。

【０００３】これに対し神経変性疾患の根本的な病因で
ある虚血、外傷、老化、或いは原因不明の病因による全
般的な、或いは特定の領域の神経細胞の機能低下、変
性、壊死に対し、直接的にそれを予防したり、再生を促
進させることにより疾患を治療することを目的として、
神経細胞の成長促進・生存維持・神経突起伸展促進をす
る物質、いわゆる神経栄養因子（以下、ＮＴＦと略す）
と称する物質を生体より探索・発見し、医薬品として応
用する試みが盛んに行われている。その代表例として神
経成長因子（以下、ＮＧＦと略す）があり、研究が進め
られているが、神経細胞の中の限られた細胞にしか効果
を示さないことが最近の研究で明らかとなっている（プ
ロシーディングス オブ ザ ナショナル アカデミー
オブ サイエンシーズ オブ ザ ユナイテッド ス
テイツ オブ アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）８８、９６１−９６５、１９９
１）。他に塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、脳
由来神経栄養因子（以下、ＢＤＮＦと略す）、毛様体神
経栄養因子（以下、ＣＮＴＦと略す）、ニューロトロフ
ィン−３、ニューロトロフィン−４、ニューロトロフィ
ン−５、インターロイキン２、インターロイキン３、イ
ンターロイキン６、インスリン様成長因子（以下、ＩＧ
Ｆ−１と略す）、肝実質細胞増殖因子（ＨＧＦ）等がＮ
ＴＦとしての作用を有することが示されている（古川昭
栄ら、クリニカルニューロサイエンス、９、１２８４−
１２８９、１９９１）。

【０００４】これらＮＴＦのいくつかについては、その
臨床応用が試みられつつある。すなわち、ＢＤＮＦ、Ｃ
ＮＴＦ、ＩＧＦ−１などを用いて、末梢の神経変性疾患
である筋萎縮性側索硬化症患者を対象として、臨床検討
が進行しつつある。現在までのところ、ＣＮＴＦの効果
が報告されているが、半減期が極めて短いためか、その
臨床効果は乏しかったのみならず、注射局所の疼痛・熱
感などの副作用が報告されている（岡澤均、最新医学、
５０、２１９７−２２０２、１９９５）。したがって、
現在までのところ、臨床上有用性が認められたＮＴＦは
なく、より効果が優れ、かつ、副作用が軽度な、安全な
治療剤が切望されている。

【０００５】一方、ＴＭは、１９８１年にエスモンらに
より血管内皮細胞表面上に存在する抗凝固物質として発
見され、その後１９８７年に鈴木らによりその全一次構
造が明らかにされた糖蛋白質であり、トロンビンと結合
してトロンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロ
ンビンによるプロテインＣ活性化を著しく促進させる。
ＴＭ様蛋白質は、効率よく凝固系を抑制することから、
播種性血管内凝固症候群（以下、ＤＩＣと略す）や各種
血栓症等の予防や治療に有用であることが示唆されてい
る。このようにＴＭは広く凝固線溶系に作用する分子で
あると考えられているが、他方、細胞機能に及ぼす影響
についてはほとんど知られていない。

【０００６】数少ない報告例をあげると、今田らは、マ
ウステトラカルシノーマＦ９細胞をレチノイン酸あるい
はサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）で内胚葉系細胞に分
化させると、マウスＴＭと同じ機能を有し、また、遺伝
子クローニングの結果マウスＴＭとまったく同一である
ことが明らかとなったフェトモジュリンが内胚葉系細胞
に発現されることを報告した［デベロップメンタル バ
イオロジー（Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．）１４０、１１３−１
２２、１９９０］。また、最近、石井らは、ＴＭ様蛋白
質がマウス由来の線維芽細胞に対して増殖促進作用を有
することを報告した（特開平７−３１６０６６号公
報）。以上のような報告がみられるが、ＴＭ様蛋白質
が、神経系で最も重要な役割を担っている神経細胞に対
して直接作用すること、特に生存維持や神経突起伸展等
の神経栄養効果があるということを記載した報告は全く
知られていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】中枢および末梢の神経
変性疾患に対して用いられている薬物は、対症療法が中
心であり、臨床効果も不十分である。この様な現況か
ら、中枢および末梢の神経変性疾患において、副作用が
少なく安全で、かつ本質的治療薬となりうる新しいＮＴ
Ｆを有効成分として含有する神経変性疾患治療剤を提供
するのが、本発明の課題である。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者は、神経細胞に
対するＮＴＦに関する探索研究を行っている途上、ＴＭ
様蛋白質がＮＧＦでは作用が見られない大脳神経細胞に
直接作用し、その生存維持や神経突起伸展等の神経栄養
効果を示すという今まで全く知られていなかった事実を
発見し、さらに鋭意研究を重ねて本発明を完成した。

【０００９】以下に本発明を詳細に説明する。本発明の
第一の態様は、ＴＭ様蛋白質を有効成分として含有する
ことを特徴とする神経変性疾患治療剤である。

【００１０】本発明の第二の態様は、ＴＭ様蛋白質を有
効成分として含有することを特徴とする中枢の神経変性
疾患治療剤であり、特に、アルツハイマー型痴呆症、パ
ーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脳外傷あるいは脳
損傷による神経障害などの治療剤である。

【００１１】本発明の第三の態様は、ＴＭ様蛋白質を有
効成分として含有することを特徴とする末梢の神経変性
疾患治療剤であり、特に、筋萎縮性側索硬化症、糖尿病
性神経障害、制癌剤による神経障害、アルコール性神経
障害などの治療剤である。また、本発明の第四の態様
は、ＴＭ様蛋白質および任意のＮＴＦを有効成分として
含有することを特徴とする神経変性疾患治療剤である。
さらに、本発明の第五の態様は、ＴＭ様蛋白質を有効成
分として含有することを特徴とする神経組織あるいは神
経細胞の移植時の処理剤あるいは保存剤である。

【００１２】本明細書において、「神経変性疾患」の語
は、虚血、外傷、老化、或いは原因不明の病因による神
経細胞の機能低下、変性、壊死などによりひきおこされ
る疾患をすべて含む。すなわち、アルツハイマー型痴呆
症、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、脳外傷ある
いは脳損傷による神経障害など、中枢の神経障害が含ま
れる。また、筋萎縮性側索硬化症、糖尿病性神経障害、
制癌剤による神経障害、アルコール性神経障害などの末
梢の神経障害も含まれる。

【００１３】また、「ＴＭ様蛋白質」の語は、ＴＭおよ
びＴＭの生物学的もしくは免疫学的活性に必要な一部分
のアミノ酸配列を有するペプチドまたはそれらの類似物
を意味する。すなわち、本発明に用いるＴＭ様蛋白質
は、トロンビンと結合してトロンビンの凝固促進作用を
抑制するとともにトロンビンによるプロテインＣ活性化
を著しく促進させる蛋白性物質をすべて含む。従って、
天然型あるいは遺伝子工学的に産生されたいずれでも良
く、遺伝子工学手法により得られる改変型あるいはキメ
ラ型であってもよい。医薬品とする場合、好ましくはヒ
ト由来のＴＭ様蛋白質が望まれる。また、ヒト由来のＴ
Ｍは膜結合性であり、完全長のアミノ酸配列を持つもの
は水に対する溶解性が低い。このため、本発明において
は完全長のアミノ酸配列を持たず、溶解性の高いＴＭ様
蛋白質（以下、可溶性ＴＭ様蛋白質と略す）、例えば天
然型のヒト尿由来の可溶性ＴＭ様蛋白質もしくは遺伝子
組換えヒト可溶性ＴＭ様蛋白質がさらに好ましい。な
お、遺伝子組換え技術等を利用して産生された、ＴＭの
アミノ酸配列の部分構造を有する様々なＴＭ様蛋白質
も、神経変性疾患治療剤として本発明の効果を有するも
のは、本発明に含まれる。

【００１４】このようなＴＭ様蛋白質は、天然型につい
ては、例えば、特開昭６０−１９９８１９号公報に開示
されているヒト胎盤由来のＴＭ、ヒト尿由来の可溶性Ｔ
Ｍ様蛋白質として、特開平３−８６９００号公報に開示
されている非還元状態での分子量が５５，０００〜５
８，０００および６０，０００〜６５，０００の可溶性
ＴＭ様蛋白質、特開平３−２１８３９９号公報に開示さ
れている非還元状態での分子量が７２，０００±３，０
００および７９，０００±３，０００の可溶性ＴＭ様蛋
白質、ジャーナル オブ バイオケミストリー（Ｊ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．）１１３，４３３−４４０、１９９３に
記載されている非還元状態での分子量が５５，０００お
よび６０，０００の可溶性ＴＭ様蛋白質およびヨーロピ
アン ジャーナル オブ バイオケミストリー（Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）２２１、１０７９−１０８
７、１９９４に記載されている非還元状態での分子量が
５７，０００および６３，０００の可溶性ＴＭ様蛋白質
があげられる。

【００１５】遺伝子組換え型については、例えば、遺伝
子組換えヒト可溶性ＴＭ様蛋白質として、特開平１−６
２１９号公報に開示されている少なくともアミノ末端か
ら３４５−４６２番目のアミノ酸配列を含む可溶性ＴＭ
様蛋白質およびＷＯ９２／００３２５号公報に開示され
ている少なくともアミノ末端から４−４４６番目のアミ
ノ酸配列を含む可溶性ＴＭ様蛋白質があげられる。ま
た、特開平２−２５５６９９号公報、特開平３−２５９
０８４号公報あるいは特開平５−２１３９９８号公報に
開示されているＴＭの構成アミノ酸が一部欠如している
ＴＭ様蛋白質、特表平５−５０８１５０号公報、ＷＯ９
３／１５７５５号公報、ＷＯ９３／２５６７５号公報あ
るいは特開平５−３１０７８７号公報に開示されている
一部が他のアミノ酸に置換されたＴＭ様蛋白質が挙げら
れる。例えば、メチオニンを他のアミノ酸に置換するこ
とによって酸化を防止したもの［特表平５−５０８１５
０号公報］、あるいはアミノ酸配列を修飾することによ
って蛋白分解酵素による分解を防止したもの［ＷＯ９３
／１５７５５号公報］等が挙げられる。

【００１６】また、ＷＯ９１／０４２７６号公報、ＷＯ
９１／０５８０３号公報、あるいは特開平３−１３３３
８０号公報に開示されているコンドロイチン及び／又は
コンドロイチン硫酸を含む糖鎖を有するＴＭ様蛋白質、
特開平６−２７９４９７号公報に開示されているウシト
ロンボモジュリン由来の酸性アミノ酸配列を含むｏ−グ
リコシド糖鎖結合部位を付加し、コンドロイチン硫酸糖
鎖を結合させたＴＭ様蛋白質、あるいは、ＷＯ９２／０
３１４９号公報に開示されているｏ−グリコシル化部位
領域の糖鎖を修飾あるいはｏ−グリコシル化部位領域を
欠失させたＴＭ様蛋白質、特開平４−２１０７００号公
報に開示されているコンドロイチン及び／又はコンドロ
イチン硫酸を含まないＴＭ様蛋白質などが挙げられる。
さらに、特表平４−５０５５５４号公報に開示されてい
るヒト組織プラスミノーゲンアクチベーター等のアミノ
酸配列の一部を含んでいてもよいＴＭ様蛋白質があげら
れる。

【００１７】ＴＭ様蛋白質は現在臨床開発中のＤＩＣ治
療薬であり、ヘパリンによる治療に付随するような出血
傾向などの副作用も少なく、医薬品としての安全性が高
いことが期待されている（保坂義隆ら、第５６回日本血
液学会抄録集、７９１題、１９９４）。また、ＴＭ様蛋
白質は生体内半減期が長く、医薬品として好ましい体内
動態を示すことが確認されている。

【００１８】本発明の製剤は、神経細胞に直接作用し、
その生存維持や神経突起伸展促進等の神経栄養効果を発
揮するＴＭ様蛋白質を含有するので、今まで用いられて
きた脳代謝賦活薬や脳循環改善薬等の対症療法剤と異な
り、種々の神経変性疾患の根本的な病因である虚血、外
傷、老化、或いは原因不明の病因による全般的な、或い
は特定の領域の神経細胞の機能低下、変性、壊死に対
し、直接的にそれを予防したり、再生を促進させること
により疾患の治療に用いることが出来る。神経変性疾患
としては、例えば、中枢の神経変性疾患として、アルツ
ハイマー型痴呆症、パーキンソン病、ハンチントン舞踏
病、脳外傷あるいは脳損傷による神経障害などがあげら
れる。また、末梢の神経変性疾患として、筋萎縮性側索
硬化症、糖尿病性神経障害、制癌剤による神経障害、ア
ルコール性神経障害などがあげられる。以上の疾患があ
げられるが、この限りでない。また、本発明の治療剤を
他のＮＴＦと適宜組み合わせて併用することもできる。
さらに、神経組織や神経細胞等の移植の際に生着率の改
善や移植後の機能維持等を目的として本発明の治療剤を
生体へ投与したり、あるいは、移植する前の神経組織や
神経細胞等を本発明の治療剤で処理することもできる。

【００１９】本発明の有効成分であるＴＭ様蛋白質はｉ
ｎ ｖｉｔｒｏにおいて大脳神経細胞の生存を維持する
という、ＮＧＦにはない作用を有していることから、よ
り効果的に神経変性疾患の治療剤として用いる事が出来
る。本発明の製剤が生体においても効果を示すことは、
中枢の神経変性疾患モデルとして、例えばクロマー（Ｋ
ｒｏｍｅｒ）らにより示されている脳損傷病態モデル
（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２３５，２１４−２１
６、１９８７）等で証明することが出来る。また、末梢
の神経変性疾患モデルとしては、例えば、オッペンハイ
ム（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ）らにより示されている運動神
経傷害モデル（ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３７３，３
４４−３４６、１９９５）等で証明することが出来る。

【００２０】本発明のＴＭ様蛋白質および任意のＮＴＦ
を有効成分として含有する神経変性疾患治療剤におい
て、ＴＭ様蛋白質と組み合わせるＮＴＦの具体例として
は、ＮＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＤＮＦ、ＣＮＴＦ、ニューロ
トロフィン−３、ニューロトロフィン−４、ニューロト
ロフィン−５、インターロイキン２、インターロイキン
３、インターロイキン６、ＩＧＦ−１およびＨＧＦ等を
挙げることができる。このうち、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ニ
ューロトロフィン−３あるいはＩＧＦ−１等が好まし
く、ＢＤＮＦがさらに好ましい。本発明のＴＭ様蛋白質
を有効成分として含有する神経組織あるいは神経細胞の
移植時の処理剤あるいは保存剤としては、前述のＴＭ様
蛋白質を含有する製剤のいずれの形態であってもよい。
移植時に、直接薬物を移植部位に投与する、あるいは、
移植前の神経組織や神経細胞を栄養液等で保存する際に
本発明の製剤を添加することにより、生着率の向上や生
着後の機能活性の維持がはかられる。

【００２１】本発明の製剤は有効成分としてＴＭ様蛋白
質を含有していれば良く、公知のいかなる製剤学的製造
法によっても製造することが出来る。当該ＴＭ様蛋白質
は、薬剤として一般的に用いられる適当な担体または、
媒体、例えば滅菌水や生理食塩水、植物油（例、ゴマ
油、オリーブ油）、鉱油、高級アルコール、高級脂肪
酸、無害性有機溶媒（例、エタノール）等、さらには必
要に応じて賦形剤（例、マンニトール）、着色剤、乳化
剤（例、コレステロール）、懸濁剤（例、アラビアゴ
ム）、界面活性剤（例、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ
油系界面活性剤、ポリエチレングリコール系界面活性
剤）、溶解補助剤（例、リン酸ナトリウム）、安定化剤
（例、糖、糖アルコール、アルブミン）または保存剤
（例、パラベン）、吸着防止剤、保湿剤、酸化防止剤、
緩衝剤、等張化剤、無痛化剤等と適宜組み合わせて、生
体に効果的に投与するのに適した注射剤、経鼻吸収剤、
経皮吸収剤、経口剤等の医薬用製剤、好ましくは注射剤
に調製することが出来、これら具体例のいくつかについ
ては公知である。例えば、注射剤の製剤としては、凍結
乾燥品や、注射用水剤や、浸透圧ポンプに封入した形等
で提供できる。

【００２２】本発明の製剤は、例えば、動脈内注射、静
脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、脳室内投与、髄腔内
投与、経口投与等の方法によって、例えば、ＴＭ様蛋白
質量として一日、約０．０１〜１０，０００μｇ／ｋ
ｇ、さらに好ましくは、０．１〜１，０００μｇ／ｋｇ
となる量を投与したり、浸透圧ポンプ等に封入し生体に
留置することにより連続的に投与することができる。さ
らに本発明の有効成分であるＴＭ様蛋白質をリポソーム
形成物質（特開昭６０−２４３０２２号公報あるいは特
開昭６４−８５９２０号公報）に封入した後、リポソー
ムとして投与することもできる。また、脳室内や髄腔内
にカテーテルを埋め込み、これから直接薬物を投与する
こともできる。さらに、神経組織または神経細胞移植時
の保存液中に、例えば、ヒトＴＭ様蛋白質濃度を約
０．００１〜１，０００μｇ／ｍｌ、さらに好ましく
は、０．０１〜１００μｇ／ｍｌの濃度で添加すること
もできる。

【００２３】また、頸動脈よりマンニトールや尿素等の
高張液を注入すると一過性に脳血液関門の透過性が上昇
すること（プロシーディングス オブ ザ ナショナル
アカデミー オブ サイエンシーズ オブ ザ ユナ
イテッド ステイツ オブアメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）７６、４８１−４８
５、１９７９）、また、アルキルグリセロール等の物質
に、他の薬物の脳移行性を促進する作用があることが報
告されており（アンジュワンデ ケミ（Ａｎｇｅｗ．Ｃ
ｈｅｍ．）２３、２５７−３２８、１９８４）、このよ
うな手法を用いて投与することもできる。また、アルブ
ミンに化学修飾を施し、カチオン化したカチオン化アル
ブミンは何等かの機構で脳内に取り込まれる可能性が示
唆されており（ジャーナル オブ クリニカル インベ
スチゲーション（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ）７０，
２８９−２９５）、このような手法を用いてＴＭ様蛋白
質を化学修飾した後、投与することもできる。

【００２４】（取得例）以下にＴＭ様蛋白質の取得例を
挙げて、本発明をより具体的に説明するが、本発明に用
いるＴＭ様蛋白質はこれらに限定されるものではない。 取得例１（可溶性ＴＭ様蛋白質の取得例：ＵＴＭ０） ヒト尿中可溶性ＴＭ様蛋白質の製造 特開平３−２１８３９９号公報に記載された方法に準じ
て調製した。すなわち、原尿１００ＬをＮａＯＨでｐＨ
８．５に調整し、析出した沈殿物を除去した。ＨＣｌで
ｐＨ５．５に調整した後、アクリルニトリル繊維で濾過
して尿中のウロキナーゼを吸着除去し、通過尿を限外濾
過膜を使用して脱塩濃縮した。ｐＨを７．３に調整した
後、６０℃で１５分間処理した。次いで、ＤＥＡＥセル
ロース（ワットマン社製）カラム、ＤＩＰ−トロンビン
−アガロースクロマトグラフィーでおよびセファクリル
Ｓ−３００（ファルマシアファインケミカル社製）カラ
ムで順次精製し、活性画分を採取した（以下、ＵＴＭ０
と略す）。この画分は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（分子量測定
キット（生化学工業社製、ゲル濾過用）およびフォスフ
ォリラーゼＢ（ベーリンガーマンハイム社製））で分子
量７２，０００±３，０００および７９，０００±３，
０００に相当する。この画分は一晩蒸留水に対して透析
した後凍結乾燥した。

【００２５】取得例２（可溶性ＴＭ様蛋白質の取得例：
ｒＵＴＭ） 遺伝子組換え型ヒト可溶性ＴＭ様蛋白質の製造 ＷＯ９２／００３２５号公報の方法に準じて製造した。
すなわち、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーより釣り上げ
たＤＮＡを利用してアミノ末端のアミノ酸配列がＡｌａ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−であるアミノ酸４５６残基よりなる
可溶性ＴＭを発現するベクターを調製し、これをＣＨＯ
細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行って高発現株を得
た。この高発現株の培養液をＤＩＰ−トロンビン−アガ
ロースカラムとゲル濾過により精製し目的物を得た（ｒ
ＵＴＭ）。

【００２６】取得例３（可溶性ＴＭ様蛋白質の取得例：
ＲＴＭ） 遺伝子組換え型ヒト可溶性ＴＭ様蛋白質の製造 ＷＯ９２／００３２５号公報の方法に準じて製造した。
すなわち、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーより釣り上げ
たＤＮＡを利用してアミノ末端のアミノ酸配列がＡｌａ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−であるアミノ酸４９８残基よりなる
可溶性ＴＭを発現するベクターを調製し、これをＣＨＯ
細胞に組み込んだ後、遺伝子増幅を行って高発現株を得
た。この高発現株の培養液をＤＩＰ−トロンビン−アガ
ロースカラムとゲル濾過により精製し目的物を得た（Ｒ
ＴＭ１、ＲＴＭ２）。

【００２７】（実験例）以下に本発明を詳細に説明する
ために実験例により効果を具体的に説明するが、本発明
はこれらによって、なんら限定されるものではない。 （実験例１：ＴＭ様蛋白質による大脳皮質神経細胞に対
する生存維持効果）吉田らの方法（ニューロサイエンス
レターズ（Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．）６６、１
８１−１８６、１９８６）に従い、胎生１５日齢のマウ
ス（静岡実験動物農業協同組合より入手）脳の大脳皮質
より神経細胞を単離して１％牛胎児血清（日本生物材料
センター）を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（ギブコ社）に
懸濁し、予めポリリジン（シグマ社）をコーティングし
た培養プレートに１平方センチメートルあたり５×１０
⁴ 個の密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ₂ の条件で培養
した。２４時間後に表１のＴＭ様蛋白質を神経細胞の培
養液中に添加した。４８時間後に細胞を１％グルタルア
ルデヒド溶液で固定し、細胞数をクリスタルバイオレッ
トを用いた比色定量法（アナリティカル バイオケミス
トリー（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）１８２、１６−
１９、１９８９）にて測定した。結果を表１に示す。数
値は播種した細胞数に対する生き残った細胞数の百分率
（％）の平均値で示した。

【００２８】表 １ ────────────────────── 添加サンプル（用量） 神経細胞生存率（％） ────────────────────── 無添加（対照） ２２ ＵＴＭ０（200U/mL ） ７５ ──────────────────────

【００２９】表１から明らかなように、ＵＴＭ０は明ら
かに神経細胞の生存を維持し、神経栄養効果を示した。
また、ｒＵＴＭ、ＲＴＭ１およびＲＴＭ２も同様の作用
を示す。一方、ウシ血清アルブミンは１００μｇ／ｍＬ
あるいは１０００μｇ／ｍＬの添加によっても全く効果
を示さなかった。なお、ヒト尿由来可溶性ＴＭ様蛋白質
のマウスにおける急性毒性試験結果は、特開平３−２１
８３９９号公報に開示されており、ＴＭ様蛋白質は安全
であることが確認されている。

【００３０】

【実施例】以下に本発明の製剤の実施例を示すが、本発
明はこれらに限定されるものではない。 （実施例１） ＵＴＭ０ ５ ｍｇ 精製ゼラチン ５０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３１】（実施例２） ＵＴＭ０ ５ ｍｇ アルブミン ２０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３２】（実施例３） ｒＵＴＭ １０ ｍｇ 精製ゼラチン ２０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニト−ル ２５ ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調整した。

【００３３】（実施例４） ＲＴＭ１ １０ ｍｇ 精製ゼラチン ５０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３４】（実施例５） ＲＴＭ２ １０ ｍｇ アルブミン ２０ ｍｇ リン酸ナトリウム ３４．８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ｍｇ マンニトール ２５ ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３５】（実施例６） ＵＴＭ０ １０ ｍｇ Ｌ−アルギニン塩酸塩 ２００ ｍｇ プルロニックＦ６８ １０ ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３６】（実施例７） ＲＴＭ１ １０ ｍｇ マルトース １００ ｍｇ 精製ゼラチン １００ ｍｇ プルロニックＦ６８ １０ ｍｇ リン酸水素二ナトリウム・１２水和物 ０．７７ｍｇ リン酸二水素ナトリウム・２水和物 ０．１８ｍｇ 塩化ナトリウム ８１．８ ｍｇ 上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３７】

【発明の効果】本発明の治療剤は神経細胞に対して直接
作用し、その生存促進や神経突起伸展促進等の神経栄養
効果を示すので、種々の神経変性疾患、例えば中枢の神
経変性疾患としてアルツハイマー型痴呆症、パーキンソ
ン病、ハンチントン舞踏病、脳外傷あるいは脳損傷によ
る神経障害などの本質的な治療剤として用いることがで
きる。また、末梢の神経変性疾患として、筋萎縮性側索
硬化症、糖尿病性神経障害、制癌剤による神経障害、ア
ルコール性神経障害などの本質的な治療剤として用いる
こともできる。また、神経組織や神経細胞等の移植の際
に生着率の改善や移植後の機能維持等を目的として本発
明の治療剤を生体へ投与したり、あるいは、移植する前
の神経組織や神経細胞等を本発明の治療剤で処理するこ
ともできる。

【００３８】本発明の神経変性疾患治療剤の有効成分で
あるＴＭ様蛋白質は、上記神経変性疾患の根本的な病因
である虚血、外傷、老化、或いは原因不明の病因による
神経細胞の機能低下、変性、壊死に対し、直接的にそれ
を予防したり、再生を促進させることが出来るので、今
まで用いられてきた脳代謝賦活薬や脳循環改善薬等の対
症療法剤に比べて優れており、かつ、ＮＧＦ等の既存の
神経栄養因子にはない作用を有しているため本質的な神
経変性疾患治療剤として医療に貢献できる。また、本発
明のＴＭ様蛋白質は既存薬に比べて副作用が少ないこと
が期待され、安全な神経変性疾患の治療剤になりうる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
   して含有することを特徴とする神経変性疾患治療剤。
2. 【請求項２】前記神経変性疾患が、中枢の神経変性疾患
   である請求項１に記載の神経変性疾患治療剤。
3. 【請求項３】前記神経変性疾患が、末梢の神経変性疾患
   である請求項１に記載の神経変性疾患治療剤。