MEDICIÓN NO INVASIVA DE LA GLUCOSA Campo de la invención Los dispositivos, métodos, y kits descritos aquí están en el campo de la medición no invasiva de la glucosa, y más específicamente, la medición no invasiva de cantidades de nanogramos de la glucosa, que llegan hasta la superficie de la piel por medio del sudor. Antecedentes de la invención La American Diabetes Association reporta que aproximadamente 6 % de la población en los Estados Unidos de América, un grupo de 16 millones de personas, tiene diabetes, y que este número está creciendo a una tasa de 12-15 % por año. La asociación reporta además que la diabetes es la séptima causa de muerte en los Estados Unidos de América, contribuyendo hasta casi 200,000 muertes por año. La diabetes es una enfermedad amenazante de la vida con amplias complicaciones, que incluyen ceguera, enfermedad del riñon, enfermedad de los nervios, enfermedad del corazón, amputación y ataques. La diabetes se cree que va a ser la principal causa de nuevos casos de ceguera en individuos con edades entre 20 y 74 años; aproximadamente 12,000-24,000 personas por año pierden su vista a causa de la diabetes. La diabetes también es la principal causa de la enfermedad renal en la etapa final, tomando en cuenta casi 40 % de nuevos casos. Casi 60-70 % de personas con diabetes tienen formas suaves a Ref .178362
severas de daño de los nervios que tienen la enfermedad de la diabetes lo cual, en formas severas, puede conducir a amputaciones de las extremidades inferiores . La gente con diabetes son propensas 2-4 veces más probablemente a tener una enfermedad del corazón y a padecer ataques . La diabetes resulta de la incapacidad del cuerpo para producir o utilizar apropiadamente la insulina, una hormona necesaria para convertir el azúcar, los almidones, y semejantes en energía. Aunque la causa de la diabetes no es entendida completamente, se han identificado parcialmente factores genéticos, factores ambientales, y causas virales. Existen dos tipos principales de diabetes: el tipo 1 y el tipo 2. La diabetes del tipo 1 (también conocida como diabetes juvenil) es provocada por un proceso autoinmune que destruye las células beta que secretan insulina en el páncreas . La diabetes del tipo 1 ocurre más frecuentemente en adultos jóvenes y niños. Las personas con diabetes del tipo 1 deben tomar diariamente inyecciones de insulina para permanecer vivas . La diabetes del tipo 2 es un trastorno metabólico que resulta de la incapacidad del cuerpo para hacer una cantidad suficiente, o para usar apropiadamente, la insulina. La diabetes del tipo 2 es más común, cuantificándose en 90-95 % de la diabetes. En los Estados Unidos de América, la
diabetes del tipo 2 está cerca de proporciones epidémicas, principalmente debido a un número incrementado de ciudadanos americanos ancianos y a una frecuencia más grande de obesidad y estilos de vida sedentarios. La insulina, en términos simples, es la hormona que permite que la glucosa se introduzca a las células y las alimente. En los diabéticos, la glucosa no puede introducirse en las células, de modo que la glucosa se acumula en la sangre hasta niveles tóxicos. Los diabéticos que tienen diabetes del tipo 1 se requiere típicamente que se auto-administren insulina utilizando, por ejemplo, una jeringa o una pluma con aguja y un cartucho. La infusión de insulina subcutánea continua por medio de bombas externas o implantadas también está disponible. Los diabéticos que tienen diabetes del tipo 2 son tratados típicamente con cambios en la dieta y ejercicio, así como con medicamentos orales. Muchos diabéticos del tipo 2 llegan a ser dependientes de la insulina en las etapas finales de la enfermedad. Los diabéticos que utilizan insulina para ayudar a regular sus niveles de azúcar en la sangre están en riesgo aumentado de episodios médicamente peligrosos de un nivel bajo de azúcar en la sangre debido a errores en la administración de la insulina, o a cambios no anticipados en la absorción de insulina. Se recomienda ampliamente por el profesionista
médico que los pacientes que usan insulina se practiquen la auto-verificación de la glucosa en la sangre ("SMBG" (por sus siglas en inglés) ) . Basado en el nivel de glucosa en la sangre, los individuos pueden hacer ajustes de dosificación de la insulina antes de la inyección. Los ajustes son necesarios puesto que los niveles de glucosa en la sangre pueden variar día a día por una variedad de razones, por ejemplo, el ejercicio, la tensión, las velocidades de absorción de los alimentos, los tipos de alimentos, los cambios hormonales (embarazo, pubertad, etc.) y semejantes. A pesar de la importancia de SMBG, varios estudios han encontrado que la proporción de los individuos que se auto-verifican al menos una vez al día declina significativamente con la edad. Esta reducción es probable que sea simplemente debido al hecho de que el método típico, utilizado más ampliamente, de SMBG involucra la obtención de sangre de una picadura del dedo capilar. Muchos pacientes consideran que la obtención de la sangre va a ser significativamente más dolorosa que la auto-administración de insulina. Se están investigando técnicas no invasivas o mínimamente invasivas, algunas de las cuales están empezando a estar en el foco de la medición de la glucosa sobre la superficie de la piel o en un fluido intersticial. Por ejemplo, la patente U.S. No. 4,821,733 de Peck describe un proceso para detectar un analito que ha llegado a estar en la
superficie de la piel por medio de difusión. Específicamente, Peck enseña un sistema de detección transdérmico para la detección de un analito que migra a la superficie de la piel de un sujeto por difusión en la ausencia de un medio de transporte líquido, tal como el sudor. Como será descrito con mayor detalle posteriormente, a causa de que el proceso de difusión pasiva de un analito a la superficie de la piel toma un período de tiempo irrazonablemente prolongado (por ejemplo, desde algunas horas hasta varios días) , Peck no proporciona una solución de verificación no invasiva de la glucosa, práctica. De manera semejante, la patente U.S. No. 6,503,198 de Aronowitz et al. ("Aronowitz") describe un sistema transdérmico para la extracción del analito desde el fluido intersticial. Específicamente, Aronowitz enseña parches que contienen componentes químicos secos y húmedos. El componente húmedo es utilizado para formar una capa del gel para la extracción y la transferencia por medio de un puente líquido del analito desde el fluido biológico hasta el componente químico seco. El componente químico seco es utilizado para medir cuantitativa o cualitativamente el analito. Una desventaja del sistema descrito en Aronowitz es el efecto de una interfaz química húmeda en la provisión de un medio ambiente en fase líquida sobre la piel en la cual diferentes fuentes de glucosa podrían estar mezcladas irreversiblemente
entre sí. Un contacto de fase líquida con la superficie de la piel podría hacer imposible distinguir entre la glucosa sobre la superficie de la piel que se origina de los desechos epidérmicos de muchos días de edad, de la glucosa sobre la superficie de la piel que se origina de una difusión transdérmica de muchas horas de edad, y finalmente, de la glucosa sobre la piel de la salida más sincronizada de la glándula sudorípara ecrina . Otros investigadores han investigado la medición de glucosa en el sudor; sin embargo, no han podido demostrar una correlación entre los niveles de glucosa en la sangre y los niveles de glucosa en el sudor, y han fallado de manera semejante en establecer o demostrar que solamente la glucosa que viene del sudor está siendo medida. Por ejemplo, la patente U.S. No. 5,140,985 de Schroeder et al. ( "Schroeder" ) describe una unidad de verificación no invasiva de la glucosa, que utiliza una mecha para absorber el sudor y la electroquímica para realizar mediciones de la glucosa. Schroeder está basado en un artículo de T. C. Boysen, Shigeree Yanagaun, Fusaho Sato y Uingo Sato publicado en 1984 en el Journal of Applied Psychology para establecer la correlación entre los niveles de glucosa en la sangre y los niveles de glucosa en el sudor, pero el análisis cuantitativo de los datos provistos aquí demuestra que los niveles de glucosa en la sangre y los niveles de glucosa en el sudor de
los dos sujetos descritos allí no pueden ser correlacionados (dando coeficientes de correlación de aproximadamente 0.666 y 0.217 respectivamente). Se deben utilizar métodos adicionales, más allá de aquellos citados en el artículo de Boysen et al., para aislar la glucosa en el sudor de otras fuentes de glucosa sobre la piel. De manera semejante, la patente U.S. No. 5,036,861 de Sembrowich et al. ( "Sembrowich" ) describe una tecnología de verificación de la glucosa basada en el análisis de la glucosa en la superficie de la piel desde una respuesta del sudor modificada, localizada. De una manera semejante, la patente U.S. No. 5,638,815 de Schoendorfer ( "Schoendorfer" ) describe un parche dérmico que va a ser utilizado sobre la piel para incrementar la concentración de un analito expresado por medio de la piel en la transpiración, a un nivel que se puede medir convenientemente. Sin embargo, de manera semejante a Schroeder, Sembrowich y Schoendorfer fallan cada uno en enseñar o describir métodos o etapas para aislar o distinguir la glucosa en el sudor de otras fuentes de confusión de la glucosa encontrada en la superficie de la piel . Breve descripción de la invención Se describen aquí dispositivos, métodos, y kits para la medición no invasiva de la glucosa. En general, los dispositivos comprenden parches para la piel configurados
para colectar el sudor y que permiten la medición de lá glucosa, y un dispositivo de medición correspondiente. En una variación, el parche para la piel comprende un material adhesivo, una membrana permeable al sudor, una capa de colección, un detector configurado para detectar la glucosa, y una capa de interfaz. En otra variación, el parche para la piel comprende un depósito de colección del sudor configurado para colectar la glucosa que ha llegado hasta la superficie de la piel por medio del sudor, y un detector de la glucosa capaz de detectar cantidades de nanogramos de la glucosa, en donde el parche está configurado para operar con un dispositivo de medición para medir la glucosa. En algunas variaciones, el detector es un detector de base electroquímica, en otras variaciones el detector es un detector de base fluorescente. La membrana permeable al sudor está configurada para actuar como una barrera para los contaminantes epidérmicos y la glucosa llevada hasta la superficie de la piel por medio de difusión. En algunas variaciones, la membrana permeable al sudor comprende un material que generalmente es oclusivo, pero que permite que el sudor pase a través del mismo. En otras variaciones, la membrana permeable al sudor comprende un polímero líquido que se endurece cuando se expone al oxígeno, dejando aberturas sobre los poros de la glándula sudorípara solamente. La membrana permeable al sudor también puede comprender un
polímero sólido, o un material inorgánico con microporos. La membrana permeable al sudor y el material adhesivo pueden estar en una sola capa, o pueden estar en capas distintas separadas . El parche puede comprender además una capa de respaldo, o un revestimiento de liberación. En algunas variaciones, la capa de respaldo comprende un material oclusivo, impermeable al vapor del agua. La capa de colección puede comprender un depósito de volumen fijado para ayudar a minimizar el efecto de confusión de una velocidad de sudor variable. En algunas variaciones, el parche comprende un circuito eléctrico, al menos un conductor, o una ruta de transmisión óptica para determinar que el depósito de volumen fijo sea llenado. Dependiendo de la naturaleza del detector de la glucosa, la capa de interfaz del parche puede comprender materiales requeridos para la operación de un detector electroquímico o puede ser ópticamente transmisora. Por ejemplo, cuando el detector de la glucosa es de base fluorescente, la capa de interfaz típicamente es transparente con respecto a la excitación y la longitud de onda de emisión del detector de base fluorescente. De manera semejante, cuando el detector de la glucosa es de base electroquímica, la capa de interfaz comprende típicamente al menos dos electrodos.
El parche puede comprender además un mecanismo físico, químico, o mecánico de inducción de una respuesta de la sudoración local. Por ejemplo, el parche puede comprender pilocarpina, sola, con un mejorador de la permeación, o configurada para el suministro iontoforético . De manera semejante, el parche puede comprender un químico capaz de inducir un incremento de la temperatura local, por lo cual se inicia una respuesta de la sudoración local . De una manera semejante, el parche también puede comprender un calentador para el calentamiento localizado suficiente de la superficie de la piel para inducir una respuesta mejorada de la sudoración local . Los dispositivos de medición de la glucosa para su uso con un parche para la piel también son descritos. Típicamente, el dispositivo de medición de la glucosa comprende una pantalla, un procesador, un código ejecutable por la computadora para ejecutar un algoritmo de calibración, y un mecanismo de medición ultra-sensible para medir la glucosa colectada en un parche correspondiente. El mecanismo de medición está configurado para medir cantidades de nanogramos de la glucosa. El dispositivo de medición de la glucosa también puede comprender un suministro de energía, una memoria, una conexión para descargar los datos a una computadora, y combinaciones de los mismos. El dispositivo de medición también puede comprender un inductor de la presión
para expresar el fluido del sudor desde el lumen de la glándula sudorípara y para ayudar a proporcionar una cantidad más adecuada del sudor sobre la superficie de la piel . El dispositivo de medición también puede comprender una fuente iontoforética para su uso en la propulsión de la pilocarpina, u otras moléculas adecuadas, hacia la piel conduciendo a una velocidad de sudoración local mejorada farmacológicamente . En las variaciones en donde el detector de la glucosa es de base fluorescente, el mecanismo de medición típicamente comprende una fuente óptica optimizada adecuadamente y un detector. La fuente óptica puede ser una fuente óptica de paso de banda estrecho, sintonizada apropiadamente, tal como un diodo emisor de la luz (LED (por sus siglas en inglés) ) centrado en la longitud de onda de excitación de la molécula fluorescente, o puede ser una fuente óptica más amplia que tiene un filtro de paso de la banda en la longitud de onda de excitación de la molécula fluorescente. El detector óptico típicamente comprende un fotodetector que tiene un filtro de paso de la banda en la longitud de onda de emisión de la molécula fluorescente. En las variaciones en donde el detector de la glucosa es de base electroquímica, el dispositivo de medición típicamente proporciona un mecanismo de contacto para el establecimiento de un contacto eléctrico con el parche.
El dispositivo de medición también puede ser configurado para detectar un marcador dejado sobre la superficie de la piel. Por ejemplo, una fuente óptica y un detector pueden ser incluidos para detectar la presencia de una molécula fluorescente, no interferente, separada, asociada con el uso apropiado de una tela para la limpieza por frotamiento de la piel, que es requerida típicamente para hacer posible la medición. El dispositivo de medición puede determinar por medio de esto que ningún marcador ha sido detectado sobre la superficie de la piel y por lo tanto que cualquier intento para correlacionar la glucosa de la superficie de la piel con la glucosa en la sangre podría ser contaminado por los residuos alimenticios o por otras fuentes que no se pueden correlacionar de la glucosa. El dispositivo de medición también puede ser configurado para proporcionar una indicación de una condición a un usuario. La condición puede ser, por ejemplo, la concentración de glucosa del usuario que es ya sea peligrosamente baja, o peligrosamente elevada. El dispositivo de medición puede proporcionar tal indicación utilizando sonidos, luces, avisos vocales, o combinaciones de los mismos. Los métodos de medición de la glucosa sobre la piel también son descritos aquí. Estos métodos pueden comprender las etapas de limpiar por frotamiento una superficie de la piel con una tela que contiene al menos un solvente para
remover la glucosa, colocar un parche sobre la superficie de la piel, en donde el parche comprende una membrana permeable al sudor configurada para actuar como una barrera para los contaminantes epidérmicos y la glucosa llevada hasta la superficie de la piel por medio de difusión, y medir la glucosa colectada en el parche. El parche puede ser colocado sobre cualquier superficie adecuada de la piel, por ejemplo, un sitio anatómico que es conveniente para el usuario para los propósitos de verificación de la glucosa y que produce una respuesta satisfactoria del sudor con o sin estimulación. En algunas variaciones, el parche es colocado sobre la yema palmar. En algunas variaciones, la etapa de colocación de un parche sobre la superficie de la piel ocurre desde aproximadamente 10 segundos hasta aproximadamente 2 minutos después de la etapa de limpieza por frotamiento de la superficie de la piel. Los kits para la medición de la glucosa también son provistos. En algunas variaciones, los kits comprenden al menos un parche, ya sea solo, o en combinación con instrucciones para el uso del parche. Los kits también pueden comprender un parche y un dispositivo de medición, o combinaciones de diferentes parches. Típicamente, los parches son envueltos o empacados individualmente y son desechables y están configurados para un solo uso.
Breve descripción de las figuras La figura 1 proporciona una vista esquemática de los mecanismos de transporte de la glucosa desde la sangre hasta la piel . La figura 2A proporciona una ilustración de una variación adecuada de cómo se pueden utilizar los dispositivos y métodos descritos aquí para medir la glucosa sobre la piel. La figura 2B proporciona una vista superior ilustrativa de un parche adecuado. La figura 3A, figura 3B, figura 3C y figura 3D muestran varias formas ilustrativas para los parches descritos aquí, y proporcionan ilustraciones de una vista superior de cómo pueden ser utilizados estos parches por un usuario. La figura 4A y la figura 4B proporcionan vistas en sección transversal de los parches ilustrativos descritos aquí . La figura 5A, la figura 5B, la figura 5C, la figura 5D, la figura 5E, la figura 5F, y la figura 5G muestran variaciones ilustrativas de cómo puede ser utilizado un depósito de volumen fijo con los parches descritos aquí. La figura 6 muestra el efecto de la estimulación térmica sobre la respuesta del sudor durante el transcurso del tiempo.
La figura 7 muestra los resultados de las mediciones de la glucosa con y sin el uso de una membrana permeable al sudor . La figura 8 demuestra una correlación normalizada entre la glucosa en la sangre y la glucosa en el sudor cuando una membrana permeable al sudor es utilizada. La figura 9 es una gráfica de la relación del flujo del sudor con respecto al flujo de la glucosa con y sin una membrana permeable al sudor . La figura 10 es una gráfica que demuestra los niveles de glucosa en el sudor y en la sangre en un sujeto que tiene niveles de glucosa reducidos. La figura HA y la figura 11B proporcionan gráficas de regresión para los datos graficados en la figura 10. La figura 12 es una gráfica que demuestra los niveles de glucosa en el sudor y en la sangre en un sujeto que tiene niveles de glucosa elevados. La figura 13A y la figura 13B proporcionan gráficas de regresión para los datos graficados en la figura 12. Descripción detallada de la invención Aquí se describen métodos y dispositivos para la medición no invasiva de la glucosa. En general, los métodos de medición de la glucosa involucran el uso de un parche que es colocado sobre la superficie de la piel y asegurado sobre la misma con un adhesivo. Un dispositivo de medición separado
es colocado adyacente a, o directamente sobre el parche y está configurado para obtener información del parche y medir la glucosa colectada en el mismo. El dispositivo de medición típicamente es un dispositivo manual, pequeño, que está equipado con tecnología correspondiente a aquella necesaria para obtener información del parche. Por ejemplo, el dispositivo de medición puede tomar mediciones ópticas o mediciones eléctricas, dependiendo de cómo está configurado el detector en el parche (por ejemplo, cuando el detector es una molécula fluorescente, el dispositivo de medición estará configurado típicamente para tomar mediciones ópticas, cuando el detector es un sensor electroquímico, el dispositivo de medición está configurado típicamente para realizar mediciones electroquímicas, y semejantes) . El parche está configurado de modo que solamente la glucosa que se puede correlacionar con la glucosa en la sangre (por ejemplo, aquella glucosa que ha llegado recientemente a la superficie de la piel por medio del sudor) será detectada, mientras que las fuentes restantes de glucosa sobre la piel no serán detectadas. Por ejemplo, como se muestra en la figura 1, existen diferentes rutas por las cuales migra la glucosa en la sangre hacia la piel durante el transcurso del tiempo. Como se muestra allí, la glucosa en la sangre (102) pasa hasta el fluido intersticial (104), o a las glándulas sudoríparas
(108) . Después de un período de tiempo, los niveles de glucosa en la sangre (102) y los niveles de glucosa en el fluido intersticial (104) alcanzan el equilibrio. En sujetos sanos, este período de tiempo típicamente es del orden de cinco a diez minutos . Este retardo del tiempo relativamente breve para lograr el equilibrio entre los niveles de la glucosa en la sangre y los niveles de la glucosa en el fluido intersticial, ha hecho que el fluido intersticial sea el centro de muchos esfuerzos para desarrollar tecnología de verificación de la glucosa continua. La glucosa derivada del fluido intersticial (104) también es transportada por difusión (106) a través del stratum corneum hasta la superficie de la piel. Sin embargo, la impermeabilidad relativa del stratum corneum, o alternativamente, la alta calidad de la función de la barrera del tejido stratum corneum intacto, conduce a retardos de tiempo significativos para el paso a través del stratum corneum por difusión transdérmica. La glucosa suministrada hasta la superficie de la piel por difusión transdérmica retarda en muchas horas el nivel de glucosa en la sangre detrás de este mecanismo, haciéndolo inadecuado para usos de diagnóstico médico. La glucosa también puede llegar a la superficie de la piel por medio del proceso de descamación del stratum corneum conduciendo a contaminantes epidérmicos (110) , y
semejantes. Por ejemplo, la glucosa epidérmica resulta de la segmentación enzimática específica de ciertos lípidos. Esto produce glucosa libre, una fuente de energía para las capas superiores de la epidermis que de otra manera son perfusionadas escasamente con la sangre. Esta glucosa libre no es representativa de la glucosa en la sangre correspondiente, o de los valores de la glucosa intersticial. Las glándulas sudoríparas (108) pueden ser consideradas un desvío que atraviesa el stratum corneum y permite el transporte de masa rápido del material a través de una barrera de otra manera relativamente impermeable. La glucosa del fluido intersticial es la fuente primaria de energía para la función de trabajo o de bombeo de las glándulas sudoríparas ecrinas (108) . El sudor secretado por las glándulas sudoríparas ecrinas contiene una fracción de glucosa de la sangre (102), que surge desde la piel a través de los poros u orificios muy delgados sobre la superficie de la piel . Se ha descubierto que una fracción del sudor secretado puede ser reabsorbida por el stratum corneum. La cantidad de sudor, y en consecuencia, la cantidad de glucosa, absorbida nuevamente en el stratum corneum, depende del estado de hidratación de la piel y varía en todo el día. Por consiguiente, sin bloquear la transferencia de regreso de la glucosa desde el sudor hacia el stratum corneum, puede ser difícil desarrollar un instrumento que pudiera correlacionar
la glucosa sobre la piel con aquella en la sangre. Cunningham y Young midieron el contenido de la glucosa en el stratum corneum utilizando una variedad de métodos incluyendo la separación con una cinta en serie y la extracción acuosa, y encontraron aproximadamente 10 nanogramos por centímetro cuadrado por micrón de profundidad del stratum corneum. Véase Cunningham, D. D. y Young, D. F., "Measurements of Glucose on the Skin Surface, in Stratum Corneum and in Transcutaneous Extracts: Implications for Physiological Sampling", Clin . Chem . Lab Med, 41, 1224-1228, 2003. En sus experimentos en la colección y agrupación de la glucosa desde la superficie de la piel, Cunningham y Young encontraron que el stratum corneum fue la fuente de contaminantes epidérmicos sobre la superficie de la piel, y que estos contaminantes no fueron correlacionables con la glucosa de la sangre. La glucosa de los contaminantes epidérmicos típicamente refleja la abundancia de la glucosa en el tejido en cualquier parte desde días hasta semanas previo a su aparición durante la descamación (a causa de que el cambio epidérmico ocurre aproximadamente cada 28 días) . Véase, por ejemplo, Rao, G., Guy, R. H., Glikfeld, P., LaCourse, W. R. , Leung, L. Tamada, J., Potts, R. O. Azimi, N. "Reverse iontophoresis : noninvasive glucose monitoring in vivo in humans", Pharm Res, 12, 1869-1873 (1995). De una manera
semejante, es improbable que la glucosa llevada hasta la superficie de la piel por medio de difusión (106) pueda ser correlacionada con la glucosa en la sangre. Además, a causa de que la glucosa tiene que atravesar la ruta sinuosa de las capas de la piel para alcanzar la superficie, la glucosa llevada hasta la superficie de la piel por medio de difusión frecuentemente conduce a un tiempo de retardo (por ejemplo, en el intervalo de unas pocas horas hasta días) , lo cual es indeseable para propósitos de verificación de la glucosa. Los métodos y dispositivos descritos aquí proporcionan una manera de medir solamente aquella glucosa llevada hasta la piel por medio del sudor. Se debe entender que cuando se hace referencia al término "piel" aquí de principio a fin, este término se entiende que incluye, no solamente la superficie más externa de la piel, sino también, el stratum corneum completo. Métodos de uso Como se describió brevemente antes, los métodos provistos aquí involucran el uso de un parche y un dispositivo de medición. Previo a la aplicación del parche, la piel es limpiada por frotamiento para remover cualquier glucosa "antigua" o residual que permanece sobre la piel. La tela para la limpieza está hecha típicamente de un material adecuado para la limpieza por frotamiento de la piel y comprende un solvente para remover la glucosa. Para facilidad
de descripción solamente, el término "tela de limpieza por frotamiento" será utilizado aquí para incluir cualquier tipo de tela, material tejido, material no-tejido, tejido, almohadilla, mezcla polimérica o fibrosa, y materiales semejantes a tales soportes capaces de absorber un solvente o que tengan un solvente impregnado en los mismos. En algunas variaciones, la tela de limpieza contiene un marcador que es depositado sobre la piel. En estas variaciones, el dispositivo de medición verifica la presencia del marcador, y si el marcador es detectado, entonces procede la medición. Si el marcador no es detectado, la medición no procede. En algunas variaciones, como será descrito con mayor detalle posteriormente, el dispositivo de medición proporciona una indicación al usuario de que la piel no ha sido limpiada por frotamiento. De esta manera, la posibilidad de que un usuario obtenga y se apoye en una medición clínicamente peligrosa (por ejemplo, basada en una lectura errónea que resulte de residuos de alimentos u otras fuentes de glucosa sobre la piel que no están correlacionadas con la glucosa en la sangre real del usuario) es minimizada, y se facilitan las mediciones exactas. El marcador puede comprender una substancia química que tiene una vida media breve, de modo que será descompuesto después de un período breve de tiempo. De esta manera, un marcador solamente será válido para una sola tela de limpieza, o para un uso único y
la detección errónea de un marcador sobre la superficie de la piel será minimizada. De una manera semejante, el marcador también puede ser unido a un compuesto volátil, y se hace que se evapore en un período breve de tiempo. Se debe señalar sin embargo, que la tela de limpieza no debe contener solventes, marcadores, u otras substancias químicas que pudieran interferir con la medición de la glucosa. Es decir, un solvente de glucosa adecuado podría tener la capacidad de solubilizar la glucosa sin interferir con la medición ya sea eléctrica u óptica de la glucosa. Los solventes polares, y en particular, una mezcla de agua destilada y alcohol, han provisto muy buenos resultados en la remoción de la glucosa residual de la superficie de la piel. La relación del agua destilada con respecto al alcohol puede ser elegida de tal modo que exista suficiente agua para disolver la glucosa, pero no tanta agua que haga que la remoción de agua en exceso tome un período de tiempo inconvenientemente prolongado con relación a la medición de la glucosa (por ejemplo, más de 25 minutos) . Como se señaló anteriormente, es deseable que la mezcla de alcohol/agua, u otro solvente polar, sea seleccionada de tal modo que la misma remueva la glucosa residual, pero que no interfiera con la medición de la glucosa. Después que la piel ha sido limpiada por frotamiento, una almohadilla es colocada sobre la piel. El
parche puede ser colocado sobre cualquier superficie de la piel adecuada. Por ejemplo, el parche puede ser colocado sobre un dedo, sobre la palma, sobre la cintura, etc. Típicamente, el parche es colocado sobre la punta del dedo, a causa de que las puntas de los dedos tienen la densidad más grande de glándulas sudoríparas. Además, la colocación del parche sobre la punta del dedo proporciona un sitio de prueba conveniente, discreto, y fácilmente accesible. Como se describirá con mayor detalle posteriormente, el parche comprende una capa de colección, un detector, y una capa adhesiva. El detector puede ser, por ejemplo, un sensor electroquímico a base de un polímero, seco, un sensor electroenzimático húmedo en un empaque microfluídico, una molécula o polímero fluorescente, sensible a la glucosa, o semejantes. Un período breve de tiempo después de la aplicación del parche (por ejemplo, desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 25 minutos) , el dispositivo de medición es colocado adyacente a, o directamente sobre el parche. Como se muestra en la figura 2, el parche (200) ha sido colocado sobre la superficie de la punta del dedo (202). El dispositivo de medición (204) está colocado adyacente al parche (200) y obtiene información (206) del parche. Como se señaló brevemente antes, y como será descrito con mayor detalle posteriormente, la configuración del dispositivo de
medición es dependiente de la configuración del parche. Por ejemplo, si el detector del parche es una molécula fluorescente, entonces el dispositivo de medición será configurado con los elementos ópticos correspondientes necesarios para medir la fluorescencia. En algunas variaciones, el dispositivo y el parche son llevados en contacto entre sí. Por ejemplo, como será descrito con mayor detalle posteriormente, algunas veces el contacto físico entre el parche y el dispositivo de medición proporciona energía al dispositivo y/o es utilizado para hacerlo funcionar. Alternativamente, el parche puede comprender una fuente de baterías incluida en el mismo. Después que se ha hecho una medición, el usuario remueve el parche y lo desecha. Cuando es deseable medir una vez más la glucosa, el usuario limpia por frotamiento la piel, obtiene un nuevo parche, coloca el parche sobre una localización adecuada y deseable, y utiliza el dispositivo de medición para obtener información del parche. Alternativamente, el usuario puede obtener información del parche más de una vez, lo cual puede ser útil para mediciones continuas. Por ejemplo, se podría obtener información del parche varias veces dentro de un intervalo de tiempo suficiente para permitir que el parche vuelva a ser llenado con sudor fresco (mientras que el sudor viejo es absorbido en la capa de absorción) . Cuando un detector de base
electroquímica es utilizado, la glucosa puede ser medida como la diferencia entre la primera y segunda cargas eléctricas integradas, por ejemplo. De manera semejante, cuando se utiliza un detector de base fluorescente, la constante del tiempo de equilibrio químico deberá ser suficientemente pequeña de modo que la intensidad fluorescente pueda ser utilizada para medir la glucosa en el sudor. Parches Los parches pueden ser de cualquier configuración adecuada. Por ejemplo, los mismos pueden tener una geometría rectangular, como se muestra en la figura 3A, o los mismos pueden tener una geometría circular, como se muestra en la figura 3B. El parche también puede tener una geometría de forma graciosa, o incluye diseños divertidos sobre el mismo (por ejemplo, caricaturas, formas, dinosaurios, etc.), para el entretenimiento de los niños, como se muestra en las figuras 3C y 3D. El parche mostrado en la figura 3A se enrolla alrededor de la punta del dedo, mientras que los parches mostrados en las figuras 3B, 3C, y 3D no lo hacen, y cualquier variación es adecuada. De manera semejante, el parche puede ser de cualquier tamaño adecuado. Por ejemplo, los parches propuestos para la cintura típicamente serán más grandes que aquellos propuestos para la punta del dedo. Haciendo referencia de nuevo a la figura 2B, un parche (200) es mostrado allí teniendo una geometría circular y un
diámetro de 1 cm. Típicamente, los parches circulares propuestos para su uso sobre la punta del dedo tendrán diámetros en el intervalo de aproximadamente 1.0 cm hasta aproximadamente 2.5 cm, o áreas que varían desde aproximadamente 0.785 cm2 hasta aproximadamente 4.91 cm2. Para la colocación del parche sobre otras superficies de la piel, el parche puede tener áreas que varían desde aproximadamente 2 cm2 hasta aproximadamente 10 cm2. En algunas variaciones, y como se muestra generalmente a través de las figuras 4A y 4B, el parche comprende un material adhesivo, una capa de colección, una capa de interfaz, y un detector. Sin embargo, en algunas variaciones, el parche no comprende un material adhesivo, y en estas variaciones, el parche puede ser adherido, sujetado, o colocado de otra manera adecuadamente sobre la superficie de la piel de un usuario. Por ejemplo, el parche puede ser mantenido sobre la superficie de la piel por el usuario, o puede ser sujetado sobre la piel utilizando un material elástico, una cinta médica, o semejante. De manera semejante, en algunas variaciones, el parche no comprende un capa de interfaz. En estas variaciones, la capa de interfaz puede ser adherida al dispositivo de medición, y el dispositivo de medición/capa de interfaz puede ser colocado sobre el parche para una lectura. Haciendo referencia ahora a la figura 4A, allí se
muestra una vista en sección transversal del parche (400) sobre la piel (402). El parche (400) comprende un material adhesivo en la forma de una capa (404), una capa de colección (405), una capa de detección (406), y una capa de interfaz (408) . El detector no necesita estar separado espacialmente en una capa distinta. Por ejemplo, mostrada en la figura 4B está una vista en sección transversal del parche (410) sobre la superficie de la piel (412). El parche (410) comprende una capa adhesiva (414), una capa de colección (416), y una capa de interfaz (418) . En la variación de la figura 4B, la capa de colección (416) contiene el detector en la misma. Aunque no se muestra en las figuras, el parche también puede incluir al menos un revestimiento de liberación. Por ejemplo, un revestimiento de liberación sobre la superficie adhesiva inferior podría proteger a la capa adhesiva de la pérdida de sus propiedades adhesivas durante el almacenamiento y previo a su uso. De manera semejante, un revestimiento de liberación puede ser colocado sobre la parte superior de la capa de interfaz superior para proteger a los componentes ópticos o eléctricos contenidos allí. En algunas variaciones, ningún revestimiento de liberación es utilizado y la capa de interfaz es colocada en su parte de arriba con una capa de respaldo. En algunas variaciones, la capa de respaldo está hecha de una hoja flexible tejida o no tejida, tales como aquellas conocidas en el arte de los parches
transdérmicos. En otras variaciones, la capa de respaldo está hecha de un plástico o caucho flexible. Típicamente, el parche también comprende una barrera permeable al sudor como se muestra por (403) y (415) en las figuras 4A y 4B respectivamente. La barrera permeable al sudor es permeable al sudor, pero actúa como una barrera para los contaminantes epidérmicos, tales como aquellos contaminantes llevados a la superficie de la piel por medio de la descamación, y con respecto a la glucosa que no se puede correlacionar llevada hasta la superficie de la piel por medio de difusión. De esta manera, la glucosa que no se puede correlacionar, y que interfiere de otra manera, no es pasada a través de la capa de colección para la medición. La barrera permeable al sudor también puede ayudar a la prevención o reducción de la reabsorción de la glucosa que ha sido llevada hasta la superficie de la piel por medio del sudor, en la capa externa del stratum corneum. En general, la membrana permeable al sudor puede comprender cualquier material que permita que el sudor pase a través de la misma, que no sea tóxica, y que prevenga la reabsorción del sudor en la piel. Por ejemplo, la membrana permeable al sudor puede estar hecha de un recubrimiento hidrofóbico o una película hidrofóbica porosa. La película debe ser suficientemente gruesa para recubrir la piel, pero lo suficientemente delgada para permitir que el sudor pase a
través de la misma. Los ejemplos adecuados de los materiales hidrofóbicos incluyen petrolato, parafina, aceites minerales, aceites de silicona, aceites vegetales, ceras, y semejantes. Aunque las membranas permeables al sudor mostradas en las figuras 4A y 4B son mostradas arriba de las capas adhesivas, no necesariamente tienen que estar allí. Por ejemplo, en una variación, la membrana permeable al sudor comprende un recubrimiento de aceite y/o de petrolato aplicado a la superficie de la piel. De esta manera, solamente aquella glucosa que llega hasta la superficie de la piel por medio de la glándula sudorípara ecrina será detectada. De manera semejante, un recubrimiento polimérico líquido, o un vendaje con un líquido puede ser utilizado como una membrana permeable al sudor. Típicamente, estos materiales son membranas líquidas con una tensión superficial baja, que dejan aberturas sobre los poros de las glándulas sudoríparas cuando los mismos se endurecen (por ejemplo, polímeros de silicón tales como SILGARD®) . El recubrimiento polimérico líquido tiene ventajas significativas en que es impermeable al agua en todas partes excepto en los poros de las glándulas sudoríparas, pero una capa de polímero sólido con microporos también puede ser utilizada, por ejemplo los filtros de membrana modulados y grabados con ácido, de policarbonato, de Whatman de NUCLEOPORE®. Otras membranas adecuadas incluyen las membranas inorgánicas ANOPORE® que consisten de una
matriz de alúmina de alta pureza con una estructura de poros con forma de panal de abejas, no deformable, precisa. Se debe entender que aunque las membranas permeables al sudor (403) y (415) son mostradas en las figuras 4A y 4B respectivamente como capas separadas, esto no necesariamente tiene que ser así. Realmente, en algunas circunstancias, puede ser deseable combinar un polímero adhesivo con los polímeros líquidos descritos anteriormente. En esta variación, el polímero líquido podría comenzar a endurecerse (o fijarse como un sólido) cuando se exponga al oxígeno (por ejemplo, cuando el revestimiento de liberación sea removido) . La capa podría cubrir la epidermis, pero dejará orificios solamente sobre los orificios de la glándula sudorípara. De esta manera, solamente la glucosa llevada hasta la superficie de la piel por medio de las glándulas sudoríparas podría pasar hasta la capa de colección. Como se señaló anteriormente, además de permitir que la glucosa en el sudor se transporte hasta la superficie de la piel, la membrana permeable al sudor también puede ser útil para bloquear la difusión y en el bloqueo de la generación de desechos epidérmicos resultantes de la descamación. En consecuencia, solamente la glucosa del sudor, la cual puede ser correlacionada con la glucosa de la sangre, será medida. El material adhesivo puede comprender una capa de superposición anular como es mostrada por (208) en la figura
2B o puede comprender una capa de adhesivo contemporánea o co-extensiva con al menos otra capa del parche. Se puede utilizar cualquier adhesivo adecuado. Por ejemplo, los adhesivos sensibles a la presión comunes conocidos en el arte de los parches transdérmicos, tales como silicona, poliacrilatos, y semejantes, pueden ser utilizados. Se debe señalar aquí que en algunas circunstancias, puede ser deseable proporcionar una capa adhesiva, o una combinación de una capa adhesiva y una capa de barrera permeable al sudor, que sea relativamente seca. Esto es a causa de que se piensa que la humectación excesiva del stratum corneum puede inhibir la función de la glándula sudorípara (véase, por ejemplo, Nadel, E. R. y Stolwijk, J. A. J., "Effect of skin wettedness on sweat gland response", J. Appl. Physiol., 35, 689-694, 1973). Además, la humectación excesiva de la piel puede ayudar a la liberación de la glucosa sobre la piel, que es resultado de la descamación. En consecuencia, puede ser deseable limitar la naturaleza acuosa o de otra manera húmeda de la interfaz entre la piel y el parche. El parche también puede comprender un componente para inducir el sudor por métodos físicos, químicos o mecánicos. Por ejemplo, en una variación, el parche comprende pilocarpina y un mejorador de la penetración o permeación para inducir el sudor de manera química o farmacológica. El uso de un mejorador de la penetración puede ayudar a
incrementar la velocidad a la cual se introduce la policarpina al cuerpo y por esto, incrementar el inicio de la respuesta mejorada de la sudoración. Los ejemplos de los mejoradores de la permeación adecuados incluyen, pero no están limitados al etanol y otros alcoholes superiores, N- decilmetilsulfóxido (nDMS) , monolaurato de polietilenglicol, monolaurato de propilenglicol, dilaurato y esteres relacionados, monooleato de glicerol y glicéridos mono, di y trifuncionales relacionados, dietil toluamida, esteres de ácidos carboxílicos de alquilo o arilo del éter monoalquílico de polietilenglicol, y éteres de carboximetilo de
•polietilenglicol alquilo. La pilocarpina también puede ser impulsada hacia la piel utilizando iontofóresis . Los presentes inventores han mostrado que la infusión de pilocarpina en la piel utilizando iontofóresis incrementa la cantidad de sudor en aproximadamente 20 veces por área unitaria. De manera semejante, otras substancias químicas pueden ser introducidas en la piel para incrementar la respuesta al sudor. El parche también puede comprender un componente que incrementa la respuesta al sudor por el inicio de un incremento en la temperatura local. Por ejemplo, un calentador (por ejemplo, un calentador de resistencia eléctrica) puede ser utilizado para incrementar la temperatura de la superficie de la piel y por consiguiente
incrementar la sudoración. La inducción térmica de una respuesta al sudor también puede ser lograda por la aplicación de energía (por ejemplo, en las regiones del infrarrojo visible o próximo) . Por ejemplo, una lámpara puede ser utilizada para generar calor y para inducir la sudoración. Los experimentos fueron corridos para medir la velocidad de sudoración (en µl/cm2 x min) como una función de la potencia de la lámpara (W) contra el tiempo (seg.). Como se muestra por la figura 6, parece que va a existir un umbral mínimo requerido para inducir una respuesta de la sudoración. En este caso, este umbral estuvo en el intervalo de aproximadamente 2 hasta aproximadamente 2.5 watts (potencia con respecto a la lámpara) , cuando se utiliza una lámpara de halógeno de 6 volts, modelo LR00001, MAGLITE®. La estimulación eléctrica directa (es decir, la estimulación farádica) también puede ser utilizada para inducir una respuesta de sudoración. De manera semejante, un compuesto químico, o combinación de compuestos, puede ser utilizada para iniciar un incremento de la temperatura local y para inducir o incrementar por lo tanto la respuesta de sudoración. Por ejemplo, dos compuestos químicos pueden ser utilizados, separados por una membrana delgada. La membrana puede ser removida por una orejeta de jalado cuando el parche es adherido a la piel, por lo cual se une por medio de un puente a los compuestos poniéndolos en contacto entre sí, y
provocando una reacción exotérmica. De esta manera, se proporciona una fuente de calor. Los mecanismos físicos de inducción o de incremento de la sudoración también pueden ser utilizados. Por ejemplo, en una variación, el dispositivo de medición es llevado en contacto con el parche y se aplica fuerza al parche de una manera suficiente para provocar un incremento en el transporte del sudor hasta la piel. La presión aplicada sobre el parche de colección conduce a que el fluido desde el lumen de la glándula sudorípara sea expresado y suministrado a la superficie de la piel. Además, el dispositivo de medición podría incluir un mecanismo de succión o de vacío, el cual en combinación con la presión aplicada podría conducir a una cantidad más grande de sudor que es suministrado a la capa de colección del parche. La vibración también puede ser utilizada para inducir el sudor. El sudor también puede ser inducido por el uso de una capa oclusiva dentro del parche, la cual inhibe la pérdida evaporativa de la superficie de la piel y permite por esto una acumulación de sudor más eficiente en la capa de colección del parche. Esta capa oclusiva puede comprender un elemento dentro del parche, o puede ser una parte superpuesta removible que es separada del parche previo al uso del dispositivo de medición. Esta capa oclusiva puede ser, por ejemplo, una película de polivinilo delgada o algún otro
material impermeable al vapor de agua, adecuado. En algunas variaciones, puede ser necesario proporcionar un método para minimizar el efecto de las velocidades de sudoración variables sobre la cantidad de acumulación de la glucosa en la capa de colección. Existen varias formas en la cuales el efecto de las velocidades de sudoración variables puede ser normalizado por el método de colección o el uso de varios analitos. Un método para reducir el efecto de una velocidad de sudoración variable es normalizar el flujo de la glucosa medida. Por ejemplo, cuando la glucosa es transportada a la superficie de la piel por el sudor, la cantidad total de glucosa depositada sobre la unidad de la superficie de la piel por minuto puede ser calculada como sigue: GF = SR x SG en donde GF es el flujo de glucosa (ng/cm2 x min) , SR es la velocidad de sudoración (µl/cm2 x min) , y SG es la concentración de la glucosa en el sudor (ng/µl) . Frecuentemente, la velocidad de sudoración fluctúa durante el transcurso del tiempo como resultado de la estimulación física o emocional, y esta fluctuación puede conducir a una variación en la cantidad de la glucosa colectada desde la superficie de la piel, y por consiguiente a una variación de la exactitud de la medición de la concentración de la glucosa. Esta variación puede ser
reducida significativamente si la velocidad de sudoración es medida como una función del tiempo y utilizada para normalizar el flujo de la glucosa, como sigue: GF/SR = (SRXSG)/SR = SG Otro método, por ejemplo, puede comprender la configuración de la capa de colección del parche para colectar un volumen constante del fluido de modo que una velocidad de sudoración variable solamente afecte el tiempo para llenar el volumen de colección, pero no la cantidad del fluido colectado. Por ejemplo, la capa de colección puede comprender un polímero absorbente que llega a ser saturado hasta un volumen dado del fluido. De manera semejante la capa de colección puede comprender un depósito capilar que tiene un volumen fijo. Los depósitos capilares adecuados incluyen aquellos filtros fabricados por Whatman descritos anteriormente. Mostrado en la figura 5A está un parche (500) sobre la superficie de la piel (502) . En esta variación, la capa adhesiva y la membrana permeable al sudor están combinadas en una sola capa (504) . Dentro de la capa de colección (508) está un depósito de volumen fijo (506) . El depósito de volumen fijo (506) es mostrado en la figura 5A como un recipiente que está completamente vacío. Cuando el sudor se empieza a transportar hasta la superficie de la piel, y a través de la membrana permeable al sudor, el depósito de volumen fijo empieza a llenarse, como se muestra
en la figura 5B. Un número de diferentes técnicas puede ser utilizado para determinar cuando el depósito de volumen fijo, y por consiguiente la capa de colección, es llenada. Por ejemplo, una capacitancia eléctrica, una conductancia eléctrica, o mediciones ópticas pueden ser utilizadas como se muestra en las figuras 5C, 5D, y 5E respectivamente. Por ejemplo, mostrado en la figura 5C está el parche (510) sobre la superficie de la piel (512) . En esta figura, el sudor ya se ha hecho pasar a través del adhesivo y de la capa de la membrana permeable al sudor (514) para llenar el depósito de volumen fijo (516) . Los conductores (518) para formar un capacitor relleno dieléctrico son colocados sobre cualquier lado del parche (510) . De esta manera, el volumen dentro del depósito de volumen fijo (516) puede ser determinado por un cambio en la capacitancia del capacitor relleno, dieléctrico. Los conductores ilustrativos adecuados para su uso con los parches descritos aquí incluyen aquellos hechos de plata, platino, y semejantes. De manera semejante, la conductancia eléctrica puede ser utilizada para determinar cuando el depósito es llenado. Mostrado en la figura 5D está el parche (520) sobre la superficie de la piel (522) . El sudor ya sea ha hecho pasar a través del adhesivo y de la capa de membrana permeable al sudor (524) para llenar el depósito de volumen fijo (526) . Un
circuito conductor (530) es establecido con el depósito (526) mostrado allí en la parte superior del depósito. El circuito puede estar abierto o cerrado. De esta manera, el volumen dentro del depósito de volumen fijo (526) puede ser determinado por un cambio en la conductancia (por ejemplo, en la parte superior del depósito) . Los soportes (528) pueden ser provistos sobre cualquier lado del parche (520) para ayudar a proporcionar al mismo, integridad estructural. Estos soportes pueden ser substratos de plástico con los elementos ,de circuito impreso configurados adecuadamente que podrían proporcionar una ruta de circuito a través del depósito de volumen fijo. Los cambios en la resistencia o conductancia en la parte superior del depósito podrían indicar si el volumen del fluido en el depósito ha alcanzado un máximo. La potencia modesta requerida para impulsar una corriente a través del circuito descrito aquí podría ser provista por un mecanismo de acoplamiento inductivo encerrado dentro del dispositivo de medición, una batería de plástico, y semejantes. La transmisión óptica también puede ser utilizada para determinar cuando el depósito es llenado. Mostrado en la figura 5E está el parche (530) sobre la superficie de la piel (532) . El sudor ya se ha hecho pasar a través del adhesivo y de la capa de membrana permeable al sudor (534) para llenar el depósito de volumen fijo (536) . Una ruta de transmisión óptica (538) es establecida con el depósito (536) , mostrada
aquí en la parte superior del depósito. De esta manera, el volumen dentro del depósito de volumen fijo (536) puede ser determinado por un cambio en la transmisión óptica (por ejemplo, en la parte superior del depósito) . Una ruta de fibra óptica puede ser provista en la parte superior de los soportes mecánicos (540) sobre cualquier lado del parche (530) que conecta una fuente óptica sobre un lado del parche con un detector óptico sobre el otro. Los cambios en la transmisión medida podrían indicar si el volumen del fluido en el depósito ha alcanzado un máximo. La potencia para la fuente óptica y el detector puede ser incluida en el dispositivo de medición. La reflexión óptica también puede ser utilizada para determinar cuando se ha llenado el depósito. Por ejemplo, como se muestra en la figura 5F, ahí está el parche (550) sobre la superficie de la piel (542). El sudor ya ha pasado a través del adhesivo y la capa de la membrana permeable al sudor (544) y ha llenado parcialmente el depósito de volumen fijo (546). Una placa transparente (549) está localizada sobre la parte superior del depósito. Esta placa tiene un índice óptico de refracción cercano a aquel del sudor (aproximadamente 1.33). La luz incidente (551) ilumina la interfaz entre los depósitos (546) y la placa (549). Aquí, la luz reflejada (552) tiene una intensidad elevada a causa de que la diferencia del índice óptico entre la placa (549) y el
ai e (que tiene un índice óptico de refracción de aproximadamente 1.0) es elevada. Mostrada en la figura 5G está el mismo parche (550) en donde el depósito (546) está llenado completamente con el sudor. Aquí, la luz reflejada (552) tiene una intensidad baja a causa de que la diferencia del índice óptico entre la placa (549) y el sudor es baja (ambas tienen un índice óptico de refracción de aproximadamente 1.33). Por consiguiente, la caída en la intensidad de la luz reflejada puede ser utilizada como un indicador de que el depósito está lleno. Una fuente óptica y un detector pueden ser incluidos en el dispositivo de medición y se puede obtener información del parche por medio de una interfaz óptica. La determinación del nivel de la glucosa en el parche puede ser normalizada para velocidades de sudoración variables por el uso de un analito diferente de la glucosa específico para el sudor que está constante en la concentración (por ejemplo, lactato, urea, cloruro de sodio, otros electrólitos, etc.). De esta manera, la concentración de la glucosa puede ser normalizada a este valor. Por ejemplo, un detector químico separado puede ser incorporado en el parche para determinar independientemente la cantidad del analito del sudor. La cantidad de este analito del sudor acumulada en la capa de colección depende solamente del volumen del sudor en la capa. Una vez que este es
determinado, la cantidad de glucosa medida en el sudor puede ser normalizada hasta el volumen total del sudor colectado, por lo cual se evitan los errores asociados con la medición de una acumulación incrementada de glucosa en la capa de colección del parche (es decir, debido a la sudoración incrementada en lugar de las concentraciones de glucosa fisiológica incrementada) . Alternativamente, pueden existir marcadores fisiológicos en el sudor que se incrementan con la velocidad de sudoración incrementada. La determinación de la concentración de estos marcadores también puede servir como un método para la normalización de la glucosa acumulada en la capa de colección. Como se describió anteriormente, el parche comprende un detector. El detector puede estar en su propia capa, adyacente a la capa de colección, o, dependiendo de la naturaleza del detector, puede ser combinado en la propia capa de colección. En la ausencia de estimulación térmica, emocional, física, o farmacológica, los valores típicos de rendimiento de la sudoración sobre la yema palmar y el antebrazo son relativamente pequeños. El rendimiento de la sudoración varía de un individuo a otro y de un sitio anatómico sobre el cuerpo a otro. La velocidad de sudoración máxima por glándula se ha reportado que varía desde aproximadamente 2 ni/min hasta aproximadamente 20 ni/min. Véase Sato, K. y Dobson, R. L. "Regional and individual
variations in the function of the human eccrine sweat gland" , J. Invest . Dermat . 54, 443, 1970. Suponiendo velocidades de transpiraciones sensibles por glándula de 1 nl/min y utilizando densidades de glándulas sudoríparas medidas en diferentes partes del cuerpo, se puede estimar un rendimiento del sudor total. Las densidades de las glándulas sudoríparas típicas sobre el antebrazo son de aproximadamente 100 glándulas por centímetro cuadrado, lo cual proporciona 0.1 µl de sudor por centímetro cuadrado por minuto. Las densidades de las glándulas sudoríparas típicas sobre la yema palmar son aproximadamente de 500 glándulas por centímetro cuadrado, lo cual proporciona 0.5 µl de sudor por centímetro cuadrado por minuto. En la ausencia de estimulación, el número de glándulas sudoríparas activas por unidad de área frecuentemente es reducido a la mitad del total disponible. Boysen et al., descrito anteriormente, encontró que la concentración de la glucosa en el sudor fue aproximadamente de una centésima de los valores normales de la glucosa en la sangre (por ejemplo, 1 mg/dl) . Por consiguiente, el flujo de la glucosa con respecto a la superficie de la planta palmar se puede estimar que va a estar en el intervalo desde aproximadamente 2.5 nanogramos hasta aproximadamente 5 nanogramos por centímetro cuadrado por minuto. En consecuencia, el detector descrito aquí debe ser capaz de detectar cantidades de nanogramos de la glucosa (menores de
100 nanogramos) y el dispositivo de medición descrito aquí debe ser capaz de efectuar mediciones de glucosa ultrasensibles . Realmente, se ha demostrado que el flujo de glucosa llevado hasta la piel por medio del sudor fue del orden de 1-20 nanogramos por centímetro cuadrado por minuto en la ausencia de estimulación térmica, farmacológica u otras formas de estimulación. Estas mediciones se hicieron utilizando el sistema Wescor MACRODUCT® (459 South Main Street Logan, Utah 84321) y en cámaras de colección del sudor adaptadas especialmente. El sudor colectado en el aparato Wescor MACRODUCT® y en las cámaras de colección del sudor fue analizado entonces utilizando un aparato de intercambio aniónico de alto rendimiento Dionex (Sunnyvale, California) con un detector amperométrico de impulsos (HPAE-PAD) . La sensibilidad y especificidad del sistema de HPAE-PAD fueron probadas utilizando muestras analíticas. Se detectó la glucosa en cantidades tan pequeñas como 1 nanogramo utilizando HPAE-PAD. Varios tipos de detectores adecuadamente sensibles pueden ser utilizados. Por ejemplo, los detectores pueden ser de base electroquímica, o pueden ser de base fluorescente. Los sensores electroquímicos adecuados pueden ser aquellos que comprenden una glucosa-oxidasa inmovilizada u otra(s) enzima (s) en, o sobre un polímero u otro soporte, y aquellos
que comprende glucosa-oxidasa u otra(s) enzima (s) en una configuración microfluídica . De manera semejante, el detector no puede ser de base fluorescente, por ejemplo, a base de una fluorescencia mejorada o suprimida de una molécula fluorescente sensible a la glucosa. Como se señaló anteriormente, se puede utilizar cualquier detector electroquímico adecuado, por ejemplo, el detector electroquímico puede ser a base de un polímero, a base de dispositivos microfluídicos y semejantes. Cuando un detector electroquímico está basado en un polímero, el polímero típicamente es permeable a la glucosa, y una enzima reactiva a la glucosa está inmovilizada sobre o dentro del polímero. La capa de interfaz comprende al menos dos electrodos, los cuales son activados típicamente por el dispositivo de medición cuando el mismo es llevado en contacto eléctrico con el parche. En una variación, se utiliza la enzima de glucosa oxidasa, que produce peróxido de hidrógeno que reacciona en al menos un electrodo para producir una corriente eléctrica medible proporcional a la concentración de la glucosa. Es decir, utilizando un proceso enzimático conocido en el arte, la glucosa oxidasa cataliza la reacción de la glucosa y el oxígeno para producir ácido glucónico y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno es reducido entonces electroquímicamente en al menos un electrodo, produciendo dos electrones para la detección. Como
se señaló anteriormente, el contacto eléctrico entre el dispositivo de medición y el parche también puede servir para proporcionar energía al parche (aunque, como se señaló anteriormente, el parche puede comprender también una batería en el mismo) . El dispositivo de medición obtiene información del parche (es decir, del detector) y proporciona una lectura discreta única. Cuando se utilizan detectores electroquímicos a base de dispositivos microfluídicos, el parche típicamente comprende un depósito de fluido, un canal de flujo, una válvula de compuerta, y electrodos del sensor. En esta variación, la enzima electroquímica está típicamente en solución. La capa de interfaz comprende al menos un electrodo, el cual es activado por el dispositivo de medición cuando se coloca en contacto eléctrico con el parche. Como en el caso anterior, el contacto eléctrico entre el dispositivo de medición y el parche, puede servir para suministrar energía al parche. Un sensor microfluídico también puede comprender un depósito con un analito de referencia para proporcionar la calibración in situ del detector. Como en los casos anteriores, el contacto eléctrico entre el dispositivo de medición y el parche, puede servir para proporcionar energía al parche, o el parche puede comprender una batería en el mismo. La sensibilidad para estos detectores
electroquímicos puede ser aumentada incrementando la temperatura durante los ciclos de detección, por el incremento de la longitud del ciclo de detección, por el incremento del área del detector, por la selección apropiada del potencial operativo, y por el uso de membranas selectivas para seleccionar las substancias de interferencia tales como el ácido ascórbico, ácido úrico, acetaminofen, etc. Además, se pueden utilizar métodos diferenciales en donde la muestra de glucosa es medida en la presencia y ausencia de una enzima específica para la glucosa y la concentración de la glucosa es determinada a partir de la diferencia entre estas dos señales . Por ejemplo, la sensibilidad puede ser incrementada por el calentamiento de la solución del sensor desde 25 2C hasta 40 2C, y tal incremento de la temperatura es improbable que afecte a la actividad de la enzima del detector de la glucosa. Véase, por ejemplo, Kriz, D. Berggre, C, Jonhanson, A. y Ansell, R.J., "SIRE-Technology . Part I. Amperometric biosensor based on flow injection of the recognition element and differential measurements", Instrumentation Science & Technology, 26, 45-57 (1998) . De manera semejante, la sensibilidad puede ser incrementada aumentando el área del detector, puesto que la corriente del detector se incrementa linealmente con el área del electrodo del detector. La extensión del intervalo de tiempo sobre el cual se puede
hacer la medición también puede ser utilizada para incrementar la carga medida y por consiguiente, la sensibilidad total del detector. Por último, la cobertura del electrodo con membranas selectivas del tamaño, y, o, de la carga, puede permitir el paso del peróxido de hidrógeno, por ejemplo, mientras que se excluye el ascorbato, urato y otros materiales, que pueden reaccionar directamente con el sensor para producir una señal parásita. Las membranas selectivas del tamaño, adecuadas, por ejemplo, incluyen aquellas hechas de poliuretano, polietileno y otros materiales así como las membranas selectivas de la carga hechas de polietilsulfuro, NAFION®, acetato de celulosa, y otros materiales que pueden ser utilizados como membranas de selección de interferencia para detectores electroquímicos. El detector también puede ser un detector fluorescente. En esta variación, la capa de interfaz del parche está hecha de un material que es ópticamente transparente a las longitudes de onda de excitación y emisión relevantes para el detector de base fluorescente particular utilizado por el parche. En esta variación, el dispositivo de medición no necesita ser llevado en contacto físico directo, a causa de que la obtención de la información del parche es logrado acoplando ópticamente el dispositivo y el parche, como se muestra ilustrativamente en la figura 2A. Los elementos electrónicos internos del dispositivo de medición
también pueden ser configurados para registrar una señal máxima cuando la misma se hace pasar sobre el parche, por lo cual se reduce la necesidad de un registro estático apropiado entre el dispositivo de medición y el propio parche. El parche también puede incluir una molécula fluorescente de referencia, insensible a la glucosa, para proporcionar una medición de la relación entre dos magnitudes, en lugar de una medición de intensidad absoluta. La adición de una molécula de referencia también puede proteger contra una señal parásita que se origina en la longitud de onda de emisión del detector de base fluorescente. El detector fluorescente típicamente comprende una molécula fluorescente sensible a la glucosa inmovilizada sobre un polímero o solvente adecuado, y como se describió anteriormente, puede estar en una capa separada, o dispersada de principio a fin de la capa de colección. A causa de que el dispositivo de medición estará midiendo la glucosa a una longitud de onda específica, es deseable que los materiales utilizados en el parche no tengan su fluorescencia en, o substancialmente cerca de, la longitud de onda de la emisión fluorescente de la molécula transductora de la glucosa. De manera semejante, frecuentemente es deseable que la membrana permeable al sudor en estas variaciones sea opaca para prevenir la auto-fluorescencia desde la piel. Los detectores de la fluorescencia adecuados pueden
ser por ejemplo aquellos descritos en la patente U.S. No. 6,750,311 a favor de Van Antwerp et al, tal sección sobre los detectores de la fluorescencia es incorporada aquí para referencia en su totalidad. Como se describe allí, los detectores de la fluorescencia pueden estar basados en la atenuación de la intensidad de la fluorescencia de los compuestos orgánicos de lectinas etiquetadas o de boronato (germinato o arsenato) . Las lectinas adecuadas incluyen la concanavalina A (Jack Bean) , Vicia faba (Faba Bean) , Vicia sativa, y semejantes. Tales lectinas se aglutinan a la glucosa con las constantes de equilibrio de aproximadamente 100. Véase, Falasca, et al., Biochim . Biophys . Acta . , 577-71 (1979) . La lectina puede ser etiquetada con una porción fluorescente tal como el isotiocianato de fluoresceína o rodamina utilizando los kits disponibles comercialmente. La fluorescencia de la lectina etiquetada se reduce con una concentración creciente de la glucosa. Los compuestos de aglutinación al azúcar a base de boronato también pueden ser utilizados como la base para el detector de la fluorescencia. La glucosa se aglutina reversiblemente al grupo del boronato en estos compuestos. Los complejos del boronato ya han sido descritos, los cuales transducen una señal de glucosa por medio de una variedad de medios. Véase, Nakashima, et al., Chem. Lett. 1267 (1994); James, et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun. 411 (1994); y
James, et al., Nature, 374:345 (1995). Estos incluyen cambios geométricos en las moléculas del tipo de la porfirina o el indol en la energía de rotación óptica en las porfirinas, y la transferencia de electrones fotoinducida en las porciones del tipo del antraceno. De manera semejante, la fluorescencia del ácido 1-antrilborónico se ha mostrado que va a ser apagada por la adición de glucosa. Véase, Yoon, et al., J. Am . Chem . Soc . , 114:5874 (1992). El tinte utilizado en el detector de base fluorescente anterior puede ser, por ejemplo un antraceno, fluoresceína, xanteno (por ejemplo, sulfo-rodamina, rodamina), cianina, cumarina, (por ejemplo cumarina 153), oxazina (por ejemplo, azul del Nilo) , un complejo metálico u otro hidrocarburo poliaromático que produzca una señal fluorescente. A diferencia de las aplicaciones descritas anteriormente de estos sensores, en donde los sensores están diseñados especialmente para la aglutinación en el equilibrio con un analito objetivo y para la reversibilidad, la constante de aglutinación de los detectores de base fluorescente descritos aquí puede ser incrementada para reducir adicionalmente el límite de detección. Dispositivo de Medición El dispositivo de medición obtiene información del parche para medir la glucosa. El dispositivo mide la cantidad total de la glucosa presente en un volumen fijo, y luego
convierte la medición de la glucosa en una concentración. En general, el dispositivo de medición comprende típicamente una pantalla, para exhibir los datos. El dispositivo también puede incluir indicadores de advertencia (por ejemplo, una advertencia local, luces parpadeantes, sonidos, etc.) para indicar que los niveles de glucosa de un usuario son peligrosamente elevados o peligrosamente bajos. Además, como se describió brevemente antes, el dispositivo de medición también puede ser configurado para verificar que un procedimiento de limpieza de la piel ha sido efectuado. Por ejemplo, cuando las telas de limpieza con un marcador han sido utilizados, el marcador permanece sobre la superficie de la piel. Si el dispositivo de medición detecta el marcador, entonces procede la medición. Si el dispositivo de medición no detecta el marcador, la medición no procede. En una variación, el dispositivo de medición proporciona una indicación al usuario, de que la superficie de la piel debe ser limpiada previo a su uso (por ejemplo, utilizando una advertencia vocal, luces coloreadas o parpadeantes, o varios sonidos) . El dispositivo de medición también puede comprender una fuente iontoforética, por ejemplo, que va a ser utilizada para ayudar a impulsar la pilocarpina, u otras moléculas de interés hacia la piel. La configuración del dispositivo de medición depende de la configuración del detector en la ruta. Por
ejemplo, cuando el dispositivo de medición va a ser utilizado con un detector electroquímico, el dispositivo de medición proporciona un contacto eléctrico con la capa de interfaz, y es ya sea provista de energía por el contacto eléctrico, o es provista de energía por una fuente de energía independiente (por ejemplo, una batería dentro del propio parche, etc.) . El dispositivo de medición también comprende típicamente un procesador de computadora para analizar los datos. Por el contrario, cuando el dispositivo de medición está configurado para la detección de la fluorescencia, el dispositivo de medición está configurado para proporcionar el contacto óptico o interacción con la capa de interfaz. En esta variación, el dispositivo de medición también comprende típicamente una fuente de luz para estimular la fluorescencia. En algunas variaciones, el dispositivo de medición comprende tanto los contactos eléctricos necesarios como los elementos ópticos necesarios de modo que un dispositivo de una sola medición pueda ser utilizado con un parche que tiene diversas configuraciones de las capas del parche (por ejemplo, una capa que comprende una molécula de base fluorescente, y otra capa que comprende un detector electroquímico) . El dispositivo de medición comprende además un código ejecutable por computadora que contiene un algoritmo de calibración, el cual se refiere a los valores medidos de
la glucosa detectada con respecto a los valores de la glucosa en la sangre. Por ejemplo, el algoritmo puede ser un algoritmo de puntos múltiples, el cual típicamente es válido durante aproximadamente 30 días o un período más prolongado. Por ejemplo, el algoritmo puede necesitar el funcionamiento de mediciones múltiples de la glucosa en la sangre de los capilares (por ejemplo, absorciones por capilaridad de la sangre) con mediciones simultáneas en los parches durante un período de aproximadamente 1 día hasta aproximadamente 3 días. Esto podría ser efectuado utilizando un medidor de la glucosa en la sangre, destinado, separado, provisto con el dispositivo de medición descrito aquí, que comprende una conexión inalámbrica (u otro adecuada) hacia el dispositivo de medición. De esta manera, se establece un procedimiento de transferencia automático de los datos, y los errores del usuario en la entrada de los datos son minimizados. Una vez que un número estadísticamente significativo de puntos de datos agrupados por parejas ha sido adquirido, que tienen un intervalo suficiente de valores (por ejemplo, que cubren los cambios en la glucosa en la sangre de aproximadamente 200 mg/dl) , será generada una curva de calibración, la cual se refiere a la glucosa en el sudor, medida con respecto a la glucosa en la sangre. Los pacientes pueden efectuar verificaciones de las calibraciones periódicas con mediciones únicas de la glucosa en la sangre,
o recalibraciones totales cuando sea deseable o necesario. El dispositivo de medición también puede comprende una memoria, para guardar las lecturas y semejantes. Además, el dispositivo de medición puede incluir una conexión (inalámbrica, un cable, o semejantes) a una computadora. De esta manera, los datos almacenados pueden ser transferidos desde el dispositivo de medición hasta la computadora, para un análisis posterior, etc. El dispositivo de medición puede comprender además varios botones, para controlar las diversas funciones del dispositivo y para suministrar energía al dispositivo para el encendido y apagado cuando sea necesario. Kits También se describen aquí los kits. Los kits pueden incluir uno o más parches empacados, ya sea solos, o en combinación con otros parches, un dispositivo de medición, o instrucciones. En una variación, los kits comprenden al menos un parche que tiene un detector de base fluorescente y al menos un parche que tiene un detector de base electroquímica. Típicamente, los parches son empacados individualmente en recipientes estériles o son envueltos y están configurados para un solo uso. Los kits también pueden incluir parches múltiples que contienen un solo tipo del detector. En otra variación, los kits comprenden al menos un parche, y al menos un dispositivo de medición. Al menos un parche puede tener un detector que corresponde a la capacidad
de medición del dispositivo de medición (por ejemplo, un parche que tiene un detector electroquímico con un dispositivo de medición configurado para proporcionar el contacto eléctrico) o el parche puede tener un detector que no corresponde a la capacidad de medición del dispositivo de medición. En algunas variaciones, los kits comprenden parches que tienen tipos múltiples de detectores, y el dispositivo de medición está configurado con capacidades tanto eléctricas como ópticas. Ejemplos Ejemplo 1: Investigación de los efectos de una membrana permeable al sudor Una iontofóresis de pilocarpina estándar fue efectuada simultáneamente sobre la piel seca limpia de ambos brazos de una persona diabética del tipo 1 de sexo masculino de 40 años de edad. La piel fue limpiada por frotamiento después de la estimulación y una superficie MedOptix Macrovial fue aplicada dentro del transcurso de 1 minuto después de la iontofóresis (el dispositivo MedOptics Macrovial permite que las muestras en serie sean colectadas desde el mismo sitio sobre la piel. Esto se hace desde una placa que tiene un orificio a través del mismo para el contacto con la superficie de la piel. Sobre el lado de contacto que no es de la piel, de la placa, un tubo capilar conecta el orificio a una cámara de colección o vial) . Un
material de barrera de vaselina-parafina (que actúa como una membrana permeable al sudor) fue aplicada al sitio sobre el brazo derecho antes que el dispositivo MedOptix Macrovial sea aplicado. Las muestras fueron colectadas cada 10 minutos desde la aparición de la primera gota de sudor sobre el extremo del dispositivo MedOptix Macrovial. El sujeto llegó con un nivel de glucosa en la sangre inicial de aproximadamente 220 mg/dl, el cual fue estabilizado en aproximadamente 175 mg/dl durante los primeros 40 minutos de colección de la muestra. El sujeto tomó entonces 289 g (10 onzas) de COKE® que produce una elevación en la glucosa en la sangre hasta aproximadamente 300 mg/dl. Las primeras dos muestras del brazo izquierdo (que no tienen una membrana permeable al sudor) , contuvieron aproximadamente 2.0 mg/dl de glucosa. La concentración del sudor se incrementó monotónicamente en todo el resto del experimento hasta un máximo de aproximadamente 5.0 mg/ml. Este incremento en la concentración no estuvo correlacionado con el incremento en la glucosa en la sangre, la cual empezó a elevarse 40 minutos después de la elevación inicial en la glucosa en el brazo izquierdo. En contraste, las muestras de sangre desde el brazo derecho, que tienen la membrana permeable al sudor, permanecieron planas a aproximadamente 1.7 mg/ml y empezó a elevarse hasta un máximo de aproximadamente 2.5 mg/dl aproximadamente 10 minutos después
que la glucosa en la sangre empezó a elevarse. Estos resultados son mostrados en la figura 7. La figura 8 muestra un ajuste de la glucosa en la sangre contra la glucosa en el sudor para el sitio que tiene la membrana permeable al sudor, que ha sido cambiada en el tiempo. Los valores de la glucosa en la sangre y en el sudor estuvieron altamente correlacionados, como se muestra por la R2 de 0.98. la concentración de la glucosa se incrementó en todo el experimento sobre el sitio que no tiene una membrana permeable al sudor, lo cual es consistente con una fuente de glucosa independiente del sudor. La figura 9 es una gráfica de la relación del flujo de sudor con respecto al flujo de glucosa. Como es muestra en esta figura, en el caso en donde existe una membrana permeable al sudor, la relación permanece constante mientras que el nivel de glucosa en la sangre es constante. Por el contrario, en el caso en donde no existe una membrana permeable al sudor, la relación se incrementa durante este tiempo. En consecuencia, estos datos sugieren que el uso de una membrana permeable al sudor puede actuar como una barrera para los contaminantes epidérmicos y la glucosa llevada hasta la superficie de la piel por medio de difusión. Ejemplo 2. Correlación de la glucosa en el sudor con respecto a la glucosa en la sangre Ambos antebrazos de los sujetos utilizados fueron
limpiados por frotamiento con una torunda con alcohol isopropílico al 70 % estándar. Las almohadillas de algodón remojadas en una solución salina amortiguada y una solución de pilocarpina al 1 % fueron aplicadas respectivamente a los electrodos negativo y positivo de un dispositivo de iontofóresis estándar. Una carga (dosis) de 10 mA-min a una corriente de 1 mA fue aplicada a los electrodos cuando los mismos fueron sujetados de manera ceñida contra la piel de los sujetos, con tiras elásticas. La piel fue limpiada por frotamiento después de 10 minutos de la iontofóresis y un dispositivo MedOptix Macrovial fue aplicado al sitio del electrodo positivo dentro de 1 min después de la iontofóresis. Los viales de la muestra fueron reemplazados cada 10 ó 15 minutos hasta que el flujo de sudor llegó a ser menor que aproximadamente 10 µl durante el intervalo de colección. Los niveles de glucosa en la sangre fueron determinados a partir de picaduras de los capilares en el dedo cada 10 minutos utilizando un medidor de glucosa de la sangre, personal, comercial (ACCU-CHECK ADVANTAGE®, Roche) . En algunos experimentos, los macro-viales fueron colocados simultáneamente sobre los brazos derecho e izquierdo, mientras que en otros macro-viales fueron colocados primero en un brazo y luego después de una hora sobre el brazo opuesto. Las muestras fueron filtradas, diluidas y analizadas
sobre un sistema DIONEX® HPAE-PAD. El protocolo varió con el estado inicial del sujeto. Por ejemplo, si la glucosa en la sangre (BG (por sus siglas en inglés)) del sujeto fue elevada (>200 mg/dl) al paciente se le pidió que siguiera su programa de insulina normal para reducir la BG. De otra manera, los sujetos fueron provistos con una bebida que contiene 35-70 g de la glucosa en el inicio del experimento para producir una elevación en la BG durante el período de colección. El paciente BCG1701, cuyos resultados son mostrados en las figuras 10 y 11A-B, es una persona diabética del tipo II, caucásica, del sexo femenino, de 48 horas de edad. El sujeto BDW2002, cuyos resultados son mostrados en las figuras 12 y 13A-B, es un paciente no diabético, asiático, del sexo masculino, de 39 años de edad. La figura 10 muestra un resultado típico para una reducción de la BG. En este experimento el paciente llegó con un nivel de BG elevado (250 mg/dl) . Después del régimen de tratamiento propio del sujeto, la insulina fue inyectada y las muestras del sudor y la sangre fueron colectados desde los antebrazos izquierdo y derecho. Los datos mostrados en la figura 10 no están corregidos para la desviación que algunos sujetos demostraron entre el brazo izquierdo y derecho. En esta figura la BG (círculos) se reduce desde 250 hasta 100
durante el experimento de 2.5 horas . El nivel de glucosa en el sudor (SG) es mostrado para el antebrazo izquierdo (LFA) seguido por el antebrazo derecho (RFA) . Los números sobre los puntos de SG proporcionan el volumen en µl del sudor colectado para cada muestra sobre el intervalo de colección. Las figuras HA y 11B muestran una gráfica de regresión lineal de la glucosa en la sangre, interpolada contra la glucosa en el sudor para LFA y RFA respectivamente. Estos ajustes tienen valores de R2 de 0.83 y 0.92, indicando un alto grado de correlación entre los niveles de glucosa en la sangre y en el suero . La figura 12 muestra los resultados experimentales para un experimento con BG creciente. En este experimento el paciente fue provisto con 75 g de glucosa que elevó su BG desde aproximadamente 125 hasta aproximadamente 200 mg/dl durante el transcurso del experimento. Los datos graficados en la figura 12 muestran los niveles de glucosa en el sudor (eje izquierdo) de las colecciones "simultáneas" de LFA y RFA junto con los niveles cambiantes en la sangre (eje derecho) . Las figuras 13A y B muestran gráficas de la regresión lineal de la glucosa en la sangre contra la glucosa en el sudor para LFA y RFA. Los valores de R2 fueron de 0.99 y 0.97 para LFA y RFA respectivamente, demostrando una fuerte correlación entre la glucosa en la sangre y en el suero en
este experimento. Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.