de suero o plasma. Entre estos agentes, los inhibidores de reductasa de HMG-CoA, una enzima de limitación de régimen en la trayectoria biosintética de colesterol, se han desarrollado para reducir la concentración de lipoproteinas o lipidos en suero. Los inhibidores de reductasa de HMG-CoA de ejemplo son: mevastatina (Patente de E.U.A.. No. 3,983,140), lovastatina también llamada mevinolina (Patente de E.U.A. No. 4,231, 938), pravastatina (Patentes de E.U.A. Nos. 4,346,227 y 4,410,629), lactona de pravastatina (Patente de E.U.A. No. 4,448,979), velostatina y simvastatina, también llamada como sinvinolina (Patentes de E.U.A. Nos. 4,448,784 y 4,450,171), rivastatina, fluvastatina, atorvastatina y cerivastatina. Los inhibidores de reductasa de HMG-CoA se han usado ampliamente para tratar hiperlipidemia durante varias décadas para reducir la concentración in vivo total de colesterol y LDL-colesterol (Grundi, S.M., y col., N. Engl. J. Med. 319(1): 24-32, 25-26 y 31, 1998). La síntesis de mevalonato mediante la acción de HMG-CoA es una etapa temprana en la trayectoria biosintética de colesterol, y el inhibidor de reductasa de HMG-CoA reduce la concentración total de colesterol y LDL-colesterol en suero inhibiendo la síntesis de mevalonato (Grundi, S.M., y col., N. Engl. J. Med. 319(1): 24-32, 25-26 y 31, 1998). Sin embargo, la mayoría de dichos inhibidores de reductasa de HMG-CoA se administran en la forma de formulaciones de liberación rápida, que ocasiona efectos laterales tales como hepatoxrcidad, desorden muscular y rabdomiolisis (Garnet, W.R., y col./ Am. J. Cardio. 78: 20-25, 1996; El grupo de estudio de lovastatina pravastatina, Am. J. Cardiol. 71: 810-815, 1993; Duzovne, C.A., y col., Am. J. Med. 91: 25S-30S, 1991; y Mantel, G.M., y col., am. J. Cardiol. 66: 11B-15B, 1990). Consecuentemente, ha habido la necesidad de desarrollar una formulación de liberación sostenida del inhibidor de reductasa de HMG-CoA para prevenir o aliviar los efectos laterales inducidos por la liberación rápida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA. Muchos estudios sobre la formulación de liberación sostenida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA han sugerido que la mayoría de los inhibidores de reductasa de HMG-CoA absorbidos en el cuerpo se metabolizan en el hígado (85% y más) mientras que solamente 5% o menos se cuentan para aquellos transferidos al sistema de circulación sistémico. De esta manera, la biodisponibilidad del inhibidor de reductasa de HMG-CoA al sistema de circulación sistémico es baja. Asimismo, ya que el inhibidor de reductasa de HMG-CoA ejerce su actividad enzimática principalmente en el hígado, es importante entender las farmacocinéticas en el hígado asi como su biodisponibilidad. La formulación de liberación rápida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA muestra las farmacocinéticas no lineales dependientes de dosis, pero no puede mantener su efecto terapéutico durante un tiempo prolongado debido a la media vida de liberación prolongada ocasionada por el fenómeno de saturación (capacidad limitada) presente durante un metabolismo hepático. Sin embargo, cuando se administra la formulación de liberación sostenida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA, aún cuando la concentración de sangre de inhibidor de reductasa de HMG-CoA puede ser inferior que aquel de la formulación de liberación rápida debida al metabolismo hepático, no hay ocurrencia de saturación debida a su baja concentración de sangre. De conformidad con los últimos estudios, se ha reportado que la formulación de liberación sostenida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA muestra biodisponibilidad igual o ligeramente inferior que la formulación de liberación rápida en ambos tipos ácido y de lactona. Sin embargo, su eficiencia de entrega de droga a su sitio de meta se muestra que es superior a aquella de la formulación de liberación rápida (John R, Amer. J. Cardio. 89: 15, 2002) . Consecuentemente, la formulación de liberación sostenida es capaz de reducir más efectivamente el nivel de LDL-colesterol en sangre que la formulación de liberación rápida (Monique P, am. J. Drug. Deliv. 1(4): 287-290, 2003) . La presente invención, por lo tanto, han tratado de resolver los problemas de la formulación de liberación rápida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA previamente reportado y desarrollaron una nueva formulación de liberación sostenida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA que tiene una biodisponibilidad mejorada con efectos laterales mínimos manteniendo la cantidad de inhibidor de reductasa de HMG-CoA a un nivel constante en la sangre a través de un mecanismo de liberación lenta y uniforme del mismo. Compendio de la Invención. Consecuentemente, un objeto de la presente invención es proporcionar una formulación de liberación sostenida para administración oral de un inhibidor de reductasa de HMG-CoA para tratar hiperlipidemia que es capaz de liberar lentamente el inhibidor de reductasa de HMG-CoA a un régimen uniforme durante un tiempo prolongado. Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método para la preparación de dicha formulación. De conformidad con un aspecto de la presente invención, se proporciona una formulación de liberación sostenida para administración oral de un inhibidor de reductasa de HMG-CoA que comprende un dispersante sólido que contiene el inhibidor de reductasa de HMG-CoA, un agente de solubilización y un agente de estabilización; un portador compuesto de liberación sostenida; y un acelerador de hidratación de gel. De conformidad con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para preparar la formulación de liberación sostenida para administración oral del inhibidor de reductasa de HMG-CoA, que comprende los pasos de: (1) mezclar el inhibidor de reductasa de HMG-CoA, el agente de solubilización, y el agente de estabilización en un solvente para obtener el dispersante sólido; (2) mezclar homogéneamente el portador de compuesto de liberación sostenida y el acelerador de hidratación de gel con el dispersante sólido para formar una primera mezcla; (3) añadir cuando menos un aditivo farmacéuticamente aceptable a la primera mezcla para formar una segunda mezcla; y (4) mezclar con secado y formular la segunda mezcla hacia una formulación sólida. Breve Descripción de los Dibujos Los anteriores y otros objetos y particularidades de la presente invención se harán evidentes a partir de la siguiente descripción de la invención, cuando se tome en conjunción con los dibujos que se acompañan, que muestran respectivamente : La Figura 1 muestra un diagrama que compara solubilidades de los dispersantes sólidos preparados en los
Ejemplos 1 a 3; La Figura 2 ilustra gráficas que representan regimenes de elució de las formulaciones de liberación sostenida preparadas en el Ejemplo 4, las gráficas estando mostradas para cada velocidad de rotación; La Figura 3 presenta un diagrama que comprende regimenes de elución de las formulaciones de liberación sostenida preparadas en los Ejemplos 4 a 6, dependiendo de la cantidad de goma de xantano; La Figura 4 ilustra un diagrama que compara regimenes de elución de las formulaciones de liberación sostenida preparadas en los Ejemplos 7 a 9, dependiendo de la cantidad de HPMC 2208; La Figura 5 ofrece un diagrama que presenta el cambio en nivel de simvastatina en sangre después de administración oral de la formulación de liberación sostenida preparada en el Ejemplo 5; La Figura 6 ilustra un diagrama que representa patrones de distribución y de excreción de simvastatina hacia el jugo biliar después de administración oral de la formulación de liberación sostenida preparada en el Ejemplo 5. Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona una formulación de liberación sostenida para administración oral de un inhibidor de reductasa de HMG-CoA que comprende un dispersante sólido que contiene el inhibidor de reductasa de HMG-CoA, un agente de solubilización y un agente de estabilización; un portador de compuesto de liberación sostenida; y un acelerador de hidratación de gel. La formulación de liberación sostenida de la presente invención se puede preparar por los siguientes pasos : 1) mezclar el inhibidor de reductasa de HMG-CoA, el agente de solubilización/ y el agente de estabilización en un solvente para obtener el dispersante sólido; 2) mezclar homogéneamente el portador de compuesto de liberación sostenida y el acelerador de hidratación de gel con el dispersante sólido para formar una primera mezcla; 3) añadir cuando menos un aditivo farmacéuticamente aceptable a la primera mezcla para formar una segunda mezcla; y 4) mezclar en seco y formular la segunda mezcla hacia una formulación sólida.
Puesto que la formulación de liberación sostenida para administración oral de la presente invención libera lentamente el inhibidor de reductasa de HMG-CoA hacia la sangre a un régimen uniforme, es capaz de mantener un nivel de droga constante en sangre. Consecuentemente, la formulación de liberación sostenida para administración oral se puede usar efectivamente para prevenir y tratar la hiperlipídemia y arterioesclerosis administrando oralmente una vez al día en una sola dosis. A continuación, los componentes de la formulación de liberación sostenida de la presente invención se describen con detalle como sigue: (i) Ingrediente farmacológicamente activo El inhibidor de reductasa de HMG-CoA es una droga usada para tratar hiperlipídemia y arterioesclerosis reduciendo la lipoproteína o nivel de lipido en la sangre. Los ejemplos representativos de la misma pueden incluir mevastatina (Patente de E.U.A. No. 3,983,140), lovastatina (Patente de E.U.A. No. 4,231,938), pravastatina (Patentes de. E.Ü.A. Nos. 4,346,227 y 4,410,629), lactona de pravastatina (Patente de E.U.A. No. 4,448,979), velostatina, simvastatina (Patentes de E.Ü.A. Nos. 4,448,784 y 4,450,171), rivastatina, fluvastatina, atorvastatina, cerivastatina, y una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas. Entre los inhibidores de reductasa de HMG-CoA arriba mencionados, la simvastatina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma se prefiere. (ii) Agente de solubilización Puesto que la biodisponibilidad de la droga poco soluble en agua se disminuye en proporción con la disminución en su solubilidad, el estudio para solubilizar la droga y aumentar su solubilidad es esencial para desarrollar una formulación de liberación sostenida de una droga poco soluble en agua. Puesto que la mayoría de los inhibidores de reductasa de HMG-CoA son compuestos poco solubles en agua, el agente de solubilización sirve para aumentar la solubilidad de la droga en la presente invención. Ejemplos representativas del agente de solubilización pueden incluir TPGS de vitamina E (succinato de polietilenglícol 1000 d-a-tocoferilo: Eastman), éster de ácido polioxietileno esterárico (v.gr., Myrj : ICI), polietilenglicol, copolímero de bloque de polioxipropileno-polioxipropileno (v.gr., Poloxamero: BASF) y lo semejante. La formulación de liberación sostenida de la presente invención comprende el agente de solubilización en una cantidad que varia de 0.05 a 20 partes en peso, de preferencia 0.1 a 10 partes en peso basada en 1 parte en peso de un ingrediente farmacológicamente activo. (iii) Agente de estabilización El agente de estabilización para uso en la presente invención puede ser cualquiera de los agentes de estabilización convencionales, que impide que una droga se oxide. Los agentes de estabilización de ejemplo son hidroxi tolueno butilado (BH ), hidroxi anisol butilado (BHA) , ácido eritórbico, ácido ascórbico y los semejantes. La formulación de liberación sostenida inventiva de la presente invención comprende el agente de estabilización en una cantidad que varia de 0.01 a 0.5 parte en peso, de preferencia 0.02 a 0.1 parte en peso basada en 1 parte en peso de un ingrediente farmacológicamente activo. La presente invención prepara el dispersante sólido que tiene una solubilidad mejorada mezclando el ingrediente farmacológicamente activo, el agente de solubilización y el agente de estabilización de conformidad con un método convencional tal como un método de secado por aspersión, un método de evaporación de solvente, un método de humectación pulverizando finamente, un método de fusión y un método de secado por congelación. En caso de formulación a través del método de secado por aspersión, el dispersante sólido de la presente invención puede comprender además un portador de solubilización farmacéuticamente aceptable. El portador de solubilización farmacéuticamente aceptable hace al dispersante sólido con tamaños de partícula menores homogéneamente distribuidos para mejorar la solubilidad de los mismos. Los ejemplos representativos del portador de solubilización pueden incluir almidón y un derivado del mismo (v.gr., dextrina, almidón de carboximetilo) celulosa y un derivado de la misma (metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa) ; sacáridos (lactosa, azúcar, glucosa); acido silícico y silicatos (ácido silícico de aluminio natural, ácido silícico de magnesio); carbonato (carbonato de calcio, carbonato de magnesio, carbonato de hidrógeno de sodio) ; derivado de polioxietileno; monoestearato de glicerina y lo semejante. (ív) Portador de compuesto de liberación sostenida En la presente invención, el portador de compuesto de liberación sostenida sirvió para formar un hidrogel es de preferencia una mezcla de alginato de sodio (Klentone(R) HVCR, Keltone(R) LVF, Kelcosol(R), elset(R): ISP, USA) y goma de xantano (Keltrol(R) F; Kelco<R!, EUA) , y la mezcla puede comprender además goma de frijol de algarroba (CesagumR) LN1, LR 200; Cesalpinia, Italia) . Generalmente, los efectos de los componentes son como sigue: el alginato de sodio suprime la ocurrencia de un efecto de estallido inicial; la goma de xantano contribuye a la fijación de configuración, que reduce al mínimo la diferencia en regímenes de elución debidos a fuerza física tales como movilidad gastrointestinal; y la goma de frijol de algarroba puede fijar más fuertemente la configuración en combinación con la goma de xantano. Si los ingredientes portadores arriba mencionados se usan en la mezcla a una cierta relación mezclada, el efecto de estallido inicial y la diferencia en regímenes de elución debida a la fuerza física se pueden reducir. En la formulación de liberación sostenida de la presente invención, el portador de compuesto de liberación sostenida se puede usar en una cantidad que varía de 3 a 30 partes en peso, de preferencia 5 a 25 partes en peso basada en .1 parte en peso de un ingrediente farmacológicamente activo. En caso de usar la mezcla de alginato de sodio y goma de xantano como el portador de compuesto de liberación sostenida, la goma de xantano se usa en una cantidad que varía de 0.1 a 10 partes en peso, de preferencia 3 a 6 partes en peso basada en 1 parte en peso del alginato de sodio. Además, en caso de usar la mezcla de alginato de sodio, goma de xantano y goma de frijol de algarroba como el portador de compuesto de liberación sostenida, la goma de xantano se usa en una cantidad que varía de 0.2 a 10 partes en peso, de preferencia 3 a 6 partes en peso, y la goma de frijol de algarroba se usa en una cantidad que varía de 0.1 a 5 partes en peso, de preferencia 0.5 a 5 partes en peso basada en 1 parte en peso del alginato de sodio. (v) Acelerador de hidratación de gel El acelerador de hidratación de gel utilizado en la presente invención juega un papel clave al formar un núcleo gelado homogéneo sencillo sin formar un núcleo no gelado. Cuando la formulación de liberación sostenida de la presente invención se lleva a contacto con medio acuoso in vivo, el acelerador de hidratación de gel induce su hidratación rápida e infiltra agua hacia un núcleo interno de la formulación de una forma igual y rápida. En la presente invención, el acelerador de hidratación de gel es de preferencia una mezcla de alginato de éster de propilenglicol e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) . En la mezcla anterior, es preferible que HPMC tenga una viscosidad que varia de 4,000. a 100,000 cps, y el alginato de éster de propilenglicol se usa en una cantidad que varia de 0.05 a 20 partes en peso, de preferencia 0.1 a 10 partes en peso basada en 1 parte en peso de HPMC. En la formulación de liberación sostenida de la presente invención, el acelerador de hidratación de gel se usa en una cantidad que varia de 0.1 a 20 partes en peso, de preferencia, 0.5 a 15 partes en peso basada en 1 parte en peso de un ingrediente farmacológicamente activo. Además, la formulación de liberación sostenida de la presente invención puede comprender además cuando menos un aditivo farmacéuticamente aceptable para preparar una formulación sólida para administración oral. Los ejemplos representativos del aditivo farmacéuticamente aceptable son un aglutinante/ un agente de lubricación, un agente edulcorante, un excipiente y lo semejante. El aglutinante para uso en la preparación de la formulación sólida puede ser cualquiera de los aglutinantes farmacéuticamente aceptables tales como polivinilpirrolidona (PVP), gelatina, hidroxipropilcelulosa, kofovidona (Kollidon VA64: BASF, Alemania) y los semejantes. El agente de lubricación para uso en la presente invención puede ser cualquiera de los agentes lubricantes farmacéuticamente aceptables, que aumenta la fluidez. Los ejemplos representativos del mismo pueden incluir ácido silícico anhidro ligero, sal de estearato de zinc o magnesio, y lo semejante. Además, la presente invención proporciona un método para preparar la formulación de liberación sostenida para administración oral del inhibidor de reductasa de HMG-CoA. ' El método de la presente invención comprende los siguientes pasos: (1) mezclar el inhibidor de reductasa de HMG-CoA, el agente de solubilización, y el agente de estabilización en un solvente para obtener el dispersante sólido; > (2) mezclar homogéneamente el portador de compuesto de liberación sostenida y el acelerador de hidratación de gel con el dispersante sólido para formar una primera mezcla; (3) añadir cuando menos un aditivo farmacéuticamente aceptable a la primera mezcla para formar una segunda mezcla; y (4) mezclar en seco y formular la segunda mezcla hacia una formulación sólida. Adicionalmente, el método de la presente invención puede comprender además el paso de revestir la superficie de la formulación sólida preparada en el paso (4) con cualquiera de los agentes de revestimiento farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos representativos del agente de revestimiento pueden incluir hidroxipropilmetilcelulosa, polietilenglicol, alcohol de polivinilo y lo semejante. En el paso (1), el dispersante sólido se puede preparar mediante un método convencional tal como un método de secado por aspersión, .un método de evaporación de solvente, un método de humectación de pulverización finamente, un método de fusión y un método de secado por congelación, y es preferible tener un tamaño de partícula que varía de 5 a 200 um de diámetro. El solvente usado para disolver el inhibidor de reductasa de HMG-CoA, el agente de solubilización, y el agente de estabilización es de preferencia agua, etanol o cloruro de metileno. La mezcla seca obtenida en el paso 4) se puede formular hacia cápsulas suaves y duras de conformidad con los procedimientos convencionales . En una modalidad preferida de la presente invención, la segunda mezcla del paso (4) puede ser comprimida hacia una tableta de conformidad con un método de formación de tableta directo o formularse hacia una tableta después de comprimir y pulverizar. Una dosis diaria típica de la formulación de liberación sostenida para administración oral del inhibidor de reductasa de HMG-CoA puede estar en la forma de una sola dosis o en dosis divididas . Los siguientes Ejemplos se pretenden para ilustrar adicionalmente la presente invención sin limitar su alcance. Ejemplos 1 a 3: Preparación de dispersantes sólidos Simvastatina (Hanmi Fine Chemical Co., Ltd.,
Corea) , vitamina E TPGS (Eastman, EUA) , BHT (UENO Fine Chemical, EUA) y HPMC 2910 (Shin-Etsu, Japón) se disolvieron en etanol de conformidad con la siguiente cantidad como se describe en el Cuadro 1 (Ejemplos 1 a 3; grupos experimentales), y cada una de las mezclas resultantes se sometió a secado por aspersión, para obtener un dispersante sólido que tiene un tamaño de partícula promedio de 100 um e inferior. Como un grupo comparativo, el dispersante sólido se preparó mezclando solamente simvastatina y HPMC 2910 en etanol (Ejemplo Comparativo 1) .
<Cuadro 1> Composición Simvastatina Vitamina E BHT HPMC 2910 (mg/disper- TPGS sante) Ejemplo Com parativo 1 40 X 100
Ejemplo 1 40 80 2 100
Ejemplo 2 40 40 2 100
Ejemplo 3 40 40 2 50 Ejemplo 1. Luego, cada uno de los dispersantes sólidos se mezcló con alginato de sodio (ISP, EUA) , goma de xantano ( elco, EUA), goma de frijol de algarroba (Cesalpinia, Italia) , alginato- de éster de propilenglicol (ISP, EUA) , HPMC 2208 (Shin-Etsu, Japón) y kofovidona (BASF, Alemania) durante alrededor de 30 minutos. Polvos de estearato de magnesio y ácido silícico anhidro ligero (más finos que malla 40) se añadieron a la mezcla, y se mezclaron durante 5 minutos. La mezcla resultante se moldeó hacia una masa usando un ensamblador de configuración, y la masa se trituró hacia partículas que tienen un tamaño de malla que varia de 20 a 80. Las partículas luego se formularon hacia una tableta mediante compresión convencional en un formulador. A continuación, las formulaciones de liberación sostenida para administración oral de los Ejemplos 5 a 12 se prepararon de conformidad con el mismo método como se describe arriba. La cantidad de cada ingrediente se muestra en los Cuadros 2 a 4. En este momento, el HPMC 2208 usado en todos los Ejemplos tuvo una viscosidad de 100, 000 cps, y los Ejemplos 11 y 12 usaron lovastatina y fluvastatina como un ingrediente farmacológicamente activo en lugar se usar simvastatina, respectivamente , <Cuadro 2> Componente Ejem. E em. Ejem. Ejem. Ejem. E em. Ejem.
(mg/tableta) 4 5 6 7 8 9 10
Simvastatina 40 40 40 40 40 40 40
Vitamina E TPGS 40 40 40 40 40 40 0
Myrj 0 0 0 0 0 0 40
HPMC 2910 50 50 50 50 50 50 50
Alginato de sodio 36 36 36 36 , 36 36 36
Goma de xantano 100 120 160 160 160 160 120
Goma de fri- jol de algarroba 60 60 60 60 60 60 60
Propileno 36 36 36 36 36 36 36
Alginato de éster de glicol HPMC 2208 160 160 160 40 80 120 160
Kofo idona 35 35 35 35 35 35 35
Ácido silícico anhidro ligero 10 10 10 10 10 10' 10
Estearato de magnesio 2 2 2 2 <Cuadro 3> Componente (mg/tableta) Ejemplo 11 Lovastatina 60
Vitamina E TPGS 20 BHT 2
HPMC 2910 50
Alginato de sodio 36 Goma de xantano 150
Goma de frijol de algarroba 50
Alginato de éster de propilenglicol 30
HPMC 2208 110
Kofovidona 35 Ácido silícico anhidro ligero 10 Estearato de magnesio 2 <Cuadro 4> Componente (mg/tableta) Ejemplo 12
Fluvastatina 80 Vitamina E TPGS ' 60 BHT 2 HPMC 2910 60 Alginato de sodio 40 Goma de xantano 150 Goma de frijol de algarroba 80 Alginato de éster de propilenglicol 35 HPMC 2208 110 Kofovidona 35 Ácido silícico anhidro ligero 10 Estearato de magnesio 2 E emplo de Prueba 1: Prueba de solubilidad de dispersantes sólidos Los dispersantes sólidos del Ejemplo Comparativo 1 y Ejemplos 1 a 3, y un polvo de simvastatina crudo como un grupo de control se sometieron a prueba de solubilidad en agua destilada usando un sistema de prueba de disolución bajo las siguientes condiciones de conformidad con el método Io Basket descrito en la Farmacopea de Corea. Sistema de prueba de disolución: Erweka DT 80 (Erweks, Alemania) Efluente: 900 mi de agua destilada Temperatura de efluente: 37 ± 0.51C Velocidad de rotación: 50, 100 y 150 rpm Método analítico: cromatografía líquida Columna: Cosmosil Ci8 (Nacalai tesque) Fase móvil: acetonitrilo/pH 4.0 solución de tampón* Detector: espectrofotómetro ultravioleta (238 nm) Volumen de inyección: 20 ul *solución de tampón de pH 4.0 se preparó mezclando 3 mi de ácido acético glacial con 1 1 de agua destilada y ajusfando el pH de la mezcla a 4.0 con NaOH. Como se puede ver en la Figura 1, se encontró que los dispersantes sólidos de los Ejemplos 1 a 3 preparados mediante secado por aspersión de la mezcla de simvastatina, vitamina E TPGS y HPMC mostraron solubilidad superiores que el dispersante sólido del Ejemplo Comparativo 1 preparado mezclando solamente simvastatina y HPMC y el polvo de simvastatina crudo, y sus solubilidades fueron más bien proporcionales a la cantidad de vitamina E TPGS que HPMC. Ejemplo de Prueba 2: Prueba de disolución para velocidad de rotación La formulación preparada en el Ejemplo 5 se sometió a prueba de disolución in vitro bajo las siguientes condiciones de conformidad con el 1er método Paddle descrito en la Farmacopea de Corea. La cantidad de simvastatina eluida de la formulación durante la prueba se midió mediante cromatografía liquida a l, 2, 4, 6, 8, 10 12, 16, 20 y 24 horas después de la administración. Cada muestra se dejó con 40 mg de Mn02 previamente lavado (bajo la Tableta 1 de Simvastatina de USP) para reacción con la misma durante 30 minutos y se sometió a centrifugación a 3,000 rpm durante 5 minutos. Luego, la absorbencia de cada muestra se midió usando un espectrofotometro ultravioleta y su absorbencia real se calculó restando la absorbencia a 257 nm de aquella a 247 nm. Sistema de prueba de disolución: Erweka DT 80 Efluente: 0.01 M de solución de tampón de fosfato de sodio (pH 7.0) conteniendo 5% de laurilsulfato de sodio (SLS) Temperatura de efluente: 37 ± 0.5°C Velocidad de rotación: 50, 100 y 150 rpm Método analítico: espectrofotometro ultravioleta
(247 nm y 257 nm) Cálculo de cantidad eluida: Cantidad de liberación acumulativa Como se muestra en la Figura 2, se encontró que la formulación de simvastatina de la presente invención no mostró ninguna diferencia significativa en el régimen de disolución por el cambio en la velocidad de rotación, indicando que la biodisponibilxdad es reproducible. ' Ejemplo de Prueba 3: Prueba de disolución para la cantidad de goma de xantano Las formulaciones preparadas en los Ejemplos 4 a
6 se sometieron a prueba de disolución in vitro a 100 rpm de conformidad con el mismo método al descrito en el Ejemplo de Prueba 2. El resultado en la Figura 3 mostró que el régimen de disolución de la droga es inversamente proporcional a la cantidad de goma de xantano, lo que sugiere que la goma de xantano funciona como un portador de liberación sostenida. Consecuentemente, se puede inferir que un hidrogel que tiene resistencia más fuerte se forma aumentando la cantidad de goma de xantano. Ejemplo de Prueba 4: Prueba de disolución para la cantidad de HPMC 2208 Las formulaciones preparadas en los Ejemplos 7 a 9 se sometieron a prueba de disolución in vitro a 100 rpm de conformidad con el mismo método al descrito en el
Ejemplo de Prueba 2. Como se muestra en la Figura 4, se encontró que el régimen de disolución de la droga es proporcional a la cantidad de HPMC hasta que la cantidad de HPMC alcanza cierta concentración, después de la cual se hace inversamente proporcional a la cantidad de HPMC. Estos resultados muestran que HPMC funciona como un acelerador de hidratación de gel, pero puede ser capaz de actuar como un portador de liberación sostenida cuando se añade en concentración elevada. Ejemplo de Prueba 5: Pruebas para régimen de absorción oral de distribución/excreción hacia jugo biliar A fin de comparar una biodisponibilidad y un efecto de liberación sostenida de la formulación oralmente administrable de la presente invención y examinar su efecto terapéutico en el hígado como un sitio de meta de inhibidor de reductasa de HMG-CoA, se condujeron pruebas para biodisponibilidad y distribución/excreción hacia jugo biliar cuando se administró oralmente a ratas, como sigue: En este momento, la formulación de liberación sostenida preparada en el Ejemplo 5 se usó como una muestra de prueba y ZOCORÍR1 ( orea MSD Ltd.), conocido como una formulación de liberación rápida de simvastatina se usó como una muestra de control. Ratas Sprague Da ley macho de 14 a 15 semanas de edad (peso corporal' promedio: 250 g) se dividieron en dos grupos, cada uno consistiendo de 5 ratas. Las ratas se aclimataron durante más de 4 dias dejando acceso libre a comida y agua. Y luego, las ratas se pusieron en ayuno durante un período de 48 horas, mientras que se les permitió acceso libre a agua. Antes de Ia administración de cada muestra, las ratas se eterizaron, se amarraron sus manos y patas, y luego, se sometieron a una operación quirúrgica para insertar un tubo hacia una arteria y una vena de la región femoral, y un ducto de bilis para tomar sangre y jugo biliar al mismo tiempo, respectivamente. La pérdida de fluido corporal se suplemento inyectando una solución de salina fisiológica a través del tubo insertado en la vena. Después, cada una de las muestras de prueba y control se llenó en una cápsula para administración oral a las ratas en una cantidad que corresponde a 10 mg/kg de simvastatina, y se administró oralmente a las ratas usando una herramienta de inyección apropiada, respectivamente. Se tomaron muestras de sangre de los tubos insertados en la arteria y la vena de las ratas antes de la administración y a 0.5, 1, 1.5, 3, 5, 7, 9, 12' y 24 horas después de la administración. Muestras de jugo biliar se tomaron del tubo insertado hacia el ducto de bilis de las ratas a 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 y 24 horas después de la administración. La concentración de sangre y el patrón de distribución del jugo biliar de la simvastatina se analizaron por lo siguiente. A cada 100 ul de muestras de jugo biliar y sangre, se añadieron 200 ul de metanol como una norma interna y la mezcla se agitó para obtener un extracto. El extracto se sometió a centrifugación a 3,000 rpm durante 10 minutos para obtener un sobrenadante y el sobrenadante se filtró a través de un papel de filtro que tiene un tamaño de poro de 0.22 um. Luego el filtrado se sometió a análisis LC-MS bajo las siguientes condiciones. Los resultados analíticos se muestran en las Figuras 5 y 6. Columna: Waters Oasis HLB (2.1 x 50 rara) Fase móvil: sistema de gradiente de concentración de acetonitrilo, agua y 10 mM de N¾OAc (ajusfando el pH a 4.5 con ácido fórmico) Volumen de inyección: 50 ul Régimen de flujo: 0.3 ml/min Detección: modo SIR m/z: 419.4 (simvastatina) , 435.3 (ácido simvastatínico) Como se muestra en la Figura 5, la formulación de liberación sostenida de la presente invención mostró 79.4 ng/ml de Cmax y 249.0 ng-hr/ml de AÜC que fueron ligeramente inferiores a aquellos de la formulación de liberación rápida {88.1 ng/ml de Cmax y 266.2 ng-hr/ml de AUC) , pero ejerció un nivel deseado de efecto de liberación sostenida.
Además, el resultado en la Figura 6 mostró que la mayoría de la formulación de liberación sostenida de la presente invención se encontró que estaba presente y se metabolizó en el hígado, lo que fue indicativo del hecho de que la formulación de liberación sostenida fue más efectiva para el hígado que la formulación de liberación rápida. Considerando que el inhibidor de reductasa de HMG-CoA está diseñado para ser efectivo en el hígado en donde más del 95% del mismo se metaboliza, la formulación de liberación sostenida de la presente invención es la formulación más apropiada para administración oral del inhibidor de reductasa de HMG-CoA. Ejemplo de Prueba 6: Efecto de reducir los niveles de colesterol y triglicérido A fin de examinar un efecto terapéutico de la formulación de liberación sostenida de inhibidor de reductasa de HMG-CoA en hiperlipidemia ocasionada por una dieta elevada en colesterol/ la formulación de liberación sostenida de la presente invención se administró a ratas inducidas con hiperlipidemia y los cambios en la concentración en sangre de colesterol y triglicérido se midiero . En particular, la preparación de la dieta elevada en colesterol usada para inducir hiperlipidemia y- el establecimiento de un modelo patológico se condujeron de conformidad con el método descrito por Niiho y col . , (Yakugaku/ Zasshi 110: 604-611, 1991). La dieta elevada en colesterol se preparó moliendo un alimento animal común para una dieta normal, pasándolo a través de un tamiz malla 40 y mezclando con 5% de colesterol, 0.25% de ácido cólico y 2.5% de aceite de oliva. Veinticuatro ratas Sprague Dawley macho de 4 a 5 semanas de edad se usaron en los siguientes experimentos. Después de pesar las ratas y hacerlas uniformemente distribuidas de conformidad con sus pesos corporales promedio, se dividieron en cuatro grupos, cada uno consistiendo de 6 ratas que tienen un peso corporal promedio de 202+5 g. Las ratas se- aclimataron al ambiente de jaula que se ajustó a una temperatura de 23 + 2°C y una humedad relativa a 55 + 5%. El primer grupo fue un grupo de control que ser sometió a la dieta elevada en colesterol durante el experimento sin tratar con una droga terapéutica; y el segundo grupo se sometió a la dieta elevada en colesterol con administración de ZOCO 1R) una vez al día en una cantidad correspondiente a 5 mg/kg de simvastatina. El tercer grupo se sometió a la dieta elevada en colesterol con administración de la formulación de liberación sostenida preparada en el Ejemplo 5 una vez al dia en una cantidad correspondiente a 5 mg/kg de simvastatina; y el cuarto grupo fue uno normal que no tiene historia de recibir la dieta elevada en colesterol y una droga terapéutica. Dos semanas después - de la administración, las ratas se sacrificaron y se tomaron muestras de suero de cada grupo. La concentración en sangre de colesterol y triglicérido total se midió de conformidad con un método de reacción de enzima convencional, y los resultados se muestran en los Cuadros 5 y 6. <Cuadro 5> Grupo Animal Colesterol total* Relación de nivel (mg/dl) colesterol a un control (%) El 1er grupo (control) 671.5±84.1 100 El 2a grupo (ZOCOR!R)) 567.9±93.2 84.6 El 3er grupo (la formulación de liberación sostenida del Ejemplo 5) 453.0+77.0 67.5 El 4o Grupo (normal) 81.0±8.2 *una concentración promedio de colesterol ± desviación convencional <Cuadro 6> Grupo animal Triglicérido* Relación de nivel (mg/dl) de triglicérido a un control (%) El 1er grupo (control) 242.4±12.6 100 El 2o grupo (ZOCOR!R)) 187.0±24.6 77.1 El 3er grupo (la formulación de liberación sostenida del Ejemplo 5) . 157.0+18.0 64.8 El 4o grupo (normal) 120.3+10.1 *una concentración promedio de triglicérido ± desviación convencional Como se muestra en los Cuadros 5 y 6, la concentración en sangre de colesterol y. triglicérido del primer grupo aumento 8 veces y 2 veces superior a aquellos del cuarto grupo (control), respectivamente, debido a la administración de la dieta elevada en colesterol durante 2 semanas. En los grupos 2a (ZOCOR(R)) y tercero (la formulación de liberación sostenida del Ejemplo 5) cuando se sometieron a la dieta elevada en colesterol y la droga durante 2 semanas, su concentración en sangre de colesterol y triglicérido total fueron significativamente inferiores que aquellos del grupo de control. En particular, la formulación de liberación ¦ sostenida de la presente invención mostró efecto inhibitorio superior al aumentar la concentración en sangre de colesterol y triglicérido total que la formulación de liberación rápida anterior de simvastatina, lo que resulta de la acción prolongada de la formulación de liberación sostenida en el hígado. Mientras que la invención se ha descrito con respecto a las modalidades especificas anteriores, se debe reconocer que diversas modificaciones y cambios se pueden hacer a la invención por aquellos expertos en el ramo que también quedan dentro del alcance de la invención como se define por las reivindicaciones anexas .