MXPA06012568A

MXPA06012568A - Formulacion que com0prende inhibidores de histona desacetilasa.

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Publication number: MXPA06012568A
Application number: MXPA06012568A
Authority: MX
Inventors: Hanshermann Franke; Bernd Hentsch; Peter Lennartz; Alexander B Maurer; Sascha Hovelmann; Elke Martin
Original assignee: Topo Target Germany Ag
Priority date: 2004-04-30
Filing date: 2005-05-02
Publication date: 2007-04-30
Also published as: JP4789927B2; ATE399539T1; PL1591109T3; SI1591109T1; AU2005237251B2; CY1108301T1; CA2564877A1; PT1591109E; BRPI0509340A; CN1980647A; JP2007535518A; WO2005105055A1; ZA200608714B; US20070232528A1; EP1591109B1; EP1591109A1; DK1591109T3; ES2308065T3; DE602004014723D1; AU2005237251A1

Abstract

La presente invencion se relaciona con una formulacion galenica disponible por via oral de acido valproico o derivados de este, que presenta un perfil farmacocinetico bifasico especifico, optimizado para obtener una inhibicion maxima de histona desacetilasas en una preparacion terapeutica. Esta formulacion galenica especifica esta disenada para el tratamiento de enfermedades malignas y enfermedades asociadas con la hipoacetilacion de histonas, o en las cuales la induccion de la hiperacetilacion presenta un efecto beneficioso, por ejemplo, mediante la induccion de la diferenciacion y/o apoptosis. Debido al patron de liberacion bifasico, el perfil farmacocinetico resultante permite inhibir enzimas HDAC deseadas de forma eficiente, y luego inducir la hiperacetilacion de las histonas de forma rapida y con una accion prolongada. Este perfil asegura la modulacion eficiente y un perfil de expresion genetica deseado, lo que contribuye al beneficio terapeutico.

Description

FORMULACIÓN QUE COMPRENDE INHIBIDORES DE HISTONA DESACETILASA La presente invención se relaciona con una nueva formulación galénica de ácido valproico, o derivados de éste, disponible por vía oral, que presenta un perfil farmacocinético bifásico específico, optimizado para obtener una inhibición máxima de las histona desacetilasas en una preparación terapéutica. Esta formulación galénica específica está diseñada para el tratamiento de enfermedades malignas y enfermedades asociadas con la hipoacetilación de las histonas, o en las cuales la inducción de la hiperacetilación presenta un efecto beneficioso, por ejemplo, mediante la inducción de la diferenciación y/o la apoptosis. Debido al patrón de liberación bifásica, el perfil farmacocinético resultante permite inhibir las enzimas HDAC blanco de forma más eficiente, y luego inducir la hiperacetilación de las histonas de forma rápida y con una acción prolongada. Este perfil asegura la modulación eficiente de un perfil de expresión genética deseado, lo que contribuye al beneficio terapéutico. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Regulación de la cromatina v enfermedades La remodelación local de la cromatina es un paso clave en la activación de la transcripción de los genes. Es necesario que ocurran cambios dinámicos en el agrupamiento nucleosomal del ADN para permitir que las proteínas de la transcripción entren en contacto con el ADN molde. Uno de los mecanismos más importantes que influyen en la remodelación de la cromatina y la transcripción genética son las modificaciones post-traduccionales de las histonas y otras proteínas celulares por acetilación, y los cambios subsiguientes en la estructura de la cromatina (Davie, 1998, Curr Opin Genet Dev 8, 173-8; Kouzarides, 1999, Curr Opin Genet Dev 9, 40-8; Strahl y Allis, 2000, Nature 403, 41-4). En el caso de la hiperacetilación de las histonas, los cambios en la atracción electrostática del ADN y el impedimento estérico introducido por los grupos acetilo hidrofóbicos conduce a la desestabilización de la interacción de la s histonas con el ADN. Como resultado, la acetilación de las histonas altera los nucleosomas y permite que el ADN sea más accesible a la maquinaria de la transcripción. La remoción de los grupos acetilo permite que las histonas se unan más estrechamente al ADN y los nucleosomas adyacentes, con lo cual se mantiene una estructura de la cromatina bajo una represión de la transcripción. La acetilación es mediada por una serie de enzimas con actividad de histona acetiltransferasa (HAT). Por otro lado, los grupos acetilo son removidos por enzimas histona desacetilasas (HDAC) específicas. La alteración de estos mecanismos da lugar a una desregulación de la transcripción, y puede contribuir a una variedad de enfermedades humanas, incluyendo trastornos autoinmunes, inflamatorios o hiperprolíferativos, incluyendo la transformación tumorigénica y la progresión tumoral. Adicionalmente, otras moléculas, tales como los factores de transcripción, alteran su actividad y su estabilidad, dependiendo de su estado de acetilación. Por ejemplo, PML-RAR, la proteína de fusión asociada con la leucemia promielocíctica aguda (APL), inhibe p53 al mediar en la desacetilación y la degradación de p53, con lo que permite que los blastos de APL evadan las vías de vigilancia del cáncer dependientes de p53. La expresión de PML-RAR en células precursoras hematopoyéticas resulta en la represión de la activación de la transcripción mediada por p53, y en la protección de la apoptosis dependiente de p53 desencadenada por el estrés genotóxico (rayos X, estrés oxidativo). Sin embargo, la función de p53 se recupera en presencia de inhibidores de HDAC, lo que implica un reclutamiento activo de HDAC a p53 por PML-RAR, como mecanismo subyacente de la inhibición de p53 (Insinga et al., Febrero de 2004, EMBO Journal, 1-11). Por consiguiente, la acetilación de proteínas distintas de las histonas, tales como la acetilación de p53, tiene una participación crucial en la actividad antitumoral de los inhibidores de HDAC. Receptores nucleares e histona desacetilasas Los receptores de hormonas nucleares son factores de transcripción dependientes de ligandos que controlan el desarrollo y la homeostasis mediante el control positivo y negativo de la expresión genética. Los defectos en estos procesos de regulación constituyen las causas subyacentes de muchas enfermedades, y tienen una participación importante en el desarrollo del cáncer. Muchos receptores nucleares, incluyendo T3R, RAR y PPAR, pueden interactuar con co-represores, tales como N-CoR y SMRT, en ausencia de los ligandos, con lo que inhiben la transcripción. Además, también se ha informado que N-CoR interactúa con los receptores de progesterona y estrógeno ocupados por antagonistas. Lo que resulta más interesante, se ha demostrado que N-CoR y SMRT existen en grandes complejos de proteínas, que también contienen proteínas mSin3 e histona desacetilasas (Pazin y Kadonaga, 1997; Cell 89, 325-8). Por consiguiente, el cambio de los receptores nucleares de represión a activación inducida por ligandos refleja el intercambio de los complejos co-represor y co-activador con actividades enzimáticas antagonísticas. Regulación genética por receptores nucleares Estos complejos de co-represores que presentan actividad de HDAC no solamente median en la represión por los receptores nucleares, sino que también interactúan con factores de transcripción adicionales, incluyendo Mad-1 , BCL-6 y ETO. Muchas de estas proteínas tienen una participación clave en trastornos de la proliferación y la diferenciación celular (Pazin y Kadonaga, 1997, Cell 89, 325-8; Huynh y Bardwell, 1998, Oncogene 17, 2473-84; Wang, J. et al., 1998, Proc Nati Acad Sci U S A 95, 10860-5). Por ejemplo, T3R fue identificado originalmente sobre la base de su homología con el oncogen viral v-erbA, que, en contraste con el receptor tipo salvaje, no se une a ligandos y funcionas como un represor constitutivo de la transcripción. Además, las mutaciones en las RAR han sido asociadas con una cantidad cánceres humanos, particularmente la leucemia promielocíctica aguda (APL) y el carcinoma hepatocelular. En los pacientes con APL, las proteínas de fusión RAR, que son el resultado de translocaciones cromosómicas, incluyen la proteína de leucemia promielocítica (PML) o la proteína promielocítíca de dedos de cinc (PLZF). Auque ambas proteínas de fusión pueden interactuar con componentes del complejo co-represor, la adición de ácido retinoico separa el complejo co-represor de PML-RAR, mientras que PLZF-RAR ¡nteractúa de forma constitutiva. Estos descubrimientos proporcionan una explicación de por qué los pacientes de APL con PML-RAR alcanzan una remisión completa después de un tratamiento con ácido retinoico, mientras que los pacientes de APL con PLZF-RAR responden de forma muy pobre (Grignani et al., 1998, Nature 391 , 815-8; Guidez et al., 1998, Blood 91, 2634-42; He et al., 1998, Nat Genet 18, 126-35; Lin et al., 1998, Nature 391, 811-4). Recientemente, un paciente con PML-RAR que había experimentado múltiples relapsos después de un tratamiento con ácido retinoico fue tratado con el inhibidor de HDAC fenilbutirato, lo que resultó en una remisión completa de la leucemia (Warrell et al., 1998, J. Nati. Cáncer Inst. 90, 1621-1625). La familia de proteínas de las histona desacetilasas Se considera que el reclutamiento de histona acetiltranferases (HAT) e histona desacetilasas (HDAC) es un elemento clave en la regulación dinámica de muchos genes que tienen una participación importante en la proliferación y la diferenciación celular. La hiperacetilación de las colas N-terminales de las histonas H3 y H4 se correlaciona con la activación genética, mientras que la desacetilación puede mediar en ía represión de la transcripción. En consecuencia, muchas enfermedades han sido relacionadas con cambios en la expresión genética provocados por mutaciones que afectan factores de transcripción. La expresión aberrante por proteínas de fusión de leucemia, tales como PML-RAR, PLZF-RAR, AML-ETO y Stat5-RAR, sirve como ejemplo prototípico en este aspecto. En todos estos casos, las translocaciones cromosómicas convierten los activadores de la transcripción en represores, que reprimen constitutivamente los genes blanco importantes para la diferenciación hematopoyética a través del reclutamiento de HDAC. Es posible que eventos similares pudieran contribuir a la patogénesis de muchos otros tipos de cáncer. Existe una evidencia creciente de que lo mismo también es válido para trastornos autoinmunes, inflamatorios o hiperproliferativos. Las histona desacetilasas de mamíferos pueden dividirse en tres subclases (Gray y Ekstróm, 2001). Las HDAC 1 , 2, 3 y 8, que son homologas de la proteína RPD3 de levaduras, constituyen la clase I. Las HDAC 4, 5, 6, 7, 9 y 10 están relacionadas con la proteina de levadura Hda 1, y forman la clase II. Recientemente se han identificado diversos homólogos de mamífero de la proteína de levadura Sir2, que forman una tercera clase de desacetilasas, que son dependientes de NAD. Además, HDAC11 ha sido clasificada como una histona desacetilasa clase I con características estructurales de HDAC clase II. Todas estas HDAC parecen existir en las células como subunidades de una plétora de complejos multiproteicos. En particular, se ha demostrado que las HDAC clase I y II interactúan con los co-represores de la transcripción mSin3, N-CoR y SMRT, que sirven como factores de unión requeridos para el reclutamiento de HDAC por los factores de transcripción.

Terapia con inhibidores de HDAC Recientemente se han iniciado otras investigaciones clínicas para explotar el tratamiento clinico sistémico de pacientes con cáncer de acuerdo con el principio de la inhibición de la HDAC.

Hasta el momento se ha completado una prueba clínica de fase II, con el derivado de ácido butírico relacionado estrechamente Pivanex (Titán Pharmaceuticals) como monoterapia, del que se demostró que presenta actividad en la etapa lll/IV del cáncer de células pulmonares no pequeñas (Keer et al., 2002, ASCO, Abstract No. 1253). Se han identificado más inhibidores de HDAC, de los cuales NVP-LAQ824 (Novartis) y SAHA (Aton Pharma Inc.) son miembros de la clase estructural de los ácidos hidroxámicos evaluados en las pruebas clínicas de fase II (Marks et al., 2001, Nature Reviews Cáncer 1, 194-202). Otra clase comprende tetrapéptidos cíclicos, tales como el depsipéptido (FR901228 - Fujisawa), usado con éxito en una prueba de fase II para el tratamiento de linfomas de células T (Piekarz et al., 2001, Blood 98, 2865-8). Además, en la actualidad se está evaluando MS-27-275 (Mitsui Pharmaceuticals), un compuesto relacionado con la clase de las benzamidas, en una prueba de fase I para tratar pacientes con manifestaciones malignas hematológicas. Ácido valproico El ácido valproico (VPA; ácido 2-propil-pentanoico) tiene múltiples actividades biológicas que dependen de distintos mecanismos de acción molecular: el VPA es una droga antiepiléptica. - el VPA es teratogénico. Cuando se usa como droga antiepiléptica durante el embarazo, el VPA puede inducir defectos en el desarrollo (defectos de cierre en el tubo neural y otras malformaciones) en un porcentaje pequeño de recién nacidos. En ratones, el VPA es teratogénico en la mayoría de los embriones de ratón cuando se usa apropiadamente. el VPA activa un receptor de hormonas nucleares (PPARd). Varios otros factores de transcripción también están deprimidos, pero algunos factores no están significativamente deprimidos (receptor de glucocorticoides, PPARa). el VPA ocasionalmente causa hepatotoxicidad, que puede depender de esteres metabolizadss pobremente con coenzima A. el VPA es un inhibidor de las HDAC. El uso de derivados de VPA permitió determinar que las distintas actividades están mediadas por mecanismos de acción molecular diferentes. La teratogenicidad y la actividad antiepiléptica son el resultado de modos de acción diferentes, ya que podrían aislarse compuestos que fueran preferiblemente teratogénicos o que preferiblemente presentaran actividad antiepiléptica (Ñau et al., 1991, Pharmacol. Toxicol. 69, 310-321). Se descubrió que la activación de PPARd estaba estrictamente correlacionada con la teratogenicidad (Lampen et al., 1999, Toxicol. Appl. Pharmacol. 160, 238-249), lo que sugiere que la activación de PPARd y la teratogenicidad requieren la misma actividad molecular de VPA. También, la diferenciación de las células F9 se correlacionó estrictamente con la activación de PPARd y la teratogenicidad, como lo sugieren Lampen et al., 1999, y como se documenta con el análisis de marcadores de diferenciación (Werling et al., 2001, Mol. Pharmacol. 59, 1269-1276). Se demostró que la activación de PPARd era causada por la actividad de inhibición de la HDAC por el VPA y sus derivados (WO 02/07722 A2; WO 03/024442 A2). Además, se demostró que el inhibidor de HDAC estabilizado TSA activaba PPARd e inducía el mismo tipo de diferenciación de células F9 que el VPA. A partir de estos resultados, puede concluirse que no solamente la activación de PPARd, sino también la inducción de la diferenciación de las células F9 y la teratogenicidad del VPA o los derivados de VPA son causadas por la inhibición de la HDAC. Las actividades antiepilépticas y sedantes presentan distintas relaciones de actividad estructural, por lo que obviamente dependen de una actividad primaria de VPA diferente de la inhibición del HDAC. El mecanismo de la hepatotoxicidad está pobremente comprendido, y se desconoce si está asociado con la formación del éster de VPA-CoA. Sin embargo, la inhibición de la HDAC parece no requerir la formación de éster de CoA. El ácido valproico como inhibidor de histona desacetilasas El VPA fue desarrollado como una droga usada para el tratamiento de la epilepsia. Por consiguiente, el VPA se usa en forma sistémica, oral o intravenosa, para permitir que la droga atraviese la barrera hematoencefálica para alcanzar las regiones epilépticas deseadas en el tejido cerebral, con el fin de que cumpla su propósito anti-epiléptico. Más aún, se ha demostrado que el VPA presenta efectos beneficiosos cuando se lo usa para el tratamiento de muchos tipos de cánceres humanos, como único agente o en combinación con toda una variedad de otras terapias antitumorales, que están basadas individualmente en modos de acción marcadamente diferentes, mediante la inhibición de un conjunto de enzimas con actividad de HDAC, con lo que se induce la diferenciación y/o la apoptosis (WO 02/07722 A2, EP 1170008; WO 03/024442 A2, EP 1293205 A1). Para el tratamiento o la prevención de las enfermedades malignas, las enfermedades autoinmunes y otros trastornos inflamatorios o hiperproliferativos, también es posible administrar el VPA por vía sistémica, oral o intravenosa. Además, se demostró que el VPA atraviesa la piel humana de forma efectiva, por lo que puede administrarse por vía tópica sobre la piel, y presenta efectos beneficiosos cuando se lo usa para el tratamiento tópico o la prevención de enfermedades autoinmunes, inflamatorias o hiperproliferativas de la piel humana, por ejemplo, psoriasis y cáncer de piel humano (solicitud EP N° 03014278.0). Una formulación de VPA a medida para tratar el cáncer Para una administración oral, se ha desarrollado el VPA en formulaciones de aplicación "de liberación lenta" y también "de liberación rápida". Sin embargo, el uso de una formulación de aplicación "de liberación lenta" resultará en un incremento lento de los niveles de VPA en la sangre durante un período prolongado, sin que se alcancen eficientemente las concentraciones de VPA en plasma requeridas para la inhibición de las enzimas con actividad de histona desacetilasa. Además, es posible inducir contra-mecanismos celulares de compensación durante este período de incremento lento de los niveles de VPA, antes de que se alcancen dosis efectivas en suero, lo que torna el VPA menos efectivo para inhibir enzimas con actividad de histona desacetilasa. Por otro lado, una formulación basada exclusivamente en una formulación "de liberación rápida" de VPA conducirá a un nivel inicial elevado de VPA en sangre, lo que solamente resultará en un período breve de inhibición efectiva de HDAC. Sorprendentemente, los inventores pudieron demostrar que no solamente la concentración de VPA en suero, sino también la duración de los niveles efectivos de VPA durante el tratamiento, son cruciales para obtener una inhibición máxima de la actividad de histona desacetilasa. Es imposible alcanzar el perfil farmacocinético deseado y más beneficioso con el uso de las formulaciones galénicas actuales y bien establecidas. Por consiguiente, considerando las desventajas de las formulaciones establecidas, la presente invención se relaciona con una formulación farmacéutica que comprende al menos inhibidor de histona desacetilasa que presenta un perfil de liberación bifásico. Preferiblemente, la formulación es una formulación disponible por vía oral. Otro aspecto de esta invención es una formulación farmacéutica que comprende (i) un componente de liberación rápida, que comprende compartimientos que contienen al menos un inhibidor de histona desacetilasa, y (ii) un componente de liberación lenta, que comprende compartimientos que contienen al menos un inhibidor de histona desacetilasa, donde los compartimientos del componente de liberación rápida difieren de los compartimientos del componente de liberación íenta. Aún otro aspecto de la presente invención es una formulación farmacéutica que comprende al menos un inhibidor de histona desacetilasa, donde entre 10 y 60% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 30 minutos, y entre 50 y 100% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 6 horas, lo que se determina de acuerdo con USP 24, método 724, aparato 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm. El término "liberación", como se lo usa en la presente documentación, hace referencia la liberación del inhibidor de histona desacetilasa de la formulación farmacéutica. Como se lo usa en la presente documentación, el término "perfil de liberación" hace referencia a la liberación del inhibidor de histona desacetilasa durante un período de tiempo dado. Los métodos para determinar el perfil de liberación de una formulación farmacéutica in vitro son conocidos por aquellos entrenados en la técnica. Un método preferido de acuerdo con esta invención es el método de la Farmacopea de los EEUU (USP) 24, método 724, aparato 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm. Un perfil de liberación "bifásico" presenta una primera fase de liberación (liberación inmediata), seguida por una segunda fase de liberación lenta (liberación sostenida). Preferiblemente, 10-60% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 30 minutos, y 50-100% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 6 horas. Más preferiblemente, 20-50% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 30 minutos, y 60-100% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 6 horas. Como se lo usa en la presente documentación, el término "inhibidor de histona desacetilasa" denota una sustancia que es capaz de inhibir la actividad de histona desacetilasa de una enzima que tiene actividad de histona desacetilasa. La actividad de inhibición de un inhibidor de histona desacetilasa puede determinarse en un ensayo in vitro como el que se describe en el Ejemplo 1 de esta solicitud. Es posible tomar el valor de ICso como una medida de la actividad de inhibición de un inhibidor de histona desacetilasa. Un valor de IC50 bajo indica una actividad de inhibición alta; un valor de IC50 alto indica una actividad de inhibición baja. Los inhibidores de histona desacetilasa usados de acuerdo con esta invención preferiblemente tienen un valor de IC50 menor que 1 mM, más preferiblemente, menor que 500 µM, respecto de al menos una histona desacetilasa. De acuerdo con una realización preferida, el inhibidor de histona desacetilasa, o al menos un inhibidor de histona desacetilasa, es capaz de inhibir preferiblemente un subconjunto de histona desacetilasas o desacetilasas seleccionadas. El término "inhibir preferiblemente", como se lo usa en la presente documentación, hace referencia a una situación en la que un primar grupo de histona desacetilasas son inhibidas con más fuerza por un inhibidor de histona desacetilasa dado que un segundo grupo de histona desacetilasas. Comúnmente, el inhibidor de histona desacetílasa que inhibe preferiblemente un primer grupo de histona desacetilasas tiene un valor de IC50 menor que 800 µM, preferiblemente menor que 500 µM, respecto de las histona desacetilasas de dicho primer grupo. El valor de IC50 respecto de las histona desacetilasas del segundo grupo comúnmente es mayor que 800 µM, preferiblemente mayor que 1 mM. En una primera realización específica, el inhibidor de histona desacetilasa, o al menos un inhibidor de histona desacetilasa, es capaz de inhibir preferiblemente histona desacetilasas clase I. De acuerdo con esta primera realización, las histona desacetilasas clase I son inhibidas con mayor fuerza que las histona desacetilasas clase II. En esta primera realización, el inhibidor de histona desacetilasa comúnmente tiene valores de IC50 menores que 800 µM, preferiblemente menores que 500 µM, respecto de las enzimas histona desacetilasas HDAC 1, 2, 3 y 8. Además, el inhibidor de histona desacetilasa comúnmente tiene valores de IC50 mayores que 800 µM, preferiblemente de mayores que 1 mM, respecto de las enzimas HDAC clase II 4, 5, 6, 7, 9 y 10. En una segunda realización específica, el inhibidor de histona desacetilasa, o al menos un inhibidor de histona desacetilasa, es capaz de inhibir preferiblemente histona desacetilasas clase II. De acuerdo con esta segunda realización, las histona desacetilasas clase II son inhibidas con mayor fuerza que las histona desacetilasas clase I. En esta segunda realización, el inhibidor de histona desacetilasa comúnmente tiene valores de IC50 menores que 800 µM, preferiblemente menores que 500 µM, respecto de las enzimas HDAC clase II 4, 5, 6, 7, 9 y 10, mientras que los valores de IC50 respecto de las enzimas HDAC clase I 1, 2, 3 y 8 son preferiblemente mayores que 800 µM, más preferiblemente mayores que 1 mM. Los inhibidores de histona desacetilasa específicos son el ácido valproico, las sales de ácido valproico aceptables para el uso farmacéutico, los derivados de ácido valproico y las sales de éstos aceptables para el uso farmacéutico. Se prefieren el ácido valproico y sus sales aceptables para el uso farmacéutico, tales como el vaiproato de sodio. Los derivados de ácido valproico incluyen, sin limitaciones, los compuestos de fórmula I donde R1 y R2 son independientemente una cadena de hidrocarburo alifático C3.25 lineal o ramificada, saturada o no saturada, que opcionalmente comprende uno o más heteroátomos, y que puede estar sustituida, R3 es hidroxilo, halógeno, alcoxilo o un grupo amino opcionalmente alquilado. Residuos R1 y R2 diferentes dan lugar a compuestos quirales. Comúnmente, uno de los estereoisómeros tiene un efecto teratogénico más fuerte que el otro, y el isómero más teratogénico activa PPARd con mayor eficiencia. Por consiguiente, puede esperarse que este isómero inhiba las HDAC con mayor fuerza (WO 02/07722 A2). En la presente invención se incluyen las formas racémicas de los compuestos respectivos, y en particular, los isómeros más activos. Las cadenas de hidrocarburos R1 y R2 puede comprender uno o más heteroátomos (por ejemplo, O, N, S) que reemplazan los átomos de carbono en la cadena de hidrocarburo. Esto se debe al hecho de que los grupos de heteroátonos pueden adoptar estructures muy similares a las de los grupos de átomos de carbono cuando dichos heteroátomos tienen el mismo tipo de hibridízaci?n que el grupo de átomos de carbono correspondiente. R1 y R2 pueden estar sustituidos. Los sustituyentes posibles incluyen grupos hidroxilo, amino, carboxílico y alcoxilo, así como grupos arilo y heterocíclicos. Preferiblemente, R1 y R2 comprenden independientemente entre 3 y 10, entre 4 y 10, o entre 5 y 10 átomos de carbono. También se prefiere que R1 y R2, independientemente uno del otro, estén saturados o comprendan un enlace doble o un enlace triple. En particular, una de las cadenas laterales (R1) puede contener preferiblemente átomos de carbono con hibridización sp1 en la posición 2 y 3, o heteroátomos que generen una estructura similar. Esta cadena lateral debería comprender 3 átomos de carbono o heteroátomos, pero las cadenas más largas también pueden generar moléculas inhibidoras de HDAC. También, se considera que la inclusión de anillos aromáticos o heteroátomos en R2 gene compuestos con actividad de inhibición de HDAC, ya que el lado catalítico de la proteína HDAC aparentemente acomoda una variedad de moléculas de unión. Con la observación de que los derivados teratogénicos de VPA son inhibidores de HDAC, también se considera que los compuestos que han sido considerados con anterioridad como agentes antiepilépticos apropiados son inhibidores de HDAC (WO 02/07722 A2). En particular, pero no exclusivamente, se consideran los compuestos que tienen un residuo de propinilo como R1 y residuos de 7 o más carbonos como R2 (Lampen et al, 1999). Preferiblemente, el grupo "COR3" es un grupo carboxílico. También debe considerarse la derivatización del grupo carboxílico para la generación de compuestos con potencial actividad de inhibición de HDAC. Estos derivados pueden ser haluros (por ejemplo, cloruros), esteres o amidas. Cuando R3 es alcoxilo, el grupo alcoxilo comprende entre 1 y 25, preferiblemente 1-10 átomos de carbono. Cuando R3 es un grupo mono o di-alquilado, los sustituyentes alquilo comprenden entre 1 y 25, preferiblemente 1-10 átomos de carbono. En una realización, R1 y R2 son independientemente una cadena de hidrocarburo C3.25 lineal o ramificada, que opcionalmente comprende un enlace doble o triple. Un ejemplo preferido de esta realización es 4-in-VPA, o una sal de éste aceptable para el uso farmacéutico. Es posible usar otros inhibidores de histona desacetilasa en esta formulación de liberación bifásica, y éstos incluyen, sin limitaciones, derivados de ácido hidroxámico, tales como, sin limitaciones, NVP-LAQ824, tricostatina A (TSA), ácido hidroxámico de anuida de suberoil, CBHA, píroxamida, scriptaíd, CI-994, CG-1521, clamidocina, hidroxamato de biarilo, por ejemplo, A-161906, aril-N-hidroxicarboxamidas bícíclícas, PXD-101, ácido hidroxámico de sulfonamida, análogo de TPX-HA (CHAP), oxamflatina, trapoxina, depudecina, metabolitos microbianos con actividad de inhibición de HDAC, apidicina, benzamidas tales como, sin limitaciones, MS-27-275, piroxamidas y derivados de éstas, ácidos grasos de cadena corta, tales como, sin limitaciones, ácido butírico y derivados de éste, por ejemplo, pivanex (butirato de pivaloiloximetilo), tetrapéptidos cíclicos, tales como, sin limitaciones, trapoxina A, depsipéptido (FK-228) y compuestos peptídicos relacionados, tacedinalina, MG2856 e inhibidores de HDAC clase lll o inhibidores de SIRT, o compuestos que presentan especificidades de inhibición de isoenzimas HDAC. Formulación galénica, dosificación y perfil farmacocinético de vaiproato El perfil en suero óptimo para una dosificación oral b.i.d. en el estado estable se caracteriza porque permite un incremento rápido de la concentración de VPA en suero hasta niveles de entre 90 y 200 µg/ml en 30 minutos, y más preferiblemente entre 110 y 180 µg/ml. Este nivel de concentración en suero permanece constante por entre 8 y 10 horas, y luego disminuye debajo de 110 µg/ml. Sin embargo, el nivel de concentración de VPA en suero permanece constantemente sobre 80 µg/ml durante el tratamiento, más preferiblemente sobre 100 µg/ml. Los períodos de tiempo indicados hacen referencia al momento (del comienzo) de la administración oral. En el caso de formulaciones de liberación controlada para administración oral, las formas de múltiples dosificaciones individuales son superiores a las formas de dosificaciones únicas. La liberación del ingrediente activo depende del grado de relleno del estómago, y resulta en perfiles de liberación similares, aún en distintos pacientes. Además, es posible evitar el fenómeno de descarte de la dosis (J Butler et al., Pharm. Technol. 1998, 122-138). Existen diversas composiciones farmacéuticas para la administración del VPA y sus sales, incluyendo formas parenterales, soluciones orales, tabletas recubiertas con resistencia a fluidos gástricos, tabletas de liberación lenta y minitabletas. Debido a la naturaleza del VPA y la naturaleza higroscópica del vaiproato de sodio, la formulación de formas de dosificación con múltiples unidades constituye un desafío tecnológico. Es posible obtener los niveles de concentración de VPA en suero deseados pueden obtenerse con una combinación de un patrón de liberación rápida y lenta in vitro, que no puede obtenerse con las formulaciones existentes, con el fin de inhibir efectivamente las enzimas HDAC deseadas. Para el tratamiento o la prevención, por ejemplo, del cáncer u otros trastornos hiperproliferativos o inflamatorios mediante la inhibición de las histona desacetilasas, existe la necesidad de una nueva formulación farmacéutica para administración oral que provea el perfil de concentración de VPA en suero deseado. Estos requerimientos preferiblemente son satisfechos por una composición farmacéutica con un patrón de liberación bifásico de inhibidores de histona desacetilasa, por ejemplo, vaiproato de sodio. Por consiguiente, la formulación farmacéutica de acuerdo con la invención preferiblemente comprende un componente de liberación rápida y un componente de liberación lenta, comúnmente en una proporción predefinida. En una realización particular, la formulación farmacéutica consiste esencialmente en un componente de liberación rápida y un componente de liberación lenta en una proporción predefinida. La relación entre el componente de liberación rápida y el componente de liberación lenta es preferiblemente de entre 1:0.5 y 1:4, más preferiblemente entre 1:1 y 1:3. En una realización, la relación es una relación sobre una base de peso: peso. En otra realización, la relación es la relación de la cantidad de compartimientos (por ejemplo, minitabletas) en los componentes respectivos. La formulación farmacéutica preferiblemente presenta una liberación in vitro de entre 20 y 50% en 30 minutos, entre 25 y 65% en 2 horas, entre 55 y 85% en 4 horas, y entre 70 y 100% en 6 horas (USP 24, método 724, ap. 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm). La asimilación de agua de la combinación de ambos componentes es comúnmente inferior a 5% en 24 horas, cuando se la expone a 40% de humedad relativa a 25°C. El componente de liberación rápida preferiblemente presenta una liberación in vitro de al menos 90% de inhibidor de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) en 15 minutos (USP 24, método 724, ap. 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm). La asimilación de agua del componente regularmente es inferior a 5% en 24 horas, cuando se lo expone a 40% de humedad relativa a 25°C. El componente de liberación lenta preferiblemente presenta una liberación in vitro de entre 0 y 30% en 1 hora, entre 20 y 60% en 4 horas, y entre 55 y 95% en 6 horas (USP 24, método 724, ap. 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm). La asimilación de agua del componente generalmente es inferior a 5% en 24 horas, cuando se lo expone a 40% de humedad relativa a 25°C. El componente de liberación lenta comúnmente tiene un contenido de inhibidores de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) de entre 50 y 96% en peso, preferiblemente entre 70 y 95%. El componente de liberación rápida comúnmente tiene un contenido de inhibidores de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) de entre 50 y 96% en peso, preferiblemente entre 70 y 95%. Como debería administrarse una cantidad de droga elevada, se prefiere una formulación multiparticulada. Por consiguiente, en una realización, la formulación farmacéutica de la invención es una forma de dosificación con unidades múltiples que comprende compartimientos. El término "compartimiento" denota una partícula que contiene un inhibidor de histona desacetilasa. La partícula puede tener uno o más recubrimientos. El inhibidor de histona desacetilasa contenido en la partícula preferiblemente está separado del ambiente por uno o más recubrimientos. Preferiblemente, los compartimientos son microtabletas recubiertas. Los compartimientos pueden tener distintas formas, preferiblemente tienen una forma esférica o biconvexa. El tamaño máximo (por ejemplo, el diámetro) de los compartimientos individuales comúnmente es de 3 mm, preferiblemente, el tamaño de los compartimientos individuales es de entre 0.5 y 2.5 mm.

El componente de liberación rápida puede comprender compartimientos, preferiblemente, el componente de liberación rápida consiste esencialmente en compartimientos. El componente de liberación lenta puede comprender compartimientos, preferiblemente el componente de liberación lenta consiste esencialmente en compartimientos. En una realización específica, el componente de liberación rápida y el componente de liberación lenta comprenden compartimientos, preferiblemente el componente de liberación rápida y el componente de liberación lenta consisten esencialmente en compartimientos. Los compartimientos individuales del componente de liberación rápida difieren de aquellos del componente de liberación lenta. Los compartimientos individuales del componente de liberación rápida presentan una liberación muy rápida de los inhibidores de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) después de una administración oral. Pueden prepararse con técnicas comúnmente conocidas de granulación, formación de pellets o formación de tabletas. En comparación con la sustancia pura, se obtienen propiedades de manipulación superiores, debido a la higroscopicidad reducida que se obtiene usando excipientes y procesos de preparación apropiados. Por ejemplo, los componentes pueden estar recubiertos con un polímero apropiado, con el fin de obtener la higroscopicidad reducida. Los compartimientos individuales del componente de liberación lenta presentan una liberación lenta de los inhibidores de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) después de una administración oral. El tamaño máximo de los compartimientos comúnmente es de 3 mm. Pueden prepararse con técnicas comúnmente conocidas de granulación, formación de pellets o formación de tabletas. Como se mencionó previamente, se obtienen propiedades de manipulación superiores en comparación con la droga pura, debido a la higroscopicidad reducida. La higroscopicidad reducida se establece usando excipientes y procesos de preparación apropiados. Por ejemplo, los componentes pueden estar recubiertos con un polímero apropiado, con el fin de obtener la higroscopicidad reducida y el patrón de liberación lenta.

Los compartimientos pueden tener un contenido de inhibidor de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) de entre 50 y 95% en peso, preferiblemente entre 60 y 85%. En un aspecto de la invención, los compartimientos son minítabletas recubiertas. Comúnmente, las minitabletas recubiertas del componente de liberación rápida difieren de aquellas del componente de liberación lenta en su recubrimiento. En un aspecto específico, las minitabletas recubiertas comprenden al menos un inhibidor de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio), un lubricante, un polímero y un deslizante. Preferiblemente, minitabletas recubiertas consisten esencialmente en estos constituyentes. El lubricante preferiblemente es estearato de magnesio, estearato de calcio y/o ácido esteárico. Los deslizantes apropiados incluyen dióxido de silicio, dióxido de silicio metilado y/o talco. El polímero puede ser copolímero de metacrilato de amonio, etilcelulosa y/o hipromelosa.

En otro aspecto, el recubrimiento de las minitabletas recubiertas del componente de liberación rápida comprende al menos un polímero y al menos un plastificante apropiado. El polímero preferiblemente es un copolímero de metacrilato de aminoalquilo, alcohol polivinílico y/o hipromelosa. Los plastificantes apropiados incluyen Triacetina, sebacato de dibutilo, citrato de trietilo, polietilenglicol. Es posible obtener información sobre plastificantes adicionales en la literatura (por ejemplo, Lexikon der Hilfsstoffe, H.P. Fiedler, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4. Edición 1998). En aún otro aspecto, el recubrimiento de las minitabletas recubiertas del componente de liberación lenta comprende al menos un polímero y al menos un plastificante apropiado. Los polímeros apropiados son el copolímero de matacrilato de amonio y/o la etilcelulosa. Ambos componentes pueden estar presentes en una proporción predefinida en cápsulas o recipientes, para una administración en una única dosis. El contenido de inhibidores de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) en una cápsula o un recipiente para una administración en una única dosis puede variar entre 0.1 y 3 g, preferiblemente entre 0.2 y 1.5 g. El recipiente para una administración en una única dosis puede comprender saches o ampollas. Puede consistir en papel aluminio con un grosor mínimo de 9 µm, o como alternativa, papel recubierto u otros materiales con características comparables, con el fin de proporcionar una barrera suficiente contra la humedad. La cantidad óptima de un inhibidor de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) para el tratamiento se alcanza individualmente mediante la administración de la cantidad requerida de las cápsulas o los recipientes para una administración en una única dosis en cada intervalo de dosificación. La cantidad óptima de un inhibidor de histona desacetilasa (por ejemplo, vaiproato de sodio) para el tratamiento depende del peso del paciente. Además, la invención se relaciona con un método para preparar una formulación farmacéutica que presenta un perfil de liberación bifásico, que comprende combinar un componente de liberación rápida que contiene un inhibidor de histona desacetilasa con un componente de liberación lenta que contiene un inhibidor de histona desacetilasa, de modo que se obtiene una forma de dosificación de unidades múltiples que comprende compartimientos. Las diversas realizaciones descriptas en la presente documentación respecto de la formulación farmacéutica de la invención se aplican a este método mutatis mutandis. Preferiblemente, los compartimientos que contienen una única droga (por ejemplo, las minitabletas recubiertas) se preparan con técnicas de granulación, extrusión, fusión caliente, formación de pellets, formación de tabletas y recubrimiento. Ambos componentes pueden mezclarse en una proporción predefinida y colocarse en cápsulas o recipientes para una administración en una única dosis. Como alternativa, puede colocárselos en forma consecutiva en cápsulas o recipientes, para una administración en una única dosis que no requiera mezclarlos con anterioridad. El contenido de vaiproato de sodio en una única cápsula o un único recipiente para una administración en una única dosis puede variar entre 0.1 y 3 g, preferiblemente entre 0.2 y 1.5 g. Además, la invención se relaciona con el uso de una formulación farmacéutica descripta en la presente documentación para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención del cáncer de mama dependiente del receptor de estrógeno, el cáncer de mama independiente del receptor de estrógeno, el cáncer de próstata dependiente de receptores de hormonas, el cáncer de próstata independiente de receptores de hormonas, el cáncer de cerebro, el cáncer renal, el cáncer de colon, el cáncer colorrectal, el cáncer de páncreas, el cáncer de vejiga, el cáncer de esófago, el cáncer de estómago, el cáncer genitourinario, el cáncer gastrointestinal, el cáncer de útero, el cáncer de ovario, astrocitomas, los gliomas, el cáncer de piel, el carcinoma de células escamosas, el queratoacantoma, la enfermedad de Bowen, el linfoma de células T cutáneas, el melanoma, el carcinoma de células básales, la queratosis actínica; la ictiosis; el acné, el acné vulgar, los sarcomas, el sarcoma de Kaposi, el osteosarcoma, el cáncer de cabeza y cuello, el carcinoma de células pulmonares pequeñas, el carcinoma de células pulmonares no pequeñas, las leucemias, los linfomas y/u otros cánceres de células sanguíneas, el síndrome de resistencia en la tiroides, la diabetes, la talasemia, la cirrosis, las infecciones de protozoos, las artritis reumática, la espondilitis reumática, todas las formas de reumatismo, la osteoartritis, la artritis de gota, la esclerosis múltiple, la diabetes mellitus insulinodependiente, la diabetes no insulinodependiente, el asma, la rinitis, la uveítis, el lupus eritematoide, la colitis ulcerativa, el Morbus Crohn, la enfermedad intestinal inflamatoria, la diarrea crónica, la psoriasis, la dermatitis atópica, las enfermedades óseas, los trastornos fibroproliferativos, la aterosclerosis, la anemia aplástica, el síndrome de DiGeorge, la enfermedad de Graves, la epilepsia, el status epilepticus, la enfermedad de Alzheimer, la depresión, la esquizofrenia, el trastorno esquizoafectivo, la manía, la apoplejía, los síntomas psicóticos incongruentes con el humor, el trastorno bipolar, los trastornos afectivos, la meningitis, la distrofia muscular, la esclerosis múltiple, la agitación, la hipertrofia cardiaca, la falla cardiaca, la lesión por reperfusión y/o la obesidad. En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de un inhibidor de histona desacetilasa para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de uno o más de estos trastornos, donde el medicamento es una formulación farmacéutica que presenta un perfil de liberación bifásico. Las diversas realizaciones descriptas en la presente documentación respecto de la formulación farmacéutica de la invención se aplican a este uso mutatis mutandis. Aún otro aspecto de esta invención es un método para tratar uno o más de los trastornos indicados con anterioridad, que comprende administrarle a un paciente que lo necesita una cantidad efectiva de una formulación farmacéutica descripta previamente en la presente documentación. La administración de la cantidad efectiva de la formulación farmacéutica es apropiada para mejorar la condición del paciente que se desea tratar. La realización preferida descripta en la presente documentación respecto de la formulación farmacéutica de la invención se aplica a este método de tratamiento mutatis mutandis. En la presente invención se provee una formulación farmacéutica que tienen un perfil farmacocinético de liberación bifásica para la inhibición efectiva de proteínas HDAC. La formulación presenta características muy beneficiosas, sin potenciar los efectos colaterales negativos. En este caso, una liberación inicial rápida del compuesto conduce a una concentración de relevancia farmacéutica que inhibe la actividad de la HDAC celular después de la administración de la droga. La liberación lenta subsiguiente de más compuesto permite mantener la inhibición de la HDAC con niveles en suero ligeramente superiores a la dosis terapéutica por un período de tiempo extendido. Esta concentración constante sostenida del compuesto en el rango terapéutico resulta en un efecto prolongado del VPA sobre las enzimas deseadas que presentan actividad de histona desacetilasa. Este efecto puede monitorearse analizando marcadores de reemplazo, tales como la hiperacetilación de histonas en sangre periférica de pacientes tratados con VPA. Vale destacar que se sabe que el VPA inhibe preferiblemente las isoenzimas HDAC clase I (uno), en contraste con su actividad de inhibición más débil sobre las enzimas HDAC clase II (dos). Este perfil es muy deseado, ya que la inhibición de las enzimas HDAC clase II puede estar asociada con efectos colaterales cardiotóxicos (Zhang et al., Cell 2002, 110:479-488; Antos et al., JBC 2003, 278:28930-7). Por consiguiente, los niveles sostenidos de VPA en suero en concentraciones de relevancia farmacéutica conducen a una inhibición prolongada de las histona desacetilasas - en particular, de las isoenzimas clase I - que minimiza los efectos colaterales cardiotóxicos. Esta inhibición prolongada de las enzimas que presentan actividad de histona desacetilasa en pacientes con condiciones malignas y/o enfermedades basadas en el reclutamiento aberrante de histona desacetilasas, tales como trastornos hiperproliferativos o inflamatorios, mediante la aplicación de una formulación farmacéutica de los inhibidores de histona desacetilasas descriptos en esta invención, claramente constituye un abordaje novedoso para optimizar las estrategias de tratamiento o prevención para pacientes que sufren estas afecciones. Por consiguiente, se considera que el uso de una composición disponible por vía oral que combina un perfil farmacocinético de liberación rápida y lenta es muy beneficioso para la aplicación de VPA, u otros inhibidores de histona desacetilasas, en el tratamiento o la prevención de trastornos hiperprolíferativos, tales como enfermedades con tumores malignos o enfermedades inflamatorias. En otra realización de esta invención se incluyen otros tipos de aplicaciones de inhibidores de histona desacetilasas, tales como, sin limitaciones, aplicaciones intravenosas, intramusculares, subcutáneas, tópicas (incluyendo yesos), otras vías orales, nasales, intraperitoneales o basadas en supositorios (abdomino-anales), que pueden permitir crear el patrón de liberación y los niveles de concentración en suero de los inhibidores de histona desacetilasas descriptos en esta invención. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1 : VPA inhibe la actividad de enzimas HDAC recombinantes En la figura 1 se ilustra que el VPA inhibe preferiblemente las enzimas HDAC clase I relevantes para los tumores (con una IC8 de aproximadamente 200 µM; lo que presenta como ejemplo para la enzima HDAC clase I 1) y es menos activo sobre las enzimas HDAC clase II (IC50 de aproximadamente 1.1 mM, lo que presenta como ejemplo para la enzima HDAC clase II 8). Respecto de estos datos, vale destacar que los datos farmacocinéticos obtenidos en un estudio clínico de fase I reveló niveles de VPA en suero en pacientes con cáncer suficiente para inhibir exitosamente estas isoenzimas clase I relevantes. En contraste, es posible evitar los niveles requeridos para la inhibición de las enzimas HDAC clase II. Este es un perfil muy deseado, ya que se espera que la inhibición de las enzimas clase II provoque cardiotoxicidad (Zhang et al., Cell, 2002, 110: 479-488; Antos et al., JBC, 2003, 278:28930-7). Figura 2: Correlación entre los niveles de VPA en suero y la hiperacetilaci?n de las histonas En la figura 2 se ilustran los resultados de un estudio clínico de fase l/ll, en el que se usó VPA por vía intravenosa con pacientes que sufrían enfermedades malignas avanzadas. Se examinó la inducción de la hiperacetilación de las histonas (presentada como la "inducción en veces") como marcador de la eficacia del tratamiento con VPA en células de sangre periférica recolectadas de los pacientes, antes, y 6 horas, 24 horas y 48 horas después del inicio del tratamiento con VPA. Se observó una correlación clara entre los niveles pico de VPA en suero (presentados en µg/ml) y la inducción de la hiperacetilación de las histonas.

Figura 3: VPA induce la hiperacetilación de las histonas y la regulación de genes marcadores en sangre periférica de pacientes de una prueba de fase l/il En la figura 3 se ilustra un análisis de Western Blot lisados de células de sangre periférica obtenidos de dos pacientes (Pac. N° 1 y Pac. N° 2) que presentaban enfermedades malignas avanzadas, tratados con VPA por vía intravenosa, en el contexto de un estudio clínico de fase l/ll.

Se tomaron muestras de sangre antes, y 6 horas, 24 horas y 48 horas después del inicio del tratamiento. Fue posible detectar la hiperacetilación de las histonas H3 y H4, y la regulación negativa de la proteína marcadora HDAC 2 en pacientes con niveles en suero superiores a la concentración terapéutica en plasma. Figura 4: Modelo de xenoinjerto en ratones PC-3 En la figura 4 se ilustran los resultados de un modelo de xenoinjerto en ratones PC-3. 24 ratones atímicos Nu/Nu"'" recibieron una inyección de 1 x 10ß células de carcinoma de próstata PC3 en 100 µl de PBS en el flanco derecho (8 animales por grupo). Se permitió que los tumores se desarrollaran por 4 días. Los animales se trataron PBS (control), 2 x 200 mg/kg/d o 2 x 400mg/kg/d, respectivamente, desde el día 5 hasta el día 21. Los volúmenes tumorales se midieron cada 3-4 días. En este caso, nuevamente resultó evidente que era necesario administrar determinadas dosis umbrales para obtener efectos antitumorales beneficiosos (reducción tumoral >25% cuando los ratones se trataron con 400 mg/kg/d dos veces por día, mientras que no fue posible detectar ningún efecto antitumoral en los ratones tratados con 200 mg/kg/d dos veces por día). Figura 5: Hiperacetilaci?n de las histonas inducida por diversas formulaciones de VPA En la figura 5 se presenta como ejemplo el transcurso propuesto de los niveles de VPA en suero en un perfil farmacocinético de "liberación rápida" ('VPA "normal"' - A), un perfil farmacocinético de "liberación lenta" ("VPA demorado" - B), y perfil farmacocinético bifásico novedoso ("VPA PEAC C). Se analizaron lisados de células 293T, tratadas con VPA durante los períodos de tiempo indicados (en horas), que representaron los perfiles farmacocinéticos de "liberación rápida" (A), "liberación lenta" (B), o bifásicos novedosos PEAC (C), en un análisis de Western Blot, usando un anticuerpo anti-histona H3. En comparación, el uso de una formulación de "liberación rápida" o "liberación lenta", cada una por separado, fue menos efectivo respecto del grado de inducción de hiperacetilación de las histonas, en comparación con la actividad del concepto PEAC, en el que se combinaron ambas características de liberación en la formulación galena bifásica descripta en la presente documentación. Figura 6: Intervalo de tratamiento de líneas celulares Colo320DM y PC-3 En la figura 6 se ilustra un cronograma de tratamiento con VPA para líneas de células Colo320DM y PC-3. Las células se trataron con VPA 1 mM 2 veces por 8 horas, con un intervalo libre de tratamiento de 40 horas ("8 h d"), lo que representó una formulación de VPA de "liberación rápida", o se trataron dos veces por 20 horas, con un intervalo libre de tratamiento de 26 horas ("20 h d"), lo que representó una formulación de "liberación lenta", o se las trató en forma continua durante 66 horas, lo que representó los niveles en suero que podrían obtenerse usando el nuevo perfil de liberación bifásico de compuesto de acuerdo con el concepto PEAC ("continuo"). En la figura 6A se ilustran los resultados de ensayos SRB con líneas de células Colo320DM y PC-3 tratadas de acuerdo con el cronograma descripto en la figura 6A. Mientras que dos exposiciones por 8 horas ("8 h d") conducen solamente a una inhibición del crecimiento de 26% (PC3) y 27% (Colo320DM), dos exposiciones de 20 horas ("20 h d") incrementan la inhibición del crecimiento a 43% en las células PC3 y 57% en las células Colo320DM. La inhibición máxima se observa con una exposición continua a VPA, que representa los niveles terapéuticos en suero que se obtendrían usando el perfil de liberación bifásico por un período de tiempo extendido, con un 57% de inhibición en células PC3 y un 80% en células Colo320DM ("continuo"). En la figura 7 se ilustra un perfil de liberación in vitro típico de una formulación de acuerdo con la presente invención. Se preparó una formulación farmacéutica como se describe en el ejemplo 3. El perfil de liberación in vitro de la formulación se determinó de acuerdo con USP 24, método 724, aparato 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm. Tabla 1 : Concentraciones de VPA en suero para un estudio de fase l/ll con administración intravenosa de VPA Ene esta tabla se ilustran los requerimientos de nivel de concentración de VPA en suero necesarios para inhibir eficientemente las isoenzimas HDAC clase I. Con un nivel total en suero de aproximadamente 144.2 µg/ml, hay una fracción libre (es decir, sin suero unido a proteínas) de VPA que está en el rango de concentración IC50 correspondiente a la inhibición de las de enzimas clase I (aproximadamente 0.2 mM). Se observaron efectos colaterales neuronales a partir de concentraciones totales de VPA en plasma superiores a 210 µg/ml (aproximadamente 1.4 5mM). Sobre la base de estos datos se ha desarrollado la formulación galénica novedosa de VPA descripta en esta invención. Esta formulación asegura una inhibición eficiente de las enzimas HDAC clase I deseadas más relevantes, y luego induce la hiperacetilación de las histonas rápidamente y por un período prolongado, al tiempo que no se alcanzan los niveles en suero (especialmente de VPA libre) que serían necesarios para inhibir las enzimas HDAC clase II. (PM: peso molecular) EJEMPLOS Ejemplo 1 El VPA, que actúa como un inhibidor preferencial de las enzimas histona desacetilasas clase I (figura 1), induce la hiperacetilación de las histonas en sistemas celulares, así como en células de sangre periférica de pacientes (figura 3). La evidencia presentada para esta invención también se relaciona con las siguientes patentes: WO 02/07722 A2, EP 1170008; WO 03/024442 A2, EP 1293205 A1; Solicitud EP N° 03014278.0. Métodos: Ensayo de HDAC in vltro para determinar los valores de /C50." La determinación de la actividad de histona desacetilasa en proteínas HDAC recombinantes derivadas de la expresión en células de insecto High5 se basa en la desacetilación específica de un sustrato artificial (Fluor de Lys, Biomol). El recambio del sustrato puede detectarse y cuantificarse por fluorometria. La hidrólisis del sustrato se restringe al agregar un inhibidor de HDAC, lo que resulta en una menor señal fluorométrica. Es posible calcular los valores de IC50 a partir de las curvas de respuesta a la dosis. El ensayo se separa en dos pasos: en el primer paso, el sustrato (Fluor de Lys/Biomol Kl-104) es hidrolizado por las histona desacetilasas. En el paso dos, se termina la actividad de las HDAC y se activa el fluoróforo mediante la adición de un agente de revelado (Developer/Biomol Kl-105). Las proteínas recombinantes y el inhibidor de HDAC se mezclan con amortiguador de reacción (Biomol KI-143) hasta un volumen total de 25 µl por cavidad de una placa de 96 cavidades. Se agregan 25 µl de sustrato (dilución 1:100 en amortiguador de reacción) por cavidad para comenzar la reacción. Del mismo modo se trata un control negativo sin actividad de histona desacetiiasa, y un control positivo sin inhibidor de HDAC. La reacción se detiene después de 15-60 minutos, al agregar 50 µl de agente de revelado (dilución 1:20 en amortiguador de reacción). Después de otros 15 minutos de incubación a temperatura ambiente, la señal de fluorescencia es estable por 60 minutos, y puede detectarse con un lector de fluorescencia (filtro de excitación: 390 nm, filtro de emisión: 460nm). Las histona desacetilasas recombinantes pueden prepararse y purificarse como se describe en Buggy et al., Cloning and characterization of a novel human histone deacetylase, HDAC8. Biochem J. 15 de Agosto de 2000;350 Pt 1:199-205.

Modelo de xenoinjerto en ratón: 24 ratones atímicos Nu/Nu"'" (Harían) recibieron una inyección de 1 x 106 células de carcinoma de próstata PC3 en 100 µl de PBS en el flanco derecho (8 animales por grupo). Se permitió que los tumores se desarrollaran por 4 días. Los animales se trataron PBS (control) o VPA, a razón de 2 x 200 mg/kg/d o 2 x 400mg/kg/d, respectivamente, desde el día 5 hasta el día 21. Los volúmenes tumorales se midieron cada 3-4 días.

Western blot: Se obtuvieron células de sangre periférica de pacientes tratados con VPA por vía intravenosa en una prueba clínica de fase l/ll, antes, y 6 horas, 24 horas y 48 horas después del inicio del tratamiento con VPA. Se prepararon extractos de células completas mediante la lisis de las células en amortiguador RIPA más inhibidores de proteasas, con el fin de efectuar una electroforesis en gel de SDS desnaturalizante, sobre un gel de poliacrilamida desnaturalizante al 12%. Las histonas H3 y H4 acetiladas, y la proteína marcadora HDAC 2 se detectaron con análisis de Western blot, usando un anticuerpo anti-acetil histona H3 (Upstate, #06-942), un anticuerpo anti-acetil histona H4 (clon T25; solicitud de patente EP 02.021984.6) y un anticuerpo anti-HDAC 2 (SCBT, SC-7899). Para obtener una carga igual, las membranas PVDV control se colorearon con Coomassie. Resultados: En solicitudes de patentes anteriores se presentó evidencia de que era posible usar el VPA para el tratamiento de muchos tipos distintos de cánceres humanos y otros trastornos hiperproliferativos o inflamatorios, como agente único o en combinación con toda una variedad de otras terapias antitumorales, que están basadas individualmente en modos de acción marcadamente diferentes (solicitudes de patentes WO 02/07722 A2, EP 1170008; WO 03/024442 A2, EP 1293205 A1; solicitud EP N° 03014278.0). En este caso se presentan evidencias de que el VPA actúa como un inhibidor preferencial de las enzimas histona desacetilasas clase I (figura 1 ), y que es posible usarlo en pacientes para obtener concentraciones terapéuticas en suero efectivas para inducir la hiperacetilación de las histonas y la regulación de una proteína deseada, HDAC 2 (figura 3). En la figura 1 se ilustra el resultado de un ensayo in vitro en el que se examinó la especificidad de inhibición del VPA sobre las isoenzimas HDAC. Al generar curvas de respuesta a la dosis con dosis diversas de VPA sobre proteínas recombinantes purificadas a partir de células de insecto High 5, resultó evidente que el VPA inhibe preferiblemente las enzimas HDAC clase I, ya que los valores de IC50 para las HDAC 1 y 8 (ambas clase I) son 200 µM y 300 µM, respectivamente, mientras que el valor de IC50 para la HDAC 6 (clase II) es 1.1 mM. Estos datos son apoyados por los resultados obtenidos a partir de enzimas HDAC humanas aisladas en inmunoprecipitados (Góttlicher et al., EMBO J. (2001), 20:6969-78). Estos ensayos de inmunoprecipitación revelaron que los valores de IC50 de inhibición del VPA sobre las enzimas HDAC clase I (por .ejemplo HDAC 1, 2, 3 y 8) varían entre aproximadamente 100 µM y 400 µM, y sobre las enzimas clase II (por ejemplo, HDAC 5, 6 y 10), varían entre 1100 y 2800 µM. Esta inhibición preferencial de las enzimas HDAC clase I resulta un perfil muy deseado, ya que la inhibición de las enzimas HDAC clase II puede estar asociada con efectos colaterales cardiotóxicos (Zhang et al., Cell 2002, 110:479-488; Aptos et al., JBC 2003, 278:28930-7). Además, los datos in vivo obtenidos en los modelos de xenoinjertos en ratones PC-3 indican que es necesario administrar determinadas dosis umbral para obtener efectos antitumorales beneficiosos. Como puede observarse en la Figura 4, los volúmenes de los tumores PC-3 se redujeron en más de 25% cuando se trataron los ratones con 400 mg/kg/d de VPA dos veces por día, en comparación con los tumores control tratados con PBS, al tiempo que no fue posible detectar un efecto antitumoral cuando se trataron los ratones con 200 mg/kg/d de VPA dos veces por día. En la tabla 1 se presentan los niveles de VPA en suero obtenidos en pacientes tratados con VPA por vía intravenosa en una prueba de fase l/ll, donde se índica que es posible alcanzar niveles en suero efectivos para inhibir las enzimas HDAC en los pacientes. Se observaron efectos colaterales neuronales para niveles totales de VPA en suero superiores a 210 µg/ml (aproximadamente 1.45 mM). Por consiguiente, las concentraciones en suero tolerables para el uso terapéutico serán muy superiores que las dosis efectivas necesarias para inhibir las HDAC clase I (aproximadamente 0.2 mM de VPA libre, aproximadamente 1.0 mM de VPA total), pero aún serán suficientemente bajas como para no inhibir las enzimas HDAC clase II, con lo que se evitarán los efectos colaterales cardiotóxicos. Tabla 1: En las figuras 2 y 3 se presentan datos sobre los pacientes tratados con VPA por vía intravenosa en una prueba de fase l/ll. Se examinó la inducción de la hiperacetilación de las histonas como marcador de la eficacia del tratamiento con VPA en células de sangre periférica recolectadas de los pacientes, antes, y 6 horas, 24 horas y 48 horas después del inicio del tratamiento con VPA. Se observó una correlación clara entre los niveles pico de VPA en suero y la inducción de la hiperacetilación de las histonas (figura 2). Además, fue posible detectar la hiperacetilación de las histonas H3 y H4, y la regulación negativa de la proteína marcadora HDAC 2 en pacientes con niveles en suero superiores a la concentración terapéutica en plasma (figura 3). Por consiguiente, el VPA es un inhibidor de histona desacetilasas con especificidad por las isoenzimas, no solamente en sistemas celulares, sino también en una preparación terapéutica para el tratamiento o la prevención de pacientes con enfermedades de tumores con tumores malignos u otros trastornos hiperproliferativos o inflamatorios. Ejemplo 2 La inhibición máxima del VPA sobre la HDAC requiere un pico de concentración inicial, seguido por una concentración prolongada y sostenida superior al nivel terapéutico. Métodos: Western blot: Se sembraron células 293T en placas de 6 cavidades, y se las trató de acuerdo con un esquema en el que se representó un patrón de "liberación rápida" ("VPA normal"), "liberación lenta" ("VPA demorado") y bifásico ("VPA PEAC). La duración de la exposición se calculó como 6 horas, para representar la formulación normal de VPA de "liberación rápida", 15 horas, para representar la formulación de VPA demorado de "liberación lenta", y 24 horas, para representar el patrón de liberación bifásico de la formulación PEAC. Se prepararon extractos de células completas mediante la lisis de las células en amortiguador RIPA más inhibidores de proteasas, con el fin de efectuar una electroforesis en gel de SDS desnaturalizante, sobre un gel de poliacrilamida desnaturalizante al 12%. Las histonas H3 acetiladasse detectaron con análisis de Western blot, usando un anticuerpo anti-H3 acetilada (Upstate, #06-942). Ensayo de proliferación SRB: La reducción en la biomasa celular se midió con un ensayo SRB. Para este ensayo, se sembraron células en placas de cultivo de 96 cavidades, con densidades de entre 3000 y 8000 células por cavidad. Después de una recuperación de 24 horas, las células se cultivaron por 72 horas en ausencia o presencia de las concentraciones de VPA indicadas. Las células se fijaron con tricloracetato frío (TCA), para producir una concentración final de TCA de 10%. Después de 1 hora de incubación a 4°C, las células se lavaron cinco veces con agua y se secaron al aire. Las células fijadas se colorearon por 30 minutos con 0.4% (p/vol) de sulforrodamina B (SRB) disuelta en 1% de ácido acético, y se lavaron cuatro veces con ácido acético al 1% para eliminar el colorante no unido. Después de realizar un secado al aire, el colorante unido se solubilizó con base Tris no amortiguada 10 mM (pH 10.5) por 5 minutos. Las densidades ópticas (OD) se leyeron en un lector de microplacas giratorio a Molecular Devices Versa Max a 520-550 nm. Se prepararon cuatro cavidades de prueba para cada respuesta a la dosis, en paralelo con 12 cavidades control por línea celular. También se realizó la medición de la densidad poblacional en el tiempo 0 (T0; el momento en el que se agregó la droga) en 12 cavidades de referencia de células fijadas con TCA, justo antes de agregar la droga a las placas de prueba. También se determinó la OD de fondo del medio completo con 5% de FBS, fijado y coloreado como se describió con anterioridad, en 12 cavidades separadas. A partir de los datos de OD sin procesar de cada placa de microtitulación, se sustrajeron las mediciones de OD de fondo (es decir, la OD del medio completo más la coloración, y la OD de las células a T0) para obtener la reducción de la biomasa celular de las células. Resultados: Para la inhibición máxima de la actividad de la HDAC y el crecimiento celular en líneas de células cancerosas, no solamente es importante obtener las concentraciones de VPA efectivas requeridas, sino también mantener estos niveles por tanto tiempo como sea posible. En la figura 5 se demuestra de forma convincente que el grado de hiperacetilación observado en las células después de un tratamiento con VPA a concentraciones superiores a los valores de IC50 calculados para las enzimas HDAC clase I se ve fuertemente potenciada cuando se prolonga el período de exposición. La duración de la exposición se calculó como 6 horas, para representar la formulación normal de VPA de "liberación rápida", 15 horas, para representar la formulación de VPA demorado de "liberación lenta", y 24 horas, para representar el patrón de liberación bifásico de la formulación PEAC. Además, los resultados de la inhibición del crecimiento por parte del VPA obtenidos en dos líneas de células cancerosas, Colo320DM y PC3, indican que el VPA debe administrarse por períodos de tiempo prolongados, con concentraciones terapéuticas, con el fin de obtener una inhibición del crecimiento optimizada. Como puede observarse en la figura 6, las líneas celulares se expusieron a VPA 1 mM por distintos períodos de tiempo durante un período de cultivo de 72 horas, donde estos períodos variaron entre 2 exposiciones de 8 horas con un intervalo libre de tratamiento de 40 horas ("8 h d"), 2 exposiciones de 20 horas con un intervalo libre de tratamiento de 26 horas ("20 h d"), y un tratamiento continuo de 66 horas, que representó los niveles en suero que podrían obtenerse con el principio de liberación bifásica de esta invención ("continuo"). En la figura 6A se indica que la inhibición del crecimiento aumenta con una exposición prolongada al VPA, mientras que 2 exposiciones de 8 horas ("8 h d") conducen a inhibiciones de crecimiento de solamente 26% (PC3) y 27% (Colo320DM), y 2 exposiciones de 20 horas ("20 h d") incrementan la inhibición del crecimiento hasta 43% en células PC3 y 57% en células Colo320DM. La inhibición máxima se observa con una exposición continua a VPA, con 57% de inhibición en células PC3 y 80% en células Colo320DM ("continuo"). Por consiguiente, las propiedades galénicas necesarias para una formulación de VPA más apropiada para usar en una terapia contra el cáncer, autoinmune y anti-inflamatoria presenta un perfil farmacocinético bifásico específico, con el fin de inhibir las enzimas HDAC clase I deseadas de forma más eficiente, para luego inducir la hiperacetilación de las histonas de forma rápida y con una acción prolongada, y para inducir, por ejemplo, una inhibición máxima del crecimiento o una inducción de la diferenciación de las células cancerosas o de otras células características de enfermedades hiperproliferativas, tales como las células inmunes en un trastorno inmunológico. Además, este perfil también permite asegurar la modulación eficiente del gen blanco deseado, y un perfil de expresión de proteínas que contribuye con al beneficio terapéutico y es apropiado para el tratamiento o la prevención de enfermedades hiperproliferativas, premalignas y malignas, o trastornos autoinmunes e inflamatorios, donde la inhibición de las enzimas que presentan actividad de histona desacetilasa tiene un efecto terapéutico beneficioso. Estos trastornos incluyen, sin limitaciones, cáncer de mama dependiente e independiente del receptor de estrógeno, cáncer de próstata dependiente e independiente de receptores de hormonas, cáncer de cerebro, cáncer renal, colon y cáncer colorrectal, cáncer de páncreas, cáncer de vejiga, cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer genitourinario, cáncer gastrointestinal, cáncer de útero, cáncer de ovario, astrocitomas, gliomas, cáncer de piel, carcinoma de células escamosas, queratoacantoma, enfermedad de Bowen, linfoma de células T cutáneas, melanoma, carcinoma de células básales, queratosis actínica; ictiosis; acné, acné vulgar, sarcomas, tales como el sarcoma de Kaposi y el osteosarcoma, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células pulmonares pequeñas y células pulmonares no pequeñas, leucemias, linfomas y otros cánceres de la sangre, síndrome de resistencia en la tiroides, diabetes, talasemia, cirrosis, infecciones de protozoos, artritis reumática, espondilitis reumática, todas las formas de reumatismo, osteoartritis, artritis de gota, esclerosis múltiple, diabetes mellitus insulinodependiente y diabetes no insulinodependiente, asma, rinitis, uveítis, lupus eritematoide, colitis ulcerativa, Morbus Crohn, enfermedad intestinal inflamatoria, diarrea crónica, psoriasis, dermatitis atópica, enfermedades óseas, trastornos fibroproliferatívos (por ejemplo, de tejidos conectivos), aterosclerosis, anemia aplástica, síndrome de DiGeorge, enfermedad de Graves, epilepsia, status epilepticus, enfermedad de Alzheimer, depresión, esquizofrenia, trastorno esquizoafectivo, manía, apoplejía, sintomas psicóticos incongruentes con el humor, trastorno bipolar, trastornos afectivos, meningitis, distrofia muscular, esclerosis múltiple, agitación, hipertrofia cardiaca, falla cardiaca, lesión por reperfusión, obesidad. Ejemplo 3 Fabricación de composiciones farmacéuticas con el perfil de disolución deseado. 1 Fabricación de minitabletas Formulaciones (peso por minitableta): 'ausentes en el producto terminado seco Preparación de las formulaciones 1, 2, 3, 4 (tamaño del lote: 1000000 minitabletas): El componente "a" se mezcla con 40% del componente "b", 45% del componente "c" y 60% del componente "d" en una mezcladora apropiada con gran fuerza centrífuga. La mezcla resultante se granula posteriormente en un compactador con rodillo. El granulado resultante se mezcla con las cantidades residuales de los componentes "b", "c" y "d" en una mezcladora, y se le da la forma de tabletas en una máquina tableteadora rotativa con el tamaño de unidad específico, con lo que se obtienen minitabletas con el peso por tableta especificado. Preparación de las formulaciones 5, 6 (tamaño del lote: 1000000 min?' abletas): El componente "a" se mezcla con 55% del componente "b" y 45% del componente "c" en una mezcladora apropiada con gran fuerza centrífuga. La mezcla resultante se granula posteriormente con una dispersión de "d" en "e". El granulado resultante se seca y se tamiza, luego se mezcla con las cantidades residuales de los componentes "b" y "c" en una mezcladora, y se le da la forma de tabletas en una máquina tableteadora rotativa con el tamaño de unidad específico, con lo que se obtienen minitablßtas con el peso por tableta especificado.

Preparación de las formulaciones 7, 8, 9, 10 (tamaño del lote: 1000000 minitabletas): El componente "a" se mezcla con 70% del componente "b" y 45% del componente "c" en una mezcladora apropiada con gran fuerza centrífuga. La mezcla resultante se granula posteriormente con una dispersión de "d" en "e". El granulado resultante se seca y se tamiza, luego se mezcla con las cantidades residuales de los componentes "b" y "c" en una mezcladora, y se le da la forma de tabletas en una máquina tableteadora rotativa con el tamaño de unidad específico, con lo que se obtienen minitabletas con el peso por tableta especificado. 2. Fabricación de minitabletas de liberación lenta Formulaciones (peso por minitableta): Peso de la 4.200 4.200 4.200 4.200 4.200 6.700 6.700 6.700 6.700 6.700 minitableta recubierta 'ausentes en el producto terminado seco Preparación de las formulaciones 11-20 (tamaño dallóte: 1000000 minitabletas): El componente "a" se recubre con una dispersión de "b", "c", "d" y "e" en una unidad de recubrimiento apropiada. 3. Fabricación de minitabletas de liberación rápida Formulaciones (peso por minitableta): 'ausentes en el producto terminado seco Preparación de las formulaciones 21-28 (tamaño dallóte: 1000000 minitabietas): El componente "a" se recubre con una mezcla de "b", "c", "d" y V en una unidad de recubrimiento apropiada. 4. Fabricación de la forma de dosificación Formulaciones (peso por forma de dosificación): Preparación de las formulaciones 29-48: Los componentes "a" y "b" se colocan en cápsulas o en recipientes de dosis individuales. El componente "b" puede mezclarse con 0.2% de dióxido de silicio para reducir los fenómenos electrostáticos.

Claims

REIVINDICACIONES: 1. Una formulación farmacéutica que comprende (i) un componente de liberación rápida que comprende compartimientos que contienen al menos un inhibidor de histona desacetilasa, y (ii) un componente de liberación lenta que comprende compartimientos que contienen al menos un inhibidor de histona desacetilasa, donde los compartimientos del componente de liberación rápida difieren de los compartimientos del componente de liberación lenta.
2. Una formulación farmacéutica que comprende ai menos un inhibidor de histona desacetilasa, donde entre 10 y 60% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 30 minutos, y entre 50 y 100% del inhibidor de histona desacetilasa en la formulación es liberado en 6 horas, lo que se determina de acuerdo con USP 24, método 724, aparato 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm.
3. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, donde al menos un inhibidor de histona desacetilasa es capaz de inhibir preferiblemente histona desacetilasas seleccionadas.
4. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3, donde las histona desacetilasas seleccionadas son histona desacetilasas clase I.
5. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3, donde las histona desacetilasas seleccionadas son histona desacetilasas clase II.
6. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde al menos un inhibidor de histona desacetilasa es un compuesto de fórmula I COR3 I R1 R2 donde R1 y R2 son independientemente una cadena de hidrocarburo alífático C3.25 lineal o ramificada, saturada o no saturada, que opcionalmente comprende uno o más heteroátomos, y que puede estar sustituida, R3 es hidroxilo, halógeno, alcoxilo o un grupo amino opcionalmente alquilado, o una sal de éste aceptable para el uso farmacéutico.
7. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, donde R1 y R2 son independientemente una cadena de hidrocarburo C3.2s lineal o ramificada que opcionalmente comprende un enlace doble o triple.
8. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, donde al menos un inhibidor de histona desacetilasa es 4-in-VPA, o una sal de éste aceptable para el uso farmacéutico.
9. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, donde al menos un inhibidor de histona desacetilasa es ácido valproico, o una sal de éste aceptable para el uso farmacéutico.
10. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, donde al menos un inhibidor de histona desacetilasa es vaiproato de sodio.
11. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde al menos un inhibidor de histona desacetilasa se selecciona del grupo que consiste en derivados de ácido hidroxámico, benzamidas, piroxamidas y derivados de éstas, metabolitos microbianos que presentan actividad de inhibición de HDAC, ácidos grasos y derivados de éstos, tetrapéptidos cíclicos, compuestos peptídicos, inhibidores de HDAC clase lll e inhibidores de SIRT.
12. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 11, donde el inhibidor de histona desacetilasa se selecciona del grupo que consiste en NVP-LAQ824, tricostatina A (TSA), ácido hidroxámico de anuida de suberoil, CBHA, piroxamida, scriptaid, CI-994, CG-1521, clamidocina, hidroxamato de biarilo, A-161906, aril-N-hidroxicarboxamidas bicíclicas, PXD-101 , ácido hidroxámíco de sulfonamida, análogo de TPX-HA (CHAP), oxamflatína, trapoxina, depudecina, apidicina, MS-27-275, piroxamidas y derivados de éstas, ácidos grasos de cadena corta, tales como, ácido butírico y derivados de éste, pivanex (butirato de pivaloiloximetilo), trapoxina A, depsipéptido (FK-228) y compuestos peptídicos relacionados, tacedinalina y MG2856.
13. Una formulación farmacéutica de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 12, para una administración intraveneosa, intramuscular, subcutánea, tópica, oral, nasal, intraperitoneal o basada en supositorios.
14. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 13, donde la relación en peso entre el componente de liberación rápida y el componente de liberación lenta es de entre 1:0.5 y 1:4.
15. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, que presenta una liberación in vítro de entre 20 y 50% en 30 minutos, entre 25 y 65% en 2 horas, entre 55 y 85% en 4 horas, y entre 70 y 100% en 6 horas, lo que se determina de acuerdo con USP 24, método 724, aparato 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm.
16. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 15, donde el componente de liberación rápida presenta una liberación in vitro de al menos 90% de vaiproato de sodio en 15 minutos, y el componente de liberación lenta presenta una liberación in vítro de entre 0 y 30% en 1 hora, entre 20 y 60% en 4 horas, y entre 55 y 95% en 6 horas, lo que se determina de acuerdo con USP 24, método 724, aparato 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm.
17. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 16, donde los componentes de liberación lenta tienen un contenido de inhibidor de histona desacetilasa de entre 50 y 96% en peso, y los componentes de liberación rápida tienen un contenido de inhibidor de histona desacetilasa de entre 50 y 96% en peso.
18. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, que es una forma de dosificación con múltiples unidades que comprende compartimientos, donde el tamaño máximo de cada compartimiento individual es de 3 mm.
19. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 18, donde el tamaño de los compartimientos individuales es de entre 0.5 y 2.5 mm.
20. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, que comprende entre 0.1 y 3 g de inhibidor de histona desacetilasa.
21. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 20, donde el componente de liberación rápida comprende minitabletas recubiertas, y el componente de liberación lenta comprende minitabletas recubiertas.
22. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 21, donde las minitabletas recubiertas comprenden vaiproato de sodio, un lubricante, un polímero y un deslizante.
23. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 22, donde el lubricante es estearato de magnesio, estearato de calcio o ácido esteárico.
24. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 22 ó 23, donde el deslizante es dióxido de silicio, dióxido de silicio metilado o talco.
25. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, donde el polímero es copolímero de metacrilato de amonio, etilcelulosa o hipromelosa.
26. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 25, donde el recubrimiento de las minítabletas recubiertas del componente liberación rápida comprende al menos un polímero y al menos un plastificante apropiado.
27. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 26, donde el polímero es copolímero de metacrilato de aminoalquilo, alcohol polivinílico o hipromelosa.
28. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 27, donde el recubrimiento de las minitabletas recubiertas del componente de liberación lenta comprende al menos un polímero y al menos un plastificante apropiado.
29. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 28, donde el polímero es copolimero de metacrilato de amonio o etilcelulosa.
30. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, que es una formulación farmacéutica disponible por via oral.
31. Una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30, donde el perfil de liberación se determina de acuerdo con USP 24, método 724, aparato 2, en 900 ml de un amortiguador a pH 6.8, USP a 100 rpm.
32. El uso de una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención del cáncer de mama dependiente del receptor de estrógeno, el cáncer de mama independiente del receptor de estrógeno, el cáncer de próstata dependiente de receptores de hormonas, el cáncer de próstata independiente de receptores de hormonas, el cáncer de cerebro, el cáncer renal, el cáncer de colon, el cáncer colorrectal, el cáncer de páncreas, el cáncer de vejiga, el cáncer de esófago, el cáncer de estómago, el cáncer genitourinario, el cáncer gastrointestinal, el cáncer de útero, el cáncer de ovario, astrocitomas, los gliomas, el cáncer de piel, el carcinoma de células escamosas, el queratoacantoma, la enfermedad de Bowen, el linfoma de células T cutáneas, el melanoma, el carcinoma de células básales, la queratosis actínica; la ictiosis; el acné, el acné vulgar, los sarcomas, el sarcoma de Kaposi, el osteosarcoma, el cáncer de cabeza y cuello, el carcinoma de células pulmonares pequeñas, el carcinoma de células pulmonares no pequeñas, las leucemias, los linfomas y/u otros cánceres de células sanguíneas, el síndrome de resistencia en la tiroides, la diabetes, la talasemia, la cirrosis, las infecciones de protozoos, las artritis reumática, la espondilitis reumática, todas las formas de reumatismo, la osteoartritis, la artritis de gota, la esclerosis múltiple, la diabetes mellitus insulinodependiente, la diabetes no insulinodependiente, el asma, la rinitis, la uveítis, el lupus eritematoide, la colitis ulcerativa, el Morbus Crohn, la enfermedad intestinal inflamatoria, la diarrea crónica, la psoriasis, la dermatitis atópica, las enfermedades óseas, los trastornos fibroproliferativos, la aterosclerosis, la anemia aplástica, el síndrome de DiGeorge, la enfermedad de Graves, la epilepsia, el status epilepticus, la enfermedad de Alzheimer, la depresión, la esquizofrenia, el trastorno esquizoafectivo, la manía, la apoplejía, los síntomas psicóticos incongruentes con el humor, el trastorno bipolar, los trastornos afectivos, la meningitis, la distrofia muscular, la esclerosis múltiple, la agitación, la hipertrofia cardiaca, la falla cardiaca, la lesión por reperfusión y/o la obesidad.
33. El uso de un inhibidor de histona desacetilasa para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención del cáncer de mama dependiente del receptor de estrógeno, el cáncer de mama independiente del receptor de estrógeno, el cáncer de próstata dependiente de receptores de hormonas, el cáncer de próstata independiente de receptores de hormonas, el cáncer de cerebro, el cáncer renal, el cáncer de colon, el cáncer colorrectal, el cáncer de páncreas, el cáncer de vejiga, el cáncer de esófago, el cáncer de estómago, el cáncer genitourinario, el cáncer gastrointestinal, el cáncer de útero, el cáncer de ovario, astrocitomas, los gliomas, el cáncer de piel, el carcinoma de células escamosas, el queratoacantoma, la enfermedad de Bowen, el linfoma de células T cutáneas, el melanoma, el carcinoma de células básales, la queratosis actínica; la ictiosis; el acné, el acné vulgar, los sarcomas, el sarcoma de Kaposi, el osteosarcoma, el cáncer de cabeza y cuello, el carcinoma de células pulmonares pequeñas, el carcinoma de células pulmonares no pequeñas, las leucemias, los linfomas y/u otros cánceres de células sanguíneas, el síndrome de resistencia en la tiroides, la diabetes, la talasemia, la cirrosis, las infecciones de protozoos, las artritis reumática, la espondilitis reumática, todas las formas de reumatismo, la osteoartritis, la artritis de gota, la esclerosis múltiple, la diabetes mellitus insulinodependiente, la diabetes no insulinodependiente, el asma, la rinitis, la uveitis, el lupus eritematoide, la colitis ulcerativa, el Morbus Crohn, la enfermedad intestinal inflamatoria, la diarrea crónica, la psoriasis, la dermatitis atópica, las enfermedades óseas, los trastornos fibroproliferativos, la aterosclerosis, la anemia aplástica, el síndrome de DiGeorge, la enfermedad de Graves, la epilepsia, el status epilepticus, la enfermedad de Alzheimer, la depresión, la esquizofrenia, el trastorno esquizoafectivo, la manía, la apoplejía, los síntomas psicóticos incongruentes con el humor, el trastorno bipolar, los trastornos afectivos, la meningitis, la distrofia muscular, la esclerosis múltiple, la agitación, la hipertrofia cardiaca, la falla cardiaca, la lesión por reperfusión y/o la obesidad, donde el medicamento es una formulación farmacéutica que presenta un perfil de liberación bifásico.
34. El uso de acuerdo con la reivindicación 33, donde la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31.
35. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 32 a 34, donde el medicamento se administra a través de una aplicación intravenosa, intramuscular, subcutánea, tópica, oral, nasal, intraperitoneal o basada en supositorios.
36. Un método para preparar una formulación farmacéutica que presenta un perfil de liberación bifásico, que comprende combinar un componente de liberación rápida que contiene un inhibidor de histona desacetilasa con un componente de liberación lenta que contiene un inhibidor de histona desacetílasa, de modo que se obtiene una forma de dosificación con múltiples unidades que comprende compartimientos.
37. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, donde los compartimientos que contienen una única droga se preparan con técnicas de granulación, extrusión, fusión caliente, formación de pellets, formación de tabletas y recubrimiento.
38. Un método de acuerdo con la reivindicación 36 ó 37, donde los componentes de liberación rápida y los componentes de liberación lenta se mezclan en una proporción predefinida, y se colocan en cápsulas o recipientes para una administración en una única dosis.
39. Un método de acuerdo con la reivindicación 36 ó 37, donde los componentes de liberación rápida y lenta se colocan sucesivamente en cápsulas o recipientes para una administración en una única dosis, sin mezclarlos con anterioridad.